CN112913784B - 一种枯叶蛱蝶的滞育诱导方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种枯叶蛱蝶的滞育诱导方法，包括对枯叶蛱蝶蛹期或/和0–7日龄成虫连续进行低温或/和短光照处理，本发明方法对枯叶蛱蝶成虫的滞育诱导效率高，诱发的滞育强度大，活体成虫的死亡率低，滞育枯叶蛱蝶成虫活体可长期贮存；通过显著延长成虫的观赏寿命，降低了生态园投放活体蝴蝶的频率，从而节省了运营成本；通过实现活体枯叶蛱蝶一季生产、长期供应，降低了枯叶蛱蝶养殖户因为成虫集中羽化带来的滞销问题，避免了潜在经济风险。
Description
技术领域
本发明涉及一种资源昆虫的滞育诱导方法，特别涉及一种观赏蝴蝶的滞育诱导方法，属于生物技术的繁育和利用领域。
背景技术
枯叶蛱蝶Kallima inachus(Doyére，1840)，又名木叶蝶、枯叶蝶、木叶蛱蝶、中华枯叶蝶和树叶蝶等，为蛱蝶科Nymphalidae蛱蝶亚科Nymphalinae大型蝴蝶。其成虫在停息时翅膀合拢竖立背面，精巧地模仿了枯叶的形态，是著名的伪装昆虫，具有较高的观赏和科普教育价值，是生态蝴蝶园和昆虫工艺产品中不可或缺的种类。正是由于其极高的利用价值，枯叶蛱蝶的生物学及人工繁育技术近年来受到了较多关注。
经过多年的摸索，作为目前国内蝴蝶生态观赏园中的主打蝶种之一，枯叶蛱蝶的主要生物学特征已较为清楚，其人工繁育已经取得一定成效，枯叶蛱蝶活体成虫在其自然发生季节的供应问题近年来得到了一定程度缓解。循其自然生活史，目前南方各地枯叶蛱蝶生产上一般可以养殖3个世代，各代成虫的羽化时间主要集中在6月中旬至9月下旬。例如在四川峨眉山低海拔地带，在近自然条件下，枯叶蛱蝶为多化性种类，一年可发生3代，以第1、2代为主，以成虫越冬。第1代雌成虫和8月中旬前羽化的第2代雌成虫的大部分个体参与当年繁殖，少部分进入生殖休眠。第3代雌成虫和8月中旬后羽化的第2代雌成虫的绝大多数进入生殖休眠。最后，三个世代中的休眠个体汇聚成越冬成虫群体。
赵春生和李德海提出了一种在北方地区开展枯叶蛱蝶人工养殖的方法。该方法为：幼虫寄主植物盆栽，冬天在温室内越冬；幼虫1–2龄期在盆栽寄主植物上放养，3龄后转入室内饲养；夏季繁殖在网室内进行，在低温季节(十月中旬至次年六月中旬)设置配种产卵温室供成虫继续产卵。
春季气温适宜，天敌及病原物均较少，是一年中养殖枯叶蛱蝶最为适宜的时期。夏季多高温、暴雨、大风等极端天气，加之养殖场所积累了大量病原物，容易引发疾病流行，对枯叶蛱蝶的养殖颇为不利。而在秋季，由于种蝶成虫大多进入生殖休眠，一般养殖户常难以获得足够的蝶卵用于规模化养殖。故而，一般养殖场均将春季作为养殖的主要季节。
大量养殖户将养殖生产安排在春季造成的一个严重后果是，各地产品集中在初夏上市，往往造成活体成虫跌价，甚至滞销，给生产者带来经济损失。研究和生产实践均表明，枯叶蛱蝶蛹对低温的耐受性较差，难以长期在低温下贮藏；夏季直接发育(非休眠)成虫的寿命也较短，尤其是在高温条件下难以长期存放。春季产品的滞销和跌价，打击了养殖户的生产积极性，加之夏季养殖中存在的固有困难，使得夏季世代的枯叶蛱蝶产量大幅降低，接下来影响到秋季直至来年春季的活体成虫供应。当前枯叶蛱蝶的市场供需矛盾，已经由最初的活体成虫产量不足转变为活体成虫供应的高度季节性与蝴蝶园常年平衡需求之间的矛盾，甚至一些时候出现了供大于求的局面。这种局面的持续，对于养殖户和蝴蝶园均极为不利。
