TWI632915B - 用以治療關節炎之醫藥組成物 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種用以治療關節炎之醫藥組成物，其包含一有效劑量之益生菌，以及藥學上可接受之載劑，其中該益生菌係BCRC 910636。本發明所提供之醫藥組成物，對於骨關節炎具有顯著的治療效果，對於關節組織被破壞亦具有減緩之作用。

Description

用以治療關節炎之醫藥組成物
本發明係關於一種醫藥組成物，尤其是關於一種包含益生菌而得以用於治療關節炎之醫藥組成物。
臨床上，關節炎略可分為骨關節炎、類風濕性關節炎、痛風性關節炎、細菌性關節炎等，每一類型關節炎的症狀及好發部位皆不盡相同，而骨關節炎則是其中最常見的一種。骨關節炎是一種退化性的關節疾病，患者的關節軟骨受到侵害，除造成患者疼痛外，也有僵硬、腫脹與變形等症狀，此症狀若持續進行，患者還可能造成行動困難而需要枴杖或輪椅的協助。
一般情形下，骨關節炎主要侵犯經常活動以及需要負重的關節，例如膝關節、髖關節、手指指間關節、腰椎及頸椎等。骨關節炎的治療方式，起初多採非手術性的治療，包括：藥物治療、復健治療或施打玻尿酸。若仍無法以上述方式減緩患者的症狀時，才以手術作為治療的手段。
在藥物治療方面，可使用類固醇藥物，其止痛效果快速而顯著，但它的副作用也相當大，例如會產生骨質疏鬆症、傷口不易癒合、皮膚變薄、上消化道出血等，甚至會加重高血壓、糖尿病的病情，因此，目前大多數的情況都已停止使用，但對於某些類風濕性關節炎、紅斑性狼瘡、僵直性脊椎炎或脊椎外傷患者而言，仍需使用類固醇以緩解病情。可取代類固醇藥物的藥物有非類固醇抗炎藥與葡萄糖胺。目前，非類固醇抗炎藥的使用相當普遍，止痛效果也都不錯，但長期使用仍有副作用，例如消化 性潰瘍、下肢水腫、腎臟功能的損傷等，故在使用上也需相當注意。此外，由於葡萄糖胺可刺激關節內的軟骨細胞合成醣蛋白，又同時具有消炎止痛的效果、無非類固醇抗炎藥的副作用，許多患者也使用此種方式治療，但由於其劑量以及吸收能力的差異，葡萄糖胺對於許多患者並無明顯的效果。
另一方面，則可在關節腔內注射玻尿酸，當作一種潤滑劑以幫助關節活動而減緩症狀。玻尿酸雖可抑制一些發炎反應，但對於疼痛減緩的功效卻是有限，其雖然沒有副作用，但在體內，只要數星期就會被人體吸收，持久性不高。
當前述非手術治療方式都無法改善患者症狀並減輕痛楚時，只能進行以侵入式的手術治療，例如利用關節鏡手術，清除關節腔內的異物或對受損的軟骨進行修補，但其對於關節受損已經相當嚴重的患者而言效果極其有限。若是直接更換以人工關節，雖可避免發炎、減少疼痛，但人工關節也有其使用壽命，若使用較長壽命的純金屬或陶瓷，則需高額的費用。
因此，若能發現一種醫藥組成物，沒有副作用，而且可持續產生作用，特別是能夠緩解患者的疼痛，且能以最經濟、無須經手術治療的方式達到治療關節炎的功效，將是關節炎患者的一大福音。
本發明目的之一在於提供一種能夠治療關節炎的醫藥組成物，該醫藥組成物對患者不會產生副作用，而得長期安全使用，且具有良好的抑制發炎的效果。
本發明的另一目的則在於一種能夠減緩關節炎的醫藥組成物，減緩患者因關節炎所引起的疼痛困擾，讓患者大幅改善行動困難的不便，同時也改善其生活品質，免受疼痛的苦楚。
為了達成前述的目的，本發明提供一種用以治療關節炎之醫藥組成物，包括：一有效劑量之益生菌，以及藥學上可接受之載劑，其中該益生菌係RCRC 910636(食品工業發展研究所)。
在本發明的一實施例中，該益生菌之有效劑量係大於5x109CFU/公斤/天。
在本發明一實施例的一態樣中，該益生菌之有效劑量較佳係5x109~5x1011CFU/公斤/天。
在本發明一實施例的一態樣中，該益生菌之有效劑量較佳係5x1010~5x1011CFU/公斤/天。
本發明同時提供一種益生菌用於製備治療關節炎的醫藥組成物之用途，該益生菌係BCRC 910636，利用該益生菌作為醫藥組成物的組成分，用以治療關節炎。
