CN112772411A - 一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法及应用 - Google Patents

一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明适用于玉米育种技术领域，提供了一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法及应用。利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，包括以下步骤：诱导剂选择；分区；诱导剂处理，包括以下步骤：各区在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入各区对应的诱导剂，然后套回纸袋；诱导剂筛选；最优诱导剂处理；收获。本发明通过对诱导剂的改进来解决试剂使用上的安全问题、花粉污染问题、操作效率问题，在保证安全的同时改进诱导效果，可加快玉米自交系的选育速度，且诱导率高，能保证种质资源遗传的稳定性。

Description

一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法及应用
技术领域
本发明属于玉米育种技术领域，尤其涉及一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法及应用。
背景技术
玉米自交系选育的常规方法，完成一个自交系选育至少要经过7代以上的连续自交，对于遗传背景复杂的材料甚至要10代以上。为了加快选育速度，传统方法是采用诱导系进行诱导单倍体后加倍或利用秋水仙素等单一化学试剂诱导法。
但是诱导系诱导法存在单倍体籽粒难挑选和难加倍等问题，而利用秋水仙素等化学诱导法存在试剂致癌、诱导率偏低、花粉污染、操作速度缓慢以及效率低等问题。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法及应用，旨在解决背景技术中指出的现有技术存在的问题。
本发明实施例是这样实现的，一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，包括以下步骤：
诱导剂选择；
分区：田间按照诱导剂数量进行分区；
诱导剂处理，包括以下步骤：各区在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入各区对应的诱导剂，然后套回纸袋；
诱导剂筛选：收获后计算各区的诱导率，得到最优诱导剂；
最优诱导剂处理，包括以下步骤：在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入最优诱导剂，然后套回纸袋；
收获：成熟时收获果穗，获得基因型纯合的二倍体种子，经下一代鉴定得到纯系。
作为本发明实施例的另一种优选方案，诱导剂选择中：
复方A包括体积比为1：(1～1.2)的氟乐灵与青鲜素；
复方B包括体积比为1：(1～1.2)的氟乐灵与戊炔草胺；
复方C包括体积比为1：(1～1.2)：(1～1.2)的氟乐灵、青鲜素与戊炔草胺；
复方D包括体积比为1：(1～1.2)的青鲜素与戊炔草胺。
作为本发明实施例的另一种优选方案，设置两组对照，对照A包括氟乐灵，对照B包括秋水仙素。
作为本发明实施例的另一种优选方案，所述注入诱导剂的300～500倍液1.5～2.5ml。
作为本发明实施例的另一种优选方案，注入最优诱导剂的300～500倍液1.5～2.5ml。
作为本发明实施例的另一种优选方案，吐丝3～5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝。
作为本发明实施例的另一种优选方案，所述诱导糯质玉米的最优诱导剂为复方B，诱导率达61.4％。
作为本发明实施例的另一种优选方案，所述诱导普通玉米的最优诱导剂为复方D，诱导率达57.9％。
本发明实施例的另一目的在于提供一种所述的育种方法在糯质玉米育种中的应用。
本发明实施例的另一目的在于提供一种所述的育种方法在普通玉米育种中的应用。
本发明通过对诱导剂的改进来提高诱导率，可加快玉米自交系的选育速度，且能保证种质资源遗传的稳定性；本发明可解决试剂使用上的安全问题、花粉污染问题、操作效率问题，在保证安全的同时改进诱导效果。本发明在实际操作过程中可实现全天候作业，操作简单、处理速度快、适合规模化应用，育种成本可大大降低。
附图说明
图1为实施例1不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
图2为实施例2不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
图3为实施例3不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
图4为实施例4不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
图5为实施例5不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
图6为实施例6不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
图7为实施例7不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
图8为实施例8不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
图9为实施例9不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
图10为实施例10不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下结合具体实施例对本发明的具体实现进行详细描述。
