CN112748194A - 一种食品中农药残留的检测方法 - Google Patents

一种食品中农药残留的检测方法 Download PDF

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Abstract

本申请涉及食品检测的领域，具体公开了一种食品中农药残留的检测方法。一种食品中农药残留的检测方法为：S1.食品样品前处理：S1.1.食品样品溶液制备：将待检测的食品制备为样品溶液；S1.2.食品样品萃取：用磁性吸附剂对样品溶液进行萃取；S2.取S1.2中的萃取得到的上清液用液相色谱‑串联质谱法进行测定；磁性吸附剂为用钛酸四丁酯修饰核‑壳结构的Fe3O4@TpBD纳米粒子制得，其中核‑壳结构Fe3O4@TpBD纳米粒子是由1,3,5‑三甲酰基间苯三酚与联苯二胺包裹Fe3O4颗粒制得。本申请的检测方法具有简化食品中农药残留检测前处理过程的效果。

Description

一种食品中农药残留的检测方法
技术领域
本申请涉及食品检测的领域，更具体地说，它涉及一种食品中农药残留的检测方法。
背景技术
在果蔬等农作物的生长过程中往往会对其施加杀菌剂、杀虫剂等农药，因为农药的稳定性，迁移性，农药会在果蔬中残留，并随食物链进入人体，影响人类的身体健康。
目前，对于食品中杀虫剂残留的检测分析方法包括高效液相色谱法、气-质联用、液-质联用等，在检测食品中的农药残留时，由于通常样品基质较复杂，农药残留水平低于许多分析仪器的检测限，为了减小基质对测定的干扰，提高检测灵敏度，样品前处理是一个必不可少的过程。
现有的关于检测农药残留时所用的样品前处理技术很多，如固相萃取、液液萃取、固相微萃取、搅拌棒吸附萃取等，但针对农药检测的传统技术的样品前处理过程中，往往需要复杂的前处理操作步骤。
发明内容
为了简化食品中农药残留检测前处理过程，本申请提供一种食品中农药残留的检测方法。
本申请提供一种食品中农药残留的检测方法，采用如下的技术方案：
一种食品中农药残留的检测方法，包括以下步骤：
S1.食品样品前处理：
S1.1.食品样品溶液制备：将待检测的食品制备为样品溶液；
S1.2.食品样品萃取：向40-60ml食品样品溶液中加入20-30mg磁性吸附剂，振荡反应35-45min，通过外部磁场进行磁性分离并去除上清液，加入0.8-1.2mL乙腈溶液超声洗脱4-6min，磁性分离去除磁性吸附剂，过滤得到上清液；
S2.取S1.2中的上清液用液相色谱-串联质谱法进行测定；
磁性吸附剂为用钛酸四丁酯修饰核-壳结构的Fe3O4@TpBD纳米粒子制得，其中核-壳结构Fe3O4@TpBD纳米粒子是由1,3,5-三甲酰基间苯三酚与联苯二胺包裹Fe3O4颗粒制得。
通过采用上述技术方案，将食品样品溶液与磁性吸附剂混合，并充分振荡，然后通过外部磁场进行分离，再进行超声洗脱过滤，即可完成上机检测之间的前处理步骤，相比于传统的经过净化柱洗涤、浓缩、氮吹、过滤的前处理步骤，本申请的前处理步骤更加简便、容易操作，且相对于传统前处理方法，本申请的方法使用的有机溶剂少，对环境的影响更小；另外本申请的检测方法回收率良好。
磁性吸附剂与农药之间存在π-π堆积相互作用，同时在二氧化钛的包裹作用下增加了磁性吸附剂的疏水性，使磁性吸附剂的性能更好。
优选的，所述S1.1.食品样品溶液制备：将待检测食品切碎并均化，称取45-55g均质化的食品以2800-3000rpm离心5-7min，固液分离后，分别收集上清液与固体残留物；向固体残留物中加入5-7mL超纯水并离心，固液分离后再次收集上清液，将所有上清液合并在一起，并过滤，向过滤后的上清液转中加入水，上清液与水的总体积为90-110mL，得到食品样品溶液。
通过采用上述技术方案，先将切碎的待检测食品进行离心并进行固液分离，固液分离后的上清液进行收集，固液分离后的固体物质再次加水稀释离心并收集上清液，两次上清合并后过滤，收集过滤后的液体并加水稀释得到的样品溶液即可在磁性吸附剂的作用下进行萃取，与使用传统的前处理方法净化前对食品样品进行提取处理相比，不需要加入替他物质以及浓缩等步骤，使得前处理步骤更加简便、容易操作。
