CN112666359B - 血浆神经酰胺作为预测肝切除术后肝功能不全的生物标志物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物医药技术领域，涉及用于肝切除术后肝功能不全预后预测的生物标志物，本发明公开了血浆神经酰胺作为预测肝切除术后肝功能不全的生物标志物及其应用，本发明采用HPLC‑MS/MS法检测神经酰胺在人血浆中的浓度，通过临床试验证明了18：1碳‑神经酰胺(C18：1‑Cer)和/或20：1碳‑神经酰胺(C20：1‑Cer)在发生肝切除术后肝功能不全组的术前血浆样本中的含量明显高于其在未发生肝切除术后肝功能不全组的含量。利用本发明进行肝切除术后肝功能不全的辅助诊断和预后判断，对围手术期临床治疗具有指导意义。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及血浆神经酰胺作为预测肝切除术后肝功能不全的生物标志物及其应用。
背景技术
肝切除术是治疗肝脏各种良恶性病变的重要手段，虽然得益于现代外科手术以及围手术期管理技术的提高，肝切除术后患者的预后已有显著改善，但是肝切除术后肝功能不全(post-hepatectomy liver failure，PHLF)仍是引起肝切除术后患者死亡的重要并发症，尤其是在接受半肝切除的大范围肝切除术的患者。根据2011年国际肝脏外科学组(International Study Group of Liver Surgery，ISGLS)提出了PHLF诊断及分级标准，PHLF的发病率可能在0.7％到34％之间，并将PHLF分为A、B、C三级，并且是延长住院时间、增加费用和不良长期结果的主要原因。同时C级PHLF病人的术后死亡率高达47.6％。然而，由于对PHLF发生发展的病理生理机制缺乏理解，往往导致PHLF的临床防治陷入困境，临床上仍然缺乏防治PHLF的有效措施，因此对PHLF展开深入的研究具有重要的临床意义。
鞘脂代谢物包括神经酰胺(ceramides，CER)、鞘氨醇(sphingosine，SPH)、和鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate，S1P)等是一类调节细胞增殖的重要活性脂质。既往认为CER、SPH抑制细胞增殖，而S1P促进细胞增殖，CER、SPH和S1P的平衡是影响细胞增殖的关键因素。CER是由神经鞘氨醇长链碱基与不同的脂肪酸碳链构成，CER的种类繁多，根据脂肪酸碳链的饱和度，它可分为饱和CER、不饱和CER两大类，再根据脂肪酸碳链的长度，CER可分为短链(少于6个碳原子)、中链(6-12个碳原子)、长链(14-20个碳原子)及超长链(多于22个碳原子)四类。CER的生成途径包括从头合成、复合鞘脂降解途径以及补救合成途径。CER降解生成SPH，SPH可被磷酸化生成S1P。随着CER定性定量技术的发展、成熟，研究不同种类的CER及其代谢途径的特异性生物学功能已渐渐成为脂质学领域的研究热点。CER、SPH和S1P对各种肝病的病理生理机制有重要调节作用。越来越多的临床研究证实，CER及其代谢物的水平与多种肝病显著相关，CER及其代谢物水平是潜在的诊断性标志物，同时，CER代谢途径也是治疗这些肝病的潜在靶点。
研究不同种类的CER的特异性生物学功能是脂质学领域的研究热点，越来越多的研究也证实，不同种类的CER及其代谢物的水平与不同肝病的发生发展有一定相关性。运用HPLC-MS/MS开展对不同种类CER的定性定量实验。
目前，关于神经酰胺代谢在肝切除术后肝功能不全的作用机制尚不清楚，其功能和表达变化的临床意义尚未有报道。因此，运用HPLC-MS/MS的技术，对进行肝切除病人的术前血浆进行神经酰胺靶向定量定性分析，收集围术期相关临床数据，研究CER水平与PHLF的相关性，确立神经酰胺水平对PHLF的临床诊疗意义，探索针对神经酰胺水平对肝切除术后肝功能不全的相关性至关重要。
发明内容
为解决上述问题，本发明第一个方面是提供用于肝切除术后肝功能不全预后预测的生物标志物，所述生物标志物为18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)。
