CN1128622C - 治疗艾滋病的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗艾滋病病毒的药物组合物。它包括有效量的海藻硫酸多糖和AZT。该药物组合物对艾滋病有显著的疗效，且副作用少。

Description

治疗艾滋病的药物组合物

本发明涉及一种治疗艾滋病的药物组合物。

许多病毒性疾病仍严重威胁着人类的生命安全，其中艾滋病病毒(HIV)引起的艾滋病(AIDS)是一种传染性强且危害性极大的传染病，其致病性和致死性非常强，目前尚无有效的治疗药物。目前，全世界有4000万感染者，我国现有感染者50万人，如果控制不当，本世纪末可能达到100万人，到2010年会达到1000万人。现用于AIDS治疗的药物大多为化学药物，虽然可以有效地缓解症状，延长病程，但仍存在很多问题：不能彻底清除体内病毒，停药反弹，易产生耐药性，副作用大及每疗程10余万元的昂贵费用，使得这些药物的应用受到很大限制。所以低毒、有效和价廉的天然药物重新被人们所推崇，充分利用国内的自然资源，积极发展抗艾滋病的药物将有利于中国和广大发展中国家(拥有全球90％以上的HIV感染者)HIV感染者的生存。

现代药用海藻多达百余种，具有清热解毒、利水消肿、补肾养心、活血化淤和消食驱虫等功效。海藻中含有多种有效成分，其中，硫酸酯多糖是研究较为深入，同时也是最赋有实用价值的成分。海藻多糖是一种具有特殊结构的复合糖，含有硫酸酯基团的蛋白多糖。以糖类为基础的药物研究有巨大的潜力，糖类分子在细胞识别、信号传递、细胞间相互作用等方面起重要作用，糖部分决定了整个分子的功能。糖类药物在抗感染，抗癌，抗病毒及抗类风湿关节炎等方面均有不同程度的开发与应用。多糖中的结合蛋白组分发挥抑制病毒繁殖和杀灭病毒作用，是多位点抗病毒的分子基础。

对海藻硫酸多糖的抗HIV病毒作用，国内外已有报道(郑永唐，贲昆龙，金善炜，17种植物中蛋白质提取物的抗HIV活性，中国病毒学，1998；13：312-24；Witvrouw M and De Clercq E.Sulfated polysaccharides extractedfrom sea algae as potential antiviral drugs.Gen Pharmacol，1997；29：497-511；Witvrouw M，Este JA，Mateu MQ，et al.Activity of a sulfated polysaccharidesextracted from the red seaweed aghardhiella tenera against humanimmunodeficiency virus and enveloped viruses.Antiviral chemistry&chemotherapy，1994；5：297-303)。但是，对其抗病毒作用及其药理药效，尚无完整和深入的研究，缺乏确凿的实验资料。

叠氮脱氧胸苷(Zidovudine，AZT)是美国FDA批准的第一个用于治疗艾滋病的药物。用AZT后，虽可在一定程度上提高患者的生活质量，但总的疗效还不理想，严重副作用较多。

本发明的发明人在研究中发现海藻硫酸多糖与AZT联合用药具有意想不到的显著的抗HIV协同作用。

本发明的目的是提供一种对艾滋病具有明显疗效、毒副作用较少的药物组合物。

本发明的目的药物组合物包含有效量的海藻硫酸多糖和AZT，其中海藻硫酸多糖与AZT的重量比为70∶15 。

本发明的海藻硫酸多糖(Sulfated polysaccharides from seaweeds，SPS)是从褐藻中提取的一种含硫酸酯基团的蛋白质多糖，主要理化特征为：易溶于水，溶解度≥30％，白色或黄色多晶粉末，具特有的香味；SO₄ ^2-含量为20±5％，岩藻糖含量为20±5％，蛋白质含量10-18％。

本发明的海藻硫酸多糖提取工艺是由本发明的发明人独立研究开发的，它包括以下步骤：

1.选料：可选国产优质淡干海藻(也可使用巨藻)，主要产地，我国北

方海域；

2.浸泡和清洗：常温下浸泡并清洗，严格控制浸泡和清洗的时间；

3.粉碎；

4.水提；

5.低浓度醇沉；

6.高浓度醇沉，获得粗产品；

7.纯化，获得精制产品。

该制备方法条件温和，不破坏海藻藻体所含的各种天然营养成份，操作简单，提高了海藻综合利用程度，产率较高(2％)，成本较低，适合于工业化生产。

本发明的药物组合物可制成片剂、丸剂、针剂和胶囊(软、硬)。该药品每剂含海藻硫酸多糖250mg，遵医嘱口服。每日用量750mg～1500mg，可分三次给予，每次250mg～500mg。

参照中华人民共和国国家标准GB15193.3-94、GB15193.5-94、GB15193.8-94、GB15193.7-94、GB15193.4-94、GB15193.14-94和GB15193.13-94，进行大鼠急性毒性试验、小鼠急性毒性试验、小鼠骨髓微核试验(雄性)、小鼠骨髓微核试验(雌性)、小鼠精子畸形试验、小鼠睾丸染色体畸变试验、Ames试验、大鼠系统致畸试验和大鼠30天喂养试验，结果显示大、小鼠LD₅₀＞21.50g/kg；胶囊实验组与溶剂组比较，小鼠骨髓细胞微核率无显著差异；胶囊实验组与溶剂组比较，小鼠精子畸形率无显著性差异；胶囊实验组与溶剂组比较，小鼠初级精母细胞染色体畸变率，无显著差异；Ames试验，实验组回变菌落数小于或等于自然回变菌落数2倍；大鼠致畸试验中，实验组与溶剂组比较，孕鼠孕期体重增重和生殖胚胎检查、胎鼠生长发育和骨骼畸形检查等指标差异不显著；大鼠30天喂养，与基础饲料对照组比较，临床检查：脏器称量、血液生化学检查、血液学检查、病理组织学检查，均无显著性差异。该结果表明海藻硫酸多糖属无毒，无遗传毒性和无致畸作用物质。