优选的，所述磁性吸附剂的制备方法为：
A1.制备Fe3O4@TpBD粒子：取50-60mgFe3O4颗粒加入2.5-3mL均三甲苯与二恶烷的混合液中，均三甲苯与二恶烷的体积比为1：(1-1.2)，向混合液中加入20-24mg1,3,5-三甲酰基间苯三酚与27.6-33.2mg联苯二胺，然后再向混合液中加入0.5-0.6mL乙酸，并超声3-5min，将混合液在90-130℃条件下反应23-30h，用二甲基甲酰胺洗涤反应产物至上清液澄清后，再次用二甲基甲酰胺与丙酮依次洗涤2-4次，最后将产物在55-65℃条件下真空干燥，得到Fe3O4@TpBD粒子；
A2.用钛酸四丁酯修饰Fe3O4@TpBD粒子制备Fe3O4@mTiO2@TpBD磁性吸附剂：取0.1-0.2gFe3O4@TpBD粒子分散于30-60mL无水甲醇中，再加入5-10ml钛酸四丁酯，室温下反应72-84h，磁性分离后，产物用二甲基甲酰胺、甲醇依次洗涤3-5次，最后将产物在45-55℃真空条件下干燥，得到磁性吸附剂。
通过采用上述技术方案，先合成核-壳结构的Fe3O4@TpBD粒子，然后再用钛酸四丁酯修饰Fe3O4@TpBD粒子制备Fe3O4@mTiO2@TpBD磁性吸附剂，合成核-壳结构的Fe3O4@TpBD粒子直接通过Fe3O4颗粒与1,3,5-三甲酰基间苯三酚以及联苯二胺进行反应，相比于制备Fe3O4@SiO2粒子→用3-氨丙基三乙氧基硅烷对Fe3O4@SiO2粒子进行氨基官能团化，得到Fe3O4@SiO2-NH2→将1,3,5-三甲酰基间苯三酚接枝到Fe3O4@SiO2-NH2上，得到Fe3O4-Tp→用1,3,5-三甲酰基间苯三酚以及联苯二胺与Fe3O4-Tp反应得到Fe3O4@TpBD，本申请合成Fe3O4@TpBD的方法更为简便。
优选的，所述A1步骤中，Fe3O4颗粒的制备方法为：取1.4-2gFeCl3和0.47-0.67g柠檬酸钠加入到含有31-44mL乙二醇中，混合物超声分散8-10min，然后加热溶解完全；冷却至室温后加入2.5-5g醋酸钠，随后磁力40-50min，得到混合液，混合液在190-210℃下加热反应12-13h；反应结束后冷却至室温，产物用磁铁分离，并依次用水和乙醇洗涤三次，得到Fe3O4颗粒。
通过采用上述技术方案，用FeCl3与柠檬酸钠以及醋酸钠先后反应，制备复合要求的Fe3O4颗粒，且柠檬酸钠修饰后，使得Fe3O4颗粒的分散性更好。
优选的，所述S1.1步骤中将所有上清液合并在一起后，过滤时采用0.4-0.5μm的水膜进行过滤；S1.2步骤中磁性分离去除磁性吸附剂后，过滤时采用0.4-0.5μm的有机滤膜进行过滤。
通过采用上述技术方案，在此粒径下进行过滤可以防止后续检测过程中高效液相色谱的色谱柱被堵塞，S1.2步骤中因为加入了乙腈，而水系滤膜在有机溶剂中会溶解，所以选用有机滤膜。
优选的，所述S2中用液相色谱-串联质谱法进行测定时，流动相由乙腈和水组成，洗脱模式为梯度洗脱。
通过采用上述技术方案，采用等度洗脱模式，调节优化乙腈与水的比例也不易将目标分析物分离出来，采用梯度洗脱的模式可以优化目标分析物的灵敏度和分离度。
优选的，所述梯度洗脱过程为：0-(13-15)min时流动相比例为乙腈：水＝(1.85-3)：1，(13-15)-(35-37)min时升为乙腈：水＝(4-9)：1，(35-37)-(40-42)min时流动相比例为乙腈：水＝1：0。
通过采用上述技术方案，通过调节洗脱过程中乙腈与水之间比例和保留时间两个方面来优化梯度洗脱过程，以提高目标分析物的灵敏度和分离度。
优选的，所述洗脱过程中0-(13-15)min时，流动相的滴加速度为(0.2-0.4)ml/min；(13-15)min之后的滴加速度为(0.5-0.7)ml/min。
通过采用上述技术方案，流速不仅影响目标分析物的保留时间，也对目标分析物的分离度有一定的影响，根据洗脱过程中乙腈与水之间的比例以及保留时间调整合适的流动相滴加速度，以达到更好的目标分析物的灵敏度和分离度。
优选的，所述S2中用液相色谱-串联质谱法进行测定时，高效液相色谱色谱柱的柱温为34-36℃。
