CN112716899A - 一种防治主动脉夹层的仿生纳米药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属药物制剂和纳米医学技术领域,涉及一种防治主动脉夹层的仿生纳米药物,具体涉及一种单核/巨噬细胞膜仿生修饰的多药共载抗炎脂质体及其制备方法。本发明的脂质体由阳离子磷脂与中性磷脂组成,其内部可实现多种抗炎药的共载,脂质体表面共价修饰抗炎穿膜肽,再使用单核/巨噬细胞膜蛋白进行仿生化修饰。该仿生抗炎脂质体利用单核/巨噬细胞膜表面介导趋化的多种受体、黏附分子配体,实现对炎症部位的天然靶向作用,并借助白细胞自我识别分子的修饰减少网状内皮系统(RES)对脂质体的非特异性清除。本仿生抗炎脂质体可有效跨过血管内皮屏障,在主动脉夹层早期病变部位靶向聚集,释放抗炎药物,发挥协同抗炎作用,抑制炎症相关细胞趋化、浸润于病变部位,进而防治主动脉夹层的发生与发展。
Description
技术领域
本发明属药物制剂和纳米医学技术领域,涉及一种防治主动脉夹层的仿生纳米药物,具体涉及一种单核/巨噬细胞膜仿生修饰的多药共载抗炎脂质体及其制备方法。
背景技术
现有技术公开了主动脉夹层(Aortic Dissection)是临床上一类非常凶险且死亡率极高的大血管病,研究显示,该疾患发病过程中,多种原因导致的血管内皮病变首先造成主动脉壁内膜形成撕裂口,主动脉腔内血液在动脉压的驱动下,经撕裂处进入中膜,使中膜分离并沿主动脉长轴方向扩展,形成假性通道。临床实践显示,目前临床缺乏有效治疗药物,寻找防治的药物与疗法,提高预防和治疗水平已引起业内人员的关注。研究显示,主动脉夹层的发病机制与炎症密切相关,内皮细胞在血管紧张素Ⅱ等因子的慢性刺激下,炎症相关通路激活,通过旁分泌的方式使血管壁平滑肌细胞内NF-κB通路激活、活性氧和基质金属蛋白酶的产生增加,加速基质降解和血管平滑肌细胞凋亡,并招募一系列免疫细胞,导致血管壁在慢性炎症的过程中不断重构并变薄弱。
有研究表明,单核/巨噬细胞是主动脉夹层发生发展中的关键靶细胞。单核/巨噬细胞是机体内重要的免疫细胞,在免疫反应中发挥着重要作用,且在组织修复以及某些病理改变的过程中也具有不可替代的作用;与其相关的炎症反应伴随着夹层部位病变及重构的进程。动物实验表明敲除小鼠体内的单核/巨噬细胞后,主动脉夹层发生率显著降低,另有临床研究发现,外周血单核细胞的数量在发病的急性期异常升高,综上,确证了单核/巨噬细胞在主动脉夹层的发生发展发挥关键作用;而细胞膜表面的某些黏附分子、受体等膜蛋白介导了单核/巨噬细胞向病变部位的迁移,使用单核细胞膜修饰脂质体后,不仅可赋予脂质体CD45等白细胞自我识别分子,从而减少网状内皮系统对脂质体的非特异性吞噬,同时也可修饰某些黏附分子的配体,使脂质体在膜蛋白的导向下有效聚集到炎症组织。
研究表明,纳米载体是理想的治疗巨噬细胞相关疾病的靶向递送工具,其中,脂质体因其无毒、载药量高等优良特性,被广泛运用于药物递送系统中;脂质体可同时装载亲水性、亲脂性或两亲性药物,改善药物的药动学性质,增加药物的稳定性和溶解度,并赋予药物靶向性和缓释性等特征;同时它的类细胞结构易与细胞膜融合,为细胞膜蛋白修饰脂质体提供了生物学基础,尤其是阳离子脂质体,其与负电性细胞膜的相互作用可进一步提高脂质体的摄取。
基于现有技术的基础与现状,本申请的发明人拟提供一种防治主动脉夹层的仿生纳米药物,具体涉及一种单核/巨噬细胞膜仿生修饰的多药共载抗炎脂质体及其制备方法。
发明内容
本发明的目的是基于现有技术的基础与现状,提供一种防治主动脉夹层的仿生纳米药物,具体涉及一种单核/巨噬细胞膜仿生修饰的多药共载抗炎脂质体及其制备方法。本发明的仿生抗炎脂质体药物可有效抑制心血管系统以及炎症相关细胞的慢性炎症,进一步防治主动脉夹层的发生发展。
