CN112955462B - 用于治疗实体瘤的βIG-H3拮抗剂和免疫检查点抑制剂的组合 - Google Patents

用于治疗实体瘤的βIG-H3拮抗剂和免疫检查点抑制剂的组合 Download PDF

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Abstract

为了研究胰腺癌中βig‑h3调节抗肿瘤免疫应答的机制，发明人利用自发性胰腺肿瘤和癌症的工程化小鼠模型评估了耗尽βig‑h3对调节抗肿瘤免疫力的作用及其单独和与免疫检查点抑制剂组合对肿瘤生长的影响。这种组合在该模型中被证明在体内是有效的，显示出治疗组合的协同作用。因此，本发明涉及(i)免疫检查点抑制剂和(ii)βig‑h3拮抗剂的组合，其用于同时或依次使用以治疗患有实体瘤例如胰腺癌的患者。本发明还提供βig‑h3拮抗剂，其用于增强患有实体瘤的患者对免疫检查点抑制剂的敏感性的方法。

Description

用于治疗实体瘤的βIG-H3拮抗剂和免疫检查点抑制剂的组合
技术领域
本发明涉及(i)βig-h3拮抗剂和(ii)免疫检查点抑制剂的组合，其用于同时或依次使用以治疗患有实体瘤(例如胰腺癌)的患者。本发明还提供βig-h3拮抗剂，其用于增强患有肿瘤的患者对免疫检查点抑制剂的敏感性的方法。
发明背景
胰腺导管腺癌(PDA)是一种高度侵袭性癌症，其中中位生存期不到6个月，并且5年生存率是3-5％1。PDA通过一系列伴有基因修饰的胰腺上皮内瘤形成(PanIN)进化。其中，最早且最普遍的是Kras2的致瘤性激活。除了定义癌细胞的分子和组织学改变外，PDA的标志是围绕肿瘤细胞的显著基质响应。基质的细胞成分包括免疫细胞，例如淋巴细胞、巨噬细胞和骨髓来源的抑制细胞(MDSC)，以及血管和神经元件(分别是内皮细胞和神经元)，以及与癌症相关的成纤维细胞(CAF)。
现已公认，活化的胰腺星状细胞(PSC)是负责产生这种胶原基质的主要细胞群体3。PSC在稳定状态下占胰腺的约4％。它们在炎症时被激活，然后转化为CAF。最近的研究表明CAF能够吸引和隔离肿瘤外腔室中的CD8+T细胞。这种作用抑制它们与肿瘤细胞的接触并因此清除肿瘤4。在小鼠中进行的若干研究表明耗尽CAF消除免疫抑制5，6，表明它们在调节局部抗肿瘤响应中起着重要作用。在大多数实体瘤中，如在PDA中，CD8+T细胞浸润入肿瘤中是与预后良好相关的因素7，8。在近肿瘤腔室中具有高密度CD8+T细胞的PDA患者比具有较低密度的患者具有更长的生存期4，9。因此，恢复抗肿瘤CD8+T细胞响应在PDA中可能非常重要。
免疫检查点阻断已在一些患有不同晚期恶性肿瘤(即黑色素瘤)的患者中引起临床反应，但对PDAC无效，这表明其他因素(包括在增生性肿瘤微环境中产生的机械张力)可能限制T细胞活性10。免疫细胞不会穿透这些肿瘤的实质组织，而是保留在围绕肿瘤细胞巢的基质中11，12。用抗PD-L1/PD-1剂治疗后，基质相关的T细胞可以显示出激活和增殖证据，但没有浸润，且无临床反应10。
βig-h3(也称为TGFβ1)是一种68kDa的ECM蛋白，其最早分离自经TGF-β处理的A549人肺腺癌细胞13。提出βig-h3的生理功能包括细胞-基质相互作用和细胞迁移14。βig-h3还显示与若干ECM分子结合，例如胶原I、II和IV以及纤连蛋白、蛋白聚糖和骨膜蛋白15，16。在细胞表面，βig-h3显示与各种整合素相互作用，包括αVβ3 17,18α1β1 18和αVβ5 19。最近表明，βig-h3通过干扰TCR信号传导途径中的早期因子(如Lck)来抑制糖尿病性T细胞活化20。发明人之前发现，在一些癌症包括胰腺癌中，βig-h3的表达增加21，而在其他癌症例如卵巢癌和多发性骨髓瘤中，βig-h3的表达降低22，23。由于胰腺癌中βig-h3的表达较高，这与免疫抑制作用的增加有关，发明人证明，βig-h3通过阻断抑制CD8+T细胞活化而在直接调节抗肿瘤免疫应答中发挥作用(参见WO2017/158043)。
总之，免疫检查点阻断已作为抗癌疗法进行了测试，但尚未证明能够完全治疗所有罹患癌症，尤其是实体瘤(例如胰腺癌)的个体，这与预后不良相关。因此，需要可以提供特别是在胰腺癌治疗中的新前景的新的治疗选择。
发明概述
本发明涉及βig-h3拮抗剂和免疫检查点抑制剂的组合，其用于同时或依次使用以治疗患有实体瘤(特别是胰腺癌)的患者。本发明还提供βig-h3拮抗剂，其用于增强患有实体瘤的患者对免疫检查点抑制剂的敏感性的方法。
发明详述
本发明源于发明人的意料不到的发现，即βig-h3拮抗剂，例如中和性βig-h3抗体，与免疫检查点抑制剂(抗体抗PD1)协同作用，以促进癌细胞凋亡并预防肿瘤生长。
为了研究胰腺癌中βig-h3调节抗肿瘤免疫应答的机制，发明人利用基于胰腺细胞中KrasG12D激活的自发性胰腺肿瘤和癌症的工程化小鼠模型24，25。使用这些模型，他们评估了耗尽βig-h3对调节抗肿瘤免疫力的作用及其单独和与免疫检查点抑制剂组合对肿瘤生长的影响(参见图1和2)。这种组合在这些模型中被证明在体内是有效的，显示治疗组合的协同作用。
不受任何理论的束缚，发明人证明了CAF分泌的βig-h3在肿瘤微环境中观察到的硬化中起着重要作用(参见图3和4)，并且耗尽该蛋白对免疫抑制有影响，但也可在抗肿瘤CD8+T细胞基质的机械释放中具有作用。
因此，本发明人证实了就抗肿瘤T细胞的机械张力释放和渗透而言，中和最近鉴定的基质靶标(βig-h3)的效果(图3)。因此，使用抗基质疗法以增强对抗PD-1检查点免疫疗法的应答的益处已充分建立，并为实体瘤(例如胰腺癌)的联合免疫和特异性基质疗法提供了潜力。
βig-h3拮抗剂与免疫检查点抑制剂的组合，其用于治疗实体瘤
因此，本发明提供以下的组合
i.βig-h3拮抗剂；和
ii.免疫检查点抑制剂，
其用于同时或依次使用以治疗实体瘤的。
本发明还提供βig-h3拮抗剂，其用于增强患有实体瘤的患者对免疫检查点抑制剂的敏感性的方法。
就其最广泛的含义而言，术语“治疗”是指逆转、减轻、抑制该术语所适用的病症或病状或这种病症或病状的一种或多种症状的进展。
“βig-h3拮抗剂”是指能够中和、阻断、抑制、消除、降低或干扰βig-h3活性的分子(天然或合成)，包括例如降低或阻断βig-h3和αVβ3整联蛋白之间的相互作用和/或降低或阻断βig-h3与胶原蛋白之间的相互作用。βig-h3拮抗剂包括抗体及其抗原结合片段、蛋白质、肽、糖蛋白、糖肽、糖脂、多糖、寡糖、核酸、生物有机分子、拟肽、药理剂及其代谢产物、转录和翻译控制序列等。拮抗剂还包括蛋白质的拮抗剂变体、针对蛋白质的siRNA分子、针对蛋白质的反义分子、适配子和针对蛋白质的核酶。例如，βig-h3拮抗剂可以是结合βig-h3并中和、阻断、抑制、消除、降低或干扰βig-h3的生物活性(例如阻断抗肿瘤免疫应答)的分子。更特别地，根据本发明的βig-h3拮抗剂是抗βig-h3抗体。
βig-h3的“生物活性”是指抑制CD8+T细胞活化(阻断抗肿瘤免疫应答)并诱导肿瘤微环境(TME或肿瘤基质)的硬化。
用于测定化合物作为βig-h3拮抗剂的能力的测试是本领域技术人员众所周知的。在优选实施方案中，拮抗剂以足以抑制βig-h3的生物活性的方式特异性结合βig-h3。可以通过本领域众所周知的任何竞争性测定来测定与βig-h3的结合和对βig-h3的生物活性的抑制。例如，所述测定可以在于测定作为βig-h3拮抗剂测试的试剂结合βig-h3的能力。结合能力通过Kd测量值反映。如本文所用，术语“KD”旨在表示离解常数，其由Kd与Ka之比(即Kd/Ka)获得并表示为摩尔浓度(M)。结合生物分子的KD值可以使用本领域良好建立的方法来测定。在特定实施方案中，“特异性结合βig-h3”的拮抗剂旨在表示以1μM或更小、100nM或更小、10nM或更小或3nM或更小的KD结合人βig-h3多肽的抑制剂。然后，可以建立竞争性测定以测定所述试剂抑制βig-h3的生物活性的能力。可以预期功能性测定从而评估抑制以下的能力：a)诱导TME的硬化和/或b)抑制CD8+T细胞活化(参见与功能性T细胞抑制测定有关的实施例/方法)。
本领域技术人员可以容易地确定βig-h3拮抗剂是否中和、阻断、抑制、消除、降低或干扰βig-h3的生物活性。为了检查βig-h3拮抗剂是否结合βig-h3和/或能够抑制TME的硬化和/或以与最初表征的阻断βig-h3抗体相同的方式阻断抑制性CD8+T细胞活化，对每种拮抗剂进行结合测定和/或胶原蛋白I粗纤维测定和/或抑制性CD8+T细胞活化测定。例如，可以按照Patry等中所述20，通过用抗体抗CD69和抗CD44检测表达活化标志物的细胞(CD8+T细胞)来评估抑制性CD8+T细胞活化(或参见实施例方法中的功能性T细胞抑制测定)，并且可以在天狼星红染色后通过原子力显微镜或偏振光测量胶原蛋白I粗纤维测定(参见实施例部分)。
因此，βig-h3拮抗剂可以是结合选自下组的βig-h3的分子：抗体、适配子和多肽。
本领域技术人员可以容易地测定βig-h3拮抗剂是否中和、阻断、抑制、消除、降低或干扰βig-h3的生物活性：(i)结合βig-h3和/或(ii)诱导TME的硬化和/或(iii)抑制CD8+T细胞活化。
因此，在特定实施方案中，βig-h3拮抗剂直接结合βig-h3并抑制CD8+T细胞活化的抑制(或恢复CD8+T细胞活化)和TME的硬化。
如本文所用，表达“肿瘤微环境(TME)”或“肿瘤基质”(两种表达将可互换使用)具有其在本领域的一般含义，并且是指其中存在肿瘤的细胞环境，包括周围的血管、免疫细胞、成纤维细胞、骨髓源性炎症细胞、淋巴细胞、信号分子和细胞外基质(ECM)(Joyce,JA.；et al.(April 2015).Science Magazine.pp.74–80.；Spill,F.；et al.Current Opinionin Biotechnology.40:41–48))。肿瘤与周围的微环境密切相关并不断相互作用。肿瘤可以通过释放细胞外信号、促进肿瘤血管生成和诱导外周免疫耐受来影响微环境，而微环境中的免疫细胞可以影响癌细胞的生长和进化(Korneev,KV；et al(January 2017)."Cytokine.89:127–135.)。
