CN112656783B - 一种甲基天冬氨酸用于制备治疗溃疡性结肠炎的药物的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种甲基天冬氨酸用于制备治疗溃疡性结肠炎的药物的用途。本发明研究结果表明，甲基天冬氨酸可以有效治疗溃疡性结肠炎，具有开发成治疗溃疡性结肠炎的药物的前景。现有技术没有公开过该技术方案，也不存在技术启示，具有突出的实质性特点和显著的进步。

Description

一种甲基天冬氨酸用于制备治疗溃疡性结肠炎的药物的用途

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种甲基天冬氨酸用于制备治疗溃疡性结肠炎的药物的用途。

背景技术

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)又称慢性非特异性溃疡性结肠炎或特发性溃疡性结肠炎，是一种常见的慢性肠道疾病，也是一种多因素、多层次的原因不明的非特异性炎症。病变主要在结肠的黏膜及黏膜下层，呈连续性弥漫性分布，多数累及直肠和乙状结肠。主要临床表现为腹痛、腹泻、黏液脓血便、里急后重等，部分患者有肠外表现，如关节、肝胆管类疾病及眼睛、皮肤的损伤；病程迁延不愈，轻重不等；发病年龄段主要在20～50岁，但无显著性的性别差异。国内外流行病学统计数据显示，UC的发病率和和患病率均呈现明显的增高趋势，被世卫组织列为现代难治病之一，其病因、病机和治疗药物一直是研究热点。

甲基天冬氨酸是一种天然的氨基酸衍生物，目前没有其用于治疗UC的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种甲基天冬氨酸用于制备治疗溃疡性结肠炎的药物的用途。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

一种甲基天冬氨酸用于制备治疗溃疡性结肠炎的药物的用途。

一种治疗溃疡性结肠炎的药物，以甲基天冬氨酸为活性成分。

进一步地，还含有药学上可以接受的辅料，制成药学上可以接受的剂型。

更进一步地，所述辅料为液体、固体或半固体辅料。

更进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊、注射剂。

有益效果：

本发明研究结果表明，甲基天冬氨酸可以有效治疗溃疡性结肠炎，具有开发成治疗溃疡性结肠炎的药物的前景。现有技术没有公开过该技术方案，也不存在技术启示，具有突出的实质性特点和显著的进步。

附图说明

图1为各组小鼠的体重折线图。

图2为各组小鼠的DAI评分结果。

图3为各组小鼠的结肠长度测定结果。

图4为各组小鼠的结肠病理学切片及组织学评分结果；其中：A为各组小鼠结肠病理切片图，B为各组小鼠组织学评分结果。

图5为各组小鼠结肠组织中MPO、IL-6和IL-1β的表达水平；其中：A为不同组小鼠结肠组织中MPO的表达水平，B为不同组小鼠结肠组织中IL-6的表达水平，C为不同组小鼠结肠组织中IL-1β的表达水平。

具体实施方式

下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

一、实验材料和方法

1、分组、造模和给药

材料：C57BL/6型小鼠；葡聚糖硫酸钠(DSS)；0.5％CMC-Na溶液；甲基天冬氨酸(N-Methyl-DL-AsparticAcid)购自上海源叶，CAS号为17833-53-3。

选取C57BL6型小鼠为实验对象，购自扬州大学比较医学中心，周龄为8周-12周，在中国药科大学动物实验中心适应性饲养一周左右，待体重至20g左右进行实验。

随机分为空白组(Control)、模型组(DSS)、甲基天冬氨酸组(MDLA)和5-氨基水杨酸组(5-ASA)，每组10只小鼠。

实验周期为7天，空白组小鼠饮用正常水7天，其他组别在第一天开始饮用含3％的DSS水溶液至七天进行溃疡性结肠炎(UC)造模。自造模第1天开始给药干预：甲基天冬氨酸组灌胃给予100mg/kg的甲基天冬氨酸，5-氨基水杨酸组灌胃给予200mg/kg 5-氨基水杨酸，溶剂均为质量浓度为0.5％CMC-Na溶液，空白组和模型组灌胃均给予同剂量的0.5％CMC-Na溶液。饲喂第7天时断颈处死小鼠。

2、体重测定

在开始正式实验的第一天，每天同个时间点称量小鼠体重，记录在表格中，在第7天实验结束后将所有体重整理，做成折线图，以体重来反馈小鼠的疾病严重程度。

3、疾病活动度指数(DAI)评分的测定

实验期间，每天记录小鼠体质量变化、粪便性状及便血情况，进行疾病活动度指数(DAI)评分的测定。DAI由体重减失率分数，大便性状分数和便血分数相加而得，分值在0～12之间。评分标准如下：1)体重减失率评分：体重无减轻，0分；减轻5％～9％，1分；减轻10％～14％，2分；减轻15％～20％，3分；减轻大于20％，4分。2)大便性状评分：正常，0分；松散，1分；半成型稀，2分；不成型稀，3分；水样泄，4分。3)大便便血评分：便血阴性(－)，0分；便血弱阳性(+)，1分；便血阳性(++)，2分；便血强阳性(+++)，3分；肉眼可见血便，4分。在第7天实验结束后将所有DAI评分整理，做成折线图，作为反映小鼠疾病严重程度一个指标。