通过采用上述技术方案，色谱柱温度升高时，目标分析物的灵敏度有一定的增加，但考虑到长时间的高温会影响柱效，且会使色谱柱的寿命缩短。综合考虑，选择34-36℃的柱温，在达到较佳的目标分析物的灵敏度的同时减少对色谱柱的不利影响。
优选的，所述A1步骤中，将组分混合并超声分散后，混合液在115-125℃条件下反应23-25h。
通过采用上述技术方案，此合成温度与反应时间下制得的Fe3O4@TpBD粒子性能更佳。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、由于本申请采用磁性吸附剂对食品样品溶液进行磁固相萃取，得到可以用液相色谱-串联质谱检测的试液，简化食品中农药残留检测的前处理步骤，同时本申请的检测方法回收率与精密性良好。
2、本申请中优选采用合适的洗脱程序，达到更好的目标分析物的灵敏度和分离度。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。
原料和/或中间体的制备例
原料
均三甲苯：分析纯，≥99.0％成都市科隆化学品有限公司；
二恶烷：分析纯，≥98.0％北京百灵威科技有限公司；
1,3,5-三甲酰基间苯三酚：分析纯，≥99.0％上海腾骞生物科技有限公司；
联苯二胺：分析纯，≥99.0％上海阿拉丁生化科技股份有限公司；
二甲基甲酰胺；分析纯，≥99.0％濮阳市瑞科化工有限公司；
丙酮；四川航嘉生物医药科技有限责任公司；
无水甲醇：合肥健宇环保科技有限公司；
钛酸四丁酯：分析纯，≥99.0％成都市科隆化学品有限公司；
甲醇：沧州标尧化工有限公司；
FeCl3·6H2O：分析纯，≥99.0％成都市科隆化学品有限公司
柠檬酸钠：分析纯，≥99.0％上海阿拉丁生化科技股份有限公司
乙二醇：济南金优化工有限公司；
醋酸钠：苏州恒程化工科技有限公司；
双炔酰菌胺：成都思天德生物科技有限公司。
制备例
制备例1
Fe3O4@mTiO2@TpBD磁性吸附剂的制备方法为：
A1.Fe3O4颗粒的制备：取1.4gFeCl3和0.67g柠檬酸钠加入到含有31mL乙二醇中，混合物超声分散10min，然后加热溶解完全；冷却至室温后加入2.5g醋酸钠，随后磁力50min，得到混合液，混合液在190℃下加热反应13h；反应结束后冷却至室温，产物进行磁性分离，并依次用水和乙醇洗涤2次，得到Fe3O4颗粒；
A2.制备Fe3O4@TpBD粒子：取50mgFe3O4颗粒加入3mL均三甲苯与二恶烷的混合液中，均三甲苯与二恶烷的体积比为1：1，向混合液中加入24mg1,3,5-三甲酰基间苯三酚与27.6mg联苯二胺，然后再向混合液中加入0.6mL乙酸，并超声3min，将混合液在130℃条件下反应23h，用二甲基甲酰胺洗涤反应产物至上清液澄清后，再次用二甲基甲酰胺与丙酮依次洗涤4次，最后将产物在55℃条件下真空干燥，得到Fe3O4@TpBD粒子；
A3.用钛酸四丁酯修饰Fe3O4@TpBD粒子制备Fe3O4@mTiO2@TpBD磁性吸附剂：取0.1gFe3O4@TpBD粒子分散于60mL无水甲醇中，再加入5ml钛酸四丁酯，室温下反应84h，磁性分离后，产物用二甲基甲酰胺、甲醇依次洗涤3次，最后将产物在55℃真空条件下干燥，得到磁性吸附剂。
制备例2
Fe3O4@mTiO2@TpBD磁性吸附剂的制备方法为：
A1.Fe3O4颗粒的制备：取1.7gFeCl3和0.57g柠檬酸钠加入到含有37mL乙二醇中，混合物超声分散9min，然后加热溶解完全；冷却至室温后加入3.7g醋酸钠，随后磁力45min，得到混合液，混合液在200℃下加热反应12.5h；反应结束后冷却至室温，产物进行磁性分离，并依次用水和乙醇洗涤3次，得到Fe3O4颗粒；
A2.制备Fe3O4@TpBD粒子：取55mgFe3O4颗粒加入2.75mL均三甲苯与二恶烷的混合液中，均三甲苯与二恶烷的体积比为1：1.1，向混合液中加入22mg1,3,5-三甲酰基间苯三酚与30.4mg联苯二胺，然后再向混合液中加入0.55mL乙酸，并超声4min，将混合液在110℃条件下反应26.5h，用二甲基甲酰胺洗涤反应产物至上清液澄清后，再次用二甲基甲酰胺与丙酮依次洗涤3次，最后将产物在60℃条件下真空干燥，得到Fe3O4@TpBD粒子；
