CN112789030A - 肽抑制剂的药物制剂 - Google Patents

Abstract

本文描述了适合用于制备包含免疫调节性肽抑制剂的药物制剂的药物产品。本文描述了包含免疫调节性肽抑制剂的药物制剂。本文也描述了通过施用包含免疫调节性肽抑制剂的药物制剂改善、抑制、治疗癌症或减轻其症状的方法。

Description

肽抑制剂的药物制剂

相关申请

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领域

本文中的实施方案涉及包含免疫调节性肽的药物产品和药物制剂以及使用它们的方法。

背景

免疫系统被精细调整以检测并根除外来分子，并且同时避免可能引起正常组织的破坏的过度反应，所述正常组织的破坏引起自身免疫或慢性炎性疾病。特异性免疫应答的启动是在效应子功能的活化(诸如，细胞因子的释放、特异性抗体的产生和/或细胞的细胞毒性活性)中达到极点的事件的协调有致的链。

尽管数据指示免疫系统对于癌症控制是非常重要的(Dunn GP，等人，Immunity.2004 21：137-48.,Galon J,等人，Science.2006 313：1960-4.,KoebelCM,等人,Nature.2007 450：903-7，Clinchy B，等人，Cancer.2007 109：1742-9，Teng MW，等人，JLeukoc Biol.2008 84：988-93)，但是恶性肿瘤继续生长并且免疫疗法的效力是非常差的，客观缓解率为10-20％。这个明显矛盾可能有几个原因，例如，肿瘤避免免疫系统的识别(由于肿瘤抗原是弱的自体抗原)、差的抗原呈递(由TAP和MHC I和II的下调)或耐受性或癌症相关免疫抑制的诱导。不利的肿瘤内环境的影响被来自动物实验(Perdrizet GA，等人，JExp Med.1990；171：1205-20.，Yu P，等人，J Exp Med.2005 201：779-91.)和人肿瘤(Gajewski TF，等人，J Immunother.2006 29：233-40,Whiteside TL,Oncogene.2008 27：5904-12)的结果证实。

不同类型的免疫抑制细胞、调节性T-细胞、未成熟的树突细胞(iDC)、肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)以及骨髓衍生的抑制细胞(MDSC)可以在癌症相关的免疫抑制中实质性发挥功能。免疫平衡通常倾向于以细胞因子(诸如IL-4、IL-10和PGE2)为特征的Th2优势。另外，其它的免疫抑制机制(诸如血清阻断因子、循环的免疫复合物、增强的IL-1Ra产生以及增强的肿瘤内蛋白水解活性)可以在癌症相关的免疫抑制中起作用。

在研究癌症患者中白介素-6(IL-6)的诱导机制时，发现了从血清白蛋白衍生出的免疫调节性肽序列(参见例如，美国专利号7,960,126；8,110,347；和8,110,347；以及,美国公开号2010/0323370,和PCT公开号WO 2016/144650)，它们中的每一篇特此明确地通过引用整体并入)。白介素-2(IL-2)在免疫应答的起始和活化以及它的诱导淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK细胞)、T-细胞增殖和细胞毒性的能力中发挥重要作用。几篇报道已经显示，来自癌症患者的外周血单核细胞(PBMC)具有减少的合成IL-2(Wanebo HJ,等人,Cancer.198657：656-62,Mantovani,G.，等人，Diagn.Clin.Immunol.1987 5：104-111，Lauerova L，等人,Neoplasma 1999 46:141-149)和对IL-2做出应答(Tsubono M,等人,J Clin LabImmunol 1990 33:107-115,Pellegrini P,等人,Cancer Immunol Immunother 1996 42:1-8)的能力。来自肿瘤外植体的可溶性产物或来自癌症患者的血清可以抑制细胞因子产生、抑制IL-2受体表达(Botti C,等人,Intl J Biol Markers 1998 13:51-69,LauerovaL,等人,Neoplasma 1999 46:141-149)和/或降低在正常T淋巴细胞中的增殖能力(BottiC,等人,Intl J Biol Markers 1998 13:51-69)。

整联蛋白是跨膜糖蛋白的一个超家族，主要在介导细胞-细胞和细胞基质相互作用的白细胞上发现。整联蛋白在免疫调节中发挥重要作用，同样，尤其是αLβ2(白细胞功能相关分子-1,LFA-1)对于免疫应答的起始和调节、炎性细胞的组织募集和迁移以及淋巴细胞的细胞毒性活性是至关重要的(Hogg N,等人,J Cell Sci.2003 116:4695-705,GiblinPA,等人,Curr Pharm Des.2006 12:2771-95,Evans R,等人,Cell Sci.2009 122:215-25)。另外，LFA-1参与对白介素-2的增殖应答(Vyth-Dreese FA，Eur J Immunol.1993 12:3292-9)，并且白蛋白的一些片段与LFA-1和/或IL-2受体结合，从而调节通过这些受体介导的功能特性，包括免疫细胞增殖(参见美国公开号2011/0262470，其特此明确地通过引用整体并入)。

发明内容

选项1包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：包含第一溶液的药物产品，所述第一溶液包含溶解在所述第一溶液中的分离的包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)的肽，所述第一溶液具有小于7或约小于7的pH和亚等渗摩尔渗透压浓度。所述药物产品可以包含含有张度剂和碱的第二溶液，其中所述第一溶液和第二溶液当彼此组合时产生等渗凝胶，且其中所述等渗凝胶包含至少0.2mg/ml或约至少0.2mg/ml的浓度的分离的肽和6.5-7.5或约6.5-7.5的pH。

选项2包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1的药物产品，其中所述第一溶液基本上不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒，且其中所述第二溶液基本上不含有大于0.2μM或大于约0.2μM直径的颗粒。

选项3包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-2中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液包含小于或等于10mM NaCl或小于或等于约10mM NaCl，但非零。

选项4包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-2中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液不包含NaCl。

选项5包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-4中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液进一步包含具有相当于1.5mM或约1.5mM乙酸钠或更低但非零的缓冲容量的缓冲液。

选项6包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-4中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液进一步包含小于或等于1.5mM或小于或等于约1.5mM或更低但非零的浓度的乙酸钠。

选项7包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-4中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液不包含缓冲液。

选项8包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-7中的任一项的药物产品，其中所述张度剂是NaCl，且其中所述第二溶液为凝胶配置以包含100mM-120mM NaCl或约100mM-120mM NaCl。

选项9包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-8中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液基本上不含有凝胶。

选项10包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-9中的任一项的药物产品，其中所述溶解在所述第一溶液中的分离的肽基本上不呈β-折叠构象。

选项11包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-11中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液为凝胶配置以包含至少0.4mg/ml或至少约0.4mg/ml的浓度的分离的肽。

选项12包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-11中的任一项的药物产品，其中所述分离的肽包含不超过30个氨基酸残基。

选项13包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-12中的任一项的药物产品，其中所述分离的肽包含氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)。

选项14包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-11中的任一项的药物产品，其中所述分离的肽由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)组成。

选项15包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-11中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液能够将至少95％或至少约95％的溶解在所述第一溶液中的分离的肽在5℃维持至少12-25个月或至少约12-25个月。

选项16包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项1-15中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液和所述第二溶液为凝胶配置以包含：至少0.4mg/ml或至少约0.4mg/ml的分离的由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)组成的肽；30-40mM或至少约30-40mM乙酸；1.2-1.6mM或至少约1.2-1.6mM乙酸钠；小于或等于30mM或小于或等于约30mM氢氧化钠；和100-120mM或约100-120mM氯化钠。所述凝胶可以具有280-300mOSmol/L或约280-300mOSmol/L的摩尔渗透压浓度。

选项17包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：制备选项1-16中的任一项的药物产品的方法。所述方法可以包括无菌过滤前体溶液，所述前体溶液包含以至少0.2mg/ml或至少约0.2mg/ml的浓度溶解在所述前体溶液中的分离的包含氨基酸序列FFVKLS(SEQID NO：1)的肽，其中所述前体溶液具有小于7或小于约7的pH和亚等渗摩尔渗透压浓度，从而产生所述第一溶液。所述方法可以包括提供包含张度剂和碱的第二溶液。

选项18包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项17的方法，其中将所述前体溶液用约0.2μM或0.2μM孔径的过滤器无菌过滤。

选项19包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项17-18中的任一项的方法，其中所述前体溶液具有小于4.5或小于约4.5的pH。

选项20包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项17-19中的任一项的方法，其中所述分离的肽包含不超过30个氨基酸残基。

选项21包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项17-20中的任一项的方法，其中所述分离的肽包含氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)。

选项22包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项17-21中的任一项的方法，其中所述分离的肽由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)组成。

选项23包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：从选项1-22中的任一项的药物产品制备药物制剂的方法。所述方法可以包括将所述第一溶液和所述第二溶液组合以形成所述凝胶。

选项24包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：包含凝胶的药物制剂。所述凝胶可以包含至少0.4mg/ml或至少约0.4mg/ml的分离的包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)的肽。所述凝胶可以包含含有乙酸和乙酸钠的缓冲系统，所述缓冲系统包含小于或等于1.6mM或小于或等于约1.6mM乙酸钠。所述凝胶可以包含张度剂。所述凝胶可以是等渗的且具有4.5-7.5或约4.5-7.5的pH。

选项25包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项24的药物制剂，其中所述凝胶基本上不含有大于0.2μM或大于约0.2μM直径的颗粒。

选项26包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项25-26中的任一项的药物制剂，其中所述张度剂是100-120mM或约100-120mM的浓度的氯化钠。

选项27包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项24-26中的任一项的药物制剂，其中所述缓冲系统包含30-40mM或约30-40mM乙酸和1.2-1.6mM或约1.2-1.6mM乙酸钠。

选项28包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项24-27中的任一项的药物制剂，其进一步包含小于或等于30mM或小于或等于约30mM但非零的浓度的氢氧化钠。

选项29包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项24-28中的任一项的药物制剂，其中所述凝胶具有280-300mOSmol/L或约280-300mOSmol/L的摩尔渗透压浓度。

选项30包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项24-29中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽包含不超过30个氨基酸残基。

选项31包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项24-30中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽包含氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)。

选项32包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项24-31中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)组成。

选项33包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：药物制剂。所述药物制剂可以包含分离的包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)的肽，其中所述分离的肽以0.2-20mg/ml或约0.2-20mg/ml的浓度溶解在所述药物制剂中。所述药物制剂可以包含非离子张度剂。所述药物制剂可以是等渗的，且具有5.0-5.5或约5.0-5.5的pH，且所述药物制剂可以是液体。

选项34包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项33的药物制剂，其中所述药物组合物基本上不含有具有大于0.2μM或大于约0.2μM的直径的颗粒。

选项35包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项33-34中的任一项的药物制剂，其进一步包含弱酸。所述肽和所述弱酸可以构成将药物制剂维持在5.0-5.5或约5.0-5.5的pH的缓冲系统。

选项36包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项35的药物制剂，其中所述弱酸是乙酸，其以0.01M或约0.01M的浓度存在。

选项37包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项33-36中的任一项的药物制剂，其中所述非离子张度剂是葡萄糖，其以0.2M-0.4M或约0.2M-0.4M的浓度存在。

选项38包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项33-37中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽浓度为0.2-5mg/ml、约0.2-5mg/ml、0.2-10mg/ml、约0.2-10mg/ml、1-5mg/ml、约1-5mg/ml、1-10mg/ml或约1-10mg/ml。

选项39包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项33-38中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽包含不超过30个氨基酸残基。

选项40包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项33-39中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽包含氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)。

选项41包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项33-38中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)组成。

选项42包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项33-41中的任一项的药物制剂，其进一步包含0.01M或约0.01M乙酸。所述分离的肽可以由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)组成，且所述分离的肽可以以1-10mg/ml或约1-10mg/ml的浓度存在。所述非离子张度剂可以是葡萄糖，其以0.2-0.4M或约0.2-0.4M的浓度存在。

选项43包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：在有此需要的患者中改善、抑制、治疗癌症或减轻其症状的方法，所述方法包括给所述患者施用有效量的选项24-42中的任一项的药物制剂。

选项44包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43的方法，其中所述有效量是至多1mg/kg或至多5mg/kg。

选项45包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43-44中的任一项的方法，其中所述药物制剂的有效量包含8-800μg或约8-800μg分离的肽。

选项46包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43-44中的任一项的方法，其中所述药物制剂的有效量包含60-100μg或约60-100μg分离的肽。

选项47包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43-46中的任一项的方法，其中肿瘤内地、皮下地、淋巴地和/或向患者的间隙液施用所述药物制剂。

选项48包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43-47中的任一项的方法，所述方法进一步包括重复所述药物制剂的施用。

选项49包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43-48中的任一项的方法，其中所述癌症包含肿瘤。

选项50包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43-49中的任一项的方法，其中所述癌症选自：头颈癌、乳腺癌、肾癌、结直肠癌、皮肤癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、恶性黑素瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(腺癌)、鳞状细胞癌、膀胱癌、骨肉瘤、支气管癌或造血细胞癌。

选项51包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43-50中的任一项的方法，所述方法进一步包括接收肽P3028(SEQ ID NO:3)或P3028结构在患者的样品中的存在和/或水平的检测的结果，所述样品诸如包含造血组织的样品、体液、血液样品、肿瘤活组织检查样品或肿瘤周围组织的活组织检查样品。在一些实施方案中，所述样品包括造血组织、血液样品或肿瘤活组织检查样品。

选项52包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项51的方法，所述方法进一步包括，如果变性的或受损的白蛋白诸如P3028结构在样品中存在或超过预定水平，则选择患者来接受有效量的药物制剂。

选项53包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43-52中的任一项的方法，所述方法进一步包括接收免疫细胞在患者的样品(诸如肿瘤活组织检查样品)中的存在的检测的结果。

