CN112683738B - 一种待鉴定细胞单克隆源性的鉴定方法、系统及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种待鉴定细胞单克隆源性的鉴定方法、系统及其应用。所述鉴定方法包括:在高通量细胞分析系统的明场和/或荧光通道下对孔板上多个样品孔中的待鉴定细胞进行显微成像,并获取显微图像;基于所述显微图像分析所述待鉴定细胞的生长状况,鉴定所述待鉴定细胞的单克隆源性;其中,所述鉴定方法包括在至少两个时间点对所述待鉴定细胞进行显微成像,且所述时间点包含培养第0天。本发明提供的方法可以提供直接的影像证据,连续拍照可逆向追踪,提供不同时间点的细胞生长信息;且一旦确定单克隆源性,无需第二轮有限稀释,能够明显缩短开发时间。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域,涉及待鉴定细胞的制备和筛选,尤其涉及一种待鉴定细胞单克隆源性的鉴定方法、系统及其应用。
背景技术
工程细胞的单克隆源性是产品表达和质量均一性的前提和保证,因此得到了越来越多的重视。当前,药物在审评过程中,需要采用合适的实验手段证明其所使用细胞的单克隆源性,并要求进入临床三期的药品必须提供细胞系的单克隆源性证据。
目前,常用的单克隆获取方法主要包括:有限稀释法(Limiting DilutionCloning,LDC)、半固体培养基挑取以及流式细胞荧光分选技术(Flourescent-activatedcell sorting,FACS)。
有限稀释法是传统的挑选单克隆的方法,该方法操作简单,对仪器设备的需求比较少,并且方便与成像系统关联使用,因此,有限稀释法是目前应用较多的单克隆挑选方法;其缺点是效率比较低,需要在大量的96/384孔板中进行挑选才有可能获得理想的克隆(一般认为在不低于1,000个克隆中挑选),其所需时间较长、耗费人工,需要在显微镜下靠肉眼逐孔鉴定单克隆源性。
半固体培养基挑取,挑出的克隆可能是混合细胞群体,且需要额外的筛选压力(如药物抗生素等)、多次亚克隆和染料标记,虽然该方法容易获取荧光强度较好且准确度较高的单克隆源,但都会对细胞造成伤害,挑出的荧光信号强的目的克隆往往和最终产物产量的高低也不具有非常好的相关性。由于细胞是生长在半固体培养基中,后期还需要再进行驯化。
FACS法原理是根据细胞大小、荧光染料和细胞表面marker等因素挑选出所需要的单细胞,当前广泛应用于单细胞分离,稀有细胞分选等多项研究中,一般而言,该法可用于鉴定、分离具有高水平膜蛋白表达的细胞。FACS法在应用于挑选单克隆时,需要通过条件优化,使挑选的细胞与孔板的孔一一对应。在整个筛选过程中,细胞的形态及状态会对条件和分离效果产生影响,流式细胞仪在分选过程中细胞容易聚集成团,细胞活性低,且需要用染料标记,对细胞有伤害,分选结束后,单克隆在孔板内的克隆形成率也具有不确定性且无法得到克隆源的有效图片,仍需要使用显微成像系统进行拍摄并靠肉眼逐孔鉴定单克隆源性,并且由于流式细胞荧光分选技术和半固体培养基挑选对细胞的一些影响,所以很多开发者仍然使用传统的有限稀释法来鉴定。
此外,工程细胞在传代过程中有可能发生基因型和表型的突变,即使同一细胞来源的细胞库也很可能存在不均一性。一般细胞库的不均一性由两种原因导致:一是细胞库本身不是来源于一个细胞;二是细胞库来源于一个细胞,但有一个细胞发生突变,并在细胞库形成了亚群,虽然这些亚克隆序列的异质性可能不会影响工艺的一致性和稳健性。但是有些情况下,即使是单克隆来源细胞也难以作为稳定的工程细胞用于生产,所以需要对目标细胞株进行长期稳定性观察,重点是细胞株超过可能的生产周期代次后的分子水平、生产状态、产量和产品质量的一致性,所以确认工程细胞的单克隆源性以及随时对其进行监控和鉴定对保证药物的产品质量具有重要的意义。
