CN113041241A - 褪黑素在制备治疗或预防急性痛风炎症的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体是褪黑素在制备治疗或预防急性痛风炎症的药物中的应用。本发明研究结果表明：痛风急性期患者血清褪黑素显著高于缓解期患者和正常人。褪黑素可降低小鼠炎症指数以及关节内中性粒细胞浸润。褪黑素还可抑制腹腔巨噬细胞IL‑1β、IL‑6、NLRP3、p‑p65、Caspase‑1的表达。本发明的研究表明褪黑素是治疗或预防急性痛风炎症的潜在药物，在体内和体外均能减轻痛风急性炎症，其机制与抑制NLRP3炎症小体有关。

Description

褪黑素在制备治疗或预防急性痛风炎症的药物中的应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体地说，是褪黑素在制备治疗或预防急性痛风炎症的药物中的应用。
背景技术
痛风是最常见的炎症性关节炎，在我国东部沿海地区发病率接近1.14％。痛风还与代谢性疾病、心血管疾病和肾功能不全有关。因此，预防痛风具有重大的社会经济意义。目前治疗痛风的常用药物有非甾体抗炎药、糖皮质激素和秋水仙碱。这些药物都具有显著的肝肾毒性，以及对糖耐量和消化道的损害，因此有必要寻找安全有效的治疗痛风炎症的药物。
典型的急性痛风炎症是由单钠尿酸钠(Monosodium Urate，MSU)晶体沉积在关节引起的急性自限性炎症(Chen B,Li H,Ou G,Ren L,Yang X,Zeng M.Curcumin attenuatesMSU crystal-induced inflammation by inhibiting the degradation of IκBαandblocking mitochondrial damage.Arthritis Res Ther.2019；21(1):193.)。MSU晶体被锚定在单核细胞/巨噬细胞表面的Toll样受体(TLR2/4)和CD14识别，提供细胞外和细胞内刺激，并启动单核细胞/巨噬细胞对MSU晶体的吞噬作用(Chung YH,Kim HY,Yoon BR,KangYJ,Lee WW.Suppression of Syk activation by resveratrol inhibits MSU crystal-induced inflammation in human monocytes.J Mol Med(Berl).2019；97(3):369-383.)。关节内的巨噬细胞通过吞噬MSU晶体，通过双重信号激活和Caspase1激活NLRP3炎症小体，从而将pro-IL-1β剪切成成熟的IL-1β，吸引中性粒细胞聚集在MSU沉积的关节部位，引发临床上的红、肿、热、痛等急性炎症反应。(So AK,Martinon F.Inflammation in gout:mechanisms and therapeutic targets.NAT REV RHEUMATOL 2017,13(11):639-647.)
褪黑素(N-乙酰-5-甲氧基色胺)是一种天然激素，主要由松果体分泌。褪黑素主要调节昼夜节律，改善睡眠质量。近年来，褪黑素被发现具有免疫调节作用，并在急性胰腺炎和败血症等多种急性炎症性疾病模型中发挥抗炎作用(Baltatu OC,Amaral FG,CamposLA,Cipolla-Neto J.Melatonin,mitochondria and hypertension.Cell Mol LifeSci.2017；74(21):3955-3964.)。但其抗炎作用的具体机制尚不十分清楚。最近的研究发现，褪黑素能抑制肺泡巨噬细胞、脂肪细胞相关巨噬细胞、肠上皮细胞等多种细胞中NLRP3的表达，从而对急性肺功能衰竭、脂肪炎症和放射性相关肠道疾病起到抗炎作用(ZhangJJ,Meng X,Li Y,et al.Effects of Melatonin on Liver Injuries and Diseases.IntJ Mol Sci.2017；18(4):673.)。
研究者既往认为褪黑素在许多巨噬细胞相关性疾病均可以发挥治疗作用，比如在乳腺癌的治疗中，褪黑素提高了肿瘤的化疗药物的疗效；但是在类风湿性关节的治疗中，褪黑素的作用效果不一致。那么，作为痛风这种最常见的炎性关节炎，褪黑素能否起到抗炎作用，之前尚未见研究报道。
发明内容
本发明的目的在于提供褪黑素在制备治疗或预防急性痛风炎症的药物中的应用。
本发明的第一方面，提供褪黑素在制备治疗或预防急性痛风炎症的药物中的应用。