在本發明的一實施例中，所述之益生菌用於製備治療關節炎的醫藥組成物之用途，該益生菌之有效劑量係大於5x109CFU/公斤/天。
在本發明的一實施例中，所述之益生菌用於製備治療關節炎的醫藥組成物之用途，該益生菌之有效劑量係5x109~5x1011CFU/公斤/天。
在本發明一實施例的一態樣中，該益生菌之有效劑量較佳係5x1010~5x1011CFU/公斤/天。
在本發明的一實施例中，所述之益生菌用於製備治療關節炎的醫藥組成物之用途，其中該治療關節炎的醫藥組成物包括減緩關節炎的醫藥組成物。
此外，本發明亦同時提供一種益生菌用於製備減緩疼痛的醫藥組成物之用途，該益生菌係BCRC 910636；以及該減緩疼痛的醫藥組成物係減緩由關節炎所引起疼痛的醫藥組成物。
在本發明的一實施例中，所述之益生菌用於製備減緩疼痛的醫藥組成物之用途，其中該益生菌之有效劑量係大於5x109CFU/公斤/天。
在本發明一實施例的一態樣中，其中該益生菌之有效劑量係5x109~5x1011CFU/公斤/天。
在本發明一實施例的一態樣中，該益生菌之有效劑量較佳係 5x1010~5x1011CFU/公斤/天。
本發明亦同時提供一種益生菌用於製備增加/保護軟骨細胞醫藥組成物之用途，其中該益生菌之有效劑量係大於5x109CFU/公斤/天。
在本發明一實施例的一態樣中，其中該益生菌之有效劑量係5x109~5x1011CFU/公斤/天。
在本發明一實施例的一態樣中，該益生菌之有效劑量較佳係5x1010~5x1011CFU/公斤/天。
藉由本發明所提供之醫藥組成物，對於骨關節炎具有顯著的治療效果，對於關節組織被破壞亦具有減緩之作用。
以下將進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
圖1 係本發明實施例中不同TCI633劑量對於ACLT誘發後腿負重分布改變之比較結果圖。
圖2係本發明實施例中不同TCI633劑量對於溫度感覺異常影響之比較結果圖。
圖3係本發明實施例中不同TCI633劑量對於ACLT誘發機械性觸覺過敏影響之比較結果圖。
圖4係本發明實施例中不同TCI633劑量對於ACLT誘發膝關節腫脹影響之比較結果圖。
圖5係本發明實施例中不同TCI633劑量對於體重變化之比較結果圖。
圖6係本發明實施例中不同TCI633劑量對於膝關節滑膜組織發炎影響 之組織解剖圖。
圖7係本發明實施例中不同TCI633劑量對於膝關節骨頭組織影響之組織解剖圖。
圖8係本發明實施例中不同TCI633劑量對於膝關節軟骨組織影響之組織解剖圖。
圖9係本發明實施例中利用國際骨關節炎研究學會評估分數系統評估不同TCI633劑量對於膝關節軟骨組織影響之比較結果圖。
定義
本文所稱之術語「有效劑量」係指能持續減輕關節炎之症狀及/或徵象(諸如疼痛及關節僵硬)之劑量。
在本案所稱之術語「治療」係指一種能減輕或延緩關節炎之一種或多種影響、或症狀的方法。治療亦係指一種能減輕基礎病因而非僅症狀之方法。
益生菌的培養
本發明用以治療關節炎之醫藥組成物所包含之菌株係命名為TCI633的益生菌(食品工業發展研究所，編號BCRC 910636，中華民國專利公告號I519644專利寄存)，屬嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)，並係由人類健康之母乳中所分離。TCI633益生菌之培養，可將保存於甘油之菌株，接種在MRS培養基(1%，v/v)上培養16至24小時，之後將菌株轉移至含有20g/L至60g/L葡萄糖、5g/L至30g/L蔗糖、10g/L至20g/L酵母菌萃取物5g/L至10g/L蛋白腖(peptone)、2.5g/L至8g/L磷酸氫二鉀(K2HPO4)、1g/L至2g/L氯化鈉(NaCL)及0.5g/L至1.2g/L七水硫酸鎂(MgSO4 7H2O)之培養基中，再於37℃下培養48小時後備用。