在本发明的技术方案中，所述神经酰胺还可以为18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)的同源物、或具有其生物活性的变体形式。
本发明第二个方面提供了18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)作为检测靶标在预测或评估肝切术后肝功能不全的应用。
在本发明的技术方案中，所述预测或评估是根据所检测对象的生物样本中的18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)含量水平来预测或评估检测对象肝切除后肝功能不全的发生风险。
在本发明的技术方案中，所述生物样本是人血浆。
本发明第二个方面提供了18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)在制备用于预测或评估肝切术后肝功能不全的试剂盒中的用途。
在本发明的技术方案中，所述试剂盒是根据所检测对象的生物样本中18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)含量水平来预测或评估肝切术后肝功能不全的风险。
在本发明的技术方案中，所述生物样本是人血浆。
本发明第三个方面提供了18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)或其类似物或代谢调节剂在制备预防或治疗肝切除术后肝功能不全药物组合物中的应用，所述代谢调节剂具有调节神经酰胺合成、降解、转化的作用。
在本发明的技术方案中，所述药物组合物包括能调节18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)合成及降解的药物。
本发明第四个方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物由18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)与药学上可接受的药用载体组成。
本发明采用HPLC-MS/MS方法检测进行肝切除术前人血浆中神经酰胺的水平，并评估血浆中神经酰胺水平与肝切除术后肝功不全的相关性。具体的人血浆18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)的提取和检测方法：取135ul异丙醇，50ul血浆，15ul内标，混匀，室温静置10min，将待测样品置于-20℃冰箱过夜；次日将待测样品取出，4℃16000g条件下离心20min，沉淀蛋白；取上清，用尼龙过滤器(10um)过滤，移至上样管，标记后样品用HPLC-MS/MS技术检测。
在本发明的一些实施方案中，所述检预测为根据所检测对象的生物样品(血浆)中的18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)水平来评估对象中肝切术后肝功能不全的预后预测或病情预测。
需要说明的是，本发明可以采用本领域熟知的多种方法来将18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)或其类似物或代谢调节剂施用于患者如哺乳动物，优选人。所述给药方式是非肠道给予的，包括但不限于：皮下注射、肌肉注射、经皮给予、局部给予、植入、缓释给予等；也可选择采用基因治疗的手段进行肝切除术后肝功能不全的预防或治疗，如直接将18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)或其类似物或代谢调节剂通过诸如注射等方法施用于患者；或者，可通过一定的途径将携带18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)或其类似物或代谢调节剂的表达单位如表达载体或病毒等递送到靶点上，并使之表达具有18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)或其类似物或代谢调节剂，具体情况需视所述的药剂类型而定，这些均是本领域技术人员所熟知的。