进一步的，所述的急性痛风炎症为MSU诱导的急性痛风炎症。
进一步的，所述的应用为，褪黑素在制备抑制MSU诱导的急性痛风炎症的药物中的应用。
进一步的，所述的应用为，褪黑素在制备抑制MSU诱导的NLRP3活化的药物中的应用。
进一步的，所述的应用为，褪黑素在制备减少痛风性关节炎处中性粒细胞浸润的药物中的应用。
进一步的，所述的应用为，褪黑素在制备降低巨噬细胞中IL-1β、IL-6、NLRP3、Caspase-1、p-p65的表达水平的药物中的应用。
本发明的第二方面，提供褪黑素在制备MSU诱导的NLRP3活化抑制剂中的应用。
进一步的，所述的应用为，褪黑素在制备抑制巨噬细胞中NLRP3炎症小体和相关炎症因子IL-1β的药物中的应用。
本发明的第三方面，提供一种治疗或预防急性痛风炎症的药物，所述的药物以褪黑素作为活性成分。
进一步的，所述的治疗或预防急性痛风炎症的药物为注射剂。更进一步的，所述的注射剂使用时直接注射在关节处。注射剂量15mg/kg。
本发明检测痛风急性期、间歇期和正常人同一时间点的外周血浆褪黑素水平。C57BL/6小鼠足爪关节内注射尿酸单钠(MSU，1mg)晶体建立痛风性关节炎模型。采用苏木精-伊红(H&E)染色法评价小鼠关节炎症反应；小鼠足掌炎症指数定义为右、左足厚度的比值；使用Q-PCR检测小鼠脚掌IL-6、IL-1β和NLRP3的mRNA水平。使用单钠尿酸盐晶体刺激小鼠腹腔原代巨噬细胞，比较褪黑素干预组与非干预组，细胞培养上清的IL-1β水平，以及细胞IL-1β、NLRP3、p-p65、Caspase-1的蛋白表达。结果表明：痛风急性期患者血清褪黑素显著低于缓解期患者和正常人。褪黑素可降低小鼠炎症指数以及关节内中性粒细胞浸润。褪黑素还可抑制腹腔巨噬细胞IL-1β、IL-6、NLRP3、p-p65、Caspase-1的表达。本发明的研究表明褪黑素是治疗或预防急性痛风炎症的潜在药物，在体内和体外均能减轻痛风急性炎症，其机制与抑制NLRP3炎症小体有关。
附图说明
图1.不同人群血清褪黑素水平比较；急性期患者血清褪黑素水平明显低于缓解期患者和正常人(*p<0.05)，痛风患者外周血单个核细胞褪黑素受体2的mRNA水平较正常对照组明显减低(*p<0.05)。
图2.褪黑素对MSU诱发的小鼠足爪急性炎症有抑制作用；A、褪黑素模型组和模型对照组小鼠足肿胀程度。B、HE染色显示，褪黑素模型组中性粒细胞浸润明显少于模型对照组(*p<0.05)。
图3.褪黑素模型组IL-1β、IL-6和NLRP3的mRNA表达降低。
图4.褪黑素抑制腹腔巨噬细胞IL-1和IL-6的mRNA表达；用LPS刺激腹腔巨噬细胞12h，再加或不加MSU处理6h；A、褪黑素干预组和DMSO对照组巨噬细胞分泌IL-1β和IL-6的表达；B、褪黑素干预组和DMSO对照组IL-1βmRNA表达。(*p<0.05)
图5.褪黑素抑制腹腔巨噬细胞IL-1和IL-6蛋白表达；褪黑素干预组和DMSO对照组NLRP3、Caspase-1和pro-IL-1β的蛋白水平。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例：
一、材料和方法
1、病人和标本收集
本研究纳入符合2015美国风湿病学会痛风诊断标准的急性期痛风患者24例，缓解期痛风患者29例。另外9名正常人作为对照。患者均为男性，年龄22～82岁，同时，三组间年龄无显著性差异。所有参与治疗的患者均出具书面知情同意书。本研究经上海浦东医院伦理委员会批准。门诊采集患者静脉血，室温下以1500rpm离心20min后采集血清。在上午9-10点同一时间点采集3组患者的血浆。(褪黑素主要有大脑松果体分泌，其分泌水平具备昼夜周期性。)
2、试剂和抗体
褪黑素(purtiy^98％)从Selleck(美国德克萨斯州)获得。MSU来自Sigma公司(美国密苏里州)。α-必需培养基(α-MEM)、胎牛血清(FBS)、RPMI1640培养基和青霉素链霉素均来自澳大利亚赛默飞世尔科技公司。苏木精-伊红(HE)染色试剂盒来自中国苏州贝奥蒂姆生物有限公司。抗NLRP3、PP-65、caspase1和pro-IL-1β的主要抗体购自Cell SignalingTechnologies(马萨诸塞州，美国)。
3、MSU晶体制剂