動物模式的建立
本發明實施例中，實驗所用的雄性大鼠(Wistar rat,8週齡)係購自樂斯科生物科技股份有限公司(Taipei,Taiwan)，飼養於中山大學海洋生物科技暨資源學海洋藥物前臨床測試核心實驗室。其光週期控制在12小時光照12小時黑暗週期，而動物房的溼度(50~55%)與溫度(24±1℃)皆受空調系統控制，先經過約10天的訓養期。進行實驗時，大鼠體重約300±10公克重(9-10週齡)。所有模式建立手術與灌食動作均在2.5%異氟烷(isoflurane,Catalog No.08547,Panion & BF Biotech Inc.,Taoyuan,Taiwan)麻醉下進行。所有動物實驗的操作和使用均遵照美國生理學協會動物照護和使用指導原則(Guiding Principles in the Care and Use of Animals of the American Physiology Society)並同時在國立中山大學動物照護及使用委員會(Institutional animal care and use committee of National Sun Yat-sen university)的允許下進行。
動物模式中，大鼠前十字韌帶切除骨關節炎模式(anterior cruciate ligament transected，以下稱ACLT)是仿照Stoop等人於2001所發表的論文與Yang等人於2014所發表的論文中方法進行(Stoop et al.,2001；Yang et al.,2014)。在進行動物行為基礎值(baseline)測量後，大鼠進行麻醉後將雙膝部位剃毛，並以酒精消毒處理後再從內側髕骨旁切入，打開膝部關節囊後，將髕骨向外脫臼，使膝部置於完全屈曲狀態，得以露出前十字韌帶。利用尖刀片將前十字韌帶中段切除，並以前拖曳測驗(anterior draw test)來判斷是否切除足夠，確認完全切除後，進行手術縫合；而控制組則是只打開膝部之關節囊，不切除前十字韌帶(Stoop,et al.,2001)。手術後注射cefazolin(20mg/kg)以防傷口感染，並將大鼠放回鼠籠使其自由活動八週。其中每週進行動物行為測試，以確認疼痛與發炎腫脹行為正常組有顯著差異，再施以益生菌治療。
動物實驗分為以下五組：a. 控制組(control)，為一般正常大鼠，其膝關節被打開，但未誘發關節炎；b. 前十字韌帶切除組(ACLT)：於手術誘發後第8至20周，每天口服 給予賦形劑；c. ACLT+TCI633(5x1011CFU/公斤/天)組：於手術誘發後第8至20周，每天口服給予TCI633(5x1011CFU/公斤/天)；d. ACLT+TCI633(5x1010CFU/公斤/天)組：於手術誘發後第8至20周，每天口服給予TCI633(5x1010CFU/公斤/天)；以及e. ACLT+(TCI633 5x109CFU/公斤/天)組：於手術誘發後第8至20周，每天口服給予TCI633(5x109CFU/公斤/天)。
醫藥組成物之製備
準備TCI633益生菌及賦形劑(由台灣第一新藥股份有限公司提供)。其中，控制組僅口服餵食賦形劑加水，作為空白溶劑組別，而益生菌TCI633三種劑量組別(前述第c-e組)，皆利用TCI633加水進行口服餵食。
益生菌也可以和藥學上可接受之載劑混合，以製備成溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、口含錠、片劑、口嚼膠或膠囊之劑型。
數據分析
以下所有實施例之實驗所得數據之呈現上皆以mean±SEM程式表示。兩組間數據比較，依照t檢定方法進行統計分析。多組間數據比較，則利用單因子變異數分析(one-way analysis of variance，ANOVA)進行數據統計分析其各組間的差異性，同時根據Duncan's Method進行多重組間差異性比較。當P值小於0.05時，表示有顯著差異，進行統計分析。
