CN112912515A

CN112912515A - 核苷酸试剂溶液

Info

Publication number: CN112912515A
Application number: CN201980068423.8A
Authority: CN
Inventors: J.加迪里; K.阿特霍图亚-卡尔萨
Original assignee: Life Technologies Corp
Current assignee: Life Technologies Corp
Priority date: 2018-10-16
Filing date: 2019-10-16
Publication date: 2021-06-04
Also published as: US20200115737A1; WO2020081670A1; US20220127663A1; US11873526B2; US20240117412A1; EP3867401A1; US11230730B2

Abstract

试剂溶液包含水、核苷酸和0.5μM至1000μM范围内的三(2‑羧乙基)膦。所述试剂溶液还可包含0.001％至1％的量的非离子表面活性剂或0.001％至1％的量的杀生物剂。所述试剂溶液可以包含盐，例如氯化钠或硫酸镁。

Description

核苷酸试剂溶液

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年10月16日提交的美国临时申请号62/746,542的权益，该临时申请的全部内容通过引用并入本文。

背景技术

越来越多地，生物和医学研究转向增强生物研究和医学的测序。例如，生物学家和动物学家正在转向测序以研究动物的迁移、物种的进化和性状的起源。为了研究疾病的起源、对药物的敏感性和感染的起源，医学界转向了测序。但是，测序历史上是昂贵的过程，因此限制了它的实践。

特别地，包含核苷酸的溶液对温度和pH变化敏感。许多测序系统使用冷储存并且每次运行时更换的试剂筒。此类一次性使用的试剂筒限制了试剂暴露于室温和可改变pH的气体的扩散。但是，利用一次性试剂筒是昂贵且耗时的。

附图说明

通过参考附图，本公开可以被更好地理解，并且其众多特征和优点对于本领域技术人员是显而易见的。

图1包含实例测序系统的图示。

图2包含包含传感器阵列的示范性系统的图示。

图3包含示范性传感器和相关井的图示。

图4包含说明试剂溶液稳定性的图。

在不同附图中使用相同的附图标记表示相似或相同的项目。

具体实施方式

在示范性实施例中，试剂溶液包含biomer和三(2-羧乙基)膦(TCEP)。在一个实例中，biomer是核苷酸、核糖核苷酸、氨基酸或其组合。例如，试剂溶液可以是包含水、核苷酸和TCEP的水溶液。此外，试剂溶液可包含表面活性剂，例如非离子表面活性剂，或者可以包含盐，例如氯化钠或硫酸镁。此外，试剂溶液可包含杀生物剂，例如异噻唑啉酮或其衍生物。已证实此类试剂溶液在室温下具有稳定性并且可以用作本体溶液。

试剂溶液的实施例可用于测序方法和测序系统。示范性测序系统可基于核苷酸与靶序列的相互作用来检测序列。在一个实例中，测序系统可以使用合成测序过程来检测序列。此类系统的实例包含光学测序和基于pH的测序。检测核酸序列的其他方法包含定量PCR。试剂溶液的实施例也可用于合成核酸、核糖核酸或蛋白质。

图1图解绘示了用于进行基于pH的核酸测序的系统。该设备的每个电子传感器产生取决于参考电压值的输出信号。流体回路允许多种试剂被输送到反应室。

在图1中，包含流体回路102的系统100通过入口连接到至少两个试剂储存器(104、106、108、110或112)、连接到废物储存器120，并且通过流体路径132连接到生物传感器134，所述流体路径132将流体节点130连接到生物传感器134的入口138用于流体连通。来自储存器(104、106、108、110或112)的试剂可以通过包含压力、泵(诸如注射泵、重力进料等)多种方法被驱动到流体回路102，并且通过控制阀114来加以选择。来自流体回路102的试剂可以通过接收来自控制系统118的信号的阀114被驱动到废物容器120。也可以通过生物传感器134将来自流体回路102的试剂驱动到废物容器136。控制系统118包含用于阀的控制器，其通过电连接116生成用于打开和关闭的信号。