滞育，是指昆虫预先受到预示不良环境变化即将来临的某种信号的诱导，在内在的中枢指令调控下，将昆虫个体的直接发育模式切换至滞育模式，而后发生的发育停滞。滞育的开始通常往往提前于不良环境的到来，滞育一旦发生，通常都会持续一段时间，不会因为有利环境条件的到来而立即结束，但其终止也往往提前于不利环境条件的结束。多种外界环境因素，如光照、温度、湿度、水、食料等，都可能诱导不同昆虫的滞育发生(侯月利和花蕾，2003)。其中，光周期和温度已在大量昆虫种类中被证实为最主要的滞育诱导因素。光周期有年周期性，而温度是季节变化最明显的标志，使得昆虫在进化过程中，把光信号和温度信号作为预判未来环境变化的主要信号(徐卫华，2008)。
枯叶蛱蝶成虫的滞育特性对于该种蝴蝶的人工繁育，其既有不利的一面，也有其可予利用的地方。其中，不利的一面主要：8月中旬后羽化的种蝶将停止繁殖，使养殖场无法获得足够的蝶卵用于开展秋季养殖；然而滞育的枯叶蛱蝶成虫寿命很长，抗逆性也强，对于延长成虫供应期以及降低观赏园的蝴蝶成本是有益的。滞育成虫，无论雌雄，寿命远较未滞育个体长，最长可达300天以上，而繁殖成虫的寿命一般不足2个月。研究发现枯叶蛱蝶滞育雌成虫的寿命与非滞育雌成虫寿命显著延长，如表1。
表1枯叶蛱蝶滞育与非滞育雌成虫的寿命对比
滞育枯叶蛱蝶因其活动减少，翅膀可长期保持完好，正面色彩亦褪色缓慢。对于养殖场，人工诱导成虫滞育的发生，可以实现一季生产、长期贮存、长期供应，既集约地使用了养殖场的场地、房屋、养虫器材、寄主植物及人工，同时也避免了成虫集中羽化可能带来的滞销问题，避免了潜在经济风险。而对于蝴蝶生态园，滞育成虫自然寿命延长，且对夏季高温及冬季低温的耐受性增强，也就大大延长了其在蝴蝶生态园中的使用寿命(即“观赏寿命”)，降低了生态园投放活体蝴蝶的频率，从而节省了运营成本。在生态观赏园中，蝴蝶成虫翅膀色彩和形状完整是其观赏价值的主要体现，衰老的蝴蝶往往失去其观赏价值。
发明内容
本发明的目的是针对目前枯叶蛱蝶人工养殖中突出存在的供需季节性失衡及成虫观赏寿命短等问题，提供一种枯叶蛱蝶的成虫滞育诱导方法。本发明方法通过调控特定虫期经历的温度和光照条件，诱导成虫生殖滞育发生，并在适宜条件下贮藏滞育成虫，实现活体枯叶蛱蝶一季生产、长期供应。本发明方法诱导的滞育枯叶蛱蝶成虫活体可长期贮存，显著延长成虫的观赏寿命，降低了生态园投放活体蝴蝶的频率，从而节省了运营成本，降低枯叶蛱蝶养殖户因为成虫集中羽化带来的滞销问题，避免了潜在经济风险。
为实现本发明的上述目的，本发明一方面提供一种枯叶蛱蝶的滞育诱导方法，包括对枯叶蛱蝶蛹期或/和0–7日龄成虫连续进行低温或/和短光照处理。
其中，对枯叶蛱蝶蛹期和0–7日龄成虫进行低温或/和短光照处理，进而对经人工诱导进入滞育的成虫进行长期贮存。
特别是，对枯叶蛱蝶蛹期和0–7日龄成虫进行低温及短光照处理，即对枯叶蛱蝶蛹-7日龄成虫进行低温-短光照的联合处理，从枯叶蛱蝶蛹期处理至7日龄成虫，进行(连续)的低温、短光照诱导处理。
尤其是，对枯叶蛱蝶0–7日龄成虫进行低温或/和短光照处理。
对枯叶蛱蝶蛹期和0–7日龄成虫进行低温和短光照处理，对经过连续的诱导处理后进入滞育的成虫进行长期贮存。
其中，所述枯叶蛱蝶蛹期为枯叶蛱蝶老熟幼虫化蛹、蛹外壳硬化后至蛹羽化为成虫之间的枯叶蛱蝶个体发育时期。
特别是，所述低温处理过程中，温度保持≤24℃，优选为18–24℃，进一步优选为19-23℃。
其中，所述短光照处理过程中，24小时循环光周期，其中光照时间≤11h。