實施例1 後腳負重分布改變(weight bearing)
前十字韌帶切除(ACLT)後導致退化關節的腳和對側控制組之腳的負重分布改變代表了骨關節炎的疼痛指標之一(Bove et al,2006)。雙足平衡測痛儀(Dual Channel Weight Averager,Singa Technology Corporation,Taiwan)可用來測試大白鼠左右後腳施力之重量。將大白鼠置於一有坡度的管道內，左右腳站立於可分別量測左右腳施重的分離量秤上，待大鼠姿勢 穩定及靜置穩定後，按下儀器測量鍵，紀錄三秒後之數據，結果以正常肢(左腳)減去受傷肢(右腳)的兩腳負重差值計算(Fernihough,et al.,2004)，在動物行為基礎值測量與前十字韌帶切除手術後第1到第24週，每週測定一次，其結果如圖1所示。
由圖1可知，在ACLT誘發後腿負重分布改變方面，ACLT組與控制組相比較，於第1周至第24周後腳負重分布改變有顯著上升之差異。在誘發關節炎模式後，ACLT+TCI633(5 x 1011CFU/公斤/天)組與ACLT組比較上，於第9周至第24周其後腳負重分布改變有顯著下降之差異。在ACLT+TCI633(5 x 1010CFU/公斤/天)組與ACLT組比較上，於第10周至第24周其後腳負重分布改變有顯著下降之差異。在ACLT+TCI633(5 x 109CFU/公斤/天)組與ACLT組比較上，於第13周至第19周與第22周其後腳負重分布改變有顯著下降之差異。其中於第9周至第24周時，後腳負重分布改變在ACLT+TCI633(5 x 1010CFU/公斤/天)和ACLT+TCI633(5 x 1011CFU/公斤/天)組與ACLT+TCI633(5 x 109CFU/公斤/天)比較下，越有顯著下降之差異。因此，總合以上結果可確認，益生菌TCI633對於ACLT誘發後腳負重分布改變有顯著改善之效果，同時呈現劑量依賴效應。而在停止餵食TCI633後，如表1所示，在ACLT+TCI633各組對後腳負重分布改變行為止痛效果百分比(%)有趨向減緩之趨勢。
實施例2 溫度感覺異常測試(thermal hyperalgesia)
溫度感覺異常測試是仿照Hargreaves等人於1988年所建立之 方式以低能量之放射性熱光源照射動物腳掌量取其退縮時間。熱覺過敏行為是以熱足板法(plantar test)進行分析。熱源刺激儀器(Plantar Stimulator Analgesia Meter)(Life IITC Model 390,Woodland Hills,CA,USA.)熱源設定強度為25，為了避免大白鼠腳掌組織因長時間受到熱源傷害，故設定照射30秒為截止時間點(Hargreaves et al.,1988)。將大鼠置於壓克力玻璃平台上，利用熱源刺激大白鼠後腳掌中間位置，觀察並記錄其腳掌何時舉離檯面，在動物行為基礎值測量與前十字韌帶切除手術後第1到第24週，每週測定一次，其結果如圖2所示。
由圖2可知，ACLT組與正常組(control)相比較，第0周至第24周後無顯著改變溫度感覺異常之差異。在誘發關節炎模式後，ACLT+TCI633三組與ACLT組比較上亦無顯著改變溫度感覺異常之差異。因此，總合以上結果可以確認，益生菌TCI633對於手術後誘發骨關節炎上無顯著改變溫度感覺異常之差異，其數值呈現與control組相似。而在停止餵食TCI633後亦無顯著之影響。
實施例3 機械性觸覺過敏(mechanical allodynia)
依據Chaplan等人於1994年所發表論文中的方法，評估TCI633對於ACLT誘發機械性觸覺過敏之影響。將大鼠置於鐵絲網上的褐色壓克力盒內竟置15分中使大鼠適應。以凡芙瑞絲(Von Frey filaments,Stoelting,Wood Dale,IL,USA)由下往上對大鼠後腳掌施垂直加壓力，從1g開始逐漸增加壓力克數直到大鼠產生縮腳行為，並紀錄其壓力數值作為縮足閾值。每次施加壓力最多持續5秒，並重複測量3次以確保數據準確性，且每次刺激間隔15秒以上(Chaplan et al.,1994)，其結果如圖3所示。