因此,本领域急需开发一种能快速进行扫描和鉴定待鉴定细胞单克隆源性的方法。
发明内容
鉴于现有技术中存在的问题,本发明的目的在于提供一种待鉴定细胞单克隆源性的分析方法。本发明所述待鉴定细胞单克隆源性的鉴定方法,直接从图像获得结果,检测过程直观方便验证,且检测速度快,通量高。
为达此目的,本发明采用以下技术方案:
第一方面,本发明提供一种待鉴定细胞单克隆源性的鉴定方法,包括如下步骤:
在高通量细胞分析系统的明场和/或荧光通道下对孔板上多个样品孔中的待鉴定细胞进行显微成像,并获取显微图像;基于所述显微图像分析所述待鉴定细胞的生长状况,鉴定所述待鉴定细胞的单克隆源性;其中,所述鉴定方法包括在至少两个时间点对所述待鉴定细胞进行显微成像,且所述时间点包含培养第0天。
本发明中,结合图像识别和图像分析技术,直接对孔板进行成像,若细胞本身不携带荧光标记,则使用明场通道,若细胞本身携带荧光标记例如荧光蛋白,则可以使用明场和/或荧光通道进行拍摄;所得图像中孔边缘的细胞仍清晰可见,且无需借助其他的中间信号转换得到细胞信息,根据直接获得统计结果,所得结果直观且可保存,可信度较高;
同时,所得细胞图像也为后续的实验结果提供了依据和对比;且因高通量细胞分析系统不属于液流分析系统,该方法不仅适用于96孔板,也适用于384等其他孔板的检测分析,因此其还具有通量大、检测效率高的优点,对于抗体的制备和高通量筛选而言具有重要的意义。
本发明中,在培养第0天进行拍摄,指在细胞种板后,待细胞沉降贴壁即可开始拍摄;为避免细胞由1个分裂成2个,而无法判定是否为单细胞,需要在种板当日内完成拍摄,即0~24小时之内。因此,本发明中,在铺板时,需要将待鉴定细胞进行稀释,稀释至每孔理论上只含有1个单细胞为止;铺板后,孔板上每孔内所述待鉴定细胞的浓度为0.5~1cell/孔。
作为本发明优选的技术方案,所述待鉴定细胞包括悬浮细胞和/或贴壁细胞。所述待鉴定细胞可以是CHO细胞、293T细胞或Vero细胞等多种不同类型的细胞,悬浮或贴壁状态均可;因此,其实用性较好,对于抗体的筛选而言,适用范围较广。
作为本发明优选的技术方案,所述至少两个时间点中包含培养第0天,其余时间点包括培养第1天至预期培养结束日期中的任意一个或至少两个。
一般而言,预期培养结束日期为培养第21天,因此,本发明中在至少两个时间点进行拍摄,所述的至少两个时间点中包含培养第0天(day 0),其余时间点包括培养第1天(day1)、第3天(day 3)、第5天(day 5)、第7天(day 7)、第14天(day 14)、第15天(day 15)、第18天(day 18)、第15天(day 15)、第21天(day 21)、第25天(day 25)、第30天(day 30)或第36天(day 36)中的任意一个或至少两个(也可以是其他时间点,本发明对此不做限定)。
进一步地,可选择多个不同的时间点获取细胞图像,其中,培养第0天的时间点是必须的,该培养图像用于溯源,其余时间点为培养过程中任意选取,若是为了获得更加准确的生长曲线,则获取图像的时间点应尽可能的多,尤其是培养前期,隔一天拍摄一次,至于培养后期,可以间隔时间稍长。