在本发明中，“预后”是指进行肝切除术患者在通过手术、药物治疗或其组合处理等肝切术后肝功不全预防和治疗的过程或结果。预后可以通过检测血浆18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)的含量水平来评估。预后评估可以这样进行：根据标志物的水平，或者升高或降低，确定患者的预后是否良好，或者确定良好预后或不良预后的概率。术前血浆18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)的含量高于预测模型的阈值时，预测患者术后发生肝切除术后肝功能不全高风险。术前血浆18：1碳-神经酰胺(C18：1-Cer)和/或20：1碳-神经酰胺(C20：1-Cer)的含量低于预测模型的阈值时，预测患者术后发生肝切除术后肝功能不全低风险。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：
1、本发明发现了人血浆中C18：1-Cer和/或C20：1-Cer的水平高低能准确预测肝切除术后肝功能不全。基于上述发现，本发明提供了一种用于肝切除术后肝功能不全的生物标志物，生物标志物为血浆C18：1-Cer和/或C20：1-Cer，该标志物作为检测靶点，可预测或辅助判断病人肝切除术后的发生肝功能不全的概率或预后。
2、临床研究结果显示：人血浆C18：1-Cer检测对预测肝切除术后肝功能不全的ROC曲线下面积是0.673，敏感性是42.3％，特异性为89.1％约登(Youden)指数J为0.314，预测肝切除术后肝功能不全的最佳临界(cutoff)值为3.81ng/mL。即患者术前血浆C18：1-Cer大于或等于3.81ng/mL时，有发生肝切除术肝功能不全的高风险概率；患者术前血浆C18：1-Cer小于3.81ng/mL时，有发生肝切除术肝功能不全的低风险概率。人血浆C20：1-Cer检测对预测肝切除术后肝功能不全的ROC曲线下面积是0.707，敏感性是65.4％，特异性为76.4％，约登(Youden)指数J为0.418，预测肝切除术后肝功能不全的最佳临界(cutoff)值为2.99ng/mL。即患者术前血浆C20：1-Cer大于等于2.99ng/mL时，有发生肝切除术肝功能不全的高风险概率；患者术前血浆C20：1-Cer小于2.99ng/mL时，有发生肝切除术肝功能不全的低风险概率。人血浆C18：1-Cer和C20：1-Cer的总和(C18：1+C20：1-Cer)检测对预测肝切除术后肝功能不全的ROC曲线下面积是0.690，敏感性是61.5％，特异性为80％，约登(Youden)指数J为0.415，预测肝切除术后肝功能不全的最佳临界(cutoff)值为6.57ng/mL。即患者术前血浆C18：1+C20：1-Cer大于等于6.57ng/mL时，有发生肝切除术肝功能不全的高风险概率；患者术前血浆C18：1+C20：1-Cer小于6.57ng/mL时，有发生肝切除术肝功能不全的低风险概率。
通过临床试验证明了血浆C18：1+C20：1-Cer在患者发生肝切除术后肝功能不全患者的术前血浆样本中的含量明显高于其在未发生肝切除术后肝功能不全组的含量。
附图说明
图1为人血浆C18：1-Cer在未发生肝切除术后肝功能不全者(Non-PHLF)和发生肝切除术后肝功不全者(PHLF)两组间的定量差异(median(IQR)；1.97(1.24-2.65)vs 2.57(1.65-4.05)；Non-PHLF vs PHLF；p＝0.008)。
图2为人血浆C20：1-Cer在未发生肝切除术后肝功能不全者(Non-PHLF)和发生肝切除术后肝功不全者(PHLF)两组间的定量差异(median(IQR)；2.21(1.37-3.10)vs 3.39(1.88-4.78)；Non-PHLF vs PHLF；p＝0.009)。
