CN112891308A - 脂质体制剂 - Google Patents

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Abstract

一种脂质体制剂，其包含不饱和脂质和紫杉醇形成的脂质体，所述脂质体混悬在包含约0.01至0.1mM的有机酸和约10％(w/w)的海藻糖的水相中，所述不饱和脂质和紫杉醇的摩尔比约为97:3。本申请的脂质体制剂具有更强的储存稳定性，降低与其有关的药物等的储存、运输条件，同时更加延长与其有关的药物等的保质期，极大的节约了其应用成本。

Description

脂质体制剂
技术领域
本揭露提供可稳定储存的脂质体制剂。
背景技术
脂质体是由磷脂双层形成的闭合囊泡状结构。根据其结构的不同可以分为单层脂质体、多层脂质体和多室脂质体。脂质体可作为药物递送载体。目前市售已有多种脂质体药物产品，例如：Doxil、Ambisome、Marqibo和Onivyde等。脂质体可由阳离子、阴离子和/或中性脂质组成；采用脂质可以是饱和或不饱和脂质。
水解和氧化是脂质体制剂主要的降解途径。具体而言，连接脂肪酸和甘油骨架的酯官能基易于水解。除水解外，脂质过氧化是脂质的氧化降解。过氧化是脂质体制剂的一个严重问题。该过程通过自由基炼式反应机制进行。与其他自由基反应一样，反应包括三个主要步骤：起始、传播和终止。过氧化引发涉及从脂肪酸中提取氢原子以产生初始基。脂质脂肪酸中是否含有不饱和键与氢可以被提取的容易程度有关。相较于烷基的碳-氢键能(101千卡/摩尔)，烯丙基的碳-氢键能较低(88千卡/摩尔)。在传播步骤期间，脂质自由基可与氧反应生成过氧自由基。一旦形成，过氧自由基可以从另一种脂质分子提取氢原子，产生另一脂质自由基。终止是最后的脂质过氧化步骤，发生在自由基浓度变得非常低并导致耦合两个自由基形成一个非自由基的产物时。以脂质作为药物载剂时，脂质自由基亦有可能与药物活性成分反应而催化药物活性成分氧化。除此之外，过氧化会改变脂质体双层的物理性质。
目前已知的脂质体药物产品多数使用饱和脂质作为药物递送载体，例如Doxil使用1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷乙醇胺(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine,DSPE)、Onivyde使用1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷胆碱(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine,DSPC)和Ambisome使用1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷甘油(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoglycerol,DSPG)。相较于饱和脂质，不饱和脂质更容易氧化。以不饱和脂质作为药物递送载体需要更加注意氧化的问题，例如：干燥的脂质体制剂与空气接触发生氧化。因此，进一步研究干燥状态脂质体制剂的储存稳定性是必要的，特别是对于不饱和脂质。
在溶液中形成脂质体的脂质会进行水解。Vernooij等人对于阳离子脂质DOTAP和DOPE形成的脂质体进行的研究发现DOTAP在pH 6.4时最不易水解(Journal of ControlledRelease,2002.79(1-3):p.299-303)。此外，美国专利7,794,747描述了一种紫杉醇脂质体制剂，并提出紫杉醇脂质体在酸性环境下不易产生紫杉醇衍生物。然而，该专利并未提供脂质体脂质稳定性(水解)的测试结果。我们尝试依照美国专利7,794,747所教示在酸性环境下分析脂质体脂质稳定性，结果显示酸性环境下脂质含量下降，此结果与Vernooij等人所描述相符。因此，综合上述先前技术无法轻易得知兼顾脂质和紫杉醇两者稳定性的条件。