实施例1
该实施例提供了一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，包括以下步骤：
(1)诱导剂选择：
复方A包括体积比为1：1的氟乐灵与青鲜素；
复方B包括体积比为1：1的氟乐灵与戊炔草胺；
复方C包括体积比为1：1：1的氟乐灵、青鲜素与戊炔草胺；
复方D包括体积比为1：1的青鲜素与戊炔草胺；
设置两组对照，对照A包括氟乐灵，对照B包括秋水仙素；
(2)分区：田间按照诱导剂数量进行分区，分成复方A区、复方B区、复方C区、复方D区、对照A区、对照B区；
(3)操作处理：各区在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝3天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入各区对应的诱导剂(注入诱导剂的300倍液1.5ml)，然后套回纸袋；
(4)诱导剂筛选：收获后计算各区的诱导率，得到诱导糯质玉米和诱导普通玉米的最优诱导剂；
(5)最优诱导剂处理：在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝3天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入最优诱导剂(注入诱导剂的300倍液1.5ml)，然后套回纸袋；
(6)收获：成熟时收获果穗，获得基因型纯合的二倍体种子，经下一代鉴定得到纯系。
2019年得到278粒糯玉米籽粒，海南加代自交，收获278个果穗，2020年种成穗行，经田间鉴定，淘汰88个穗行，得到190个自交系。
实施例2
该实施例提供了一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，包括以下步骤：
(1)诱导剂选择：
复方A包括体积比为1：1.2的氟乐灵与青鲜素；
复方B包括体积比为1：1.2的氟乐灵与戊炔草胺；
复方C包括体积比为1：1.2：1.2的氟乐灵、青鲜素与戊炔草胺；
复方D包括体积比为1：1.2的青鲜素与戊炔草胺；
设置两组对照，对照A包括氟乐灵，对照B包括秋水仙素；
(2)分区：田间按照诱导剂数量进行分区，分成复方A区、复方B区、复方C区、复方D区、对照A区、对照B区；
(3)操作处理：各区在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入各区对应的诱导剂(注入诱导剂的500倍液2ml)，然后套回纸袋；
(4)诱导剂筛选：收获后计算各区的诱导率，得到诱导糯质玉米和诱导普通玉米的最优诱导剂；
(5)最优诱导剂处理：在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入最优诱导剂(注入诱导剂的500倍液2ml)，然后套回纸袋；
(6)收获：成熟时收获果穗，获得基因型纯合的二倍体种子，经下一代鉴定得到纯系。
实施例3
该实施例提供了一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，包括以下步骤：
(1)诱导剂选择：
复方A包括体积比为1：1.1的氟乐灵与青鲜素；
复方B包括体积比为1：1.1的氟乐灵与戊炔草胺；
复方C包括体积比为1：1.1：1.1的氟乐灵、青鲜素与戊炔草胺；
复方D包括体积比为1：1.1的青鲜素与戊炔草胺；
设置两组对照，对照A包括氟乐灵，对照B包括秋水仙素；
(2)分区：田间按照诱导剂数量进行分区，分成复方A区、复方B区、复方C区、复方D区、对照A区、对照B区；
(3)操作处理：各区在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝4天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入各区对应的诱导剂(注入诱导剂的400倍液2.5ml)，然后套回纸袋；
(4)诱导剂筛选：收获后计算各区的诱导率，得到诱导糯质玉米和诱导普通玉米的最优诱导剂；
(5)最优诱导剂处理：在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝4天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入最优诱导剂(注入诱导剂的400倍液2.5ml)，然后套回纸袋；
(6)收获：成熟时收获果穗，获得基因型纯合的二倍体种子，经下一代鉴定得到纯系。
实施例4
该实施例提供了一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，包括以下步骤：
(1)诱导剂选择：
复方A包括体积比为1：1.15的氟乐灵与青鲜素；
复方B包括体积比为1：1.15的氟乐灵与戊炔草胺；
复方C包括体积比为1：1.15：1.15的氟乐灵、青鲜素与戊炔草胺；
复方D包括体积比为1：1.15的青鲜素与戊炔草胺；
设置两组对照，对照A包括氟乐灵，对照B包括秋水仙素；
(2)分区：田间按照诱导剂数量进行分区，分成复方A区、复方B区、复方C区、复方D区、对照A区、对照B区；
(3)操作处理：各区在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝4.5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入各区对应的诱导剂(注入诱导剂的320倍液1.6ml)，然后套回纸袋；
(4)诱导剂筛选：收获后计算各区的诱导率，得到诱导糯质玉米和诱导普通玉米的最优诱导剂；
(5)最优诱导剂处理：在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝4.5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入最优诱导剂(注入诱导剂的320倍液1.6ml)，然后套回纸袋；
