CN112662756A - 一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，涉及胎儿染色体检测领域。该基于胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，包括如下步骤：s1：取样，采取孕妇的含有胎儿DNA的外周血；s2：提取DNA，提取DNA，然后浓缩；s3：进行检查，运用高通量测序技术对全基因组扫描并进行生物信息分析；S4：输出结果；所述步骤s1取样可以采集流产组织(含胚胎、胎儿组织或绒毛)。本发明通过对胎儿在孕十二至二十二周左右进行检测，若胎儿在检测中出现染色体缺失或多染色体情况，我们建议终止妊娠，并且此时妊娠工作较为简单，为确保孕妇安全以及其家庭和睦。
Description
技术领域
本发明涉及胎儿染色体检测技术领域，具体为一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法。
背景技术
染色体(chromosome)是遗传物质，基因的载体，人类的常染色体是成对存在的。人体的体细胞染色体数目为23对，其中22对为男女所共有，称为常染色体(autosome)；另外一对为决定性别的染色体，男女不同，称为性染色体(sex chromosome)，男性为XY，女性为XX。在生殖细胞(generative cell)中，男性生殖细胞染色体的组成：22对常染色体+XY。女性生殖细胞染色体的组成：22对常染色体+XX；非整倍体(aneuploid)指细胞内染色体的数目增加或减少1条或几条。这是人类最常见的一类染色体畸变。细胞内染色体数目少了一条或多条，称为亚二倍体(hypodiploid)；多一条或数条，则称为超二倍体(hyperdiploid)。有时染色体数目虽是二倍体，但有些染色体对的数目或结构偏离正常，有的增多，有的减少，当增减的数目相等时染色体总数不变，称为假二倍体(pseudodiploid)。当核型中两对或两对以上染色体的数目有异常时叫复合非整倍体变异(complex aneuploid)；非整倍体的产生是由于生殖细胞在减数分裂过程中染色体发生了不分离。所谓不分离是指在第一次减数分裂时，某号同源染色体不分离，不能平均分配到两个子细胞中去，结果形成一个细胞得到双份染色体，另一个细胞未得到该染色体，由此而形成的配子有一半是多一条染色体(n+1)，一半则少一条染色体(n-1)，这种异常的配子受精后将会形成三体型和单体型的合子。如果第一次减数分裂正常，而第二次减数分裂时发生二分体的不分离，也会产生(n+1)和(n-1)的异常配子。巳知减数分裂时染色体不分离多发生在后期I。
高通量测序技术(High-throughput sequencing)又称“下一代”测序技术("Next-generation"sequencing technology)，以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。
染色体多一个或者少一个对人体生长和发育都会造成较大的影响，缺少染色体的婴儿较少能够存活，同时染色体上的基因也会出现很多疾病，对染色体基因进行检测也是重中之重，婴儿对孕妇造成较大的影响，严重的会影响孕妇的生命安全，越早的检测婴儿的染色体，是对家庭以及孕妇安全的保障，为此我们提出一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，解决了现有检测方式层次不齐，缺乏完整的检测方法以及步骤的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，包括如下步骤：
s1：取样，采取孕妇的含有胎儿DNA的外周血；
s2：提取DNA，提取DNA，然后浓缩；
s3：进行检查，运用高通量测序技术对全基因组扫描并进行生物信息分析；
S4：输出结果。
优选的，所述步骤s1取样可以采集受检者外周血等样品。
优选的，所述步骤s2先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用二倍容积异丙醇，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb，可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)。
优选的，所述步骤s2中浓缩，采用乙醇或异丙醇沉淀，需要阳离子盐的存在，NaAc最常用,NaCl对含SDS样品好，NH4Ac去除dNTP好，采用PiCl沉淀RNA好，但不能用于反转录前，同时沉淀温度与时间；0℃一4℃，12000g，10分钟，小于100bp DNA需超速离心。
优选的，所述步骤s3完成全基因组扫描，然后判断受检者或受检样本存在染色体非整倍体及微缺失/重复异常的风险，并与基因库的获病基因进行对照，寻找相似基因，若不配备，则基因完好，若匹配我们建议终止妊娠。
优选的，所述步骤s3的任务，我们出具书面检查结果，并给出合理建议。
工作原理：首先进行取样任务，通过多位置取血，可采用3-10天采集一次样本，月进行三次取样任务，可以可以采集流产组织(含胚胎、胎儿组织或绒毛)、刮宫组织、引产组织、脐带血、羊水或受检者外周血等样品；将采取的先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用二倍容积异丙醇，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb，可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)；再采用乙醇或异丙醇沉淀，需要阳离子盐的存在，NaAc最常用,NaCl对含SDS样品好，NH4Ac去除dNTP好，采用PiCl沉淀RNA好，但不能用于反转录前，同时沉淀温度与时间；0℃一4℃，12000g，10分钟，小于100bp DNA需超速离心，然后进行检测任务，运用高通量测序技术对全基因组扫描并进行生物信息分析，然后判断受检者或受检样本存在染色体非整倍体及微缺失/重复异常的风险，并与基因库的获病基因进行对照，寻找相似基因，若不配备，则基因完好，若匹配我们建议终止妊娠，最后出具书面检查结果，并给出合理建议，即完成检测任务，得出检测结果；
(三)有益效果
本发明提供了一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法。具备以下有益效果：
1、本发明提供了一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，通过对胎儿在孕十二至二十二周左右进行检测，若检测中出现染色体缺失或多染色体情况，我们建议终止妊娠，并且此时妊娠工作较为简单，为确保孕妇安全以及其家庭和睦。