例如,本发明中可以在培养第0天和第3天进行拍摄,或者在培养第0天和第5天进行拍摄,或者在培养第0天、第1天和第3天进行拍摄,或者在培养第0天、第1天和第5天进行拍摄,或者在培养第0天、第1天、第3天、第5天、第7天和第14天进行拍摄等。
本发明中,在多个时间点拍照,可逆向追踪,可提供不同时间点的细胞生长信息,可对多克隆的孔快速识别和有效的排除比单纯的单克隆泊松分布概率更严谨,也更有说服力。
同时,通过对克隆生长不同时间点的成像,对多克隆的孔快速识别和有效的排除,同时可以测量各个克隆的生长速度,后续结合抗体生产能力的分析结果,再对克隆进一步筛选优化。
进一步地,基于所述显微图像分析所述待鉴定细胞的生长状况包括基于所述显微图像确定待鉴定细胞的汇合度。
本发明中,所述待鉴定细胞的汇合度达到预期汇合度时,基于所述待鉴定细胞第0天的显微图像和/或所述待鉴定细胞的汇合度达到预期汇合度时拍摄的显微图像确定细胞是否具备单克隆源性。
所述预期汇合度为:待鉴定细胞分泌足量可用于检测活性的蛋白时对应的汇合度;即所述待鉴定细胞分泌的蛋白质的含量可用于检测时的汇合度记为预期汇合度。
进一步地,基于第0天的显微图像识别多细胞样品孔和/或无细胞样品孔。
进一步地,基于至少两个不同时间点的显微图像识别无繁殖能力的细胞样品孔。
本发明中,除了符合单克隆源性的细胞样品孔,不符合单克隆源性的细胞样品孔包括:多细胞样品孔、无细胞样品孔、无繁殖能力样品孔(可能仅含无繁殖能力的细胞如死细胞、可能仅含杂质,也可能两者都包含)。
对于所述多细胞样品孔、无细胞样品孔或无繁殖能力的细胞样品孔不再补充培养基和/或不继续拍摄显微图像。
进一步地,所述鉴定方法包括对符合单克隆源性的待鉴定细胞,输出单克隆鉴定报告,所述鉴定报告包括所述待鉴定细胞的生长曲线和/或相应时间点拍摄的显微图像。
进一步地,所述生长曲线以时间点为横坐标,以所述待鉴定细胞的汇合度为纵坐标。本发明中,基于所述显微图像构建所述待鉴定细胞的生长曲线,分析所述待鉴定细胞的生长过程。此外,还能够根据显微图像获得细胞的生长速度,所述待鉴定细胞的生长速度通过比较至少两个时间点的显微图像得到。
本发明中,在确定孔板上的某孔中的待鉴定细胞具有单克隆源性之后,需要输出其各个时间点摄取的显微图像,并合成细胞生长曲线,作为单克隆源性鉴定报告的一部分,作为单克隆源性鉴定的参考依据,方便将单克隆源性的步骤标准化,方便后续验证。
示例性地,所述鉴定方法包括如下步骤:
(1)对待鉴定细胞进行有限稀释,按照0.5~1cell/孔进行铺板,并使用高通量细胞分析系统的明场和/或荧光通道对所述待鉴定细胞进行显微成像,得到培养第0天的显微图像;
(2)培养所述待鉴定细胞,并在培养第1天、第3天、第5天、第7天、第14天或第21天中的任意一天或至少两天的进行显微成像(也可以是其他时间点,本发明对此不做限定);
(3)所述待鉴定细胞生长到预期汇合度(如75~85%)后,追溯所述待鉴定细胞培养第0天的显微图像,确认为单细胞,则所述待鉴定细胞具有单克隆源性,并输出所述待鉴定细胞在相应时间点的显微图像及生长曲线作为单克隆源性的鉴定报告。
本发明中,先对细胞进行有限稀释,每孔按照0.5个cell进行接种,从第0天开始拍摄,而后拍摄其第1天、第3天、第5天、第7天、第14天等的细胞图像(也可以是其他时间点,本发明对此不做限定),待细胞生长到一定程度如达到预期汇合度(如80%左右)后,进行单克隆源性鉴定,追溯到第0天,确认是否为单个细胞;
如果确认第0天是单个细胞,则确定单克隆源性,并输出该孔不同时间点的图片及相应生长曲线作为单克隆源性的鉴定报告;如果第0天不是单个细胞,则证明该孔中不是单克隆,原则上该孔细胞不得使用。