因为脂质、脂质水解产物、亲脂性活性成分或其衍生物皆有可能在溶液中形成不溶性微粒，我们尝试对紫杉醇脂质体制剂进行不溶性微粒数量分析。实际以柠檬酸缓冲液将紫杉醇脂质体制剂再水化，并进行不溶性微粒数量分析后发现部分紫杉醇脂质体制剂的不溶性微粒数量偏高。用于注射剂型，脂质体制剂所含不溶性微粒数量也是制剂的重要参数之一。因此，现有的紫杉醇脂质体制剂仍有改善的需求。
发明内容
针对现有技术中存在的技术问题，本发明提出了一种脂质体制剂，其包含不饱和脂质和紫杉醇形成的脂质体，所述脂质体混悬在包含约0.01至0.1mM的柠檬酸和约10％(w/w)的海藻糖的水相中，所述不饱和脂质和紫杉醇的摩尔比约为97:3。
如上所述的脂质体制剂，所述水相进一步包括0.1mM的氨基酸。
如上所述的脂质体制剂，所述氨基酸为甘氨酸、天冬氨酸或谷氨酸。
如上所述的脂质体制剂，所述柠檬酸缓冲液可由摩尔比为2:1至3:1的柠檬酸和柠檬酸盐混合而成。
如上所述脂质体制剂，所述不饱和脂质为至少包含两个碳-碳双键的不饱和脂质。
如上所述的脂质体制剂，其中所述不饱和脂质选自1,2-二油酰氧基-3-二甲基铵-丙烷(DODAP)、1,2-二油酰氧基-3-三甲基铵-丙烷(DOTAP)、N-[1-(2,3-二油酰氧基)丙基-N,N,N-三甲基铵(DOTMA)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷胆碱(DOPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷乙醇胺(DOPE)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷甘油(DOPG)或1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷-L-丝胺酸(DOPS)。
如上所述的脂质体制剂，所述不饱和脂质包含摩尔比为50:47的DOTAP和DOPC。
一种制备脂质体制剂的方法，该方法包括：
(a)将有机溶剂与紫杉醇和不饱和脂质混合形成有机相，所述不饱和脂质和紫杉醇的摩尔比为97:3；
(b)将海藻糖溶液与柠檬酸或柠檬酸缓冲液混合形成水相，所述水相包含约0.01至0.1mM的柠檬酸；
(c)将步骤(a)的有机相和步骤(b)的水相混合并均质化形成脂质体混悬液；
(d)将步骤(c)的脂质体混悬液过滤；
(e)对步骤(d)过滤后的脂质体混悬液行冷冻干燥脱水。
如上所述的方法，其中步骤(b)所述水相可进一步加入氨基酸，使所述水相包含约0.1mM的氨基酸。
如上所述的方法，其中步骤(b)加入的氨基酸为甘氨酸、天冬氨酸或谷氨酸。
如上所述的方法，其中步骤(b)所述的柠檬酸缓冲液可由摩尔比为2:1至3:1的柠檬酸和柠檬酸盐混合而成。
本申请的脂质体制剂具有更强的储存稳定性，降低与其有关的药物等的储存、运输条件，同时更加延长与其有关的药物等的保质期，极大的节约了其应用成本。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本申请的各个特定实施例在以下进行了足够详细的描述，使得具备本领域相关知识和技术的普通技术人员能够实施本申请的技术方案。应当理解，还可以利用其它实施例或者对本申请的实施例进行结构、逻辑或者电性的改变。
本文中出现的某些名词具有以下含义：
本文所用“脂质体”一词意指显微球形膜围绕载体(直径约50-2,000nm)。脂质体一词包含脂质双层围绕的任何隔室。脂质体也意指脂质载体。为了，脂质分子包含延长的非极性(疏水性)部分和极性(亲水性)部分形成脂质体。分子的疏水性和亲水性部分较佳的是位于延长分子结构的两端。此类脂质在水中分散时，会自发形成称为薄板(lamellae)的双层膜。薄板由两个单层脂质分子薄片组成，其非极性(疏水性)表面彼此相对，且其极性(亲水性)表面朝向水性介质。脂质形成的膜会围绕液相的一部分，其方式类似于细胞膜围绕细胞的内容物。由于脂质的立体形状及两亲性质，自行组合会导致形成脂质双层(膜)，其中疏水性烷基链彼此相对，而极性头基团朝向水相。这些膜会组织形成圆形载体，称为脂质体。