特别是，所述短光照处理过程中，光周期为LD8–11:16–13h(即光周期为(8-11h)L:(13-16h)D，光照时间与黑暗时间的比为(8-11h)：(16-13h)，也就是24小时循环光周期，每日光照时间与黑暗时间的比值为(8–11h):(13-16h))。
尤其是，所述短光照处理过程中，光周期优选为LD10–11:14–13h，进一步优选为LD10:14h。
其中，所述短光照处理过程中，光源为自然光源。
特别是，所述短光照处理过程中，光照强度为50–2000lx。
尤其以0–7日龄成虫作为滞育诱导的关键敏感虫期，连续进行低温或/和短光照处理。
其中，在对枯叶蛱蝶进行所述低温或/和短光照处理过程中，控制空气相对湿度为60-90％，优选为70-90％。
特别是，枯叶蛱蝶蛹至7日龄成虫滞育诱导的湿度条件为70–90％；光照为自然光源；光照强度为50–2000lx。
特别是，在对蛹期枯叶蛱蝶进行所述低温或/和短光照处理过程中，还包括每1–3日(优选为2日)对蛹以喷雾的方式补水一次，每次补水量为5–10g/头。
尤其是，在对蛹期枯叶蛱蝶进行所述低温或/和短光照处理过程中，为蛹期枯叶蛱蝶补水至蛹羽化为成虫。
特别是，在对0–7日龄的枯叶蛱蝶成虫进行所述低温或/和短光照处理过程中，还包括每日以喷雾的方式给成虫补水一次，每次补水量为5–10g/头成虫。
尤其是，在对0–7日龄的枯叶蛱蝶成虫进行所述低温或/和短光照处理过程中，为枯叶蛱蝶成虫补水至成虫满7日龄。
特别是，还包括将低温或/和短光照处理后的枯叶蛱蝶进行贮藏处理，以使枯叶蛱蝶滞育成虫长期存活。
其中，所述贮藏处理过程中控制贮藏温度为≤26℃，优选为15℃–26℃。
特别是，贮藏处理过程中控制贮藏空气湿度≥50％。
尤其是，贮藏处理过程中每2–4天对贮藏成虫以喷雾的方式供水一次，优选为每3天对贮藏成虫以喷雾方式供水一次。
特别是，每次喷雾供水的供水量为5–10g/头成虫。
滞育枯叶蛱蝶成虫贮藏过程中，光照为自然光源；光照时长为自然光照时间；光照强度为自然光照强度。
本发明方法将整个蛹期至7日龄成虫作为生殖滞育诱导虫期，连续进行低温、短光照处理，其中蛹期处理时间为9–23天，合计处理时间16–30天；经过滞育诱导处理、进入生殖滞育的成虫放养贮藏在近自然条件下滞育成虫能够长期存活，存活时间为90-120天。
通常，枯叶蛱蝶蛹-7日龄成虫的滞育诱导在空调室内进行，白天暗期时以≥99％遮光率的涂层牛津布遮光；滞育诱导后的处于生殖滞育虫期的枯叶蛱蝶活体成虫贮藏在近自然网室内，以维持滞育成虫的长期存活。
滞育诱导室为普通砖混结构，具有窗户，窗户内侧安装遮光率99％的遮光布；光照时间，室内光照强度为50-2000lx；黑暗时间，以遮光布挡住窗户。通常采用空调控制滞育诱导室温度≤24℃；采用空气加湿器控制室内相对湿度为70-90％。
滞育成虫贮藏的近自然网室的底部为矩形，高3.5m；网室各面(即网室的四周和顶部)的外层覆盖以孔径为0.5–1.0cm的尼龙网作为防鸟隔离层；在尼龙网内侧、距离尼龙网约30cm处，设置遮光率90％的遮阳网；在网室四周，栽植高度在4.0米以上的常绿乔木树种遮荫。维持滞育成虫贮藏网室内温度15℃–26℃、空气湿度≥50％；网室内栽植的常绿乔木为樟树或/和大叶女贞。
滞育成虫贮藏的近自然网室为在枯叶蛱蝶生长繁殖的自然环境中，用两层网将滞育的枯叶蛱蝶成虫围在网内部，其中所述两层网包括一层遮阳网和一层隔离网，其中遮阳网的遮光率为90％；隔离网的孔径为0.5-1.0cm。