第二方面,本发明提供了一种鉴定细胞单克隆源性的系统,所述系统包括如下模块:
显微成像模块,用于对待鉴定细胞进行显微成像,在明场和/或荧光通道下对孔板上多个样品孔中的所述待鉴定细胞进行显微成像,并获取所述待鉴定细胞的显微图像;
分析处理模块,用于分析所述待鉴定细胞的显微图像,得到所述待鉴定细胞的生长状况并基于所述待鉴定细胞的生长状况鉴定所述待鉴定细胞的单克隆源性。
所述系统还包括:样品台模块,用于承载所述孔板,所述孔板有多个样品孔,所述显微成像模块对所述孔板上各孔中的待鉴定细胞分别进行拍摄,得到所述待鉴定细胞的显微图像。
所述系统还包括:样品自动更换模块,用于更新孔板,再由显微成像模块对更新后的孔板上的待鉴定细胞进行拍摄,得到所述更新后的孔板上的待鉴定细胞的显微图像。
第三方面,本发明还提供一种如第一方面所述的鉴定方法和/或如第二方面所述的鉴定细胞单克隆源性的系统在待鉴定细胞的筛选或待鉴定细胞质量控制中的应用。
本发明中提供的鉴定方法能够用于待鉴定细胞的筛选及质量控制等领域,且检测方法高通量、效率较高,能够明显缩短开发时间。
本发明所述的数值范围不仅包括上述列举的点值,还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值,限于篇幅及出于简明的考虑,本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
与现有技术相比,本发明至少具有以下有益效果:
(1)本发明提供一种高通量鉴定单克隆源性的方法,可以提供直接的影像证据,连续拍照可逆向追踪,可提供不同时间点的细胞生长信息,比单纯的单克隆泊松分布概率更严谨,也更有说服力;而且一旦确定单克隆源性,无需第二轮有限稀释,缩短开发时间。
(2)该方法遵从以监管的方式验证和记录单克隆性,接种后可对单个细胞进行清晰成像,确保单克隆来源的可信度,孔边缘的细胞仍清晰可见;通过克隆生长不同时间点的成像,可对多克隆的孔快速识别和有效的排除;此外,本发明所述的方法还可以测量各个克隆的生长速度,后续结合抗体生产能力的分析结果,能够再对克隆进行进一步筛选优化;该方法不仅适用于96孔板,也适用于384等其他孔板的检测分析。
附图说明
图1为本发明中使用的高通量细胞分析系统的结构示意图。
图2为本发明中提供的克隆源性的鉴定方法的流程示意图。
图3为贴壁CHO工程细胞在不同时间点的显微图像。
图4为悬浮CHO工程细胞在不同时间点的显微图像。
图5为所述贴壁CHO工程细胞的生长曲线。
图6为所述悬浮CHO工程细胞的生长曲线。
具体实施方式
下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案,但下述的实例仅仅是本发明的简易例子,并不代表或限制本发明的权利保护范围,本发明的保护范围以权利要求书为准。
本发明中,所使用的高通量细胞分析系统的结构如图1所示,具体包括:光源模块、显微成像模块、样品台模块、控制模块、分析处理模块及样品自动更换模块;
(1)所述分析处理模块与所述显微成像模块相连,用于分析处理显微成像装置采集的显微图像,识别单细胞样品孔、多细胞样品孔、无细胞样品孔或无繁殖能力的细胞样品孔;
(2)所述控制模块分别与光源模块、样品台模块、显微成像模块及样品自动更换模块相连,分别控制光源通道、样品位置移动、显微成像设置及自动更换样品;
(3)所述光源模块包括明场光源和/或荧光光源。所述光源模块提供荧光激发光经样品台模块中的样品形成图像信息;
