CN112661855B - 含SIRPa变体的融合蛋白 - Google Patents

Abstract

本申请涉及一种融合蛋白、与其相关的免疫缀合物、核酸分子、载体、组合物、细胞和制备方法，以及它们在制备药物中的用途。本申请所述的融合蛋白能够用于治疗肿瘤和/或自免疫疾病。

Description

含SIRPa变体的融合蛋白

技术领域

本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种多特异性融合蛋白，还涉及其在治疗肿瘤和/或自免疫疾病中的用途。

背景技术

目前，在肿瘤治疗领域，存在施用靶向药物和免疫治疗两大方法。这两种治疗方法可能有相互作用，导致更强的细胞毒性作用，稳定而持续地缓解肿瘤。然而，靶向药物和免疫治疗之间的相互作用是非常复杂的，种类、剂量、顺序、剂型等各种因素都可能会影响联合治疗的整体抗肿瘤效果和毒性特征。

B细胞成熟抗原BCMA(CD269或TNFRSF17)是肿瘤坏死因子超家族的成员，主要在浆细胞和一部分成熟的B细胞上表达，人BCMA是由184个氨基酸残基组成的III型跨膜蛋白。BCMA能与增殖诱导配体(APRIL)和B细胞激活因子(BAFF)特异性结合，激活NF-κB和MAPK8/JNK信号通路；也能与多种TRAF家族成员结合，促进B细胞在不同发育阶段的存活，参与调节体液免疫、B细胞发育和稳态。据报道，BCMA高表达于多种肿瘤细胞表面，而在造血干细胞和其他正常组织细胞中不表达，因此是癌症靶向性治疗的理想靶点。

CD47蛋白是一种跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族成员，除正常组织细胞表达CD47以外，许多肿瘤细胞过度表达CD47。肿瘤细胞表面的CD47与巨噬细胞表面的SIRPα相结合会阻止巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬，这被视为肿瘤逃避机体免疫监视的一种机制。阻断CD47蛋白和SIRPα的相互作用，可抑制肿瘤增长。

然而，现有的用于阻断CD47蛋白和SIRPα相互作用的试剂识别活性有限，其与CD47蛋白的亲和力往往不足，对肿瘤的抑制能力有限。同时，现有靶向CD47的抗体类药物存在引起贫血反应或者血小板减少的副作用。亟待获得同时特异性靶向CD47蛋白和相关肿瘤抗原的有效疗法。

发明内容

本申请提供了一种融合蛋白，其包含特异性结合BCMA的第一结合域和特异性结合CD47蛋白的第二结合域。本申请还提供包含该融合蛋白的免疫缀合物；编码该融合蛋白的核酸分子；能够包含和/或表达该融合蛋白的载体、组合物和细胞；以及制备所述融合蛋白的方法。本申请的融合蛋白、免疫缀合物、核酸分子、载体、组合物和细胞具有以下一种或多种性质：1)能够同时特异性结合CD47蛋白和BCMA抗原；2)能够特异性阻断CD47蛋白与SIRPα的相互作用；3)能够有效抑制肿瘤或肿瘤细胞的生长和/或增殖。

一方面，本申请提供了一种融合蛋白，其包含：特异性结合BCMA的第一结合域；以及特异性结合CD47蛋白的第二结合域；其中，所述第二结合域包含人SIRPα变体1的突变体，所述突变体与SEQ ID NO:13所示的序列相比，在第33位至第149位中的一个或多个位置包含氨基酸残基的取代、缺失或添加。

在某些实施方式中，所述突变体在选自下组的一个或多个氨基酸残基处包含氨基酸取代：I61、V63、E77、Q82、K83、E84、V93、D95、D96、K98、N100、R107、G109和V132。

在某些实施方式中，所述突变体在选自下组的氨基酸残基处包含氨基酸取代：(1)I61、V63、E77、E84、V93、L96、K98、N100和V132；(2)I61、E77、Q82、K83和E84；(3)I61、V63、K83、E84和V132；(4)I61、E77、E84、R107和V132；(5)I61、V63、E77、K83、E84和N100；(6)I61、E77、Q82、K83、E84和R107；(7)I61、E77、Q82、E84、V93、L96、N100、R107、G109和V132；(8)I61、E77、Q82、K83、E84和V132；(9)I61；(10)I61、D95、L96、G109和V132；(11)I61、D95、L96、K98、G109和V132；(12)I61、E77、E84、V93、R107和V132；(13)E77、L96、N100、G109和V132；(14)I61、V63、Q82、E84、D95、L96、N100和V132；(15)I61、E77、Q82、K83、E84、V93、D95、L96、K98、N100和V132；(16)I61、E77、Q82、K83、E84和V93；(17)I61、V63、E77、K83、E84、D95、L96、K98和N100；(18)I61、V63、E77、K83、D95、L96、K98、N100和G109；(19)I61、E77、Q82、E84、V93、D95、L96、K98和N100；和，(20)I61、V63、E77、Q82和E84。

在某些实施方式中，所述突变体包含选自下组的一个或多个氨基酸取代：I61L/V/F、V63I、E77I/N/Q/K/H/M/R/N/V/L、Q82S/R/G/N、K83R、E84K/H/D/R/G、V93L/A、D95H/R/E、D96S/T、K98R、N100G/K/D/E、R107N/S、G109R/H和V132L/R/I/S。

在某些实施方式中，所述突变体包含选自下组的氨基酸取代：(1)I61L、V63I、E77I、E84K、V93L、L96S、K98R、N100G和V132L；(2)I61V、E77N、Q82S、K83R和E84H；(3)I61F、V63I、K83R、E84K和V132I；(4)I61L、E77Q、E84D、R107N和V132I；(5)I61L、V63I、E77K、K83R、E84D和N100G；(6)I61V、E77H、Q82R、K83R、E84H和R107S；(7)I61L、E77I、Q82G、E84R、V93L、L96T、N100G、R107S、G109R和V132R；(8)I61L、E77M、Q82G、K83R、E84D和V132L；(9)I61L；(10)I61F、D95H、L96S、G109H和V132S；(11)I61F、D95H、L96S、K98R、G109H和V132S；(12)I61L、E77Q、E84D、V93A、R107N和V132I；(13)E77K、L96S、N100K、G109H和V132L；(14)I61L、V63I、Q82G、E84G、D95R、L96S、N100D和V132I；(15)I61L、E77R、Q82N、K83R、E84G、V93L、D95E、L96T、K98R、N100D和V132L；(16)I61V、E77N、Q82S、K83R、E84H和V93A；(17)I61V、V63I、E77V、K83R、E84D、D95E、L96T、K98R和N100E；(18)I61L、V63I、E77V、K83R、D95E、L96S、K98R、N100D和G109R；(19)I61V、E77L、Q82G、E84G、V93L、D95E、L96T、K98R和N100G；和，(20)I61L、V63I、E77N、Q82G和E84G。

在某些实施方式中，所述突变体包含如SEQ ID NO:14-33中任一项所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，所述第一结合域包含抗体或其抗原结合片段。

在某些实施方式中，所述抗体选自下组：单克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。

在某些实施方式中，所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab')₂，dAb，分离的互补决定区CDR，Fv和scFv。

在某些实施方式中，所述BCMA为人BCMA。

在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含抗体重链可变区VH中至少一个CDR，所述VH包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，所述融合蛋白包含HCDR1，所述HCDR1包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:4。

在某些实施方式中，所述融合蛋白包含HCDR2，其中所述HCDR2包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:5。

在某些实施方式中，所述的融合蛋白包含HCDR3，其中所述HCDR3包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:6。

在某些实施方式中，所述重链可变区VH包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:8。

在某些实施方式中，所述融合蛋白包含重链恒定区，且所述重链恒定区包含IgG。

在某些实施方式中，所述IgG选自下组：IgG1和IgG4。

在某些实施方式中，所述融合蛋白包含抗体重链或其片段，其中所述抗体重链包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:10。

在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含抗体轻链可变区VL中至少一个CDR，所述VL包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，所述融合蛋白包含LCDR1，其中所述LCDR1包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:1。

在某些实施方式中，所述融合蛋白包含LCDR2，其中所述LCDR2包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:2。

在某些实施方式中，所述的融合蛋白包含LCDR3，其中所述LCDR3包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:3。

在某些实施方式中，所述融合蛋白包含轻链可变区VL，所述VL包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:7。

在某些实施方式中，所述融合蛋白包含轻链恒定区，其中所述轻链恒定区包含Igκ。

在某些实施方式中，所述融合蛋白包含抗体轻链或其片段，且所述抗体轻链包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:9。

在某些实施方式中，所述第一结合域位于所述第二结合域的N端。

在某些实施方式中，所述融合蛋白还包含连接子，所述连接子位于所述第一结合域的C端且位于所述第二结合域的N端。

在某些实施方式中，所述连接子包含如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列。

在某些实施方式中，所述融合蛋白包含至少2个所述第二结合域。

在某些实施方式中，所述每个所述第二结合域分别位于所述第一结合域的C端。

另一方面，本申请提供了一种免疫缀合物，其包含本申请所述的融合蛋白。

另一方面，本申请提供了一个或多个分离的核酸分子，其编码所述的融合蛋白和/或所述的免疫缀合物。

另一方面，本申请提供了一个或多个载体，其包含所述的核酸分子。

另一方面，本申请提供了组合物，其包含所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，和/或所述的核酸分子，以及任选地药学上可接受的赋形剂。

另一方面，本申请提供了细胞，其包含所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，和/或所述的载体。

另一方面，本申请提供了制备项所述的融合蛋白的方法，其包括在使得所述融合蛋白能够表达的条件下培养所述的细胞。

另一方面，本申请提供了本申请所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，所述的载体，所述的组合物，和/或所述的细胞在制备药物中的用途，其中所述药物用于治疗肿瘤或自免疫疾病。

在某些实施方式中，所述肿瘤包括BCMA阳性肿瘤。

在某些实施方式中，所述肿瘤包括非实体瘤。

在某些实施方式中，所述肿瘤包括选自下组的肿瘤：骨髓瘤、淋巴瘤和血液系统恶性肿瘤。

在某些实施方式中，所述肿瘤选自下组：CD47阳性血液肿瘤或CD47阳性实体瘤。

在某些实施方式中，所述自免疫疾病选自下组：克罗恩氏病、过敏性哮喘和类风湿性关节炎。

另一方面，本申请提供了阻断CD47/SIRPa相互作用的方法，其包括施用所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，所述的载体，所述的组合物，和/或所述的细胞。

另一方面，本申请还提供了判断受试者中与BCMA蛋白的表达相关的疾病或病况的方法，所述方法包括：使源自所述受试者的样品与所述的融合蛋白接触，以及判断所述样品中能够特异性结合所述融合蛋白的物质的存在和/或含量。

另一方面，本申请还提供了所述的融合蛋白在制备可被细胞内化的药物中的用途，其中所述细胞表达BCMA。

本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。

附图说明

本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明书如下：

图1显示的是本申请所述融合蛋白的结构示例；

图2显示的是本申请所述融合蛋白与BCMA抗原的结合活性；

图3显示的是本申请所述融合蛋白与CD47的结合活性；

图4显示的是检测本申请所述融合蛋白与BCMA和CD47之间相互作用的方法原理示意图；

图5显示的是本申请所述融合蛋白同时与BCMA和CD47结合的活性；

图6显示的是本申请所述融合蛋白对CD47蛋白与SIRPα相互作用的阻断活性；

图7显示的是本申请的融合蛋白的细胞内化活性。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。

在本申请中，术语“融合蛋白”通常指由两个或更多个蛋白或多肽融合得到的蛋白。融合蛋白可通过重组DNA技术人工制备。例如，编码所述两个或更多个蛋白或多肽的基因或核酸分子可彼此连接而形成融合基因或融合的核酸分子，该融合基因或融合的核酸分子可编码所述融合蛋白。所述融合基因的翻译可以产生单一多肽，其可以具有融合前的所述两个或更多个蛋白或多肽中至少一个、甚至每一个的性质。

