CN112816710A - 流动供给缓冲液的蛋白转印方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及蛋白转印方法领域，尤其是流动供给缓冲液的蛋白转印方法。该方法的步骤为：A、凝胶上设有穿孔，穿孔内设有蛋白，将阳极板、聚合物膜、海绵块一、电泳后的凝胶、海绵块二、阴极板依次堆叠固定在一起；B、然后将阳极液从海绵块一顶部灌入，从海绵块一底部流出，将阴极液从海绵块二顶部灌入，从海绵块二底部流出；阳极液与阴极液的体积比为1:1；阳极液与阴极液通过泵体持续供液。本发明的有益效果是，该发明通过连续供液的方式使得阳极液和阴极液进行持续流动，从而获得散热的效果。并且通过将阳极液与阴极液分离可带来高电流效果，通过阴极液与阳极液分开的方式进行转膜。
Description
技术领域
本发明涉及蛋白转印方法领域，尤其是流动供给缓冲液的蛋白转印方法。
背景技术
Western Bolt技术被称为蛋白免疫印迹技术，其全部过程包括，首先进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳后的凝胶进行蛋白转印（转膜），蛋白条带会转移到一张聚合物膜上，再由膜进行抗体孵育，孵育完毕进行显影。其中蛋白转印（转膜）技术为其中重要的一步。
现有的转印技术分为湿式，半干式，干式。
半干式转印及是将海绵-滤纸-膜-丙烯酰胺凝胶-滤纸-海绵的复合物，夹入板式电极之间，在没有缓冲液补充的情况下进行转膜。
相对于普通的半干转系统而言，缓冲液是在一个封闭的体系中完成转膜的，
它通过将凝胶和膜的夹层放置在浸泡过转移缓冲液的吸水介质之间进行转移，转膜液的体系采用阴极液与阳极液分开的方式进行转膜，以此带来在低电压下的高电流效果。
但随之产生的问题是，在高电流下系统的发热十分严重，而且没有有效的降温手段。
发明内容
为了克服现有的系统发热严重的不足，本发明提供了流动供给缓冲液的蛋白转印方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种流动供给缓冲液的蛋白转印方法，该方法的步骤为：
A、凝胶上设有穿孔，穿孔内设有蛋白，将阳极板、聚合物膜、海绵块一、电泳后的凝胶、海绵块二、阴极板依次堆叠固定在一起；
B、然后将阳极液从海绵块一顶部灌入，从海绵块一底部流出，将阴极液从海绵块二顶部灌入，从海绵块二底部流出；阳极液与阴极液的体积比为1:1；阳极液与阴极液通过泵体持续供液；
C、阳极板与阴极板通电之后，使得阳极板与阴极板之间实现均匀电场，在凝胶和聚合物膜横截面上通过电流，让带负电荷的蛋白由阴极板方向向阳极板转移，受到聚合物膜的有效截留而由凝胶转印到聚合物膜上。
根据本发明的另一个实施例，进一步包括所述阳极液的各组分重量配比为：三羟基甲氨基甲烷1-2.5%、甲醇10-20%、水79-87.5%。
根据本发明的另一个实施例，进一步包括所述阴极液的各组分重量配比为：0-1%甘氨酸、0.01%-0.5%三羟甲基氨基甲烷、0.01%-0.1% 乙二胺四乙酸二钠、0.01%-0.1%十二烷基硫酸钠、10-20%甲醇、水79.97-88.3%。
根据本发明的另一个实施例，进一步包括步骤C中，阳极板与阴极板通电电源的电压为20-300v，电流为200-2000mA。
根据本发明的另一个实施例，进一步包括海绵块一上方设有阳极液流道，海绵块二上方设有阴极液流道，阳极液流道和阴极液流道均由数个直线流道组成。