A3.用钛酸四丁酯修饰Fe3O4@TpBD粒子制备Fe3O4@mTiO2@TpBD磁性吸附剂：取0.15gFe3O4@TpBD粒子分散于45mL无水甲醇中，再加入7.5ml钛酸四丁酯，室温下反应78h，磁性分离后，产物用二甲基甲酰胺、甲醇依次洗涤4次，最后将产物在50℃真空条件下干燥，得到磁性吸附剂。
制备例3
Fe3O4@mTiO2@TpBD磁性吸附剂的制备方法为：
A1.Fe3O4颗粒的制备：取2gFeCl3和0.47g柠檬酸钠加入到含有44mL乙二醇中，混合物超声分散8min，然后加热溶解完全；冷却至室温后加入5g醋酸钠，随后磁力40min，得到混合液，混合液在210℃下加热反应12h；反应结束后冷却至室温，产物进行磁性分离，并依次用水和乙醇洗涤4次，得到Fe3O4颗粒；
A2.制备Fe3O4@TpBD粒子：取60mgFe3O4颗粒加入2.5mL均三甲苯与二恶烷的混合液中，均三甲苯与二恶烷的体积比为1：1.2，向混合液中加入20mg1,3,5-三甲酰基间苯三酚与33.2mg联苯二胺，然后再向混合液中加入0.5mL乙酸，并超声5min，将混合液在90℃条件下反应30h，用二甲基甲酰胺洗涤反应产物至上清液澄清后，再次用二甲基甲酰胺与丙酮依次洗涤2次，最后将产物在65℃条件下真空干燥，得到Fe3O4@TpBD粒子；
A3.用钛酸四丁酯修饰Fe3O4@TpBD粒子制备Fe3O4@mTiO2@TpBD磁性吸附剂：取0.2gFe3O4@TpBD粒子分散于30mL无水甲醇中，再加入10ml钛酸四丁酯，室温下反应72h，磁性分离后，产物用二甲基甲酰胺、甲醇依次洗涤5次，最后将产物在45℃真空条件下干燥，得到磁性吸附剂。
制备例4
与制备例2不同的是，步骤A2中将组分混合并超声分散4min后，将混合液在115℃条件下反应25h。混合液在115-125℃条件下反应23-25h
制备例5
与制备例2不同的是，步骤A2中将组分混合并超声分散4min后，将混合液在120℃条件下反应24h。
制备例6
与制备例2不同的是，步骤A2中将组分混合并超声分散4min后，将混合液在125℃条件下反应23h。
实施例
实施例1
一种食品中农药残留的检测方法的步骤为：
S1.食品样品前处理：
S1.1.食品样品溶液制备：
将待检测番茄切碎并均化，称取45g均质化的食品以3000rpm离心5min，固液分离后，分别收集上清液与固体残留物；向固体残留物中加入7mL超纯水并离心，固液分离后再次收集上清液，将所有上清液合并在一起，采用0.4μm的水膜进行过滤，向过滤后的上清液转中加入水，上清液与水的总体积为110mL，得到食品样品溶液；
S1.2.食品样品萃取：
向40ml食品样品溶液中加入30mg磁性吸附剂(制备例2所得)，振荡反应35min，通过外部磁场进行磁性分离并去除上清液，然后加入1.2mL乙腈溶液超声洗脱4min，磁性分离去除磁性吸附剂，采用0.4μm的有机滤膜过滤得到上清液；
S2.取S1.2中的上清液用液相色谱-串联质谱法法进行测定：
S2.1标准工作溶液的配制：
将不含双炔酰菌胺的番茄基质空白样品按上述步骤S1处理，得样品提取净化液，用空白提取净化液配制0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L双炔酰菌胺标准工作溶液，将标准工作液进LC-MS/MS分析，以所得峰面积对其相应浓度进行回归分析，以进样浓度(mg/L)为横坐标，峰面积为纵坐标，得到标准工作曲线；
S2.2测定：
在相同条件下将步骤S1.2中最终得到的上清液注入LC-MS-MS进行测定，测得样品液中双炔酰菌胺的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中双炔酰菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中双炔酰菌胺残留量；
其中液相色谱-串联质谱的测定条件为：
色谱柱：AtlantisT,3μm，150mm×2.1nm(内径)；
洗脱程序为；
时间/min 流速/(μl/min) 流动相A(水)％ 流动相B(乙腈)％