在一个实施方案中，脂质体可以由不饱和脂质、饱和脂质或其混合物制备。不饱和脂质是指在长链脂肪酸组分上含有碳-碳双键的脂质。在某些实施例中，不饱和脂质在脂质的长链脂肪酸组分上至少含有两个碳-碳双键。
在另一个实施方案中，脂质体可以由中性电荷脂质、阴离子脂质、阳离子脂质或其混合物制备。
上述脂质可选自1,2-二油酰氧基-3-二甲基铵-丙烷(1,2-dioleoyl-3-dimethylammonium-propane,DODAP)、1,2-二油酰氧基-3-三甲基铵-丙烷(1,2-dioleoyloxy-3-(trimethylammonium)propane，DOTAP)、N-[1-(2,3-二油酰氧基)丙基-N,N,N-三甲基铵(N-(1-(2,3-dioleyloxy)propyl)-N,N,N-trimethylammonium,DOTMA)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷胆碱(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine,DOPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷乙醇胺(1,2-dioleoylphosphatidylethanolamine，DOPE)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷甘油(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoglycerol,DOPG)或1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷-L-丝胺酸(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine,DOPS)。
在一个实施方案中，制备冻干制剂的方法包括：
(i)在第一期间内将包含脂质、亲脂性活性物质和稳定剂的液态制剂降温到第一温度，并在第二期间内维持第一温度，所述第一期间不大于2小时、1.5小时、1小时或0.5小时，第一温度为-40℃、-50℃、-60℃、-70℃或-80℃，第二期间为至少3小时、3.5小时、4小时4.5小时或5小时；
(ii)在第三期间内将温度压力分别调节至第二温度和第一压力，并在第四期间内维持第二温度和第一压力进行首次干燥，所述第三期间为至少0.5小时、1小时、2小时、2.5小时或3小时，第二温度为-25℃至-10℃或-20℃至-15℃，第一压力为0.1至1毫巴，第四期间为至少60小时、70小时、80小时、90小时、100小时、110小时、120小时或130小时；
(iii)在第五期间内将温度压力分别调节至第三温度和第二压力，并在第六期间内维持第三温度和第二压力进行二次干燥，所述第五期间为至少0.5小时、1小时、2小时、2.5小时或3小时，第三温度为15℃至25℃，第二压力为0.01至0.1毫巴，第六期间为至少10小时、12小时、15小时、18小时或20小时。
本文所用的“再水化”一词是指将冻干制剂(例如脂质体)溶解在稀释剂中以使冻干制剂分散在稀释剂中的过程。
本文的冻干制剂再水化后，脂质和亲脂性活性物质形成的复合物粒径不大于300nm。在某些实施例中，脂质和亲脂性活性物质形成的复合物粒径不大于250nm、200nm或150nm。
不溶性微粒(sub-visible particle)是小于人眼可见颗粒尺寸(约200μm)的物质，无法通过目视检查观察到。注射液中可能含有不溶性微粒，较大的微粒会阻塞口径小的血管或刺激凝血机制形成血栓。各国药典对静脉注射药物中的微粒含量进行了相关规定，以减低注射液中存在不溶性微粒的风险。例如USP<788>要求规定尺寸大于10μm的颗粒必须控制在6000个/容器以下，而颗粒大于25μm的颗粒必须在600个/容器以下。不溶性微粒可能是活性成分、活性成分衍生物、形成脂质体的脂质或脂质衍生物等物质。