选项54包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项53的方法，其中在施用所述药物组合物以后至少5天收集所述患者的样品。

选项55包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项53-54中的任一项的方法，所述方法进一步包括，如果免疫细胞存在于样品中，则选择患者来接受有效量的药物制剂。

选项56包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43-55中的任一项的方法，所述方法进一步包括选择所述患者作为在患者的样品诸如包含造血组织的样品、体液、血液样品或肿瘤活组织检查样品中包含肽3028和/或免疫细胞。在一些实施方案中，所述样品包括造血组织、血液样品或肿瘤活组织检查样品。

选项57包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43-56中的任一项的方法，所述方法进一步包括选择所述患者作为包含：基本上不含有T细胞浸润物的肿瘤、在间质中包含大多数T-细胞浸润物的肿瘤或被无活性T细胞发炎和浸润的肿瘤。

选项58包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43-57中的任一项的方法，所述方法进一步包括在药物制剂施用后检测对肿瘤的炎症应答，诸如效应细胞和/或肿瘤的抑制细胞浸润。

选项59包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43-58中的任一项的方法，所述方法进一步包括在药物组合物施用后检测肿瘤细胞的死亡，诸如细胞凋亡或坏死。

选项61包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项43-59中的任一项的方法，所述方法进一步包括给患者施用额外的治疗剂。

选项62包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：选项61的方法，其中所述额外的治疗剂包含特异性地结合PD-1或PDL-1的抗体，或对PD-1和PDL-1双特异性的抗体。

附图简要说明

图1A-D的一系列图说明了P28R对针对IL-2的受抑制增殖应答的刺激活性。图1A、1B、1C和1D分别说明了四个不同癌症患者的刺激活性。

图2A-B的一系列图说明了在含有正常人AB血清的培养基中全长肽P28R和6氨基酸中心序列(32230,FFVKLS，SEQ ID NO：1)的作用。使用流式细胞计量术将活化测定为具有增强的标志物CD69或CD71的细胞的百分比。在RPMI+10％人AB血清中将PBMC与肽(40μg/mL)一起温育24小时。图2A说明了针对每种肽进行的两个实验(420和422)的结果。图2B说明了针对每种肽进行的两个实验(424和426)的结果。

图3的图说明了在含有来自两个不同癌症患者的血清(“人癌血清1”430和“人癌血清2”432)的培养基中全长肽P28R和6氨基酸“P28核心”序列(32230,FFVKLS，SEQ ID NO：1)的对比。

图4的图显示了根据本文的一些实施方案与5只未治疗的对照狗相比7只具有乳腺肿瘤的狗中P28R治疗的评价。在代表性图(n＝1-5)中，计数来自治疗组(P28R#4、#7、#8、#11、#13、#16和#17中的深色条881)和来自对照肿瘤(对照#2、#3、#4、#5和#6中的深色条882)的肿瘤细胞的总数，并将其与炎性细胞的数目(浅灰色条883)进行对比。

图5A-B的一系列图显示，自发的犬乳腺肿瘤的皮下P28R治疗(单剂量80微克)导致炎性细胞的募集和肿瘤细胞死亡(对照N＝12和治疗N＝5)。

图6A-C是使用针对P3028(红色)和CD3(棕色)的抗体双染色的三个不同舌癌的一系列显微镜图像。免疫沙漠癌症(图6A)具有3028的强表达和在间质中仅少量分散的T-细胞。在中间的免疫排斥癌症(图6B)具有3028的强表达和在间质中的T-细胞浸润，在右侧的炎性癌症(图6C)仅关于3028微弱染色，且具有非常强的T-细胞浸润。

图7A-B是来自乳腺癌患者的肿瘤切片的一系列显微镜图像，显示了被针对CD11a的抗体染色的炎性细胞。在染色之前，将没有任何固定的新鲜冷冻肿瘤切片与缓冲液(图7A)或P28R(图7B)一起温育。

详细描述

本文描述了包含肽抑制剂、基本上由其组成或由其组成的药物产品，以及肽抑制剂的药物制剂，以及制备和使用所述药物产品和制剂的方法。所述肽抑制剂与引起人(例如患有癌症的人)中的免疫抑制的免疫调节性肽相互作用，并且已经被显示在体外减轻癌症患者血清中的免疫细胞的免疫抑制，并且在体内引起哺乳动物肿瘤的退行性改变和根除(参见实施例1-4和8)。在狗中的额外剂量递增研究中进一步证实了这些结果(参见实施例4)。本文已经观察到，肽抑制剂的常规制剂可以影响注射部位附近的细胞的健康，例如由于低摩尔渗透压浓度和/或乙酸盐的存在(参见实施例9)。此外，本文已经观察到，肽抑制剂可以在高pH和/或存在高钠的情况下形成凝胶，其可以通过堵塞过滤器的孔而干扰无菌过滤(参见实施例10和11)。因此，根据本文一些实施方案描述了药物产品、药物制剂，其是无菌的，稳定地维持肽抑制剂，并允许施用合适剂量的肽抑制剂，同时避免与乙酸盐和非等渗摩尔渗透压浓度有关的不良作用。

在一些实施方案中，提供了包含第一溶液和第二溶液的药物产品，所述第一溶液在酸性pH包含肽抑制剂诸如P28R，所述第二溶液包含碱。可以在使用前组合所述第一溶液和第二溶液以形成包含肽抑制剂的凝胶，该凝胶具有适合于施用给癌症患者的pH和重量摩尔渗透压浓度。第一溶液可以是无菌的，例如通过无菌过滤(第一溶液的酸性pH和低钠含量可以避免形成会堵塞过滤器孔的凝胶；参见实施例10)。第一溶液可以具有酸性pH和亚等渗摩尔渗透压浓度。第二溶液可以具有碱性pH和超过等渗的摩尔渗透压浓度。在一些实施方案中，所述肽抑制剂是包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成的肽。该肽可以包含不超过50、45、40、35、30、25或20个氨基酸。在一些实施方案中，所述肽抑制剂是包含氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)、基本上由其组成或由其组成的肽。

在本文所述的剂量递增研究中已经观察到，将P28R的初始80微克剂量加倍和四倍维持抗肿瘤作用，而没有观察到不良作用(参见实施例4)。因此，预期包含甚至更高浓度的肽抑制剂的制剂可以是安全且有效的。根据本文一些实施方案描述了药物产品，其包含或被配置成构成约0.2-20mg/ml(例如，0.2-5mg/ml、0.2-10mg/ml、1-5mg/ml、1-10mg/ml或1-20mg/ml)的浓度的肽抑制剂的药物制剂，或者由其组成、基本上由其组成。所述药物制剂可以包含如本文所述的肽抑制剂和非离子张度剂。该制剂可以是等渗的，并且具有5.0-5.5或约5.0-5.5的pH。该制剂可以是液体。肽抑制剂可以保持溶解在液体中。因此，药物制剂可以不含有或基本上不含有凝胶。因此，药物制剂可以不含有或基本上不含有沉淀物。

本文中使用的“基本上不含有”具有本领域普通技术人员考虑到本公开内容会理解的其普通和常规含义。它表示对药物产品或制剂的稳定性和效力没有可察觉的影响的痕量，并且还包括指定物质的不存在。如果关注其它数值精度，则在一些实施方案中，当组合物(诸如药物产品或药物制剂)含有不超过5％(w/w)的物质，例如，不超过5％、4％、3％、2％、1％、0.9％、0.5％、0.2％、0.1％、0.05％或0.01％(包括所列值中的任意两个之间的范围)的物质时，则它基本上不含有该物质。

本文还描述了在有此需要的患者中改善、抑制、治疗癌症或减轻其症状的方法，所述方法包括给所述患者施用有效量的本文所述的药物制剂。

肽抑制剂

一些实施方案包括肽抑制剂。已经显示，白蛋白-衍生的肽P3028(VFDEFKPLVEEPQNLIK-SEQ ID NO:3)足以抑制免疫细胞增殖和活化，并像“P3028结构”一样造成免疫系统的阻断(例如，受损的和/或变性的白蛋白，其可以通过对P3028特异性的抗体和/或肽来鉴定)(参见实施例1；也参见美国专利号9,796,77,和PCT公开号WO 2015/035332和WO 2016/144650，它们中的每一篇通过引用整体并入本文)。开发了P3028的基于肽的结合配偶体。显示了包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成和由其组成的肽、例如P28R(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)足以结合肽P3028(参见PCT公开号WO2016/144650的实施例10和36)。此外，包含基序FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成和由其组成的肽抑制剂、例如P28R(SEQ ID NO：2)足以减轻P3028的免疫抑制作用(参见实施例1-2)，并且可以减轻免疫抑制，从而在体内引起免疫系统浸润和肿瘤的破坏(参见实施例3-5)。

一些实施方案的组合物、药物产品、药物制剂和方法的肽抑制剂可以结合和抑制免疫调节性肽、诸如P3028和/或一种或多种其它的白蛋白-衍生的免疫调节性肽(参见，例如，在PCT公开号WO 2016/144650的表1-4中鉴定的阻滞剂肽)。一些实施方案的肽抑制剂可以包括、但不限于：肽、环肽、肽拟似物和蛋白，包括、例如，合成的肽。以下部分提供了关于基于抗体或抗体片段的肽抑制剂的更多细节。

在一些实施方案的组合物、药物产品、药物制剂和方法中，所述肽抑制剂包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案的组合物、药物产品、药物制剂和方法中，所述肽抑制剂包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)，且具有不超过100个氨基酸的长度，例如，不超过100、90、80、70、60、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7或6个氨基酸残基，包括所列值中的任意两个之间的范围，例如，6-100、6-50、6-30、6-29、6-25、6-20、6-15、6-16、10-100、10-50、10-30、10-29、10-25、10-20、10-16、15-100、15-50、15-30、15-29、15-25、15-20或15-16个氨基酸残基。在一些实施方案的组合物、药物产品、制剂和方法中，所述肽抑制剂包含P28R(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。

一些实施方案的肽抑制剂结合包含P3028的氨基酸序列(VFDEFKPLVEEPQNLIK-SEQID NO：3)、基本上由其组成或由其组成的肽。一些实施方案的肽抑制剂抑制P3028与LFA-1受体的结合，从而解除阻断LFA-1受体。因此，一些实施方案的肽抑制剂足以诱导已经被损伤的或变性的白蛋白或白蛋白肽诸如P3028结构免疫抑制的免疫细胞的活化。免疫细胞活化的例子包括、但不限于增殖、增强的CD69和/或CD71表达、IL-12或IFNγ的分泌、或穿孔蛋白或颗粒酶B的分泌、增强的细胞毒性、细胞迁移、或细胞因子产生，或所列项目中的两种或更多种。在一些实施方案中，药物产品、药物制剂、组合物或方法包括有效地抑制P3028与LFA-1受体的结合从而解除阻断LFA-1受体的量的肽抑制剂。在一些实施方案中，药物产品、药物制剂、组合物或方法包括有效地活化免疫细胞的量的肽抑制剂，所述免疫细胞已经被损伤的或变性的白蛋白或白蛋白肽诸如P3028结构免疫抑制。

除非明确地另外说明，每当在本文中提及“分离的肽”时，例如在一些实施方案的药物产品、制剂、组合物或方法的上下文中，除非另外说明，应当理解它表示如本文中所述的“肽抑制剂”。

缓冲系统

本文中使用的“缓冲液”和“缓冲系统”具有本领域普通技术人员考虑到本公开内容会理解的其普通和惯常的含义。它们表示抵抗溶液中的pH变化的组合物。因此，缓冲液可以促进一些实施方案的组合物、药物产品和/或药物制剂维持在指定的pH范围内。

缓冲液或缓冲系统可以包含弱酸和它的共轭碱、基本上由其组成或由其组成。K_a表示酸的质子的解离常数，并可以计算为K_a＝([H⁺][A^-]/[HA])。缓冲容量在缓冲液的pK_a(即K_a的负对数)为最大。因此，可以将缓冲液选择成具有在或接近被缓冲物质的期望pH或pH范围的pK_a，例如，在期望pH的±2内的pK_a，在期望pH的±1内的pK_a，或在期望pH的±0.5内的pK_a。应当指出，一些酸可以具有多于一个质子，且因此，缓冲系统可以具有多于一个pK_a。除了常规小分子缓冲剂(诸如磷酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐和硼酸盐系统)外，氨基酸代表弱酸，氨基酸的酸性侧链也是如此，且因此这些氨基酸和侧链也可以提供缓冲。因此，预期一些实施方案的酸性侧链(诸如Asp、Glu和His)可以促进如本文所述的肽抑制剂的缓冲，特别是在酸性侧链的pK_a处或附近的pH范围(应当指出，Asp、Glu和His的侧链的pK_a分别为3.7、4.3和6.5)。

“缓冲容量”具有本领域普通技术人员考虑到本公开内容会理解的其普通和惯常的含义。它表示将pH改变一个单位所需的强酸或强碱的量。通常，将缓冲容量单位表示为克或摩尔当量。缓冲容量可以根据经验确定(例如通过酸和/或碱滴定)，且也可以计算。举例来说，下面的方程(I)可以用于估计包含酸[HA]和它的共轭碱[A^-]且具有K_a的解离常数的缓冲系统的缓冲容量：

缓冲容量＝[A^-]+([H⁺][A^-]/K_a)(I)

应当理解，在可比较条件诸如温度和/或压强下，合适地进行缓冲容量的对比(例如，在缓冲液和参考缓冲液诸如乙酸钠或柠檬酸钠之间)。在一些实施方案中，在1大气压的压强下在室温或室温附近确定缓冲容量。在一些实施方案中，在标准温度和压强(0℃和1大气压)确定缓冲容量。