具体地,所述光源模块包括荧光光源组件以及用于支撑和移动荧光光源的荧光光源座;所述荧光光源组件包括滤光立方体和荧光发生单元;所述光源模块还包括与荧光光源相连的用于调节荧光光源位置的荧光光源电机;所述荧光光源电机与控制模块相连;
(4)所述显微成像模块采集样品台模块中样品的光学信息形成显微图像;所述显微成像模块包括物镜、管镜和相机;
(5)所述样品自动更换模块可以自动更换样品载板,对多块样品载板上的样品进行批量检测,可以24小时不间断工作,高效实现对样品的高通量检测。
若无特殊说明,本发明中所用反应试剂和实验耗材均可购自本领域常规生产厂商;同样的,若无特殊说明,所用实验方法和技术手段均为本领域技术领域人员熟知的方法和手段。
图2给出了本发明中单克隆源性的高通量鉴定步骤,具体包括如下步骤:
S1、对待鉴定细胞进行显微成像
高通量细胞分析系统的光源模块对样品台模块上孔板中待鉴定细胞的显微成像。
所述孔板用于承载待鉴定细胞,可以是单孔或多孔(如96孔、384孔等)的。所述待鉴定细胞可以是CHO工程细胞、293T工程细胞或Vero工程细胞,悬浮或贴壁状态均可。此外,其他类型的细胞如干细胞的单克隆源性也能通过本发明提供的方案进行鉴定,本发明对此不做限定。所述待鉴定细胞也可携带荧光标记等,若携带荧光标记,则在明场和/或荧光通道下均能对其进行显微成像;
在一实施例中,所述待鉴定细胞为贴壁的CHO工程细胞,所述CHO细胞为中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO),是一种具有代表性的用于基因工程疫苗研究的动物表达系统;使用DMEM(dulbecco's modified eagle medium)完全培养基按照0.5cell/孔进行96孔板的铺板,每孔体积为200μL;在明场和/或荧光通道下对孔板上的CHO细胞进行显微成像;
在另一实施例中,所述待鉴定细胞为悬浮的CHO工程细胞,按照同样的方式进行铺板后,在明场和/或荧光通道下对孔板上的CHO细胞进行显微成像;
S2、获取待鉴定细胞的显微图像
高通量细胞分析系统的显微成像模块获取样品台模块上孔板中待测样品的显微图像。在至少两个时间点对所述待鉴定细胞进行显微成像,且所述时间点包含培养第0天,其余时间点包括培养第1天至预期培养结束日期中的任意一个或至少两个。在多个时间点拍照,可逆向追踪,可提供不同时间点的细胞生长信息,可对多克隆的孔快速识别和有效的排除比单纯的单克隆泊松分布概率更严谨,也更有说服力。
在一实施例中,使用高通量细胞分析系统在贴壁的CHO工程细胞铺板后的第0天、第1天、第3天、第5天、第7天、第14天和第21天的时间点(也可以是其他时间点,本发明对此不做限定)进行拍照;所得显微成像结果如图3所示;由图可知,本发明所述的方法对单个细胞进行清晰成像,孔边缘的细胞仍清晰可见;且随着时间的延长,细胞大量繁殖。
在另一实施例中,使用高通量细胞分析系统在悬浮的CHO工程细胞铺板后的第0天、第1天、第3天、第5天、第7天、第14天和第21天的时间点(也可以是其他时间点,本发明对此不做限定)进行拍照;所得显微成像结果如图4所示;
S3、分析待鉴定细胞的生长状况
高通量细胞分析系统的分析处理模块对待鉴定细胞的显微图像进行分析。所述分析方法可分为两种:
方法一:基于显微图像计算汇合度,若某一孔汇合度达到预期汇合度(在预期汇合度下待鉴定细胞能够分泌足量的可用于检测活性的蛋白),基于所述待鉴定细胞第0天的显微图像和/或所述待鉴定细胞的汇合度达到预期汇合度时拍摄的显微图像确定细胞是否具备单克隆源性。