MSU晶体是用先前研究中提到的方法生产的(Ma T,Liu X,Cen Z,etal.MicroRNA-302b negatively regulates IL-1βproduction in response to MSUcrystals by targeting IRAK4 and EphA2.Arthritis Res Ther.2018；20(1):34.)。首先将尿酸(800mg)溶解在155ml沸腾的双蒸水和5ml氢氧化钠中，然后将溶液调节至ph7.2，并在室温下逐渐冷却。离心(3000g，2min，4℃)后，部分水汽化结晶，180℃灭菌2h。在偏振光显微镜下，可见针尖状晶体即为单钠尿酸盐晶体(MSU)。最后，收集晶体并在无菌条件下保存。
4、ELISA法检测血清褪黑素的表达
酶联免疫吸附试验按照制造商(英国剑桥Abcam)的指示进行。简单地说，样本与单克隆抗体结合。在小鼠体内加入生物素化抗褪黑素抗体，形成免疫复合物附着在板上。为了与生物素结合，加入辣根过氧化物酶标记链霉素。然后加入酶底物OPD进行可视化。加入液体硫酸后，反应终止。在492nm处测得光密度(OD)，由于褪黑素浓度与OD值呈正相关，因此可以通过标准曲线得到样品中褪黑素的浓度。
5、痛风小鼠动物分组及模型的建立
雄性C57B/6L小鼠，年龄6-8周(20-25g，北京维顿利华)饲养在标准透明塑料笼(5-6个/笼)中，自由进食和饮水。所有试验均在上午9:00至下午5:00在温度控制室进行。动物护理和处理程序由当地机构伦理委员会批准。首先，用游标卡尺测量每只小鼠的左、右爪子厚度，并分别记录作为基线数据。为探讨褪黑素在MSU诱导的急性痛风炎症中的作用，将小鼠随机分为3组：空白组，左足注射生理盐水50微升；造模对照组：模型组左足注射生理盐水50ul，右足同时注射含1mg的MSU晶体50ul；造模对照组，左足注射50ul生理盐水，同时将1mgMSU和每克1.5微克褪黑素注射到右足。结果发现，关节炎性反应高峰通常发生在注射MSU悬浮液后8h。因此，在炎症高峰期处死小鼠，并用4％多聚甲醛固定右足组织。脱钙后进行病理HE染色。用游标卡尺测量小鼠右、左足的厚度，定义为小鼠足的炎症指数。
6、小鼠腹腔巨噬细胞的培养
用RPMI1640培养基灌洗收集小鼠腹腔巨噬细胞。具体地说，每只小鼠在术前2-4天先腹腔注射2毫升淀粉肉汤(100毫升6％淀粉肉汤混合1.0克蛋白胨、0.5克氯化钠和0.3克牛肉提取物)。然后处死小鼠，在75％酒精中浸泡1-2分钟。消毒后腹腔注射含青霉素链霉素的RPMI1640培养基5ml，收集腹腔巨噬细胞。以1000rpm离心5min后，用RPMI1640培养基洗涤细胞一次，离心两次。用含10％小牛血清的RPMI1640培养基重新悬浮细胞以备进一步使用。
7、免疫印迹分析
在新鲜制备的冷冻放射免疫沉淀试验缓冲液(RIPA)中用蛋白酶和磷酸酶抑制剂溶解细胞。标准化蛋白质样品经BCA法定量后，用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分离，转移到硝酸纤维素膜上。然后在室温下用5％牛血清白蛋白(BSA)封闭膜1小时，然后在4℃下用稀释的抗-NLRP3、IL-1β和Caspase-1一级抗体培养过夜(Abcam，Cambridge，MA)。用Tris-buffered生理盐水ween-20(TBST)清洗三次，然后在室温下用5％脱脂牛奶稀释的IgG单克隆抗体(马萨诸塞州剑桥市Abcam)培养1小时。通过使用INTAS科学成像(德国哥廷根)，将信号显影胶片与ECL矩阵溶液孵育1分钟。
8、实时定量PCR(RT-qPCR)
根据制造商的建议(Invitrogen，Carlsbad，CA)，采用基于Trizol的一步法提取从巨噬细胞中分离并使用分光光度计(Omega平板阅读器，BMG Labtech GmbH，Germany)定量的总RNA。然后使用实时聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒(马里兰州汉诺威市酵素公司)将提取的RNA反向转录成互补DNA(cDNA)。随着cDNA的增加，对引物(表1)和PCR条件进行了优化，以分析对数期获得的PCR产物。用2-ΔCt法计算mRNA的相对表达。
所需的引物如下所列：
IL-1β：
5'TAC ATC AGC ACC TCA CAA GC 3'(SEQ ID NO.1)；
5'AGA AAC AGT CCA GCC CAT ACT 3'(SEQ ID NO.2)；
IL-6：
5'ACC AAG ACC ATC CAA TTC ATC 3'(SEQ ID NO.3)；
5'CTG ACC ACA GTG AGG AAT GTC 3'(SEQ ID NO.4)；
TNF-α：
5'TAG CCA GGA GGG AGA ACA GA 3'(SEQ ID NO.5)；
5'CCA GTG AGT GAA AGG GAC AGA 3'(SEQ ID NO.6)；