由圖3可知，ACLT組與控制組(control)相比較，於第6周至第24周其縮足反應閾值有顯著下降之差異。在誘發關節炎模式後，在ACLT+TCI633(5 x 1011CFU/公斤/天)組與ACLT組比較上，於第9周至第24周其縮足反應閾值有顯著上升之差異。在ACLT+TCI633(5 x 1010CFU/公斤/天)組與ACLT組比較上，於第9周至第23周其縮足反應閾值有顯著上升之差異。在ACLT+TCI633(5 x 109CFU/公斤/天)組與ACLT組比較上，於第13周 至第22周其縮足反應閾值有顯著上升之差異。其中於第9周至第22周時，縮足反應閾值在ACLT+TCI633(5 x 1010CFU/公斤/天)和ACLT+TCI633(5 x 1011CFU/公斤/天)組與ACLT+TCI633(5 x 109CFU/公斤/天)比較下，越有顯著下降之作用。因此，總合以上結果可以確認，益生菌TCI633對於ACLT誘發機械性觸覺過敏有顯著改善之效果，同時呈現劑量依賴效應。而在停止餵食TCI633(第21周至第24周)後，如表2所示，在ACLT+TCI633各組對機械性觸覺過敏行為止痛效果百分比(%)有趨向減緩之趨勢。
實施例4 膝關節寬度腫脹之測量(knee swelling)
在前十字韌帶切除手術前(basline)和手術後第1到第24週的膝部關節寬度變化每週測定一次，以評估膝部發炎情形。將大鼠以2.5% isofurane麻醉後，以游標尺(calipers,AA847R,Aesculap,AG& CO,KG,German)測量大鼠左右膝部寬度，觀測其左右腳膝關節寬度，並詳加紀錄改變情形(Yang et al.,2014)。結果以受傷肢(右腳)減去正常肢(左腳)的兩腳膝關節寬度差值作為計算，如圖4所示。
由圖4可知，ACLT組與控制組(control)相比較，於第1周至第24周在左右膝關節寬度差異有顯著上升之差異。在誘發關節炎模式後，ACLT+TCI633(5 x 1011CFU/公斤/天)組與ACLT組比較上，於第9周至第24周其左右膝關節寬度差異有顯著下降之差異。在ACLT+TCI633(5 x 1010CFU/公斤/天)組與ACLT組比較上，於第8周至第11周和第14周到第22周其左右膝關節寬度差異有顯著下降之差異。在ACLT+TCI633(5 x 109CFU/公斤/ 天)組與ACLT組比較上，於第13周至第22周其左右膝關節寬度差異有顯著下降之差異。其中於第8周至第22周時，左右膝關節寬度差異在ACLT+TCI633(5 x 1010CFU/公斤/天)和ACLT+TCI633(5 x 1011CFU/公斤/天)組與ACLT+TCI633(5 x 109CFU/公斤/天)比較下，越有顯著下降之差異並。因此，總合以上結果可以確認，益生菌TCI633對於ACLT誘發左右膝關節寬度差異有顯著改善之效果，同時呈現劑量依賴效應。而在停止餵食TCI633後，如表3所示，在ACLT+TCI633各組對膝關節腫脹之抑制效果百分比(%)有趨向減緩之趨勢。
實施例5 體重之測量
在前十字韌帶切除手術前(basline)和手術後第1到第24週的每週測定一次大鼠體重，其結果如圖5所示。