如本文所用，表述“免疫检查点抑制剂”或“检查点阻断癌症免疫治疗剂”(两种表达将可互换使用)具有其在本领域中的一般含义，并且是指抑制免疫抑制检查点蛋白功能的任何化合物。抑制包括降低功能和完全阻断。优选的免疫检查点抑制剂是特异性识别免疫检查点蛋白的抗体。已知许多免疫检查点抑制剂，并且与这些已知的免疫检查点蛋白抑制剂类似，在(不久的)将来可能会开发出替代的免疫检查点抑制剂。免疫检查点抑制剂包括肽、抗体、核酸分子和小分子。特别地，施用本发明的免疫检查点抑制剂以增强受试者中CD8+T细胞的增殖、迁移、持久和/或细胞毒性活性，特别是增强受试者的CD8+T细胞的肿瘤浸润。如本文所用，“CD8+T细胞”具有其在本领域中的一般含义，并且是指在其表面表达CD8的T细胞的子集。它们是MHC I类限制性的，并起细胞毒性T细胞的作用。“CD8+T细胞”也称为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、T杀伤细胞、溶细胞性T细胞、CD8+T细胞或杀伤性T细胞。CD8抗原是免疫球蛋白超基因家族的成员，并且是主要组织相容性复合体I类限制性相互作用中的关联识别元件。免疫检查点抑制剂增强T CD8细胞杀伤活性的能力可以通过本领域众所周知的任何测定来确定。典型地，所述测定是体外测定，其中使CD8+T细胞与靶细胞(例如，被CD8+T细胞识别和/或裂解的靶细胞)接触。例如，可以选择使通过CD8+T细胞的特异性裂解比相同效应子获得的特异性裂解增加超过约20％，优选至少约30％，至少约40％，至少约50％或更高的能力的本发明的免疫检查点抑制剂：与本发明的免疫检查点抑制剂接触的CD8+T细胞或CD8 T细胞系的靶细胞比例。经典细胞毒性测定的方案的实施例是常规的。
典型地，检查点阻断癌症免疫治疗剂是阻断由活化的T淋巴细胞(如细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)和程序性细胞死亡1(PDCD1，最常称为PD-1))或由NK细胞(如杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)家族的各种成员)表达的免疫抑制受体的试剂，或阻断这些受体的主要配体(如PD-1配体CD274(最常称为PD-L1或B7-H1))的试剂。
典型地，检查点阻断癌症免疫治疗剂是抗体。
在一些实施方案中，检查点阻断癌症免疫治疗剂是选自下组的抗体：抗CTLA4抗体、抗PD1抗体、抗PDL1抗体、抗PDL2抗体、抗TIM-3抗体、抗LAG3抗体、抗IDO1抗体、抗TIGIT抗体、抗B7H3抗体、抗B7H4抗体、抗BTLA抗体和抗B7H6抗体。
抗CTLA-4抗体的实例描述于美国专利号5,811,097；5,811,097；5,855,887；6,051,227；6,207,157；6,682,736；6,984,720；和7,605,238。一种抗CDLA-4抗体是替西木单抗(ticilimumab，CP-675,206)。在一些实施方案中，抗CTLA-4抗体是依匹单抗(也称为10D1，MDX-D010)，一种结合CTLA-4的完全人单克隆IgG抗体。
PD-1和PD-L1抗体的实例描述于美国专利号7,488,802；7,943,743；8,008,449；8,168,757；8,217,149和PCT公开专利申请号：WO03042402、WO2008156712、WO2010089411、WO2010036959、WO2011066342、WO2011159877、WO2011082400和WO2011161699。在一些实施方案中，PD-1阻断剂包括抗PD-L1抗体。在某些其他实施方案中，PD-1阻断剂包括抗PD-1抗体和类似的结合蛋白，如纳武单抗(MDX 1106、BMS 936558、ONO 4538)，一种结合PD-1并通过其配体PD-L1和PD-L2阻断其活化的完全人IgG4抗体；派姆单抗(MK-3475或SCH 900475)，一种针对PD-1的人源化单克隆IgG4抗体；CT-011是结合PD-1的人源化抗体；AMP-224是B7-DC的融合蛋白；抗体Fc部分；用于PD-L1(B7-H1)阻断的BMS-936559(MDX-1105-01)。
其他免疫检查点抑制剂包括淋巴细胞激活基因3(LAG-3)抑制剂，如IMP321，一种可溶性Ig融合蛋白(Brignone et al.,2007,J.Immunol.179:4202-4211)。
其他免疫检查点抑制剂包括B7抑制剂，如B7-H3和B7-H4抑制剂。特别是抗B7-H3抗体MGA271(Loo et al.,2012,Clin.Cancer Res.July 15(18)3834)。
还包括TIM3(T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3)抑制剂(Fourcade etal.,2010,J.Exp.Med.207:2175-86and Sakuishi et al.,2010,J.Exp.Med.207:2187-94)。如本文所用，术语“TIM-3”具有其在本领域的一般含义，并且是指T细胞免疫球蛋白和含有粘蛋白结构域的分子3。TIM-3的天然配体是半乳凝素9(Gal9)。因此，本文所用的术语“TIM-3抑制剂”是指可以抑制TIM-3的功能的化合物、物质或组合物。例如，抑制剂可以抑制TIM-3的表达或活性、调节或阻断TIM-3信号传导途径和/或阻断TIM-3与半乳糖凝集素9的结合。对TIM-3具有特异性的抗体是本领域众所周知的，并且典型地是WO2011155607、WO2013006490和WO2010117057中描述的那些。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是吲哚胺2,3-二加氧酶(IDO)抑制剂，优选IDO1抑制剂。IDO抑制剂的实例描述于WO2014150677。IDO抑制剂的实例包括但不限于1-甲基-色氨酸(IMT)、β-(3-苯并呋喃基)-丙氨酸、β-(3-苯并(b)噻吩基)-丙氨酸)、6-硝基色氨酸、6-氟色氨酸、4-甲基色氨酸、5-甲基色氨酸、6-甲基色氨酸、5-甲氧基色氨酸、5-羟基色氨酸、吲哚3-甲醇、3,3’-二吲哚基甲烷、表没食子儿茶素没食子酸酯、5-Br-4-Cl-吲哚基1,3-二乙酸酯、9-乙烯基咔唑、醋乙酰胺、5-溴色氨酸、5-溴吲哚基二乙酸酯、3-氨基萘甲酸、吡咯烷二硫代氨基甲酸酯、4-苯基咪唑(一种油菜素衍生物)、硫代乙内酰脲衍生物、β-咔啉衍生物或芸苔抗毒素衍生物。优选地，IDO抑制剂选自1-甲基色氨酸、β-(3-苯并呋喃基)-丙氨酸、6-硝基-L-色氨酸、3-氨基萘酸和β-[3-苯并(b)噻吩基]-丙氨酸或其衍生物或前药。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗TIGIT(T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域)抗体。
在优选实施方案中，检查点阻断癌症免疫治疗剂是CTLA4阻断抗体(如伊匹单抗)，或PD-1阻断抗体(如纳武单抗或派姆单抗)，或其组合。
在具体实施方案中，免疫检查点抑制剂在于PD-1阻断抗体(派姆单抗)，其包含：
-具有如SEQ ID NO:_1所示序列的重链
-具有如SEQ ID NO:_2所示序列的轻链
下表1显示了派姆单抗抗体的序列：
在具体实施方案中，免疫检查点抑制剂在于PD-1阻断抗体(纳武单抗)，其包含：
-具有如SEQ ID NO:_3所示序列的重链
-具有如SEQ ID NO:_4所示序列的轻链
下表2显示了纳武单抗抗体的序列：
在特定的实施方案中，免疫检查点抑制剂在于PD-1阻断抗体(阿特朱单抗)，其包含：
-具有如SEQ ID NO:_5所示序列的重链
-具有如SEQ ID NO:_6所示序列的轻链
下表3显示了阿特朱单抗抗体的序列：
在具体实施方案中，免疫检查点抑制剂在于PD-1阻断抗体(奥维单抗)，其包含：
-具有如SEQ ID NO:_7所示序列的重链
-具有如SEQ ID NO:_8所示序列的轻链
下表4显示了奥维单抗抗体的序列：
在具体实施方案中，免疫检查点抑制剂在于PD-1阻断抗体(杜鲁伐单抗)，其包含：
-具有如SEQ ID NO:_9所示序列的重链
-具有如SEQ ID NO:_10所示序列的轻链
下表5显示了杜鲁伐单抗抗体的序列：
在具体实施方案中，免疫检查点抑制剂在于CTLA-4阻断抗体(伊匹单抗)，其包含：
-具有如SEQ ID NO:_11所示序列的重链
-具有如SEQ ID NO:_12所示序列的轻链
下表6显示了伊匹单抗抗体的序列：
本发明的进一步方面涉及治疗实体瘤的方法，其包括向有需要的受试者施用一定量的免疫检查点抑制剂化合物和βig-h3拮抗剂化合物。
如本文所用，术语“受试者”表示受实体瘤影响的人。
术语“癌症”和“肿瘤”是指或描述哺乳动物中典型地以不受控制的细胞生长为特征的病理病症。更精确地，在本发明的用途中，疾病，即表达/分泌βig-h3的肿瘤最有可能在恢复CD8+T细胞活化后响应于βig-h3拮抗剂。特别地，癌症与实体瘤相关。与实体瘤形成相关的癌症的实例包括乳腺癌、子宫/宫颈癌、食道癌、胰腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、肾癌、卵巢癌、前列腺癌、头颈癌、非小细胞肺癌、胃癌、间充质起源的肿瘤(即纤维肉瘤和横纹肌肉瘤)、中枢和周围神经系统肿瘤(即包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、胶质瘤、神经胶质瘤)、甲状腺癌。
优选地，实体瘤选自下组：胰腺癌、食道鳞状细胞癌(Ozawa et al,2014)、胃癌和肝癌(Han et al,2015)、结肠癌(Ma et al,2008)、黑素瘤(Lauden et al,2014)。
在一个优选实施方案中，实体瘤是胰腺癌。
更优选地，胰腺癌是胰腺导管腺癌。
术语“抗肿瘤CD8+T细胞响应”是指CD8+T细胞裂解癌细胞的天然能力(Robbinsand Kawakami,1996,Romero,1996)。
-抗体
在另一个实施方案中，βig-h3拮抗剂是可以阻断βig-h3与αVβ3整联蛋白相互作用的抗体(该术语包括抗体片段或部分)。
在优选实施方案中，βig-h3拮抗剂可在于针对βig-h3的抗体，其方式是使所述抗体损害βig-h3与αVβ3整联蛋白的结合(“中和抗体”)。
然后，对于本发明，根据其以下能力如上所述选择βig-h3的中和抗体：(i)结合βig-h3和/或(ii)降低TME的硬化和/或(iii)阻断抑制性CD8+T细胞活化。
在本文描述的抗体或其部分的一个实施方案中，抗体是单克隆抗体。在本文描述的抗体或其部分的一个实施方案中，抗体是多克隆抗体。在本文描述的抗体或其部分的一个实施方案中，抗体是人源化抗体。在本文描述的抗体或其部分的一个实施方案中，抗体是嵌合抗体。在本文描述的抗体或其部分的一个实施方案中，抗体的部分包含抗体的轻链。在本文描述的抗体或其部分的一个实施方案中，抗体的部分包含抗体的重链。在本文描述的抗体或其部分的一个实施方案中，抗体的部分包含抗体的Fab部分。在本文描述的抗体或其部分的一个实施方案中，抗体的部分包含抗体的F(ab')2部分。在本文描述的抗体或其部分的一个实施方案中，抗体的部分包含抗体的Fc部分。在本文描述的抗体或其部分的一个实施方案中，抗体的部分包含抗体的Fv部分。在本文描述的抗体或其部分的一个实施方案中，抗体的部分包含抗体的可变结构域。在本文描述的抗体或其部分的一个实施方案中，抗体的部分包含抗体的一个或多个CDR结构域。