本发明设计了细胞膜蛋白修饰的阳离子脂质体,包载穿膜抗炎肽以及两种温和的抗炎药物,充分发挥药物协同抗炎的作用,有效抑制主动脉及循环系统的炎症,从而防治主动脉壁血肿以及形成夹层,并可降低夹层破裂的风险。
本发明提供了一种防治主动脉夹层的仿生纳米药物,其包括(如图1所示):(1)脂质体双分子层内嵌入单核细胞膜蛋白;(2)脂质体表面通过化学键修饰具有穿膜和抗炎作用的TN肽;(3)脂质体包载抗炎药从而发挥协同抗炎作用。
具体的,本发明提供了一种防治主动脉夹层的仿生纳米药物,其特征在于,以阳离子脂质体为基本载体包载抗炎药物,穿膜抗炎肽共价修饰于脂质体表面,再采用单核/巨噬细胞膜蛋白进行修饰制得仿生纳米药物,其组成通式为:
PM/TN-(AIs)LP
其中,PM为单核/巨噬细胞膜(Plasma membrane);TN为穿膜抗炎肽,该穿膜抗炎肽是由TAT穿膜序列肽和NBD抗炎序列肽由共价键连接成的融合肽;TAT肽又与马来酰亚胺-聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(MAL-PEG-DSPE)反应形成共价键连接至DSPE-PEG的一端;AIs为一种或两种抗炎药物,本发明的实施例中,优选AIs为抗炎药物姜黄素(CUR)和/或塞来昔布(CXB);LP为阳离子脂质体载体。
本发明中,抗炎穿膜肽TAT-NBD(TN)是由细胞穿膜肽TAT与抗炎肽NBD通过二硫键连接而成的融合肽;TAT是一种带正电荷的短肽,可有效提高大分子物质被摄取进入细胞;NBD肽,即NEMO结合域多肽(NEMO binding domain peptide,NBD)是可抑制NF-κB激活的抗炎肽,其序列含有LDWSWL片段,能抑制IkBα的降解从而特异性阻断IKK复合物的形成,进而抑制NF-κB的活化。
本发明所使用的抗炎模型药物为姜黄素和/或塞来昔布,两者均为疏水性药物,包载于脂质体中可提高药物的水溶性,延长体内半衰期和稳定性,更加有利于抗炎疗效的发挥。
本发明采用的姜黄素(curcumin,CUR)是一种倍半萜类天然产物,具有抗炎、抗氧化、心血管保护等作用,且毒性极低。姜黄素可作用于NF-κB、STAT3、MAPK、p53等多种信号通路来抑制炎症反应,从而减少心血管细胞的损伤和凋亡;姜黄素作用于单核/巨噬细胞,可显著抑制单核细胞向促炎表型的M1型巨噬细胞极化,并促进单核细胞、M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化,从而有效抑制M1型巨噬细胞介导的慢性炎症反应,并可起到促进伤口愈合等作用。
本发明采用的塞来昔布(Celecoxib,CXB)为选择性环氧合酶Ⅱ(COX-2)抑制剂,塞来昔布通过抑制COX-2的活性并下调表达,抑制前列腺素(PGE2)这一重要炎症介质的合成,可作用于NF-κB等炎症相关通路来抑制单核细胞的炎症激活或血管内皮损伤,从而缓解多种心血管疾病的发生与发展,并且副作用相较于其他非甾体类抗炎药显著减少。
本发明中,单核/巨噬细胞膜蛋是从单核细胞(RAW 264.7)或M1型巨噬细胞中提取的膜蛋白,利用单核/巨噬细胞膜表面介导趋化的多种受体、黏附分子配体,实现仿生脂质体对炎症部位的天然靶向作用,并可借助白细胞自我识别分子的修饰减少网状内皮系统(RES)对脂质体的非特异性清除。
本发明中,所述的TN肽序列选自YGRKKRRQRRR-G-TTLDWSWLQMEC或YGRRARRRARR-TALDWSWLQTEC,因序列中含半胱氨酸而含有游离巯基。
本发明提供了防治主动脉夹层的仿生纳米药物,也即穿膜抗炎肽TN修饰的防治主动脉夹层的仿生载体的制备方法,其包括:
(1)制备TN-PEG-DSPE:
用TN肽末端的半胱氨酸游离巯基与DSPE-PEG-MAL反应形成共价连接,合成示意图如下:
(2)制备脂质体:
采用薄膜水化法制备PM/TN-(AIs)LP,具体步骤为:称取处方量的磷脂、胆固醇、TN、姜黄素、塞来昔布,溶于氯仿和甲醇的混合溶剂,减压旋转蒸发成膜后加入水化介质,水化后得到脂质体悬液,超声使磷脂膜重排得到粒径均一的TN-(AIs)LP;
(3)单核细胞膜的提纯:
将单核/巨噬细胞从培养皿上刮下,离心后以适宜浓度重悬于低渗缓冲液中,使细胞充分吸水涨破,进而物理研磨使细胞充分破碎;低速离心除去杂质,超速离心得到细胞膜;将沉淀重悬后冻干,置于-20℃长期保存;
(4)制备细胞膜修饰脂质体
将细胞膜与脂质体混合,超声后再共同挤出聚碳酸酯膜,使细胞膜与脂质体膜重构并充分融合,得细胞膜修饰的脂质体,即本发明的防治主动脉夹层的仿生纳米药物。
本发明中,所述的脂质体的磷脂材料为大豆磷脂(SPC)、(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(DOTAP)、胆固醇(cholesterol)、DSPE-PEG-TN。
本发明中,所述的DSPE-PEG-TN含量为1~5%,AIs的含量共为4~8%,PM的含量为0.2~2%。
本发明中,所述的抗炎脂质体平均粒径为80-100nm,修饰细胞膜蛋白后粒径在85-120nm,细胞膜蛋白嵌入或修饰于脂质体磷脂双分子层表面,形成仿天然细胞膜结构的纳米粒子。
经体外释放试验测定,结果显示,制得的防治主动脉夹层的仿生抗炎脂质体在PBS7.4条件下的释放具有明显的缓释特征,能够实现抗炎药的平稳持续释放。
经体外细胞试验测定,结果显示,制得的防治主动脉夹层的仿生抗炎脂质体对M1型巨噬细胞与炎症激活的血管内皮细胞(HUVEC)有更显著的抑制作用,对正常血管内皮细胞、主动脉平滑肌细胞有较高的安全性,同时可降低巨噬细胞相关的炎症通路与活性氧物质的释放,抑制炎性巨噬细胞跨血管内皮的迁移,并可抑制氧化应激导致的主动脉平滑肌细胞(AoSMC)凋亡。
本发明中,采用小鼠主动脉夹层模型,以BAPN饲料饲喂小鼠从而诱发主动脉壁的病变,再使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)加速夹层的发生,夹层可能发生于主动脉弓、胸主动脉、腹主动脉等多位点。
经体内动物试验评价,结果显示,制得的仿生抗炎脂质体可以显著降低模型动物主动脉夹层的发病率与死亡率,显著延长模型动物生存期,并可以有效改善主动脉的血肿与病变。
本发明的防治主动脉夹层的仿生抗炎脂质体具有如下显著优点:
(1)单核/巨噬细胞膜修饰具有良好的生物相容性、低免疫原性和较高的炎症靶向性;
(2)TN肽的修饰和纳米级的粒径有利于脂质体跨过血管内皮屏障,又能够抑制NF-B的活化起到抗炎作用。
(3)抗炎药物联用能够同时抑制慢性炎症的多种通路,起到协同抗炎作用,同时可以减少平滑肌细胞的凋亡从而起到防治主动脉夹层发生发展的作用。
附图说明
图1为PM/TN-(AIs)LP的结构示意图。
图2.1为TN-(AIs)LP与PM/TN-(AIs)LP的粒径分布图,前者粒径为96±3.7nm,后者粒径为102±2.8nm;图2.2为不同膜蛋白-磷脂比例制备的脂质体的zeta电位,TN-(AIs)LP的zeta电位为32.5±3.2mV,以膜蛋白:磷脂=1:50修饰后正电性显著下降,得到的PM/TN-(AIs)LP的zeta电位为10.5±2.8mV。
图3为PM/TN-(AIs)LP的药物释放曲线,图中显示脂质体在PBS 7.4条件下的释放均具有明显的缓释特征,能够实现抗炎药的平稳持续释放。
图4为PM/TN-(AIs)LP对单核细胞、血管内皮细胞和主动脉平滑肌细胞的细胞毒性曲线,图中显示仿生抗炎脂质体对正常的单核细胞、血管内皮细胞和主动脉平滑肌细胞的活力几乎没有影响,但是对炎症激活的M1型RAW和血管紧张素Ⅱ刺激的HUVEC细胞表现出了一定的抑制作用。
