CN112903637B - 尿胰蛋白酶原-2的检测试剂盒、适配的检测装置及检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及尿胰蛋白酶原‑2检测试剂盒、适配的检测装置及检测方法。该试剂盒包括形成有放置腔的盒体、可连接于放置腔内的检测条、用于固定检测条的固定组件及用于控制检测条上生化反应温度的温控件。通过设置迁移膜，能够加快样品液在检测条中的迁移，同时还利用尿胰蛋白酶原‑2和其他样品成分的迁移速率不同，起到将尿胰蛋白酶原‑2进行迁移分离的作用，不仅满足普通定性分析需要，还能准确进行定量分析。

Description

尿胰蛋白酶原-2的检测试剂盒、适配的检测装置及检测方法

技术领域

本发明涉及检测试剂盒技术领域，尤其涉及一种尿胰蛋白酶原-2的检测试剂盒、适配的检测装置及检测方法。

背景技术

急性胰腺炎((acute pancreatitis,AP)是临床常见的急腹症之一，据国外统计，其发病率在6.5~80/10万人，约占急腹症的10%。有学者认为，其发病机制与基因改变导致胰蛋白酶的过度活化有关。本症起病急，病情险恶，约20~30%的AP病例可转化为坏死性胰腺炎，导致败血症等严重并发症，因此，早期确诊和治疗十分重要。血淀粉酶(AMS)是诊断AP的常用检测项目，但是其敏感性和特异性都不是十分理想。胰蛋白酶原(trypsinogen, TPS)是胰蛋白酶的前体，有2种同工酶：胰蛋白酶原-1(TPS-1)和胰蛋白酶原-2(TPS-2)。其中TPS-2是丝氨酸蛋白酶，具有激活基质金属酶功能，能引起组织胶原蛋白的溶解。TPS-2相对分子质量较小，能透过肾小球毛细血管壁，并在肾小管吸收较少。因此，血液和尿液中的TPS-2浓度相差不大。国内外关于TPS诊断胰腺炎的价值评价几乎都认为在灵敏度和特异性方面优于淀粉酶(amylase,AMY)和血清脂肪酶。免疫层析法检测尿胰蛋白酶原-2，诊断急性胰腺炎的敏感性和特异性分别为96.3%和93.3，证明免疫层析法尿胰蛋白酶原-2的检测可作为诊断急性胰腺炎较好的指标。北京军区总医院研究报道，采用ELISA法定量检测，以44.05pg/L为临界值，血清胰蛋白酶原-2鉴别胰腺癌与胰腺炎的敏感度和特异度分别为63.3%和73.9%，以1.85μg/L为临界值，鉴别诊断胰腺癌与健康人的敏感度为91.4%，特异度为95.7%。虽然胰蛋白酶原-2是辅助诊断胰腺炎的特异性和敏感性指标，但是该指标目前常用的检测方法为酶联免疫法和免疫层析法。酶联免疫法检测样本的准确度较高，灵敏度好，但是检测过程繁琐，耗时较长，且样本需要批量检测，不适用于及时检验；同时酶联免疫法检测自动化程度低，检测结果受人为因素影响较大。免疫层析法是近几年来国外兴起的一种快速诊断技术，这种方法检测样本迅速，但一般不能定量检测只能用作定性判断。胶乳增强透射免疫比浊检测(PETIA)技术是在胶乳凝集定性试验基础上发展建立的一种非放射性均相免疫测定法，可以对各种微量的抗原物质和小分子半抗原进行精确的定量测定，同时该检测方法耗时短，自动化程度高，目前越来越多的应用到临床实验室中。鉴于胰蛋白酶原-2具有明确的诊断意义，开发一种对于胰蛋白酶原-2能够快速检测和快速定量的检测试剂盒，对于临床上急性胰腺炎的快速准确诊断具有重要的意义。

发明内容

有鉴于此，有必要提供一种尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒，以克服现试剂盒仅能定性分析，适用范围窄的问题。

本发明提供一种尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒，包括：

盒体，所述盒体形成有一放置腔；

检测条，可连接于所述放置腔内，所述检测条包括底板、依次附设于所述底板上的迁移膜和储水膜、及依次附设于所述底板一端的样品结合垫；

固定组件，所述固定组件包括固定件及附设于所述固定件上的液体驱动件，所述固定件具有延伸至所述放置腔内的一端，所述固定件具有将所述检测条固定连接于所述放置腔内的固定部，所述液体驱动件具有延伸至所述放置腔外的一端并可与所述检测条抵接，所述液体驱动件可被外部动力源驱动以在所述检测条上产生液体流动的驱动力；

