CN112946143B - 一种7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2h-3-苯并氮杂卓-2-酮的分析检测方法 - Google Patents
一种7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2h-3-苯并氮杂卓-2-酮的分析检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种7，8‑二甲氧基‑1,3‑二氢‑2H‑3‑苯并氮杂卓‑2‑酮的分析检测方法，包括：S1)将7，8‑二甲氧基‑1,3‑二氢‑2H‑3‑苯并氮杂卓‑2‑酮供试品与溶剂混合，得到供试品溶液；S2)将所述供试品溶液通过高效液相色谱进行分析；所述高效液相色谱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；所述高效液相色谱的流动相为醇溶剂与乙酸铵‑乙酸溶液；所述醇溶剂与乙酸铵‑乙酸溶液的体积比为(37～47)：(53～63)。与现有技术相比，本发明提供的分析检测方法可用于监控7，8‑二甲氧基‑1,3‑二氢‑2H‑3‑苯并氮杂卓‑2‑酮的质量，具有分离度高，操作简单，分析时间短，重复性及耐用性良好，结果稳定可靠的优点。
Description
技术领域
本发明属于高效液相色谱分析技术领域，尤其涉及一种7，8-二甲氧基-1,3- 二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的分析检测方法。
背景技术
盐酸伊伐布雷定(Ivabradine hydrochloride)，化学名为3-[3-[[[(7S)-3,4- 二甲氧基二环[4.2.0]辛-1,3,5-三烯-7-基]甲基]-甲基氨基]丙基]-7,8-二甲氧基-1,3,4,5-四氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮盐酸盐，化学结构式为：
盐酸伊伐布雷定具有非常有价值的药理学和治疗特性，尤其是减缓心率的特性，可用于治疗或预防心肌缺血的多种临床表现，例如心绞痛、心肌梗塞和相关的节律紊乱，以及涉及节律紊乱的多种疾病，尤其是室上性心律失常，并可用于收缩性心力衰竭和舒张性心力衰竭。
盐酸伊伐布雷定的合成主要是以7,8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮为起始物料，通过3-氯-1-溴丙烷发生亲核反应生成3-(3-氯丙基)-7,8- 二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂-2-酮，然后再与(1S)-4,5-二甲氧基-1-[(甲基氨基)甲基]苯并环丁烷在碱性条件下发生缩合生成中间体3-[3-[[[(7S)-3,4-二甲氧基双环[4.2.0]辛-1,3,5-三烯-7-基]甲基]甲基氨基]丙基]-1,3-二氢-2H-苯并氮杂-2-酮，最后氢化制备得到盐酸伊伐布雷定。
现有技术中主要针对7,8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮合成路线进行描述，如公开号为CN102276530A的中国专利等，该合成路线通过反应3,4-二甲氧基苯乙酸(杂质A)与氨基乙醛缩二甲醇反应，生成中间体N-(2,2- 二甲氧基乙基)-3,4-二甲氧基苯基乙酰胺(杂质B)，然后再通过闭环生成该物料。
由此可见，盐酸伊伐布雷定中关键物料7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3- 苯并氮杂卓-2-酮中的杂质主要为杂质A、杂质B，其中，杂质A和杂质B的化学结构式分别为：
7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮化学结构式为：
但目前没有关于7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的含量分析检测方法，为不断提高药品的安全性和有效性，迫切需要建立一种操作简便、灵敏度高、重现性好的含量检测方法。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的分析检测方法，该分析检测方法分离度高、分析时间短、操作简单且具有较好的重复性与耐用性。
本发明提供了一种7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的分析检测方法，包括：
S1)将7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品与溶剂混合，得到供试品溶液；
S2)将所述供试品溶液通过高效液相色谱进行分析；所述高效液相色谱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；所述高效液相色谱的流动相为醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液；所述醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液的体积比为(37～47)： (53～63)。
优选的，所述乙酸铵-乙酸溶液中乙酸铵的浓度为0.035～0.045mol/L；所述乙酸铵-乙酸溶液的pH值为5.9～6.1；所述醇溶剂为甲醇。
优选的，所述乙酸铵-乙酸溶液中乙酸铵的浓度为0.04mol/L；所述乙酸铵-乙酸溶液的pH值为6；所述醇溶剂为甲醇。
优选的，所述醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液的体积比为42：58。
优选的，所述固定相为Kromasil C18。
优选的，所述高效液相色谱的柱温为25℃～35℃；检测波长为235nm；流动相的流速为0.9～1.1mL/min。
优选的，所述步骤S1)中的溶剂为流动相；所述供试品溶液中7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品的浓度为(0.005～1)mg/mL。
优选的，所述供试品溶液中7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2- 酮供试品的浓度为0.05mg/mL；所述高效液相色谱的柱温为30℃；检测波长为235nm；流动相的流速为1mL/min。