在一些实施方案中，组合物、药物产品或制剂包含选自以下的缓冲系统：氨基丁三醇、N，N-双(2-羟基乙基)甘氨酸、三(羟甲基)甲基甘氨酸、MOPS、MOPSO、MOBS、Tris、Hepes、HEPBS、MES、磷酸盐、碳酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、乙醇酸盐、乳酸盐、硼酸盐、ACES、ADA、酒石酸盐、AMP、AMPD、AMPSO、BES、CABS、二甲基胂酸盐、CHES、DIPSO、EPPS、乙醇胺、甘氨酸、HEPPSO、咪唑、咪唑乳酸、PIPES、SSC、SSPE、POPSO、TAPS、TABS、TAPSO、TES和如本文中所述的肽抑制剂的酸性侧链，包括所列项目中的两种或更多种。在一些实施方案中，组合物、药物产品或药物制剂包含选自以下的缓冲系统：乙酸盐和如本文中所述的肽抑制剂的酸性侧链，或所列项目二者。在一些实施方案中，组合物、药物产品或药物制剂包含含有乙酸盐和如本文中所述的肽抑制剂的酸性侧链的缓冲系统。

张度剂

为了使一些实施方案的组合物、药物产品或制剂具有合适的张度(以便在施用所述组合物、药物产品或制剂后使疼痛和组织损伤最小化)，所述组合物、药物产品或药物制剂可以包含张度剂。可以将张度剂包含在如本文所述的组合物、药物产品或制剂中，以使所述组合物、药物产品或药物制剂的重量摩尔渗透压浓度是在生理范围或附近。通常，人血液的摩尔渗透压浓度是275-299mOsm/L或约275-299mOsm/L，例如，275-295mOsm/L、275-296mOsm/L、275-297mOsm/L、280-295mOsm/L、280-296mOsm/L、280-297mOsm/L、281-295mOsm/L、281-296mOsm/kg或281-297mOsm/L。

尽管多种因素(诸如脱水)可以影响单个人的血液的摩尔渗透压浓度，但应该理解，根据本文的实施方案，等渗重量摩尔渗透压浓度表示等于或接近患者血液的摩尔渗透压浓度的重量摩尔渗透压浓度或在其附近，或在患者血液的预期摩尔渗透压浓度范围内，以便允许向其施用，同时抑制由于重量摩尔渗透压浓度差异而引起的不适和不利的生理效应。如果关注额外的数值精度，则在一些实施方案中，等渗摩尔渗透压浓度是在患者血液的摩尔渗透压浓度的±10％内，例如在±10％、±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％或±1％内，包括所列值中的任意两个之间的范围。在一些实施方案中，等渗摩尔渗透压浓度表示约280-300mOsmol/L或280-300mOsmol/L。因此，还应当理解，“亚等渗”摩尔渗透压浓度表示在数值上低于等渗摩尔渗透压浓度的摩尔渗透压浓度，例如，小于280mOsm/L、270mOsm/L或260mOsm/L。还应当理解，大于张度(tonic)的摩尔渗透压浓度表示在数值上大于等渗摩尔渗透压浓度的摩尔渗透压浓度，例如，大于300mOsm/L、310mOsM/L或320mOsm/L。

在一些实施方案中，组合物、药物产品或制剂具有约280-300mOsmol/L或280-300mOsmol/L的摩尔渗透压浓度。在一些实施方案中，组合物、药物产品或制剂具有270-280mOsmol/L、270-290mOsmol/L、270-300mOsmol/L、270-310mOsmol/L、280-290mOsmol/L、280-300mOsmol/L、280-310mOsmol/L、290-300mOsmol/L、290-310mOsmol/L或300-310mOsmol/L的摩尔渗透压浓度。

一些实施方案的组合物、药物产品或制剂的合适张度剂的例子包括、但不限于氯化钠、氯化钾、葡萄糖、蔗糖、右旋糖、甘露醇、山梨醇、海藻糖、甘油或这些中的两种或更多种的组合。张度剂的例子还可以参见：Remington's The Science and Practice ofPharmacy,第21版,Lippincott Williams&Wilkins(2005),和Gilman等人(编)(1990)；Goodman和Gilman 的：The Pharmacological Basis of Therapeutics,第8版,PergamonPress，它们中的每一篇通过引用整体并入本文。

在一些实施方案中，所述组合物、药物产品或制剂(例如包含至少10mg/ml的肽抑制剂的制剂，诸如制剂C)包含非离子张度剂，诸如葡萄糖、蔗糖、右旋糖、甘露醇、甘油或所列项目中的两种或更多种的组合。在一些实施方案中，所述组合物、药物产品或制剂的张度剂不包含钠。因此，在一些实施方案中，所述组合物、药物产品或制剂不含有或基本上不含有钠。在一些实施方案中，所述组合物、药物产品或制剂的张度剂不包含氯化钠。因此，在一些实施方案中，所述组合物、药物产品或制剂不含有或基本上不含有氯化钠。

载体

可以将组合物、药物产品或药物制剂配制在合适的载体中。所述载体可以是组合物、药物产品或药物制剂的一些或所有组分的溶剂。合适的载体的例子包括、但不限于糖浆剂、酏剂、乳剂和/或混悬液，例如包含乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、液体蔗糖、山梨醇和/或水、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述组合物、药物产品或制剂是水溶液。在一些实施方案中，在载体中配制所述组合物、药物产品或药物制剂，所述载体包含水、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，在为水的载体中配制所述组合物、药物产品或药物制剂。在一些实施方案中，所述组合物、药物产品或药物制剂包含水性制剂、基本上由其组成或由其组成。

药物产品

在一些实施方案中，药物产品包含以下内容、基本上由其组成或由其组成：肽抑制剂的制剂，或肽抑制剂的制剂的组分。一些实施方案的药物产品包含含有肽抑制剂的第一溶液，所述第一溶液是在小于7或约小于7(例如，小于或等于7、6、5、4.5、4、3.5或3)的pH且具有亚等渗重量摩尔渗透压浓度。所述第一溶液可以是无菌的，例如，通过无菌过滤。本文中已经显示，在相对高的pH(诸如4.5或更大的pH)，肽抑制剂可以形成干扰无菌过滤的凝胶，且可以从溶液中沉淀出来(参见实施例10-11)。因此，预期指定的酸性pH对于将肽抑制剂维持在可过滤的无菌溶液中可能是有利的。药物产品可以进一步包含含有张度剂的第二溶液。第一溶液和第二溶液当组合时可以产生包含肽抑制剂的等渗凝胶，其具有至少0.2mg/ml或约至少0.2mg/ml的浓度和6-8或约6–8的pH。肽抑制剂可以包含P28核心(FFVKLS；SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液基本上不含有大于0.2μM或大于约0.2μM直径的颗粒。所述第二溶液可以基本上不含有大于0.2μM或大于约0.2μM直径的颗粒。在一些实施方案中，所述第一溶液和第二溶液当组合时产生具有4.5-7.5、约4.5-7.5、6.5-7.5或约6.5-7.5的pH的等渗凝胶。在一些实施方案中，所述第一溶液和第二溶液当组合时产生等渗凝胶，其包含至少0.2mg/ml或至少约0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂和4.5-7.5或约4.5-7.5的pH。在一些实施方案中，所述第一溶液和第二溶液当组合时产生等渗凝胶，其包含至少0.2mg/ml或约至少0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂和6.5-7.5或约6.5-7.5的pH。

本文中已经显示，增加NaCl的浓度可以造成如本文所述的肽抑制剂聚集并形成凝胶(实施例11)。凝胶可以干扰无菌过滤。因此，在一些实施方案中，肽抑制剂是在液体诸如第一溶液中。第一溶液可以是无菌的，例如通过通过具有不大于0.2μM(例如，0.2μm或更小或0.1μm或更小)的孔径的过滤器的无菌过滤。因此，由第一溶液和第二溶液的组合形成的凝胶可以基本上不含有直径大于或等于过滤器孔的直径的颗粒。因此，在一些实施方案中，第一溶液和第二溶液各自不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。在一些实施方案中，第一溶液和第二溶液各自基本上不含有大于0.2μM直径的颗粒或基本上不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述肽抑制剂包含P28R(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液包含至少0.4mg/ml或至少约0.4mg/ml的浓度的肽抑制剂。在一些实施方案中，所述第一溶液包含具有约1.5mM乙酸钠或更少、或1.5mM乙酸钠或更少的缓冲容量的缓冲液，例如，不超过1.5mM、1.3mM、1.2mM、1mM、0.9mM、0.7mM或0.5mM乙酸钠的缓冲容量的缓冲容量。在一些实施方案中，所述缓冲液包含乙酸钠(和它的共轭酸)、基本上由其组成或由其组成。应当指出，可以将缓冲容量与在相同条件下(诸如温度和压强)的参照(诸如乙酸钠)进行对比。在一些实施方案中，在标准温度和压强确定缓冲容量。在本文中显示，钠(诸如乙酸钠、氢氧化钠和/或氯化钠)可以造成肽形成凝胶，其可以干扰溶解性和无菌过滤(参见实施例11)。因此，预期使包含肽的溶液中的钠含量最小化可以促进溶解性和无菌过滤。在一些实施方案中，所述第一溶液不包含乙酸钠。在一些实施方案中，所述第一溶液不包含缓冲剂。在一些实施方案中，所述第一溶液不包含NaCl。在一些实施方案中，所述第一溶液基本上不含有NaCl。在一些实施方案中，所述第一溶液包含以下物质、基本上由其组成或由其组成：小于或等于10mM NaCl或小于或等于约10mM NaCl，但非零。在一些实施方案中，所述第一溶液具有与所述第二溶液相同的体积或约相同的体积。

在一些实施方案中，所述药物产品包含表1A的第一溶液和表1B的第二溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液可以彼此分开。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以产生药物制剂，所述药物制剂包含表1C的凝胶、基本上由其组成或由其组成。因此，应当理解，根据本文的一些实施方案，药物制剂包含表1C的凝胶、基本上由其组成或由其组成。

表1A：一些实施方案的第一溶液

表1B：一些实施方案的第二溶液

张度剂，诸如氯化钠
	碱，诸如氢氧化钠
超过等渗的摩尔渗透压浓度
	任选地，不含有或基本上不含有大于0.2μM直径的颗粒

表1C：一些实施方案的凝胶

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，所述表1A的溶液包含具有相当于约1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液的缓冲容量的缓冲液。所述肽抑制剂可以包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有小于约7的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以配置成产生表1C的凝胶，所述凝胶包含至少约0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂且具有约6.5-7.5的pH和约等渗摩尔渗透压浓度，诸如约270-310mOsmol/L或约280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述肽抑制剂包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，所述表1A的溶液包含具有相当于1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液的缓冲容量的缓冲液。所述肽抑制剂可以包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有小于7的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂且具有6.5-7.5的pH和等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述肽抑制剂包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO:2)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有或基本上不含有大于0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，所述表1A的溶液包含具有相当于约1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液的缓冲容量的缓冲液。所述肽抑制剂可以包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有小于约5的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少约0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂且具有约6.5-7.5的pH和约等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述肽抑制剂包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有或基本上不含有大于0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，所述表1A的溶液包含具有相当于1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液的缓冲容量的缓冲液。所述肽抑制剂可以包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有小于5的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂且具有6.5-7.5的pH和等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述肽抑制剂包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，所述表1A的溶液包含具有相当于约1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液的缓冲容量的缓冲液。所述肽抑制剂可以包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有约3至约4.5的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少约0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂且具有约6.5-7.5的pH和约等渗摩尔渗透压浓度，诸如约270-310mOsmol/L或约280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述肽抑制剂包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，所述表1A的溶液包含具有相当于1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液的缓冲容量的缓冲液。所述肽抑制剂可以包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有3-4.5的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂且具有6.5-7.5的pH和等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述肽抑制剂包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO:2)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，所述表1A的溶液包含约1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液。所述肽抑制剂可以包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有小于约7的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少约0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂且具有约6.5-7.5的pH和约等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述肽抑制剂包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，所述表1A的溶液包含1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液。所述肽抑制剂可以包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有小于7的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂且具有6.5-7.5的pH和等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述肽抑制剂包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，所述表1A的溶液包含约1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液。所述肽抑制剂可以包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有小于约5的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少约0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂且具有约6.5-7.5的pH和约等渗摩尔渗透压浓度，诸如约270-310mOsmol/L或约280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述肽抑制剂包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，所述表1A的溶液包含1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液。所述肽抑制剂可以包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有小于5的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂且具有6.5-7.5的pH和等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述肽抑制剂包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，所述表1A的溶液包含约1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液。所述肽抑制剂可以包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有约3.5-4.5的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少约0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂且具有约6.5-7.5的pH和约等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述肽抑制剂包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，且包含1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液。所述肽抑制剂可以包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ IDNO：1)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有3.5-4.5的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少0.2mg/ml的浓度的肽抑制剂且具有6.5-7.5的pH和等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述肽抑制剂包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，且包含具有相当于约1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液的缓冲容量的缓冲液。所述肽抑制剂可以包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有小于约5的pH，例如小于约5、4.5、4、3.5或3，包括所列值中的任意两个之间的范围，例如，约3-5、约3.5-5、约4-5、约4.5-5、约3-4.5、约3.5-4.5、约4-4.5、约3-4或约3.5-4的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少0.2mg/ml(诸如至少0.4mg/ml)的浓度的肽抑制剂且具有约6.5-7.5的pH和约等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，且包含具有相当于1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液的缓冲容量的缓冲液。所述肽抑制剂可以包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有小于约5的pH，例如小于5、4.5、4、3.5或3，包括所列值中的任意两个之间的范围，例如，3-5、3.5-5、4-5、4.5-5、3-4.5、3.5-4.5、4-4.5、3-4或3.5-4的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少0.2mg/ml(诸如至少0.4mg/ml)的浓度的肽抑制剂且具有6.5-7.5的pH和等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，且包含约1.5mM或更少的乙酸钠缓冲液。所述肽抑制剂可以包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有小于约5的pH，例如小于约5、4.5、4、3.5或3，包括所列值中的任意两个之间的范围，例如，约3-5、约3.5-5、约4-5、约4.5-5、约3-4.5、约3.5-4.5、约4-4.5、约3-4或约3.5-4的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少约0.2mg/ml(诸如至少约0.4mg/ml)的浓度的肽抑制剂且具有约6.5-7.5的pH和约等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，且包含1-1.5mM的乙酸钠缓冲液。所述肽抑制剂可以包含P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)、基本上由其组成或由其组成。所述第一溶液可以具有小于约5的pH，例如小于5、4.5、4、3.5或3，包括所列值中的任意两个之间的范围，例如，3-5、3.5-5、4-5、4.5-5、3-4.5、3.5-4.5、4-4.5、3-4或3.5-4的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少0.2mg/ml(诸如至少0.4mg/ml)的浓度的肽抑制剂且具有6.5-7.5的pH和等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，所述第一溶液包含表1A的溶液、基本上由其组成或由其组成，且包含具有相当于约1.5mM的乙酸钠缓冲液的缓冲容量的缓冲液。所述肽抑制剂可以具有P28R的氨基酸序列(KKLDTFFVKLSLFTER；SEQ ID NO：2)。所述第一溶液可以具有3-4.5的pH。所述第二溶液可以包含表1B的溶液、基本上由其组成或由其组成。第一溶液和第二溶液当彼此组合时可以形成表1C的凝胶，所述凝胶包含至少0.2mg/ml(诸如至少约0.4mg/ml)的浓度的肽抑制剂且具有6.5-7.5的pH和等渗摩尔渗透压浓度，诸如270-310mOsmol/L或280-300mOsmol/L。在一些实施方案中，所述第一溶液可以包含不超过约10mM NaCl。所述第二溶液的张度剂可以包含NaCl。不受理论的限制，预期通过在第二溶液中提供NaCl(为了张度和/或其它目的)，可以使第一溶液中的钠最少化，从而使第一溶液中的肽抑制剂的凝胶形成最小化。在一些实施方案中，所述第二溶液的张度剂是NaCl，且表1C的凝胶包含100mM-120mM NaCl、或约100mM-120mM NaCl。在一些实施方案中，所述第一溶液不含有或基本上不含有凝胶。在一些实施方案中，所述第一溶液中的肽抑制剂不是呈β折叠构象，或基本上不含有呈β折叠构象的肽抑制剂。在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液包含小于或等于约10mM NaCl，例如小于或等于约10mM NaCl，但非零，例如，小于或等于约10、9、8、7、56、5、4、3、2、1或0.1mM NaCl，包括所列值中的任意两个之间的范围，例如约0.1-10mM NaCl、约0.1-7mM NaCl、约1-7mM NaCl、约1-10mM NaCl、约5-7mM NaCl或约5-1 0mM NaCl。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液包含小于或等于10mM NaCl，例如，小于或等于10、9、8、7、56、5、4、3、2、1或0.1mM NaCl，包括所列值中的任意两个之间的范围，例如0.1-10mM NaCl、0.1-7mM NaCl、1-7mM NaCl、1-10mM NaCl、5-7mM NaCl或5-1 0mMNaCl。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液基本上不含有NaCl。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液不包含NaCl。

