CN112778433A - 一种植物多糖双水相萃取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种植物多糖双水相萃取方法，涉及多糖提取领域。使用双水相萃取方法，萃取体系中加入活性保持剂，加入量为步骤2混合物总重量的0.1%~1%；所述活性保持剂含有氯磺酸，混合均匀后进行浸提。通过双水相萃取的方法实现，对植物中的多糖进行提取的效果，另外针对植物中含有的硫酸化多糖，通过复配的活性保持剂的添加在进行提取的过程中，最大程度的保持了硫酸化多糖的活性，提升了提取的多糖作为营养添加剂的生物活性。
Description
技术领域
本发明涉及多糖提取领域，尤其涉及一种植物多糖双水相萃取方法。
背景技术
近二十年来，由于分子生物学的发展，人们逐渐认识到糖及其复合物分子具有极其重要的生物功能，多糖与免疫功能的调节、细胞与细胞的识别、细胞间物质的运输、癌症的诊断与治疗等，都有着密切的关系。多糖具有储藏能量、结构支持和抗原决定性等多种生物功能，多糖及糖结合物的分离，纯化和组分测定及结构分析有了长足进展。同时，对多糖的生物学功能有了新的认识。
大型藻类植物中含有的硫化多糖作为一种硫酸化的多糖，是多糖的糖单元上含有硫酸基。由于硫化多糖具有显著的免疫调节活性，近年来已经成为多糖研究的热点。硫化多糖具有免疫调节的活性，其中的机制包括三个方面：（1）对巨噬细胞功能、NK细胞、T/B淋巴细胞进行调节；（2）激活淋巴细胞的免疫反应；（3）激活补体系统。
传统的提取方法是水提醇沉，水提醇沉的原理是利用某些成分在水和醇中的溶解度差异，加入醇后使其溶解度变小而沉淀，一般来说水提会将药物中的大极性物质都提出来比如多糖、蛋白质、水溶性生物碱、淀粉等。但是传统的方式对含有硫酸根的硫化多糖的活性造成一定的影响。
发明内容
本发明的目的是提供一种植物多糖双水相萃取方法，通过双水相萃取的方法实现，对植物中的多糖进行提取的效果，另外针对植物中含有的硫酸化多糖，通过复配的活性保持剂的添加在进行提取的过程中，最大程度的保持了硫酸化多糖的活性，提升了提取的多糖作为营养添加剂的生物活性。
为实现上述效果，本发明公开了一种植物多糖双水相萃取方法，使用双水相萃取方法，其特征在于所述双水相萃取方法包括如下步骤：
（1）.植物原料粉碎，将植物原料进行破碎至一定细度；
（2）.双液相萃取，配置双水相体系萃取液，将上述步骤粉碎的植物原料加入进行浸提萃取；
（3）.超声搅拌浸提，向步骤2的萃取体系中加入活性保持剂，加入量为步骤2混合物总重量的0.1%~1%；所述活性保持剂含有氯磺酸，混合均匀后进行浸提；
（4）.分离，将萃取完成后的分相溶液进行分离，取上相浸提液，减压浓缩后冷冻干燥获得植物多糖。
进一步的，其中所述活性保持剂为氯磺酸与乙酸按照1：（1~10）重量比例配合后加入十倍重量的水制得。
进一步的，其中原料粉碎后在进行双液相萃取之前还经过脱脂处理，通过丙酮浸泡后烘干实现。
进一步的，其中所述步骤2的双水相体系萃取液和所述植物原料的混合质量比例为100：（20-100）。
进一步的，其中所述步骤3中超声浸提的时间为2-4小时，浸提的温度不超过70℃。
进一步的，其中所述活性保持剂即配即用。
进一步的，其中所述双水相体系萃取液为硫酸铵-乙醇体系的双水相体系萃取液。
进一步的，其中所述步骤4中上相浸提液中加入无水乙醇对无机盐进行分离。
本发明的有益效果在于：
本发明使用双水相萃取的方式，避免了水提醇沉的方法对多糖活性的损害，另外创造性的通过使用复配的含有氯磺酸的活性保持剂，能够进一步对多糖尤其是硫化多糖的活性进行最大化的保持。实现了高效提取植物中多糖的效果。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一:
一种植物多糖双水相萃取方法，使用双水相萃取方法，其特征在于所述双水相萃取方法包括如下步骤：
（1）.植物原料粉碎，将植物原料进行破碎过50目筛网；原料粉碎后在进行双液相萃取之前还经过脱脂处理，通过丙酮浸泡后烘干实现；
（2）.双液相萃取，配置硫酸铵-乙醇体系的双水相体系萃取液，将上述步骤粉碎的植物原料50g加入进行浸提萃取；双水相体系萃取液和所述植物原料的混合质量比例为100：40；
（3）.超声搅拌浸提，向步骤2的萃取体系中加入活性保持剂，加入量为步骤2混合物总重量的0.2%；所述活性保持剂含有氯磺酸，混合均匀后进行浸提；超声浸提的时间为3小时，浸提的温度不超过40℃
（4）.分离，将萃取完成后的分相溶液进行分离，取上相浸提液，减压浓缩后冷冻干燥获得植物多糖。
实施例二:
一种植物多糖双水相萃取方法，使用双水相萃取方法，其特征在于所述双水相萃取方法包括如下步骤：
（1）.植物原料粉碎，将植物原料进行破碎过50目筛网；原料粉碎后在进行双液相萃取之前还经过脱脂处理，通过丙酮浸泡后烘干实现；
