CN113040965A - 一种绝经后骨质疏松模型鼠的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种绝经后骨质疏松模型鼠的方法，包括：A.术前准备；B.双侧卵巢切除；C.术后检测和护理。本发明通过设置一种简易手术流程的大鼠卵巢切除方法，仅通过针对目标卵巢部位进行组织切除，其方式简单，具有较强的再现性，无需复杂的术中检测即可实时建立生物模型，同时经由术前的稳定环境下培育，通过长期观测和控制变量使大鼠之间的环境因素影响趋于相同，并通过观测筛去具有隐性疾病的大鼠，且同步观察父辈骨骼健康状态，如先天具有隐性骨质疏松的大鼠，防止影响到最终的实验结果。
Description
技术领域
本发明涉及生物建模领域，特别涉及一种绝经后骨质疏松模型鼠的方法。
背景技术
骨质疏松是中老年人的一种常见病，多并发骨折。由于伦理学的限制，将骨质疏松的研究建立在细胞或动物模型上是更好的选择，近年来多利用大鼠来构建骨质疏松的动物模型，用于研究骨质疏松疾病的机制。
现有的模型鼠通常建模手段复杂，再现性差，同时无明显对照组和过渡对照，术前的观察和检测减少，容易因前期的生物隐藏性患病和环境因素影响后续建模结构，尤其是骨骼、软骨、肌腱、毛发等器官输送营养物质，是保持骨骼健康的主要体液；针对于大鼠的术后处理流程中，仅简易的清理和消毒也会因为大鼠的创面影响到其本身的健康。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种绝经后骨质疏松模型鼠的方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：
本发明一种绝经后骨质疏松模型鼠的方法，具体包括如下步骤：
A.术前准备；
选择健康的9只雌性SD大鼠，月龄均为3-9个月，体重为200-220g，随机分为两组，分别为全摘除手术组、半摘除手术组和假手术组；术前每只大鼠分别注射相同剂量的8mg/kg头孢呋辛和麻醉剂；
B.双侧卵巢切除；
麻醉完毕后用碘伏消毒手术区域，于脊柱两侧背部肋骨下缘开1-2cm竖向切口，采用剪刀依次剪开或钝性分离皮下组织，可见到白色润泽的脂肪团，拨开脂肪团褶皱可见粉红色菜花状卵巢，提起卵巢显露输卵管，提起流程中保持缓慢，随后维持大鼠骨盆舒展状态，沿盆腔基底靠近子宫处连带脂肪组织结扎，切除卵巢及部分输卵管，结扎后将脂肪组织放回腹腔，再次对另一卵巢采取同样步骤切除；术后做好防御感染措施，缝合创面；
假手术组手术流程中仅切除卵巢附近的脂肪组织，其他步骤均与全摘除手术组相同；
半摘除手术组中仅切除一侧卵巢，另一侧仅切除卵巢附近的脂肪组织，保持与全摘除手术组和假手术组的手术步骤相同；
C.术后检测和护理；
术后按照0.01mg/kg给予大鼠哌替啶，日三次，在三日后则开始检测大鼠的骨密度和血清参数指标，持续3-6周，分别针对全摘除手术组、半摘除手术组和假手术组记录不同的数据；
作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤A流程中，于手术前1周，大鼠均处于20-26摄氏度，湿度为50-60％环境下，阳光照射充足情况下喂养，同时观察大鼠母系和父系的长时间健康状态，并记录观察大鼠是否处于处于持续健康状态。
作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤C中还包含有实验期后安乐死和建模验证取样流程，主要采用麻醉安乐后，浸泡于福尔马林中，用于建模验证取样流程中的解剖和骨密度重量检测。
作为本发明的一种优选技术方案，所述建模验证取样还包含有血液采集和血清骨收集，血液于2-3摄氏度下离心采集血清。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1：本发明通过设置一种简易手术流程的大鼠卵巢切除方法，仅通过针对目标卵巢部位进行组织切除，其方式简单，具有较强的再现性，无需复杂的术中检测即可实时建立生物模型。
2：本发明经由术前的稳定环境下培育，通过长期观测和控制变量使大鼠之间的环境因素影响趋于相同，并通过观测筛去具有隐性疾病的大鼠，且同步观察父辈骨骼健康状态，如先天具有隐性骨质疏松的大鼠，防止影响到最终的实验结果。
3：本发明方法在术后注射止疼剂量药物，能够降低大鼠在术后的创面瘙痒和感染，避免大鼠自身对创面进行摩擦导致患病的现象发生。
具体实施方式
以下本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
本发明提供一种绝经后骨质疏松模型鼠的方法，具体包括如下步骤：
A.术前准备；
选择健康的9只雌性SD大鼠，月龄均为3-9个月，体重为200-220g，随机分为两组，分别为全摘除手术组、半摘除手术组和假手术组；术前每只大鼠分别注射相同剂量的8mg/kg头孢呋辛和麻醉剂；