方法二:拍摄第0天的图像后,基于第0天的显微图像识别出多细胞样品孔和/或无细胞样品孔;由于杂质(如细胞碎片、细小颗粒等)可能具有与待鉴定细胞相似的形态。在一些实施例中,对于第0天图像上出现多个类似细胞的情况,直接确定为多细胞样品孔。
对于多细胞样品孔和无细胞样品孔,后续无需再补充培养基或者继续拍摄观察,可以节省时间和成本。
S4、鉴定单克隆源性
基于所述待鉴定细胞的图像分析结果确定所述待鉴定细胞的单克隆源性。
基于第0天图像进行鉴定:在一些实施例中,追溯第0天图像,若为单细胞,则符合单克隆源性,输出单克隆鉴定报告,报告包括生长曲线和每个时间点的显微图像,否则确定为多细胞或无细胞样品孔。
在一具体的实施例中,追溯孔内的贴壁的CHO工程细胞在第0天时为单细胞,因此可以确定其单克隆源性;输出单克隆鉴定报告,报告包括生长曲线和每个时间点的显微图像,图5即为贴壁的CHO工程细胞的生长曲线,该生长曲线以时间(天)为横坐标,汇合度(%)为纵坐标,反应细胞的生长情况。在一具体的实施例中,追溯孔内的悬浮的CHO工程细胞在第0天时为单细胞,因此可以确定其单克隆源性;图6即为悬浮的CHO工程细胞的生长曲线。
基于汇合度进行鉴定:在另一些实施例中,待鉴定细胞的汇合度达到预期汇合度时拍摄的显微图像;若只有一个细胞团,则符合单克隆源性,输出单克隆鉴定报告,报告包括生长曲线和每个时间点的显微图像,否则确定为多细胞。
基于第0天图像和预期汇合度共同鉴定:在另一些实施例中,可以结合二者共同鉴定是否符合单克隆源性。例如,细胞样品孔中可能包含与细胞形态相似的杂质,追溯第0天的图像时,可能会误判为多细胞,此时可以结合汇合度达到预期时拍摄的显微图像,若显示为一个细胞团,则可证明第0天为单细胞,否则,则为多细胞或无细胞样品孔。
此外,在一些实施例中,为了结果更精确,基于第0天图像初步判断为多细胞样品孔后,可以继续对这些疑似的多细胞样品孔拍摄显微图像,对比至少两个时间点(间隔1~3天,与待鉴定细胞自身特性相关)的显微图像确定细胞是否为多细胞(图像识别算法识别出生长为多个细胞团)。同样,识别为多细胞样品孔后,无需对该孔再补充培养基或者继续拍摄观察。
在另一些实施例中,基于第0天的显微图像判断为单细胞的,可能无繁殖能力(比如是形态与细胞相似的杂质或死细胞)。此时,需要对比至少两个时间点(间隔1~3天,与待鉴定细胞自身特性相关)的显微图像确定细胞是否具备繁殖能力,如图像上的细胞未发生变化,或基于图像计算得到的汇合度没有变化,则确定为无繁殖能力的样品孔,后续无需再补充培养基或者继续拍摄观察。
除多细胞样品孔、无细胞样品孔和无繁殖能力样品孔外,对其余样品孔,继续拍摄显微图像,直至待鉴定细胞的汇合度达到预期汇合度,可输出单克隆鉴定报告。
综上所述,本发明中提供的鉴定方法,在接种后可对单个细胞进行清晰成像,确保单克隆来源的可信度,孔边缘的细胞仍清晰可见;通过克隆生长不同时间点的成像,可对多克隆的孔快速识别和有效的排除;可以提供直接的影像证据,连续拍照可逆向追踪,可提供不同时间点的细胞生长信息,与单纯的单克隆泊松分布概率相比,可靠性更高。
申请人声明,以上所述仅为本发明的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,所属技术领域的技术人员应该明了,任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到的变化或替换,均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (3)