图5.1为单核/巨噬细胞对抗炎脂质体的摄取程度,图中显示M1型巨噬细胞对脂质体的摄取显著高于未极化的单核细胞和M2型巨噬细胞;其中M1型巨噬对仿生脂质体的摄取最高;图5.2为血管内皮细胞对抗炎脂质体的摄取程度。结果表明炎症激活的HUVEC对TN-LP和PM/TN-LP的摄取较为显著。
图6为巨噬细胞跨血管内皮细胞的趋化迁移试验,图中显示,趋化环境下巨噬细胞迁移通过血管内皮的数目显著增加,而PM/TN-(AIs)LP可显著抑制巨噬细胞跨血管内皮的趋化迁移。
图7为抑制M1型巨噬细胞内活性氧物质的产生试验,图中显示炎症激活的巨噬细胞产生活性氧物质的比例显著增加,而加入仿生抗炎脂质体PM/TN-(AIs)LP后可最显著地减少活性氧阳性的巨噬细胞比例,几乎降至与正常细胞一致的水平。
图8为抗主动脉平滑肌细胞凋亡试验结果,图中显示仿生抗炎脂质体可抑制过氧化氢造成的平滑肌细胞凋亡。
图9为脂质体在主动脉夹层造模小鼠的活体分布示意图,图中显示仿生脂质体在潜在的主动脉夹层发生和破裂的位点具有明显的靶向分布。
图10为主动脉夹层造模小鼠的生存期,显示给予PM/TN-(AIs)LP的模型鼠主动脉夹层破裂率与死亡率显著降低,生存期显著延长。
图11为主动脉夹层造模小鼠的血清炎症因子浓度,图中显示抗炎脂质体可显著降低模型鼠血清TNF-α与IL-6炎症因子的水平。
图12为主动脉夹层造模小鼠的主动脉大体观,图中显示脂质体给药组的主动脉外观有显著改善,特别是仿生抗炎脂质体PM/TN-(AIs)LP组的主动脉几乎无血肿。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明加以进一步的说明,但是不限制本发明的内容。
实施例1
1.合成DSPE-PEG2000-TN:
称取2μM的TN(YGRKKRRQRRRG-S-S-TTLDWSWLQMEC),溶于1ml ddH2O,为溶液A;称取1μM的DSPE-PEG2000-MAL,溶于2ml ddH2O,为溶液B。搅拌下将B液缓慢滴加入A液,室温搅拌反应12h,将溶液冷冻干燥得到白色疏松粉末,即为DSPE-PEG2000-TN。
2.制备TN-(CUR)LP
称取SPC 24mg、DOTAP 5mg、胆固醇3.6mg、DSPE-PEG2000-TN 5.4mg、CUR 3mg置于圆底烧瓶,溶于3ml氯仿-甲醇(4:1)的混合溶剂,40℃旋转蒸发除去有机溶剂,在烧瓶内壁形成一层均匀的脂质膜。将含有0.3%吐温-80的PBS 5.7加入脂质薄膜,40℃水化30min,再于80W超声3min,得到粒径均匀分布在80-100nm的脂质体溶液,10,000g离心1h后除去沉淀,即为TN-(CUR)LP
3.制备PM/TN-(CUR)LP
将RAW 264.7细胞从培养皿上刮下,离心后以适宜浓度重悬于低渗缓冲液中使细胞吸水涨破,进而使用Dounce匀浆器反复研磨20-50次,使细胞充分破碎。4℃离心10,000g,30min除去细胞核、线粒体等胞质内容物,再将上清于150,000g超速离心90min,得到细胞膜沉淀。将沉淀重悬后冻干,置于-20℃长期保存。
将细胞膜与TN-(CUR)LP混合,超声80W,2min,再共同挤出200nm聚碳酸酯膜,使细胞膜与脂质体膜重构并充分融合,即得PM/TN-(CUR)LP。
实施例2
同实施例1的制备方法将处方中的CUR改为相同剂量的CUR与CXB,固定处方中其他组分的用量,制得PM/TN-(CUR&CXB)LP。
实施例3
同实施例1的制备方法将处方中的PM改为以相同方法纯化的M1型巨噬细胞膜蛋白,首先使用LPS在体外诱导单核细胞极化为M1型巨噬细胞,再进行膜蛋白的提纯,固定处方中其他组分的用量,制得PMM1/TN-(CUR/CXB)LP。