滞育的枯叶蛱蝶成虫在贮藏网室内存活，即进入生殖滞育的成虫放养贮藏在近自然条件下。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和好处：
本发明方法对枯叶蛱蝶的人工繁育及保障枯叶蛱蝶产业的可持续、健康发展具有重要意义。
对于蝴蝶养殖场，本发明方法进行人工诱导成虫滞育的发生，可以实现一季生产、长期贮存、延长枯叶蛱蝶成虫的观赏寿命，长期供应，解决了枯叶蛱蝶在近自然养殖过程中成虫在其繁殖季节集中羽化，短时间内蝴蝶供应大于需求的功效矛盾，降低了枯叶蛱蝶繁殖高峰期产品滞销的风险，降低了蝴蝶养殖场的生产成本。
本发明方法既集约地使用了养殖场的场地、房屋、养虫器材、寄主植物及人工，而且滞育的枯叶蛱蝶活体成虫的贮藏时间显著延长，延长了枯叶蛱蝶的货架时间，避免了成虫集中羽化可能带来的滞销问题，避免了潜在经济风险。
对于蝴蝶生态园，滞育成虫自然寿命延长，且对夏季高温及冬季低温的耐受性增强，也就大大延长了其在蝴蝶生态园中的使用寿命(即“观赏寿命”)，降低了生态园投放活体蝴蝶的频率，降低蝴蝶园的蝴蝶成本投入和运营成本。
本发明方法生产的滞育枯叶蛱蝶成虫能长时间贮存，枯叶蛱蝶成虫的生存时间长，达到90天以上，通常为90–120天，枯叶蛱蝶活体成虫的贮存期、货架期显著延长；因此也显著延长了枯叶蛱蝶的观赏寿命。
本发明的生产可长期贮存枯叶蛱蝶活体成虫及延长其观赏寿命的技术，通过该方法可以实现活体枯叶蛱蝶成虫一季生产、长期供应，也可降低蝴蝶园的蝴蝶成本投入，对珍贵观赏蝶种枯叶蛱蝶的人工繁育利用及保障国内枯叶蛱蝶产业的可持续健康发展具有重要意义。
本发明的枯叶蛱蝶滞育诱导方法以及滞育活体成虫的贮藏方法，操作方便、成本低、效果好，不会产生任何不利影响。
附图说明
图1为本发明枯叶蛱蝶滞育诱导方法的处理设备和流程示意图。
图2为枯叶蛱蝶滞育雌成虫卵巢发育情况
图3为枯叶蛱蝶非滞育雌成虫卵巢发育情况
附图标记说明
1、滞育诱导室；2、滞育成虫贮藏室。
具体实施方式
下面结合具体实施方式来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施方式仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
如图1，本发明的枯叶蛱蝶成虫滞育诱导在诱导室1内进行，经滞育诱导处理后的枯叶蛱蝶成虫转移至滞育成虫贮藏网室2内放养、贮存，根据需要出售或使用。
试验例1枯叶蛱蝶的滞育诱导
1、滞育诱导室
滞育诱导室为普通砖混结构，面积为12m2(3m×4m)，每平方米可同时处理约500头蛹(500±50头蛹)；室内安装有海尔1.5匹壁挂式空调1台；窗户内侧安装遮光率99％的加厚双面银涂层牛津布；沿墙壁和在房间中部，放置4层角钢架，架宽为60cm，角钢架的每层放置5层胶合板一张，用于放置装有待处理蛹和成虫的容器。光照时间为日光，且光照强度为50-2000lx；黑暗期以牛津布遮挡窗户，防止阳光进入室内。
本发明具体实施方式中采用普通砖混结构的诱导室进行滞育诱导处理，除了上述结构的诱导室之外，本领域中其他用于蝴蝶诱导、培养、繁殖等处理的设备均适用于本发明，例如人工气候箱等。
2、滞育诱导和敏感虫期实验
2-1诱导条件设置
(1)光周期的滞育诱导作用和枯叶蛱蝶的光周期敏感虫期
将2个空调房间的光周期分别设置为LD 15:9和LD 11:13，温度均恒定为22±2℃，湿度恒定为RH 80±10％。