控制系统118还包含用于系统的其它部件的控制器，诸如通过电连接122连接到其上的洗涤溶液阀124和参考电极128。控制系统118还可以包含用于生物传感器134的控制和数据采集功能。在一种操作模式中，流体回路102在控制系统118的程序控制下将一系列选定的试剂1、2、3、4或5输送到生物传感器134，使得在选定的试剂流之间，流体回路102被填充和清洗，并且生物传感器134也被清洗。进入生物传感器134的流体通过出口140排出并通过夹紧阀调节器144的控制沉积在废物容器136中。阀144与生物传感器134的传感器流体输出140流体连通。

包含对由第一入口和第二入口形成的孔进行限定并且暴露传感器垫的介电层的装置尤其适用于检测化学反应和副产物，例如检测响应于核苷酸并入的氢离子的释放，用于遗传测序等其它应用。在具体实施例中，测序系统包含其中设置有传感阵列的流动池，包含与传感阵列电子连通的通信电路，并且包含与流动池流体连通的容器和流体控制器。在实例中，图2示出流动池200的扩大的横截面图并且示出了流动室206的一部分。试剂流208流过孔阵列202的表面，其中试剂流208流过孔阵列202的孔的开口端。孔阵列202和传感器阵列205一起可形成形成流动池200的下壁(或底板)的集成单元。参考电极204可以与流动室206流体耦合。此外，流动池盖230将流动室206封装以将试剂流208容纳在限定区域内。

图3示出了孔301和传感器314的展开图，如图2的210所示。孔的体积、形状、长径比(例如基座宽度与孔深度之比)和其他尺寸特征可基于发生的反应的性质以及所用的试剂、副产物或标记技术(如果有的话)来选择。传感器314可以是化学场效应晶体管(chemFET)，更具体地是离子敏感FET(ISFET)，其具有浮置栅极318，所述浮置栅极318具有任选地通过钝化层316与孔内部隔开的传感器板320。传感器314可响应于存在于与传感器板320相对的钝化层316上的电荷324的量(并产生与之相关的输出信号)。电荷324的变化可以引起chemFET的源极321和漏极322之间的电流变化。反过来，chemFET可以直接用于提供基于电流的输出信号，或者间接地与附加电路一起用于提供基于电压的输出信号。反应物、洗涤溶液和其它试剂可以通过扩散机构340移入和移出孔。

在实施例中，在孔301中进行的反应可以是识别或确定所关注分析物的特征或性质的分析反应。这些反应可以直接或间接产生影响邻近传感器板320的电荷量的副产物。如果此类副产物以少量产生或迅速衰减或与其它成分反应，那么可以同时在孔301中分析相同分析物的多个拷贝，以便增加生成的输出信号。在实施例中，分析物的多个拷贝可以在沉积到孔301中之前或之后附接到固相载体312上。固相载体312可以是微粒、纳米粒子、珠粒、固体或多孔的凝胶等。为了简单和易于解释，固相载体312在本文中也称为粒子或珠粒。对于核酸分析物，可以通过滚环扩增(RCA)、指数RCA或类似技术制备多个连接的拷贝，以产生扩增子而不需要固体载体。

特别地，导致寡核苷酸如引物延伸的反应，或以其他方式形成靶DNA或RNA拷贝的反应利用包含核酸的试剂溶液。在一个实例中，试剂溶液是包含biomer、三(2-羧乙基)膦(TCEP)和水的水溶液。试剂溶液可进一步包含表面活性剂、盐、杀生物剂或其组合。

例如，试剂溶液可以包含0.5μM至1000μM范围内的TCEP。在一个实例中，TCEP可以0.5μM至100μM范围内，例如0.5μM至10μM范围内，0.5μM至5μM范围内或0.5μM至1μM范围内的量包含在试剂溶液中。

biomer是用于形成生物聚合物如核酸、核糖核酸或蛋白质的单元。例如，biomer可以是核苷酸、核糖核苷酸、氨基酸或其组合。示范性核苷酸可选自胸腺嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶或其组合。或者，核苷酸可选自胸腺嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤、或其组合。示范性核糖核苷酸可具有与上述识别的核苷酸相似的碱基。