温控件，所述温控件包括温控件，所述温控件可接收外部动力源提供的热源或冷源以向所述迁移膜内传递热量或者进行冷却。

可选的，所述动力源为电力，所述液体驱动件具有为可获取电力的电极部，所述液体驱动件设置有两个且可分别抵接于所述检测条的两端以在所述检测条的迁移膜上产生一个电力迁移的驱动力。

其中，所述底板具有与所述电极部导通的导电部，所述导电部具有延伸至所述迁移膜内的一端。

具体的，所述导电部沿所述底板长度方向贯通或设置于所述底板的端部，所述储水膜用于对所述迁移膜提供水分。

可选的，所述动力源为气源，所述液体驱动件可连通所述动力源并在所述迁移膜的一端产生正压驱动力或者负压驱动力；

所述储水膜包裹于所述迁移膜外，以在所述迁移膜内形成一个封闭空间。

更多的，所述底板具有隔水部，所述隔水部将所述储水膜的分隔成两段，其中一段上覆盖所述样品结合垫。

进一步的，所述底板开设有若干长孔，所述底板内还开设有通气腔，所述通气腔通过所述长孔连通至所述迁移膜表面。

更进一步的，所述温控件可将外部动力源提供的热源或者冷源连通导入所述通气腔中。

本发明还提供一种与所述试剂盒适配的检测装置，包括形成有收纳腔的箱体，固定于所述收纳腔内存储部、取样器和动力源及温控模块，及设置于所述收纳腔内的荧光检测器；

所述存储部可用于固定所述试剂盒和样品容器，所述取样器用于获取检测样品并将样品释放至所述检测条的样品处理垫上，所述动力源可匹配连接于所述液体驱动件延伸至所述放置腔外的一端，所述温控模块用于控制所述迁移膜的温度，所述荧光检测部可用于检测所述检测条中产生的荧光。

本发明还提供一种利用所述试剂盒和所述检测装置进行尿胰蛋白酶原-2的检测方法，包括以下步骤：

S1、获取所述检测条，并将所述检测条通过所述固定件固定连接于所述放置腔内以制作所述试剂盒；

S2、利用所述取样器获取外部样品并将其释放至所述盒体内的样品检测垫上；

S3、开启所述动力源、所述温控件和所述温控模块，所述动力源对所述液体驱动件提供所述检测条所需的液体驱动力并同时提供热源或者冷源，所述温控模块向所述温控件发出温控指令，所述温控件执行所述温控指令以向所述迁移膜内传递热量或者进行冷却，以完成样品液在所述迁移膜上的迁移和生化反应；

S4、关闭所述动力源、所述温控件和所述温控模块，将所述检测条从所述放置腔内取出，通过所述荧光检测部获取所述检测条中的生物荧光检测信息。

有益效果：

1、该试剂盒通过设置迁移膜，能够加快样品液在检测条中的迁移，同时还利用尿胰蛋白酶原-2和其他样品成分的迁移速率不同，起到将尿胰蛋白酶原-2进行迁移分离的作用。这不仅有利于尿胰蛋白酶原-2的定量检测，提供其检测速率；通过这种差速迁移，还实现尿胰蛋白酶原-2的初步定量分析。该试剂盒能够克服现有技术仅能定性分析而定量分析需借助大型而昂贵的设备进行检测的缺陷，这不仅了满足检测的准确性需要，还能大大降低检测成本，拓宽该试剂盒的适用范围。

2、该检测装置可与试剂盒相适配，在试剂盒内完成样品反应，并获得反应结果，如产生荧光信息，在荧光检测器上进行荧光检测，不仅满足普通定性分析需要，还能准确进行定量分析。

3、该检测条的样品结合垫上，通过包被有时间分辨荧光物质白，可实现高带宽光学编码，可采用滤光片进行滤光，减少干扰；同时其荧光衰变时间长，为传统荧光的100多倍，通过测定时间差可以实现高信噪比；同时其可以反复接受激发，从而大大提高仪器探测到的信号值，有效排除样品自然荧光的干扰，具有灵敏度高，特异性强、稳定性好和无放射性污染等特点，可广泛应用于胰蛋白酶原-2的临床免疫检验和科学研究中。