在本发明中，术语“特异性结合”通常是指两分子间的非随机结合反应，如抗体和产生该抗体的抗原间的反应。在某些情形中，某抗原和相应的抗体之间的结合可通过例如放射免疫分析(RIA)、酶联免疫吸附分析(ELISA)、BIACORE或本领域中已知的其他分析所测定。

在本申请中，术语“结合域”通常是可以特异性结合和/或识别靶标(例如抗原)上的特定表位的结构域。在本申请中，术语“结构域”通常是指蛋白质亚基结构中明显分开的紧密球状结构区域。例如，多肽链首先可以是在某些区域相邻的氨基酸残基形成有规则的二级结构，然后，又可以由相邻的二级结构片段组装在一起形成超二级结构，在此基础上多肽链可以折叠成近似于球状的三级结构。对于较大的蛋白质分子或亚基，多肽链往往可以由两个或多个在空间上可明显区分的、相对独立的区域性结构缔合而成三级结构，这种相对独立的区域性结构可以称为结构域。

在本申请中，术语“第一结合域”和“第二结合域”中的所述“第一”、“第二”可以只是为了在描述上进行区分。

在本申请中，术语“CD47蛋白”通常是指整联蛋白相关蛋白(IAP)，其为一种属于免疫球蛋白超家族的多次跨膜受体。例如，CD47蛋白可与膜整合素(membrane integrins)结合，并与其配体凝血栓蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)和信号调节蛋白α(signal-regulatory protein alpha,SIRPα)结合。CD47蛋白广泛表达于细胞膜表面。在本申请中，所述CD47蛋白可包括人CD47的任何变体、同种型和物种同系物。人CD47蛋白的氨基酸序列在GenBank中作为CEJ95640.1列出。所述CD47蛋白可以由细胞天然表达或在用CD47基因转染的细胞上表达。

在本申请中，术语“SIRPα”通常是指来自SIRP家族的调节性膜糖蛋白，其可作为CD47蛋白的配体。在本申请中，所述SIRPα可包括人SIRPα。例如，SIRPα变体1和SIRPα变体2。所述SIRPα变体2与所述SIRPα变体1有13个氨基酸不同，并且其氨基酸序列在GenBank中作为CAA71403.1列出。在本申请中，术语“SIRPα变体1”通常是指氨基酸序列作为NCBI RefSeqNP_542970.1列出(残基31-504构成成熟型)的SIRPα蛋白，此时SIRPα变体1的氨基酸序列如SEQ ID NO:50所示。

在本申请中，术语“BCMA”可与“CD269”、“BCM”“TNFRSF17”互换使用，通常是指B细胞成熟抗原。例如，人BCMA是由994个核苷酸长的初级mRNA转录物(NM_001192.2)编码的184个氨基酸长的蛋白质。人BCMA的氨基酸序列用UniPretKB登录号Q02223表示。在本申请中，术语“BCMA”可包括包含突变的蛋白质，例如可包括包含全长野生型BCMA的点突变、片段、插入、缺失和剪接变体的蛋白质。在本申请中，术语“BCMA”还可包括完整BCMA蛋白的一部分，只要保留相关的生物活性即可。

在本申请中，术语“抗体”通常指免疫球蛋白或其片段或其衍生物，涵盖包括抗原结合位点的任何多肽，无论其是在体外还是体内产生的。该术语包括但不限于多克隆的、单克隆的、单特异性的、多特异性的、非特异性的、人源化的、单链的、嵌合的、合成的、重组的、杂化的、突变的和移植的抗体。术语“抗体”也包括抗体片段，比如Fab、F(ab')₂、Fv、scFv、Fd、dAb和保持抗原结合功能(即，特异性结合例如BCMA)的其它抗体片段。通常，这样的片段应当包括抗原结合结构域。基本的4链抗体单元是由两个相同的轻(L)链和两个相同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白。IgM抗体由5个基本的异四聚体单元与另外一个称为J链的多肽组成，且含有10个抗原结合位点，而IgA抗体包括2-5个可以与J链相结合聚合形成多价组合的基本4链单元。就IgG而言，4链单元一般为约150,000道尔顿。每个L链通过一个共价二硫键与H链连接，而两个H链通过一个或多个取决于H链同种型的二硫键相互连接。每个H和L链还具有规则间隔的链内二硫化桥键。每个H链在N末端具有可变结构域(VH)，对于α和γ链各自继之以三个恒定结构域(CH)、对于μ和ε同种型继之以四个CH结构域。每个L链在N末端具有可变结构域(VL)，在其另一端具有恒定结构域。VL与VH对应，且CL与重链的第一恒定结构域(CH1)相对应。特定的氨基酸残基被认为在轻链和重链可变结构域之间形成界面。VH和VL配对一起形成单个抗原结合位点。对于不同类别抗体的结构和性质，参见例如Basic andClinical Immunology,8th Edition,Daniel P.Sties,Abba I.Terr and TristramG.Parsolw(eds),Appleton&Lange,Norwalk,Conn.,1994，第71页和第6章。来自任何脊椎动物物种的L链可以基于其恒定结构域的氨基酸序列被分为两种明显不同的类型中的一种，称为κ和λ。取决于其重链(CH)恒定结构域的氨基酸序列，可以将免疫球蛋白分为不同的类别或同种型。存在五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，具有分别被命名为α、δ、ε、γ和μ的重链。基于CH序列和功能方面的相对小的差异，将γ和α类进一步分成亚类，例如，人表达下述亚类：IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4、IgA1和IgK1。

在本申请中，术语“CDR”通常指抗体可变结构域的区域，其序列是高度可变的和/或形成结构定义环。通常，抗体包括六个CDR；在VH中三个(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，和在VL中三个(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。在天然抗体中，HCDR3和LCDR3显示所述六个CDR的大多数多样性，并且特别地HCDR3被认为在赋予抗体的精细特异性方面起独特作用。参见，例如Xu etal,Immunity 13:37-45(2000)；Johnson and Wu,in Methods in Molecular Biology248:1-25(Lo,ed.,Human Press,Totowa,N.J.,2003)。实际上，仅由重链组成的天然存在的骆驼抗体在缺乏轻链的情况功能正常且稳定。参见，例如,Hamers-Casterman et al.,Nature363:446-448(1993)；Sheriff et al,Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。例如，在本申请中，所述OX40结合部分可以包含重链可变结构域VH1，VH1中可以包括3个CDR(例如，H1CDR1、H1CDR2和H1CDR3)，其还可以包含轻链可变结构域VL1，VL1中可以包括3个CDR(例如，L1CDR1、L1CDR2和L1CDR3)。又例如，在本申请中，所述PD-L1结合部分可以包含重链可变结构域VH2，VH2中可以包括3个CDR(例如，H2CDR1、H2CDR2和H2CDR3)。

本领域中可以通过多种方法来划分抗体的CDR，例如：1)基于序列可变性的Kabat定义规则(Wu和Kabat，J Exp Med 132:211-50，1970；Kabat等人，Sequences ofProteinsof Immunological Interest，第5版，Public Health Service，National InstitutesofHealth，Bethesda，Md.，1991)，2)基于结构环区域位置的Chothia定义规则(A1-Lazikani等人，JMol Biol273:927-48，1997)，3)用Oxford Molecular的AbM抗体模型软件权衡上述两种规则的AbM定义规则，4)基于得到的复合物晶体结构分析的Contact定义规则。这些标记CDR方法可总结如下表1。

表1 CDR划分方法

	Kabat定义	AbM定义	Chothia定义	Contact定义
					轻链CDR1	L24-L34	L24-L34	L24-L34	L30-L36
轻链CDR2	L50-L56	L50-L56	L50-L56	L45-L55
					轻链CDR3	L89-L97	L89-L97	L89-L97	L89-L96
重链CDR1	H31-H35	H26-H35	H26-H32	H30-H35
					重链CDR2	H50-H65	H50-H58	H52-H56	H47-H58
重链CDR3	H95-H102	H95-H102	H95-H102	H93-H101

其中，Laa-Lbb可以指从抗体轻链的N端开始，第aa位至第bb位的氨基酸序列；Haa-Hbb可以指从抗体重链的N端开始，第aa位至第bb位的氨基酸序列。例如，L24-L34可以指从抗体轻链N端开始，第24位至第34位的氨基酸序列；H26-H35可以指从抗体重链N端开始，第26位至第35位的氨基酸序列。在本申请中，使用Kabat定义规则确定可变结构域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基。

在本申请中，术语“抗原结合片段”通常是指全长抗体的一个或多个部分，所述部分基本上保持结合抗体所结合的相同抗原(例如，BCMA)的能力。通常参见，FundamentalImmunology,Ch.7(Paul,W.,ed.,第2版，Raven Press,N.Y.(1989)，并且将其全文通过引用并入本申请。可通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗原结合片段。在一些情况下，抗原结合片段可包括Fab、Fab'、F(ab')₂、Fd、Fv、dAb和互补决定区(CDR)片段、单链抗体(例如，scFv)、嵌合抗体、双抗体(diabody)和这样的多肽，其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。可使用本领域技术人员已知的常规技术(例如，重组DNA技术或酶促或化学断裂法)从给定的抗体获得抗体的抗原结合片段，并且以与对于完整抗体的方式相同的方式就特异性筛选抗体的抗原结合片段。

在本申请中，术语“Fab”通常是指由VL、VH、CL和CH1结构域组成的抗原结合片段。术语“Fab'”通常是指与Fab片段相比在CH1结构域的羧基末端具有几个额外的残基的抗原结合片段。例如，Fab'可包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。术语“F(ab)₂”通常是指由半胱氨酸相连接的成对的Fab片段所得到的抗原结合片段。术语Fd通常是指由VH和CH结构域组成的抗原结合片段。术语“dAb片段”通常是指由VH结构域组成的抗原结合片段(Ward等人,Nature 341:544-546(1989))。术语“互补决定区CDR”通常是指轻链可变区(VL)与重链可变区(VH)的3个高变区(HVR)，该部位因在空间结构上可与抗原决定簇形成精密的互补，故高变区又称互补性决定区。术语“Fv片段”通常是指由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的抗原结合片段。术语“scFv”通常是指是由抗体重链可变区和轻链可变区通过短肽连接子(linker)连接而成的分子，又称为单链抗体。

在本申请中，术语“单克隆抗体”通常是指一群基本同源的抗体，包含于该群的各个抗体除了可能的以微量存在的天然发生的突变之外可以是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，直接针对单个抗原性位点。此外，与包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物相反，每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇修饰语"单克隆"不是被解释为需要通过任何特殊方法产生抗体。例如，所述单克隆抗体可以通过杂交瘤技术制备或者通过使用重组DNA方法在细菌、真核动物或植物细胞中产生单克隆抗体，也可以得自噬菌体抗体文库，使用例如Clackson et al.,Nature,352:624-628(1991)和Marks et al.,Mol.Biol.，222:581-597(1991)所述的技术进行。