图3为人血浆C18：1+C20：1-Cer在未发生肝切除术后肝功能不全者(Non-PHLF)和发生肝切除术后肝功不全者(PHLF)两组间的定量差异(median(IQR)；4.12(2.89-5.75)vs5.93(1.88-4.78)；Non-PHLF vs PHLF；p＝0.009)。
图4为人血浆神经酰胺水平预测肝切除术后肝功能不全的ROC曲线。
图5为所有进行肝切除术患者术后发生肝功能不全的二元Logistic回归分析的独立危险因素的森林图。
图6为MELD Score、C18：1+C20：1-Cer、肝切除范围和预测模型诊断PHLF的ROC曲线。
图7为小部分肝切除术患者术后发生肝功能不全的二元Logistic回归分析的独立危险因素的森林图。
图8为MELD Score、C20：1-Cer和预测模型诊断PHLF的ROC曲线。
图9为C18：1-Cer的化学结构图。
图10为C20：1-Cer的化学结构图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行进一步的阐述，应理解，下述具体实施例仅是为了用于说明本发明，并不对本发明内容进行限定。
需要说明的是，以下实施例中所用原料和设备均为本领域技术人员熟知，且均为市场上能够购买到或容易获得或制得。
下述实施例中，C18：1-Cer含义为18：1碳-神经酰胺，C20：1-Cer含义为20：1碳-神经酰胺，附图9为实施例靶向检测的C18：1-Cer的化学结构图；附图10为本实例靶向检测的C20：1-Cer的化学结构图。
通过实施例证明，血浆C18：1-Cer和/或C20：1-Cer在患者发生肝切除术后肝功能不全患者的术前血浆样本中的含量明显高于其在未发生肝切除术后肝功能不全组的含量。
实施例1
1、收集患者临床资料和获得血浆样本
收集2018年10月到2020年1月期间在南方医科大学南方医院普通外科肝脏外科进行肝脏切除术的患者的相关资料。入组标准：(1)年龄18-80岁的拟行肝脏部分切除的病人。(2)患者为慢性乙型病毒性肝炎的患者。(3)肝功能评分为Child PughA或B级。排除标准：(1)若为肝脏恶性肿瘤病人，侵犯门脉主干及一级分支、总肝管及一级分支、肝静脉主干及下腔静脉，或存在肝外转移；(2)不符合R0切除；(3)存在胆道梗阻，手术合并胆道探查或重建；(4)手术合并脾切除或脾动脉结扎术；(5)术前合并心、肺、肾等其他器官的重大基础疾病；(6)术前有感染病史。符合入组及排除标准的患者81例，收集患者术前的血浆样品，用含有EDTA的采血管采取全血2ml，以3000rpm离心10min，分离取血浆，编号后置-80℃低温冰箱保存。所有病人均书面告知，标本收集均经南方医科大学南方医院医学伦理审查委员会同意。
2、对血浆样本进行脂质提取
采用异丙醇(Macklin，货号I811932-4L)进行样本脂质提取，实验操作具体如下：
①收集血浆样本后冻存于-80℃冰箱，取出后把血浆样品放置冰上融解；
②取50uL血浆样品，加入3倍体积的异丙醇与内标混合液(异丙醇135uL+内标15uL)，使用涡旋混合器充分混匀，室温下放置10分钟；
③将混合液样品置于-20℃冰箱过夜；
④次日将混合液样品取出，4℃下以16000g离心20min；
⑤取上清，尼龙过滤器(10um)过滤，移至送样管，标记后样品送检。
3、通过HPLC-MS/MS进行血浆神经酰胺检测。
仪器：Prelude SPLC System全自动在线样品纯化及液相系统，TSQ Quantiva三重四极杆质谱仪，厂家：Thermo fisher Scientific。液相法：色谱柱：前处理柱：C18-XL，0.5*50mm；色谱柱：Waters BEH C182.1*100mm,1.7um；流动相：Loading:A甲醇：水＝50：50(含10mM乙酸铵，0.2％甲酸)；B甲醇：异丙醇＝30：70(含10mM乙酸铵，0.2％甲酸)；C乙腈：异丙醇：丙酮＝45：45：10；eluting:A甲醇：水＝50：50(含10mM乙酸铵，0.2％甲酸)；B甲醇：异丙醇＝30：70(含10mM乙酸铵，0.2％甲酸)。柱温：40℃，样品加载量：5μL。全局参数主要包括离子源性质：离子源类型：H-ESI；喷涂电压：静电；正离子(V)：3000；负离子(V)：2200；SheathGas(Arb)：55；Aux Gas(Arb)：10；Sweep Gas(Arb)：0；Ion Transfer Tube Temp(℃)：350；Vaporizer Temp(℃)：300。