附图说明

图1为本发明实施例提供的可选的尿胰蛋白酶原-2的检测试剂盒的的结构示意图。

图2为本发明实施例提供的可选的尿胰蛋白酶原-2的检测试剂盒的的结构示意图。

图3为本发明实施例提供的可选的尿胰蛋白酶原-2的检测试剂盒的的结构示意图。

图4为本发明实施例提供可选的储水膜的平面结构示意图。

图5为本发明实施例提供可选的检测条的立体结构示意图。

图6为本发明实施例提供可选的检测条的立体结构示意图。

图7为本发明实施例提供可选的检测条的立体结构示意图。

图8为图7对应的固定部与检测条连接后的平面结构示意图。

图9为本发明实施例提供的与所述试剂盒适配的检测装置的平面结构示意图。

图10为本发明实施例提供的利用所述试剂盒和所述检测装置进行尿胰蛋白酶原-2的检测方法流程示意图。

图11为图10中S3步骤可选的具体流程示意图。

图12为图10中S3步骤可选的具体流程示意图。

1盒体、10放置腔、11缺口、12观察窗、2检测条、20底板、200导电部、201隔水部、2010插槽、202通气腔、21迁移膜、210检测线、211质控线、22储水膜、220保水层、221隔绝层、23样品结合垫、230加样口、24分样件、240合端、241分支端、3固定组件、30固定件、300固定部、31液体驱动件、310电极部、311电连接端子、4温控件、5箱体、500收纳腔、51存储部、52加样器、53动力源、54温控模块、55荧光检测器。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明实施例提供一种尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒，如图1和9，包括盒体1、检测条2、固定组件3和温控件4。该试剂盒通过设置迁移膜，能够加快样品液在检测条中的迁移，同时还利用尿胰蛋白酶原-2和其他样品成分的迁移速率不同，起到将尿胰蛋白酶原-2进行迁移分离的作用。这不仅有利于尿胰蛋白酶原-2的定量检测，提供其检测速率；通过这种差速迁移，还实现尿胰蛋白酶原-2的初步定量分析。该试剂盒能够克服现有技术仅能定性分析而定量分析需借助大型而昂贵的设备进行检测的缺陷，这不仅了满足检测的准确性需要，还能大大降低检测成本，拓宽该试剂盒的适用范围。

如图1-4所示，盒体1形成有一放置腔10。检测条2可连接于放置腔10内，检测条2包括底板20、依次附设于底板20上的迁移膜21和储水膜22、及依次附设于底板20一端的样品结合垫23。底板20可以是PVC材料或者其他对于生物样品惰性的基材制成。迁移膜21可以是硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、玻璃纤维膜或有机纤维素膜。储水膜22具体包括保水层220和隔绝层221。保水层220可补充迁移膜21中样品迁移所需的微液态环境所需的水分。保水层220可以是多孔的无机保水材料、有机材料或有机-无机复合材料制成；有机保水材料可以为有机酸、海藻酸钠、丙烯酸和丙烯酸通过聚合法得到的透明缓释保水材料，也可以是透明质酸制成的缓释保水材料。无机材料可以是硅凝胶或气凝胶等。隔绝层221可由致密的有机惰性材料制成，以隔绝保水层220和其内部的迁移膜21与外部的空间，减少外部空间水分和环境对于迁移膜21中样品液的温度、水分和氧化还原等因素的影响。具体的，放置腔10还开设有缺口11和观察窗12，外用加样器可从缺口11进入放置腔10内以便进行加样，观察窗12用于观察检测结果。

固定组件3包括固定件30及附设于固定件30上的液体驱动件31。固定件30具有延伸至放置腔10内的一端，固定件30具有将检测条2固定连接于放置腔10内的固定部300，液体驱动件31具有延伸至放置腔10外的一端并可与检测条2抵接，液体驱动件31可被外部动力源驱动以在检测条2上产生液体流动的驱动力。

温控件4可接收外部动力源提供的热源或冷源以向迁移膜21内传递热量或者进行冷却。具体的，温控件4包括可连通外部动力源的管腔、流量计和/或阀，其中的阀可为减压阀、电动阀或电动微阀，管腔用于流通动力源提供的热源或冷源气流。