在本申请中，术语“嵌合抗体”通常是指这样的抗体，其中每个重链或轻链氨基酸序列的一部分与来自特定物种的抗体中相应氨基酸序列同源，或者属于特定的类别，而该链的其余区段则与另一物种中的相应序列同源。例如，轻链和重链的可变区均来自一个动物物种(如小鼠、大鼠等)的抗体的可变区，而恒定部分则与来自另一物种(如人)的抗体序列同源。例如，为获得嵌合抗体，可利用非人源的B细胞或杂交瘤细胞产生可变区，而与其组合的恒定区则来自人。所述可变区具有易于制备的优点，并且其特异性不受与其组合的恒定区的来源的影响。同时，由于嵌合抗体的恒定区可来源于人类，因此嵌合抗体在注射时抗体引发免疫应答的可能性会低于使用恒定区为非人来源的抗体。

在本申请中，术语“人源化抗体”通常是指将衍生自非人物种(例如小鼠或大鼠)的抗体、免疫球蛋白结合蛋白和多肽对人体的免疫原性降低，同时仍保留原始抗体的抗原结合特性的改造抗体。例如，可以使用遗传工程技术制备人源化抗体，可以使用CDR移植(Jones et al.,Nature 321:522(1986))及其变体；包括“重塑”(reshaping)，(Verhoeyen,et al.,1988Science 239:1534-1536；Riechmann,et al.,1988Nature 332:323-337；Tempest,et al.,Bio/Technol1991 9:266-271)，“高度加成”(hyperchimerization)，(Queen,et al.,1989Proc Natl Acad Sci USA 86:10029-10033；Co,et al.,1991ProcNatl Acad Sci USA 88:2869-2873；Co,et al.,1992JImmunol 148:1149-1154)和“贴面”(veneering)，(Mark,et al.,“Derivation of therapeutically active humanized andveneered anti-CD18 antibodies.”In:Metcalf B W,Dalton B J,eds.Cellularadhesion:molecular definition to therapeutic potential.New York:Plenum Press,1994:291-312)等技术手段，对非人源的结合域进行人源化。如果其他区域，例如铰链区和恒定区结构域也源自非人来源，则这些区域也可以被人源化。

在本申请中，术语“全人源抗体”通常是指由基因工程改造的抗体基因缺失动物中表达编码人类抗体的基因得到的抗体。例如，可以将人类抗体基因通过转基因或转染色体技术，将编码人类抗体的基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中，使动物表达的人类抗体。

在本申请中，术语“连接子”通常是指连接或联接两个分子的功能分子。例如，所述连接分子可以连接一个分子和另一个分子(例如，一个分子为蛋白质分子，另一个分子也为蛋白质分子，或者可以为小分子药物)。所述连接分子可以用于所述融合蛋白的构建中。

通常情况下，在多肽链中，氨基与多肽链中的另一个羧基相连可以使其成为一个链，但是在蛋白质的两个末端，分别剩余没有成肽键的氨基酸残基，分别是携带游离的氨基的多肽链末端和携带羧基的多肽链末端。在本申请中，术语“N端”通常是指氨基酸残基携带游离的氨基的多肽链的末端。在本申请中，术语“C端”通常是指氨基酸残基携带游离的羧基的多肽链的末端。

在本申请中，术语“内化”通常是指一种外源物质(如蛋白质、核酸)与细胞结合，进入细胞内部，而不需要借助其他外部的试剂或条件(例如转染、电穿孔、微量注射、原生质体融合等)。在某些情形下，内化可以是抗体或其抗原结合片段或多肽与细胞表面的受体特异性结合，形成受体-抗体复合物，然后借助该受体介导的胞吞作用进入到细胞内的过程。此时这样的抗体或其抗原结合片段(如Fab片段)可以成为内化抗体。所述内化抗体可以作为定向运载药物、酶或DNA的载体。在某些情形下，所述内化可抑制肿瘤细胞的增殖。例如，所述内化抗体可用于偶联抗肿瘤的化疗剂、放射性元素、细胞生长抑制剂和细胞毒性剂，并作为肿瘤生物治疗的候选分子。

在本申请中，术语“免疫缀合物”通常是指缀合了一个或多个异源分子(包括但不限于化疗剂、放射性元素、细胞生长抑制剂和细胞毒性剂)的具有免疫功能的多肽分子。在本申请中，“缀合”和“连接”、“融合”在本申请中可以互换使用，并且通常是指将两个或更多个化学元素、序列或组分连接在一起，例如通过包括化学缀合或重组手段。所述异源分子可以是细胞毒素、化疗药物等。例如，将本申请所述的融合蛋白缀合一个或多个异源分子(例如，细胞毒素)可以得到所述的免疫缀合物。

在本申请中，术语“核酸分子”通常是指从其天然环境中分离的或人工合成的任何长度的分离形式的核苷酸、脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。

在本发明中，术语“载体”通常是指可将编码某蛋白的多聚核苷酸插入其中并使蛋白获得表达的一种核酸运载工具。载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内表达得以表达。所述载体可包括主要用于将DNA或RNA插入细胞中的载体、主要用于复制DNA或RNA的载体，以及主要用于DNA或RNA的转录和/或翻译的表达的载体。所述载体还包括具有多种上述功能的载体。所述载体可以是当引入合适的宿主细胞时能够转录并翻译成多肽的多核苷酸。举例来说，载体包括：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。用作载体的动物病毒种类有逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。一种载体可能含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。载体还有可能包括有协助其进入细胞的成分，如病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳，但不仅仅只有这些物质。

在本申请中，术语“细胞”通常是指可以或已经含有包括本申请所述的核酸分子的质粒或载体，或者能够表达本申请所述的抗体或其抗原结合片段的个体细胞，细胞系或细胞培养物。所述细胞可以包括单个细胞的子代。由于天然的，意外的或故意的突变，子代细胞与原始亲本细胞在形态上或在基因组上可能不一定完全相同，但能够表达本申请所述的抗体或其抗原结合片段即可。所述细胞可以通过使用本申请所述的载体体外转染细胞而得到。所述细胞可以是原核细胞(例如大肠杆菌)，也可以是真核细胞(例如酵母细胞，例如COS细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，HeLa细胞，HEK293细胞，COS-1细胞，NS0细胞或骨髓瘤细胞)。在一些实施方案中，所述细胞是哺乳动物细胞。例如，所述哺乳动物细胞可以是CHO-K1细胞。在本申请中，术语“重组细胞”通常指在其中引入了重组表达载体的细胞。所述重组细胞不仅包括某种特定的细胞，还包括这些细胞的后代。

在本申请中，术语“肿瘤”通常是指哺乳动物中的机体(例如，细胞或其组成部分)在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的赘生物。在本申请中，肿瘤可以包括BCMA阳性肿瘤。在某些情形中，所述的肿瘤可以包括CD47阳性血液肿瘤或CD47阳性实体瘤。

在本申请中，术语“BCMA阳性肿瘤”通常是指与BCMA蛋白的表达相关，或者BCMA蛋白的表达量显著提高的肿瘤。所述BCMA阳性肿瘤可以是非实体瘤。所述BCMA阳性肿瘤可以选自以下组：骨髓瘤、淋巴瘤和血液系统恶性肿瘤。

在本申请中，术语“淋巴瘤”通常是指一种淋巴系统的恶性肿瘤。淋巴瘤的发生可以是由于淋巴结细胞或淋巴细胞开始无法控制地繁殖，并产生具有异常能力，可以侵入整个身体其他组织的癌细胞。淋巴瘤细胞表面通常呈BCMA表达阳性。

在本申请中，术语“骨髓瘤”通常是指以骨髓内浆细胞克隆性增殖为特征的肿瘤。在骨髓瘤细胞上，BCMA的表达通常呈阳性。示例性骨髓瘤细胞包括但不限于，X63Ag8、Sp2/0、NS1、NS0、J558L、U266、U937、P3U1、XG-1、XG-2、XG-3、XG-4、XG-5、XG-6、XG-7、XG-8、XG-9、U266、RPM1-8226、LP1、L363、OPM1、OPM2、以及NCLH929细胞或来源于这些细胞系的细胞系。

在本申请中，术语“血液系统恶性肿瘤”通常是指指涉及细胞如白细胞、淋巴细胞、天然杀伤细胞、浆细胞和髓细胞如嗜中性粒细胞和单核细胞的造血作用过程中产生的癌症或过度增生性病症。血液系统恶性肿瘤可包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或淋巴恶性肿瘤以及脾和淋巴结癌症，该术语还涵盖其它的血液学和/或B细胞或T细胞相关的癌症，但不包括上述骨髓瘤和淋巴瘤。

在本申请中，术语“CD47阳性”通常是指在生物体或细胞表面表达CD47蛋白或其片段的特性。特别地，本申请所述的“CD47阳性”细胞可以为过表达CD47的那些细胞，这些CD47阳性细胞通常为疾病细胞，并且其表面的CD47蛋白密度超过指定细胞类型所具有的正常CD47蛋白密度。在某些实施方式中，所述肿瘤或肿瘤细胞可为CD47阳性。例如，所述肿瘤可选自下组：CD47阳性血液肿瘤或CD47阳性实体瘤。

在本申请中，术语“包含”通常是指包括明确指定的特征，但不排除其他要素。

在本申请中，术语“约”通常是指在指定数值以上或以下0.5％-10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。

融合蛋白

一方面，本申请提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白可包含第一结合域和第二结合域。所述第一结合域可以特异性结合BCMA抗原，所述第二结合域可以特异性结合CD47。

第二结合域

本申请所述第二结合域可以包含人SIRPα变体1的突变体，所述突变体与SEQ IDNO:13所示的序列相比，在第33位至第149位中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)位置包含氨基酸残基的取代、缺失或添加。

在某些情形中，所述突变体与SEQ ID NO:13所示的序列相比，可在选自下组的一个或多个氨基酸残基处包含氨基酸取代：I61、V63、E77、Q82、K83、E84、V93、D95、D96、K98、N100、R107、G109和V132。在本申请中，氨基酸残基的位置编号根据Kabat中的EU索引或EU编号方案进行。

在本申请中，“氨基酸取代Xn”是指在相应于SEQ ID NO:13所示氨基酸序列中第n位的氨基酸残基X处发生氨基酸取代，其中n为正整数，X为任意氨基酸残基的缩写。例如，“氨基酸取代I61”表示在相应于SEQ ID NO:13所示氨基酸序列中第61位的残基异亮氨酸I处发生氨基酸取代。

本申请中，所述的氨基酸取代可以为非保守取代。所述非保守取代可包括以非保守的形式改变目标蛋白或多肽中的氨基酸残基，例如将具有某种侧链大小或某种特性(例如，亲水性)的氨基酸残基变为具有不同侧链大小或不同特性(例如，疏水性)的氨基酸残基。

本申请中，所述的氨基酸取代也可以为保守取代。所述保守取代可包括以保守的形式改变目标蛋白或多肽中的氨基酸残基，例如将具有某种侧链大小或某种特性(例如，亲水性)的氨基酸残基变为具有相同或相似侧链大小或者相同或相似特性(例如，仍为亲水性)的氨基酸残基。这样的保守取代通常不会对所产生的蛋白质的结构或功能带来很大影响。在本申请中，作为所述融合蛋白或其片段的氨基酸序列变体可包括不显著改变蛋白质结构或其功能(例如，阻断CD47与特异性结合CD47蛋白的人SIRPα变体1的突变体)的保守氨基酸取代。