优选的，所述高效液相色谱的色谱柱长为250mm，内径为4.6mm；固定相的粒径为5μm。
优选的，还包括标准曲线的建立：
A1)将7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮对照品与溶剂混合，得到对照品溶液；
A2)将所述对照品溶液通过高效液相色谱进行分析，得到标准曲线；
根据标准曲线与供试品溶液的高效液相色谱数据，得到7，8-二甲氧基-1,3- 二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品中7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的含量。
本发明提供了一种7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的分析检测方法，包括：S1)将7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品与溶剂混合，得到供试品溶液；S2)将所述供试品溶液通过高效液相色谱进行分析；所述高效液相色谱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；所述高效液相色谱的流动相为醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液；所述醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液的体积比为(37～47)：(53～63)。与现有技术相比，本发明提供的分析检测方法可用于监控7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的质量，具有分离度高，操作简单，分析时间短，重复性及耐用性良好，结果稳定可靠的优点。
实验表明，本发明提供的分析检测方法可以有效将7，8-二甲氧基-1，3- 二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮及杂质A、杂质B分开，分离度均高于1.5，在经过进行破坏性试验时，也保证了7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2- 酮不受干扰。该方法操作简单，重复性及耐用性好，结果稳定可靠，从而可用于7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮质量控制，为最终成品的质量提供有效保障。
附图说明
图1为本发明实施例1中流动相空白的HPLC谱图；
图2为本发明实施例1中得到的供试品溶液的HPLC谱图；
图3为本发明实施例1中得到的混合溶液的HPLC谱图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的分析检测方法，包括：S1)将7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品与溶剂混合，得到供试品溶液；S2)将所述供试品溶液通过高效液相色谱进行分析；所述高效液相色谱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；所述高效液相色谱的流动相为醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液；所述醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液的体积比为(37～47)：(53～63)。
其中，本发明对所有原料的来源并没有特殊的限制，为市售即可。
将7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品与溶剂混合，得到供试品溶液；所述溶剂优选为流动相；在本发明中，优选先将7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品用少量醇溶剂，然后再用流动相进行稀释，得到供试品溶液；所述醇溶剂优选为甲醇；所述流动相优选为醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液；所述乙酸铵-乙酸溶液中乙酸铵的浓度优选为0.035～0.045 mol/L，更优选为0.04mol/L；在本发明提供的实施例中，所述乙酸铵-乙酸溶液中乙酸铵的浓度具体为0.035mol/L、0.04mol/L或0.045mol/L；所述乙酸铵-乙酸溶液的pH值优选为5.9～6.1，更优选为6；所述醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液的体积比优选为(37～47)：(53～63)，更优选为(40～45)：(55～60)，再优选为42：58；在本发明提供的实施例中，所述醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液的体积比具体为37：63、47：53或42：58；得到的供试品溶液中7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品的浓度优选为(0.005～1)mg/mL，更优选为(0.01～1)mg/mL，再优选为(0.03～0.08)mg/mL，最优选为0.05mg/mL。
将所述供试品溶液通过高效液相色谱进行分析；所述高效液相色谱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，优选为Kromasil C18；所述固定相的粒径优选为5μm；其所进行填料的色谱柱柱长优选为250mm，内径为4.6mm；所述高效液相色谱的柱温优选为25℃～35℃，更优选为30℃；用于洗脱固定相的流动相同上所述，在此不再赘述；所述流动相的流速优选为0.9～1.1mL/min，更优选为1mL/min；所述高效液相色谱的检测波长优选为235nm。
通过高效液相色谱可简单快速地分离出供试品中的杂质。
为了进一步得到供试品中7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的含量，优选通过外标法进行测定，更优选还包括标准曲线的建立：A1)将 7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮对照品与溶剂混合，得到对照品溶液；A2)将所述对照品溶液通过高效液相色谱进行分析，得到标准曲线；根据标准曲线与供试品溶液的高效液相色谱数据，得到7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品中7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓 -2-酮的含量。