4、结肠组织炎症指标表达水平的测定

材料：IL-6高敏酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒；IL-1β高敏酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒；MPO普通酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒。

方法：第7天实验结束后，解剖小鼠，取其结肠部分，组织研磨，超声破碎，离心取上清，-80℃冰箱保存备用，避免反复冻融。

1)加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μL，其余孔分别加标准品或待测样品溶液100μL。加样时将样品加于酶标板孔底部，轻轻晃动混匀，酶标板加上覆膜，37℃孵育1h。

2)弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μL(使用前一小时内配制，取lμL检测溶液A加99μL检测稀释液A，轻轻混匀)，37℃，60min。

3)温育60min后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡2min，350μL/孔，甩干。

4)每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液)100μL，37℃孵育1h。

5)温育60min后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡2min，350μL/孔，甩干。

6)依序每孔加底物溶液90μL，37℃避光孵育反应15min。

7)依序每孔加终止溶液50μL，终止反应。

8)用酶标仪在450nm波长下测量各孔的光密度(OD值)。

5、结肠长度测定

在第7天处死小鼠后，解剖小鼠，取其结肠部分，放置在白色纸张上，用直尺量取长度，记录下来，以结肠长度作为一个方面来反应疾病严重程度。

6、结肠病理学切片及组织学评分

材料：4％多聚甲醛；乙二胺四乙酸EDTA；HE染液；中性树脂；二甲苯；乙醇

方法：实验小鼠处死后，剪取约1cm长含有病变部位的结肠固定于4％多聚甲醛，用乙二胺四乙酸EDTA脱钙，石蜡包埋，切片4～5μm(纵切)，常规二甲苯、各级乙醇、蒸馏水脱蜡至水；HE染色。苏木素染核，伊红染胞浆；中性树脂封片，光学显微镜观察病理组织学变化。结肠切片组织学评分标准分为上皮损伤及黏膜炎细胞浸润2个方面：上皮损伤分5级：0级，无损伤；1级，少量杯状细胞丢失；2级，大量杯状细胞丢失；3级，少量隐窝消失及大量杯状细胞丢失；4级大量隐窝消失。炎症浸润分5级：0级，无浸润；1级，浸润到隐窝底部；2级，浸润到黏膜肌层；3级，黏膜肌层大量浸润伴水肿；4级，浸润到黏膜下层。以上2部分得分之和为组织学评分。

7、数据处理

实验结果采用(Mean±SEM)表示，采用Student’s t进行两组之间的比较，One-wayANOVA和post hoc检验进行多组之间比较。*P<0.05具有统计学差异，**P<0.01具有统计学显著性差异，***P<0.001具有统计学极显著性差异。

二、实验结果

1、体重测定结果

各组小鼠的体重折线图如图1所示，空白组小鼠在实验周期内的体重无明显变化，与空白组相比，模型组小鼠在实验周期内的体重呈明显下降趋势；与模型组相比，甲基天冬氨酸组和5-氨基水杨酸组小鼠在实验周期内的体重下降趋势均得到有效控制。

2、疾病活动度指数(DAI)评分结果

各组小鼠的DAI评分结果如图2所示，与空白组相比，模型组小鼠的DAI评分显著升高；与模型组相比，甲基天冬氨酸组和5-氨基水杨酸组小鼠的DAI评分显著降低。

3、结肠长度测定结果

各组小鼠的结肠长度测定结果如图3所示，与空白组相比，模型组小鼠的结肠长度显著降低；与模型组相比，甲基天冬氨酸组和5-氨基水杨酸组小鼠的结肠长度显著升高。

4、结肠病理学切片及组织学评分结果

各组小鼠的结肠病理学切片及组织学评分结果如图4所示，与空白组相比，模型组小鼠的结肠出现明显病变，炎性浸润增强；与模型组相比，甲基天冬氨酸组和5-氨基水杨酸组小鼠的结肠病变明显缓解，炎性浸润改善。

5、结肠组织炎症指标表达水平测定结果

各组小鼠结肠组织中IL-1β，IL-6和MPO的表达水平如图5所示，与空白组相比，模型组小鼠结肠组织中IL-1β，IL-6和MPO的表达水平显著升高；与模型组相比，甲基天冬氨酸组和5-氨基水杨酸组小鼠结肠组织中IL-1β，IL-6和MPO的表达水平显著降低。

上述实验结果表明，甲基天冬氨酸可以有效治疗溃疡性结肠炎，具有开发成治疗溃疡性结肠炎的药物的前景。现有技术没有公开过该技术方案，也不存在技术启示，具有突出的实质性特点和显著的进步。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。

Claims (1)

1.一种甲基天冬氨酸用于制备治疗溃疡性结肠炎的药物的用途。

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