作为示例，下述各组中每组内各氨基酸间的相互取代在本申请中可被认为是保守取代：具有非极性侧链的氨基酸组：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸。不带电荷、具有极性侧链的氨基酸组：甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸，半胱氨酸，酪氨酸，天冬酰胺和谷氨酰胺。带负电荷、具有极性侧链的氨基酸组：天冬氨酸和谷氨酸。带正电荷的碱性氨基酸：赖氨酸、精氨酸和组氨酸。带苯基的氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。

在某些情形中，所述突变体可以在选自下组的氨基酸残基处包含氨基酸取代：(1)I61、V63、E77、E84、V93、L96、K98、N100和V132；(2)I61、E77、Q82、K83和E84；(3)I61、V63、K83、E84和V132；(4)I61、E77、E84、R107和V132；(5)I61、V63、E77、K83、E84和N100；(6)I61、E77、Q82、K83、E84和R107；(7)I61、E77、Q82、E84、V93、L96、N100、R107、G109和V132；(8)I61、E77、Q82、K83、E84和V132；(9)I61；(10)I61、D95、L96、G109和V132；(11)I61、D95、L96、K98、G109和V132；(12)I61、E77、E84、V93、R107和V132；(13)E77、L96、N100、G109和V132；(14)I61、V63、Q82、E84、D95、L96、N100和V132；(15)I61、E77、Q82、K83、E84、V93、D95、L96、K98、N100和V132；(16)I61、E77、Q82、K83、E84和V93；(17)I61、V63、E77、K83、E84、D95、L96、K98和N100；(18)I61、V63、E77、K83、D95、L96、K98、N100和G109；(19)I61、E77、Q82、E84、V93、D95、L96、K98和N100；和，(20)I61、V63、E77、Q82和E84。

在本申请中，所述突变体可以包含选自下组的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸取代：I61L/V/F、V63I、E77I/N/Q/K/H/M/R/N/V/L、Q82S/R/G/N、K83R、E84K/H/D/R/G、V93L/A、D95H/R/E、D96S/T、K98R、N100G/K/D/E、R107N/S、G109R/H和V132L/R/I/S。

在本申请中，氨基酸取代“XnY/Z”是指相应于SEQ ID NO:13所示氨基酸序列中第n位的残基X被取代为氨基酸残基Y或者氨基酸残基Z，其中n为正整数，X、Y和Z分别独立地为任意氨基酸残基的缩写，且X不同于Y或Z。例如，氨基酸取代“I61L/V/F”是指相应于SEQ IDNO:13所示氨基酸序列中第61位的残基异亮氨酸I被取代为氨基酸残基亮氨酸L、缬氨酸V或苯丙氨酸F。

在某些情形中，所述突变体可以包含选自下组的氨基酸取代：(1)I61L、V63I、E77I、E84K、V93L、L96S、K98R、N100G和V132L；(2)I61V、E77N、Q82S、K83R和E84H；(3)I61F、V63I、K83R、E84K和V132I；(4)I61L、E77Q、E84D、R107N和V132I；(5)I61L、V63I、E77K、K83R、E84D和N100G；(6)I61V、E77H、Q82R、K83R、E84H和R107S；(7)I61L、E77I、Q82G、E84R、V93L、L96T、N100G、R107S、G109R和V132R；(8)I61L、E77M、Q82G、K83R、E84D和V132L；(9)I61L；(10)I61F、D95H、L96S、G109H和V132S；(11)I61F、D95H、L96S、K98R、G109H和V132S；(12)I61L、E77Q、E84D、V93A、R107N和V132I；(13)E77K、L96S、N100K、G109H和V132L；(14)I61L、V63I、Q82G、E84G、D95R、L96S、N100D和V132I；(15)I61L、E77R、Q82N、K83R、E84G、V93L、D95E、L96T、K98R、N100D和V132L；(16)I61V、E77N、Q82S、K83R、E84H和V93A；(17)I61V、V63I、E77V、K83R、E84D、D95E、L96T、K98R和N100E；(18)I61L、V63I、E77V、K83R、D95E、L96S、K98R、N100D和G109R；(19)I61V、E77L、Q82G、E84G、V93L、D95E、L96T、K98R和N100G；和，(20)I61L、V63I、E77N、Q82G和E84G。

在本申请中，在人SIRPα变体1(如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列，即人SIRPα的氨基酸序列中的第33-149位残基)的基础上，分别包含以上(1)-(20)的氨基酸取代组的SIRPα变体1的突变体可依次被命名为M1、M5、M12、M35、M37、M41、M57、M67、M81、M82、M84、M91、M99、M102、M111、M122、M126、M130、M135和M145。所述SIRPα变体1的突变体可依次包含如SEQ ID NO:14-33所示的氨基酸序列。

例如，所述SIRPα变体1的突变体可以是M91，所述SIRPα变体1的突变体包含如SEQID NO:25所示的氨基酸序列。

第一结合域

本申请所述融合蛋白可包含第一结合域，所述第一结合域可以是特异性结合BCMA的第一结合域。在某些情形中，所述第一结合域可以包含抗体或其抗原结合片段。例如，所述抗体可以选自下组：单克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。例如，所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab'，(Fab')₂，F(ab)₂，dAb，分离的互补决定区CDR，Fv和scFv。

在本申请中，所述抗体或其抗原结合片段还可以包含所述抗体或其抗原结合片段的变体，所述抗体或其抗原结合片段的所述变体可以在所述抗体或所述其抗原结合片段中经过取代、缺失或添加一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸的蛋白质或多肽。或者所述抗体或其抗原结合片段的所述变体可以与所述抗体或所述其抗原结合片段具有至少90％(例如，例如，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，或至少100％)序列同源性的蛋白质或多肽。

本申请所述的抗体、其抗原结合片段或变体，可以与参比抗体竞争结合所述BCMA蛋白。所述参比抗体可以包含轻链可变区。例如，所述参比抗体的轻链可变区可包含LCDR1-3，所述LCDR1-3的氨基酸序列依次为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3。所述参比抗体可以包含重链可变区。所述参比抗体的重链可变区可包含HCDR1-3，所述HCDR1-3的氨基酸序列依次为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6。

在某些情形中，所述参比抗体的轻链可变区可以包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，且所述参比抗体的重链可变区可以包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。在某些情形中，所述参比抗体的轻链可以包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列；且所述参比抗体的重链可以包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。

本申请所述参比抗体可包含LCDR1-3和HCDR1-3，且其LCDR1-3可分别包含SEQ IDNO:1-3所示的氨基酸序列；其HCDR1-3可分别包含SEQ ID NO:4-6所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体SG1116或与其具有相同的LCDR1-3及HCDR1-3的抗体。在某些情形中，所述参比抗体可包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列可以包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，且所述重链可变区可以包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体SG1116或与其具有相同的轻链可变区及重链可变区的抗体。本申请所述参比抗体可包含轻链和重链，所述轻链的氨基酸序列可以包含SEQ IDNO:9所示的氨基酸序列；且所述重链的氨基酸序列可以包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。例如，所述参比抗体可包括抗体SG1116或与其具有相同的轻链及重链的抗体。

本申请所述第一结合域的抗体或其抗原结合片段可包含抗体轻链可变区VL中至少一个CDR，所述VL包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。

例如，所述抗体或其抗原结合片段可包含LCDR1，且所述LCDR1可以包含SEQ IDNO:1所示的氨基酸序列。所述抗体或其抗原结合片段可包含LCDR2，且所述LCDR2可以包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。所述抗体或其抗原结合片段可包含LCDR3，且所述LCDR3可以包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

本申请所述抗体或其抗原结合片段可包含轻链可变区VL，且所述轻链可变区VL的氨基酸序列可以包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。

所述抗体或其抗原结合片段可包括轻链恒定区，且所述轻链恒定区可包含Igκ恒定区，例如可包含人Igκ恒定区。例如，所述人Igκ恒定区可包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。

本申请所述抗体或其抗原结合片段可包含抗体轻链或其片段，且所述抗体轻链或其片段可包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。

本申请所述第一结合域的抗体或其抗原结合片段可包含抗体重链可变区VH中至少一个CDR，所述VH包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。

例如，所述抗体或其抗原结合片段可包含HCDR1，且所述HCDR1可以包含SEQ IDNO:4所示的氨基酸序列。所述抗体或其抗原结合片段可包含HCDR2，且所述HCDR2可以包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。所述抗体或其抗原结合片段可包含HCDR3，且所述HCDR3可以包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。

本申请所述抗体或其抗原结合片段可包含重链可变区VH，且所述重链可变区VH的氨基酸序列可以包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。

所述抗体或其抗原结合片段可包括重链恒定区，且所述轻链恒定区可包含IgG。在某些情形行中，所述IgG可选自下组：IgG1和IgG4。例如，所述重链恒定区可包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。

本申请所述抗体或其抗原结合片段可包含抗体重链或其片段，且所述抗体重链或其片段可包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。

在某些情形中，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可包含LCDR1-3和HCDR1-3。其中LCDR1可包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；且HCDR1可包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；HCDR3可包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。例如，该抗体或其抗原结合片段可包含抗体SG1116或与SG1116具有相同的LCDR1-3及HCDR1-3的抗体。在某些情形中，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区可包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；且所述重链可变区可包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。例如，该抗体或其抗原结合片段可包含抗体SG1116或与SG1116具有相同的轻链可变区及重链可变区的抗体。在某些情形中，本申请所述的抗体或其抗原结合片段可包含轻链和重链，所述轻链可包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，且所述重链可包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。例如，该抗体或其抗原结合片段可包括抗体SG1116或与SG1116具有相同的轻链及重链氨基酸序列。

例如，本申请所述的抗体可以为SG1116。抗体SG1116的LCDR1-3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示；VL的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；HCDR1-3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示；VH的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示；重链的氨基酸序列如SEQID NO:10所示。

第一结合域和第二结合域的连接

在本申请中，所述第一结合域可以位于所述第二结合域的N端。例如，所述第一结合域的C端可以通过连接子间接连接于所述第二结合域的N端。在某些情形中，所述第一结合域的C端也可以直接(例如，在框内)连接于第二结合域的N端。

在本申请中，所述融合蛋白还可以包含连接子，所述连接子可以位于所述第一结合域的C端且位于所述第二结合域的N端。例如，在所述融合蛋白中，第一结合域的C端可以连接连接子的N端，连接子的C端可以连接第二结合域的N端。例如，在所述融合蛋白中，从N端到C端，可以依次包含第一结合域、连接子和第二结合域。

例如，所述连接子可以包含如SEQ ID NO:35中所示的氨基酸序列。

在某些情形中，所述融合蛋白可以包含至少2个(例如，至少2个，至少3个，至少4个，至少5个，至少6个，至少7个，至少8个，至少9个，至少10个，或更多)所述第二结合域。在本申请中，所述每个所述第二结合域可以分别位于所述第一结合域的C端。在本申请中，所述2个以上的第二结合域可以分别直接或间接连接于所述第一结合域的C端。

在本申请中，所述融合蛋白可以包含特异性结合BCMA抗原的第一结合域，以及特异性结合CD47蛋白的第二结合域，其中所述第一结合域可以包含特异性结合BCMA抗原的抗体或其抗原结合片段，第二结合域可以包含人SIRPα变体1的突变体，特异性结合BCMA抗原的抗体或其抗原结合片段的C端可以直接或者间接连接人SIRPα变体1的突变体的N端。例如，所述第二结合域可以包含至少2个人SIRPα变体1的突变体，且2个人SIRPα变体1的突变体的N端分别连接特异性结合BCMA抗原的抗体或其抗原结合片段或变体的C端。