如本文所用，“抗体”包括天然存在和非天然存在的抗体。具体地，“抗体”包括多克隆和单克隆抗体、及其单价和二价片段。此外，“抗体”包括嵌合抗体、全合成抗体、单链抗体及其片段。抗体可以是人或非人抗体。可以通过重组方法将非人抗体人源化以降低其在人中的免疫原性。
根据常规方法制备抗体。单克隆抗体可以使用Kohler和Milstein的方法(Nature,256:495,1975)产生。为了制备可用于本发明的单克隆抗体，用抗原形式的βig-h3以合适的间隔(例如，每周两次、每周、每月两次或每月)免疫小鼠或其他合适的宿主动物。可以在处死一周后向动物施用抗原的最后“增强”。通常需要在免疫期间使用免疫佐剂。合适的免疫佐剂包括弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、明矾、Ribi佐剂、Hunter's Titermax、皂苷佐剂如QS21或Quil A、或含CpG的免疫刺激性寡核苷酸。其他合适的佐剂是本领域众所周知的。可以通过皮下、腹膜内、肌内、静脉内、鼻内或其他途径免疫动物。可以通过多种途径用多种形式的抗原免疫给定的动物。
简言之，可以通过用重组细胞系表达来提供重组βig-h3。可以使用任何之前描述的方法提供βig-h3的重组形式。免疫方案后，从动物的脾脏、淋巴结或其他器官中分离淋巴细胞，并使用试剂(如聚乙二醇)将其与合适的骨髓瘤细胞系融合以形成杂交瘤。融合后，使用标准方法将细胞置于允许杂交瘤生长而不是融合伴侣生长的培养基中，如(Coding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice:Production and Application ofMonoclonal Antibodies in Cell Biology,Biochemistry and Immunology,3rdedition,Academic Press,New York,1996)所述。培养杂交瘤后，分析细胞上清液中所需特异性的抗体(即选择性结合抗原的抗体)的存在。合适的分析技术包括ELISA、流式细胞仪、免疫沉淀和蛋白质印迹。其他筛选技术是本领域众所周知的。优选的技术是确认抗体与构象完整的、天然折叠的抗原结合的那些，例如非变性ELISA、流式细胞术和免疫沉淀。
明显地，如本领域众所周知，抗体分子的仅一小部分(即抗体结合部位)参与抗体与其表位的结合(通常参见Clark,W.R.(1986)The Experimental Foundations of ModernImmunology Wiley&Sons,Inc.,New York；Roitt,I.(1991)Essential Immunology,7thEd.,Blackwell Scientific Publications,Oxford)。例如，Fc'和Fc区是补体级联的效应子，但不参与抗原结合。从其上酶促切割了pFc'区的抗体，或者在没有pFc'区的情况下产生的抗体，称为F(ab')2片段，其保留了完整抗体的两个抗原结合位点。类似地，从其上酶促切割了Fc区的抗体，或者在没有Fc区的情况下产生的抗体，称为Fab片段，其保留了完整抗体分子的抗原结合位点之一。进一步地，Fab片段由共价结合的抗体轻链和表示为Fd的抗体重链的一部分组成。Fd片段是抗体特异性的主要决定因素(单个Fd片段可能与多达十个不同的轻链相关，而不改变抗体特异性)，并且Fd片段在分离时保留表位结合能力。
如本领域众所周知的，在抗体的抗原结合部分内，存在与抗原的表位直接相互作用的互补决定区(CDR)和保留抗体结合部位的三级结构的框架区(FR)(通常参见Clark,1986；Roitt,1991)。在IgG免疫球蛋白的重链Fd片段和轻链中，存在四个框架区(FR1至FR4)，其分别被三个互补决定区(CDR1至CDRS)隔开。CDR，特别是CDRS区域，更特别是重链CDRS，主要负责抗体的特异性。
目前在本领域中已经公认，哺乳动物抗体的非CDR区可以用同种特异性或异种特异性抗体的类似区域代替，同时保留初始抗体的表位特异性。这在“人源化”抗体的开发和使用中最明显地体现出来，其中非人CDR与人FR和/或Fc/pFc'区共价连接以产生功能性抗体。
在某些实施方案中，本发明提供了包括人源化形式的抗体的组合物和方法。如本文所用，“人源化”描述了其中CDR区外的一些、大部分或全部氨基酸被衍生自人免疫球蛋白分子的相应氨基酸取代的抗体。人源化的方法包括但不限于美国专利号4,816,567、5,225,539、5,585,089、5,693,761、5,693,762和5,859,205中描述的那些，其通过引用并入本文。上述美国专利号5,585,089和5,693,761以及WO90/07861也提出了四个可用于设计人源化抗体的可能的标准。第一个建议是，对于受体，使用来自与待人源化的供体免疫球蛋白异常同源的特定人免疫球蛋白的框架，或使用来自许多人抗体的共有框架。第二个建议是，如果人免疫球蛋白框架中的氨基酸是异常的，并且该位置的供体氨基酸是人序列的典型序列，则可以选择供体氨基酸而不是受体氨基酸。第三个建议是，在人源化免疫球蛋白链中紧邻3个CDR的位置，可以选择供体氨基酸而不是受体氨基酸。第四个建议是，使用位于框架位置的供体氨基酸残基，在该位置预期氨基酸在抗体的三维模型中的CDR的3A内具有侧链原子，并预期能够与CDR相互作用。以上方法仅是本领域技术人员可以用来制备人源化抗体的一些方法的说明。本领域普通技术人员将熟悉用于抗体人源化的其他方法。
在人源化形式的抗体的一个实施方案中，CDR区外的一些、大多数或全部氨基酸被来自人免疫球蛋白分子的氨基酸取代，但是其中一个或多个CDR区内的一些、大多数或全部氨基酸保持不变。氨基酸的少量添加、缺失、插入、取代或修饰是允许的，只要它们不会消除抗体结合给定抗原的能力。合适的人免疫球蛋白分子将包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgM分子。“人源化”抗体保留与初始抗体相似的抗原特异性。但是，使用某些人源化方法，如其内容通过引用并入本文的Wu et al.,/.Mol.Biol.294:151,1999所述，可以使用“定向进化”方法来增加抗体结合的亲和力和/或特异性。
也可以通过免疫大部分人免疫球蛋白重链和轻链基因座的转基因小鼠来制备完全人单克隆抗体。例如，参见美国专利号5,591,669、5,598,369、5,545,806、5,545,807、6,150,584和其中引用的参考文献，其内容通过引用并入本文。这些动物已经被基因修饰，使得内源性(例如鼠)抗体的生产中存在功能性缺失。进一步修饰动物以包含全部或部分人种系免疫球蛋白基因座，使得对这些动物的免疫将导致产生针对目的抗原的完全人抗体。免疫这些小鼠(例如XenoMouse(Abgenix)、HuMAb小鼠(Medarex/GenPharm))后，可根据标准杂交瘤技术制备单克隆抗体。这些单克隆抗体具有人免疫球蛋白氨基酸序列，因此向人施用时不会引起人抗小鼠抗体(KAMA)响应。
还存在用于产生人抗体的体外方法。这些包括噬菌体展示技术(美国专利号5,565,332和5,573,905)和人B细胞的体外刺激(美国专利号5,229,275和5,567,610)。这些专利的内容通过引用并入本文。
因此，对于本领域普通技术人员显而易见的是，本发明还提供了F(ab')2、Fab、Fv和Fd片段；嵌合抗体，其中Fc和/或FR和/或CDR1和/或CDR2和/或轻链CDR3区已被同源的人或非人序列取代；嵌合F(ab')2片段抗体，其中FR和/或CDR1和/或CDR2和/或轻链CDR3区已被同源的人或非人序列取代；嵌合Fab片段抗体，其中FR和/或CDR1和/或CDR2和/或轻链CDR3区已被同源的人或非人序列取代；以及嵌合Fd片段抗体，其中FR和/或CDR1和/或CDR2区已被同源的人或非人序列取代。本发明还包括所谓的单链抗体。
各种抗体分子和片段可以源自任何通常已知的免疫球蛋白类别，包括但不限于IgA、分泌型IgA、IgE、IgG和IgM。IgG亚类也是本领域技术人员众所周知的，包括但不限于人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
在另一个实施方案中，根据本发明的抗体是单结构域抗体。术语“单结构域抗体”(sdAb)或“VHH”是指可以在天然缺乏轻链的骆驼属哺乳动物中发现的类型的抗体的单重链可变域。这种VHH也被称为根据本发明，sdAb可以特别是美洲驼sdAb。
中和抗βig-h3抗体的实例已公开于例如Bae JS et al Acta Physiol2014,212,306–315。技术人员可以使用常规技术来使用这些抗体的抗原结合序列(例如，CDR)，并产生人源化抗体以治疗如本文所公开的PDAC。
发明人已经克隆并测序了单克隆抗体18B3的轻链的可变域(VL)和重链的可变域(VH)。已经根据IMGT编号系统确定了编码所述抗体的互补决定区(CDR)的序列的位置。IMGT唯一编号已定义为比较可变域，无论抗原受体、链类型或物种(Lefranc M.-P.,ImmunologyToday,18,509(1997)；Lefranc M.-P.,The Immunologist,7,132-136(1999).；Lefranc,Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003).)。
在具体实施方案中，所述βig-h3拮抗剂在于中和性抗βig-h3抗体(18B3抗体)，其包含：
-具有如SEQ ID NO:_13所示序列的重链
-具有如SEQ ID NO:_14所示序列的轻链
因此，在具体实施方案中，抗βig-h3抗体是包含以下的抗体：
(a)重链，其中可变结构域包含：
-具有如SEQ ID NO:_15所示序列的H-CDR1；
-具有如SEQ ID NO:_16所示序列的H-CDR2；
-具有如SEQ ID NO:_17所示序列的H-CDR3；
(b)轻链，其中可变结构域包含：
-具有如SEQ ID NO:_18所示序列的L-CDR1；
-具有如SEQ ID NO:_19所示序列的L-CDR2；
-具有如SEQ ID NO:_20所示序列的L-CDR3。
下表7中列出了18B3抗体的序列：
在具体实施方案中，βig-h3拮抗剂在于中和抗体，该中和抗体与中和性抗βig-h3抗体(18B3抗体)竞争结合βig-h3。