实施例4:PM/TN-(CUR/CXB)LP的体外释放测定
取PM/TN-(CUR/CXB)LP用PBS 7.4稀释一倍,并置于截留分子量为8~14kDa的透析袋中,以含有0.2%SDS的PBS 7.4缓冲液作为透析袋外液,置于37℃恒温振荡器(120rpm)。于固定时间点从外液取样,HPLC测定CUR和/或CXB的浓度,计算累计释放百分数。
实施例5:PM/TN-(CUR&CXB)LP对单核细胞/血管内皮细胞/主动脉平滑肌细胞体外毒性的考察
取处于对数生长期的RAW 264.7/HUVEC/AoSMC细胞,以3000个/孔接种于96孔板,每孔0.1mL,37℃培养24h后,分别加入不同浓度的PM/TN-(CUR&CXB)LP,继续培养48h后每孔加入0.1mL含0.5mg/mL MTT的无血清培养液,37℃避光孵育4h后吸去培养液,加入0.2mLDMSO,待孔底的结晶溶解均匀后用酶标仪于570nm处测定吸光度值,以不加药的细胞为参比,计算细胞活力的抑制情况。
实施例6:巨噬细胞/血管内皮细胞对PM/TN-LP摄取的考察
取处于对数生长期的RAW 264.7/HUVEC细胞,以0.5×105个/孔接种于24孔板,每孔500μL,37℃培养24h后,分别加入0.2μg/ml的(cou-6)LP、TN-(cou-6)LP、PM/TN-(cou-6)LP,37℃孵育2h后用4℃的PBS 7.4清洗并用胰酶消化,用流式细胞仪(Ex466nm;Em504nm)测定平均荧光强度。
实施例7:PM/TN-(CUR&CXB)LP抑制巨噬细胞趋化迁移实验
使用Matrigel包被8m孔径的Transwell上室,将HUVEC以5×104个/孔接种于上室,下室加600μl含血清培养基,培养24h使HUVEC充分贴壁形成单层内皮细胞,从而模拟血管内皮。进而加入不同游离药物或载药脂质体,药物浓度均为20μM,孵育6h。再将下室培养基替换为含有200ng/ml TNF-α的无血清培养基,同时上室接种105个RAW细胞。迁移6h,用棉签擦去上室细胞,迁移至下室的RAW用DAPI染色后于倒置荧光拍摄。使用Image J对迁移细胞的数目进行定量。
实施例8:PM/TN-(CUR&CXB)LP抗主动脉平滑肌细胞凋亡试验
取处于对数生长期的RAW 264.7/HUVEC细胞,以0.5×105个/孔接种于24孔板,每孔500μL,37℃培养24h后,加入游离药物或脂质体以20μM的浓度与细胞孵育1h,而后加入含300μM H2O2的无血清培养液诱导凋亡,1h后消化并使用Annexin V-FITC凋亡试剂盒染色,用流式细胞仪测定凋亡细胞数目。
实施例9:PM/TN-(CUR&CXB)LP抑制M1型巨噬细胞内ROS产生试验
取处于对数生长期的RAW 264.7/HUVEC细胞,以0.5×105个/孔接种于24孔板,每孔500μL,37℃培养24h后,加入1μg/ml LPS刺激,同时加入游离药物或脂质体(20μM),孵育12h,使用ROS试剂盒染色,用流式细胞仪测定ROS阳性细胞的数目。
实施例10:PM/TN-(CUR&CXB)LP在主动脉夹层造模小鼠的活体分布试验
使用3-4周龄的C57雄鼠,饲喂含有0.1-0.5%BAPN的饲料,两周后尾静脉注射0.5mg DiR/kg的游离DIR、TN-(DIR)LP、PM/TN-(DIR)LP,10min后每只小鼠皮下注射10mg/kgAngⅡ,于24h时处死小鼠,取主动脉(连同心、肾)置于活体成像Ex=748nm,Em=780nm测定组织荧光强度。
实施例11:PM/TN-(CUR&CXB)LP防治主动脉夹层的体内药效学检测