Biomer可以100nM或200μM的范围存在于试剂溶液中。例如，biomer可以1μM至100μM的范围，例如10μM至100μM的范围存在于试剂溶液中。在一个实例中，核苷酸可以100nM或200μM的范围存在于试剂溶液中。例如，核苷酸可以1μM至100μM的范围，例如10μM至100μM的范围存在于试剂溶液中。

此外，试剂溶液还可以包含表面活性剂。例如，表面活性剂可以0.001％至10％的范围，例如0.001％至1％的范围，或0.001％至0.1％的范围存在。

表面活性剂可以是离子表面活性剂、两性表面活性剂或非离子表面活性剂。离子表面活性剂可以是阴离子表面活性剂。在另一个实例中，离子表面活性剂可以是阳离子表面活性剂。示范性阴离子表面活性剂包含硫酸盐表面活性剂、磺酸盐表面活性剂、磷酸盐表面活性剂、羧酸盐表面活性剂或其任何组合。示范性硫酸盐表面活性剂包含烷基硫酸盐，如月桂基硫酸铵、月桂基硫酸钠(十二烷基硫酸钠(SDS))或其组合；烷基醚硫酸盐，例如月桂醇聚醚硫酸钠、肉豆蔻醇聚醚硫酸钠或其任何组合；或其任何组合。示范性磺酸盐表面活性剂包含烷基磺酸盐，如十二烷基磺酸钠；多库酯如磺基琥珀酸二辛酯钠；烷基苄基磺酸盐；或其任何组合。示范性磷酸盐表面活性剂包含烷基芳基醚磷酸盐、烷基醚磷酸盐或其任何组合。示范性羧酸表面活性剂包含烷基羧酸盐，如脂肪酸盐或硬脂酸钠；月桂酰肌氨酸钠；胆汁酸盐，例如脱氧胆酸钠；或其任何组合。

示范性阳离子表面活性剂包含伯胺、仲胺或叔胺、季铵表面活性剂或其任何组合。示范性季铵表面活性剂包含烷基三甲基铵盐，例如十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)或十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)；十六烷基氯化吡啶(CPC)；聚乙氧基化牛脂胺(POEA)；苯扎氯铵(BAC)；苄索氯铵(BZT)；5-溴-5-硝基-1,3-二氧杂环己烷；二甲基双十八烷基氯化铵；双十八烷基二甲基溴化铵(DODAB)；或其任何组合。

示范性的两性表面活性剂包含伯、仲或叔胺或具有磺酸根、羧酸根或磷酸根阴离子的季铵阳离子。示范性磺酸盐两性表面活性剂包含(3-[3-胆酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸盐)；磺基甜菜碱如椰油酰胺丙基羟基磺基甜菜碱；或其任何组合。示范性羧酸两性表面活性剂包含氨基酸、亚氨基酸、甜菜碱如椰油酰胺基丙基甜菜碱，或其任何组合。示范性磷酸盐两性表面活性剂包含卵磷脂。

在其他实例中，表面活性剂可以是非离子表面活性剂，例如基于聚乙二醇的表面活性剂，例如包含聚乙二醇部分。在一个实例中，基于聚乙二醇的表面活性剂包含聚乙二醇的苯基醚。在另一个实例中，表面活性剂可以是非离子表面活性剂，例如包含聚(环氧乙烷)的嵌段共聚物或包含聚(环氧乙烷)的三嵌段共聚物。例如，表面活性剂可包含聚(环氧乙烷)/聚(环氧丙烷)嵌段共聚物。

试剂溶液可进一步包含盐，例如氯化钠、硫酸镁或其组合。在一个实例中，氯化钠可以0.01M至2M的量包含在试剂溶液中。例如，氯化钠可以0.01M至1M的量，或0.01M至0.5M的量包含在试剂溶液中。