如本文所用，在抗体与预定抗原或表位结合的上下文中，术语“结合”典型地是例如当通过BIAcore 3000仪器中的表面等离振子共振(SPR)技术使用可溶形式的抗原作为配体以及抗体作为分析物进行测定时，具有对应于约10-7M或更小，如约10-8M或更小，如约10-9M或更小，约10-10M或更小，或约10-11M或甚至更小的KD的亲和力的结合。(GE Healthcare,Piscaataway,NJ)是通常用于单克隆抗体的抗原决定簇表位的多种表面等离振子共振测定形式之一。典型地，抗体以对应于比其结合与预定抗原并不相同或紧密相关的非特异性抗原(例如，BSA，酪蛋白)的KD低至少十倍，例如低至少100倍，例如低至少1,000倍，例如至少10,000倍，例如至少100,000倍的KD的亲和力结合预定抗原。当抗体的KD非常低(即抗体具有高亲和力)时，则结合抗原的KD典型地比其对非特异性抗原的KD低至少10,000倍。如果无法检测到这种结合(例如，使用BIAcore 3000仪器中的等离振子共振(SPR)技术，使用可溶形式的抗原作为配体以及抗体为分析物)，或比该抗体和具有不同化学结构或氨基酸序列的抗原或表位检测到的结合低100倍、500倍、1000倍或大于1000倍，则认为该抗体基本上不结合抗原或表位。
可以基于它们在标准βig-h3结合测定中与本发明的其他抗体交叉竞争(例如，以统计学显著的方式竞争性地抑制结合)的能力来鉴定其他抗体。测试抗体抑制本发明的抗体与βig-h3结合的能力证实测试抗体可以与该抗体竞争结合βig-h3。根据非限制性理论，这种抗体可以与其竞争的抗体结合βig-h3上相同或相关的(例如，结构上相似或在空间上接近的)表位。因此，本发明的另一方面提供与本文公开的抗体(18B3抗体)结合相同抗原并与其竞争的抗体。如本文所用，当竞争性抗体在等摩尔浓度的竞争性抗体存在下抑制本发明抗体或抗原结合片段的βig-h3结合超过50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％时，抗体“竞争”结合。
在其他实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段结合βig-h3的一个或多个表位。在一些实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段结合的表位是线性表位。在其他实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段结合的表位是非线性的构象表位。
可以通过本领域已知的任何方法测定本发明的抗体的特异性结合。许多不同的竞争性结合测定形式可以用于表位结合。可以使用的免疫测定包括但不限于使用诸如蛋白质印迹、放射免疫测定、ELISA、“夹心”免疫测定、免疫沉淀测定、沉淀素测定、凝胶扩散沉淀素测定、免疫放射测定、荧光免疫测定、蛋白质A免疫分析和补体固定分析等技术的竞争性测定系统。这样的测定是常规的并且是本领域众所周知的(例如参见Ausubel et al.,eds,1994Current Protocols in Molecular Biology,Vol.1,John Wiley&sons,Inc.,NewYork)。
-适配子
在另一个实施方案中，βig-h3拮抗剂是抗βig-h3的适配子。适配子是在分子识别方面代表抗体的替代物的一类分子。适配子是寡核苷酸或寡肽序列，其具有以高亲和力和特异性识别几乎任何种类的靶分子的能力。如Tuerk C.和Gold L.1990所述，可通过随机序列文库的指数富集(SELEX)通过配体的系统进化来分离这类配体。随机序列文库可通过DNA的组合化学合成获得。在该文库中，每个成员都是唯一序列的最终化学修饰的线性低聚物。此类分子的可能修饰、用途和优势已在Jayasena SD，1999中综述。肽适配子由通过两种杂交方法从组合文库中选择的平台蛋白(例如大肠杆菌硫氧还蛋白A)显示的受构象限制的抗体可变区组成(Colas et al.,1996)。
然后，对于本发明，根据其以下能力如上所述选择βig-h3的中和适配子：(i)结合βig-h3和/或(ii)抑制肿瘤细胞生长和/或(iii)阻断抑制性CD8+T细胞活化。
-βig-h3基因表达的抑制剂
在另一个实施方案中，βig-h3拮抗剂是βig-h3基因表达的抑制剂。“表达抑制剂”是指具有抑制基因表达的生物效应的天然或合成化合物。因此，“βig-h3基因表达的抑制剂”是指具有抑制βig-h3基因表达的生物效应的天然或合成化合物。
在本发明的一个优选实施方案中，所述βig-h3基因表达的抑制剂是siRNA、反义寡核苷酸、核酸酶或核酶。
用于本发明的βig-h3基因表达的抑制剂可以基于反义寡核苷酸构建体。反义寡核苷酸(包括反义RNA分子和反义DNA分子)将通过与之结合而直接阻断βig-h3 mRNA的翻译，从而阻止蛋白质翻译或增加mRNA的降解，从而降低细胞中的βig-h3水平，从而降低活性。例如，可以例如通过常规磷酸二酯技术合成至少约15个碱基并与编码βig-h3的mRNA转录物序列的独特区域互补的反义寡核苷酸，并通过例如静脉内注射或输注来施用。使用反义技术特异性抑制序列已知的基因的基因表达的方法是本领域众所周知的(例如，参见美国专利号6,566,135；6,566,131；6,365,354；6,410,323；6,107,091；6,046,321；和5,981,732)。
小抑制性RNA(siRNA)也可以用作用于本发明的βig-h3基因表达的抑制剂。可以通过使用小双链RNA(dsRNA)或导致产生小双链RNA的载体或构建体降低βig-h3基因的表达，从而特异性抑制βig-h3基因的表达(即RNA干扰或RNAi)。对于序列已知的基因，选择合适的dsRNA或编码dsRNA的载体的方法是本领域众所周知的(例如，参见Tuschi,T.et al.(1999)；Elbashir,S.M.et al.(2001)；Hannon,GJ.(2002)；McManus,MT.et al.(2002)；Brummelkamp,TR.et al.(2002)；美国专利号6,573,099和6,506,559；以及国际专利公开号WO 01/36646,WO 99/32619和WO 01/68836)。
所述针对βig-h3的siRNA的实例包括但不限于Chaoyu Ma(2008)Genes&Development 22:308–321中描述的那些。
核酶还可以用作用于本发明的βig-h3基因表达的抑制剂。核酶是能够催化RNA特异性切割的酶促RNA分子。核酶作用的机制涉及核酶分子与互补靶RNA的序列特异性杂交，然后进行内切核苷酸切割。因此，特异且有效地催化βig-h3 mRNA序列的内切核苷酸切割的工程发夹或锤头基序核酶分子在本发明的范围内是有用的。首先，通过扫描靶分子的核酶切割位点来鉴定任何潜在RNA靶标内的特定核酶切割位点，该酶典型地包括以下序列，GUA、GUU和GUC。一旦鉴定，就可以评估对应于包含切割位点的靶基因区域的约15至20个核糖核苷酸之间的短RNA序列的预测结构特征，例如二级结构，这会使寡核苷酸序列不合适。还可以通过使用例如核糖核酸酶保护测定法测试候选靶标与互补寡核苷酸杂交的可及性来评估候选靶标的适用性。
可以通过已知方法制备用作βig-h3基因表达的抑制剂的反义寡核苷酸、siRNA和核酶。这些包括用于化学合成的技术，例如通过固相亚磷酰胺化学合成。或者，可以通过体外或体内转录编码RNA分子的DNA序列来产生反义RNA分子。可以将此类DNA序列掺入多种载体中，所述载体掺入了合适的RNA聚合酶启动子，例如T7或SP6聚合酶启动子。可以引入对本发明的寡核苷酸的各种修饰，作为增加细胞内稳定性和半衰期的手段。可能的修饰包括但不限于将核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸的侧翼序列添加到分子的5'和/或3'末端，或在寡核苷酸骨架内使用硫代磷酸酯或2'-O-甲基而不是磷酸二酯酶键。
本发明的反义寡核苷酸、siRNA和核酶可单独或与载体结合在体内递送。从其最广泛的意义上讲，“载体”是能够促进反义寡核苷酸、siRNA或核酶核酸向细胞并且优选向表达βig-h3的细胞转移的任何载体。优选地，相对于将导致不存在载体的降解程度，载体将核酸以降低的降解运输至细胞。通常，可用于本发明的载体包括但不限于质粒、噬菌粒、病毒、衍生自病毒或细菌来源的其他媒介物，所述媒介物已通过反义寡核苷酸、siRNA或核酶核酸序列的插入或掺入进行了操作。病毒载体是优选的载体类型，包括但不限于来自以下病毒的核酸序列：逆转录病毒，例如莫洛尼鼠白血病病毒、哈维鼠肉瘤病毒、鼠乳腺肿瘤病毒和劳斯肉瘤病毒；腺病毒、腺相关病毒；SV40型病毒；多瘤病毒；爱泼斯坦-巴尔病毒；乳头瘤病毒；疱疹病毒；牛痘病毒；脊髓灰质炎病毒；和RNA病毒，例如逆转录病毒。可以容易地采用未命名但本领域已知的其他载体。
优选的病毒载体基于非细胞病变性真核病毒，其中非必需基因已被目的基因替代。非细胞病变性病毒包括逆转录病毒(例如慢病毒)，其生命周期涉及将基因组病毒RNA逆转录成DNA，随后将原病毒整合到宿主细胞DNA中。逆转录病毒已被批准用于人基因治疗试验。最有用的是那些复制缺陷(即，能够指导所需蛋白质的合成，但不能制造感染性颗粒)的逆转录病毒。这种遗传改变的逆转录病毒表达载体对于体内基因的高效转导具有普遍的用途。产生复制缺陷型逆转录病毒的标准方案(包括将外源遗传物质掺入质粒、转染有质粒的包装细胞、通过包装细胞系生产重组逆转录病毒、从组织培养基收集病毒颗粒和用病毒颗粒感染靶细胞)提供于KRIEGLER(A Laboratory Manual,"W.H.Freeman C.O.,New York,1990)和MURRY("Methods in Molecular Biology,"vol.7,Humana Press,Inc.,Cliffton,N.J.,1991)。
对于某些应用而言，优选的病毒是腺病毒和腺相关病毒，其是已经被批准用于人基因疗法的双链DNA病毒。可以将腺相关病毒工程化为复制缺陷型，并能够感染多种细胞类型和物种。它还具有诸如热和脂质溶剂稳定性的优点；在不同谱系细胞(包括造血细胞)中的高转导频率；并且没有过度感染抑制作用，因此允许多个系列的转导。据报道，腺相关病毒可以以位点特异性方式整合到人细胞DNA中，从而使插入诱变的可能性和逆转录病毒感染特征的插入基因表达的可变性最小。另外，在没有选择性压力的情况下，在组织培养中对野生型腺相关病毒感染进行大于100次的传代，表明腺相关病毒基因组整合是相对稳定的事件。腺相关病毒也可以染色体外的方式起作用。