由圖5可知，ACLT組與控制組(control)相比較，於第0周至第24周之體重變化無顯著影響，且呈現隨時間增加體重之趨勢。在誘發關節炎模式後，ACLT+TCI633(5 x 1011CFU/公斤/天)組與ACLT組比較上，於第0周至第24周之體重變化無顯著影響，且亦呈現隨時間增加體重之趨勢。在ACLT+TCI633(5 x 1010CFU/公斤/天)組與ACLT組比較上，於第8周與第11周至第24周其體重增加有顯著較少之趨勢。在ACLT+TCI633(5 x 109CFU/公斤/天)組與ACLT組比較上，於第8周與第10周至第24周其體重增加有顯著較少之趨勢。因此，總合以上結果可以確認，益生菌TCI633對於ACLT模式中體重變化中，在ACLT+TCI633(5 x 1010和5 x 109CFU/公斤/天)組對於體重 增加有顯著減緩之作用。
實施例6 病理切片觀察 樣品收集固定
於前述完成動物行為測試後進行人道犧牲。利用2.5%異氟烷深度麻醉後藉由手術器械打開大鼠胸部後，以灌流針頭由心臟底部插至左大動脈固定針頭後，經幫浦將存放在4℃每隻大白鼠600ml的4%磷酸鹽緩衝溶液(phosphate buffered saline,PBS)(137mM NaCl,2.68mM KCl,10mM Na2HPO4,1.76mM KH2PO4,Ph=7.2)含有肝素(heparin)(0.2U/ml)緩緩注入大白鼠體內，並透過剪破的右心房流出，以達到全身血液置換的流成。隨後以4℃的4%三聚甲醛(paraformaldehyde)灌流，透過三聚甲醛固定大白鼠身體組織，最後在以手術器械取下大白鼠膝蓋組織，放置於10%中性福馬林固定液中，並存放在4℃環境下固定3-4天，其間每兩天更換中性福馬林確以保固定效果。而後將已固定後的組織更換放置脫鈣液(100g乙二胺四醋酸二鈉，E.D.T.A.．2Na/1000ml PBS)中，置於在室溫下，並每兩天跟換一次脫鈣液，以達到脫鈣之效果，維持2-3週脫鈣時間。將已固定、脫鈣的組織放置包埋盒中，以組織自動脫水處理機(Tissue-Tek,Sakura Finetek Japan Co.,Ltd,Japan)進行依序為35%酒精、75%酒精、85%酒精、85%酒精、95%酒精、95%酒精、100%酒精、100%酒精、90% xyline/酒精、100% xyline、軟蠟、硬蠟共18個小時的程序，行組織脫水與滲蠟的步驟，再應用石蠟組織包埋機(CSA Embedding Center EC780-1；EC780-2)將組織進行包埋成蠟塊後，以石蠟切片機(Microm,HM340E,USA)進行厚度為1μm組織切片後，進以利用紫蘇-伊紅(hematoxylin-eosin staining)和番紅-快速綠(Safranin O/Fast green staining)染色方法進行組織切片染色。將完成樣本玻片置於光學顯微鏡(DM 6000,Leica Inc,Germany)，利用顯微鏡數位影像輸出系統(idea SPOT,Diagncstic instruments Inc.U.S.A.)拍攝和紀錄切片結果並針對切片進行分析，其結果如圖6~8所示。
評估TCI633對於膝關節滑膜組織發炎之影響
如圖6所示，在大鼠接受前十字韌帶切處手術後，與控制組 比較上，於第24周可明顯觀察到在滑膜組織中發炎性血球浸潤、組織增生和組織肥大的現象。在治療組部份，在ACLT+TCI633(5 x 109CFU/公斤/天)也可觀察到相似於ACLT組的現象。在ACLT+TCI633(5 x 1011CFU/公斤/天)和ACLT+TCI633(5 x 1010CFU/公斤/天)組中，其可觀察較輕微發炎性血球浸潤，同時有效改善前十字韌帶切處手術造成的組織增生和組織肥大的現象。因此，總合以上結果可以確認，益生菌TCI633對於ACLT模式中，在ACLT+TCI633(5 x 1011CFU/公斤/天)和ACLT+TCI633(5 x 1010CFU/公斤/天)組對於滑膜組織發炎有顯著減緩之作用。
評估TCI633對於膝關節軟骨組織之影響