使用3-4周龄的C57雄鼠,饲喂含有0.1-0.5%BAPN的饲料,于开始饲喂的第7、9、11、13天尾静脉注射生理盐水或20mg/kg的TN+CUR&CXB、TN-(CUR&CXB)LP、PM/TN-(CUR&CXB)LP,于第14天每只小鼠皮下注射10mg/kg AngⅡ,记录生存期,死亡的小鼠立即解剖,剥取主动脉观察大体观。
Claims (10)
1.一种防治主动脉夹层的仿生纳米药物,其特征在于,以阳离子脂质体为基本载体包载抗炎药物,穿膜抗炎肽共价修饰于脂质体表面,再采用单核/巨噬细胞膜蛋白进行修饰制得仿生纳米药物,其组成通式为:
PM/TN-(AIs)LP
其中,PM为单核/巨噬细胞膜(Plasma membrane);TN为穿膜抗炎肽,该穿膜抗炎肽是由TAT穿膜序列肽和NBD抗炎序列肽组成的融合肽;AIs为一种或两种抗炎药物;LP为阳离子脂质体载体。
2.按权利要求1所述的防治主动脉夹层的仿生纳米药物,其特征在于,所述的修饰仿生抗炎脂质体得单核/巨噬细胞膜选自单核细胞或M1型巨噬细胞。
3.按权利要求1所述的防治主动脉夹层的仿生纳米药物,其特征在于,所述的穿膜抗炎肽TN是TAT-NBD融合肽,其穿膜肽TAT的氨基酸序列为YGRKKRRQRRR或YGRRARRRARR;抗炎肽NBD的氨基酸序列为TTLDWSWLQMEC或TALDWSWLQTEC。
4.按权利要求3所述的防治主动脉夹层的仿生纳米药物,其特征在于,所述的TAT-NBD融合肽中,TN肽的氨基酸序列末端含有游离巯基,与二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺DSPE-PEG-MAL的马来酰亚胺基反应生成DSPE-PEG-TN。
5.按权利要求1所述的防治主动脉夹层的仿生纳米药物,其特征在于,所述的抗炎脂质体膜上修饰具有抗炎活性的TN肽,脂质体内装载抗炎药物姜黄素CUR和/或塞来昔布CXB。
6.按权利要求1所述的防治主动脉夹层的仿生纳米药物,其特征在于,所述的阳离子脂质体的载体材料为大豆磷脂(SPC)、卵磷脂(EPC)或氢化磷脂(HSPC)、(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(DOTAP)、胆固醇(cholesterol)、DSPE-PEG-TN,该阳离子脂质体的载体材料可载水溶性或脂溶性药物。
7.权利要求1所述的防治主动脉夹层的仿生纳米药物的制备方法,其特征在于,其包括:
(1)细胞膜蛋白的提取:取培养的单核细胞或M1型巨噬细胞,低渗法使细胞充分吸水涨破,物理研磨使细胞破碎,低速离心除杂质,超速离心得细胞膜;
(2)薄膜水化法制备TN-(AIs)LP:将脂质载体材料与抗炎药物溶于有机溶剂,减压旋转蒸发成膜,旋转水化得脂质体悬液,超声使磷脂膜重排制得粒径均一的TN-(AIs)LP;
(3)制备仿生纳米药物PM/TN-(AIs)LP:将(1)中提取细胞膜与TN-(AIs)LP脂质体混合,超声后再共同挤出聚碳酸酯膜,制得PM/TN-(AIs)LP。
8.按权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述的脂质载体材料的质量比为DOTAP/磷脂/胆固醇/DSPE-PEG-TN=5:(22~26):(2.5~4.5):(3~6.5),其中AIs的含量为4~8%,PM的含量为0.2~2%。
9.按权利要求7所述的制备方法,其特征在于,采用的水化介质为pH 4.3~pH5.7的酸性PBS缓冲液,且含有0.3~0.6%的吐温-80。
10.权利要求1防治主动脉夹层的仿生纳米药物在制备用于预防和治疗主动脉夹层炎症相关心血管系统疾病药物中的用途。
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