溶液可以包含硫酸镁，其例如可以0.001M至2M的量包含在试剂溶液中。例如，硫酸镁可以0.001M至1M的量，例如0.001M至0.1M的量包含在试剂溶液中。

任选地，试剂溶液可以包含杀生物剂，例如抗微生物剂。示范性杀生物剂包含异噻唑啉酮化合物或其衍生物。例如，异噻唑啉酮化合物可包含异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮、氯甲基异噻唑啉酮、苯并异噻唑啉酮、辛基异噻唑啉酮、二氯辛基异噻唑啉酮、丁基苯并异噻唑啉酮或其组合。杀生物剂如异噻唑啉酮化合物可以0.001％至1％的量，如0.001％至0.1％的量包含在试剂溶液中。

在另一个实例中，洗涤溶液包含水、非离子表面活性剂、杀生物剂和三(2-羧乙基)膦。此类洗涤溶液可用于冲洗试剂溶液或在其中不需要biomer的部分过程期间。在另一个实例中，洗涤溶液可用于形成试剂溶液。

例如，洗涤溶液可以包含0.5μM至1000μM范围内的TCEP。在一个实例中，TCEP可以0.5μM至100μM范围内，例如0.5μM至10μM范围内，0.5μM至5μM范围内或0.5μM至1μM范围内的量包含在洗涤溶液中。

表面活性剂可以是离子表面活性剂、两性表面活性剂、非离子表面活性剂、或其组合。表面活性剂可以选自上述表面活性剂。在一个实例中，表面活性剂是非离子表面活性剂。例如，表面活性剂可以是非离子表面活性剂，例如基于聚乙二醇的表面活性剂，例如包含聚乙二醇部分。在一个实例中，基于聚乙二醇的表面活性剂包含聚乙二醇的苯基醚。在另一个实例中，表面活性剂可以是非离子表面活性剂，例如包含聚(环氧乙烷)的嵌段共聚物或包含聚(环氧乙烷)的三嵌段共聚物。例如，表面活性剂可包含聚(环氧乙烷)/聚(环氧丙烷)嵌段共聚物。

洗涤溶液可进一步包含盐，例如氯化钠、硫酸镁或其组合。在一个实例中，氯化钠可以0.01M至2M的量包含在试剂溶液中。例如，氯化钠可以0.01M至1M的量，或0.01M至0.5M的量包含在试剂溶液中。

洗涤溶液可以包含硫酸镁，其例如可以0.001M至2M的量包含在洗涤溶液中。例如，硫酸镁可以0.001M至1M的量，例如0.001M至0.1M的量包含在洗涤溶液中。

任选地，洗涤溶液可以包含杀生物剂，例如抗微生物剂。示范性杀生物剂包含异噻唑啉酮化合物或其衍生物。例如，异噻唑啉酮化合物可包含异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮、氯甲基异噻唑啉酮、苯并异噻唑啉酮、辛基异噻唑啉酮、二氯辛基异噻唑啉酮、丁基苯并异噻唑啉酮或其组合。杀生物剂如异噻唑啉酮化合物可以0.001％至1％的量，如0.001％至0.1％的量包含在洗涤溶液中。

任选地，洗涤溶液可包含固体缓冲颗粒。固体缓冲颗粒可包含陶瓷颗粒。在一个实例中，陶瓷颗粒可以是二氧化钛、氧化锡、氧化锆、氧化铝、氧化钽或其组合。例如，陶瓷颗粒可以是二氧化钛或氧化锡。在特定实例中，陶瓷颗粒包含二氧化钛(即，二氧化钛)。此外，陶瓷颗粒可以是水解陶瓷颗粒或可以是气相陶瓷颗粒。特别地，陶瓷颗粒是气相陶瓷颗粒。