平均粒径(在本文中称为Zave)和多分散指数(在本文中称为Pdi)可利用已知的方式测定，例如用光相关光谱法(动态光散射)。以光源照射纳米粒子溶液时，粒子会使光散射。藉由观察不同尺寸纳米粒子之布朗运动程度不同，其影响光散射程度不同，演算出集体性的平均粒度和多分散指数。多分散指数在用作粒子集合的粒度分布的量度。相关参数的计算定义在ISO标准文档13321:1996E中。本文所用冻干制剂再水化后其Pdi不大于0.5、0.6或0.7。
本文所用“约”一词描述数量数值，意指依据所指数值，最大±20％、±10％或±5％之平均偏差。
下列实例阐明本文提供的例示性方法。这些实例并未意图且不得推断为限制揭露范围。将可明显得知方法可用本文特别描述以外方式实施。本文就教示观点而言，可有众多修改及变化，且因此在揭露范围内。
实施例1脂质体在柠檬酸缓冲液中再水化
将有机溶剂与紫杉醇和不饱和脂质混合形成有机相，水相为海藻糖溶液。将有机相和水相混合并均质化形成脂质体混悬液制剂。将脂质体制剂进行冻干。脂质体以不同浓度的柠檬酸缓冲液再水化后，分析粒径、pH和每毫升大于1和10μm的不溶性微粒数量(表1-1)。另外，脂质体再水化后于25℃下放置24、48和120小时以HPLC测量紫杉醇(表1-2)和7-Epi-紫杉醇含量(表1-3)。
由表1-2和表1-3的结果可知紫杉醇脂质体在柠檬酸浓度愈高的环境(pH值愈低)可以在120小时内维持紫杉醇的稳定性，几乎不产生7-Epi-紫杉醇。然而，如表1-1所示，柠檬酸浓度愈高的环境反而有不溶性微粒增加的趋势。综合表1-1至1-3的结果，当柠檬酸的浓度为0.01至0.1mM时，可同时兼顾不溶性微粒的数量(小于1,000)和活性成分紫杉醇的稳定性。
表1-1柠檬酸缓冲液对不溶性微粒数量的影响
Figure BDA0002302621840000071
Figure BDA0002302621840000081
表1-2柠檬酸缓冲液对紫杉醇含量的影响
Figure BDA0002302621840000082
表1-3柠檬酸缓冲液对7-Epi-紫杉醇含量的影响
Figure BDA0002302621840000083
Figure BDA0002302621840000091
实施例2：甘氨酸/柠檬酸/海藻糖溶液制备脂质体
将有机溶剂与紫杉醇和不饱和脂质混合形成有机相，水相由海藻糖和甘氨酸混合，视情况再加入柠檬酸，形成含有0.1mM、1mM、10mM和100mM甘氨酸的水相。将有机相和水相混合并均质化形成脂质体混悬液，并将脂质体混悬液过滤后进行分析。冻干后进行再水化，再水化后0小时和24小时进行分析。粒径、pH和每毫升大于1、5、10μm的不溶性微粒数量分析结果如表2-1。当甘氨酸溶液浓度为0.1mM和1mM时，再水化后经过24小时每毫升大于1μm的不溶性微粒数量小于1,000。出乎意料地，同样是冻干并再水化(0小时)，加入甘氨酸的脂质体混悬液产生的不溶性微粒低于加入柠檬酸的脂质体混悬液(见实施例6-8)。当甘氨酸溶液浓度为10mM时，再水化后经过24小时每毫升大于1μm的不溶性微粒数量大於于1,000。当甘氨酸溶液浓度为100mM时，再水化后经过每毫升大于1μm的不溶性微粒数量大於于10,000。
如表2-1所示，尽管0.1mM至1mM的甘氨酸对于不溶性微粒有出乎预期的效果，但由表2-2和表2-3的结果可以看出甘氨酸不利于维持紫杉醇的稳定性。因此单独加入甘氨酸无法兼顾不溶性微粒的数量和活性成分紫杉醇的稳定性。
进一步在脂质体水相加入甘氨酸和柠檬酸进行测试，发现可以维持紫杉醇的稳定性。然而当水相含有1mM甘氨酸和1mM柠檬酸，和水相含有10mM甘氨酸和1mM柠檬酸时，产生的不溶性微粒数量大于10,000。出乎意料地，当水相含有0.1mM甘氨酸和0.1mM柠檬酸，产生的不溶性微粒数量显著降低。