其他载体包括质粒载体。质粒载体已在本领域中广泛描述，并且是本领域技术人员众所周知的。参见例如SANBROOK et al.,"Molecular Cloning:A Laboratory Manual,"Second Edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989。在过去几年中，质粒载体已用作DNA疫苗，用于向细胞体内递送编码抗原的基因。它们对此特别有利，因为它们与许多病毒载体没有相同的安全性问题。但是，这些具有与宿主细胞相容的启动子的质粒可以表达来自质粒内可操作编码的基因的肽。一些常用的质粒包括pBR322、pUC18、pUC19、pRC/CMV、SV40和pBlueScript。其他质粒是本领域普通技术人员众所周知的。另外，可以使用限制酶和连接反应来定制设计质粒，以去除和添加DNA的特定片段。质粒可以通过多种肠胃外、粘膜和局部途径递送。例如，可以通过肌内、皮内、皮下或其他途径注射DNA质粒。其也可以通过鼻内喷雾剂或滴剂、直肠栓剂和口服施用。也可以使用基因枪将其施用于表皮或粘膜表面。可以在水溶液中提供质粒，将其干燥至金颗粒上，或者与另一种DNA递送系统结合，包括但不限于脂质体、树状聚合物、蜗状化和微囊化。
如本文所用，术语“本发明的活性成分”旨在表示如上所定义的βig-h3拮抗剂化合物和免疫检查点抑制剂化合物。
本发明的活性成分可以药物组合物的形式施用，如下文所定义。
优选地，以治疗有效量施用本发明的活性成分。
“治疗有效量”是指以适用于任何药物治疗的合理的益处/风险比来治疗实体瘤的本发明的活性成分的足够量。
在优选实施方案中，本发明的活性成分优选通过静脉内途径施用。
根据本发明，本发明的活性成分可以以组合制剂施用，用于同时、分别或依次使用以治疗实体瘤。
由于免疫检查点抑制剂和βig-h3拮抗剂的组合对胰腺癌细胞具有协同作用，因此与单独施用的治疗方案相比，免疫检查点抑制剂药物可以有利地以更低的剂量使用。
因此，在根据本发明的组合的优选实施方案中，免疫检查点抑制剂药物以低剂量，即以低于当不存在所述βig-h3拮抗剂的情况下施用所述药物时推荐的剂量的剂量使用。
对于给定的βig-h3拮抗剂药物，本领域技术人员可以立即测定低剂量。该低的剂量尤其取决于待治疗的癌症和治疗方案。
在本发明的框架中，“低剂量”是指低于在不存在βig-h3拮抗剂的情况下施用免疫检查点抑制剂时给予患者的推荐剂量的剂量。当与免疫检查点抑制剂的常规治疗剂量组合时，所述低剂量优选比推荐剂量低至少10％、15％、20％、25％、50％或75％。
当在不存在βig-h3拮抗剂的情况下施用免疫检查点抑制剂时，将给予患者的推荐剂量是本领域技术人员已知的。例如，可以在发布销售授权的官方提供的信息中找到这种推荐剂量(例如，在EMEA发布的EPAR中)。
在优选实施方案中，本发明的βig-h3拮抗剂优选通过静脉内途径施用，本发明的免疫检查点抑制剂优选通过口服途径施用。
根据本发明的药物组合物
本发明还提供了药物组合物，其包含：
ii.βig-h3拮抗剂(如上定义)，
ii.免疫检查点抑制剂(如上定义)；和
iii.药学上可接受的载体。
以适合于向人施用的方式配制的药物组合物是本领域技术人员已知的。本发明的药物组合物可以进一步包含稳定剂、缓冲剂等。
例如，本发明的组合物可以被配制并用作用于口服施用的片剂、胶囊剂或酏剂、用于直肠施用的栓剂、用于注射施用的无菌溶液或悬浮液。
制剂的选择最终取决于预期的施用方式，例如静脉内、腹膜内、皮下或口服施用方式，或通过肿瘤注射的局部施用。
根据本发明的药物组合物可以是溶液或悬浮液，例如注射液或悬浮液。例如，它可以以剂量单位形式包装。
在优选实施方案中，本发明的βig-h3拮抗剂和免疫检查点抑制剂优选通过静脉内途径施用。
本发明还提供了包含以下的药物组合物：
iii.βig-h3拮抗剂(如上定义)，
ii.免疫检查点抑制剂(如上定义)；和
iii.药学上可接受的载体，
其用于预防或治疗有需要的患者的实体瘤。
在优选实施方案中，实体瘤选自以下列表：乳腺癌、子宫/宫颈癌、食道癌、胰腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、肾癌、卵巢癌、前列腺癌、头颈癌、非小细胞肺癌、胃癌、间充质起源的肿瘤(即纤维肉瘤和横纹肌肉瘤)、中枢和周围神经系统肿瘤(即包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、胶质瘤、神经胶质瘤)、甲状腺癌。
优选地，实体瘤选自下组：胰腺癌、食道鳞状细胞癌、胃癌和肝癌、结肠癌、黑素瘤。
在一个优选实施方案中，实体瘤是胰腺癌。
更优选地，胰腺癌是胰腺导管腺癌。
通过以下附图和实施例将进一步说明本发明。但是，这些实施例和附图不应以任何方式解释为限制本发明的范围。
附图说明
图1：在KIC小鼠中诱导体内耗尽βig-h3的影响。(a)用于诱导抗体耗尽的实验方案。(b)在实验结束时定量肿瘤重量。(c)抗βig-h3和抗PD-1Abs组合的影响。使用每组5-6只小鼠进行实验。(d)每个肿瘤区域的GrzB染色的定量(在整个扫描部分上)。(e)未处理和抗β ig-h3处理的小鼠的存活曲线。(f)未处理和抗βig-h3和抗PD-1Abs处理的小鼠的存活曲线。表中显示了中位生存期。ns不显著，*P<0.05，**P<0.01，****P<0.0001。
图2：建立的PDA中的βig-h3耗尽导致肿瘤体积减小。(a)用于抗体耗尽的实验方案。(b)在Ab处理的动物中使用超声定量肿瘤体积。(c)在βig-h3处理的(AB)和未处理的(UT)KPC小鼠中CK19和裂解的半胱天冬酶-3的代表性免疫组织化学。比例尺，50μm。(d)基于CK19染色的PDA和PANIN区域的定量和(e)对裂解的半胱天冬酶-3的染色的结果的定量。该实验使用每组5-6只小鼠进行。*P<0.05和***P<0.001。
图3：建立的PDA中的βig-h3耗尽重编程原发灶和转移灶中的肿瘤微环境。(a)用于抗体耗尽的实验方案。(b)用超声在Ab处理的动物中量化肿瘤体积，并表示为第0天的百分比。(c)通过AFM结合IF(基于CK19和aSMA染色)对UT和AB处理的KIC小鼠的弹性模量进行定量(每组3只独立小鼠，每个目标区测量100条力曲线)。(d)定量总胶原蛋白(透射光)和粗纤维(偏振光)的含量。*P<0.05，****P<0.0001。
图4：βig-h3主要在基质腔室表达。(a)分离的细胞群体的示意图。(b)新鲜分离的CAF和导管细胞中βig-h3水平的qPCR分析。TATA结合蛋白(TBP)用作对照管家基因。相对表达水平使用方程式2-CT Target/2-CT TBP计算。所示结果代表2个独立实验，每组包括3只小鼠。(c)将CAF或导管细胞铺板于完全培养基中，或用20ng/ml TGF-b1刺激48小时。使用ELISA在培养上清液中定量分泌的βig-h3的水平。所示结果代表2个独立实验，其中包括3种不同的CAF制剂和2种不同的导管制剂。*P<0.05；**P<0.01和***P<0.001。
具体实施方式
下列实施例描述了进行和实施本发明的一些优选方式。但是，应该理解，这些实施例仅用于说明目的并且不旨在限制本发明的范围。
材料和方法
小鼠
p48-Cre；KrasG12D(KC)；pdx1-Cre；KrasG12D；Ink4a/Arffl/fl(KIC)和pdx1-Cre；KrasG12D；p53R172H(KPC)小鼠已在之前描述26-28。根据里昂癌症研究中心动物护理和使用委员会提供的指南，审核并批准了所有动物实验方案。
从小鼠收集组织样品
将正常胰腺和肿瘤胰腺在PBS中洗涤，切成小片段，然后在37℃的胶原酶溶液(HBSS中从Roche获得的1mg/ml胶原酶V)中孵育20分钟。将脾脏和胰周淋巴结均质化，并通过70μm细胞滤网以实现单细胞悬液。使用NH4Cl裂解缓冲液裂解红细胞。
抗体
为了进行体内研究，使用以下无内毒素的抗体：抗CD8(BioXcell；2.43)、抗βigh318B3 29、抗PD-1和对照多克隆小鼠Ig(BioXcell)。
分离的胰腺细胞群体
使用抗CD45、抗PDGFR-PE和抗EPCAM或CD45抗体以及FACS分选分离导管细胞和CAF。
将PDGFRα-PE分离的CAF(得自3只不同的KC小鼠)培养并在体外扩增。将CAF或导管细胞以104个细胞/孔的速度接种，然后使用小鼠TGF-β1以20ng/ml的终浓度刺激48小时。然后，将CAF上清液(CAF SN)收集并用于T细胞抑制测定。
功能性T细胞抑制测定
将纯化的CD8+T细胞在37℃下在无血清RPMI中用1μM 5,6-羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE，Invitrogen)标记20分钟。在存在或不存在终浓度为5μg/ml的重组人βig-h3(rβig-h3)的情况下，用OVA(SIINFEKL)肽刺激OT1 CFSE标记的脾细胞5天。在共培养测定法中评估CD8+T细胞的抗原特异性抑制，其中将从OT-1转基因小鼠获得的脾细胞(抗原特异性测定法)一式三份接种在96孔圆底板中(5x105个细胞/孔)。在用或不用抗βig-h3 Ab处理的CAF SN的存在下培养脾细胞，然后用同源抗原(OVA衍生的肽SIINFEKL)(1mg/ml；新英格兰肽)刺激3天。或者，将丝裂霉素处理的KC细胞与CFSE标记的胰腺淋巴结细胞在终浓度为6μg/ml的中和性抗βigh3 Ab或对照Ab(BioXCell，USA)存在下共培养5天。在培养期结束时，使用流式细胞仪对CFSE稀释度评估增殖。
处理KPC和KIC小鼠
每周两次处理KPC或KIC小鼠21天，并处死。通过VevoScan在KPC小鼠中监测肿瘤体积。βigh3以8微克/小鼠使用，抗PD-1以20微克/小鼠使用。对于组合，注射是在同一时间(一周两次)以ip分别进行。
免疫组织化学和免疫荧光
将具有包埋在石蜡中的4μm厚的小鼠或人胰腺组织切片的载玻片进行脱石蜡处理。使用修复溶液(Vector H 3300)将切片修复，用抗体稀释剂(Dako)饱和30分钟，然后与一抗(抗βig-h3，Sigma；抗半胱天冬酶-3，Cell Signaling；和CK19 Troma III，DSHB)一起孵育，所述一抗在抗体稀释剂中在4℃下稀释过夜。洗涤切片，然后与山羊抗大鼠生物素化的二抗(BD Biosciences；1:200)在室温下孵育1小时。其余步骤使用Vectastain ABC试剂盒(Vector Labs)进行。载玻片用苏木精复染。
反转录和qPCR
根据制造商的说明，使用Qiagen试剂盒从沉淀的胰岛中提取RNA。使用Nanodrop分光光度计测量RNA浓度。使用等量的提取RNA(大于300ng)评估逆转录(RT)。cDNA用于以Power Master Mix(Life Technologies)进行定量聚合酶链反应(qPCR)分析。使用以下引物：TBP正向5’-TGGTGTGCACAGGAGCCAAG-3’(SEQ ID N°21)TBP反向5’-TTCACATCACAGCTCCCCAC(SEQ ID N°22)，和βig-h3一体TM qPCR(MQP028379)引物，其获自GeneCopoeia。