固体缓冲颗粒如陶瓷颗粒可具有与目标pH不同的至少1.2pH单位的零电荷点。例如，零电荷点可为与目标pH不同的至少2.0pH单位或与目标pH不同的至少3.0pH单位，但不大于与目标pH不同的10pH单位。特别地，固体缓冲颗粒具有小于悬浮液的目标pH的零电荷点。或者，固体缓冲颗粒可具有大于悬浮液的目标pH的零电荷点。在其他替代方案中，可以使用固体缓冲颗粒的组合。例如，可以使用包含具有低于目标pH的零电荷点的固体缓冲颗粒和具有高于目标pH的零电荷点的固体缓冲颗粒的组合。

此外，固体缓冲颗粒可具有10m²/g至350m²/g的比表面积。例如，比表面积可在50m²/g to 350m²/g的范围内，例如100m²/g至300m²/g的范围内，150m²/g至300m²/g的范围内，或甚至225m²/g至275m²/g的范围内。在另一个实例中，比表面积可以在25m²/g至125m²/g的范围内，例如在50m²/g至100m²/g的范围内。此外，固体缓冲颗粒可具有0.01μm至1200μm范围内的粒度，例如平均团聚体尺寸。例如，平均粒度可以在0.05μm至500μm的范围内，如0.5μm至200μm的范围，或甚至5.0μm至100μm的范围。

洗涤溶液可以包含0.0001g/mL至0.01g/mL范围内，例如0.0005g/mL至0.01g/mL范围内，0.0010g/mL至0.0065g/mL范围内，0.0010g/mL至0.0050g/mL范围内或甚至0.0010g/mL至0.0040g/mL范围内的固体缓冲颗粒(例如二氧化钛)。

洗涤溶液可用于形成包含例如以上列出的那些biomer的试剂溶液。例如，biomer在洗涤溶液中的量可以在上述列出的范围内。特别地，由洗涤溶液形成的试剂溶液可以包含核苷酸。

实施例

实施例1用和不用TCEP制备试剂溶液。使用用较大试剂容器改性的ION S5 XL测试溶液。

试剂溶液包含0.1M氯化钠，0.015M氯化镁，0.01％

F68和0.05％Neolone^TM。包含TCEP的试剂溶液包含2％的TCEP。

在ION S5 XL测序仪上使用540芯片相对于缓冲的测试溶液测试pH。确定从缓冲溶液切换到试剂溶液的平均阶跃响应。所述过程每周重复，持续6周，在测试之间试剂溶液在室温下老化。如图4所示，不含TCEP的试剂溶液在每经过一周显示出显著的阶跃变化，而含TCEP的试剂溶液在6周时间内显示出很少的pH变化。

实施例2当用于测序运行时，进一步测试含TCEP的试剂溶液的有效性。用标准200bp文库试剂盒(

Exome 200bp对照文库)测试测序性能，用于使用ION Chef(ION Chef v2试剂盒)和ION 540芯片的样品制备。使用Ion Torrent S5每周老化6周后进行测序。

使用具有组成106nM NaCl、17mM MgSO4、0.05wt.％异噻唑啉酮，0.01％TritonX-100、0.0013g/ml二氧化钛和2μM TCEP的试剂溶液制备胸腺嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤和鸟嘌呤各自的核苷酸溶液。在与核苷酸混合之前从溶液中过滤二氧化钛。

如表1所绘示，测序性能在6周时间内基本保持一致。

表1.用于老化试剂溶液的测序性能

第0周

第1周

第2周

第3周

第4周

第5周

第6周

读段总数

81.2M

83.9M

77.6M

72.5M

76.2M

81.0M

68.2M

总碱基AQ20(Mbp)

11.0k

12.5k

11.1k

10.1k

10.5k

11.1k

9.21k

平均长度AQ20(bp)

158

167

162

159

157

156

平均原始读段准确度

98.86％

98.98％

98.87％

98.82％

98.80％

98.93％

关键信号(值)