表2-1甘氨酸/柠檬酸浓度与脂质体制剂稳定性关系
浓度 时间点 Z<sub>ave</sub> PdI pH 1μm 5μm 10μm
0.1mM甘氨酸 过滤后 163 0.16 5.4 8 5 2
0.1mM甘氨酸 0小时 181 0.56 5.5 118 11 2
0.1mM甘氨酸 24小时 182 0.48 5.3 810 8 0
1mM甘氨酸 过滤后 165 0.16 5.3 8 1 0
1mM甘氨酸 0小时 165 0.48 5.6 55 1 0
1mM甘氨酸 24小时 166 0.47 5.3 536 2 0
10mM甘氨酸 过滤后 165 0.17 5.0 5 0 0
10mM甘氨酸 0小时 172 0.50 5.3 205 1 0
10mM甘氨酸 24小时 174 0.51 5.1 2,255 27 1
100mM甘氨酸 过滤后 168 0.16 4.8 6 1 0
100mM甘氨酸 0小时 204 0.64 4.8 17,078 14 0
100mM甘氨酸 24小时 224 0.73 4.9 44,577 643 5
1mM甘氨酸+1mM柠檬酸 过滤后 167 0.16 3.4 252 14 2
1mM甘氨酸+1mM柠檬酸 0小时 252 0.77 3.5 42,639 213 5
1mM甘氨酸+1mM柠檬酸 24小时 275 0.83 3.5 12,703 578 91
10mM甘氨酸+1mM柠檬酸 过滤后 167 0.16 3.7 62 7 0
10mM甘氨酸+1mM柠檬酸 0小时 268 0.81 3.6 98,364 1,860 80
10mM甘氨酸+1mM柠檬酸 24小时 303 0.91 3.7 151,773 32,105 6,210
0.1mM甘氨酸+0.1mM柠檬酸 过滤后 172 0.16 4.7 12 8 2
0.1mM甘氨酸+0.1mM柠檬酸 0小时 287 0.83 4.6 318 15 0
0.1mM甘氨酸+0.1mM柠檬酸 24小时 275 0.78 4.6 754 8 0
表2-2甘氨酸/柠檬酸对紫杉醇含量的影响
Figure BDA0002302621840000111
表2-3甘氨酸/柠檬酸对7-Epi-紫杉醇含量的影响
Figure BDA0002302621840000112
实施例3油酸/海藻糖溶液制备脂质体
将有机溶剂与紫杉醇和不饱和脂质混合形成有机相，水相由海藻糖溶液和0.1mM和1mM的油酸溶液混合形成。将有机相和水相混合并均质化形成脂质体混悬液，并将脂质体混悬液过滤后进行分析。冻干后进行再水化，再水化后0小时和24小时进行分析。粒径、pH和每毫升大于1、5、10μm的不溶性微粒数量分析结果如表3。当油酸溶液浓度为0.1mM和1mM时，再水化后每毫升大于1μm的不溶性微粒数量大于1,000。
表3油酸浓度与脂质体制剂稳定性关系
浓度 时间点 Z<sub>ave</sub> PdI pH 1μm 5μm 10μm
0.1mM 过滤后 165 0.19 4.27 72 4 0
0.1mM 0小时 173 0.48 4.34 2,701 65 14
0.1mM 24小时 172 0.47 4.34 9,581 613 39
1mM 过滤后 163 0.18 5.13 46 3 0
1mM 0小时 172 0.45 5.25 4,204 41 5
1mM 24小时 180 0.48 5.24 22,046 677 8
实施例4谷氨酸/海藻糖溶液制备脂质体
将有机溶剂与紫杉醇和不饱和脂质混合形成有机相，水相由海藻糖溶液和0.1mM和1mM的谷氨酸溶液混合形成。将有机相和水相混合并均质化形成脂质体混悬液，并将脂质体混悬液过滤后进行分析。冻干后进行再水化，再水化后0小时和24小时进行分析。粒径、pH和每毫升大于1、5、10μm的不溶性微粒数量分析结果如表4。
表4谷氨酸浓度与脂质体制剂稳定性关系