IL-10：
5'AGT GTG TAT TGA GTC TGC TGG 3'(SEQ ID NO.7)；
5'GAG AGA GGT ACA AAC GAG GTT 3'(SEQ ID NO.8)；
NLRP3：
5'GAC TGC GAG AGA TTC TAC AGC 3'(SEQ ID NO.9)；
5'CCT CCT CTT CCA GCA AAT AGT 3'(SEQ ID NO.10)。
9、组间比较的统计分析
采用spss19.0软件包进行统计分析，所有数据均以mean±sd表示。两组比较采用T检验。两组间比较采用单因素方差分析，组内比较采用LSD-T检验。P<0.05有统计学意义。统计说明是使用GraphPad Prism 5.0版完成的。
二、结果
1、痛风患者血浆褪黑素的表达
3组患者均于上午9-10时抽取外周血，急性期痛风患者的血浆褪黑素水平显著低于正常人和间歇性患者(急性痛风：8.012±2.65pg/ml；痛风缓解期：9.601±1.06pg/ml；正常人：10.66±1.25pg/ml；P＜0.05)，提示褪黑素与临床痛风的全身急性炎症有关(图1)。
2、褪黑素降低小鼠爪子炎症指数
造模后8h处死小鼠，观察各组大鼠右足肿胀情况。造模对照组小鼠足肿胀较空白组明显加重(P<0.01)，表明模型鼠足急性炎症已形成。然而，在刺激MSU前用褪黑素治疗可显著减轻模型小鼠的足肿胀程度(P<0.01)，表明褪黑素能抑制MSU诱导的小鼠急性足炎症(图2A)。HE染色观察溶剂对照组和褪黑素组滑膜组织中性粒细胞浸润情况。与小鼠足肿胀程度相似，褪黑素处理显著减少中性粒细胞的浸润，增加褪黑素可有效抑制急性炎症的发生(图2B)。
3、褪黑素抑制IL-1β、IL6和NLRP3的mRNA表达
为了确定褪黑素调节痛风的可能机制，我们进行了QPCR。足掌标本显示，与溶剂对照组相比，褪黑素组IL-1β、NLRP3和IL-6的mRNA表达显著下调(图3)。
4、褪黑素抑制腹腔巨噬细胞IL-1和IL-6的mRNA表达
在QPCR的基础上，我们进一步对NLRP3炎症小体进行了研究。分离培养小鼠腹腔巨噬细胞，分为DMSO溶剂对照组和褪黑素干预组。两组分别用100ng/mL的LPS刺激12h，然后用200ug/mlmsu刺激6h。褪黑素干预组在MSU治疗前1h(预处理)或与MSU共治疗6h(共刺激)分别给予100nm或200nm褪黑素。褪黑素预处理和共刺激均显著抑制腹腔巨噬细胞分泌的细胞培养液中IL-1β和IL-6的表达(图4A)。同样，褪黑素干预组IL-1β和IL-6的mRNA表达也显著下调(图4B)。
5、褪黑素抑制腹腔巨噬细胞IL-1和IL-6蛋白表达
最后，Western blot分析还表明，与DMSO溶剂对照组相比，干预组NLRP3、p-p65和Caspase-1的表达下调(图5)。一方面，NLRP3和Caspase-1的下调表达促进了IL-1β的抑制；另一方面，p-p65的下调也参与了IL-6的抑制。总的来说，褪黑素抑制巨噬细胞中NLRP3炎症小体和相关炎症因子。
三、讨论
褪黑激素是松果体分泌的内源性吲哚胺。在脊椎动物中，循环中的褪黑激素主要来自松果体，以及胃肠道、皮肤和视网膜等其他器官。褪黑激素也是一种多功能分子，参与许多生理过程，包括参与睡眠的启动、情绪调节、性行为和自主神经系统控制。此外，褪黑素具有抗炎和抗氧化功能，还可以影响能量代谢。褪黑激素刺激促炎细胞因子和其他介质的释放，但在不同的条件下，它能抑制促炎过程，如环氧合酶2、NLRP3、toll样受体4等(Hardeland R.Aging,Melatonin,and the Pro-and Anti-Inflammatory Networks.Int JMol Sci.2019；20(5):1223.)。褪黑激素也通过其直接清除自由基的功能发挥作用。例如，在乳腺炎中，褪黑素抑制脂多糖(LPS)诱导的炎症和氧化应激，从而发挥治疗作用。在肝脏缺血再灌注损伤中，褪黑素通过单核细胞衍生的IL-6和下游IL-6/gp130-STAT3信号传导促进肝脏再生。