在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液包含具有相当于1.5mM或更少、或约1.5mM乙酸钠或更低但非零，例如，小于或等于1.5mM、1.3mM、1.1mM、1mM、0.7mM或0.5mM乙酸钠(但非零)，包括所列值中的任意两个之间的范围的缓冲容量的缓冲液。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液不包含缓冲液。例如，在一些实施方案中，表1A的第一溶液不包含缓冲液或基本上不含有缓冲液。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液基本上不含有缓冲液。应当指出，不含有或基本上不含有缓冲液的药物产品可以具有可归因于肽抑制剂本身的缓冲容量，但是不含有或基本上不含有小分子缓冲剂诸如乙酸钠。

在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液包含1.5mM或更少或约1.5mM或更低但非零的浓度的乙酸钠，例如，小于或等于1.5mM、1.3mM、1.1mM、1mM、0.7mM或0.5mM乙酸钠(但非零)，包括所列值中的任意两个之间的范围。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液不包含乙酸钠。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液基本上不含有乙酸钠。

在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品或制剂，所述张度剂包含NaCl、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案中，所述第二溶液为凝胶配置以包含100mM-120mM NaCl或约100mM-120mM NaCl。在一些实施方案中，所述第二溶液为凝胶配置以包含90mM-130mM NaCl、约90mM-130mM NaCl、110mM-120mM NaCl、约110mM-120mM NaCl、100mM-110mM NaCl或约100mM-110mM NaCl。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液不包含NaCl。在一些实施方案中，如本文中所述的药物产品或药物制剂基本上不含有NaCl。在一些实施方案中，所述药物产品或药物制剂不包含NaCl。因此，所述第二溶液的张度剂可以是除NaCl以外的张度剂，例如非离子的毒性试剂。

在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液不含有凝胶，或基本上不含有凝胶。在一些实施方案中，所述第一溶液的小于5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的肽抑制剂是在凝胶中。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述肽抑制剂溶解在所述第一溶液中。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述肽抑制剂溶解在所述第一溶液中，且基本上不呈β-折叠构象或不呈β-折叠构象。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述肽抑制剂溶解在所述第一溶液中，且所述第一溶液的小于5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％的肽抑制剂呈β折叠构象。

在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液为药物制剂的凝胶配置以包含至少0.4mg/ml或至少约0.4mg/ml的浓度的肽抑制剂。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述第一溶液为凝胶配置以包含至少0.4mg/ml，诸如至少0.4、0.5、0.6、0.8或1mg/ml，包括所列值中的任意两个之间的范围的浓度的肽抑制剂。

在一些实施方案中，对于本文描述的的任何药物产品或药物制剂，所述肽抑制剂包含不超过30个氨基酸残基，例如，不超过30、29、28、27、25、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11或10个氨基酸残基，包括所列值中的任意两个之间的范围。

在一些实施方案中，对于本文描述的的任何药物产品或药物制剂，所述肽抑制剂包含氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述肽抑制剂由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)组成。

在一些实施方案中，所述第一溶液能够将至少95％或至少约95％的溶解在所述第一溶液中的肽抑制剂在5℃维持至少12-25个月或至少约12-25个月，例如当至少95％、96％、97％、98％或99％的肽抑制剂被溶解时。在一些实施方案中，所述第一溶液能够将至少95％或至少约95％的溶解在所述第一溶液中的肽抑制剂在5℃维持至少12-19个月或至少约12-19个月，例如至少95％、96％、97％、98％或99％内的肽抑制剂被溶解。

在一些实施方案中，所述第一溶液和所述第二溶液为凝胶配置以包含至少0.4mg/ml或至少约0.4mg/ml的由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)组成的肽抑制剂。所述第一溶液和所述第二溶液可以进一步为凝胶配置以包含：30-40mM或至少约30-40mM乙酸；1.2-1.6mM或至少约1.2-1.6mM乙酸钠；小于或等于30mM或小于或等于约30mM氢氧化钠；和100-120mM或约100-120mM氯化钠。所述凝胶可以具有280-300mOSmol/L或约280-300mOSmol/L的摩尔渗透压浓度。

药物制剂

凝胶制剂

在一些实施方案中，描述了药物制剂。所述药物制剂可以包含凝胶(例如表1C的凝胶)、基本上由其组成或由其组成。所述凝胶可以包含至少0.4mg/ml或至少约0.4mg/ml的分离的肽，所述肽包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)、基本上由其组成或由其组成。所述凝胶可以包含含有乙酸和乙酸钠的缓冲系统，所述缓冲系统包含小于或等于1.6mM或小于或等于约1.6mM乙酸钠。所述凝胶可以包含张度剂。所述凝胶可以是等渗的和/或可以具有4.5-7.5或约4.5-7.5的pH。在一些实施方案中，所述药物制剂用于医学用途。在一些实施方案中，所述药物制剂是用于改善、抑制、治疗如本文中所述的癌症或减轻其症状。

如本文中所指出的，尽管凝胶可以干扰无菌过滤，但是可以将前体溶液无菌过滤，例如通过具有0.2μm或更小，例如，0.2μm或更小，或0.1μm或更小的孔径的过滤器。因此，在一些实施方案中，所述凝胶基本上不含有大于0.2μM直径的颗粒或大于约0.2μM直径。在一些实施方案中，所述凝胶不含有大于0.2μM或大于约0.2μM直径的颗粒。在一些实施方案中，所述凝胶不含有大于0.1μM或大于约0.1μM直径的颗粒。

在一些实施方案中，对于如本文中所述的包含凝胶的任何药物制剂，所述凝胶的张度剂包含NaCl、基本上由其组成或由其组成。所述凝胶可以包含100-120mM或约100-120mM的浓度的张度剂(NaCl)。在一些实施方案中，所述凝胶包含不超过50、60、70、80、90、100、105、110、115、120、130、140或150mM的浓度的NaCl，包括所列值中的任意两个之间的范围，例如，50-150mM的浓度的NaCl。在一些实施方案中，所述凝胶包含105-115mM或约105-115mM的浓度的NaCl。在一些实施方案中，所述凝胶包含约110mM的浓度的NaCl。

在一些实施方案中，对于如本文中所述的包含凝胶的任何药物制剂，所述缓冲系统的缓冲容量不超过20mM乙酸钠缓冲液的缓冲容量，例如，不超过20、15、10、5、4、3、2或1mM乙酸钠，包括所列值中的任意两个之间的范围，例如，1-2mM、1-5mM、1-10mM、1-20mM、2-5mM、2-10mM、2-20mM、5-10mM或5-20mM乙酸钠缓冲液的缓冲容量。在一些实施方案中，所述缓冲系统包含30-40mM乙酸和1.2-1.6mM乙酸钠，或约30-40mM乙酸和约1.2-1.6mM乙酸钠。在一些实施方案中，所述缓冲系统不包含乙酸钠。在一些实施方案中，所述缓冲系统基本上不含有乙酸钠。在一些实施方案中，如本文中所述的任何药物制剂基本上不含有缓冲液。在一些实施方案中，如本文中所述的任何药物制剂不包含缓冲液。

在一些实施方案中，本文描述的任何药物制剂包含氢氧化钠。氢氧化钠可以浓度为小于或等于30mM或小于或等于约30mM但非零，例如，小于或等于30mM、25mM、20mM、15mM、10mM或1mM，包括所列值中的任意两个之间的范围。

在一些实施方案中，对于如本文中所述的包含凝胶的任何药物制剂，所述凝胶具有张度摩尔渗透压浓度(tonic osmolarity)。在一些实施方案中，所述凝胶具有270-310mOSmol/L、约270-310mOSmol/L、280-300mOSmol/L、约280-300mOSmol/L、285-295mOSmol/L、约285-295mOSmol/L、289-291mOSmol/L或约289-291mOSmol/L的摩尔渗透压浓度。

在一些实施方案中，对于如本文中所述的包含凝胶的任何药物制剂，所述肽抑制剂包含不超过30个氨基酸残基，例如，不超过30、29、28、27、25、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11或10个氨基酸残基，包括所列值中的任意两个之间的范围。

在一些实施方案中，对于如本文中所述的包含凝胶的任何药物制剂，所述肽抑制剂包含氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)。在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物产品，所述肽抑制剂由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)组成。

单一溶液药物制剂

在一些实施方案中，所述药物制剂包含液体、基本上由其组成或由其组成。本文中已经显示，可以在相对高的浓度(例如，至多约10mg/ml)配制肽抑制剂(参见实施例14)。不受理论的限制，预见到尽管钠和/或高于4.5的pH可以造成肽抑制剂沉淀(参见实施例10-11)，但是在较高浓度制剂中，肽抑制剂本身可以充当弱缓冲剂(例如，由于肽抑制剂上的酸侧链之间的相互作用)，因此允许低水平的钠。药物制剂的分离的肽可以包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO：1)。所述分离的肽可以以0.2-20mg/ml或约0.2-20mg/ml的浓度溶解在药物制剂中。所述药物制剂可以进一步包含非离子张度剂。所述药物制剂可以是等渗的。在一些实施方案中，所述药物制剂是等渗的，且具有5.0-5.5或约5.0-5.5的pH。在一些实施方案中，所述药物制剂用于医学用途。在一些实施方案中，所述药物制剂用于改善、抑制、治疗如本文中所述的癌症或减轻其症状。

在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物制剂，所述药物组合物不含有或基本上不含有具有大于0.2μM或大于约0.2μM的直径的颗粒，例如具有大于0.1μM的直径的颗粒。

在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物制剂，所述药物制剂进一步包含弱酸。肽和弱酸可以构成缓冲系统，其将药物制剂维持在4.5-5的pH，例如约4.5-5、4.5-5.5、4.5-6、4.5-6.5、4.5-7、5-5.5、5-6、5-6.5、5-7、5.5-6、5.5-6.5、5.5-7、6-6.5或6-7的pH。

在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物制剂，所述弱酸是乙酸，其以不超过0.02M或约0.02M，例如，不超过0.02M、约0.02M、0.01M、约0.01M、0.005M或约0.005M的浓度存在。

在一些实施方案中，对于本文描述的任何药物制剂，所述非离子张度剂是葡萄糖。在一些实施方案中，所述非离子张度剂是葡萄糖，且以有效地使药物制剂具有张度的浓度存在。在一些实施方案中，所述非离子张度剂是葡萄糖，且以0.1-0.5M、约0.1-0.5M、0.2-0.4M、约0.2-0.4M、0.2-0.3M、约0.2-0.3M、0.3-0.4M或约0.3-0.4M的浓度存在。