本发明的有益效果是，该发明通过连续供液的方式使得阳极液和阴极液进行持续流动，从而获得散热的效果。并且通过将阳极液与阴极液分离可带来高电流效果，通过阴极液与阳极液分开的方式进行转膜。
具体实施方式
一种复合填料改性尼龙的制备方法，该制备方法的步骤为：
一种流动供给缓冲液的蛋白转印方法，该方法的步骤为：
A、凝胶上设有穿孔，穿孔内设有蛋白，将阳极板、聚合物膜、海绵块一、电泳后的凝胶、海绵块二、阴极板依次堆叠固定在一起；
B、然后将阳极液从海绵块一顶部灌入，从海绵块一底部流出，将阴极液从海绵块二顶部灌入，从海绵块二底部流出；阳极液与阴极液的体积比为1:1；阳极液与阴极液通过泵体持续供液；
C、阳极板与阴极板通电之后，使得阳极板与阴极板之间实现均匀电场，在凝胶和聚合物膜横截面上通过电流，让带负电荷的蛋白由阴极板方向向阳极板转移，受到聚合物膜的有效截留而由凝胶转印到聚合物膜上。
阳极液的各组分重量配比为：三羟基甲氨基甲烷1-2.5%、甲醇10-20%、水79-87.5%。
阴极液的各组分重量配比为：0-1%甘氨酸、0.01%-0.5%三羟甲基氨基甲烷、0.01%-0.1% 乙二胺四乙酸二钠、0.01%-0.1%十二烷基硫酸钠、10-20%甲醇、水79.97-88.3%。
步骤C中，阳极板与阴极板通电电源的电压为20-300v，电流为200-2000mA。
海绵块一上方设有阳极液流道，海绵块二上方设有阴极液流道，阳极液流道和阴极液流道均由数个直线流道组成。这样可以保证阳极液和阴极液可以从上而下渗透海绵时保持均匀。
本发明是阴极液和阳极液可以分别存留于不同的洗液介质，不会造成很大程度的混合，同时由于体系的液体体积较少，可以承受更大的电流。在大电流下可以缩短转印时间。
由于电极之间的距离被减到最小，产生了一个强电场，从而可快速转印。本申请的另一个优点是，凝胶两边使用不同的缓冲液（阳极液和阴极液）——一边促进蛋白从凝胶转移到膜上，另一边促进蛋白在膜上停留。
Claims (5)
1.一种流动供给缓冲液的蛋白转印方法，其特征是，该方法的步骤为：
A、凝胶上设有穿孔，穿孔内设有蛋白，将阳极板、聚合物膜、海绵块一、电泳后的凝胶、海绵块二、阴极板依次堆叠固定在一起；
B、然后将阳极液从海绵块一顶部灌入，从海绵块一底部流出，将阴极液从海绵块二顶部灌入，从海绵块二底部流出；阳极液与阴极液的体积比为1:1；阳极液与阴极液通过泵体持续供液；
C、阳极板与阴极板通电之后，使得阳极板与阴极板之间实现均匀电场，在凝胶和聚合物膜横截面上通过电流，让带负电荷的蛋白由阴极板方向向阳极板转移，受到聚合物膜的有效截留而由凝胶转印到聚合物膜上。
2.根据权利要求1所述的流动供给缓冲液的蛋白转印方法，其特征是，所述阳极液的各组分重量配比为：三羟基甲氨基甲烷1-2.5%、甲醇10-20%、水79-87.5%。
3.根据权利要求1所述的流动供给缓冲液的蛋白转印方法，其特征是，所述阴极液的各组分重量配比为：0-1%甘氨酸、0.01%-0.5%三羟甲基氨基甲烷、0.01%-0.1% 乙二胺四乙酸二钠、0.01%-0.1%十二烷基硫酸钠、10-20%甲醇、水79.97-88.3%。
4.根据权利要求1所述的流动供给缓冲液的蛋白转印方法，其特征是，步骤C中，阳极板与阴极板通电电源的电压为20-300v，电流为200-2000mA。
5.根据权利要求1所述的流动供给缓冲液的蛋白转印方法，其特征是，海绵块一上方设有阳极液流道，海绵块二上方设有阴极液流道，阳极液流道和阴极液流道均由数个直线流道组成。
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