例如，如图1所示，所述融合蛋白(SGBCMA47)的第一结合域可以包含SG1116，第二结合域可以包含2个SIRPα变体1的突变体M91，采用的连接子的序列如SEQ ID NO:35所示，2个M91的N端分别通过连接子连接于SG1116的2条重链的C端，在所述融合蛋白中，M91连接SG1116重链的C端可以得到第二多肽链，SG1116的轻链可以命名为第一多肽链。SGBCMA47的所述第二多肽链和所述第一多肽链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:9所示。

在本申请中涉及的蛋白质、多肽和/或氨基酸序列，还应理解为至少包含以下的范围：与该所述蛋白质或多肽具备相同或类似功能的变体或同源物。

在本申请中，所述变体可以为，在所述蛋白质和/或所述多肽(例如，本申请所述抗体或其抗原结合片段)的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸的蛋白质或多肽。例如，所述变体可包含已经通过至少1个，例如1-30个、1-20个或1-10个，又例如1个、2个、3个、4个或5个氨基酸取代、缺失和/或插入而具有氨基酸改变的蛋白质或多肽。所述功能性变体可基本上保持改变(例如取代、缺失或添加)之前的所述蛋白质或所述多肽的生物学特性。例如，所述功能性变体可保持改变之前的所述蛋白质或所述多肽的至少60％，70％，80％，90％，或100％的生物学活性(例如特异性结合BCMA蛋白的能力)。

在本申请中，所述同源物可以为，与所述蛋白质和/或所述多肽(例如，本申请所述抗体或其抗原结合片段)的氨基酸序列具有至少约80％(例如，具有至少约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高的)序列同源性的蛋白质或多肽。

在本申请中，所述同源性通常是指两个或多个序列之间的相似性或关联的程度。可以通过以下方式计算“序列同源性百分比”：将两条待比对的序列在比较窗中进行比较，确定两条序列中存在相同核酸碱基(例如，A、T、C、G)或相同氨基酸残基(例如，Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys和Met)的位置的数目以得到匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗中的总位置数(即，窗大小)，并且将结果乘以100，以产生序列同源性百分比。为了确定序列同源性百分数而进行的比对，可以按本领域已知的多种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适宜参数，包括为实现正在比较的全长序列范围内或目标序列区域内最大比对所需要的任何算法。所述同源性也可以通过以下的方法测定：FASTA和BLAST。对FASTA算法的描述可以参见W.R.Pearson和D.J.Lipman的“用于生物学序列比较的改进的工具”，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.)，85：2444-2448，1988；和D.J.Lipman和W.R.Pearson的“快速灵敏的蛋白质相似性搜索”，Science，227：1435-1441，1989。对BLAST算法的描述可参见S.Altschul、W.Gish、W.Miller、E.W.Myers和D.Lipman的“一种基本的局部对比(alignment)搜索工具”，分子生物学杂志，215：403-410，1990。

核酸分子、载体和细胞及制备方法

另一方面，本申请提供一个或多个分离的核酸分子，其编码所述的融合蛋白或者所述的免疫缀合物。例如，所述一种或多种核酸分子中的每一个核酸分子可以编码完整的所述抗体或其抗原结合片段，也可以编码其中的一部分(例如，HCDR1-3、LCDR1-3、VL、VH、轻链或重链中的一种或多种)。

本申请所述的核酸分子可以为分离的。例如，其可以是通过以下方法产生或合成的：(i)在体外扩增的，例如通过聚合酶链式反应(PCR)扩增产生的，(ii)通过克隆重组产生的，(iii)纯化的，例如通过酶切和凝胶电泳分级分离，或者(iv)合成的，例如通过化学合成。在某些实施方式中，所述分离的核酸是通过重组DNA技术制备的核酸分子。

重组DNA和分子克隆技术包括由Sambrook,J.,Fritsch,E.F.和Maniatis,T.Molecular Cloning:A Laboratory Manual；Cold Spring Harbor Laboratory Press:Cold Spring Harbor,(1989)(Maniatis)和由T.J.Silhavy,M.L.Bennan和L.W.Enquist,Experiments with Gene Fusions,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold SpringHarbor,N.Y.(1984)以及由Ausubel,F.M.等，Current Protocols in Molecular Biology,pub.by Greene Publishing Assoc.and Wiley-Interscience(1987)描述的那些技术。简而言之，可从基因组DNA片段、cDNA和RNA制备所述核酸，所有这些核酸可直接从细胞中提取或通过各种扩增方法(包括但不限于PCR和RT-PCR)重组产生。

核酸的直接化学合成通常涉及将3'-封闭的和5'-封闭的核苷酸单体依次添加至生长中的核苷酸聚合物链的末端5'-羟基，其中每次添加通过亲核攻击所添加的单体的3'-位上的生长链的末端5'-羟基来实现，所述单体通常是磷衍生物，诸如磷酸三酯、亚磷酰胺等。参见，例如，Matteuci等，Tet.Lett.521:719(1980)；属于Caruthers等的美国专利第4,500,707号；和属于Southern等的美国专利第5,436,327号和第5,700,637号；在另一方面，本申请提供了包含本申请的分离的多核苷酸的载体。所述载体可以是任何线性核酸、质粒、噬菌粒、粘粒、RNA载体、病毒载体等。病毒载体的非限制性实例可包括逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒。在一些实施方案中，所述载体是表达载体，例如，噬菌体展示载体。

另一方面，本申请提供一个或多个载体，其包含所述的核酸分子。例如，所述载体可以包含本申请所述的一种或多种核酸分子。每种载体中可包含一种或多种所述核酸分子。此外，所述载体中还可包含其他基因，例如允许在适当的宿主细胞中和在适当的条件下选择该载体的标记基因。此外，所述载体还可包含允许编码区在适当宿主中正确表达的表达控制元件。这样的控制元件为本领域技术人员所熟知的，例如，可包括启动子、核糖体结合位点、增强子和调节基因转录或mRNA翻译的其他控制元件等。在某些实施方式中，所述表达控制序列为可调的元件。所述表达控制序列的具体结构可根据物种或细胞类型的功能而变化，但通常包含分别参与转录和翻译起始的5’非转录序列和5’及3’非翻译序列，例如TATA盒、加帽序列、CAAT序列等。例如，5’非转录表达控制序列可包含启动子区，启动子区可包含用于转录控制功能性连接核酸的启动子序列。所述表达控制序列还可包括增强子序列或上游活化子序列。在本申请中，适当的启动子可包括，例如用于SP6、T3和T7聚合酶的启动子、人U6RNA启动子、CMV启动子及其人工杂合启动子(如CMV)，其中启动子的某部分可与其他细胞蛋白(如人GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶)基因启动子的某部分融合，其可包含或不包含另外的内含子。本申请所述的一种或多种核酸分子可以与所述表达控制元件可操作地连接。所述载体可以包括，例如质粒、粘粒、病毒、噬菌体或者在例如遗传工程中通常使用的其他载体。在某些实施方式中，所述载体可以为表达载体。

所述载体还可含有一个或多个选择标记基因，其在表达后赋予可用于选择或以其它方式鉴定携带载体的宿主细胞的一个或多个表型性状。用于真核细胞的合适的选择标记的非限制性实例包括二氢叶酸还原酶和新霉素抗性。

另一方面，本申请提供一种细胞，所述细胞包含所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，或所述的载体。所述细胞可以是宿主细胞。例如，所述细胞可以包括如下许多细胞类型，如大肠杆菌或枯草菌等原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等真菌细胞，如S2果蝇细胞或Sf9等昆虫细胞，或者如纤维原细胞，CHO细胞，COS细胞，NSO细胞，HeLa细胞，BHK细胞，HEK 293细胞或人细胞的动物细胞。

例如，可通过多种已建立的技术将所述载体稳定地或瞬时引入宿主细胞。例如，一种方法涉及氯化钙处理，其中通过钙沉淀引入载体。也可以按照类似方法使用其它盐，例如磷酸钙。另外，可以用电穿孔(即，施加电流以增加细胞对核酸的渗透性)。转化方法的其它实例包括显微注射、DEAE葡聚糖介导的转化和在乙酸锂存在下的热休克。脂质复合物、脂质体和树状聚合物也可用于转染宿主细胞。

在将异源序列引入宿主细胞中时，可实施多种方法来鉴定已向其中引入了载体的宿主细胞。一种示例性选择方法包括将单个细胞继代培养以形成单个菌落，然后测试所需蛋白质产物的表达。另一种方法需要基于通过载体内包含的选择标记基因的表达赋予的表型性状选择含有异源序列的宿主细胞。

例如，将本申请的各种异源序列引入宿主细胞可通过方法诸如PCR、Southern印迹或Northern印迹杂交来确认。例如，可从所得宿主细胞制备核酸，并且可使用对目标序列是特异的引物，通过PCR扩增特定目标序列。将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳或毛细管电泳，然后用溴化乙锭、SYBR Green溶液等染色，或用UV检测来检测DNA。或者，可在杂交反应中使用对目标序列是特异的核酸探针。特定基因序列的表达可以通过与PCR，Northern印迹杂交或通过使用与编码的基因产物反应的抗体的免疫测定的反转录检测相应的mRNA来确定。示例性免疫测定包括但不限于ELISA、放射免疫测定和夹心免疫测定。

此外，将本申请的各种异源序列引入宿主细胞可以通过异源序列编码的酶(例如，酶促标志物)的酶促活性来确认实。可通过本领域已知的多种方法测定酶。通常，酶促活性可通过产物的形成或正在研究的酶促反应的底物的转化来确定。所述反应可在体外或体内进行。

另一方面，本申请提供一种制备所述的融合蛋白的方法，其可以包括在使得所述融合蛋白能够表达的条件下培养所述的细胞。例如，可通过使用适当的培养基、适当的温度和培养时间等，这些方法是本领域普通技术人员所了解的。

在某些情形中，所述方法还可包括分离和/或纯化所述融合蛋白的步骤。例如，可以采用蛋白G-琼脂糖或蛋白A-琼脂糖进行亲和层析，还可通过凝胶电泳和/或高效液相色谱等来纯化和分离本申请所述的融合蛋白。

免疫缀合物、组合物和应用

另一方面，本申请提供一种免疫缀合物，其包含所述的融合蛋白。例如，所述免疫缀合物可以为融合蛋白-药物缀合物(ADC)，其中本申请所述的融合蛋白与一种或多种治疗剂缀合，所述治疗剂包括但不限于细胞毒性剂、放射性毒性剂(例如，放射性同位素)和/或免疫抑制剂(例如，通过抑制免疫应答等途径杀伤细胞的任何药剂)等。在某些实施方式中，所述治疗剂可以为能够治疗肿瘤相关的疾病或病症的治疗剂。

所述缀合可通过肽连接子(例如，可切割连接子)或其它方式进行，例如，所述连接子可以为酸不稳定连接子、肽酶敏感连接子、光不稳定连接子等。

另一方面，本申请提供一种组合物，所述组合物包含所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，或所述的核酸分子，以及任选地药学上可接受的赋形剂。例如，所述药学上可接受的赋形剂可以包括缓冲剂、抗氧化剂、防腐剂、低分子量多肽、蛋白质、亲水聚合物、氨基酸、糖、螯合剂、反离子、金属复合物和/或非离子表面活性剂等。