在一些实施方案中，对于如本文中所述的包含液体、基本上由其组成或由其组成的任何药物制剂，所述分离的肽浓度为0.2-5mg/ml、约0.2-5mg/ml、0.2-10mg/ml、约0.2-10mg/ml、0.2-20mg/ml、约0.2-20mg/ml、1-5mg/ml、约1-5mg/ml、1-10mg/ml、约1-10mg/ml、1-20mg/ml、约1-20mg/ml、5-10mg/ml、约5-10mg/ml、5-20mg/ml或约5-20mg/ml。在一些实施方案中，所述分离的肽浓度为10mg/ml或更少，例如浓度不超过10mg/ml、约10mg/ml、5mg/ml、约5mg/ml、1mg/ml或约1mg/ml。

在一些实施方案中，对于如本文中所述的任何药物制剂，所述肽抑制剂包含不超过30个氨基酸残基，例如，不超过30、29、28、27、25、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11或10个氨基酸残基，包括所列值中的任意两个之间的范围。

在一些实施方案中，对于如本文中所述的包含液体、基本上由其组成或由其组成的任何药物制剂，所述肽抑制剂包含氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，对于如本文中所述的包含液体、基本上由其组成或由其组成的任何药物制剂，所述肽抑制剂由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)组成。

在一些实施方案中，如本文中所述的包含液体、基本上由其组成或由其组成的任何药物制剂进一步包含0.01M或约0.01M乙酸。所述分离的肽由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)组成。所述肽抑制剂可以以1-10mg/ml或约1-10mg/ml的浓度存在。非离子张度剂可以是葡萄糖，其可以以0.2-0.4M或约0.2-0.4M的浓度存在。所述药物制剂可以是如本文中所述的等渗的，例如具有约280-300mOsm/L或280-300mOsm/L的摩尔渗透压浓度。

制备药物制剂的方法

一些实施方案包括从如本文中所述的药物产品制备药物制剂的方法。所述方法可以包括将如本文中所述的第一溶液(例如表1A的第一溶液)与如本文中所述的第二溶液(例如，表1B的第二溶液)组合以形成凝胶(诸如表1C的凝胶)。所述药物制剂可以包含凝胶、基本上由其组成或由其组成。

制备药物产品的方法

在一些实施方案中，描述了制备药物产品的方法。所述方法可以包括无菌过滤如本文中所述的包含肽抑制剂的溶液，所述肽抑制剂包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO:1)。所述肽抑制剂可以以至少0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7ml/ml、0.8mg/ml、0.9mg/ml或1mg/ml(包括所列值中的任意两个之间的范围)或至少约0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7ml/ml、0.8mg/ml、0.9mg/ml或1mg/ml(包括所列值中的任意两个之间的范围)的浓度溶解在所述前体溶液中。将理解，高pH和/或高钠可以造成如本文中所述的肽抑制剂形成凝胶(参见实施例10-11)。因此，应当理解，在本文的一些实施方案中，将肽抑制剂溶解在经选择以避免在无菌过滤之前形成凝胶的前体溶液(诸如表1A的溶液)中，例如这样的溶液：其包含酸性pH诸如小于约5、4.5、4、3.5、3、2.5或2或所列值中的任意两个之间的范围，例如2-3、2-3.5、2-4、2-4.5、2-5、3-3.5、3-4、3-4.5、3-5、3.5-4、3.5-4.5、3.5-5、4-4.5或4-5；和小于或等于10mMNaCl或小于或等于约10mM NaCl；和小于或等于1.5mM NaCl或小于或等于约1.5mM NaCl或更低但非零。在一些实施方案中，所述溶液的pH、NaCl和乙酸钠含量使得肽抑制剂保持溶解在前体溶液中，且前体溶液不含有或基本上不含有凝胶。

在一些实施方案中，将包含肽抑制剂的前体溶液用具有约0.2μM或0.2μM的孔径的过滤器无菌过滤。将理解，在大于4.5的pH，或在有氯化钠水平存在下(参见实施例10-11)，所述肽抑制剂可以形成凝胶，其干扰无菌过滤。进一步理解，无菌过滤的前体溶液将不含有或基本上不含有其直径至少约为过滤器的孔径大小的颗粒。例如，应当理解，用0.2μM孔径的过滤器无菌过滤的包含肽抑制剂的前体溶液将不含有或基本上不含有大于0.2μM直径的颗粒。在一些实施方案中，将包含肽抑制剂的前体溶液用不超过1μM、约1μM、0.5μM、约0.5μM、0.4μM、约0.4μM、0.3μM、约0.3μM、0.2μM、约0.2μM、0.1μM或约0.1μM(包括所列值中的任意两个之间的范围)的孔径的过滤器无菌过滤。

已经显示，在高pH，肽抑制剂可以形成凝胶(实施例11)。在一些实施方案的方法中，所述前体溶液具有酸性pH。所述pH可以足以抑制肽抑制剂的凝胶形成。在一些实施方案的方法中，所述前体溶液具有小于约5、4.5、4、3.5、3、2.5或2的pH，包括所列值中的任意两个之间的范围，例如，2-3、2-3.5、2-4、2-4.5、2-5、3-3.5、3-4、3-4.5、3-5、3.5-4、3.5-4.5、3.5-5、4-4.5或4-5的pH。

在一些实施方案的方法中，所述肽抑制剂包含不超过30个氨基酸残基，例如，不超过30、29、28、27、25、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11或10个氨基酸残基，包括所列值中的任意两个之间的范围。在一些实施方案的方法中，所述肽抑制剂包含氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)。在一些实施方案的方法中，所述肽抑制剂由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO：2)组成。

改善、抑制、治疗癌症或减轻其症状的方法

在一些实施方案中，描述了在有此需要的患者中改善、抑制、治疗癌症或减轻其症状的方法。所述方法可以包括给患者施用有效量的如本文中所述的药物制剂。应当理解，每当在本文中描述改善、抑制、治疗癌症、或者减轻癌症的症状的方法(且所述方法包括药物制剂)时，也明确地涵盖用于改善、抑制、治疗癌症、或者减轻癌症的症状的对应药物制剂。需要改善、抑制、治疗癌症或减轻其症状的“患者”也可以在本文中被称作“受试者”。

在一些实施方案的方法中，药物制剂的有效量表示包含足够量的肽抑制剂以改善、抑制、治疗患者中的癌症或减轻其症状的药物制剂的量。在一些实施方案的方法中，药物制剂的有效量包含足以造成肿瘤的免疫细胞浸润的量的肽抑制剂。在一些实施方案的方法中，药物制剂的有效量包含足以造成肿瘤中的细胞死亡的量的肽抑制剂。在一些实施方案的方法中，药物制剂的有效量包含至多5mg/kg的肽抑制剂，例如，至多0.01、0.02、0.05、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4或5mg/kg，包括所列值中的任意两个之间的范围。在一些实施方案的方法中，药物制剂的有效量包含至多约5mg/kg或1mg/kg的肽抑制剂。在一些实施方案的方法中，所述有效量包含至多2000μg或至多约2000μg肽抑制剂，例如，至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000μg，包括所列值中的任意两个之间的范围，例如，1-50μg、1-80μg、1-100μg、1-500μg、1-800μg、1-1000μg、1-2000μg、8-50μg、8-80μg、8-100μg、8-500μg、8-800μg、8-1000μg、8-2000μg、10-50μg、10-80μg、10-100μg、10-500μg、10-800μg、10-1000μg、10-2000μg、50-80μg、50-100μg、50-500μg、50-800μg、50-1000μg、50-2000μg、100-500μg、100-800μg、100-1000μg、100-2000μg、500-800μg、500-1000μg或500-2000μg肽抑制剂。在一些实施方案的方法中，药物制剂的有效量包含8-800μg或约8-800μg肽抑制剂。在一些实施方案的方法中，药物制剂的有效量包含60-100μg或约60-100μg肽抑制剂。

任何数目的合适施用途径可以用在本文一些实施方案的方法中。在一些实施方案中，肿瘤内地、皮下地、淋巴地和/或向患者的间隙液施用所述药物制剂。

在一些实施方案的方法中，重复药物制剂的施用。所述施用可以进行至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40或50次，包括所列值中的任意两个之间的范围。在一些实施方案中，在一个时间段内重复药物制剂的施用，例如至少每1、2、3、4、5、6、7、8、9或10周进行重复。

在一些实施方案的方法中，所述癌症包含肿瘤、基本上由其组成或由其组成。在一些实施方案的方法中，所述癌症选自：头颈癌、乳腺癌、肾癌、结直肠癌、皮肤癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、恶性黑素瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(腺癌)、鳞状细胞癌、膀胱癌、骨肉瘤、支气管癌和/或造血细胞癌。在一些实施方案中，所述患者具有两种或更多种列出的癌症。

应当理解，一些实施方案的肽抑制剂可以减轻与P3028结构有关的免疫抑制(参见实施例1-3)。因此，在一些实施方案的方法中，将患者选择为具有P3028结构、和/或P3028结构的免疫抑制。预见到该选择可以将患者鉴定为用如本文中所述的包含肽抑制剂的药物组合物治疗的候选人(参见实施例7)。在一些实施方案中，所述方法包括检测肽P3028(SEQ IDNO：3)或P3028结构诸如损伤的或变性的白蛋白在患者的样品(诸如造血组织、体液、血液样品、肿瘤活组织检查样品或肿瘤周围组织的活组织检查样品)中的存在和/或水平。在一些实施方案中，所述方法包括检测P3028结构诸如损伤的或变性的白蛋白在患者的样品(诸如造血组织、体液、血液样品、肿瘤活组织检查样品或肿瘤周围组织的活组织检查样品)中的存在和/或水平。如果患者包含大于健康的(非免疫抑制的)对照的相应值的肽P3028(SEQID NO：3)或P3028结构的存在和/或水平，则可以选择患者用于用包含肽抑制剂的药物组合物治疗。在一些实施方案中，所述方法包括接收肽P3028(SEQ ID NO：3)或P3028结构诸如损伤的或变性的白蛋白在患者的样品(诸如包含造血组织的样品、体液、血液样品、肿瘤活组织检查样品或肿瘤周围组织的活组织检查样品)中的存在和/或水平的检测的结果。在一些实施方案中，所述方法包括接收P3028结构诸如损伤的或变性的白蛋白在患者的样品(诸如包含造血组织的样品、体液、血液样品、肿瘤活组织检查样品或肿瘤周围组织的活组织检查样品)中的存在和/或水平的检测的结果。如果患者包含大于健康的(非免疫抑制的)对照的相应值的肽P3028(SEQ ID NO：3)或P3028结构的存在和/或水平，则可以选择患者用于用包含肽抑制剂的药物组合物治疗。在一些实施方案中，所述样品包括造血组织、血液样品、血液样品、肿瘤活组织检查样品或肿瘤周围组织的活组织检查样品。

已经进一步观察到，免疫细胞在肿瘤中的存在可以指示免疫抑制的减轻和对肿瘤的免疫应答(参见，例如，实施例4-5)。因此，在一些实施方案的方法中免疫细胞在患者的肿瘤中的存在和/或水平的检测可以指示，所述药物制剂有效地改善、抑制、治疗患者中的癌症或减轻其症状。在一些实施方案中，所述方法包括检测免疫细胞在患者的样品(诸如肿瘤活组织检查样品)中的存在。在一些实施方案中，所述方法包括接收免疫细胞在患者的样品(诸如肿瘤活组织检查样品)中的存在的检测的结果。患者的样品，诸如肿瘤活组织检查样品，可以已经在施用如本文中所述的药物组合物以后至少5天(例如至少5、6、7、8、9、10、15或20天以后)从患者收集。

已经观察到，一些肿瘤微环境包含P3028结构的大量存在和免疫细胞的缺失(例如，“免疫沙漠”和“免疫排除的”癌症；参见实施例7)。此外，已经观察到，肿瘤中的P3028水平与T细胞浸润负相关。预见到这类的“免疫沙漠”和“免疫排除的”概况可以指示适合使用如本文中所述的包含肽抑制剂的药物组合物治疗的患者。在一些实施方案中，所述方法包括选择所述患者作为包含P3028结构(诸如肽P3028、变性的白蛋白和/或损伤的白蛋白)的存在或水平，和/或免疫细胞在患者的样品中的存在或不存在。所述样品可以包括造血组织、体液、血液样品或肿瘤活组织检查样品。可以选择这样的患者来接受有效量的药物制剂。在一些实施方案中，所述方法包括，如果免疫细胞从在患者的样品中的肿瘤缺失，则选择患者来接受有效量的药物制剂。所述样品可以包含造血组织、体液、血液样品和/或肿瘤活组织检查样品。在一些实施方案中，所述方法包括，如果免疫细胞从包含肿瘤的患者的样品缺失且P3028结构是在患者的样品中，则选择患者来接受有效量的药物制剂。所述样品可以包括造血组织、体液、血液样品和/或肿瘤活组织检查样品。在一些实施方案中，所述方法包括，如果免疫细胞诸如T细胞从包含肿瘤的患者的样品缺失，则选择患者来接受有效量的药物制剂。所述样品可以包括造血组织、体液、血液样品和/或肿瘤活组织检查样品。在一些实施方案中，所述方法包括，如果P3028结构是在患者的样品中，则选择患者来接受有效量的药物制剂。所述样品可以包括造血组织、体液、血液样品和/或肿瘤活组织检查样品。在一些实施方案中，所述方法包括，如果患者具有基本上不含有T细胞浸润物的肿瘤、在间质中包含大多数T-细胞浸润物的肿瘤或被无活性T细胞发炎和浸润的肿瘤，则选择患者来接受有效量的药物制剂。在一些实施方案中，所述方法还包括在药物制剂施用后检测对肿瘤的炎症应答，诸如效应细胞和/或肿瘤的抑制细胞浸润。在一些实施方案中，所述样品包括造血组织、血液样品和/或肿瘤活组织检查样品。