(2)温度的滞育诱导作用和枯叶蛱蝶的温度敏感虫期
将2个空调房间的温度分别设置为25±1℃(即24-26℃)和20±2℃(即18-22℃)，光周期均设置为LD13:11，湿度恒定为RH 80±10％)。
2-2试虫处理
将枯叶蛱蝶生长发育的不同阶段(卵、1–3龄幼虫、4–5龄幼虫、蛹、0–7日龄成虫5个阶段)，按照表2、3的处理条件分别进行光照、温度滞育诱导处理，每个处理100只，每个处理3次重复。
将卵粒置于口径3.5cm、高7.5cm的塑料瓶内，在滞育诱导室内保育；幼虫孵化后在长、宽、高分别为45、65和50(cm)的饲养箱内、在滞育诱导室内饲育。老熟幼虫化蛹后，待蛹的外壳硬化后(24h内)，即及时采摘新化蛹，并将新化蛹装入口径约30cm、底部垫有吸水纸的塑料篮内，每个篮内装入约100头蛹。将放有蛹的塑料篮编号，并记下采蛹日期，然后转入滞育诱导室1，按照化蛹日期的先后顺序置于三角钢架的隔层上，并在盛蛹的塑料篮的上方倒扣一个相同型号的塑料篮作为盖子，防止成虫羽化后飞出。
滞育诱导实验期间，每2日对蛹以喷雾的方式补水一次，补水量为5–10g/头蛹。补充液态水对于维持蛹体内的水分平衡具有重要作用。
有成虫开始羽化后，将当日羽化成虫转入新的塑料篮中，每篮中20–30头，贴上写有羽化日期的标签；成虫处理期间，每日从塑料篮外侧以喷雾方式给成虫补水一次，直至成虫满7日龄，补水量为5–10g/头成虫。
用于存放蛹和成虫的塑料篮是透光的，透光率约80％。虽然扣上盖子后，篮内的光照有所减弱，但对滞育诱导没有影响。
2-3滞育判定
为保证枯叶蛱蝶成虫滞育诱导试验的准确性，本发明采用统一的滞育判定标准。枯叶蛱蝶成虫一旦进入滞育，即使短期内给予正常发育条件，卵母细胞也不会继续发育，而是停留在无卵黄沉积阶段，如图2；而正常发育的枯叶蛱蝶成虫在其2日龄即开始卵黄沉积，如图3。这个发育特征上的差异，被用于判定成虫是否经人工诱导进入生殖滞育。
将不同条件处理后的枯叶蛱蝶8日龄成虫转移至25℃，LD15:9条件下继续保育5天，然后解剖检查枯叶蛱蝶雌成虫卵巢发育状况，将卵母细胞中无卵黄沉积个体作为滞育个体，而将具卵黄沉积的个体作为正常发育个体。这个指标得到了行为实验结果的有力支持。该方法简便易行，准确性高，是一种可靠的判断枯叶蛱蝶滞育的标准。
实验中所有数据统计分析，结果以平均数±标准误表示。将滞育率先进行反正弦平方根转化，然后用GraphPad Prism V6.03软件中ANOVA进行方差分析，差异显著性检验采用Tukey多重比较法。
2-4实验结果
滞育诱导实验结果如表2、3所示。
从表2中的试验结果可知，在温度24±2℃条件下，枯叶蛱蝶的蛹–7日龄成虫经历长光照处理(T5-8)，雌成虫平均发育等级为3.30–3.70，均显著高于蛹–7日龄成虫经历短光照处理(T1-4 10)的雌成虫平均发育等级；无论卵和幼虫期的光周期经历，蛹–7日龄成虫经历长光照处理(T5-8)，雌成虫滞育率为0–20.00％，均显著低于蛹–7日龄成虫经历短光照处理(T1-3,10)的滞育率(81.82％–100％)。
表2 22±2℃时枯叶蛱蝶不同虫期接受长/短光照处理后的生殖发育状态
L，长光照(LD15:9)；S，短光照(LD11:13)；△，严格滞育率，即仅将解剖检查时卵巢发育为1级的个体作为滞育个体。