79

85

83

85

81

88

85

上述试剂和洗涤溶液显示出特别的技术优点，包含延长的保质期。认为所述组分相互作用以有利地防止其他组分的降解。

在第一方面，试剂溶液包含水、核苷酸和0.5μM至1000μM范围内的三(2-羧乙基)膦。

在所述第一方面的一个实例中，所述范围为0.5μM至100μM。例如，所述范围为0.5μM至10μM。

在第一方面和上述实例的另一个实例中，核苷酸选自胸腺嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤或鸟嘌呤。

在第一方面的另一实例和上述实例中，核苷酸以100纳摩尔至500μM的范围存在。例如，核苷酸以1μM至200μM的范围存在。

在第一方面和上述实例的额外实例中，试剂溶液还包含表面活性剂。例如，表面活性剂以0.001％至10％的范围，例如0.001％至1％的范围，或0.001％至0.1％的范围存在。在一个实例中，表面活性剂是非离子表面活性剂。例如，非离子表面活性剂包含三嵌段共聚物。在一个实例中，表面活性剂包含聚(环氧乙烷)部分。在另一个实例中，非离子表面活性剂包含聚环氧乙烷共聚物，例如聚(环氧乙烷)/聚(环氧丙烷)嵌段共聚物。

在第一方面和上述实例的另一个实例中，试剂溶液还包含氯化钠。例如，氯化钠以0.01M至2M的量包含在内。在一个实例中，氯化钠以0.01M至1M的量，例如以0.01M至0.5M的量包含在内。

在第一方面和上述实例的另一实例中，试剂溶液还包含硫酸镁。例如，硫酸镁以0.001M至2M的量包含在内。在一个实例中，硫酸镁以0.001M至1M的量，例如以0.001M至0.1M的量包含在内。

在第一方面和上述实例的额外实例中，试剂溶液还包含杀生物剂。例如，杀生物剂以0.001％至1％的量包含在内。在一个实例中，杀生物剂以0.001％至0.1％的量包含在内。在其他实例中，杀生物剂是异噻唑啉酮化合物。

在第二方面中，试剂溶液包含0.001％至1％的量的水、非离子表面活性剂，0.001％至1％的量的杀生物剂和0.5μM至1000μM范围内的三(2-羧乙基)膦。

在第二方面的一个实例中，三(2-羧乙基)膦以0.5μM至100μM的范围包含在内。例如，三(2-羧乙基)膦包含以0.5μM至10μM的范围包含在内。

在第二方面和上述实例的另一个实例中，试剂溶液还包含biomer。例如，biomer包含核苷酸。在一个实例中，核苷酸选自胸腺嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤或鸟嘌呤。在其他实例中，biomer以100纳摩尔至500μM的量包含在内。例如，biomer以1μM至200μM的范围存在。

在第二方面的另一实例和上述实例中，非离子表面活性剂以0.001％至0.1％的范围存在。在一个实例中，非离子表面活性剂包含三嵌段共聚物。在其他实例中，三嵌段共聚物包含聚(环氧乙烷)共聚物，例如聚(环氧乙烷)/聚(环氧丙烷)嵌段共聚物。在额外的实例中，非离子表面活性剂包含聚(环氧乙烷)部分。

在第二方面和上述实例的额外实例中，试剂溶液还包含氯化钠。例如，氯化钠以0.01M至2M的量包含在内。在一个实例中，氯化钠以0.01M至1M的量，例如以0.01M至0.5M的量包含在内。

在第二方面的另一实例和上述实例中，试剂溶液还包含硫酸镁。例如，44.硫酸镁以0.001M至2M的量包含在内。在一个实例中，硫酸镁以0.001M至1M的量，例如以0.001M至0.1M的量包含在内。