Scan参数包括4个参数：1，MS扫描属性：Orbitrap分辨率：60000；扫描范围(m/z)：200-2000；射频镜头(％)：60；AGC目标：2.0e5；最大注射时间(ms)：100；极性：正面。2，动态排除属性：n次后排除：1；排除持续时间：6；质量容差：ppm；低：10；高：10；排除同位素。3，Apex检测特性：预期峰宽(FWHM，s)：10；所需的顶点窗口(％)：30。4，数据相关的MSn扫描属性：隔离窗口(m/z)：3；隔离偏移：关闭；激活类型：HCD；碰撞能量模型：阶梯式；HCD碰撞能量(％)：15,30,45；探测器类型：Orbitrap；Orbitrap分辨率：15000；第一质量(m/z)：120；AGC目标：5.0e4；最大注射时间(ms)：100。
HPLC-MS/MS质谱仪用于检测血浆C18：1-Cer和C20：1-Cer的参数如下表1所示。
表1 C18：1-Cer和C20：1-Cer的分子信息和SRM参数
4、统计分析和统计学方法
根据ISGLS提出了PHLF诊断标准将病人分为两组，其中Non-PHLF组：未发生肝切除术后肝功能不全，共55名；PHLF组：发生肝切除术后肝功能不全，共26名。
采用SPSS 18.0对数据进行统计学分析。计量资料使用莱文方差齐性检验，正态检验采用Shapiro-wilk检验。若符合正态分布使用x－±s表示，并采用t检验；若不服从正态分布则以中位数(四分位距)的方式来表示。使用二元Logistic回归分析计算术后患者发生肝功能不全的独立影响因素；采用受试者工作特征曲线(Receiver operatingcharacteristic curve，ROC)计算神经酰胺预测PHLF的灵敏度，特异度，判读其诊断价值及准确性，计算临界值。检验水准α＝0.05(双侧)。
5、结果与分析
图1是PHLF组和Non-PHLF组血浆中C18：1-Cer水平比较。从图1中可以得出，PHLF组血浆C18：1-Cer浓度的中位数(四分位距)为2.57(1.65-4.05)ng/ml，Non-PHLF组血浆C18：1-Cer浓度的中位数(四分位距)为1.97(1.24-2.65)ng/ml，两者具有显著差异(P<0.01)。
图2是PHLF组和Non-PHLF组血浆中C20：1-Cer水平比较。从图2中可以得出，PHLF组血浆C20：1-Cer浓度的中位数(四分位距)为3.39(1.88-4.78)ng/ml，Non-PHLF组血浆C20：1-Cer浓度的中位数(四分位距)为2.21(1.37-3.10)ng/ml，两者具有显著差异(P<0.01)。
图3是PHLF组和Non-PHLF组血浆中C18：1+C20：1-Cer水平比较。从图3中可以得出，PHLF组血浆C18：1+C20：1-Cer浓度的中位数(四分位距)为5.93(1.88-4.78)ng/ml，Non-PHLF组血浆C18：1+C20：1-Cer浓度的中位数(四分位距)为4.12(2.89-5.75)ng/ml，两者具有显著差异(P<0.01)。
图4是血浆神经酰胺水平诊断PHLF的ROC曲线。表2是图4中ROC曲线下的面积计算值；
表2附图4中ROC曲线下的面积计算值
从图4以及表2中可以得出人血浆C18：1-Cer检测对预测肝切除术后肝功能不全的ROC曲线下面积是0.673，敏感性是42.3％，特异性为89.1％，约登(Youden)指数J为0.314，预测肝切除术后肝功能不全的最佳临界(cutoff)值为3.81ng/mL。人血浆C20：1-Cer检测对预测肝切除术后肝功能不全的ROC曲线下面积是0.707，敏感性是65.4％，特异性为76.4％，约登(Youden)指数J为0.418，预测肝切除术后肝功能不全的最佳临界(cutoff)值为2.99ng/mL。人血浆C18：1+C20：1-Cer检测对预测肝切除术后肝功能不全的ROC曲线下面积是0.690，敏感性是61.5％，特异性为80％，约登(Youden)指数J为0.415，预测肝切除术后肝功能不全的最佳临界(cutoff)值为6.57ng/mL。