0.00 200 35 65
14.00 700 10 90
36.00 700 0 100
41.00 700 0 100
柱温：34℃；进样量：20μL；离子源：ESI；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应监测；电喷雾电压：-4200V；雾化气压力：0.42MPa；气帘气压力：0.32MPa；辅助加热气：0.35MPa；离子源温度：700℃。
实施例2
一种食品中农药残留的检测方法的步骤为：
S1.食品样品前处理：
S1.1.食品样品溶液制备：
将待检测番茄切碎并均化，称取50g均质化的食品以2900rpm离心6min，固液分离后，分别收集上清液与固体残留物；向固体残留物中加入6mL超纯水并离心，固液分离后再次收集上清液，将所有上清液合并在一起，采用0.45μm的水膜进行过滤，向过滤后的上清液转中加入水，上清液与水的总体积为100mL，得到食品样品溶液；
S1.2.食品样品萃取：
向50ml食品样品溶液中加入25mg磁性吸附剂(制备例2所得)，振荡反应40min，通过外部磁场进行磁性分离并去除上清液，然后加入1.0mL乙腈溶液超声洗脱5min，磁性分离去除磁性吸附剂，采用0.45μm的有机滤膜过滤得到上清液；
S2.取S1.2中的上清液用液相色谱-串联质谱法法进行测定：
S2.1标准工作溶液的配制：
将不含双炔酰菌胺的番茄基质空白样品按上述步骤S1处理，得样品提取净化液，用空白提取净化液配制0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L双炔酰菌胺标准工作溶液，将标准工作液进LC-MS/MS分析，以所得峰面积对其相应浓度进行回归分析，以进样浓度(mg/L)为横坐标，峰面积为纵坐标，得到标准工作曲线；
S2.2测定：
在相同条件下将步骤S1.2中最终得到的上清液注入LC-MS-MS进行测定，测得样品液中双炔酰菌胺的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中双炔酰菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中双炔酰菌胺残留量；
其中液相色谱-串联质谱的测定条件为：
色谱柱：AtlantisT,3μm，150mm×2.1nm(内径)；
洗脱程序为：
时间/min 流速/(μl/min) 流动相A(水)％ 流动相B(乙腈)％
0.00 300 30 70
14.00 600 15 85
36.00 600 0 100
41.00 600 0 100
柱温：35℃；进样量：20μL；离子源：ESI；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应监测；电喷雾电压：-4200V；雾化气压力：0.42MPa；气帘气压力：0.32MPa；辅助加热气：0.35MPa；离子源温度：700℃。
实施例3
一种食品中农药残留的检测方法的步骤为：
S1.食品样品前处理：
S1.1.食品样品溶液制备：
将待检测番茄切碎并均化，称取55g均质化的食品以2800rpm离心7min，固液分离后，分别收集上清液与固体残留物；向固体残留物中加入5mL超纯水并离心，固液分离后再次收集上清液，将所有上清液合并在一起，并采用0.5μm的水膜进行过滤，向过滤后的上清液转中加入水，上清液与水的总体积为90mL，得到食品样品溶液；
S1.2.食品样品萃取：
向60ml食品样品溶液中加入20mg磁性吸附剂(制备例2所得)，振荡反应45min，通过外部磁场进行磁性分离并去除上清液，然后加入0.8mL乙腈溶液超声洗脱6min，磁性分离去除磁性吸附剂，采用0.5μm的有机滤膜过滤得到上清液；
S2.取S1.2中的上清液用液相色谱-串联质谱法法进行测定：
S2.1标准工作溶液的配制：
将不含双炔酰菌胺的番茄基质空白样品按上述步骤S1处理，得样品提取净化液，用空白提取净化液配制0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L双炔酰菌胺标准工作溶液，将标准工作液进LC-MS/MS分析，以所得峰面积对其相应浓度进行回归分析，以进样浓度(mg/L)为横坐标，峰面积为纵坐标，得到标准工作曲线；