在本发明中，所述标准曲线的建立与供试品的分析并无先后顺序之分。
将7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮对照品与溶剂混合，得到对照品溶液；所述7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮对照品即为标准品；所述溶剂优选为流动相；在本发明中，优选先将7，8-二甲氧基-1,3- 二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮对照品用少量醇溶剂，然后再用流动相进行稀释，得到供试品溶液；所述醇溶剂优选为甲醇；所述流动相优选为醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液；所述乙酸铵-乙酸溶液中乙酸铵的浓度优选为0.035～0.045 mol/L，更优选为0.04mol/L；在本发明提供的实施例中，所述乙酸铵-乙酸溶液中乙酸铵的浓度具体为0.035mol/L、0.04mol/L或0.045mol/L；所述乙酸铵-乙酸溶液的pH值优选为5.9～6.1，更优选为6；所述醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液的体积比优选为(37～47)：(53～63)，更优选为(40～45)：(55～60)，再优选为42：58；在本发明提供的实施例中，所述醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液的体积比具体为37：63、47：53或42：58；得到的对照品溶液中7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮对照品的浓度优选为(0.005～1)mg/mL，更优选为(0.01～1)mg/mL，再优选为(0.03～0.08)mg/mL，最优选为0.05mg/mL。
将将所述对照品溶液通过高效液相色谱进行分析，根据得到的高效液相色谱数据与对照品的浓度即可得到标准曲线；所述高效液相色谱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，优选为Kromasil C18；所述固定相的粒径优选为5 μm；其所进行填料的色谱柱柱长优选为250mm，内径为4.6mm；所述高效液相色谱的柱温优选为25℃～35℃，更优选为30℃；用于洗脱固定相的流动相同上所述，在此不再赘述；所述流动相的流速优选为0.9～1.1mL/min，更优选为1mL/min；所述高效液相色谱的检测波长优选为235nm。
根据标准曲线与供试品溶液的高效液相色谱数据，即可得到7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品中7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的含量。
在本发明中，为了使分析得到的含量更加准确，所述标准曲线建立时的高效液相色谱条件与供试品分析时的高效液相色谱条件相同。
为了进一步验证分离出的杂质，在本发明中，优选还将7，8-二甲氧基-1,3- 二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品、杂质A、杂质B与溶剂混合，得到混合溶液；将所述混合溶液通过高效液相色谱进行分析；所述溶剂及高效液相色谱的条件均同上所述，在此不再赘述；所述混合溶液中7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品的浓度优选为(0.005～1)mg/mL，更优选为 (0.01～1)mg/mL，再优选为(0.03～0.08)mg/mL，最优选为0.05mg/mL；所述混合溶液中杂质A与杂质B的总浓度优选为(0.000025～0.0025)mg/mL，更优选为(0.0001～0.002)mg/mL，再优选为0.00025mg/mL。
本发明提供的分析检测方法可用于监控7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的质量，具有分离度高，操作简单，分析时间短，重复性及耐用性良好，结果稳定可靠的优点。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的分析检测方法进行详细描述。
以下实施例中所用的试剂均为市售，以下5个典型实施例均选取相同批号(115B3-00-200501sp批，样品来源于市售)的7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3- 苯并氮杂卓-2-酮样品进行检测。
实施例1
选取批号为115B3-00-200501sp批的7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的进行含量检测，包括如下步骤：
实验仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津LC-2030plus；
色谱柱：Kromasil C18(4.6×250mm，5μm)；
检测器：UV；
检测波长：235nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
流动相：甲醇：0.04mol/L乙酸铵溶液(用冰醋酸调节pH调至6.0)按体积比42:58形成流动相。
实验步骤：
A、取7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮样品适量，加适量甲醇溶解再用流动相稀释制成每1ml含0.05mg的供试品溶液；
B、取7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮对照品加适量，加适量甲醇溶解再用流动相稀释制成每1ml含0.05mg的溶液；
C、分别取7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮样品、杂质A、杂质B适量，加适量甲醇溶解再用流动相稀释制成每1ml含0.05mg样品， 0.25μg杂质A、杂质B的混合溶液；