B.双侧卵巢切除；
麻醉完毕后用碘伏消毒手术区域，于脊柱两侧背部肋骨下缘开1-2cm竖向切口，采用剪刀依次剪开或钝性分离皮下组织，可见到白色润泽的脂肪团，拨开脂肪团褶皱可见粉红色菜花状卵巢，提起卵巢显露输卵管，提起流程中保持缓慢，随后维持大鼠骨盆舒展状态，沿盆腔基底靠近子宫处连带脂肪组织结扎，切除卵巢及部分输卵管，结扎后将脂肪组织放回腹腔，再次对另一卵巢采取同样步骤切除；术后做好防御感染措施，缝合创面；
假手术组手术流程中仅切除卵巢附近的脂肪组织，其他步骤均与全摘除手术组相同；
半摘除手术组中仅切除一侧卵巢，另一侧仅切除卵巢附近的脂肪组织，保持与全摘除手术组和假手术组的手术步骤相同；
C.术后检测和护理；
术后按照0.01mg/kg给予大鼠哌替啶，日三次，在三日后则开始检测大鼠的骨密度和血清参数指标，持续3-6周，分别针对全摘除手术组、半摘除手术组和假手术组记录不同的数据；
步骤C中还包含有实验期后安乐死和建模验证取样流程，主要采用麻醉安乐后，浸泡于福尔马林中，用于建模验证取样流程中的解剖和骨密度重量检测。
建模验证取样还包含有血液采集和血清骨收集，血液于2-3摄氏度下离心采集血清。
具体的，本发明从手术准备阶段即挑选相同状态下的大鼠，在术前即注射相应药物，具体如下表1所示：
表1
分组后即可形成不同分组，按照手术目的依照卵巢切除流程，形成全摘除手术组、半摘除手术组和假手术组，其中假手术组则类似为安慰剂对照组，用于和全摘除手术组形成效果显现对比，而半摘除手术组则为控制变量组，与全摘除手术组形成效果程度对比。
通过简单的手术流程所形成的生物模型即可支持后续的实验观测和建模验证，术后的处理流程中，仅给与哌替啶形形成镇痛效果，其哌替啶对生物的影响较低，生物模型无嗜睡效果，术后依旧能够以生物习惯，维持自身的运动习性，减少因采用其他镇痛效果的药物导致生物模型嗜睡，减少生物运动导致影响骨质变化不够明显。
实施例2
步骤A流程中，于手术前1周，大鼠均处于20-26摄氏度，湿度为50-60％环境下，阳光照射充足情况下喂养，同时观察大鼠母系和父系的长时间健康状态，并记录观察大鼠是否处于处于持续健康状态，其他步骤与实施例1相同。
在手术准备前，预先培育大鼠使其能够适应相同的环境，并同步观测目标大鼠和其父系与母系，针对父辈的大鼠健康程度推断目标大鼠是否遗传到骨类疾病，从而形成筛选效果，并且筛去不能够适应相同环境的目标大鼠，从而仅延长少量观测时间，即可进一步减少环境对于大鼠的影响，具体如下
表2所示：
表2
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种绝经后骨质疏松模型鼠的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
A.术前准备；
选择健康的9只雌性SD大鼠，月龄均为3-9个月，体重为200-220g，随机分为两组，分别为全摘除手术组、半摘除手术组和假手术组；术前每只大鼠分别注射相同剂量的8mg/kg头孢呋辛和麻醉剂；
B.双侧卵巢切除；
麻醉完毕后用碘伏消毒手术区域，于脊柱两侧背部肋骨下缘开1-2cm竖向切口，采用剪刀依次剪开或钝性分离皮下组织，可见到白色润泽的脂肪团，拨开脂肪团褶皱可见粉红色菜花状卵巢，提起卵巢显露输卵管，提起流程中保持缓慢，随后维持大鼠骨盆舒展状态，沿盆腔基底靠近子宫处连带脂肪组织结扎，切除卵巢及部分输卵管，结扎后将脂肪组织放回腹腔，再次对另一卵巢采取同样步骤切除；术后做好防御感染措施，缝合创面；
假手术组手术流程中仅切除卵巢附近的脂肪组织，其他步骤均与全摘除手术组相同；
半摘除手术组中仅切除一侧卵巢，另一侧仅切除卵巢附近的脂肪组织，保持与全摘除手术组和假手术组的手术步骤相同；
C.术后检测和护理；
术后按照0.01mg/kg给予大鼠哌替啶，仅术后一日三次，在三日后则开始检测大鼠的骨密度和血清参数指标，持续3-6周，分别针对全摘除手术组、半摘除手术组和假手术组记录不同的数据；
2.根据权利要求1所述的一种绝经后骨质疏松模型鼠的方法，其特征在于，所述步骤A流程中，于手术前1周，大鼠均处于20-26摄氏度，湿度为50-60％环境下，阳光照射充足情况下喂养，同时观察大鼠母系和父系的长时间健康状态，并记录观察目标大鼠是否处于处于持续健康状态。
3.根据权利要求1所述的一种绝经后骨质疏松模型鼠的方法，其特征在于，所述步骤C中还包含有实验期后安乐死和建模验证取样流程，主要采用麻醉安乐后，浸泡于福尔马林中，用于建模验证取样流程中的解剖和骨密度重量检测。
4.根据权利要求3所述的一种绝经后骨质疏松模型鼠的方法，其特征在于，所述建模验证取样还包含有血液采集和血清骨收集，血液于2-3摄氏度下离心采集血清。
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