样品结合垫23上包被有时间分辨荧光物质白及胰蛋白酶原-2单克隆抗体。迁移膜21远离样品结合垫23的一端上设置有检测线210和质控线211。检测线210上包被有另一表位的胰蛋白酶原-2单克隆抗体，质控线211包被有羊抗鼠IgG。其中，时间分辨荧光物质为钙元素、钛元素、或其与乳胶的结合物中的一种。优选的时间分辨荧光物质为钙钛矿材料，其具有类似CaTiO₃晶体结构的化合物，以及受激辐射和腔增强超荧光效应，可实现高带宽光学编码，可采用滤光片进行滤光，减少干扰；同时其荧光衰变时间长，为传统荧光的100多倍，通过测定时间差可以实现高信噪比；同时其可以反复接受激发，从而大大提高仪器探测到的信号值，有效排除样品自然荧光的干扰，具有灵敏度高，特异性强、稳定性好和无放射性污染等特点，可广泛应用于胰蛋白酶原-2的临床免疫检验和科学研究中。

更具体的，为便于对样品液中物质在迁移膜21上不通迁移速率产生迁移结果，如图5-7所示，检测线210设置有多条，其每一条检测线210均与迁移垂直的方向设置，且多个检测线210沿迁移方向设置在距离样品结合垫23的不同位置，如此达位于不同位置检测线的胰蛋白酶原-2，从而在不同位置检测线210进行检测产生荧光，而不同位置是通过预先试验和经验进行设计，对应于不同的胰蛋白酶原-2浓度，从而在不同检测线获得检测荧光，可根据荧光强度，直接对应读出样品液中的胰蛋白酶原-2的浓度，以实现检测。另外，由于有多个不同位置的检测线，利用样品液中尿胰蛋白酶原-2和其他样品成分的迁移速率不同，起到将尿胰蛋白酶原-2进行迁移分离的作用，从而使得其中某一检测线的上的尿胰蛋白酶原-2的纯度更高，从而更加利用其在检测线上的生化反应。更具体的，如图5-7所示，样品处理垫23上对应设置多个加样口230，样品加入口230的数量与检测线210的数量相同，如此，在加样时，能够在每一加样口230上均施加样品，从而使得对于于，每一检测线210上待迁移的样品液的期起点均相同。更具体的，检测条2还包括连接于缺口11和加样口230之间的分样件24，分样件24具有合端240和分支端241，合端240连通缺口11，分支端241连通至加样口230；如此将样品从缺口11加入，经过分样件24即能够将其均匀分至每一加样口230，以满足样品液能够沿着迁移膜21均匀迁移，以与均匀与每一检测线210相遇。

可选的实施方式中，如图6所示，动力源为电力，液体驱动件31包括可获取电力的电极部310，液体驱动件310设置有两个且可分别抵接于检测条2的两端以在检测条2的迁移膜21上产生一个电力迁移的驱动力。其中，底板20具有与电极部310导通的导电部200，导电部200具有延伸至迁移膜21内的一端。更具体的，如底板20整体为PVC或其他不能导电的材料制成，而导电部200嵌入在底板内且延伸至与迁移膜21抵接。更具体的，如图所示，底板20的端部隔水部201开设插槽2010，电极部310设置插槽2010内壁，且一端延伸至与迁移膜21抵接；进一步的，液体驱动件31还包括嵌入于固定件30的固定部300内部的电连接端子311及电连接电连接端子311与外部电源的导线。如此，当固定件30的固定部300插入值插槽2010内实现对检测条2的固定时，电连接端子311可随之插入值插槽2010内与电极部310电连接，从而实现电导通，以便都在迁移膜21上产生一个电力迁移的驱动力。

可选的，如图7所示，动力源为气源，液体驱动件31可连通动力源并在迁移膜21的一端产生正压驱动力或者负压驱动力；储水膜22包裹于迁移膜21外，以在迁移膜21内形成一个封闭空间。液体驱动件31为可连通外部动力源的管腔、流量计和/或阀，其中的阀可为减压阀、电动阀或电动微阀，该管腔用于流通动力源提供的负压气流。同样地，隔水部201的插槽2010为提供气源的通路，液体驱动件31包括设置于固定件30的固定部300内的气源通路及气源管道。

如此，液体驱动件31通过动力源提供的气源，在迁移膜21一端产生正压驱动力或负压驱动力，实际是在该封闭空间内产生一个正压驱动力或负压驱动力。具体的，样品液加样在样品结合垫23上，预设的驱动是促使样品液在迁移膜21内由样品结合垫23一端向另一端移动，故液体驱动件31通过动力源提供负压气源，在与样品处理垫23相对的一端产生负压驱动力，促使样品液中物质在迁移膜21内迁移。