肿瘤细胞的死亡还可以指示响应于如本文中所述的药物组合物的免疫抑制的减轻和肿瘤的抑制(参见，例如，实施例6)。因此，在一些实施方案中，所述方法还包括，在药物组合物施用后，检测肿瘤细胞的死亡，诸如细胞凋亡或坏死。

进一步预见到，如本文中所述的药物组合物可以与额外的治疗剂协同作用。例如，预见到，包含发炎部分(其被具有P3028的低表达的T细胞渗透)的肿瘤可以适合用检查点抑制剂治疗(参见实施例7)。例如，预见到针对PD-1或PD-L1的抗体可以抑制PD-L1介导的免疫抑制，且因此可以与如本文中所述的肽抑制剂协同作用。因此，在一些实施方案中，所述方法还包括给患者施用额外的治疗剂。在一些实施方案中，所述额外的治疗剂包含以下物质、基本上由其组成或由其组成：对PD-1特异性的抗体，和/或对PD-L1特异性的抗体。在一些实施方案中，所述额外的治疗剂是对PD-L1特异性的抗体，其选自度伐单抗、阿特朱单抗和阿维鲁单抗。在一些实施方案中，所述额外的治疗剂是对PD-1特异性的抗体，其选自纳武单抗和派姆单抗。在一些实施方案中，所述额外的治疗剂是对PD-1和PDL-1双特异性的抗体或抗体片段。

实施例1：P3028的低分子量抑制剂对淋巴细胞活化的影响

在人离体模型中进行了P3028的抑制剂P28R的分析。使用MTS或CFSE技术测量的对PBMC的刺激活性在7个健康的对照样品和7个各种诊断的癌症患者中进行研究。令人感兴趣的是，甚至在没有其它类型的刺激的情况下，P28R在7个癌症患者中的6个中具有显著的刺激活性，而来自对照样品的PBMC仅显示弱刺激或无刺激。

如在图1A-D中所示，P28R对针对IL-2的受抑制增殖应答的刺激活性。将PBMC与IL-2一起培养7天，并通过BrdU的掺入确定增殖速率。每个条代表一式三份的平均值。与关于针对P3028的抗体(参见PCT公开号WO2016/144650的图22)逆转癌症相关的免疫抑制(其被确定为来自癌症患者的PBMC对IL-2的差增殖性应答)的效力的研究类似，研究了低分子量抑制剂P28R的逆转受抑制的IL-2诱导的增殖的效力。图1A-D中显示了来自四个不同治疗原初患者的PBMC的培养结果。对于添加的P28R的每种量，在左侧显示了IL-2刺激的细胞240，且在右侧显示了未刺激的242。P28R明显刺激了具有低初始增殖的PBMC(参见图1A和1B)，而高初始增殖基本上不受药物影响(参见图1C和1D)。如预期的，并不是所有患者中都存在全身性免疫抑制，并且只有具有免疫抑制的那些才会受到刺激。

实施例2：P28R和P28核心肽对PBMC活化的影响

当使用RPMI+10％正常人AB血清作为培养基时，P28R(SEQ ID NO：2)可以在短期培养中刺激来自健康对照的PBMC。还关于其活化PBMC的能力评估了P28R的截短。将PBMC与该肽(40μg/mL)一起在RPMI+10％人AB血清中温育24小时。使用流式细胞计量术将PBMC活化测量为具有CD69(图2A)或CD71(图2B)的增强表达的细胞百分比。对每种肽进行两次实验。

进行了对免疫细胞的直接刺激效应的测试。如在图2A和2B中所示，肽P28R(SEQ IDNO：2)在该模型中有效地活化了健康的PBMC，但是肽32251(SEQ ID NO：4)和肽32230(“P28核心”)(FFVKLS)(SEQ ID NO：1)在该模型中未活化健康的PBMC。

另外，关于其减轻癌细胞中的免疫抑制的能力测试了P28R和P28核心。在PBMC培养物中，在用来自患有癌症的狗或患有癌症的人患者的血清替代培养基中的正常人AB-血清的情况下，P28R(SEQ ID NO：2)和P28核心(肽32230(FFVKLS)(SEQ ID NO：1)各自活化PBMC，测量为增强的CD69表达(参见图3)。图3显示了在含有来自两个不同癌症患者(人癌血清1430和人癌血清2 432)的血清的培养基中全长肽P28R(SEQ ID NO：2)和6氨基酸P28核心序列(肽32230)(FFVKLS)(SEQ ID NO：1)之间的对比。在癌症血清存在下，P28R(SEQ ID NO：2)和P28核心(SEQ ID NO：1)均活化了PBMC。

此外，已经显示生物素化的P28R直接结合PBMC，如通过免疫细胞化学或P28R包被的珠子的簇叶(rosetting)(珠子与细胞的结合)所证明的。

总之，这些结果显示，P28R(SEQ ID NO：2)可以结合P3028和解除阻断细胞受体，并且还可以对免疫细胞具有直接的刺激活性。另外，P28核心(SEQID NO：1)可以结合P3028和解除阻断细胞受体。

实施例3：P28R在免疫活性小鼠中活化免疫系统

在接种了B16黑素瘤的免疫活性小鼠C57Bl中研究了P28R的活化免疫系统并从而诱导肿瘤细胞裂解的能力。肿瘤内注射在100微升中的20nM的P28R，并在3-5天后取出肿瘤。如在PCT公开号WO 2016/144(通过引用整体并入本文)的实施例49中所示，在肿瘤内用P28R治疗的动物中经常发现局部淋巴结反应。P28R的肿瘤内注射不仅在P28R治疗的肿瘤中而且在未注射或仅注射盐水的对侧肿瘤中引起显著的肿瘤退行性改变(PCT公开号WO2016/144的图55A-D)。在将P28R注入治疗的肿瘤后，对未治疗的远侧/对侧肿瘤的作用随时间增加。在B57Bl小鼠的Lewis肺癌模型中获得了相似的结果。因此，显示根据本文的一些实施方案的肽抑制剂P28R的施用可以诱导肿瘤的退行性改变，包括在肿瘤内接受肽抑制剂的肿瘤以及在患者的其它部位的肿瘤(例如在接受肽抑制剂的肿瘤对侧的肿瘤)。

实施例4：用P28R对狗中的自发性肿瘤进行肿瘤内治疗

已经通过在200微升中的40nmol P28R的肿瘤内注射治疗了不同组织的自发犬肿瘤。在PCT公开号WO 2016/144650的实施例50-60(其通过引用整体并入本文)中详细描述了用P28R治疗狗肿瘤。定量7只具有治疗的乳腺肿瘤的狗和5只未治疗的对照狗的肿瘤细胞(治疗的狗为881，未治疗的对照狗为882)和淋巴细胞(治疗的狗和未治疗的对照狗均为883)的示例结果显示在图4中。在这些具有乳腺肿瘤的狗中，在所有治疗的肿瘤中均发现了明显的炎性浸润，和与14个未经治疗的肿瘤相比增加的退行性肿瘤细胞的数目。即使仅以200μL注射药物，在大肿瘤中也观察到了抗肿瘤作用。在两只具有多个肿瘤的狗中，不仅在注射的肿瘤中而且在未注射的肿瘤中发现了对P28R的相同应答。

使用P28R的皮下注射在单次剂量递增研究中治疗狗中的自发性肿瘤，并在3-5天后切除肿瘤。如在图5A-B中所示，自发犬乳腺肿瘤的皮下P28R治疗(单剂量80微克)导致炎症细胞的募集和肿瘤细胞死亡(对照N＝12和治疗N＝5)。还以160微克和320微克给狗给药。在任何狗中在任何剂量水平均未观察到不良事件。另外，(A)在具有全身性高级别B细胞淋巴瘤伴多个淋巴结肿大的狗中，将在500微升中的200微克的P28R单次注射剂施用入一个直径为2cm的腘淋巴结中。5天后，在临床上找不到被注射的肿瘤。(B)在具有牙槽嵴的进行性鳞状细胞癌(在右侧延伸进硬腭/硬颚中，并在右眼下向上延伸，在眼睛下方和侧面突出，肿瘤大小3x 4cm)的狗中，施用了十次每周一次的在200微升中的80微克P28R的肿瘤内注射。3个月以后，实现了注射肿瘤的组织病理学完全缓解。(C)在具有多发性复发性乳腺肿瘤(其大小最大为4x4 mm)的狗中，80微克在20微升中的9次通常每周注射以后，组织病理学检查显示强烈的炎性应答，但也残留肿瘤细胞。总之，可以得出结论，一些实施方案的肽抑制剂P28R是良好耐受的，并且在改善、抑制和治疗多种类型的肿瘤中是有效的。

实施例5：P28R的全身作用

研究了P28R的全身皮下施用的效果。在PCT公开号WO 2016/144650的实施例62中描述了该研究。用12微克P28R治疗接种了CT26结肠癌的小鼠，每周2次持续两周。在大多数肿瘤细胞中诱导了细胞凋亡。这些结果显示，除了直接肿瘤注射以外，根据本文的一些实施方案的肽抑制剂诸如P28R的全身施用也可以在患者中诱导炎性浸润、肿瘤细胞退行性改变和/或肿瘤组织的根除，并且可以在肿瘤细胞中诱导程序性细胞死亡。

实施例6：P28R与针对PD-1和_PD-L1的抗体之间的协同作用

在癌症药物P28R的开发中，只是为了评价增强的炎性应答选择了针对CD45的抗体。该标志物不允许在肿瘤内炎性子集的不同子集的功能特征之间进行区分。在大量研究中，特别是在狗研究中，研究了P28R注射后的短期阶段，即主要是先天免疫系统的活化。在小鼠实验中，在3-5天内诱导了强烈的炎性应答，在一些实验中在24小时后已经诱导。令人感兴趣的是，在该短时间段内观察到了令人印象深刻的肿瘤细胞根除。肿瘤细胞死亡的评价是基于形态学标准、TUNEL和Feulgen染色。显然，引起了强烈的抗肿瘤活性。另外，证明了P28R与针对PD-1和PD-L1的抗体之间的统计上显著的协同效应，评价为生长迟缓。不受理论的限制，考虑到该观察，对解剖炎性应答的关注更多地针对抗肿瘤效应物机制，而不是抑制物机制的可能发生。此外，不受理论的限制，基于早期应答、主要的炎性细胞的形态和巨噬细胞特异性标志物诸如F4/80，可以得出结论：巨噬细胞是效应细胞的主要类型。在2周的延长治疗阶段后，发生了显著增强的CD8+细胞的募集，这与免疫原性细胞死亡的早期先天诱导以及随后的适应性免疫应答非常一致。

实施例7：P3028结构在人癌症中的存在

目前，可以通过以下免疫阻断表型描述癌症免疫疗法中的治疗障碍：免疫沙漠肿瘤(无T-细胞浸润)，免疫排除的肿瘤(限于周围间质区域的T细胞)和发炎的肿瘤(无功能T-细胞的浸润)。如在乳腺癌和头颈癌研究中所示，免疫抑制剂3028的出现与T细胞向肿瘤的差募集有关。这与3028阻断LFA-1并由此抑制淋巴细胞进入肿瘤的能力以及在肿瘤内迁移到肿瘤细胞附近非常一致。

显示了使用针对3028(红色)和CD3(棕色)的抗体双重染色的三个不同舌癌。左侧的免疫沙漠癌(图6A)具有3028的强烈表达和在间质中的仅少量散布的T细胞，中间的免疫排斥癌症(图6B)具有3028的强烈表达和在间质中的T细胞浸润，右侧的炎性癌症(图6C)仅关于3028弱染色，并且具有非常强的T细胞浸润。

不受理论的限制，预见到常规免疫疗法在具有图6A和6B所示的免疫阻断的癌症中可能具有挑战性。不受理论的限制，在以发炎为特征的癌症中，由于LFA-1阻断，在很大程度上仍可能存在迁移阻断，从而抑制靠近肿瘤细胞的T细胞的迁移。进一步预见到，这些类型的癌症可能对如本文中所述的包含肽抑制剂的药物制剂产生应答。在图6C所示的炎性癌症类型(其被T细胞渗透，并具有3028的低表达)中，其它抑制机制(诸如检查点分子)正在发挥作用。这些是最可能对检查点抑制剂做出应答的肿瘤。

对人头颈癌的进一步研究

研究了免疫抑制剂3028在口腔癌中的表达。在18个评价的舌头、喉和扁桃体样品中，16个在肿瘤结节中显示3028的中等至高表达。其余两个样品也显示出3028的表达，但程度更低。

统计分析显示，CD3+肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的存在与0.024的p-值相关，表明CD3+淋巴细胞的量与3028在肿瘤结节中的存在显著相关。

实施例8：人乳腺癌的离体治疗

为了进一步证明在肿瘤中表达3028的白蛋白结构与LFA-1阻断的生物学关联性，将来自人乳腺癌的新鲜冷冻肿瘤切片与P28R一起温育，然后针对LFA-1(CD11a)进行染色。为了对比，将肿瘤切片仅与磷酸盐缓冲盐水一起温育。P28R逆转了LFA-1的阻断，导致染色强度增强，并且LFA-1受体的功能也可能增强，这对于淋巴细胞迁移和细胞毒性活性是重要的(图7A-B)。

图7A-B显示了来自乳腺癌患者的肿瘤切片，其显示了被针对CD11a的抗体染色的炎性细胞。将没有任何固定的新鲜冷冻肿瘤切片与缓冲液(图7A)或P28R(图7B)一起温育，然后染色。观察到炎性细胞浸润了用P28R处理的肿瘤切片。