2、本发明提供了一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，本发明确保检测的准确性，同时防止婴儿在生产前出现染色体变异情况。
3、本发明提供了一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，本发明通过对染色体上的基因排序进行检测，降低婴儿的发病，起到筛查的作用，避免了以检测出病因的出现。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例：
本发明实施例提供一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，包括如下步骤：
s1：取样，采取孕妇的含有胎儿DNA的外周血；
s2：提取DNA，提取DNA，然后浓缩；
s3：进行检查，运用高通量测序技术对全基因组扫描并进行生物信息分析；
S4：输出结果。
通过在胎儿在孕十二至二十二周左右进行检测，若胎儿在检测中出现染色体缺失或多染色体情况，我们建议终止妊娠，并且此时妊娠工作较为简单，为确保孕妇安全以及其家庭和睦，同时本发明通过多轮，每轮进行多次(三次)检测，确保检测的准确性，确保无误差，同时防止婴儿在生产前出现无染色体变异情况。
所述步骤s1取样可以采集受检者外周血等样品。
所述步骤s2先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用二倍容积异丙醇，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb，可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)。
所述步骤s2中浓缩，采用乙醇或异丙醇沉淀，需要阳离子盐的存在，NaAc最常用,NaCl对含SDS样品好，NH4Ac去除dNTP好，采用PiCl沉淀RNA好，但不能用于反转录前，同时沉淀温度与时间；0℃一4℃，12000g，10分钟，小于100bp DNA需超速离心。
所述步骤s3完成全基因组扫描，然后判断受检者或受检样本存在染色体非整倍体及微缺失/重复异常的风险，并与基因库的获病基因进行对照，寻找相似基因，若不配备，则基因完好，若匹配我们建议终止妊娠。
所述步骤s3的任务，我们出具书面检查结果，并给出合理建议。
首先进行取样任务，通过静脉取血，；将采取的先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用二倍容积异丙醇，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb，可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)；再采用乙醇或异丙醇沉淀，需要阳离子盐的存在，NaAc最常用,NaCl对含SDS样品好，NH4Ac去除dNTP好，采用PiCl沉淀RNA好，但不能用于反转录前，同时沉淀温度与时间；0℃一4℃，12000g，10分钟，小于100bp DNA需超速离心，然后进行检测任务，运用高通量测序技术对全基因组扫描并进行生物信息分析，然后判断受检者或受检样本存在染色体非整倍体及微缺失/重复异常的风险，并与基因库的获病基因进行对照，寻找相似基因，若不配备，则基因完好，若匹配我们建议终止妊娠，最后出具书面检查结果，并给出合理建议，即完成检测任务，得出检测结果；在胎儿在孕十六周之后，通过每个月采集一次样本的方式，进行之前相同的检测任务，防止婴儿在生产前出现染色体变异情况，为孕妇的安全着想。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (6)
1.一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
s1：取样，采取孕妇的含有胎儿DNA的外周血；
s2：提取DNA，提取DNA，然后浓缩；
s3：进行检查，运用高通量测序技术对全基因组扫描并进行生物信息分析；
S4：输出结果。
2.根据权利要求1所述的一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，其特征在于：所述步骤s1取样可以采集受检者外周血等样品，采样较为简单。
3.根据权利要求1所述的一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，其特征在于：所述步骤s2先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用二倍容积异丙醇，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb，可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)。
4.根据权利要求1所述的一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，其特征在于：所述步骤s2中浓缩，采用乙醇或异丙醇沉淀，需要阳离子盐的存在，NaAc最常用,NaCl对含SDS样品好，NH4Ac去除dNTP好，采用PiCl沉淀RNA好，但不能用于反转录前，同时沉淀温度与时间；0℃一4℃，12000g，10分钟，小于100bp DNA需超速离心。
5.根据权利要求1所述的一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，其特征在于：所述步骤s3完成全基因组扫描，然后判断受检者或受检样本存在染色体非整倍体及微缺失/重复异常的风险，并与基因库的获病基因进行对照，寻找相似基因，若不配备，则基因完好，若匹配我们建议终止妊娠。
6.根据权利要求1所述的一种胎儿染色体非整倍体基因组测序检测方法，其特征在于：所述步骤s3的任务，我们出具书面检查结果，并给出合理建议。
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| US20130017958A1 (en) * | 2009-10-26 | 2013-01-17 | Life Codexx | Means and methods for non-invasive diagnosis of chromosomal aneuploidy |
| CN103525939A (zh) * | 2013-10-28 | 2014-01-22 | 广州爱健生物技术有限公司 | 无创检测胎儿染色体非整倍体的方法和系统 |
| CN109371121A (zh) * | 2018-11-30 | 2019-02-22 | 成都凡迪医疗器械有限公司 | 一种用于产前诊断染色体异常的试剂盒 |
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