Figure BDA0002302621840000121
Figure BDA0002302621840000131
实施例5天冬氨酸/海藻糖溶液制备脂质体
将有机溶剂与紫杉醇和不饱和脂质混合形成有机相，水相由海藻糖溶液和0.1mM和1mM的天冬氨酸溶液混合形成。将有机相和水相混合并均质化形成脂质体混悬液，并将脂质体混悬液过滤后进行分析。冻干后进行再水化，再水化后0小时和24小时进行分析。粒径、pH和每毫升大于1、5、10μm的不溶性微粒数量分析结果如表5。当天冬氨酸溶液浓度为0.1mM时，再水化后每毫升大于1μm的不溶性微粒数量小于1,000。出乎意料地，同样是冻干并再水化(0小时)，加入天冬氨酸的脂质体混悬液产生的不溶性微粒低于加入柠檬酸的脂质体混悬液(见实施例6-8)。
表5天冬氨酸浓度与脂质体制剂稳定性关系
溶液组成 时间点 Z<sub>ave</sub> PdI pH 1μm 5μm 10μm
0.1mM天冬氨酸 过滤后 162 0.16 4.70 24 0 0
0.1mM天冬氨酸 0小时 182 0.53 4.70 34 2 1
0.1mM天冬氨酸 24小时 170 0.47 4.80 276 7 0
1mM天冬氨酸 过滤后 158 0.17 4.00 38 3 0
1mM天冬氨酸 0小时 168 0.49 3.90 324 1 0
1mM天冬氨酸 24小时 177 0.51 4.00 5,909 61 1
实施例6柠檬酸/海藻糖溶液制备脂质体
将有机溶剂与紫杉醇和不饱和脂质混合形成有机相，水相由海藻糖溶液和0.1mM和1mM的柠檬酸溶液混合形成。将有机相和水相混合并均质化形成脂质体混悬液，并将脂质体混悬液过滤后进行分析。冻干后进行再水化，再水化后0小时和24小时进行分析。粒径、pH和每毫升大于1、5、10μm的不溶性微粒数量分析结果如表6。当柠檬酸溶液浓度为0.1mM时，再水化后每毫升大于1μm的不溶性微粒数量小于1,000。
表6柠檬酸浓度与脂质体制剂稳定性关系
浓度 时间点 Z<sub>ave</sub> PdI pH 1μm 5μm 10μm
0.1mM 过滤后 162 0.15 4.1 - - -
0.1mM 0小时 148 0.36 4.2 755 45 5
0.1mM 24小时 147 0.29 4.2 832 68 3
1mM 过滤后 167 0.14 3.3 10,433 101 5
1mM 0小时 180 0.51 3.4 15,274 240 4
1mM 24小时 - - - - - -
实施例7柠檬酸钠/海藻糖溶液制备脂质体
将有机溶剂与紫杉醇和不饱和脂质混合形成有机相，水相由海藻糖溶液和0.1mM和1mM的柠檬酸钠溶液混合形成。将有机相和水相混合并均质化形成脂质体混悬液，并将脂质体混悬液过滤后进行分析。冻干后进行再水化，再水化后0小时和24小时进行分析。粒径、pH和每毫升大于1、5、10μm的不溶性微粒数量分析结果如下表7。当柠檬酸钠溶液浓度为0.1mM和1mM时，再水化后每毫升大于1μm的不溶性微粒数量大于1,000。
表7柠檬酸钠浓度与脂质体制剂稳定性关系
Figure BDA0002302621840000141
Figure BDA0002302621840000151
实施例8柠檬酸缓冲液/海藻糖溶液制备脂质体
将有机溶剂与紫杉醇和不饱和脂质混合形成有机相，水相由海藻糖溶液和0.1mM和1mM的柠檬酸缓冲液混合形成。其中柠檬酸缓冲液中柠檬酸和柠檬酸钠的摩尔比为2:1。将有机相和水相混合并均质化形成脂质体混悬液，取出部分上述混悬液制剂进行粒径、pH和每毫升大于1、5、10μm的不溶性微粒数量分析及脂质含量分析。结果如表8-1所示，DOTAP和DOPC在酸性环境下(1mM的柠檬酸)会进行水解。
脂质体混悬液冻干后进行再水化，再水化后0小时和24小时进行分析。粒径、pH和每毫升大于1、5、10μm的不溶性微粒数量分析结果如表8-2。当柠檬酸缓冲液浓度为0.1mM时，再水化后每毫升大于1μm的不溶性微粒数量小于1,000。当柠檬酸缓冲液浓度为1mM时，再水化后每毫升大于1μm的不溶性微粒数量大于10,000。