原子力显微镜
我们使用AFM结合共聚焦显微镜来确定顺序的机械性能和胰腺组织结构域身份。在AFM中，将悬臂的尖端推向样品，并监测该悬臂的挠度。使用杠杆的刚度常数，挠度表示样品的抵抗力。我们的协议30允许我们通过将样品变形到100nm的深度，以最小侵入性方式非常局部地测量样品的刚度。为了在高分辨率下研究PDA(基质腔室和胰腺肿瘤细胞)期间胰腺外分泌腔室的刚度模式和不同区域，我们使用了QNM(定量纳米力学映射)和力曲线阵列方案(Bruker)。在这些方案中，AFM探针在水平扫描样品时以低频振荡，并且每次探针与样品接触时产生力曲线。然后，使用Sneddon(Hertz)模型从每条曲线中提取反映刚度的样品的弹性模量，生成二维刚度图，其中每个像素代表一条力曲线。
统计分析
如附图中的图例所示，使用学生t检验(GraphPad Prism)计算P值。*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001；和****P<0.0001。为了进行多次比较，使用单向Anova与Tukey后测试。
结果
βig-h3耗尽增加免疫介导的体内肿瘤清除
我们评估了在KPC和KIC小鼠中靶向βig-h3的治疗潜力，所述KPC和KIC小鼠是两个公认的发展为侵袭性胰腺腺癌的小鼠模型24，28。从小鼠5周大时开始，将KIC小鼠每周两次注射βig-h3-耗尽性Ab 21天(图1A、B)，当肿瘤体积为100-200mm3时，将KPC小鼠进行相同处理(图2A、B)。有趣的是，与未处理动物相比，注射βig-h3-耗尽性抗体的KPC和KIC小鼠的肿瘤体积均明显较小(约38-40％)(图2B，1B)。使用CK19染色评估的肿瘤面积的定量显示，与未处理小鼠相比，βig-h3-耗尽性抗体处理的动物的胰腺内病灶中的肿瘤面积从46％急剧降至13％(图2C、D)。此外，βig-h3-耗尽性抗体处理的动物中的PanIN区域也显著小于对照(图2C、D)。裂解的半胱天冬酶-3+细胞数量的定量显示，βig-h3 Ab处理的小鼠中的凋亡细胞明显多于对照(图2E)。更重要的是，我们检测到在βig-h3 Ab处理的动物中，与裂解的半胱天冬酶-3+细胞紧密接触的颗粒酶B阳性细胞数量增加。此外，在KIC小鼠中，联合治疗(抗βig-h3和抗PD-1Ab)导致进一步的协同作用，并增加了GrzB阳性细胞(图1C、D)。此外，联合治疗(抗βig-h3和抗PD-1Ab)导致小鼠的生存期提高(中位生存期为2.5vs 1.9)，而单独的抗βig-h3处理对小鼠的生存期无影响(图1E、F)。
为了确定在晚期病变中与抗βig-h3治疗偶联的CD8+T细胞的耗尽是否恢复了肿瘤的生长，我们在KPC小鼠中进行了共注射(图3a、b)。我们发现，在βig-h3中和的情况下，CD8+T细胞耗尽无法恢复肿瘤的生长。由于之前已报道过βig-h3结合胶原蛋白，我们通过原子力显微镜分析检查组织的刚度并发现抗βig-h3处理的小鼠的整体刚度降低(图3c)。如在天狼星红染色后的偏振光中测定的，这些发现与减少的胶原蛋白I粗纤维相关，而未处理和Ab处理的动物中胶原蛋白的总体含量相似(图3d)。此外，我们回收了肝UT或Ab注射的KPC小鼠，发现在Ab处理的动物中，F4/80细胞的转移灶极大减少、更小且更易被浸润。总而言之，这些结果强烈表明，βig-h3蛋白的耗尽会在原发灶处以及远处转移位点重新编程肿瘤微环境，从而有利于有效的抗肿瘤免疫应答。
βig-h3在胰腺赘生物和肿瘤病变的基质腔室中产生
由于在胰腺赘生物和肿瘤病变中检测到βig-h3，我们接下来研究βig-h3是由肿瘤细胞本身还是由基质肿瘤微环境(TME)产生。为了解决这个问题，我们使用导管肿瘤细胞的标志物Cytokeratin19(CK19)和之前被证明是CAF的特异性表面标志物的PDGRFα进行共免疫荧光实验(24)。我们发现，βig-h3的表达主要位于PDGRFα+基质细胞中。PDGFRα还与成肌纤维细胞的另一个标志性特征αSMA共定位(25)。这些观察结果在来自KIC小鼠的PDA中进一步证实。有趣的是，我们发现在所有分析的PanIN中，βig-h3的表达与CK19的表达互斥，表明导管细胞缺乏βig-h3的表达。
接下来，我们使用CD45、EPCAM和PDGRFα(其是细胞表面的标志物)对从2.5个月大的KC胰腺组织获得的样品中的肿瘤性导管细胞(CD45-EPCAM+)和CAF(CD45-PDGRFα+)进行分选(图4a)。我们使用EPCAM作为分选活体导管细胞的标志物，因为它们共表达CK19和EPCAM。在分选的细胞上进行定量RT-PCR分析，结果证实tgfβi在CAF中比在肿瘤性导管细胞中更强表达(图4b)。为了进一步验证该结果，在使用βig-h3 ELISA试剂盒定量之前，在存在或不存在TGF-β1的情况下，将CAF和导管细胞体外培养48小时。细胞培养上清液的分析证实，尽管CAF在体外产生βig-h3(219±12.3pg/ml)，但在分离的导管细胞的上清液中几乎未检测到βig-h3(28±13.5pg/ml)(图4c)。有趣的是，我们发现用TGF-β1刺激增强导管细胞和CAF产生βig-h3，而TGF-β1刺激的导管细胞产生的βig-h3数量从未超过由CAF产生的βig-h3的基础水平(图4c)。综上，这些数据表明，βig-h3主要由KC小鼠的基质腔内的PDGFRα+CAF产生。
讨论
宿主免疫在调节肿瘤发生和肿瘤进展中的角色是至关重要的31。但是，TME中的免疫细胞无法发挥有效的抗肿瘤免疫应答32。这种现象主要是因为有效的抗肿瘤免疫应答无法“到达”肿瘤区，并且“物理上和功能上”维持为限于周围的微环境内。在TME中，基质的作用就像物理屏障，其阻止免疫系统和化学疗法进入肿瘤12。通过阻断刺猬信号转导耗尽小鼠中的基质已表明发挥有益效果33，随后针对人PDA中的间质成肌纤维细胞的临床试验实际上加速了疾病发展，导致这些临床试验被终止。因此，尚未完全表征允许基质调节免疫应答的潜在机制。在这里，我们表明基质基质蛋白βig-h3通过抑制PDA中的CD8+T细胞免疫来直接抑制抗肿瘤免疫应答。因此，这种免疫逃避策略可能有助于抵抗该癌症中已观察到的免疫疗法。
PDA进展与胰腺功能和基质腔室中的细胞和分子变化有关。谱系追踪实验表明，大多数肿瘤前病变从胰腺腺泡细胞通过称为腺泡至导管化生(ADM)34的过程发展而来，但对胰腺癌早期如何调节基质及其作用却知之甚少。在本文，我们表明βig-h3(一种最初被描述为分泌的细胞外基质蛋白，其主要由成纤维细胞、角质形成细胞和肌肉细胞产生35)是一种影响PDA病理生理的新型蛋白。我们的数据提供了在PDA肿瘤发展早期βig-h3在TME中发生的细胞相互作用的调节中的作用的见解。虽然βig-h3在正常鼠或人胰腺的外分泌腔室中不表达，但我们发现在PDA的早期阶段，其表达在基质内显著增加。有趣的是，在小鼠中过表达βig-h3导致自发肿瘤发生率高于野生型小鼠，而当敲除βig-h3时，所得小鼠与野生型对照相当36。这些数据表明靶向βig-h3可能没有实质性的副作用。我们发现，在患有胃肠道癌(包括食道癌、胃癌、肝癌和PDA癌)的患者中βig-h3升高36。在食道癌患者中，使用免疫组化法检测到基质中分泌的βig-h3。基质中而不是肿瘤细胞中βig-h3水平高的患者的预后要比水平低的患者差，表明该标志物是非细胞自主机制的关键因素。若干条证据表明，βig-h3在PDA的基质中密集积累，并在其中发挥免疫抑制作用。首先，我们使用T细胞增殖测定法(使用重组分子或在CAF上清液中分泌)，并且发现βig-h3通过降低抗原特异性活化和增殖发挥抑制作用。在本文，我们提供的第一个证据表明，使用针对分泌的βig-h3的耗尽的Ab恢复肿瘤特异性CD8+T细胞增殖和活化以及减少的细胞衰竭，其使用PD-1和Tim-3表达体外进行测量。此外，βig-h3通过整联蛋白β3(CD61)结合并诱导信号，其在浸润性CD8+T细胞上高度表达，并导致结合Lck Y505的Hic-5稳定，从而使信号转导钝化。此外，βig-h3蛋白耗尽导致F4/80巨噬细胞的重编程，这将在摄入Ag/Ab复合物时产生细胞毒性分子。第二，使用Ab策略在体内耗尽βig-h3蛋白伴随着GrzB+响应的增加。在快速的侵袭性病变发展的情况下，与抗PD-1的联合治疗具有协同作用(KIC小鼠)。第三，皮下注射的肿瘤细胞的免疫介导消除通过CD8+T细胞耗尽而得以完全挽救，表明βig-h3蛋白在肿瘤形成的早期阶段在破坏有效的抗肿瘤响应中起着核心作用。更重要的是，当我们在已经建立的PDA中耗尽蛋白质并且发现肿瘤微环境不仅在原发性肿瘤而且在转移部点也被重新编程时，进一步证实在胰腺癌更晚期阶段这种免疫调节机制的相关性，这增加了靶向βig-h3可以增强患者中免疫介导的抗肿瘤功效的振奋人心的可能性。
参考文献
贯穿本申请，各种参考文献描述了本发明所属的技术水平。这些参考文献的公开内容通过引用并入本公开中。
1.Kern SE,Shi C,Hruban RH.The complexity of pancreatic ductal cancersand multidimensional strategies for therapeutic targeting.J Pathol 2011；223:295-306.
2.Hezel AF,Kimmelman AC,Stanger BZ,et al.Genetics and biology ofpancreatic ductal adenocarcinoma.Genes&development2006；20:1218-49.
3.Apte MV,Haber PS,Applegate TL,et al.Periacinar stellate shapedcells in rat pancreas:identification,isolation,and culture.Gut1998；43:128-33.
4.Ene-Obong A,Clear AJ,Watt J,et al.Activated pancreatic stellatecells sequester CD8+T cells to reduce their infiltration of the juxtatumoralcompartment of pancreatic ductal adenocarcinoma.Gastroenterology 2013；145:1121-32.