在第二方面的其他实例和上述实例中，杀生物剂以0.001％至0.1％的量包含在内。

在第二方面的额外实例和上述实例中，48杀生物剂为异噻唑啉酮化合物。

在第二方面的另一实例和上述实例中，试剂溶液还包含二氧化钛颗粒。例如，二氧化钛颗粒以0.0005g/ml至0.01g/ml的量包含在内。

应注意，并非需要在一般描述或实例中的上述所有活动，可能不需要特定活动的一部分，且除所描述的那些之外可进行一个或更多个其他活动。此外，所列出的活动的顺序不一定是执行它们的顺序。

在前述说明书中，已参考特定实施例描述了概念。然而，所属领域的一般技术人员了解，可以在不脱离如所附权利要求书中所阐述的本发明范围的情况下进行各种修改和改变。因此，说明书和附图被认为是说明性的而不是限制性的，并且所有这样的修改都包含在本发明的范围内。

如在此所使用的，术语“包括”，“包含”，“包括”，“包含有”，“具有”，“具有”或其任何其他排他性的包含。例如，包括一系列特征的工艺，方法，制品或装置不必仅限于那些特征，而是可以包括未明确列出的或这些工艺，方法，制品或装置固有的其它特征。此外，除非有相反的明确说明，“或”是指包含性的或而不是排他性的或。例如，条件A或B由以下任一条件满足：A为真(或存在)且B为假(或不存在)，A为假(或不存在)且B为真(或存在)，且A和B均为真(或存在)。

此外，使用“a”或“an”来描述本文所述的元件和组件。这样做仅仅是为了方便和给出本发明范围的一般含义。该描述应被理解为包含一个或至少一个，并且单数也包含复数，除非其明显地表示其它含义。

上面已经关于具体实施例描述了益处、其他优点和问题的解决方案。然而，益处、优点、问题的解决方案以及可能导致任何益处，优点或解决方案发生或变得更明显的任何特征(多个特征)不应被解释为任何或所有权利要求的关键，必需或必要特征。

在阅读本说明书之后，本领域技术人员将理解，为了清楚起见，本文在单独实施例的上下文中描述的某些特征也可以在单个实施例中组合提供。相反，为了简洁起见，在单个实施例的上下文中描述的各种特征也可以单独地或以任何子组合来提供。此外，提及范围中所述的值包含该范围内的每个值。

Claims

1.一种试剂溶液，其包括：

水；

核苷酸；以及

在0.5μM至1000μM范围内的三(2-羧乙基)膦。

2.根据权利要求1所述的试剂溶液，其中所述范围为0.5μM至100μM。

3.根据权利要求2所述的试剂溶液，其中所述范围为0.5μM至10μM。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的试剂溶液，其中所述核苷酸选自胸腺嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤或鸟嘌呤。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的试剂溶液，其中所述核苷酸以100纳摩尔至500μM的范围存在。

6.根据权利要求5所述的试剂溶液，其中所述核苷酸以1μM至200μM的范围存在。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的试剂溶液，其还包括表面活性剂。

8.根据权利要求7所述的试剂溶液，其中所述表面活性剂以0.001％至10％的范围存在。

9.根据权利要求8所述的试剂溶液，其中所述表面活性剂以0.001％至1％的范围存在。

10.根据权利要求9所述的试剂溶液，其中所述表面活性剂以0.001％至0.1％的范围存在。

11.根据权利要求7所述的试剂溶液，其中所述表面活性剂是非离子表面活性剂。

12.根据权利要求11所述的试剂溶液，其中所述非离子表面活性剂包含三嵌段共聚物。

13.根据权利要求7所述的试剂溶液，其中所述非离子表面活性剂包含聚(环氧乙烷)部分。

14.根据权利要求13所述的试剂溶液，其中所述非离子表面活性剂包含聚环氧乙烷共聚物。

15.根据权利要求14所述的试剂溶液，其中所述聚环氧乙烷共聚物是聚(环氧乙烷)/聚(环氧丙烷)嵌段共聚物。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的试剂溶液，其还包括氯化钠。