表8-1柠檬酸缓冲液(1mM，柠檬酸:柠檬酸钠＝2:1)对脂质含量的影响
Figure BDA0002302621840000152
Figure BDA0002302621840000161
表8-2柠檬酸缓冲液浓度与脂质体制剂稳定性关系
浓度 时间点 Z<sub>ave</sub> PdI pH 1μm 5μm 10μm
0.1mM 过滤后 167 0.14 4.4 - - -
0.1mM 0小时 167 0.50 4.6 826 48 2
0.1mM 24小时 155 0.4 4.5 889 33 3
1mM 过滤后 171 0.15 3.9 - - -
1mM 0小时 187 0.46 3.9 91,315 991 19
1mM 24小时 - - - - - -
上述实施例仅供说明本发明之用，而并非是对本发明的限制，有关技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明范围的情况下，还可以做出各种变化和变型，因此，所有等同的技术方案也应属于本发明公开的范畴。

Claims (12)

1.一种脂质体制剂，其包含不饱和脂质和紫杉醇形成的脂质体，所述脂质体混悬在包含约0.01至0.1mM的柠檬酸或檬酸缓冲液和约10％(w/w)的海藻糖的水相中，所述不饱和脂质和紫杉醇的摩尔比约为97:3。
2.根据权利要求1所述的脂质体制剂，所述水相进一步包括0.1mM的氨基酸。
3.根据权利要求2所述的脂质体制剂，所述氨基酸为甘氨酸、天冬氨酸或谷氨酸。
4.根据权利要求1或2所述的脂质体制剂，所述柠檬酸缓冲液可由摩尔比为2:1至3:1的柠檬酸和柠檬酸盐混合而成。
5.根据权利要求1或2所述脂质体制剂，所述不饱和脂质为至少包含两个碳-碳双键的不饱和脂质。
6.根据权利要求1或2所述的脂质体制剂，其中所述不饱和脂质选自1,2-二油酰氧基-3-二甲基铵-丙烷(DODAP)、1,2-二油酰氧基-3-三甲基铵-丙烷(DOTAP)、N-[1-(2,3-二油酰氧基)丙基-N,N,N-三甲基铵(DOTMA)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷胆碱(DOPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷乙醇胺(DOPE)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷甘油(DOPG)或1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷-L-丝胺酸(DOPS)。
7.根据权利要求1或2所述的脂质体制剂，所述不饱和脂质包含摩尔比为50:47的DOTAP和DOPC。
8.根据权利要求1或2所述的脂质体制剂，其中大于1μm的不溶性微粒的数量少于1,000个/毫升。
9.一种制备脂质体制剂的方法，该方法包括：
(a)将有机溶剂与紫杉醇和不饱和脂质混合形成有机相，所述不饱和脂质和紫杉醇的摩尔比为97:3；
(b)将海藻糖溶液与柠檬酸或柠檬酸缓冲液混合形成水相，所述水相包含约0.01至0.1mM的柠檬酸；
(c)将步骤(a)的有机相和步骤(b)的水相混合并均质化形成脂质体混悬液；
(d)将步骤(c)的脂质体混悬液过滤；
(e)对步骤(d)过滤后的脂质体混悬液行冷冻干燥脱水。
10.根据权利要求9所述的方法，其中步骤(b)所述水相可进一步加入甘氨酸，使所述水相包含约0.1mM的氨基酸。
11.根据权利要求10所述的方法，所述氨基酸为甘氨酸、天冬氨酸或谷氨酸。
12.根据权利要求9或10所述的方法，其中步骤(b)所述的柠檬酸缓冲液可由摩尔比为2:1至3:1的柠檬酸和柠檬酸盐混合而成。
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