进一步的，为防止迁移膜21内液体迁移至底板20边缘与电极部310接触，或溢出底板20边缘，底板20边缘设置有导电部200的位置沿其厚度方向向外凸起形成隔水部201，以形成阻止迁移膜21内液体外流。隔水部201将储水膜22的分隔成两段，其中一段上覆盖样品结合垫23。

更多的，如图8所示，底板20开设由通气腔202，通气腔202包裹于迁移膜21和储水膜22外，温控件4可将外部动力源提供的热源或者冷源连通导入通气腔202中。如此，在通气腔202内充满热源或冷源气体，以向迁移膜21内传动热量或进行冷却。

本发明还提供的一种与上述实施例提供的试剂盒相适配的检测装置，如图9所示，包括形成有收纳腔500的箱体5，固定于收纳腔50内存储部51、取样器52和动力源53及温控模块54，及设置于收纳腔500内的荧光检测器55。该检测装置可与上述实施例提供的试剂盒相适配，在试剂盒内完成样品反应，并获得反应结果，如产生荧光信息，在荧光检测器55上进行荧光检测，使得对于尿蛋白酶原-2的检测能够克服现有技术仅能定性分析而定量分析需借助大型而昂贵的设备进行检测的缺陷，这不仅了满足检测的准确性需要，还能大大降低检测成本，拓宽该试剂盒的适用范围。

存储部51可用于固定上述实施例提供的试剂盒和样品容器，样品容器可用于盛放或暂存样品液，或者其他需要用到的检测试剂液。取样器52用于获取检测样品并将样品释放至检测条2的样品处理垫23上。动力源53可匹配连接于液体驱动件31延伸至放置腔10外的一端，以向液体驱动件31内通入正压或负压气源，或者提供液体驱动件31所需的电力。温控模块54可与温控件4通信连接，具体的，温控模块54与温控件4中的阀通信连接，以向这些阀发出控制指令，控制其开关和开关量，进而控制迁移膜21内样品液的温度。荧光检测部55可用于检测检测条2中产生的荧光。

本发明还提供一种利用上述实施例提供的试剂盒和检测装置进行尿胰蛋白酶原-2的检测方法，如图10所示，包括以下步骤：

S1、获取所述检测条，并将所述检测条通过所述固定件固定连接于所述放置腔内以制作所述试剂盒；

S2、利用所述取样器获取外部样品并将其释放至所述检测条的样品检测垫上；

S3、开启所述动力源、所述温控件和所述温控模块，所述动力源对所述液体驱动件提供所述检测条所需的液体驱动力并同时提供热源或者冷源，所述温控模块向所述温控件发出温控指令，所述温控件执行所述温控指令以向所述迁移膜内传递热量或者进行冷却，以完成样品液在所述迁移膜上的迁移和生化反应；

S4、关闭所述动力源、所述温控件和所述温控模块，将所述检测条从所述放置腔内取出，通过所述荧光检测部获取所述检测条中的生物荧光检测信息。

其中，检测条2的制备步骤如下：

1)迁移膜和储水膜的处理（以硝酸纤维素膜(NC膜)为例）

将NC膜和透膜质酸膜依次贴至底板的制定位置，取l0mm的pH 7.4磷酸盐缓冲液将胰蛋白酶原-2单克隆抗体稀释至lmg/ml，用于制备检测线；另取羊抗鼠IgG抗体，用稀释液稀释至lmg/ml，用于制备控制线；按lμl/cm划液量，通过biodot划膜仪将上述两种稀释后的抗体均匀的划至NC膜上制备检测线和控制线；后放置于25℃干燥箱中，干燥过夜。

2)样品结合垫的处理（采用玻璃纤维膜作为骨架材料）

将玻璃纤维素膜用含有表面活性剂的缓冲液(配方：100mM PB(pH7.4)，其中含有1.5%wt NaCl、5%wt BSA、0.5%吐温-20和5%蔗糖)浸泡进行预封闭后，50℃干燥过夜；通过Biodot仪器的airjet喷头，将标记有时间分辨荧光物质含CaTiO₃乳胶微球的胰蛋白酶原-2单克隆抗体按照10 μl/cm的量喷至干燥好的玻璃纤维素膜上，50℃干燥过夜，制备得到样品结合垫。