D、取A、B、C溶液各20μl分别注入高效液相色谱仪；
得到空白溶剂的HPLC谱图如图1所示；得到供试品溶液的HPLC谱图如图2所示；得到混合溶液的HPLC谱图如图3所示。
由图3可知，在该色谱条件下，7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮峰及其杂质峰可以完全分离，且7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮峰保留时间在9.541min。
实施例2：系统适用性试验
实验仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津LC-2030plus；
色谱柱：Kromasil C18(4.6×250mm，5μm)；
检测器：UV；
检测波长：235nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
流动相：甲醇：0.04mol/L乙酸铵溶液(用冰醋酸调节pH调至6.0)按体积比42:58形成流动相。
实验步骤：
A、分别取7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮样品、杂质A、杂质B适量，加适量甲醇溶解再用流动相稀释制成每1ml含0.05mg样品， 0.25μg杂质A、杂质B的混合溶液；
B、取A中得到的混合溶液20μl注入高效液相色谱仪，连续进样六次，分别计算出7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的峰面积及保留时间的相对标准偏差，得到结果见表1。
表1 7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的峰面积及保留时间的相对标准偏差
由表1数据结果可知，主峰峰面积及保留时间的RSD值均为0.1％，理论塔板数大于2000，分离度大于1.5，拖尾因子小于1.2，说明该结果稳定可靠。
实施例3：重复性试验
实验仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津LC-2030plus；
色谱柱：Kromasil C18(4.6×250mm，5μm)；
检测器：UV；
检测波长：235nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
流动相：甲醇：0.04mol/L乙酸铵溶液(用冰醋酸调节pH调至6.0)按体积比42:58形成流动相。
实验步骤：
A、取7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮样品适量，加适量甲醇溶解再用流动相稀释制成每1ml含0.05mg的供试品溶液；
B、取7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮对照品适量，加适量甲醇溶解再用流动相稀释制成每1ml含0.05mg的对照品溶液；
C、取A、B溶液各20μl注入高效液相色谱仪，分别由两人配制供试品配制六份，按外标法测定其含量，并计算12份含量相对标准偏差，得到结果见表2。
表2含量测定结果
| 名称 | 含量(％) | 名称 | 含量(％) |
| 供试品溶液1 | 99.1 | 供试品溶液7 | 98.5 |
| 供试品溶液2 | 99.0 | 供试品溶液8 | 98.6 |
| 供试品溶液3 | 99.1 | 供试品溶液9 | 99.3 |
| 供试品溶液4 | 98.6 | 供试品溶液10 | 99.2 |
| 供试品溶液5 | 99.1 | 供试品溶液11 | 99.1 |
| 供试品溶液6 | 99.7 | 供试品溶液12 | 99.0 |
| 平均值 | 99.1 | 平均值 | 98.6 |
| RSD(N＝6) | 0.4％ | RSD(N＝6) | 0.4％ |
| 平均值(N＝12) | 99.0 | RSD(N＝12) | 0.4％ |
由表2数据可知，12份供试品溶液含量相对标准偏差为0.4％，可见该方法的重复性良好。
实施例4：耐用性试验
实验仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津LC-2030plus；
色谱柱：Kromasil C18(4.6×250mm，5μm)；
检测器：UV；
检测波长：235nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
流动相：甲醇：0.04mol/L乙酸铵溶液(用冰醋酸调节pH调至6.0)按体积比42:58形成流动相。
实验步骤：
A、取7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮样品适量作为供试品，加适量甲醇溶解再用流动相稀释制成每1ml含0.05mg的供试品溶液；
B、取7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮对照品适量，加适量甲醇溶解再用流动相稀释制成每1ml含0.05mg的对照品溶液；
C、取A、B溶液各20μl分别注入高效液相色谱仪，并计算供试品含量，得到结果见表3。
表3供试品含量测试结果
由表3数据可知，在改变柱温(±5℃)、波长(±5nm)、流动相比例 (±5％)、pH值(±0.1)及不同品牌的色谱柱，其各个含量RSD值小于1.0％，说明微小变动下，各含量基本稳定，方法的耐用性良好。
由实施例4的结果可以看出，在7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮含量检测过程中，在本发明色谱条件的各参数范围内，对流动相比例、流速、柱温、pH、波长等进行调整后，均能对7，8-二甲氧基-1，3-二氢 -2H-3-苯并氮杂卓-2-酮含量结果无影响，且其检测结果均有效、准确。
实施例5：破坏性试验
实验仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津LC-2030plus；
色谱柱：Kromasil C18(4.6×250mm，5μm)；
检测器：DAD；
检测波长：190～400nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
流动相：甲醇：0.04mol/L乙酸铵溶液(用冰醋酸调节pH调至6.0)按体积比42:58形成流动相。
实验步骤：