另外，用P28R离体处理来自人乳腺癌和舌癌的切片。在靠近肿瘤细胞具有强烈自发性炎性应答的癌症中，免疫细胞表现出LFA-1的强烈膜染色，而在具有炎性细胞的仅中等浸润的肿瘤中，膜染色被阻断，但可能被离体P28R处理解除阻断。

实施例9：“制剂A”和“制剂B”的制备

P28R是一种倾向于在中性pH形成β-折叠的短肽。它已经在具有pH 5.2的乙酸盐缓冲液中成功配制(“制剂A”；参见表2A)，并在对患有自发性肿瘤的狗的研究(研究CIG-1301)中用作P28R的媒介物(参见实施例4；也参见PCT公开号WO 2016/144650)。当分析肿瘤内施用后P28R的作用时，可以检测到明显的治疗效果，但靠近注射部位肿瘤的细胞看起来受到注射的媒介物的轻微影响。不受理论的限制，认为这源自制剂A的乙酸盐和/或低重量摩尔渗透压浓度。因此，通过添加氯化钠使乙酸盐水平急剧降低并且将重量摩尔渗透压浓度调至等渗水平，以产生“制剂B”(参见表2B)。

表2A：制剂A

表2B：制剂B

出于生产技术原因，将制剂B中的P28R分入两个小瓶，其在使用前应混合以产生制剂B中的P28R(参见实施例10)。

P28R由C S Bio Co.CA,USA根据GMP标准生产。用于媒介物生产的化学物质为冰醋酸(Fisher Scientific，UK)，氯化钠(S3014-5kg，Sigma，Steinheim，德国)，氢氧化钠(Sigma，221465-500G,Sigma，Steinheim,德国),乙酸钠(71183-250G,Sigma,Steinheim,德国)。使用的无菌过滤器为：具有0,2μm聚醚砜(PES)膜的25mm无菌注射器式滤器(欧洲目录号514-0073VWRInternational,Radnor,PA,USA.)或50mm Baxter 0,2微米过滤器(REFH93835,Baxter，Deerfield，IL，USA)。以相关空白作为对照，使用DeNovix DS-11分光光度计中的“肽”设置确定蛋白浓度。使用新校准的WTW Inolab pH 720测量pH。

实施例10：P28R形成凝胶的倾向是氢氧化钠和/或pH依赖性的。

观察到，制剂B中的P28R由于过滤器的堵塞而不能被无菌过滤，并且可以通过的有限量的流通液几乎没有P28R含量(数据未显示)。不受理论的限制，怀疑过滤器的堵塞源自短肽诸如P28R形成β-折叠和/或凝胶的可能性。P28R肽在该状态形成澄清的透明液体，当在显微镜下观察时，其呈非常薄的凝胶形式。

生产了五批不同的制剂B，其中添加了不同量的氢氧化钠以创建pH梯度。将小珠子添加到溶液中以可视化任何凝胶形成的存在(表3)。

表3：在不同pH下制剂B的凝胶形成能力。通过添加小珠子鉴定P28R在pH范围从5.35直到10.97的不同pH的制剂中形成凝胶的倾向。(*沉淀的肽倾向于粘附在管壁上，从而产生变化的浓度。)

表3

观察到凝胶形成受氢氧化钠的添加影响。不受理论的限制，凝胶形成可以归因于钠添加和/或可以是pH依赖性的。但是，在pH 10附近存在较高的pH阈值，在那里未形成凝胶，但制剂从澄清溶液变为白色颗粒状外观。

因此，预见到钠的存在和/或至少5.35的pH可以造成P28R肽形成凝胶，这可以干扰无菌过滤。另一方面，在较低的pH诸如3.6，P28R肽保持溶解在液体溶液中(参见，例如，表4)。

实施例11：氯化钠诱导P28R的聚集

当将氢氧化钠添加到制剂B中时，由于过滤器的堵塞而无法进行无菌过滤，但是在没有氢氧化钠和氯化钠存在下，过滤是可能的，并且没有检测到凝胶形成(数据未显示)。

为了评价溶解的肽是否在过滤过程中结合到膜上，通过0.2μm PES过滤器将无NaOH和NaCl的制剂B除菌，得到pH 3.6(10mg P28R(CS8040)，471.7μl 10％乙酸和23，16ml1，6mM乙酸钠，当用DeNovix DS-11分光光度计测量时得到0，27mg/ml P28R)，并将流通液以1ml体积分装。使用DeNovixDS-11分光光度计确定流通液的P28R浓度(表4)。应当指出，P28R具有1972.3Da的平均分子质量。

表4显示了使用25mm PES过滤器除菌后的流通液中的P28R浓度。通过0.2μm PES过滤器将无NaOH和NaCl的制剂B除菌，得到pH 3.6(10mgP28R(CS8040)，471.7μl 10％乙酸和23，16ml 1，6mM乙酸钠)。使用DeNovixDS-11分光光度计确定流通液的P28R浓度。(*测量了有限的样品选择，且P28R浓度始终在0.26-0.28mg/ml之间，数据未显示)。

表4

然后将相同批次通过来自Pharma-Skan的50mm Baxter过滤器过滤，并通过分光光度计法确定流通液中的蛋白含量(表5)。

表5显示了使用50mm Baxter过滤器除菌后流通液中的P28R浓度。将不含NaOH和NaCl的制剂B通过50mm Baxter过滤器除菌，并将流通液以1ml体积分装。使用DeNovix DS-11分光光度计确定前24毫升流通液的P28R浓度。(*在此时间期间液体充满了膜上先前干燥的区域)。

表5

为了进一步评价pH对配制状态下的P28R行为的影响，将试管3-12和15-25中的样品合并，并使用氢氧化钠将pH调节至4.8，确定蛋白浓度为0.26mg/ml，然后使溶液通过与表5中使用的相同的Baxter过滤器。为六个第一毫升流通液(1.0ml/试管)确定蛋白含量(表6)。

表6显示，升高的pH诱导P28R结合至50mm Baxter过滤器。通过过滤器过滤不含NaCl的pH 4.8的制剂B，所述过滤器用来自先前过滤pH 3.6的制剂B的P28R饱和。使用DeNovix DS-11分光光度计确定六个第一毫升流通液的P28R浓度。

表6

第一ml流通液含有比以下样品略低的浓度，这指示，升高的pH(4.8)诱导肽与过滤器结合(相比于3.6的pH)。过滤器应该已经从表5中显示的实验中完成的过滤饱和，但是升高的pH可能改变过滤器特性或制剂中的肽，从而有助于提高的P28R结合容量。

为了研究在没有NaCl和NaOH的制剂B中是否可能进行更高P28R浓度的无菌过滤，生产了具有0.37mg/ml的蛋白含量的新批，并通过PES过滤器过滤(表7)。

表7显示了使用PES过滤器除菌后流通液中的P28R浓度。过滤具有pH3.6和0.37mg/ml的P28R含量的制剂B。使用DeNovix DS-11分光光度计确定12个第一毫升流通液的P28R浓度。

表7

当悬浮在制剂B中而不是制剂A中时，观察到P28R形成凝胶的能力。不受理论的限制，认为这种现象是以下可能性背后的最可能原因：在没有堵塞的情况下无菌过滤制剂A，而不是制剂B。由于制剂A的高乙酸盐浓度和低重量摩尔渗透压浓度，制剂B被认为更适合用于临床应用。

为了研究凝胶形成背后的原因，研究了具有较低pH值和/或没有NaCl的几种形式的制剂B。含有NaCl的制剂无法通过无菌过滤器，表明NaCl或导致的重量摩尔渗透压浓度升高正在诱导P28R肽的凝胶形成。

在过滤不含NaCl的制剂B后，显然，在达到饱和之前，小部分的P28R可以结合过滤器。如在表5中所示，在饱和前可与过滤器结合的P28R的量是pH依赖性的。

可以与过滤器结合的P28R的量取决于材料类型和过滤器尺寸。从表6中过滤后的肽损失计算，使50mm Baxter过滤器饱和所需的肽的总量为0.1mg P28R的量级。该Baxter过滤器与Pharma-Skan ApS在为临床应用制造的P28R除菌过程中使用的过滤器相同。最经常地，在临床批次的生产中使用超过100mg的P28R，且0.1mg的损失(相对于小于1/1000)因此被认为是可忽略的。

实施例12：根据GMP配制用于临床应用的P28R

由Pharma-Skan ApS在批号611170(使用API CS8040批次GH1008)中按照当前GMP标准使用两小瓶生产制剂B。P28R浓缩物(P28R小瓶-A)含有在0.76mL的不含NaCl和NaOH的制剂B缓冲液中的所有P28R。稀释剂(P28R小瓶-B)含有在0.24mL溶液中的所有NaCl和NaOH。以后在即将注射前在诊所将“P28R小瓶-A”和“P28R小瓶-B”组合以形成制剂B。

制剂B是等渗的，且与制剂A相比具有更少的乙酸盐，使制剂B成为临床应用首选。由于NaCl含量的原因，制剂B的凝胶诱导能力在过滤除菌步骤中引起生产技术问题。为了绕过这个问题，可以在没有NaCl和低pH下对P28R进行无菌过滤。因此，通过将制剂B分入双小瓶系统(P28R浓缩物在“P28R小瓶-A”中和稀释剂在“P28R小瓶-B”中)可以完成用于临床使用的P28R的生产。小瓶-A将由溶解在乙酸和乙酸钠中的P28R组成。小瓶-B将包含氯化钠和氢氧化钠。为避免在两个小瓶掺合期间使P28R遭受升高的pH，必须将小瓶-B的氢氧化钠添加到含有P28R的小瓶-A中。当将小瓶A和小瓶B混合时，将产生准备好用于临床应用的制剂B。

实施例13:GMP生产的P28R批次的稳定性测试

关于监测的储存条件与BirkaBioStorage AB合作测试了批次611170的稳定性，并由Q&Q-Labs AB执行HPLC纯度分析。在即将储存前进行纯度分析，并将97.0％纯度的结果用作参考值以对比用于以后的分析。在+5℃储存19个月后，纯度下降至94.8％。表8中呈现了所有稳定性结果。

表8显示了来自批次611170的P28R稳定性结果。由Q&Q-Labs AB(

瑞典)根据当前的GMP标准在指定的时间点使用HPLC对由认证过的储存设施Birka Biostorage AB(Lund,瑞典)在监测的+5℃条件下储存的P28R浓缩物(P28R小瓶-B)进行纯度测试。表中呈现了P28R肽的纯度、最大单个相关物质和大于0.1％的其它单个相关物质。

表8

实施例14:高浓度P28R的媒介物

为了将来使用，开发了一种优化的“制剂C”，其具有显著增加P28R浓度的可能性。

通过将P28R溶解于0,01M乙酸中至13.3mg/ml的浓度，并向其中添加1.12M葡萄糖以得到具有10mg/mL的P28R浓度的等渗溶液，生产制剂C。0.01M乙酸的酸度被肽抗衡离子(为乙酸根)抵消，因此产生约5.2的pH。可以无菌过滤10mg/mL的该制剂C，而不会堵塞过滤器，但是粘的和明显起泡。重要的部分是它不形成凝胶，且因此如果在将来需要高P28R浓度则是替代方案。通过用等渗葡萄糖稀释，可以容易地生产具有较低P28R浓度的制剂C。对具有P28R的制剂C的初步研究表明，低于5mg/mL的浓度是非常实用的。

制剂C在几个方面具有高潜力，包括生产成本、生产技术、适度的缓冲容量、增加P28R浓度的可能性，并且在诊所中采用单小瓶系统而不是双小瓶系统更为实用。

在上述实施方案中的至少一些中，在一个实施方案中使用的一个或多个要素可以在另一实施方案中互换使用，除非这样的替换在技术上不可行。本领域技术人员将理解，在不脱离所要求保护的主题的范围的情况下，可以对本文所述的方法、组合物、药物产品、药物制剂和用途进行各种其它省略、添加和修改。所有这样的修改和改变意图落入由所附权利要求限定的主题的范围内。

关于本文中基本上任何复数和/或单数术语的使用，本领域技术人员可以将复数转化为单数和/或将单数转化为复数，只要适合上下文和/或申请即可。为了清楚起见，可将各种单数/复数的互换明确地陈述于此。