S2.2测定：
在相同条件下将步骤S1.2中最终得到的上清液注入LC-MS-MS进行测定，测得样品液中双炔酰菌胺的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中双炔酰菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中双炔酰菌胺残留量；
其中液相色谱-串联质谱的测定条件为：
色谱柱：AtlantisT,3μm，150mm×2.1nm(内径)；
洗脱程序为；
Figure BDA0002853090350000091
Figure BDA0002853090350000101
柱温：36℃；进样量：20μL；离子源：ESI；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应监测；电喷雾电压：-4200V；雾化气压力：0.42MPa；气帘气压力：0.32MPa；辅助加热气：0.35MPa；离子源温度：700℃。
实施例4
与实施例2不同的是，步骤1.2中磁性吸附剂为制备例1所得。
实施例5
与实施例2不同的是，步骤1.2中磁性吸附剂为制备例3所得。
实施例6
与实施例2不同的是，步骤1.2中磁性吸附剂为制备例4所得。
实施例7
与实施例2不同的是，步骤1.2中磁性吸附剂为制备例5所得。
实施例8
与实施例2不同的是，步骤1.2中磁性吸附剂为制备例6所得。
实施例9
与实施例7不同的是，梯度洗脱程序为：
时间/min 流速/(μl/min) 流动相A(水)％ 流动相B(乙腈)％
0.00 200 90.0 10.0
4.00 200 50.0 50.0
15.00 200 40.0 60.0
20.00 200 20.0 80.0
25.00 200 5.0 95.0
32.00 200 5.0 95.0
32.01 200 90.0 10.0
40.00 200 90.0 10.0
对比例
对比例1
番茄中双炔酰菌胺残留量的LC-MS-MS检测：
(1)试样制备：
将采集番茄样品按照四分法缩分至500g，将此样品分成2×200g两份，用食品加工机粉碎，于-20℃冰柜密闭保存。
(2)提取及净化：
称取5.0g已制备好的番茄试样于50mL离心管中，加入10ml乙腈，高速匀浆2min，加入2g NaCl，剧烈振摇1min。取上层乙腈相离心，取1mL上清液加入1mL的甲醇和水混合溶液(体积比1：1)过0.2μm尼龙微孔过滤膜，得到的液相部分即为待测样品。
(3)标准工作溶液的配制：
将不含双炔酰菌胺的番茄基质空白样品按上述步骤(1)、(2)处理，得样品提取净化液，用空白提取净化液配制0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5mg/L双炔酰菌胺标准工作溶液，将标准工作液进LC-MS/MS分析，以所得峰面积对其相应浓度进行回归分析，以进样浓度(mg/L)为横坐标，峰面积为纵坐标，得到标准工作曲线。
(4)测定和结果计算：
将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC-MS-MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤(2)中净化后的样品液注入LC-MS-MS进行测定，测得样品液中双炔酰菌胺的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中双炔酰菌胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中双炔酰菌胺残留量。
步骤(4)中所述的液相色谱的流动相包括A相和B相，A相为甲醇，B相为水；流速：0.3mL/min；进样体积：1.0μL；柱温箱：45℃。
步骤(4)中液相色谱使用梯度洗脱的方法，梯度洗脱程序为：
时间/min 流动相A(甲醇)％ 流动相B(水)％
0 90 10