3)组装

在步骤1)制备好的硝酸纤维素膜的制定位置贴上步骤2)制备好的样品结合垫，并在硝酸纤维素膜的另一端贴上吸水膜，用裁膜仪按每条4mm的宽度进行裁剪，并装入层析条壳体中，即得成品。

该检测条利用双抗夹心法进行检测：将待测样品量取75μL滴加到样品垫上，尿样品中的胰蛋白酶原-2与样品垫上时间分辨荧光物质标记的胰蛋白酶原-2单克隆抗体结合，形成抗原-标记抗体复合物。经层析原理，该复合物在迁移膜中迁移，至依次与迁移膜上的另一个表位的胰蛋白酶原一2抗体((检测线)和羊抗鼠工gG抗体((控制线)形成抗体一抗原一标记抗体复合物。在时间分辨荧光分析仪的激发光激发下，标记元素显现荧光，结合的标记抗体越多，荧光强度越高，从而进行定量检测。

可选的，对于动力源为电力，以及液体驱动件31为可获取电力的电极部310的实施例中，如图11所示，S3步骤具体包括：

S31、开启所述动力源、所述温控件和所述温控模块；

S32、将所述液体驱动件设置有抵接于所述检测条的两端，所述电极部和所述导电部导通，并以在所述迁移膜上产生一个电力迁移的驱动力，促使样品液中物质在所述迁移膜内迁移；

S33、所述温控模块利用所述电极部和所述导电部的导通，获取所述迁移膜上的温度，经判断后发出加热指令或冷却指令至所述的温控件，所述温控件执行指令以向所述迁移膜内传递热量或者进行冷却，以完成样品液在所述迁移膜上的迁移和生化反应。

可选的，对于动力源为负压气源，液体驱动件31为可连通外部动力源的管腔、流量计和/或阀，其中的阀可为减压阀、电动阀或电动微阀，该管腔用于流通动力源提供的负压气流，此种实施方式中，如图12所示，S3步骤具体包括：

S31、开启所述动力源、所述温控件和所述温控模块；

S32、将所述液体驱动件设置有于所述检测条的一端，并连通所述储水膜包裹的封闭空间的一端，以在所述封闭空间内的所述迁移膜的一端形成一负压驱动力，促使样品液中物质在所述迁移膜内迁移；

S33、所述温控模块获取所述迁移膜上的温度，经判断后发出加热指令或冷却指令至所述的温控件，所述温控件执行指令以向所述迁移膜内传递热量或者进行冷却，以完成样品液在所述迁移膜上的迁移和生化反应。

健康人群尿液中胰蛋白酶原-2平均浓度为5.3ng/mL(范围0.7~9.6ng/mL)；血浆中胰蛋白酶原-2平均浓度63ng/mL(范围3~106ng/mL)。肾损伤后胰蛋白酶原-2水平急剧上升。任意选择的重症监护室患者尿液中胰蛋白酶原-2浓度可达到110ng/mL~40000ng/mL；血浆中胰蛋白酶原-2平均浓度25ng/mL~3491ng/mL。尿胰蛋白酶原-2水平高于350ng/mL或血浆胰蛋白酶原-2水平高于400ng/mL，急性肾功能衰竭阳性预测值约为90%。

将该试剂盒对试剂样品进行检测，流程如下：

取胰蛋白酶原-2校准品，稀释成不同浓度，分别加入至不检测条上的样品处理垫子上；10分钟之后，用荧光检测器55检测荧光发光值。每个稀释度的校准品检测三次，取T/C值的平均值。根据上述检测结果，以T/C值的对数值为X轴，以浓度的对数值为Y轴进行线性回归，得到线性方程Y=-0.063X²+0.962X-3.621，R²=0.9996，其具有高度线性相关性。

精密度测试：取制备好的9张检测条，配置一个浓度(700ng/mL)的胰蛋白酶原-2工作校准品，取75μ1样品，一次性加入检测条2的加样口230，开启动力源、温控件和温控模块，待样品层析l0min之后，用荧光检测器55检测荧光值，结果表明本发明提供的尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒的精密度良好。

准确性测试：配置30ng/mL、60ng/mL、150ng/mL、400ng/mL和800ng/mL浓度的工作校准品。各取75μ1样品，一次性加入同一检测条的不同的加样口230；待样品层析l0min之后，用荧光检测器55检测荧光值，结果表明本发明提供的尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒的准确度良好。