本领域技术人员将理解，一般而言，在本文中和特别是在所附权利要求(例如，所附权利要求的主体)中使用的术语通常意图作为“开放式”术语(例如，术语“包括”应解释为“包括、但不限于”，术语“具有”应解释为“至少具有”，术语“包括”应解释为“包括、但不限于”等)。本领域技术人员还将理解，如果意图将具体数量引入到权利要求描述中，则该意图将明确地记载于权利要求中，并且在无此描述时便不存在该意图。例如，作为辅助理解，以下所附权利要求可包含引导性短语“至少一个/种”和“一个/种或多个/种”用于引入权利要求描述的应用。但是，不应将此类短语的使用解释为暗示：由不定冠词“一个/种(a)”或“一个/种(an)”引入的权利要求陈述将含有这样的引入的权利要求陈述的任何特定权利要求限制为含有仅一个这样的陈述的实施方案，即使当相同的权利要求包括引导性短语“一个/种或多个/种”或者“至少一个/种”以及不定冠词诸如“一个/种(a)”或“一个/种(an)”时，(例如，“一个/种(a)”和/或“一个/种(an)”应解释为是指“至少一个/种”或“一个/种或多个/种”)；对用于引导权利要求描述的定冠词的使用也同样适用。另外，即使明确描述了引导性权利要求描述的具体数量，本领域技术人员将认识到，这样的描述应当解释为至少所述数目(例如，没有其它修饰语的“两个列举项”的裸列举是指至少两个列举项，或两个或更多个列举项)。此外，在其中使用类似于“A、B和C中的至少之一等”的习语的那些情况下，通常这样的结构是指本领域技术人员将理解的该习语的含义(例如，“具有A、B和C中至少一个的装置或基底”将包括、但不限于具有单独的A、单独的B、单独的C、A和B一起、A和C一起、B和C一起和/或A、B和C一起等的装置或基底)。在其中使用类似于“A、B或C中的至少之一等”的习语的那些情况下，通常这样的结构是指本领域技术人员将理解的该习语的含义(例如，“具有A、B或C中的至少一个的装置或基底”将包括、但不限于具有单独的A、单独的B、单独的C、A和B一起、A和C一起、B和C一起和/或A、B和C一起等的装置或基底)。本领域技术人员将进一步理解，无论在说明书、权利要求书中还是在附图中，基本上任意的表示两种或更多种可替换术语的转折连接词和/或短语都应理解为预见到包括术语之一、术语中的任一个、或术语二者的可能性。例如，短语“A或B”应理解为包括“A”或“B”或者“A和B”的可能性。另外，当本文描述包含组合物、药物制剂或药物产品的方法时，也涵盖对应的组合物、药物制剂或药物产品用于使用。例如，包括施用包含肽抑制剂的药物制剂的治疗癌症的方法明确地还涵盖用于治疗癌症的包含肽抑制剂的药物制剂。

另外，在以马库什群组的方式描述本公开内容的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，本公开内容由此也以马库什群组的任何单个成员或成员亚组的方式来描述。

本领域技术人员将理解，出于任何和所有目的，诸如就提供书面描述而言，本文公开的所有范围也涵盖任何和所有可能的子范围及其子范围的组合。可以容易地认为任何列出的范围充分地描述并能够使相同范围分成至少相等的两份、三份、四份、五份、十份等。作为一个非限制性例子，本文所讨论的每个范围可以容易地分成较低的三分之一、中间的三分之一和较高的三分之一等。本领域技术人员还理解，诸如“至多”、“至少”、“大于”、“小于”等的所有语言包括所列举的数字，并且表示随后可以细分为上面讨论的子范围的范围。最后，如本领域技术人员所理解，范围包括每个单独的成员。因此，例如，具有1-3个物品的组表示具有1、2或3个物品的组。类似地，具有1-5个物品的组表示具有1、2、3、4或5个物品的组，诸如此类。

尽管本文已经公开了各个方面和实施方案，但是其它方面和实施方案对于本领域技术人员而言将是显而易见的。本文所公开的各个方面和实施方案是出于说明的目的，且无意进行限制，真实的范围和精神由所附权利要求指示。

序列表

<110> 卡尼姆盖德治疗学公司

<120> 肽抑制剂的药物制剂

<130> CANIG.009WO

<150> 62/738859

<151> 2018-09-28

<160> 4

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 肽32230

<400> 1

Phe Phe Val Lys Leu Ser

1 5

<210> 2

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 肽P28R

<400> 2

Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Val Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg

1 5 10 15

<210> 3

<211> 17

<212> PRT

<213> 智人

<400> 3

Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile

1 5 10 15

Lys

<210> 4

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 肽32251

<400> 4

Lys Lys Leu Asp Thr Phe Phe Pro Lys Leu Ser Leu Phe Thr Glu Arg

1 5 10 15

Claims (61)

1.药物产品，其包含：

第一溶液，其包含溶解在所述第一溶液中的分离的包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ IDNO:1)的肽，所述第一溶液具有小于7或约小于7的pH，和亚等渗摩尔渗透压浓度；和

包含张度剂和碱的第二溶液，

其中所述第一溶液和第二溶液当彼此组合时产生等渗凝胶，其中所述等渗凝胶包含至少0.2mg/ml或约至少0.2mg/ml的浓度的分离的肽和6.5-7.5或约6.5-7.5的pH。

2.权利要求1的药物产品，其中所述第一溶液基本上不含有大于0.2μM直径的颗粒或不含有大于约0.2μM直径的颗粒，且其中所述第二溶液基本上不含有大于0.2μM或大于约0.2μM直径的颗粒。

3.权利要求1-2中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液包含小于或等于10mM NaCl或小于或等于约10mM NaCl，但非零。

4.权利要求1-2中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液不包含NaCl。

5.权利要求1-4中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液进一步包含具有相当于1.5mM或约1.5mM乙酸钠或更低但非零的缓冲容量的缓冲液。

6.权利要求1-4中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液进一步包含小于或等于1.5mM或小于或等于约1.5mM或更低但非零的浓度的乙酸钠。

7.权利要求1-4中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液不包含缓冲液。

8.权利要求1-7中的任一项的药物产品，其中所述张度剂是NaCl，且其中所述第二溶液为凝胶配置以包含100mM-120mM NaCl或约100mM-120mM NaCl。

9.权利要求1-8中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液基本上不含有凝胶。

10.权利要求1-9中的任一项的药物产品，其中所述溶解在所述第一溶液中的分离的肽基本上不呈β-折叠构象。

11.权利要求1-10中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液为凝胶配置以包含至少0.4mg/ml或至少约0.4mg/ml的浓度的分离的肽。

12.权利要求1-11中的任一项的药物产品，其中所述分离的肽包含不超过30个氨基酸残基。

13.权利要求1-12中的任一项的药物产品，其中所述分离的肽包含氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)。

14.权利要求1-11中的任一项的药物产品，其中所述分离的肽由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)组成。

15.权利要求1-11中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液能够将至少95％或至少约95％的溶解在所述第一溶液中的分离的肽在5℃维持至少12-25个月或至少约12-25个月。

16.权利要求1-15中的任一项的药物产品，其中所述第一溶液和所述第二溶液为凝胶配置以包含：

至少0.4mg/ml或至少约0.4mg/ml的分离的由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ IDNO:2)组成的肽；

30-40mM或至少约30-40mM乙酸；

1.2-1.6mM或至少约1.2-1.6mM乙酸钠；

小于或等于30mM或小于或等于约30mM氢氧化钠；和

100-120mM或约100-120mM氯化钠，

其中所述凝胶具有280-300mOSmol/L或约280-300mOSmol/L的摩尔渗透压浓度。

17.制备权利要求1-16中的任一项的药物产品的方法，所述方法包括：

无菌过滤前体溶液，所述前体溶液包含以至少0.2mg/ml或至少约0.2mg/ml的浓度溶解在所述前体溶液中的分离的包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO:1)的肽，其中所述前体溶液具有小于7或小于约7的pH和亚等渗摩尔渗透压浓度，从而产生所述第一溶液；和

提供所述包含张度剂和碱的第二溶液。

18.权利要求17的方法，其中将所述前体溶液用约0.2μM或0.2μM孔径的过滤器无菌过滤。

19.权利要求17-18中的任一项的方法，其中所述前体溶液具有小于4.5或小于约4.5的pH。

20.权利要求17-19中的任一项的方法，其中所述分离的肽包含不超过30个氨基酸残基。

21.权利要求17-20中的任一项的方法，其中所述分离的肽包含氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)。

22.权利要求17-21中的任一项的方法，其中所述分离的肽由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)组成。

23.从权利要求1-22中的任一项的药物产品制备药物制剂的方法，所述方法包括将所述第一溶液和所述第二溶液组合以形成所述凝胶。

24.包含凝胶的药物制剂，其包含：

至少0.4mg/ml或至少约0.4mg/ml的分离的包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO:1)的肽；

包含乙酸和乙酸钠的缓冲系统，所述缓冲系统包含小于或等于1.6mM或小于或等于约1.6mM乙酸钠；和

张度剂，

其中所述凝胶是等渗的且具有4.5-7.5或约4.5-7.5的pH。

25.权利要求24的药物制剂，其中所述凝胶基本上不含有大于0.2μM或大于约0.2μM直径的颗粒。

26.权利要求24-25中的任一项的药物制剂，其中所述张度剂是100-120mM或约100-120mM的浓度的氯化钠。

27.权利要求24-26中的任一项的药物制剂，其中所述缓冲系统包含30-40mM或约30-40mM乙酸和1.2-1.6mM或约1.2-1.6mM乙酸钠。

28.权利要求24-27中的任一项的药物制剂，其进一步包含小于或等于30mM或小于或等于约30mM但非零的浓度的氢氧化钠。

29.权利要求24-28中的任一项的药物制剂，其中所述凝胶具有280-300mOSmol/L或约280-300mOSmol/L的摩尔渗透压浓度。

30.权利要求24-29中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽包含不超过30个氨基酸残基。

31.权利要求24-30中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽包含氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)。

32.权利要求24-31中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)组成。

33.药物制剂，其包含：

分离的包含氨基酸序列FFVKLS(SEQ ID NO:1)的肽，其中所述分离的肽以0.2-20mg/ml或约0.2-20mg/ml的浓度溶解在所述药物制剂中；和

非离子张度剂，

其中所述药物制剂是等渗的，且具有5.0-5.5或约5.0-5.5的pH，和

其中所述药物制剂是液体。

34.权利要求33的药物制剂，其中所述药物组合物基本上不含有具有大于0.2μM或大于约0.2μM的直径的颗粒。

35.权利要求33-34中的任一项的药物制剂，其进一步包含弱酸，其中所述肽和所述弱酸构成将药物制剂维持在5.0-5.5或约5.0-5.5的pH的缓冲系统。

36.权利要求35的药物制剂，其中所述弱酸是乙酸，其以0.01M或约0.01M的浓度存在。

37.权利要求33-36中的任一项的药物制剂，其中所述非离子张度剂是葡萄糖，其以0.2M-0.4M或约0.2M-0.4M的浓度存在。

38.权利要求33-37中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽浓度为0.2-5mg/ml、约0.2-5mg/ml、0.2-10mg/ml、约0.2-10mg/ml、1-5mg/ml、约1-5mg/ml、1-10mg/ml或约1-10mg/ml。

39.权利要求33-38中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽包含不超过30个氨基酸残基。

40.权利要求33-39中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽包含氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)。

41.权利要求33-38中的任一项的药物制剂，其中所述分离的肽由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)组成。

42.权利要求33-41中的任一项的药物制剂，其进一步包含0.01M或约0.01M乙酸，

其中所述分离的肽由氨基酸序列KKLDTFFVKLSLFTER(SEQ ID NO:2)组成，且所述分离的肽以1-10mg/ml或约1-10mg/ml的浓度存在，且

其中所述非离子张度剂是葡萄糖，其以0.2-0.4M或约0.2-0.4M的浓度存在。

43.在有此需要的患者中改善、抑制、治疗癌症或减轻其症状的方法，所述方法包括给所述患者施用有效量的权利要求24-42中的任一项的药物制剂。

44.权利要求43的方法，其中所述有效量是至多1mg/kg或至多5mg/kg。

45.权利要求43-44中的任一项的方法，其中所述药物制剂的有效量包含8-800μg或约8-800μg分离的肽。

46.权利要求43-44中的任一项的方法，其中所述药物制剂的有效量包含60-100μg或约60-100μg分离的肽。

47.权利要求43-46中的任一项的方法，其中肿瘤内地、皮下地、淋巴地和/或向患者的间隙液施用所述药物制剂。

48.权利要求43-47中的任一项的方法，所述方法进一步包括重复所述药物制剂的施用。

49.权利要求43-48中的任一项的方法，其中所述癌症包含肿瘤。

50.权利要求43-49中的任一项的方法，其中所述癌症选自：头颈癌、乳腺癌、肾癌、结直肠癌、皮肤癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、恶性黑素瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(腺癌)、鳞状细胞癌、膀胱癌、骨肉瘤、支气管癌或造血细胞癌。

51.权利要求43-50中的任一项的方法，所述方法进一步包括接收肽P3028(SEQ ID NO:3)或P3028结构在所述患者的样品中的存在和/或水平的检测的结果，所述样品诸如包含造血组织的样品、体液、血液样品、肿瘤活组织检查样品或肿瘤周围组织的活组织检查样品。

52.权利要求51的方法，所述方法进一步包括，如果变性的或受损的白蛋白诸如P3028结构在样品中存在或超过预定水平，则选择患者来接受有效量的药物制剂。

53.权利要求43-52中的任一项的方法，所述方法进一步包括接收免疫细胞在患者的样品、诸如肿瘤活组织检查样品中的存在的检测的结果。

54.权利要求53的方法，其中在施用所述药物组合物以后至少5天收集所述患者的样品。

55.权利要求53-54中的任一项的方法，所述方法进一步包括，如果免疫细胞存在于所述样品中，则选择所述患者来接受有效量的药物制剂。

56.权利要求43-55中的任一项的方法，所述方法进一步包括，选择所述患者作为在所述患者的样品诸如包含造血组织的样品、体液、血液样品或肿瘤活组织检查样品中包含肽3028和/或免疫细胞。

57.权利要求43-56中的任一项的方法，所述方法进一步包括，选择所述患者作为包含基本上不含有T细胞浸润物的肿瘤、在间质中包含大多数T-细胞浸润物的肿瘤或被无活性T细胞发炎和浸润的肿瘤。

58.权利要求43-57中的任一项的方法，所述方法进一步包括，在药物制剂施用后检测对肿瘤的炎症应答，诸如效应细胞和/或肿瘤的抑制细胞浸润。

59.权利要求43-58中的任一项的方法，所述方法进一步包括，在药物组合物施用后检测肿瘤细胞的死亡，诸如细胞凋亡或坏死。

60.权利要求43-59中的任一项的方法，所述方法进一步包括给患者施用额外的治疗剂。

61.权利要求60的方法，其中所述额外的治疗剂包含特异性地结合PD-1或PDL-1的抗体，或对PD-1和PDL-1双特异性的抗体。

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