具体得到的人血浆C18：1-Cer水平、C20：1-Cer水平或C18：1+C20：1-Cer水平与肝切除术后肝功能不全风险关系为：
1)人血浆C18：1-Cer检测对预测肝切除术后肝功能不全的所述血浆C18：1-Cer的浓度阈值为3.81ng/mL，。具体地，当所述血浆C18：1-Cer浓度大于或等于3.81ng/mL时有发生肝切除术肝功能不全的高风险概率；当所述血浆C18：1-Cer浓度小于3.81ng/mL时，有发生肝切除术肝功能不全的低风险概率。
2)人血浆C20：1-Cer检测对预测肝切除术后肝功能不全的所述血浆C20：1-Cer的浓度阈值为2.99ng/mL。具体地，当所述血浆C20：1-Cer浓度大于或等于2.99ng/mL时有发生肝切除术肝功能不全的高风险概率；当所述血浆C20：1-Cer浓度小于2.99ng/mL时，有发生肝切除术肝功能不全的低风险概率。
3)人血浆C18：1+C20：1-Cer检测对预测肝切除术后肝功能不全的所述血浆C18：1+C20：1-Cer的浓度的阈值为6.57ng/mL。具体地，当所述血浆C18：1+C20：1-Cer浓度大于或等于6.57ng/mL时有发生肝切除术肝功能不全的高风险概率；当所述血浆C18：1+C20：1-Cer的浓度小于6.57ng/mL时，有发生肝切除术肝功能不全的低风险概率。
表3为所有进行肝切除术患者术后发生肝功能不全独立影响因素二元Logistic回归分析结果
表3
所有进行肝切除术患者术后发生肝功能不全独立影响因素二元Logistic回归分析结果如表3所示，Meld Score(OR＝1.934，95％CI：1.152-2.916，P＝0.011)、C18：1+C20：1-Cer(OR＝1.432，95％CI：1.115-1.839，P＝0.005)以及大部分肝切除是患者术后发生肝功能不全的独立危险因素。图5为所有进行肝切除术患者术后发生肝功能不全的二元Logistic回归分析的独立危险因素的森林图。Meld Score、C18：1+C20：1-Cer和大部分肝切除为独立危险因素。
使用MELD Score、肝切除范围和C18：1+C20：1-Cer纳入二元项Logistic回归分析中，得到相关参数后，建立预测模型，方程为Logit(P)＝MELD Score×0.659-2.777×肝切除范围+0.359×(C18：1+C20：1-Cer)-4.308。肝脏切除范围：当大部分肝切除时，该值为＝1，当小部分肝切除时，该值为0。Hosmer-Lemeshow检验χ2值分别为7.854、11.887和9.343，P>0.05，该模型拟合度较高。
图6是MELD Score、肝切除范围、C18：1+C20：1-Cer和预测模型诊断PHLF的ROC曲线。下表4是图6中ROC曲线下的面积计算值。
表4附图6中ROC曲线下的面积计算值AUC
从图6以及表4可以得出MELD Score ROC曲线下面积是0.679，敏感性是45.8％，特异性为88.0％，对预测肝切除术后肝功能不全的阈值为6.57。具体地，当MELD Score大于或等于6.57有发生肝切除术肝功能不全的高风险概率；当MELD Score小于6.57时，有发生肝切除术肝功能不全的低风险概率。
人血浆C18：1+C20：1-Cer ROC曲线下面积是0.682，敏感性是58.3％，特异性为82.0％，所述血浆C18：1+C20：1-Cer的浓度阈值为6.57ng/mL。具体地，当所述血浆C18：1+C20：1-Cer浓度大于或等于6.57ng/mL时有发生肝切除术肝功能不全的高风险概率；当所述血浆C18：1+C20：1-Cer浓度小于6.57ng/mL时，有发生肝切除术肝功能不全的低风险概率。