0.5 75 25
1.5 75 25
3.0 45 55
5.0 45 55
8.0 10 90
11.0 10 90
11.5 90 10
步骤(4)中液相色谱的色谱柱ZORBAX ECLIPSE Plus C18，2.1×50mm,1.8μm。
步骤(4)中分析条件为：离子源温度375℃离子源：ESI.电喷雾电压：5000V。雾化器压力：0.138MPa。辅助加热气：0.379MPa。扫描方式：正离子扫描。
对比例2
与实施例7不同的是：
S1.食品样品前处理：
S1.1提取
将番茄切碎、混匀，称取20g碎番茄于80mL离心管中,加人40mL乙腈,用高速组织捣碎机在15000r/min,匀浆提取1min,加入5g氯化钠,再匀浆提取1min,在3800r/min离心5min,取上清液20mL(相当于10g试样量),在40℃水浴中旋转浓缩至约1mL,待净化。
S1.2净化
在Sep-PakVac柱中加入约2cm高无水硫酸钠,并放入下接鸡心瓶的固定架上。加样前先用4mL乙腈+甲苯(3+1)预洗柱,当液面到达硫酸钠的顶部时,迅速将样品浓缩液转移至净化柱上,并更换新鸡心瓶接收。再每次用2mL乙腈十甲苯(3+1)洗涤样液瓶三次,并将洗涤液移人柱中。在柱上加上50mL贮液器,用25mL乙腈+甲苯(3+1)洗脱农药及相关化学品,合并于鸡心瓶中,并在40℃水浴中旋转浓缩至约0.5mL。将浓缩液置于氮气吹干仪上吹干,迅速加人1mL的乙腈+水(3+2)，混匀,经0.2μm滤膜过滤后备用。
性能检测试验
加标回收率实验：
在不含双炔酰菌胺的番茄中加入0.1mg/kg的双炔酰菌胺，待双炔酰菌胺添加30min后按处理步骤进行残留量测定。将测定浓度与双炔酰菌胺理论添加浓度进行比较，得到双炔酰菌胺添加回收率，每个添加水平平行测定6次，计算平均回收率；
表1性能检测结果
Figure BDA0002853090350000121
Figure BDA0002853090350000131
结合实施例1-9和对比例1，并结合表1可以看出，实施例1-9的检测方法得到的回归曲线的相关系数均大于对比例1，说明本申请的检测方法可以得到更准确的检测结果；实施例1-9的方法得到的平均回收率均大于对比例1，说明本申请的检测方法有较好的回收效果，说明本申请的检测方法在简化了操作流程的同时还可以取得较优的检测效果。
结合实施例7与对比例2，并结合表1可以看出，实施例7的实验数据优于对比例2，说明本申请的前处理过程不仅操作简单，而且还可以与液相色谱-质谱配合使用得到更好的检测效果。
结合实施例1-3并结合表1可以看出，实施例1-3中回归曲线的相关系数、平均回收率均较好，其中实施例2的数据更佳，说明实施例1-3检测方法均能取得较好的检测效果，且实施例2的方法更优。
结合实施例2与实施例4-5，并结合表1可以看出，实施例2的实验数据优于实施例4-5，说明在制备例1-3中，制备2制备磁性吸附剂的工艺更优。
结合实施例2与实施例6-8，并结合表1可以看出，实施例6-8得到的实验数据整体优于实施例2得到的实验数据，说明制备例4-6中制备磁性吸附剂的工艺优于制备例2，其中制备例5制备磁性吸附剂的工艺最优，即在合成Fe3O4@TpBD粒子时，混合液在115-125℃条件下反应23-25h为较佳合成工艺参数，其中混合液在120℃条件下反应24h为最优合成工艺参数。
结合实例7与实施例9，并结合表1可以看出，实施例7的实验数据明显优于对比例9，说明实施例7中的梯度洗脱程序更优，这可能是因为实施例7中的梯度洗脱程序从调节洗脱过程中乙腈与水之间比例和保留时间两个方面来优化梯度洗脱过程，提高了目标分析物的灵敏度和分离度。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (10)

1.一种食品中农药残留的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.食品样品前处理：
S1.1.食品样品溶液制备：将待检测的食品制备为样品溶液；