17.根据权利要求16所述的试剂溶液，其中所述氯化钠以0.01M至2M的量包含在内。

18.根据权利要求17所述的试剂溶液，其中所述氯化钠以0.01M至1M的量包含在内。

19.根据权利要求18所述的试剂溶液，其中所述氯化钠以0.01M至0.5M的量包含在内。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的试剂溶液，其还包括硫酸镁。

21.根据权利要求20所述的试剂溶液，其中所述硫酸镁以0.001M至2M的量包含在内。

22.根据权利要求21所述的试剂溶液，其中所述硫酸镁以0.001M至1M的量包含在内。

23.根据权利要求22所述的试剂溶液，其中所述硫酸镁以0.001M至0.1M的量包含在内。

24.根据权利要求1至23中任一项所述的试剂溶液，其还包括杀生物剂。

25.根据权利要求24所述的试剂溶液，其中所述杀生物剂以0.001％至1％的量包含在内。

26.根据权利要求24所述的试剂溶液，其中所述杀生物剂以0.001％至0.1％的量包含在内。

27.根据权利要求24所述的试剂溶液，其中所述杀生物剂是异噻唑啉酮化合物。

28.一种试剂溶液，其包括：

水；

0.001％至1％的量的非离子表面活性剂；

0.001％至1％的量的杀生物剂；以及

在0.5μM至1000μM范围内的三(2-羧乙基)膦。

29.根据权利要求28所述的试剂溶液，其中所述三(2-羧乙基)膦以0.5μM至100μM的范围包含在内。

30.根据权利要求29所述的试剂溶液，其中所述三(2-羧乙基)膦以0.5μM至10μM的范围包含在内。

31.根据权利要求28至30中任一项所述的试剂溶液，其还包括]biomer。

32.根据权利要求31所述的试剂溶液，其中所述biomer包含核苷酸。

33.根据权利要求32所述的试剂溶液，其中所述核苷酸选自胸腺嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤或鸟嘌呤。

34.根据权利要求31所述的试剂溶液，其包括100纳摩尔至500μM的量的所述biomer。

35.根据权利要求34所述的试剂溶液，其中所述biomer以1μM至200μM的范围存在。

36.根据权利要求28至35中任一项所述的试剂溶液，其中所述非离子表面活性剂以0.001％至0.1％的范围存在。

37.根据权利要求28至36中任一项所述的试剂溶液，其中所述非离子表面活性剂包含三嵌段共聚物。

38.根据权利要求37所述的试剂溶液，其中所述三嵌段共聚物是聚(环氧乙烷)/聚(环氧丙烷)嵌段共聚物。

39.根据权利要求28至38中任一项所述的试剂溶液，其中所述非离子表面活性剂包含聚(环氧乙烷)部分。

40.根据权利要求28至39中任一项所述的试剂溶液，其还包括氯化钠。

41.根据权利要求40所述的试剂溶液，其中所述氯化钠以0.01M至2M的量包含在内。

42.根据权利要求41所述的试剂溶液，其中所述氯化钠以0.01M至1M的量包含在内。

43.根据权利要求42所述的试剂溶液，其中所述氯化钠以0.01M至0.5M的量包含在内。

44.根据权利要求28至43中任一项所述的试剂溶液，其还包括硫酸镁。

45.根据权利要求44所述的试剂溶液，其中所述硫酸镁以0.001M至2M的量包含在内。

46.根据权利要求45所述的试剂溶液，其中所述硫酸镁以0.001M至1M的量包含在内。

47.根据权利要求46所述的试剂溶液，其中所述硫酸镁以0.001M至0.1M的量包含在内。

48.根据权利要求28至47中任一项所述的试剂溶液，其中所述杀生物剂以0.001％至0.1％的量包含在内。

49.根据权利要求28至48中任一项所述的试剂溶液，其中所述杀生物剂为异噻唑啉酮化合物。

50.根据权利要求28至49中任一项所述的试剂溶液，其还包括二氧化钛颗粒。

51.根据权利要求50所述的试剂溶液，其中所述二氧化钛颗粒以0.0005g/ml至0.01g/ml的量包含在内。