(6)收获：成熟时收获果穗，获得基因型纯合的二倍体种子，经下一代鉴定得到纯系。
实施例5
该实施例提供了一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，包括以下步骤：
(1)诱导剂选择：
复方A包括体积比为1：1.18的氟乐灵与青鲜素；
复方B包括体积比为1：1.18的氟乐灵与戊炔草胺；
复方C包括体积比为1：1.18：1.18的氟乐灵、青鲜素与戊炔草胺；
复方D包括体积比为1：1.18的青鲜素与戊炔草胺；
设置两组对照，对照A包括氟乐灵，对照B包括秋水仙素；
(2)分区：田间按照诱导剂数量进行分区，分成复方A区、复方B区、复方C区、复方D区、对照A区、对照B区；
(3)操作处理：各区在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝3.5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入各区对应的诱导剂(注入诱导剂的365倍液1.7ml)，然后套回纸袋；
(4)诱导剂筛选：收获后计算各区的诱导率，得到诱导糯质玉米和诱导普通玉米的最优诱导剂；
(5)最优诱导剂处理：在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝4.5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入最优诱导剂(注入诱导剂的365倍液1.7ml)，然后套回纸袋；
(6)收获：成熟时收获果穗，获得基因型纯合的二倍体种子，经下一代鉴定得到纯系。
实施例6
该实施例提供了一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，包括以下步骤：
(1)诱导剂选择：
复方A包括体积比为1：1.12的氟乐灵与青鲜素；
复方B包括体积比为1：1.12的氟乐灵与戊炔草胺；
复方C包括体积比为1：1.12：1.12的氟乐灵、青鲜素与戊炔草胺；
复方D包括体积比为1：1.12的青鲜素与戊炔草胺；
设置两组对照，对照A包括氟乐灵，对照B包括秋水仙素；
(2)分区：田间按照诱导剂数量进行分区，分成复方A区、复方B区、复方C区、复方D区、对照A区、对照B区；
(3)操作处理：各区在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝3天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入各区对应的诱导剂(注入诱导剂的340倍液1.9ml)，然后套回纸袋；
(4)诱导剂筛选：收获后计算各区的诱导率，得到诱导糯质玉米和诱导普通玉米的最优诱导剂；
(5)最优诱导剂处理：在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝3天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入最优诱导剂(注入诱导剂的340倍液1.9ml)，然后套回纸袋；
(6)收获：成熟时收获果穗，获得基因型纯合的二倍体种子，经下一代鉴定得到纯系。
实施例7
该实施例提供了一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，包括以下步骤：
(1)诱导剂选择：
复方A包括体积比为1：1.16的氟乐灵与青鲜素；
复方B包括体积比为1：1.16的氟乐灵与戊炔草胺；
复方C包括体积比为1：1.16：1.16的氟乐灵、青鲜素与戊炔草胺；
复方D包括体积比为1：1.16的青鲜素与戊炔草胺；
设置两组对照，对照A包括氟乐灵，对照B包括秋水仙素；
(2)分区：田间按照诱导剂数量进行分区，分成复方A区、复方B区、复方C区、复方D区、对照A区、对照B区；
(3)操作处理：各区在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入各区对应的诱导剂(注入诱导剂的380倍液2.1ml)，然后套回纸袋；
(4)诱导剂筛选：收获后计算各区的诱导率，得到诱导糯质玉米和诱导普通玉米的最优诱导剂；
(5)最优诱导剂处理：在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入最优诱导剂(注入诱导剂的380倍液2.1ml)，然后套回纸袋；
(6)收获：成熟时收获果穗，获得基因型纯合的二倍体种子，经下一代鉴定得到纯系。
实施例8
该实施例提供了一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，包括以下步骤：
(1)诱导剂选择：
复方A包括体积比为1：1.17的氟乐灵与青鲜素；
复方B包括体积比为1：1.17的氟乐灵与戊炔草胺；
复方C包括体积比为1：1.17：1.17的氟乐灵、青鲜素与戊炔草胺；
复方D包括体积比为1：1.17的青鲜素与戊炔草胺；
设置两组对照，对照A包括氟乐灵，对照B包括秋水仙素；
(2)分区：田间按照诱导剂数量进行分区，分成复方A区、复方B区、复方C区、复方D区、对照A区、对照B区；
(3)操作处理：各区在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝4.5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入各区对应的诱导剂(注入诱导剂的410倍液2.3ml)，然后套回纸袋；
(4)诱导剂筛选：收获后计算各区的诱导率，得到诱导糯质玉米和诱导普通玉米的最优诱导剂；
(5)最优诱导剂处理：在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝4.5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入最优诱导剂(注入诱导剂的410倍液2.3ml)，然后套回纸袋；