预测模型ROC曲线下面积是0.841，敏感性是87.5％，特异性为78.0％，对预测肝切除术后肝功能不全的阈值为0.233。具体地，当预测模型计算值大于或等于0.233时有发生肝切除术肝功能不全的高风险概率；当预测模型计算值小于0.233时，有发生肝切除术肝功能不全的低风险概率。
可见，联合MELD Score、肝切除范围和血浆C18：1+C20：1-Cer浓度的预测模型能较好地预测肝切术后肝功能不全的发生。
表5为进行小部分肝切除术患者术后发生肝功能不全独立影响因素二元Logistic回归分析结果。
表5
进行小部分肝切除术患者术后发生肝功能不全独立影响因素二元Logistic回归分析结果如表5所示，Meld Score(OR＝1.772，95％CI：1.035-3.031，P＝0.037)、C20：1-Cer(OR＝2.391，95％CI：1.352-4.226，P＝0.003)是患者术后发生肝功能不全的独立危险因素。图7为术后发生肝功能不全的二元Logistic回归分析的独立危险因素的森林图。MeldScore、C20：1-Cer为进行小部分肝切除术患者术后发生肝功能不全的独立危险因素。
使用MELD Score、C20：1-Cer纳入二元项Logistic回归分析中，得到相关参数后，建立预测模型，方程为Logit(P)＝MELD Score×0.572+0.872×C20：1-Cer-7.073。Hosmer-Lemeshow检验χ2值分别为4.548和7.417，P>0.05，该模型拟合度较高。
图8是MELD Score、C20：1-Cer和预测模型诊断PHLF的ROC曲线。表6是图8中ROC曲线下的面积计算值。
表6附图8中ROC曲线下的面积计算值曲线下的面积
从图8以及表6可以得出MELD Score ROC曲线下面积是0.724，敏感性是60.0％，特异性为86.7％，对预测肝切除术后肝功能不全的阈值为6.57。具体地，当MELD Score大于或等于6.57有发生肝切除术肝功能不全的高风险概率；当MELD Score小于6.57时，有发生肝切除术肝功能不全的低风险概率。
人血浆C20：1-Cer ROC曲线下面积是0.775，敏感性是73.3％，特异性为82.8％，所述血浆C20：1-Cer的浓度阈值为3.17ng/mL。具体地，当所述血浆C20：1-Cer浓度大于或等于3.17ng/mL时有发生肝切除术肝功能不全的高风险概率；当所述血浆C20：1-Cer浓度小于3.17ng/mL时，有发生肝切除术肝功能不全的低风险概率。
预测模型ROC曲线下面积是0.841，敏感性是86.7％，特异性为71.1％，对预测肝切除术后肝功能不全的阈值为0.176。具体地，当预测模型计算值大于或等于0.176时有发生肝切除术肝功能不全的高风险概率；当预测模型计算值小于0.176时，有发生肝切除术肝功能不全的低风险概率。
可见，在进行小部分肝切除术的患者中，联合MELD Score、和血浆C20：1-Cer浓度的预测模型能较好地预测肝切术后肝功能不全的发生。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受所述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (1)
1.20：1碳-神经酰胺或18：1碳-神经酰胺和20：1碳-神经酰胺在制备用于预测或评估肝切术后肝功能不全的试剂盒中的用途；
当以20：1碳-神经酰胺制备用于预测或评估肝切术后肝功能不全的试剂盒时，以肝切除患者术前血浆20：1碳-神经酰胺浓度2.99ng/mL作为预测肝切除术后肝功能不全的临界值；
当以18：1碳-神经酰胺和20：1碳-神经酰胺时用于预测或评估肝切术后肝功能不全的试剂盒，以肝切除患者术前血浆18：1碳-神经酰胺和20：1碳-神经酰胺总浓度6.57ng/mL作为预测肝切除术后肝功能不全的临界值。
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