A、取7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮样品适量作为供试品，加适量甲醇溶解再用流动相稀释制成每1ml含0.05mg的供试品溶液；
B、取7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮样品加适量，在各个条件下进行破坏，加适量甲醇溶解再用流动相稀释制成每1ml含0.05mg 的破坏性溶液；
C、取A、B溶液各20μl分别注入高效液相色谱仪，得到结果见表4。
表4破坏性试验分析结果
| 破坏名称 | 破坏条件 | 主峰面积 | 降解率 | 峰纯度 |
| 未破坏 | N/A | 4906776 | N/A | 1.000000 |
| 酸破坏 | 24h | 4620826 | 5.8％ | 0.999999 |
| 碱破坏 | 24h | 4679170 | 4.7％ | 1.000000 |
| 氧化破坏 | 0.3％H<sub>2</sub>O<sub>2</sub> | 4678145 | 4.7％ | 1.000000 |
| 光照破坏 | 120h | 4428438 | 9.7％ | 1.000000 |
| 高温破坏 | 24h 95℃ | 4658205 | 5.1％ | 1.000000 |
由表4数据可知，在各个条件破坏下，主成分的峰纯度均大于0.999，其降解杂质并无干扰检测，说明其方法的专属性良好。
由实施例1～实施例5的检测结果可知：(1)本发明提供了7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮含量测定方法，7，8-二甲氧基-1，3-二氢 -2H-3-苯并氮杂卓-2-酮和杂质A、杂质B进行分离检测的方法，采用不同于现有技术的色谱条件，从HPLC图谱中以看出它们之间有一定距离，能够准确测定7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮含量；(2)采用对照品的检测方法，其分离度、专属性、精密度、重复性、耐用性等方面均经详细验证，且各项验证结果均符合相关法规和指导原则的要求，实际检测效果良好；(3)本发明实用性强，检测过程简单、快捷；(4)本发明所述的高效液相色谱法，其测定条件中所包含的范围内均为有效值，即：在各参数范围内取任意值后，也能准确的检测出7，8-二甲氧基-1，3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮含量，且能对杂质A、杂质B进行有效分离。在实际检测过程中，便于检测人员对参数的调整和避免人为误差对检测结果产生的影响，适宜推广使用。
Claims (8)
1.一种7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的分析检测方法，其特征在于，包括：
S1）将7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品与溶剂混合，得到供试品溶液；所述7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品包含杂质A与杂质B；杂质A和杂质B的化学结构式分别为：
S2）将所述供试品溶液通过高效液相色谱进行分析；所述高效液相色谱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；所述高效液相色谱的流动相为醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液；所述醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液的体积比为（37~47）：（53~63）；
所述乙酸铵-乙酸溶液中乙酸铵的浓度为0.035~0.045 mol/L；所述乙酸铵-乙酸溶液的pH值为5.9~6.1；所述醇溶剂为甲醇；
所述高效液相色谱的柱温为25℃~35℃；检测波长为235 nm；流动相的流速为0.9~1.1mL/min。
2.根据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，所述乙酸铵-乙酸溶液中乙酸铵的浓度为0.04 mol/L；所述乙酸铵-乙酸溶液的pH值为6；所述醇溶剂为甲醇。
3.根据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，所述醇溶剂与乙酸铵-乙酸溶液的体积比为42：58。
4.根据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，所述固定相为Kromasil C18。
5.根据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，所述步骤S1）中的溶剂为流动相；所述供试品溶液中7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品的浓度为（0.005~1）mg/mL。
6.根据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，所述供试品溶液中7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品的浓度为0.05 mg/mL；所述高效液相色谱的柱温为30℃；检测波长为235 nm；流动相的流速为1 mL/min。
7.根据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的色谱柱长为250 mm，内径为4.6 mm；固定相的粒径为5 μm。
8.根据权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于，还包括标准曲线的建立：
A1）将7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮对照品与溶剂混合，得到对照品溶液；
A2）将所述对照品溶液通过高效液相色谱进行分析，得到标准曲线；
根据标准曲线与供试品溶液的高效液相色谱数据，得到7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮供试品中7，8-二甲氧基-1,3-二氢-2H-3-苯并氮杂卓-2-酮的含量。
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