（2）.双液相萃取，配置硫酸铵-乙醇体系的双水相体系萃取液，将上述步骤粉碎的植物原料50g加入进行浸提萃取；双水相体系萃取液和所述植物原料的混合质量比例为100：40；
（3）.超声搅拌浸提，向步骤2的萃取体系中加入活性保持剂，加入量为步骤2混合物总重量的0.5%；所述活性保持剂含有氯磺酸，混合均匀后进行浸提；超声浸提的时间为4小时，浸提的温度不超过40℃
（4）.分离，将萃取完成后的分相溶液进行分离，取上相浸提液，减压浓缩后冷冻干燥获得植物多糖。
实施例三:
一种植物多糖双水相萃取方法，使用双水相萃取方法，其特征在于所述双水相萃取方法包括如下步骤：
（1）.植物原料粉碎，将植物原料进行破碎过50目筛网；原料粉碎后在进行双液相萃取之前还经过脱脂处理，通过丙酮浸泡后烘干实现；
（2）.双液相萃取，配置硫酸铵-乙醇体系的双水相体系萃取液，将上述步骤粉碎的植物原料50g加入进行浸提萃取；双水相体系萃取液和所述植物原料的混合质量比例为100：40；
（3）.超声搅拌浸提，向步骤2的萃取体系中加入活性保持剂，加入量为步骤2混合物总重量的0.2%；所述活性保持剂含有氯磺酸，混合均匀后进行浸提；超声浸提的时间为3小时，浸提的温度不超过40℃
（4）.分离，将萃取完成后的分相溶液进行分离，取上相浸提液，减压浓缩后冷冻干燥获得植物多糖。上相浸提液中加入无水乙醇对无机盐进行分离。
对比例一：
一种植物多糖双水相萃取方法，使用双水相萃取方法，其特征在于所述双水相萃取方法包括如下步骤：
（1）.植物原料粉碎，将植物原料进行破碎过50目筛网；原料粉碎后在进行双液相萃取之前还经过脱脂处理，通过丙酮浸泡后烘干实现；
（2）.双液相萃取，配置硫酸铵-乙醇体系的双水相体系萃取液，将上述步骤粉碎的植物原料50g加入进行浸提萃取；双水相体系萃取液和所述植物原料的混合质量比例为100：40；
（3）.超声搅拌浸提，超声浸提的时间为3小时，浸提的温度不超过40℃；
（4）.分离，将萃取完成后的分相溶液进行分离，取上相浸提液，减压浓缩后冷冻干燥获得植物多糖。上相浸提液中加入无水乙醇对无机盐进行分离。
利用苯酚-硫酸法测定多糖含量,其原理是多糖在硫酸的作用下先水解成单糖分子,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚发生显色反应,并且在490nm处吸光度与含糖量呈线性关系,由此可测样品中多糖。
利用硫酸钡比浊法测定其硫酸基含量，其原理是利用酸水解,将硫酸基从糖链上脱掉,在BaCl2 -明胶溶液中,硫酸基与钡离子结合,保持悬浮状态。该悬浮液在360nm处吸光度与硫酸基含量在--定范围内线性相关,由此可测样品中硫酸基含量。
由数据可见，根据实施例一和实施例二和对比利一的对比随着活性保持剂的添加量增加，多糖的提取量和硫酸根含量都随之升高，对比例未加入活性保持剂，提取量和硫酸根含量都下降，实施例三和对比例一在步骤四还添加了醇沉无机盐的步骤，虽然最终固体量下降，但是多糖的纯度有所提高。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (8)
1.一种植物多糖双水相萃取方法，其特征在于使用双水相萃取方法，其特征在于所述双水相萃取方法包括如下步骤：
（1）.植物原料粉碎，将植物原料进行破碎至一定细度；
（2）.双液相萃取，配置双水相体系萃取液，将上述步骤粉碎的植物原料加入进行浸提萃取；
（3）.超声搅拌浸提，向步骤2的萃取体系中加入活性保持剂，加入量为步骤2混合物总重量的0.1%~1%；所述活性保持剂含有氯磺酸，混合均匀后进行浸提；
（4）.分离，将萃取完成后的分相溶液进行分离，取上相浸提液，减压浓缩后冷冻干燥获得植物多糖。
2.根据权利要求1所述的一种植物多糖双水相萃取方法，其特征在于：所述活性保持剂为氯磺酸与乙酸按照1：（1~10）重量比例配合后加入十倍重量的水制得。
3.根据权利要求1所述的一种植物多糖双水相萃取方法，其特征在于：原料粉碎后在进行双液相萃取之前还经过脱脂处理，通过丙酮浸泡后烘干实现。
4.根据权利要求1所述的一种植物多糖双水相萃取方法，其特征在于：所述步骤2的双水相体系萃取液和所述植物原料的混合质量比例为100：（20-100）。
5.根据权利要求1所述的一种植物多糖双水相萃取方法，其特征在于：所述步骤3中超声浸提的时间为2-4小时，浸提的温度不超过70℃。
6.根据权利要求1所述的一种植物多糖双水相萃取方法，其特征在于：所述活性保持剂即配即用。
7.根据权利要求1所述的一种植物多糖双水相萃取方法，其特征在于：所述双水相体系萃取液为硫酸铵-乙醇体系的双水相体系萃取液。
8.根据权利要求1所述的一种植物多糖双水相萃取法发，其特征在于：所述步骤4中上相浸提液中加入无水乙醇对无机盐进行分离。
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