此外，最近的研究还发现褪黑素能抑制多种细胞中NLRP3的表达，并起到抗炎作用。例如，褪黑素抑制脂肪细胞中NLRP3的表达，并抑制脂肪组织的炎症(Farez MF,Calandri IL,Correale J,Quintana FJ.Anti-inflammatory effects of melatonin inmultiple sclerosis.Bioessays.2016；38(10):1016-1026.Song Z,Humar B,Gupta A,etal.Exogenous melatonin protects small-for-size liver grafts by promotingmonocyte infiltration and releases interleukin-6.J Pineal Res.2018；65(1):e12486.Liu Z,Gan L,Xu Y,et al.Melatonin alleviates inflammasome-inducedpyroptosis through inhibiting NF-κB/GSDMD signal in mice adipose tissue.JPineal Res.2017；63(1):10.)。在急性肺损伤(ALI)和脑损伤中，褪黑素抑制脓毒症小鼠巨噬细胞NLRP3的激活，延长小鼠的存活时间(Zhang Y,Li X,Grailer JJ,et al.Melatoninalleviates acute lung injury through inhibiting the NLRP3 inflammasome.JPineal Res.2016；60(4):405-414.Cao S,Shrestha S,Li J,et al.Melatonin-mediatedmitophagy protects against early brain injury after subarachnoid hemorrhagethrough inhibition of NLRP3 inflammasome activation.Sci Rep.2017；7(1):2417.)。然而，褪黑激素是否在痛风急性炎症中起作用尚不清楚。本发明首先发现高血浆褪黑素水平与痛风的发病有关，这表明褪黑素与痛风有关。证实关节腔注射褪黑素能减轻小鼠足掌炎症指数。体外分离培养小鼠腹腔巨噬细胞，发现褪黑素抑制巨噬细胞中IL-1β、IL-6、NLRP3、Caspase-1和pro-IL-1β的表达，表明褪黑素抑制巨噬细胞NLRP3的表达。
NLRP3炎症小体是细胞内多蛋白复合物，在炎症性半胱天冬酶激活中起重要作用，促进促炎症的IL-1和IL-18的分泌。到目前为止，有五种不同的炎症小体已经被清楚地识别出来。其中，NLRP3是最经典、研究最多的炎症小体。NLRP3作为NOD样受体之一，由三部分组成(NRR-Nacht-PYD)，在巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞上大量表达，并作为模式识别受体(PRR)启动炎症途径。NLRP3炎症小体的激活需要两种信号：微生物分子或内源性细胞因子，通过NF-κB途径的激活上调NLRP3和pro-IL-1的表达。因此，NLRP3炎症相关免疫通路的激活增强了NF-κB介导的炎症反应。第二个信号被各种损伤相关分子模式(DAMP)激活，导致炎症性多蛋白复合物的组装。沉积的MSU由NLRP3的富含亮氨酸的区域(LRR)识别，N端热蛋白结构域(PYD)与相关凋亡点蛋白(ASC)的N端PYD区结合。然后ASC的C端结合到caspase卡上，从而形成复杂的NLRP3炎症小体(Swanson KV,Deng M,Ting JP.The NLRP3inflammasome:molecular activation and regulation to therapeutics.Nat RevImmunol.2019；19(8):477-489.)。此外，受三磷酸腺苷(ATP)影响的炎症小体寡聚化激活capase-1酶解pro-IL-1β，释放IL-1β介导炎症并激活体内炎症因子的表达。研究发现，使用氯磷酸钠抑制巨噬细胞可以显著减轻小鼠急性痛风炎症，表明巨噬细胞推动炎症的发展(Zhong Z,Sanchez-Lopez E,Karin M.Autophagy,NLRP3 inflammasome and auto-inflammatory/immune diseases.Clin Exp Rheumatol.2016；34(4Suppl 98):12-16.)。巨噬细胞在炎症反应中起着重要作用，巨噬细胞的炎症小体途径是天然免疫系统第一道防线的重要组成部分。细菌感染时，PAMP首先刺激巨噬细胞等免疫细胞，诱导IL-6、TNF-α等炎性细胞因子的表达，同时上调NLRP3和IL-1β，这是巨噬细胞的致敏信号(也称第一信号)。然后，致敏巨噬细胞被细菌或宿主细胞分泌的第二信号激活，导致caspase 1，IL–1β活化，诱导炎性细胞死亡，进一步放大炎症反应[32]。