在本申请中，可按照本领域的常规技术手段将所述组合物与药学上可接受的载体或稀释剂以及任何其他已知的辅剂和赋形剂配制在一起，例如按照Remington：TheScience and Practice of Pharmacy，第十九版，Gennaro编辑，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1995中公开的技术进行操作。

在本申请中，所述组合物可被配制用于口服给药，静脉内给药，肌肉内给药，在肿瘤部位的原位给药，吸入，直肠给药，阴道给药，经皮给药或通过皮下储存库给药。

例如，所述组合物可以用于抑制肿瘤生长。例如，本申请的组合物可以抑制或延缓疾病的发展或进展，可以减小肿瘤大小(甚至基本消除肿瘤)，和/或可以减轻和/或稳定疾病状态。

例如，本申请所述的组合物可以为适于口服给药的形式，如片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂，缓释制剂，溶液剂，混悬剂，或者用于肠胃外注射，如无菌溶液剂，混悬剂或乳剂，或者用于软膏或乳膏局部给药或作为栓剂直肠给药。所述组合物可以是适合精确剂量单次给药的单位剂量形式。所述组合物可以进一步包含常规的药物载体或赋形剂。此外，所述组合物可以包括其他药物或药剂、载体、佐剂等。

本申请所述的组合物可以包含治疗有效量的所述融合蛋白。所述治疗有效量是能够预防和/或治疗(至少部分治疗)患有或具有发展风险的受试者中的病症或病症(例如肿瘤)和/或其任何并发症而所需的剂量。所述剂量的具体量/浓度可以根据施用方法和患者需要而变化，并且可以基于例如患者体积，粘度和/或体重等来确定。例如，合适的剂量可以是约0.1mg或1mg/kg/天至约50mg/kg/天；有时，剂量可能会更高。应当理解的是，基于特定患者，制剂和/或疾病的状况，本领域技术人员(例如，医生或药剂师)可以方便地调整这些特定剂量。

在本申请中，术语“治疗”或“医治”或“缓解”或“改善”在本申请中可互换使用，并且是指获得有益或所需的结果(包括但不限于治疗益处和/或预防益处)的方法。在本申请中，治疗益处通常是指根除或减轻所治疗的潜在病症的严重性。此外，通过根除、减轻严重性或减少与潜在病症相关的一种或多种生理症状的发生率，以使得在受试者中观察到改善(尽管受试者仍然可能受到潜在病症折磨)来实现治疗益处。对于预防益处，可向处于发展特定疾病的风险中的受试者，或报告疾病的一种或多种生理症状的受试者施用组合物，即使可能尚未进行该疾病的诊断。

另一方面，本申请提供了所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，所述的载体，所述的组合物，或所述的细胞在制备药物中的用途，其中所述药物可以用于治疗肿瘤或自免疫疾病。

另一方面，本申请所述的融合蛋白、免疫缀合物、核酸分子、载体、组合物或细胞可以用于治疗所述肿瘤或自免疫疾病。

另一方面，本申请提供了所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，所述的载体，所述的组合物，或所述的细胞，其可以治疗肿瘤或自免疫疾病。

另一方面，本申请提供了治疗肿瘤或自免疫疾病的方法，所述方法包括向受试者施用本申请所述的融合蛋白、免疫缀合物、核酸分子、载体、组合物或细胞。

另一方面，本申请提供了一种阻断CD47蛋白与SIRPα相互作用的方法，所述方法可包括施用(例如，向有需要的受试者或细胞或生物学样品施用)本申请所述的融合蛋白、所述免疫缀合物、所述核酸分子、所述载体、所述组合物和/或所述细胞。

另一方面，本申请提供了一种抑制肿瘤或肿瘤细胞生长和/或增殖的方法，所述方法可包括使本申请所述的融合蛋白或组合物与所述肿瘤或肿瘤细胞接触。例如，所述接触可在体外发生。

在本申请中，术语“受试者”通常是指人或非人动物，包括但不限于猫、狗、马、猪、牛、绵羊、山羊、兔、小鼠、大鼠或猴。

另一方面，本申请提供了一种可以抑制肿瘤或肿瘤细胞生长和/或增殖的方法，其可以包括向有需要的受试者施用有效量的所述的融合蛋白，所述的免疫缀合物，所述的核酸分子，所述的载体，所述的组合物，或所述的细胞。

在本申请中，所述肿瘤可以包括BCMA阳性肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤可以包括非实体瘤。例如，所述肿瘤可以包括选自下组的肿瘤：骨髓瘤、淋巴瘤和血液系统恶性肿瘤。

在本申请中，所述肿瘤可以选自下组：CD47阳性血液肿瘤或CD47阳性实体瘤。

在本申请中，术语“CD47阳性血液肿瘤”通常是指过表达CD47的血液肿瘤，其中可包括各类白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。所述“白血病”通常是指血液的一种癌症，其中产生了过多的对抵抗感染不起作用的白细胞，由此挤占了组成血液的其他部分，如血小板和红细胞。白血病可分为急性或慢性白血病。白血病的某些形式可以为，例如，急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓细胞白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、骨髓增殖性失调/肿瘤(MPDS)和骨髓增生异常综合征。所述“淋巴瘤”可以指霍奇金淋巴瘤、惰性和侵袭性非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤(小细胞和大细胞)等。所述骨髓瘤可以指多发性骨髓瘤(MM)、巨细胞骨髓瘤、重链骨髓瘤(heavy chain myeloma)、轻链骨髓瘤(light chian myeloma)或本斯-琼斯氏骨髓瘤(Bence-Jones myeloma)。

在本申请中，术语“CD47阳性实体瘤”通常是指过表达CD47的实体瘤或有形瘤，其可以通过临床检查，例如，X线摄片、CT扫描、B超或者触诊检查出有形肿块。主要类别可包括癌症(carcinoma)和肉瘤(sarcoma)。例如，所述CD47阳性实体瘤可以包括尤文氏肉瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、星形细胞癌、胶质母细胞瘤和肾细胞癌等。

在本申请中，所述自免疫疾病可包括克罗恩氏病、过敏性哮喘和类风湿性关节炎。

在本申请中，术语“克罗恩氏病”通常是指一种原因不明的肠道炎症性疾病，在胃肠道的任何部位均可发生，但好发于末端回肠和右半结肠。所述克罗恩氏病和慢性非特异性溃疡性结肠炎两者统称为炎症性肠病(IBD)。

在本申请中，术语“过敏性哮喘”通常是指由多种细胞特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞参与的慢性气道炎症。

在本申请中，术语“类风湿性关节炎”通常是指一种以关节病变为主的慢性全身自身免疫性疾病。

本申请所述的融合蛋白、核酸分子、载体、宿主细胞和/或组合物可用于预防或治疗所述肿瘤或所述自免疫疾病。

另一方面，本申请提供了一种判断受试者中与BCMA蛋白的表达相关的疾病或病况的方法，所述方法包括：使源自所述受试者的样品与所述的抗体或其抗原结合片段接触，以及判断所述样品中能够特异性结合所述抗体或其抗原结合片段的物质的存在和/或含量。所述与BCMA蛋白的表达相关的疾病或病况可以选自以下组：骨髓瘤、淋巴瘤和血液系统恶性肿瘤。

另一方面，本申请还提供了所述的融合蛋白在制备可被细胞内化的药物中的用途，其中所述细胞表达BCMA。

本申请还涉及如下实施方案：

1.融合蛋白，其包含：

特异性结合BCMA的第一结合域；以及

特异性结合CD47蛋白的第二结合域；

其中，所述第二结合域包含人SIRPα变体1的突变体，所述突变体与SEQ ID NO:13所示的序列相比，在第33位至第149位中的一个或多个位置包含氨基酸残基的取代、缺失或添加。

2.根据实施方案1所述的融合蛋白，其中所述突变体在选自下组的一个或多个氨基酸残基处包含氨基酸取代：I61、V63、E77、Q82、K83、E84、V93、D95、D96、K98、N100、R107、G109和V132。

3.根据实施方案2所述的融合蛋白，其中所述突变体在选自下组的氨基酸残基处包含氨基酸取代：

(1)I61、V63、E77、E84、V93、L96、K98、N100和V132；

(2)I61、E77、Q82、K83和E84；

(3)I61、V63、K83、E84和V132；

(4)I61、E77、E84、R107和V132；

(5)I61、V63、E77、K83、E84和N100；

(6)I61、E77、Q82、K83、E84和R107；

(7)I61、E77、Q82、E84、V93、L96、N100、R107、G109和V132；

(8)I61、E77、Q82、K83、E84和V132；

(9)I61；

(10)I61、D95、L96、G109和V132；

(11)I61、D95、L96、K98、G109和V132；

(12)I61、E77、E84、V93、R107和V132；

(13)E77、L96、N100、G109和V132；

(14)I61、V63、Q82、E84、D95、L96、N100和V132；

(15)I61、E77、Q82、K83、E84、V93、D95、L96、K98、N100和V132；

(16)I61、E77、Q82、K83、E84和V93；

(17)I61、V63、E77、K83、E84、D95、L96、K98和N100；

(18)I61、V63、E77、K83、D95、L96、K98、N100和G109；

(19)I61、E77、Q82、E84、V93、D95、L96、K98和N100；和，

(20)I61、V63、E77、Q82和E84。

4.根据实施方案1-3中任一项所述的融合蛋白，其中所述突变体包含选自下组的一个或多个氨基酸取代：I61L/V/F、V63I、E77I/N/Q/K/H/M/R/N/V/L、Q82S/R/G/N、K83R、E84K/H/D/R/G、V93L/A、D95H/R/E、D96S/T、K98R、N100G/K/D/E、R107N/S、G109R/H和V132L/R/I/S。

5.根据实施方案4所述的融合蛋白，其中所述突变体包含选自下组的氨基酸取代：

(1)I61L、V63I、E77I、E84K、V93L、L96S、K98R、N100G和V132L；

(2)I61V、E77N、Q82S、K83R和E84H；

(3)I61F、V63I、K83R、E84K和V132I；

(4)I61L、E77Q、E84D、R107N和V132I；

(5)I61L、V63I、E77K、K83R、E84D和N100G；

(6)I61V、E77H、Q82R、K83R、E84H和R107S；

(7)I61L、E77I、Q82G、E84R、V93L、L96T、N100G、R107S、G109R和V132R；

(8)I61L、E77M、Q82G、K83R、E84D和V132L；

(9)I61L；

(10)I61F、D95H、L96S、G109H和V132S；

(11)I61F、D95H、L96S、K98R、G109H和V132S；

(12)I61L、E77Q、E84D、V93A、R107N和V132I；

(13)E77K、L96S、N100K、G109H和V132L；

(14)I61L、V63I、Q82G、E84G、D95R、L96S、N100D和V132I；

(15)I61L、E77R、Q82N、K83R、E84G、V93L、D95E、L96T、K98R、N100D和V132L；

(16)I61V、E77N、Q82S、K83R、E84H和V93A；

(17)I61V、V63I、E77V、K83R、E84D、D95E、L96T、K98R和N100E；

(18)I61L、V63I、E77V、K83R、D95E、L96S、K98R、N100D和G109R；

(19)I61V、E77L、Q82G、E84G、V93L、D95E、L96T、K98R和N100G；和，

(20)I61L、V63I、E77N、Q82G和E84G。

6.根据实施方案1-5中任一项所述的融合蛋白，其中所述突变体包含如SEQ IDNO:14-33中任一项所示的氨基酸序列。

7.根据实施方案1-6中任一项所述的融合蛋白，其中所述第一结合域包含抗体或其抗原结合片段。

8.根据实施方案7所述的融合蛋白，其中所述抗体选自下组：单克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。