利用紫蘇-伊紅染色方式分析如圖7所示，在大鼠接受前十字韌帶切處手術後，與控制組比較上，於第24周可明顯觀察到軟骨厚度與表層軟骨細胞破損的現象。在治療組部份，在ACLT+TCI633三個組別與ACLT組比較上，均可觀察到骨頭組織表層呈現不規則的現象。在ACLT+TCI633(5 x 1010CFU/公斤/天)組則可觀察到軟骨表面些許不平整，而ACLT+TCI633(5 x 1011CFU/公斤/天)組可觀察到與正常組較相近的軟骨組織。因此，總合以上結果可以確認，益生菌TCI633對於ACLT模式中，在ACLT+TCI633(5 x 1011CFU/公斤/天)和ACLT+TCI633(5 x 1010CFU/公斤/天)組對骨頭組織有顯著減緩損壞之作用。
評估TCI633對於膝關節軟骨組織之影響
其結果如圖8所示，在大鼠接受前十字韌帶切處手術後，與正常組比較上，於第24周可明顯觀察到到軟骨組織表面破損、軟骨細胞減少與軟骨層染色訊號(紅色)強度下降之情形。在ACLT+TCI633三個組別與ACLT組比較上，均可觀察到骨頭組織有較輕微的軟骨組織表面不規則和軟骨層染色訊號強度下降之情形。
另一方面，由圖7及8結果所示，可知位於軟骨組織中的軟骨細胞數量在有使用TCI633的組別中明顯高於ACLT的軟骨細胞數量，因此TCI633具有增加/保護軟骨細胞的功效。
此外，利用國際骨關節炎研究學會評估分數系統(OARSI score)評估TCI633對於膝關節軟骨組織之影響，其結果如圖9所示。評分時，同時採用OARSI的分級和骨關節炎恢復的階段進行半定量評估，其中包含六個級分(six histological grades)和四個階段(four histological stages)。總分為不同級分乘上不同階段，因此總分範圍由1分(normal articular cartilage)至24分(no repair)(Pritzker et al.,2006)。由圖9可知，大鼠接受前十字韌帶切除手術在第24周後，其ACLT組與控制組相比較，分數有顯著增加之情形。在給予TCI633之治療組與ACLT組相比較下，其評估分數有顯著下降之情形。同時在給予ACLT+TCI633(5 x 1011CFU/公斤/天)和ACLT+TCI633(5 x 1010CFU/公斤/天)組其評估分數與ACLT+TCI633(5 x 109CFU/公斤/天)組比較下，有顯著下降之情形。因此，總合以上結果可以確認，益生菌TCI633對於ACLT模式中，在ACLT+TCI633(5 x 1011CFU/公斤/天)和ACLT+TCI633(5 x 1010CFU/公斤/天)組對膝關節軟骨組織有顯著減緩損壞之作用。
綜合以上結果，口服益生菌TCI633三種劑量(5x1011,5x1010,5x109CFU/公斤/天)，對於骨關節炎的治療效果上，與ACLT組別相比較，對於機械性觸覺過敏、後腳負重分布改變和膝關節腫脹上均有顯著的治療之效果。同時利用組織學和國際骨關節炎研究學會評估分數系統進行分析上，益生菌TCI633對於骨關節炎可有效減緩關節組織被破壞之作用。

Claims (4)

  1. 一種益生菌用於製備增加軟骨細胞的醫藥組成物之用途，該益生菌係嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)TCI633，寄存編號係BCRC 910636。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該益生菌之有效劑量係大於5x109CFU/公斤/天。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該益生菌之有效劑量係5x109~5x1011CFU/公斤/天。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該益生菌之有效劑量係5x1010~5x1011CFU/公斤/天。
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