S1.2.食品样品萃取：向40-60ml食品样品溶液中加入20-30mg磁性吸附剂，振荡反应35-45min，通过外部磁场进行磁性分离并去除上清液，加入0.8-1.2mL乙腈溶液超声洗脱4-6min，磁性分离去除磁性吸附剂，过滤得到上清液；
S2.取S1.2中的上清液用液相色谱-串联质谱法进行测定；
磁性吸附剂为用钛酸四丁酯修饰核-壳结构的Fe3O4@TpBD纳米粒子制得，其中核-壳结构Fe3O4@TpBD纳米粒子是由1,3,5-三甲酰基间苯三酚与联苯二胺包裹Fe3O4颗粒制得。
2.根据权利要求1所述的一种食品中农药残留的检测方法，其特征在于：所述S1.1.食品样品溶液制备：将待检测食品切碎并均化，称取45-55g均质化的食品以2800-3000rpm离心5-7min，固液分离后，分别收集上清液与固体残留物；向固体残留物中加入5-7mL超纯水并离心，固液分离后再次收集上清液，将所有上清液合并在一起，并过滤，向过滤后的上清液转中加入水，上清液与水的总体积为90-110mL，得到食品样品溶液。
3.根据权利要求1所述的一种食品中农药残留的检测方法，其特征在于：所述磁性吸附剂的制备方法为：
A1.制备Fe3O4@TpBD粒子：取50-60mgFe3O4颗粒加入2.5-3mL均三甲苯与二恶烷的混合液中，均三甲苯与二恶烷的体积比为1：（1-1.2），向混合液中加入20-24mg1,3,5-三甲酰基间苯三酚与27.6-33.2mg联苯二胺，然后再向混合液中加入0.5-0.6mL乙酸，并超声3-5min，将混合液在90-130℃条件下反应23-30h，用二甲基甲酰胺洗涤反应产物至上清液澄清后，再次用二甲基甲酰胺与丙酮依次洗涤2-4次，最后将产物在55-65℃条件下真空干燥，得到Fe3O4@TpBD粒子；
A2.用钛酸四丁酯修饰Fe3O4@TpBD粒子制备Fe3O4@mTiO2@TpBD磁性吸附剂：取0.1-0.2gFe3O4@TpBD粒子分散于30-60mL无水甲醇中，再加入5-10ml钛酸四丁酯，室温下反应72-84h，磁性分离后，产物用二甲基甲酰胺、甲醇依次洗涤3-5次，最后将产物在45-55℃真空条件下干燥，得到磁性吸附剂。
4.根据权利要求3所述的一种食品中农药残留的检测方法，其特征在于：所述A1步骤中，Fe3O4颗粒的制备方法为：取1.4-2gFeCl3和0.47-0.67g柠檬酸钠加入到含有31-44mL乙二醇中，混合物超声分散8-10min，然后加热溶解完全；冷却至室温后加入2.5-5g醋酸钠，随后搅拌40-50min，得到混合液，混合液在190-210℃下加热反应12-13h；反应结束后冷却至室温，产物进行磁性分离，并依次用水和乙醇洗涤2-4次，得到Fe3O4颗粒。
5.根据权利要求2所述的一种食品中农药残留的检测方法，其特征在于：所述S1.1步骤中将所有上清液合并在一起后，过滤时采用0.4-0.5μm的水膜进行过滤；S1.2步骤中磁性分离去除磁性吸附剂后，过滤时采用0.4-0.5μm的有机滤膜进行过滤。
6.根据权利要求1所述的一种食品中农药残留的检测方法，其特征在于：所述S2中用液相色谱-串联质谱法进行测定时，流动相由乙腈和水组成，洗脱模式为梯度洗脱。
7.根据权利要求6所述的一种食品中农药残留的检测方法，其特征在于：所述梯度洗脱过程为：0-（13-15）min时流动相比例为乙腈：水=（1.85-3）：1，（13-15）-（35-37）min时升为乙腈：水=（4-9）：1，（35-37）-（40-42）min时流动相比例为乙腈：水=1：0。
8.根据权利要求7所述的一种食品中农药残留的检测方法，其特征在于：所述洗脱过程中0-（13-15）min时，流动相的滴加速度为（0.2-0.4）ml/min；（13-15）min之后的滴加速度为（0.5-0.7）ml/min。
9.根据权利要求1所述的一种食品中农药残留的检测方法，其特征在于：所述S2中用液相色谱-串联质谱法进行测定时，高效液相色谱色谱柱的柱温为34-36℃。
10.根据权利要求3所述的一种食品中农药残留的检测方法，其特征在于：所述A1步骤中，将组分混合并超声分散后，混合液在115-125℃条件下反应23-25h。
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