9.根据实施方案7-8中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F(ab')2，dAb，分离的互补决定区CDR，Fv和scFv。

10.根据实施方案1-9中任一项所述的融合蛋白，其中所述BCMA为人BCMA。

11.根据实施方案7-10中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗体或其抗原结合片段包含抗体重链可变区VH中至少一个CDR，所述VH包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。

12.根据实施方案11所述的融合蛋白，其包含HCDR1，所述HCDR1包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:4。

13.根据实施方案11-12中任一项所述的融合蛋白，其包含HCDR2，其中所述HCDR2包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:5。

14.根据实施方案11-13中任一项所述的融合蛋白，其包含HCDR3，其中所述HCDR3包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:6。

15.根据实施方案11-14中任一项所述的融合蛋白，其包含重链可变区VH，其中所述重链可变区VH包含下组任一项所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:8。

16.根据实施方案7-15中任一项所述的融合蛋白，其包含重链恒定区，且所述重链恒定区包含IgG。

17.根据实施方案16所述的融合蛋白，其中所述IgG选自下组：IgG1和IgG4。

18.根据实施方案7-17中任一项所述的融合蛋白，其包含抗体重链或其片段，其中所述抗体重链包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:10。

19.根据实施方案7-18中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗体或其抗原结合片段包含抗体轻链可变区VL中至少一个CDR，所述VL包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。

20.根据实施方案19所述的融合蛋白，其包含LCDR1，其中所述LCDR1包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:1。

21.根据实施方案19-20中任一项所述的融合蛋白，其包含LCDR2，其中所述LCDR2包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:2。

22.根据实施方案19-21中任一项所述的融合蛋白，其包含LCDR3，其中所述LCDR3包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:3。

23.根据实施方案19-22中任一项所述的融合蛋白，其包含轻链可变区VL，其中所述轻链可变区VL包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:7。

24.根据实施方案19-23中任一项所述的融合蛋白，其包含轻链恒定区，且所述轻链恒定区包含Igκ。

25.根据实施方案19-24中任一项所述的融合蛋白，其包含抗体轻链或其片段，其中所述抗体轻链包含下组所示的氨基酸序列：SEQ ID NO:9。

26.根据实施方案1-25中任一项所述的融合蛋白，其中所述第一结合域位于所述第二结合域的N端。

27.根据实施方案1-26中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白还包含连接子，所述连接子位于所述第一结合域的C端且位于所述第二结合域的N端。

28.根据实施方案27所述的融合蛋白，其中所述连接子包含如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列。

29.根据实施方案1-28中任一项所述的融合蛋白，其包含至少2个所述第二结合域。

30.根据实施方案29所述的融合蛋白，其中所述每个所述第二结合域分别位于所述第一结合域的C端。

31.免疫缀合物，其包含根据实施方案1-30中任一项所述的融合蛋白。

32.一个或多个分离的核酸分子，其编码根据实施方案1-30中任一项所述的融合蛋白和/或根据实施方案31所述的免疫缀合物。

33.一个或多个载体，其包含实施方案32所述的核酸分子。

34.组合物，其包含根据实施方案1-30中任一项所述的融合蛋白，根据实施方案31所述的免疫缀合物，和/或根据实施方案32所述的核酸分子，以及任选地药学上可接受的赋形剂。

35.细胞，其包含实施方案1-30中任一项所述的融合蛋白，实施方案31所述的免疫缀合物，实施方案32所述的核酸分子，和/或实施方案33所述的载体。

36.制备根据实施方案1-30中任一项所述的融合蛋白的方法，其包括在使得所述融合蛋白能够表达的条件下培养根据实施方案35所述的细胞。

37.实施方案1-30中任一项所述的融合蛋白，实施方案31所述的免疫缀合物，实施方案32所述的核酸分子，实施方案33所述的载体，实施方案34所述的组合物，和/或实施方案35所述的细胞在制备药物中的用途，其中所述药物用于治疗肿瘤或自免疫疾病。

38.根据实施方案37所述的用途，其中所述肿瘤包括BCMA阳性肿瘤。

39.根据实施方案37-38中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括非实体瘤。

40.根据实施方案37-39中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括选自下组的肿瘤：骨髓瘤、淋巴瘤和血液系统恶性肿瘤。

41.根据实施方案37所述的用途，其中所述肿瘤选自下组：CD47阳性血液肿瘤或CD47阳性实体瘤。

42.根据实施方案37所述的用途，其中所述自免疫疾病选自下组：克罗恩氏病、过敏性哮喘和类风湿性关节炎。

43.阻断CD47/SIRPa相互作用的方法，其包括施用实施方案1-30中任一项所述的融合蛋白，实施方案31所述的免疫缀合物，实施方案32所述的核酸分子，实施方案33所述的载体，实施方案34所述的组合物，和/或实施方案35所述的细胞。

44.判断受试者中与BCMA蛋白的表达相关的疾病或病况的方法，所述方法包括：使源自所述受试者的样品与实施方案1-30中任一项所述的融合蛋白接触，以及判断所述样品中能够特异性结合所述融合蛋白的物质的存在和/或含量。

45.实施方案1-30中任一项所述的融合蛋白在制备可被细胞内化的药物中的用途，其中所述细胞表达BCMA。

不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的融合蛋白、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。

实施例

实施例1融合蛋白和其他蛋白质的制备

参照如图1所示的融合蛋白结构，以抗BCMA抗体SG1116作为第一结合域、SIRPα变体1的突变体M91(SEQ ID:NO:25)为第二结构域、SEQ ID NO:35作为连接子氨基酸序列为例，制备融合蛋白SGBCMA47。从N端到C端，依次连接SG1116、连接子和2个M91，其中2个M91的N端分别和SG1116的重链的C端连接。

其中，BCMA抗体SG1116的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，抗体SG1116的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。

构建的融合蛋白SGBCMA47由第一多肽链和第二多肽链构成，第一多肽链即SG1116的轻链，其氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，第二多肽链即SG1116的重链和M91通过连接子连接得到的多肽链，其氨基酸序列如SEQ ID NO:37所示。

将SIRPα变体1的突变体M91和IgG1-FC(序列如SEQ ID NO:34所示)融合得到SS002M91，SS002M91氨基酸序列如SEQ ID NO:36所示。

实施例2融合蛋白分别与双抗原结合的活性分析

2.1 ELISA评价融合蛋白与BCMA抗原的结合活性

以抗BCMA的人源化抗体SG1116为对照，通过ELISA评价融合蛋白和BCMA抗原的结合活性。将靶抗原BCMA-His包被ELISA板条，4℃过夜；PBST洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；加入不同浓度的抗体SG1116和融合蛋白SGBCMA47，37℃反应1小时；PBST洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG二抗(Goat Anti human IgG HRP，ThermoFisher Scientific)，37℃反应30分钟；PBST洗涤5次；每孔加入100μl TMB(eBioscience)，室温(20±5℃)避光放置1～2min；随后每孔加入100μl 2N H₂SO₄终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取OD值，分析融合蛋白与相关靶抗原结合能力。

如图2所示，SGBCMA47和SG1116相比，对BCMA抗原的结合活性相近。融合蛋白与BCMA的结合EC50为0.1243nM，SG1116的EC50为0.07037nM。

2.2 ELISA评价融合蛋白与CD47的结合活性

以SIRPα变体1的突变体M91为对照，使用ELISA评价融合的融合蛋白和CD47的结合活性。将靶抗原CD47包被ELISA板条，4℃过夜；PBST洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；加入不同浓度的蛋白质SS002M91和融合蛋白SGBCMA47，37℃反应1小时；PBST洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG二抗(Goat Anti human IgG HRP，ThermoFisher Scientific)，37℃反应30分钟；PBST洗涤5次；每孔加入100μl TMB(eBioscience)，室温(20±5℃)避光放置1～2min；随后每孔加入100μl 2N H₂SO₄终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取OD值，分析融合蛋白与CD47结合能力。

如图3所示，SGBCMA47和SS002M91相比，对CD47抗原的结合活性相近。融合蛋白SGBCMA47与CD47的结合EC50为0.08911nM，SS002M91的EC50为0.05001nM。

实施例3融合蛋白与两个抗原同时结合的活性分析

参考图4的原理，以抗BCMA人源化抗体SG1116为对照，ELISA分析融合蛋白SGBCMA47同时结合两抗原BCMA和CD47的生物学活性。

将靶抗原BCMA-His包被ELISA板条，4℃过夜；PBST洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；加入不同浓度的SG1116抗体和融合蛋白SGBCMA47，37℃反应1小时；PBST洗涤后，加入生物素标记CD47(Biotin-Fc-CD47)，37℃反应30分钟；PBST洗涤5次；加入辣根过氧化物酶标记的亲和素(Streptavidin-HRP，嘉暄生物)，37℃反应30分钟；PBST洗涤5次；每孔加入100μl TMB(eBioscience)，室温(20±5℃)避光放置1～2min；随后每孔加入100μl2N H₂SO₄终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取OD值，分析融合蛋白与相关抗原和CD47同时结合的能力。

图5显示，SGBCMA47和SG1116分别对BCMA和CD47双抗原的结合情况，结果显示融合蛋白可以与双抗原同时结合；而单抗SG1116不能同时识别两个抗原。

实施例4融合蛋白阻断CD47/SIRPα相互作用活性分析

以CD47受体突变体M91与IgG1-FC融合得到的蛋白质SS002M91为对照，评价融合蛋白SGBCMA47阻断CD47/SIRPα相互作用的生物学活性。

将1μg/ml的SIRPα-His包被酶联板，4℃过夜；PBST洗涤后，加入10％的胎牛血清，37℃封闭1小时；使用10％的胎牛血分别梯度稀释SS002M91、SGBCMA47，并在样品中加入Biotin-Fc-CD47至终浓度2μg/ml，37℃预孵育30min，作为一抗；PBST洗涤酶联板后，加入一抗，37℃孵育1小时；PBST洗5遍，加入辣根过氧化物酶标记的亲和素(Streptavidin-HRP，嘉暄生物)，37℃孵育30分钟；PBST洗5遍，每孔加入100μl TMB(eBioscience)，室温(20±5℃)避光放置1-5min；每孔加入100μl 2N H₂SO₄终止液终止底物反应，酶标仪450nm处读取OD值，分析SS002M91、SGBCMA47对CD47/SIRPα的阻断作用。

从图6中可以看出，SGBCMA47与SS002M91一样可以竞争性阻断CD47与其配体SIRPα的结合。SGBCMA47的IC50值为0.003234μM，SS002M91的IC50值为0.001244μM。

实施例5融合蛋白的细胞内化活性

以抗BCMA的人源化抗体SG1116为对照，评价融合蛋白SGBCMA47细胞内化活性。

利用流式分析技术检测融合蛋白SGBCMA47、SG1116抗体在稳定表达BCMA的CHOS细胞(CHOS-BCMA)上的内化效率。收集对数生长期细胞，调整细胞密度到5×10⁶cell/mL，冰上预冷。含2％FBS预冷的生理盐水稀释融合蛋白SGBCMA47和SG1116抗体至不同浓度。取100μl细胞，加入等体积前述稀释样品，4℃孵育30min。结束后，用含2％FBS预冷的生理盐水洗涤细胞三次。将细胞继续放置于4℃或37℃培养2小时后洗涤细胞两次。用含2％FBS预冷的生理盐水按1：5稀释二抗PE Mouse Anti-Human IgG(BD Pharmingen)，取100uL重悬细胞，4℃避光反应30min。反应结束后，洗涤细胞三次。用400μl 1％多聚甲醛重悬细胞。流式细胞仪(BD Calibur)分析抗体在不同温度下培养细胞表面的荧光强度，并按照一下公式计算出抗体的内化效率。内化效率＝【表面总MFI(4℃)-表面总MFI(37℃)】/表面总MFI(4℃)×100％。