(6)收获：成熟时收获果穗，获得基因型纯合的二倍体种子，经下一代鉴定得到纯系。
实施例9
该实施例提供了一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，包括以下步骤：
(1)诱导剂选择：
复方A包括体积比为1：1.19的氟乐灵与青鲜素；
复方B包括体积比为1：1.12的氟乐灵与戊炔草胺；
复方C包括体积比为1：1.19：1.19的氟乐灵、青鲜素与戊炔草胺；
复方D包括体积比为1：1.19的青鲜素与戊炔草胺；
设置两组对照，对照A包括氟乐灵，对照B包括秋水仙素；
(2)分区：田间按照诱导剂数量进行分区，分成复方A区、复方B区、复方C区、复方D区、对照A区、对照B区；
(3)操作处理：各区在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝4天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入各区对应的诱导剂(注入诱导剂的450倍液1.9ml)，然后套回纸袋；
(4)诱导剂筛选：收获后计算各区的诱导率，得到诱导糯质玉米和诱导普通玉米的最优诱导剂；
(5)最优诱导剂处理：在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝4天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入最优诱导剂(注入诱导剂的450倍液1.9ml)，然后套回纸袋；
(6)收获：成熟时收获果穗，获得基因型纯合的二倍体种子，经下一代鉴定得到纯系。
实施例10
该实施例提供了一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，包括以下步骤：
(1)诱导剂选择：
复方A包括体积比为1：1.14的氟乐灵与青鲜素；
复方B包括体积比为1：1.14的氟乐灵与戊炔草胺；
复方C包括体积比为1：1.14：1.14的氟乐灵、青鲜素与戊炔草胺；
复方D包括体积比为1：1.14的青鲜素与戊炔草胺；
设置两组对照，对照A包括氟乐灵，对照B包括秋水仙素；
(2)分区：田间按照诱导剂数量进行分区，分成复方A区、复方B区、复方C区、复方D区、对照A区、对照B区；
(3)操作处理：各区在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝3.5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入各区对应的诱导剂(注入诱导剂的480倍液2.4ml)，然后套回纸袋；
(4)诱导剂筛选：收获后计算各区的诱导率，得到诱导糯质玉米和诱导普通玉米的最优诱导剂；
(5)最优诱导剂处理：在吐丝前对玉米雌穗严格套袋，吐丝3.5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入最优诱导剂(注入诱导剂的480倍液2.4ml)，然后套回纸袋；
(6)收获：成熟时收获果穗，获得基因型纯合的二倍体种子，经下一代鉴定得到纯系。
实验例1
图1为实施例1不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
2019-2020年，利用本发明处理普通玉米品种TK601，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为29.2％、36.4％、53.5％、57.9％、20.0％、23.1％，以复方D的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高189.5％、150.6％。
2019-2020年，利用本发明处理糯玉米品种万糯2000，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为40.5％、61.4％、49.0％、52.9％、33.3％、15.4％，以复方B的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高84.4％、298.7％。
实验例2
图2为实施例2不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
2019-2020年，利用本发明处理普通玉米品种TK601，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为30.0％、37.5％、46.2％、53.8％、24.7％、23.3％，以复方D的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高117.8％、130.9％。
2019-2020年，利用本发明处理糯玉米品种万糯2000，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为37.5％、59.6％、50.3％、51.5％、35.8％、28.9％，以复方B的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高66.4％、106.2％。
2019年得到188粒糯玉米籽粒，海南加代自交，收获178个果穗，2020年种成穗行，经田间鉴定，淘汰69个穗行，得到109个自交系；
实验例3
图3为实施例3不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
2019-2020年，利用本发明处理普通玉米品种TK601，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为33.3％、38.4％、44.4％、56.3％、27.9％、25.4％，以复方D的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高101.8％、121.7％。