从表3中的实验结果可知，在光照周期为LD13:11h的条件下，蛹–7日龄枯叶蛱蝶成虫经历高温处理(t5-8)，雌成虫卵巢平均发育等级为3.07–3.70，均显著高于蛹–7日龄枯叶蛱蝶成虫经历低温处理(t1-4,10)的雌成虫平均发育等级；无论卵和幼虫期的温度经历，蛹–7日龄成虫经历高温处理(t5-8)，雌成虫滞育率为9.09–18.18％，均显著低于蛹-7日龄成虫经历低温处理(t1-3,10)的滞育率(91.67％–100％)。
表3 LD13:11条件下枯叶蛱蝶不同虫期接受高/低温处理后的生殖发育状态
h，25±1℃；l，20±2℃；△，严格滞育率，即仅将解剖检查时卵巢发育为1级的个体作为滞育个体。
试验结果表明：将枯叶蛱蝶在不同发育阶段进行低温、短光照滞育诱导处理，枯叶蛱蝶的蛹–7日龄成虫为感受低温、短光照滞育诱导刺激的敏感期，尤其是以0–7日龄成虫为滞育诱导的关键敏感虫期；当蛹和0–7日龄成虫均处于滞育诱导条件(低温、短光照)下时，滞育诱导率最高。只对卵、1–3日龄及4–5日龄幼虫单独或连续进行滞育诱导处理，滞育诱发率极低，说明卵期、幼虫期对低温短光照的诱导不敏感。
综上所述，枯叶蛱蝶蛹-7日龄成虫对滞育诱导信息敏感，又主要以0–7日龄成虫最为敏感，而卵和幼虫对滞育诱导刺激不敏感。从蛹期开始对枯叶蛱蝶进行滞育诱导能获得更多的滞育个体。因此，对枯叶蛱蝶进行滞育诱导的时机为蛹期至0–7日龄成虫，通过调控光周期和温度因子，可诱导80％以上的枯叶蛱蝶进入滞育状态。
试验例2滞育枯叶蛱蝶的贮藏
1、滞育成虫贮藏网室
滞育成虫贮藏网室为长方体形，高3.5m；网室各面的外层覆盖以孔径为0.5cm的尼龙渔网作为防鸟隔离层；在尼龙网内侧、距离尼龙网约30cm处，设置遮光率≥70％(优选为90％)的遮阳网；在尼龙网的外侧，围绕一圈高度为1.7m的塑料膜，塑料膜下方深埋入土壤中约30cm，以此防止鼠类等大型捕食者掘土或咬烂网壁进入室内危害蝴蝶；在网室四周，以约2米的株行距栽植有3排高度为4.0–5.0米的常绿阔叶树种(例如樟树和大叶女贞Ligustrum lucidum)遮荫。
2、滞育成虫贮藏条件
维持滞育成虫贮藏网室内温度15℃–26℃、空气湿度不低于50％。
若遇长期干旱，以农用喷雾器于中午时分在地面喷水加湿降温，若遇极端高温天气，可以普通家用电风扇加强空气流动。
3、滞育成虫的贮藏与管理
将经过低温、短光照诱导处理、进入生殖滞育的8日龄枯叶蛱蝶成虫贮藏于滞育成虫贮藏网室2内，喂以各种次品水果或水果、水、蔗糖和乙醇混合发酵液；在每天例行喂食和检查中，若发现有求偶、交配和产卵的个体，将其捕捉到其他网室内暂存。一般来说，这类个体是未能被诱导进入滞育的个体，不能长久贮藏，应优先出售给蝴蝶园使用，而滞育成虫贮藏期为90–120天。
放养贮藏的成虫密度为60头/m3(通常≤90头/m3，优选为50-80头/m3)。
实施例1枯叶蛱蝶的滞育诱导
于每年7-8月，在蝴蝶养殖场，将枯叶蛱蝶卵在常规养虫室内保育，幼虫孵化后在自然条件下饲育，幼虫化蛹(即待蛹的外壳硬化，24h内)后，按照化蛹日期将蛹分为3个批次转入滞育诱导室内进行滞育诱导，直至成虫7日龄。将滞育诱导室温度设置为21±2℃，维持滞育诱导室内温度变化幅度在19℃–23℃范围内；通过在每日8:00–18:00之间打开遮光窗帘，为光照时间；其余时间(即18:00–第二天8:00)关闭遮光窗帘，为黑暗时间；控制每日光照周期为LD10:14h；光照时间为日光照射，室内光照强度为50-2000lx。房间正对窗户一侧，放置飞利浦HU4803/00加湿器(飞利浦(中国)投资有限公司)一台，控制室内空气相对湿度为70％–90％；在窗户一侧墙壁分别放置智拓ZTR-i100数据记录仪(玉环智拓仪器科技有限公司)一台和水银温度计一只，监测和观察室内温湿度变化。