结果显示，融合蛋白SGBCMA47与SG1116抗体一样在稳定表达BCMA的CHOS细胞(CHOS-BCMA)上可以有效的内化，EC50分别为0.026nM、0.15nM。结果如图7所示。

前述详细说明是以解释和举例的方式提供的，并非要限制所附权利要求的范围。目前本申请所列举的实施方式的多种变化对本领域普通技术人员来说是显而易见的，且保留在所附的权利要求和其等同方案的范围内。

序列表

<110> 尚健单抗（北京）生物技术有限公司

<120> 含SIRPa变体的融合蛋白

<130> 0070-PA-006

<160> 37

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SG1116 LCDR1

<400> 1

Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SG1116 LCDR2

<400> 2

Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr

1 5

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SG1116 LCDR3

<400> 3

Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr

1 5

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SG1116 HCDR1

<400> 4

Arg Tyr Ser Met Asn

1 5

<210> 5

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SG1116 HCDR2

<400> 5

Arg Ile Asn Thr Gly Ser Gly Ala Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 6

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SG1116 HCDR3

<400> 6

Asp Tyr Asn Tyr Ser Leu Asp His

1 5

<210> 7

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SG1116 轻链可变区

<400> 7

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu

20 25 30

Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 8

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SG1116 重链可变区

<400> 8

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Gly Ser Gly Ala Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Asn Tyr Ser Leu Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Ala

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 9

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SG1116 轻链

<400> 9

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu

20 25 30

Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95

Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 10

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SG1116 重链

<400> 10

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Gly Ser Gly Ala Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Asn Tyr Ser Leu Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Ala

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 11

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SG1116 轻链恒定区

<400> 11

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 12

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SG1116 重链恒定区

<400> 12

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 13

<211> 117

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 13

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Asp Leu

50 55 60

Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 14

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M1

<400> 14

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Leu Pro Ile Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Ile Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gln Lys Lys Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Leu Ser Asp Ser

50 55 60

Thr Arg Arg Gly Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Leu Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 15

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M5

<400> 15

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Val Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Asn Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Ser Arg His Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Asp Leu

50 55 60

Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 16

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M12

<400> 16

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Phe Pro Ile Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gln Arg Lys Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Asp Leu

50 55 60

Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Ile Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 17

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M35

<400> 17

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Leu Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Gln Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gln Lys Asp Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Asp Leu

50 55 60

Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Asn Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Ile Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 18

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M37

<400> 18

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Leu Pro Ile Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Lys Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gln Arg Asp Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Asp Leu

50 55 60

Thr Lys Arg Gly Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 19

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M41

<400> 19

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Val Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg His Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Arg Arg His Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Asp Leu

50 55 60

Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 20

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M57

<400> 20

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Leu Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Ile Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gly Lys Arg Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Leu Ser Asp Thr

50 55 60

Thr Lys Arg Gly Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Arg Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Arg Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 21

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M67

<400> 21

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Leu Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Met Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gly Arg Asp Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Asp Leu

50 55 60

Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Leu Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 22

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M81

<400> 22

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Leu Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Asp Leu

50 55 60

Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 23

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M82

<400> 23

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Phe Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser His Ser

50 55 60

Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile His Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Ser Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 24

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M84

<400> 24

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Phe Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser His Ser

50 55 60

Thr Arg Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile His Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Ser Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 25

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M91

<400> 25

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Leu Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Gln Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gln Lys Asp Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Ala Ser Asp Leu

50 55 60

Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Asn Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Ile Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 26

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M99

<400> 26

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Lys Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Asp Ser

50 55 60

Thr Lys Arg Lys Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile His Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Leu Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 27

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M102

<400> 27

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Leu Pro Ile Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gly Lys Gly Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Arg Ser

50 55 60

Thr Lys Arg Asp Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Ile Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 28

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M111

<400> 28

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Leu Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Arg Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Asn Arg Gly Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Leu Ser Glu Thr

50 55 60

Thr Arg Arg Asp Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Leu Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 29

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M122

<400> 29

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Val Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Asn Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Ser Arg His Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Ala Ser Asp Leu

50 55 60

Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 30

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M126

<400> 30

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Val Pro Ile Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Val Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gln Arg Asp Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Glu Thr

50 55 60

Thr Arg Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 31

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M130

<400> 31

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Leu Pro Ile Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Val Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gln Arg Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Glu Ser

50 55 60

Thr Arg Arg Asp Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Arg Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 32

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M135

<400> 32

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Val Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gly Lys Gly Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Leu Ser Glu Thr

50 55 60

Thr Arg Arg Gly Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 33

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> M145

<400> 33

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Leu Pro Ile Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Asn Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gly Lys Gly Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Asp Leu

50 55 60

Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser

115

<210> 34

<211> 233

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> IgG1-FC

<400> 34

Leu Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 35

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 连接子

<400> 35

Gly Gly Gly Ser Ala Ala Ala

1 5

<210> 36

<211> 350

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SS002M91的单体

<400> 36

Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Leu Pro Val Gly

20 25 30

Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Gln Leu Ile Tyr

35 40 45

Asn Gln Lys Asp Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Ala Ser Asp Leu

50 55 60

Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Asn Ile Gly Asn Ile Thr

65 70 75 80

Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Asp Ile Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Ser Leu Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

115 120 125

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

130 135 140

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

145 150 155 160

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

165 170 175

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

180 185 190

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

195 200 205

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

210 215 220

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

225 230 235 240

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

245 250 255

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

260 265 270

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

275 280 285

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

290 295 300

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

305 310 315 320

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

325 330 335

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340 345 350

<210> 37

<211> 571

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> SGBCMA的第二多肽链

<400> 37

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Gly Ser Gly Ala Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys

85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Asn Tyr Ser Leu Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Ala

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly

435 440 445

Gly Gly Ser Ala Ala Ala Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser

450 455 460

Val Leu Val Ala Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr

465 470 475 480

Ser Leu Leu Pro Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro

485 490 495

Gly Arg Gln Leu Ile Tyr Asn Gln Lys Asp Gly His Phe Pro Arg Val

500 505 510

Thr Thr Ala Ser Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile

515 520 525

Asn Ile Gly Asn Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val

530 535 540

Lys Phe Arg Lys Gly Ser Pro Asp Asp Ile Glu Phe Lys Ser Gly Ala

545 550 555 560

Gly Thr Glu Leu Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser

565 570

Claims (28)

1.融合蛋白，其包含：

特异性结合BCMA的第一结合域；以及

特异性结合CD47蛋白的第二结合域；

其中，所述第二结合域包含人SIRPα变体1中第33位-第149位氨基酸残基的突变体，所述人SIRPα变体1中第33位-第149位氨基酸残基的序列如SEQ ID NO: 13所示，且其中所述突变体相对于氨基酸序列SEQ ID NO: 13的取代为选自下述任一组：

（1）I61V、E77N、Q82S、K83R和E84H；

（2）I61F、V63I、K83R、E84K和V132I；

（3）I61F、D95H、L96S、G109H和V132S；

（4）I61F、D95H、L96S、K98R、G109H和V132S；

（5）I61L、E77Q、E84D、V93A、R107N和V132I；和，

（6）I61L、V63I、Q82G、E84G、D95R、L96S、N100D和V132I。

2. 根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO: 15、16、23、24、25和27中任一项所示。

3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述第一结合域包含抗体或其抗原结合片段。

4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其中所述抗体选自下组：单克隆抗体、单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。

5.根据权利要求3所述的融合蛋白，其中所述抗原结合片段选自下组：Fab，Fab’，F（ab'）2，dAb，Fv和scFv。

6.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述BCMA为人BCMA。

7. 根据权利要求3所述的融合蛋白，其中所述抗体或其抗原结合片段包含HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO: 4所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO: 5所示，且所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO: 6所示，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，且所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO: 3所示。

8. 根据权利要求3所述的融合蛋白，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区VH和轻链可变区VL，其中所述重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID NO: 8所示，且所述轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

9.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链恒定区，且所述重链恒定区包含IgG的重链恒定区。

10.根据权利要求9所述的融合蛋白，其中所述IgG选自下组：IgG1和IgG4。

11.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述抗体或其抗原结合片段包含轻链恒定区，且所述轻链恒定区包含Igκ。

12. 根据权利要求3所述的融合蛋白，其中所述抗体或其抗原结合片段包含抗体重链和抗体轻链，其中所述抗体重链的氨基酸序列如SEQ ID NO: 10所示，且所述抗体轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO: 9所示。

13.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述第一结合域位于所述第二结合域的N端。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白还包含连接子，所述连接子位于所述第一结合域的C端且位于所述第二结合域的N端。

15. 根据权利要求14所述的融合蛋白，其中所述连接子的氨基酸序列如SEQ ID NO:35所示。

16.根据权利要求1-13中任一项所述的融合蛋白，其包含至少2个所述第二结合域。

17.根据权利要求16所述的融合蛋白，其中所述每个所述第二结合域分别位于所述第一结合域的C端。

18.免疫缀合物，其包含根据权利要求1-17中任一项所述的融合蛋白。

19.一个或多个分离的核酸分子，其编码根据权利要求1-17中任一项所述的融合蛋白和/或根据权利要求18所述的免疫缀合物。

20.一个或多个载体，其包含权利要求19所述的核酸分子。

21.组合物，其包含根据权利要求1-17中任一项所述的融合蛋白，根据权利要求18所述的免疫缀合物，和/或根据权利要求19所述的核酸分子，以及任选地药学上可接受的赋形剂。

22.细胞，其包含权利要求1-17中任一项所述的融合蛋白，权利要求18所述的免疫缀合物，权利要求19所述的核酸分子，和/或权利要求20所述的载体。

23.制备根据权利要求1-17中任一项所述的融合蛋白的方法，其包括在使得所述融合蛋白能够表达的条件下培养根据权利要求22所述的细胞。

24.权利要求1-17中任一项所述的融合蛋白，权利要求18所述的免疫缀合物，权利要求19所述的核酸分子，权利要求20所述的载体，权利要求21所述的组合物，和/或权利要求22所述的细胞在制备药物中的用途，其中所述药物用于治疗肿瘤或自免疫疾病，所述肿瘤为BCMA阳性肿瘤和/或CD47阳性肿瘤，所述CD47阳性肿瘤为CD47阳性血液肿瘤或CD47阳性实体瘤，所述自免疫疾病选自下组：克罗恩氏病、过敏性哮喘和类风湿性关节炎。

25.根据权利要求24所述的用途，其中所述BCMA阳性肿瘤为非实体瘤。

26.根据权利要求24-25中任一项所述的用途，其中所述肿瘤为选自下组的肿瘤：骨髓瘤、淋巴瘤和血液系统恶性肿瘤。

27.体外阻断CD47/SIRPa相互作用的方法，其包括施用权利要求1-17中任一项所述的融合蛋白，权利要求18所述的免疫缀合物，权利要求19所述的核酸分子，权利要求20所述的载体，权利要求21所述的组合物，和/或权利要求22所述的细胞。

28.权利要求1-17中任一项所述的融合蛋白在制备可被细胞内化的药物中的用途，其中所述细胞表达BCMA。

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