5.Heinemann V,Reni M,Ychou M,et al.Tumour-stroma interactions inpancreatic ductal adenocarcinoma:rationale and current evidence for newtherapeutic strategies.Cancer Treat Rev2014；40:118-28.
6.Zhang Y,Ertl HC.Depletion of FAP+cells reduces immunosuppressivecells and improves metabolism and functions CD8+T cells withintumors.Oncotarget 2016；7:23282-99.
7.Galon J,Costes A,Sanchez-Cabo F,et al.Type,density,and location ofimmune cells within human colorectal tumors predict clinical outcome.Science2006；313:1960-4.
8.Balachandran VP,Luksza M,Zhao JN,et al.Identification of uniqueneoantigen qualities in long-term survivors of pancreatic cancer.Nature 2017；551:512-516.
9.De Monte L,Reni M,Tassi E,et al.Intratumor T helper type 2cellinfiltrate correlates with cancer-associated fibroblast thymic stromallymphopoietin production and reduced survival in pancreatic cancer.J Exp Med2011；208:469-78.
10.Brahmer JR,Tykodi SS,Chow LQ,et al.Safety and activity of anti-PD-L1 antibody in patients with advanced cancer.N Engl J Med2012；366:2455-65.
11.Clark CE,Hingorani SR,Mick R,et al.Dynamics of the immune reactionto pancreatic cancer from inception to invasion.Cancer research 2007；67:9518-27.
12.Provenzano PP,Cuevas C,Chang AE,et al.Enzymatic targeting of thestroma ablates physical barriers to treatment of pancreatic ductaladenocarcinoma.Cancer Cell 2012；21:418-29.
13.Skonier J,Neubauer M,Madisen L,et al.cDNA cloning and sequenceanalysis of beta ig-h3,a novel gene induced in a human adenocarcinoma cellline after treatment with transforming growth factor-beta.DNA and cellbiology 1992；11:511-22.
14.Bae JS,Lee SH,Kim JE,et al.Betaig-h3 supports keratinocyteadhesion,migration,and proliferation through alpha3beta1integrin.BiochemBiophys Res Commun 2002；294:940-8.
15.Billings PC,Whitbeck JC,Adams CS,et al.The transforming growthfactor-beta-inducible matrix protein(beta)ig-h3 interacts with fibronectin.JBiol Chem 2002；277:28003-9.
16.Hashimoto K,Noshiro M,Ohno S,et al.Characterization of acartilage-derived 66-kDa protein(RGD-CAP/beta ig-h3)that binds tocollagen.Biochimica et biophysica acta 1997；1355:303-14.
17.Nam JO,Kim JE,Jeong HW,et al.Identification of the alphavbeta3integrin-interacting motif of betaig-h3 and its anti-angiogenic effect.J BiolChem 2003；278:25902-9.
18.Ohno S,Noshiro M,Makihira S,et al.RGD-CAP((beta)ig-h3)enhances thespreading of chondrocytes and fibroblasts via integrin alpha(1)beta(1).Biochim Biophys Acta 1999；1451:196-205.
19.Ma C,Rong Y,Radiloff DR,et al.Extracellular matrix protein betaig-h3/TGFBI promotes metastasis of colon cancer by enhancing cellextravasation.Genes Dev 2008；22:308-21.
20.Patry M,Teinturier R,Goehrig D,et al.betaig-h3 Represses T-CellActivation in Type 1 Diabetes.Diabetes 2015；64:4212-9.
21.Turtoi A,Musmeci D,Wang Y,et al.Identification of novel accessibleproteins bearing diagnostic and therapeutic potential in human pancreaticductal adenocarcinoma.Journal of proteome research2011；10:4302-13.
22.Kaiser MF,Johnson DC,Wu P,et al.Global methylation analysisidentifies prognostically important epigenetically inactivated tumorsuppressor genes in multiple myeloma.Blood 2013；122:219-26.
23.Kang S,Dong SM,Park NH.Frequent promoter hypermethylation of TGFBIin epithelial ovarian cancer.Gynecol Oncol2010；118:58-63.
24.Aguirre AJ,Bardeesy N,Sinha M,et al.Activated Kras and Ink4a/Arfdeficiency cooperate to produce metastatic pancreatic ductaladenocarcinoma.Genes&development 2003；17:3112-26.
25.Hingorani SR,Petricoin EF,Maitra A,et al.Preinvasive and invasiveductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse.Cancer Cell2003；4:437-50.
26.Aguirre AJ,Bardeesy N,Sinha M,et al.Activated Kras and Ink4a/Arfdeficiency cooperate to produce metastatic pancreatic ductaladenocarcinoma.Genes Dev 2003；17:3112-26.
27.Ascher E,Markevich N,Schutzer RW,et al.Cerebral hyperperfusionsyndrome after carotid endarterectomy:predictive factors and hemodynamicchanges.J Vasc Surg 2003；37:769-77.
28.Hingorani SR,Wang L,Multani AS,et al.Trp53R172H and KrasG12Dcooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreaticductal adenocarcinoma in mice.Cancer Cell2005；7:469-83.
29.Bae JS,Lee W,Son HN,et al.Anti-transforming growth factor beta-induced protein antibody ameliorates vascular barrier dysfunction andimproves survival in sepsis.Acta Physiol(Oxf)2014；212:306-15.
30.Milani P,Mirabet V,Cellier C,et al.Matching Patterns of GeneExpression to Mechanical Stiffness at Cell Resolution through QuantitativeTandem Epifluorescence and Nanoindentation.Plant Physiol 2014；165:1399-1408.
31.Grivennikov SI,Greten FR,Karin M.Immunity,inflammation,andcancer.Cell 2010；140:883-99.