2019-2020年，利用本发明处理糯玉米品种万糯2000，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为34.6％、54.5％、48.9％、49.6％、32.8％、31.3％，以复方B的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高66.2％、74.1％。
2019年得到205粒糯玉米籽粒，海南加代自交，收获190个果穗，2020年种成穗行，经田间鉴定，淘汰51个穗行，得到149个自交系；
实验例4
图4为实施例4不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
2019-2020年，利用本发明处理普通玉米品种TK601，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为37.3％、41.8％、50.7％、55.3％、36.4％、35.7％，以复方D的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高51.9％、54.9％。
2019-2020年，利用本发明处理糯玉米品种万糯2000，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为40.5％、57.6％、53.3％、47.4％、37.1％、35.0％，以复方B的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高55.3％、64.6％。
2019年得到246粒糯玉米籽粒，海南加代自交，收获223个果穗，2020年种成穗行，经田间鉴定，淘汰85个穗行，得到138个自交系；
实验例5
图5为实施例5不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
2019-2020年，利用本发明处理普通玉米品种TK601，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为36.6％、41.7％、45.0％、53.9％、28.6％、25.0％，以复方D的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高88.5％、115.6％。
2019-2020年，利用本发明处理糯玉米品种万糯2000，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为37.5％、57.1％、51.4％、47.4％、36.0％、32.4％，以复方B的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高58.6％、76.2％。
2019年得到245粒糯玉米籽粒，海南加代自交，收获218个果穗，2020年种成穗行，经田间鉴定，淘汰79个穗行，得到139个自交系；
实验例6
图6为实施例6不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
2019-2020年，利用本发明处理普通玉米品种TK601，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为41.8％、48.4％、45.4％、54.3％、29.2％、30.4％，以复方D的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高86.0％、78.6％。
2019-2020年，利用本发明处理糯玉米品种万糯2000，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为33.3％、60.2％、57.0％、46.8％、33.8％、30.0％，以复方B的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高78.1％、100.7％。
2019年得到230粒糯玉米籽粒，海南加代自交，收获225个果穗，2020年种成穗行，经田间鉴定，淘汰55个穗行，得到170个自交系；
实验例7
图7为实施例7不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
2019-2020年，利用本发明处理普通玉米品种TK601，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为29.5％、42.9％、42.8％、52.1％、24.9％、26.3％，以复方D的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高109.2％、98.1％。
2019-2020年，利用本发明处理糯玉米品种万糯2000，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为43.0％、54.8％、47.2％、46.6％、33.3％、30.0％，以复方B的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高64.6％、82.7％。
2019年得到159粒糯玉米籽粒，海南加代自交，收获150个果穗，2020年种成穗行，经田间鉴定，淘汰56个穗行，得到94个自交系；
实验例8
图8为实施例8不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
2019-2020年，利用本发明处理普通玉米品种TK601，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为43.8％、44.7％、44.4％、54.6％、25.4％、29.3％，以复方D的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高115.0％、86.3％。