大鼠口服海藻硫酸多糖胶囊(4000mg/kg)，一天2次，连服10天，在清醒状态下观察其精神神经系统、心血管系统和呼吸系统，结果均无异常表现。

经本实验室科技人员和志愿受试者工30人试服，海藻硫酸多糖对消化系统、神经系统、呼吸系统及循环系统均不引起不良变化，多数人反映精力旺盛，食欲增加。5例身体虚弱、易患感冒的受试者反映感冒次数明显减少

下面用实施例来详细描述本发明，但这些实施例不得理解为任何意义上的对本发明的限制。

实施例1：海藻硫酸多糖的制备

100kg海藻，经浸泡、清洗、粉碎，加水800kg，90-100℃萃取3次，3.5h。取上清液减压浓缩到25L，在30％的乙醇条件下沉淀，再取上清液，减压蒸发至10L，加入85L 95％的乙醇中，过滤，得粗产品。60℃干燥，纯化，100目粉碎。

实施例2：抗HIV海藻硫酸多糖组合物的制备

该组合物包括：

海藻硫酸多糖         70％

AZT                  15％

维生素C              15％

制备方法：取海藻硫酸多糖250公斤、AZT 50公斤、维生素C AZT 50公斤，采用本技术领域中的常规技术制成100万颗片剂和胶囊。其中，胶囊350mg/粒、350mg/片，一天2粒(片)。

实施例3：海藻硫酸多糖组合物抗HIV作用

1.海藻硫酸多糖抗HIV作用

SPS对MT-4细胞的毒性试验：SPS用培养液配制成20mg/ml溶液，倍比稀释后加入96孔细胞培养板，每浓度3孔，每3天换同浓度药液，设无药物细胞对照组。将细胞与药物在37℃培养一周，用MTT法测定细胞存活率。

SPS对病毒吸附的抑制作用：在病毒感染细胞的同时加入SPS，设阴性和阳性对照，4℃放置1小时，洗净，去除未吸附的病毒和SPS，将细胞再悬浮于培养基，37℃培养一周，观察细胞病变，测定细胞活性，收集上清测定P24抗原。

SPS对HIV逆转录酶活性的抑制作用：分离HIV-l病毒颗粒，取20ul，加入10ul病毒裂解液(0.5％Triton X-100，0.8M NaCl，0.5M苯甲磺酰氟，20％(v/v)甘油，50mM Tris-HCl pH7.8)，以裂解上清中病毒颗粒，释放出其中的逆转录酶(RT)。在4℃冰浴条件下，加入20LSPS(20、4、0.8、0.16、0.032、0.0064mg/ml)，然后加入801的反应混合物，反应混合物的配法如下：0.05M Tris-HCl(pH8.4)，2mM DTT，100mM KCl，10mM MgCl2，0.1％TritonX-100，1.5g Poly[dA]-[dT]12-18，1.5Ci 3H-dTTP。将上述反应体系置37℃反应2小时，则RT的活性可通过3H-dTTP掺入PolyA-oligodT12-18模板引物的多少来表示。反应结束后，加入3ml冰冷的10％三氯乙酸沉淀DNA，沉淀的DNA收于玻璃纤维素膜上，然后以5％的三氯乙酸及70％的乙醇洗膜，将膜烘干，加入8ml闪烁液(含0.5％PPO，0.015％POPOP的二甲苯溶液)液闪计数仪测定cpm，计算抑制率。

SPS对病毒复制的抑制作用：以200TCID50HIV-1(SF33)感染MT-4细胞(6×105/ml)，细胞与病毒容积比为1∶1，37℃，孵育2小时，洗净，弃上清，将感染细胞再悬浮于培养基，在SPS或SPS+AZT存在下培养1周或4周，进行各项指标的检测。

     SPS与AZT联合用药对HIV的抑制作用

              观察指标              培养时间药物

              (％)         一周    二周    三周    四周SPS               细胞存活率   106.2   104.0   105.5   101.4(200μg/ml)       P24抑制率    35.5    60.3    90.3    95.3AZT               细胞存活率   87.2    70.2    49.6    46.7(0.5μg)          P24抑制率    99.0    99.3    99.1    98.9SPS+AZT           细胞存活率   107.5   108.1   97.8    95.5(100+0.25μg/ml)  P24抑制率    98.0    99.0    99.3    100.0

Claims (8)

1.一种治疗艾滋病的药物组合物，包括有效量的海藻硫酸多糖和叠氮脱氧胸苷，其中海藻硫酸多糖和叠氮脱氧胸苷的重量百分比为70∶15。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所说的海藻硫酸多糖为褐藻硫酸多糖。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所说的海藻硫酸多糖水溶解度大于或等于30％，为白色或黄色多晶，有芳香味，SO₄ ^2-含量为20±5％，岩藻糖含量为20±5％，蛋白质含量为10～18％。

4.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物为片剂形式。

5.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物为胶囊形式。

6.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物为丸剂形式。

7.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物为针剂形式。

8.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还包括维生素C。