另外，还可通过准确性测试中，对于不同浓度检测品对应于同一检测条上的不同检测线一一对应，以获取每一检测条对应的胰蛋白酶原-2浓度值，当采用实际样品进行检测时，可气同一检测样品分别在所有的加样口230中均进行加样，当获得荧光值最大的一条检测线，即可得知样品中胰蛋白酶原-2浓度值，检测方法更简便，无需再绘制标准曲线，在满足定性分析的前提下，还能对样品进行初步定量分析。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒，其特征在于，包括：

盒体，所述盒体形成有一放置腔；

检测条，连接于所述放置腔内，所述检测条包括底板、依次附设于所述底板上的迁移膜和储水膜、及依次附设于所述底板一端的样品结合垫；

固定组件，所述固定组件包括固定件及附设于所述固定件上的液体驱动件，所述固定件具有延伸至所述放置腔内的一端，所述固定件具有将所述检测条固定连接于所述放置腔内的固定部，所述液体驱动件具有延伸至所述放置腔外的一端并与所述检测条抵接，所述液体驱动件被外部动力源驱动以在所述检测条上产生液体流动的驱动力；

所述动力源为电力或气源动力；述样品结合垫上包被有时间分辨荧光物质白及胰蛋白酶原-2单克隆抗体，所述迁移膜远离所述样品结合垫的一端上设置有检测线和质控线，所述检测线上包被有另一表位的胰蛋白酶原-2单克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。

2.根据权利要求1所述的尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒，其特征在于，所述动力源为电力，所述液体驱动件具有为获取电力的电极部，所述液体驱动件设置有两个且分别抵接于所述检测条的两端以在所述检测条的迁移膜上产生一个电力迁移的驱动力。

3.根据权利要求2所述的尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒，其特征在于，所述底板具有与所述电极部导通的导电部，所述导电部具有延伸至所述迁移膜内的一端。

4.根据权利要求3所述的尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒，其特征在于，导电部设置于所述底板的端部，所述储水膜用于对所述迁移膜提供水分。

5.根据权利要求1所述的尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒，其特征在于，所述动力源为气源，所述液体驱动件连通所述动力源并在所述迁移膜的一端产生正压驱动力或者负压驱动力；

所述储水膜包裹于所述迁移膜外，以在所述迁移膜内形成一个封闭空间。

6.根据权利要求1-5任一项所述的尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒，其特征在于，所述底板具有隔水部，所述隔水部将所述储水膜分隔成两段，其中一段上覆盖所述样品结合垫。

7.根据权利要求6所述的尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒，其特征在于，所述底板开设由通气腔，所述通气腔包裹于所述迁移膜和所述储水膜外，温控件将外部动力源提供的热源或者冷源连通导入所述通气腔中。

8.一种与权利要求1-7任一项所述的尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒适配的检测装置，包括形成有收纳腔的箱体，固定于所述收纳腔内的存储部、取样器和动力源及温控模块，及设置于所述收纳腔内的荧光检测器；

所述存储部用于固定权利要求1-7任一项所述的尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒和样品容器，所述取样器用于获取检测样品并将样品释放至所述检测条的样品处理垫上，所述动力源匹配连接于所述液体驱动件延伸至所述放置腔外的一端，所述温控模块用于控制所述迁移膜的温度，所述荧光检测部用于检测所述检测条中产生的荧光。

9.一种利用权利要求1-7任一项所述的尿胰蛋白酶原-2检测试剂盒和权利要求8所述的检测装置进行尿胰蛋白酶原-2的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、获取所述检测条，并将所述检测条通过所述固定件固定连接于所述放置腔内；

S2、利用所述取样器获取外部样品并将其释放至所述检测条的样品检测垫上；

S3、开启所述动力源、所述温控件和所述温控模块，所述动力源对所述液体驱动件提供所述检测条所需的液体驱动力并同时提供热源或者冷源，所述温控模块向所述温控件发出温控指令，所述温控件执行所述温控指令以向所述迁移膜内传递热量或者进行冷却，以完成样品液在所述迁移膜上的迁移和生化反应；

S4、关闭所述动力源、所述温控件和所述温控模块，将所述检测条从所述放置腔内取出，通过所述荧光检测部获取所述检测条中的生物荧光检测信息。

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