2019-2020年，利用本发明处理糯玉米品种万糯2000，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为44.6％、56.2％、53.7％、50.4％、30.8％、33.3％，以复方B的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高82.5％、68.8％。
2019年得到281粒糯玉米籽粒，海南加代自交，收获267个果穗，2020年种成穗行，经田间鉴定，淘汰92个穗行，得到175个自交系；
实验例9
图9为实施例9不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
2019-2020年，利用本发明处理普通玉米品种TK601，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为31.3％、41.7％、46.1％、55.6％、22.7％、26.6％，以复方D的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高144.9％、109.0％。
2019-2020年，利用本发明处理糯玉米品种万糯2000，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为40.0％、60.0％、52.5％、52.4％、37.3％、35.4％，以复方B的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高60.9％、69.5％。
2019年得到231粒糯玉米籽粒，海南加代自交，收获215个果穗，2020年种成穗行，经田间鉴定，淘汰68个穗行，得到147个自交系；
实验例10
图10为实施例10不同诱导剂处理对玉米诱导株率的影响结果示意图。
2019-2020年，利用本发明处理普通玉米品种TK601，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为34.6％、48.7％、50.1％、52.9％、29.7％、27.6％，以复方D的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高78.1％、91.7％。
2019-2020年，利用本发明处理糯玉米品种万糯2000，复方A、复方B、复方C、复方D、对照A、对照B的诱导株率分别为37.5％、53.3％、46.9％、46.7％、26.3％、27.2％，以复方B的诱导株率最高，较对照A、对照B分别高102.7％、96.0％。
2019年得到330粒糯玉米籽粒，海南加代自交，收获303个果穗，2020年种成穗行，经田间鉴定，淘汰113个穗行，得到190个自交系。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，其特征在于，包括以下步骤：
诱导剂选择；
分区：田间按照诱导剂数量进行分区；
诱导剂处理，包括以下步骤：各区在吐丝前对玉米雌穗套袋，吐丝后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入各区对应的诱导剂，然后套回纸袋；
诱导剂筛选：收获后计算各区的诱导率，得到最优诱导剂；
最优诱导剂处理，包括以下步骤：在吐丝前对玉米雌穗套袋，吐丝后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝，当感觉到苞叶内花丝被掐断时，慢慢拔出花丝形成空腔，注入最优诱导剂，然后套回纸袋；
收获：成熟时收获果穗，获得基因型纯合的二倍体种子，经下一代鉴定得到纯系。
2.根据权利要求1所述的利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，其特征在于，诱导剂选择中：
复方A包括体积比为1：(1～1.2)的氟乐灵与青鲜素；
复方B包括体积比为1：(1～1.2)的氟乐灵与戊炔草胺；
复方C包括体积比为1：(1～1.2)：(1～1.2)的氟乐灵、青鲜素与戊炔草胺；
复方D包括体积比为1：(1～1.2)的青鲜素与戊炔草胺。
3.根据权利要求2所述的利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，其特征在于，设置两组对照，对照A包括氟乐灵，对照B包括秋水仙素。
4.根据权利要求1所述的利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，其特征在于，注入各区诱导剂的300～500倍液1.5～2.5ml。
5.根据权利要求1所述的利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，其特征在于，注入最优诱导剂的300～500倍液1.5～2.5ml。
6.根据权利要求1所述的利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，其特征在于，诱导剂处理和最优诱导剂处理中，吐丝3～5天后，在苞叶顶端处用尖嘴钳夹切花丝。
7.根据权利要求2或3所述的利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，其特征在于，诱导剂筛选中，诱导糯质玉米的最优诱导剂为复方B。
8.根据权利要求2或3所述的利用混合试剂诱导玉米无融合生殖的育种方法，其特征在于，诱导剂筛选中，诱导普通玉米的最优诱导剂为复方D。
9.一种如权利要求1～8任一所述的育种方法在糯质玉米育种中的应用。
10.一种如权利要求1～8任一所述的育种方法在普通玉米育种中的应用。
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