黑暗期采用遮光率99％的加厚双面银涂层牛津布遮挡阳光，为滞育诱导枯叶蛱蝶提供黑暗条件环境。光照期室内的光照强度受到天气的影响较大，通常为50–2000lx。
其中，将新化蛹装入口径约30cm、底部垫有吸水纸的塑料篮内，每个篮内装入约100头蛹。将放有蛹的塑料篮编号，并记下采蛹日期，然后置于诱导室内的三角钢架的隔层上，并在盛蛹的塑料篮的上方倒扣一个相同型号的塑料篮作为盖子，防止成虫羽化后飞出。有成虫开始羽化后，将当日羽化成虫转入新的塑料篮中，每篮中20–30头，贴上写有羽化日期的标签；
滞育诱导期间，在蛹处理期，每2日对蛹以喷雾的方式补水一次，补水量为5–10g/头蛹；成虫处理期间，每日从塑料篮外侧以喷雾方式给成虫补水一次，直至成虫满7日龄，补水量为5–10g/头成虫。
每个批次2000头蛹，滞育诱导处理后，每个批次各随机抽取150只雌成虫进行滞育诱导率的检测，对3批次试虫的试验结果表明，滞育诱导率分别为86.00％、100％和94.33％，结果符合预期。
试验结果表明，通过控制温度、光周期，即在低温、短光照条件下，对枯叶蛱蝶的蛹期和0-7日龄成虫期进行低温、短光照处理(即温度18-24℃、光周期LD(8-11):(13-16)h)，可诱导80％以上的枯叶蛱蝶成虫进入滞育。将此方法应用到枯叶蛱蝶人工繁育中，既可实现枯叶蛱蝶活体成虫长期贮藏、货架期延长，从而避免了成虫集中羽化可能带来的滞销问题，降低了养殖户的潜在经济风险。新方法同时也延长了枯叶蛱蝶成虫在蝴蝶生态园中的观赏寿命、降低生态园中活体成虫的投放频率，从而节省了蝴蝶园的运营成本。
本发明上述实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种枯叶蛱蝶的滞育诱导方法，其特征是，包括对枯叶蛱蝶蛹期或/和0–7日龄成虫连续进行低温或/和短光照处理，其中，所述低温处理过程中，温度保持为18–24℃；所述短光照处理过程中，光周期为LD8–11:16–13h。
2.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述短光照处理过程中，光照为自然光源。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征是，在对枯叶蛱蝶进行所述低温或/和短光照处理过程中，控制空气相对湿度为70–90％。
4.如权利要求1或2所述的方法，其特征是，还包括将低温或/和短光照处理后的枯叶蛱蝶进行贮藏处理，以使得枯叶蛱蝶滞育成虫长期存活。
5.如权利要求4所述的方法，其特征是，贮藏处理过程中控制贮藏温度为≤26℃。
6.如权利要求4所述的方法，其特征是，贮藏处理过程中控制贮藏温度为15℃–26℃。
7.如权利要求4所述的方法，其特征是，贮藏处理过程中控制贮藏空气湿度≥50％。
8.如权利要求4所述的方法，其特征是，贮藏处理过程中每2–4天对贮藏成虫以喷雾的方式供水一次。
9.如权利要求4所述的方法，其特征是，贮藏处理过程中每3天对贮藏成虫以喷雾方式供水一次。
10.如权利要求8所述的方法，其特征是，每次喷雾供水的供水量为5–10g/头成虫。
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