本发明的研究探讨了褪黑素减轻急性痛风性关节炎的机制。通过MSU干预，成功建立小鼠急性痛风性关节炎模型，证明褪黑素能有效减轻模型小鼠炎症反应。为了进一步探讨其作用机制，我们从小鼠腹腔中提取巨噬细胞，并对其进行褪黑素处理。检测IL-1β、IL-6、NLRP3、Caspase-1、pro-IL-1β的表达，并显示显著降低。因此，本发明证实褪黑素可以抑制MSU诱导的NLRP3活化，进而抑制下游通路分子的表达，包括细胞因子IL-1β。总之，本发明的研究结果表明褪黑素是治疗或预防急性痛风炎症的潜在药物。
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
序列表
<110> 上海市浦东医院（复旦大学附属浦东医院）
<120> 褪黑素在制备治疗或预防急性痛风炎症的药物中的应用
<130> /
<160> 10
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 1
tacatcagca cctcacaagc 20
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 2
agaaacagtc cagcccatac t 21
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 3
accaagacca tccaattcat c 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 4
ctgaccacag tgaggaatgt c 21
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 5
tagccaggag ggagaacaga 20
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 6
ccagtgagtg aaagggacag a 21
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 7
agtgtgtatt gagtctgctg g 21
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 8
gagagaggta caaacgaggt t 21
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 9
gactgcgaga gattctacag c 21
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial)
<400> 10
cctcctcttc cagcaaatag t 21

Claims (10)

1.褪黑素在制备治疗或预防急性痛风炎症的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的褪黑素在制备治疗或预防急性痛风炎症的药物中的应用，其特征在于，所述的急性痛风炎症为单钠尿酸钠诱导的急性痛风炎症。
3.根据权利要求1所述的褪黑素在制备治疗或预防急性痛风炎症的药物中的应用，其特征在于，褪黑素在制备抑制单钠尿酸钠诱导的急性痛风炎症的药物中的应用。
4.根据权利要求1所述的褪黑素在制备治疗或预防急性痛风炎症的药物中的应用，其特征在于，褪黑素在制备抑制单钠尿酸钠诱导的NLRP3活化的药物中的应用。
5.根据权利要求1所述的褪黑素在制备治疗或预防急性痛风炎症的药物中的应用，其特征在于，褪黑素在制备减少痛风性关节炎处中性粒细胞浸润的药物中的应用。
6.根据权利要求1所述的褪黑素在制备治疗或预防急性痛风炎症的药物中的应用，其特征在于，褪黑素在制备降低巨噬细胞中IL-1β、IL-6、NLRP3、Caspase-1、p-p65的表达水平的药物中的应用。
7.褪黑素在制备单钠尿酸钠诱导的NLRP3活化抑制剂中的应用。
8.根据权利要求7所述的褪黑素在制备单钠尿酸钠诱导的NLRP3活化抑制剂中的应用，其特征在于，褪黑素在制备抑制巨噬细胞中NLRP3炎症小体和相关炎症因子IL-1β的药物中的应用。
9.一种治疗或预防急性痛风炎症的药物，其特征在于，所述的药物以褪黑素作为活性成分。
10.根据权利要求9所述的治疗或预防急性痛风炎症的药物，其特征在于，所述的治疗或预防急性痛风炎症的药物为注射剂。
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