32.Ruffell B,DeNardo DG,Affara NI,et al.Lymphocytes in cancerdevelopment:polarization towards pro-tumor immunity.Cytokine Growth FactorRev 2010；21:3-10.
33.Olive KP,Jacobetz MA,Davidson CJ,et al.Inhibition of Hedgehogsignaling enhances delivery of chemotherapy in a mouse model of pancreaticcancer.Science 2009；324:1457-61.
34.Strobel O,Dor Y,Alsina J,et al.In vivo lineage tracing defines therole of acinar-to-ductal transdifferentiation in inflammatory ductalmetaplasia.Gastroenterology 2007；133:1999-2009.
35.LeBaron RG,Bezverkov KI,Zimber MP,et al.Beta IG-H3,a novelsecretory protein inducible by transforming growth factor-beta,is present innormal skin and promotes the adhesion and spreading of dermal fibroblasts invitro.J Invest Dermatol 1995；104:844-9.
36.Han B,Cai H,Chen Y,et al.The role of TGFBI(betaig-H3)ingastrointestinal tract tumorigenesis.Mol Cancer 2015；14:64.

Claims (9)

1.i.包含抗PD-L1抗体或抗PD-1抗体的免疫检查点抑制剂；和
ii.包含降低或阻断βig-h3和αVβ3整联蛋白之间的相互作用的抗βig-h3抗体的βig-h3拮抗剂，所述抗βig-h3抗体包含：
(a)重链，其中可变结构域包含：
-具有如SEQ ID NO:_15所示序列的H-CDR1；
-具有如SEQ ID NO:_16所示序列的H-CDR2；
-具有如SEQ ID NO:_17所示序列的H-CDR3；
(b)轻链，其中可变结构域包含：
-具有如SEQ ID NO:_18所示序列的L-CDR1；
-具有如SEQ ID NO:_19所示序列的L-CDR2；
-具有如SEQ ID NO:_20所示序列的L-CDR3；
在制备用于治疗患有在基质中表达βig-h3的胰腺癌的患者的药物中的用途，其中所述免疫检查点抑制剂和所述βig-h3拮抗剂旨在同时或依次施用。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述抗βig-h3抗体包含具有序列SEQ ID NO:13的VH结构域和具有序列SEQ ID NO:14的VL结构域。
4.包含降低或阻断βig-h3和αVβ3整联蛋白之间的相互作用的抗βig-h3抗体的βig-h3拮抗剂，所述抗βig-h3抗体包含：
(a)重链，其中可变结构域包含：
-具有如SEQ ID NO:_15所示序列的H-CDR1；
-具有如SEQ ID NO:_16所示序列的H-CDR2；
-具有如SEQ ID NO:_17所示序列的H-CDR3；
(b)轻链，其中可变结构域包含：
-具有如SEQ ID NO:_18所示序列的L-CDR1；
-具有如SEQ ID NO:_19所示序列的L-CDR2；
-具有如SEQ ID NO:_20所示序列的L-CDR3；
用于制备治疗在基质中表达βig-h3的胰腺癌的药物，其中所述抗体增强患有胰腺癌的患者对包含抗PD-L1抗体或抗PD-1抗体的免疫检查点抑制剂的敏感性。
5.根据权利要求4所述的βig-h3拮抗剂，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体。
6.根据权利要求4或5所述的βig-h3拮抗剂，其中所述抗βig-h3抗体包含具有序列SEQID NO:13的VH结构域和具有序列SEQ ID NO:14的VL结构域。
7.药物组合物，其包含：
i.包含降低或阻断βig-h3和αVβ3整联蛋白之间的相互作用的抗βig-h3抗体的βig-h3拮抗剂，所述抗βig-h3抗体包含：
(a)重链，其中可变结构域包含：
-具有如SEQ ID NO:_15所示序列的H-CDR1；
-具有如SEQ ID NO:_16所示序列的H-CDR2；
-具有如SEQ ID NO:_17所示序列的H-CDR3；
(b)轻链，其中可变结构域包含：
-具有如SEQ ID NO:_18所示序列的L-CDR1；
-具有如SEQ ID NO:_19所示序列的L-CDR2；
-具有如SEQ ID NO:_20所示序列的L-CDR3；
ii.包含抗PD-L1抗体或抗PD-1抗体的免疫检查点抑制剂；和
iii.药学上可接受的载体。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体。
9.根据权利要求7或8所述的药物组合物，其中所述抗βig-h3抗体包含具有序列SEQ IDNO:13的VH结构域和具有序列SEQ ID NO:14的VL结构域。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3226537A1 (en) 2021-07-29 2023-02-02 Ana HENNINO Humanized anti-human .beta.ig-h3 protein and uses thereof
CN113881707B (zh) * 2021-10-25 2023-07-14 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 调控脐带间充质干细胞免疫抑制作用的产品、方法及用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017158043A1 (en) * 2016-03-15 2017-09-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Early and non invasive method for assessing a subject's risk of having pancreatic ductal adenocarcinoma and methods of treatement of such disease
CN108136001A (zh) * 2015-04-03 2018-06-08 佐马技术有限公司 使用TGF-β抑制剂和PD-1抑制剂治疗癌症

Family Cites Families (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
EP0690452A3 (en) 1994-06-28 1999-01-07 Advanced Micro Devices, Inc. Electrically erasable memory and method of erasure
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US5855887A (en) 1995-07-25 1999-01-05 The Regents Of The University Of California Blockade of lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US6051227A (en) 1995-07-25 2000-04-18 The Regents Of The University Of California, Office Of Technology Transfer Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US6207157B1 (en) 1996-04-23 2001-03-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Conjugate vaccine for nontypeable Haemophilus influenzae
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
AUPP249298A0 (en) 1998-03-20 1998-04-23 Ag-Gene Australia Limited Synthetic genes and genetic constructs comprising same I
US6566131B1 (en) 2000-10-04 2003-05-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of Smad6 expression
US6410323B1 (en) 1999-08-31 2002-06-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of human Rho family gene expression
US6107091A (en) 1998-12-03 2000-08-22 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense inhibition of G-alpha-16 expression
US5981732A (en) 1998-12-04 1999-11-09 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of G-alpha-13 expression
EE05627B1 (et) 1998-12-23 2013-02-15 Pfizer Inc. CTLA-4 vastased inimese monoklonaalsed antikehad
US6046321A (en) 1999-04-09 2000-04-04 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of G-alpha-i1 expression
US7605238B2 (en) 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
KR100942863B1 (ko) 1999-08-24 2010-02-17 메다렉스, 인코포레이티드 인간 씨티엘에이-4 항체 및 그의 용도
GB9927444D0 (en) 1999-11-19 2000-01-19 Cancer Res Campaign Tech Inhibiting gene expression
JP2003526367A (ja) 2000-03-16 2003-09-09 ジェネティカ インコーポレイテッド Ｒｎａ干渉の方法とｒｎａ干渉組成物
US6365354B1 (en) 2000-07-31 2002-04-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of lysophospholipase I expression
US6566135B1 (en) 2000-10-04 2003-05-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of caspase 6 expression
JP4488740B2 (ja) 2001-11-13 2010-06-23 ダナ−ファーバー キャンサー インスティテュート，インコーポレイテッド 免疫細胞活性化を調節する作用剤およびその使用方法
CA2508660C (en) 2002-12-23 2013-08-20 Wyeth Antibodies against pd-1 and uses therefor
KR20060056445A (ko) * 2004-11-19 2006-05-24 주식회사 리젠 바이오텍 인간 βｉｇ－ｈ３에 대한 단클론 항체
NZ563193A (en) 2005-05-09 2010-05-28 Ono Pharmaceutical Co Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
SI1907424T1 (sl) 2005-07-01 2015-12-31 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Humana monoklonska protitelesa proti programiranem smrtnem ligandu 1 (PD-L1)
ES2437327T3 (es) 2007-06-18 2014-01-10 Merck Sharp & Dohme B.V. Anticuerpos para el receptor PD-1 humano de muerte programada
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
SI2342226T1 (sl) 2008-09-26 2016-11-30 Dana-Farber Cancer Institute Inc. Humana protitelesa proti PD-1, PD-L1 in PD-L2 in njihove uporabe
CN114835812A (zh) 2008-12-09 2022-08-02 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗-pd-l1抗体及它们用于增强t细胞功能的用途
EP2393835B1 (en) 2009-02-09 2017-04-05 Université d'Aix-Marseille Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
ES2571235T3 (es) 2009-04-10 2016-05-24 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Procedimiento para el tratamiento de un tumor sanguíneo que utiliza el anticuerpo anti-TIM-3
JP2013512251A (ja) 2009-11-24 2013-04-11 アンプリミューン、インコーポレーテッド Ｐｄ−ｌ１／ｐｄ−ｌ２の同時阻害
WO2011082400A2 (en) 2010-01-04 2011-07-07 President And Fellows Of Harvard College Modulators of immunoinhibitory receptor pd-1, and methods of use thereof
EP3363499A1 (en) 2010-06-11 2018-08-22 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Anti-tim-3 antibody
CA2802344C (en) 2010-06-18 2023-06-13 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Bi-specific antibodies against tim-3 and pd-1 for immunotherapy in chronic immune conditions
US8907053B2 (en) 2010-06-25 2014-12-09 Aurigene Discovery Technologies Limited Immunosuppression modulating compounds
US8841418B2 (en) 2011-07-01 2014-09-23 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to TIM3
CA2905452A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase (ido)

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108136001A (zh) * 2015-04-03 2018-06-08 佐马技术有限公司 使用TGF-β抑制剂和PD-1抑制剂治疗癌症
WO2017158043A1 (en) * 2016-03-15 2017-09-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Early and non invasive method for assessing a subject's risk of having pancreatic ductal adenocarcinoma and methods of treatement of such disease

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Delphine goehrig等.Stromal protein βig-h3 reprogrammes tumour microenvironment in pancreatic cancer.《Gut》.2018,第68卷(第4期),第693-707页. *
Taku Sato等.Identification and characterization of transforming growth factor beta‐induced in circulating tumor cell subline from pancreatic cancer cell line.《Cancer Science》.2018,第109卷(第11期),全文. *
Thomas A. Mace等.IL-6 and PD-L1 antibody blockade combination therapy reduces tumor progression in murine models of pancreatic cancer.《Gut》.2016,第67卷(第2期),全文. *
王玉亮等.胰腺癌组织中转化生长因子β诱导蛋白表达及临床意义.中国肿瘤临床.2012,(第02期),全文. *

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Publication number Publication date
JP2022505113A (ja) 2022-01-14
US20210340240A1 (en) 2021-11-04
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