1.一种待鉴定细胞单克隆源性的鉴定方法,其特征在于,所述鉴定方法包括:
(1)对待鉴定细胞进行有限稀释,按照0.5~1 cell/孔进行铺板,并使用高通量细胞分析系统的明场和/或荧光通道对所述待鉴定细胞进行显微成像,得到培养第0天的显微图像;所述待鉴定细胞包括悬浮细胞和/或贴壁细胞;
(2)培养所述待鉴定细胞,在至少两个时间点对所述待鉴定细胞进行显微成像,且所述时间点包含培养第0天;所述至少两个时间点中包含培养第0天,其余时间点包括培养第1天至预期培养结束日期中的任意一个或至少两个;预期培养结束日期为培养第21天;
(3)所述待鉴定细胞生长到预期汇合度75~85%后,追溯所述待鉴定细胞培养第0天的显微图像,确认为单细胞,则所述待鉴定细胞具有单克隆源性,并输出所述待鉴定细胞在相应时间点的显微图像及生长曲线作为单克隆源性的鉴定报告;所述生长曲线以时间点为横坐标,以所述待鉴定细胞的汇合度为纵坐标;
确定待鉴定细胞的单克隆源性的方法包括:
基于汇合度进行鉴定:待鉴定细胞的汇合度达到预期汇合度时拍摄的显微图像;若只有一个细胞团,则符合单克隆源性,输出单克隆鉴定报告,报告包括生长曲线和每个时间点的显微图像,否则确定为多细胞;
或,基于第0天图像和预期汇合度共同鉴定:结合二者共同鉴定是否符合单克隆源性;细胞样品孔中可能包含与细胞形态相似的杂质,追溯第0天的图像时,可能会误判为多细胞,此时可以结合汇合度达到预期时拍摄的显微图像,若显示为一个细胞团,则可证明第0天为单细胞,否则,则为多细胞或无细胞样品孔;对所述多细胞样品孔、无细胞样品孔或无繁殖能力的细胞样品孔不再补充培养基和/或不继续拍摄显微图像。
2.一种鉴定细胞单克隆源性的系统,其特征在于,所述系统包括如下模块:
显微成像模块,用于对待鉴定细胞进行显微成像,在明场和/或荧光通道下对孔板上多个样品孔中的所述待鉴定细胞进行显微成像,并获取所述待鉴定细胞的显微图像;
分析处理模块,用于分析所述待鉴定细胞的显微图像,得到所述待鉴定细胞的生长状况,并基于所述待鉴定细胞的生长状况鉴定所述待鉴定细胞的单克隆源性;
所述分析处理模块基于所述显微图像分析所述待鉴定细胞的生长状况,基于所述显微图像确定待鉴定细胞的汇合度,所述待鉴定细胞的汇合度达到预期汇合度时,基于所述待鉴定细胞第0天的显微图像和/或所述待鉴定细胞的汇合度达到预期汇合度时拍摄的显微图像确定细胞是否具备单克隆源性;判断符合单克隆源性的标准为:如果确认第0天是单个细胞,则确定单克隆源性,如果第0天不是单个细胞,则证明该孔中不是单克隆;
所述鉴定方法包括在至少两个时间点对所述待鉴定细胞进行显微成像,且所述时间点包含培养第0天;所述至少两个时间点中包含培养第0天,其余时间点包括培养第1天至预期培养结束日期中的任意一个或至少两个;对符合单克隆源性的待鉴定细胞,输出单克隆鉴定报告;所述单克隆鉴定报告包括所述待鉴定细胞的生长曲线和/或相应时间点拍摄的显微图像,所述生长曲线以时间点为横坐标,以所述待鉴定细胞的汇合度为纵坐标;
样品台模块,用于承载所述孔板,所述孔板有多个样品孔,所述显微成像模块对所述孔板上各孔中的待鉴定细胞分别进行拍摄,得到所述待鉴定细胞的显微图像;
样品自动更换模块,用于更新孔板,再由显微成像模块对更新后的孔板上的待鉴定细胞进行拍摄,得到所述更新后的孔板上的待鉴定细胞的显微图像。
3.如权利要求1所述的鉴定方法和/或如权利要求2所述的鉴定细胞单克隆源性的系统在待鉴定细胞的筛选或待鉴定细胞质量控制中的应用。
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