CN112646001A - 多肽、包含其的多肽产品、试剂盒及应用 - Google Patents

多肽、包含其的多肽产品、试剂盒及应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种多肽、包含其的多肽产品、试剂盒及应用。该多肽，尤其是SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:8所示的多肽，能够特异性地与SARS‑CoV‑2的刺突蛋白结合，从而竞争性抑制SARS‑CoV‑2的刺突蛋白与hACE2结合。这些多肽均能够竞争性地降低或抑制S蛋白与ACE2蛋白的结合，因而可以作为药物或潜在药物减弱或抑制新冠病毒对人体的感染作用。

Description

多肽、包含其的多肽产品、试剂盒及应用
技术领域
本发明涉及多肽领域，具体而言，涉及一种多肽、包含其的多肽产品、试剂盒及应用。
背景技术
由新型冠状病毒“SARS-CoV-2”(Severe Acute Respiratory SyndromeCoronavirus 2)感染所致的新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)目前正在全球肆虐。截止到2020年12月11日，在全球范围内SARS-CoV-2感染病例已达70714214例，其中死亡病例为1588277例。
由于疫情还在迅速蔓延，对全世界带来了极大的危害和威胁。为遏制疫情进一步蔓延，控制或阻断其传播，急需要开发出相应的遏制新冠病毒传播的药物或预防试剂，尤其是多肽类的相关产品。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种多肽、包含其的多肽产品、试剂盒及应用，为遏制新冠病毒传播提供新的手段和方案。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种多肽，多肽能够特异性地与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合，从而竞争性抑制刺突蛋白与hACE2结合。
进一步地，多肽能够特异性地与SARS-CoV-2的刺突蛋白的受体结合区域结合。
进一步地，多肽选自SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：8中的任意一条或多条；优选地，多肽为修饰后的肽段；优选地，修饰为化学基团修饰或氨基酸修饰；优选地，化学基团修饰为PEG修饰；优选地，PEG修饰为直链PEG修饰、具有单官能团的PEG修饰或者具有双官能团的PEG修饰；优选地，PEG修饰的位点选自多肽的N端、C端、Lys侧链和Cys侧链中的任意一个或多个；优选地，PEG修饰为分子量为500～40000的PEG修饰；优选地，氨基酸修饰为亲水性氨基酸修饰或半胱氨酸修饰；优选地，亲水性氨基酸修饰为在多肽的N端、C端或者NC两端添加1-4个亲水性氨基酸，更优选地，亲水性氨基酸为Glu、Lys、Ser或Gly；进一步优选地，1-4个亲水性氨基酸选自如下任意一种：Glu-Glu、Lys-Lys或Ser-Gly-Ser；优选地，半胱氨酸修饰为在多肽的如下任一位置添加半胱氨酸：N端、C端、NC两端或肽链中间；更优选地，在肽链中间添加半胱氨酸包括在肽链中间插入一个或多个半胱氨酸，或者一个或多个半胱氨酸以支链形式连接于肽链的中间。
根据本申请的第二个方面，提供了一种多肽产品，多肽产品包括上述任一种多肽。
进一步地，多肽产品还包括多肽稳定剂；优选地，多肽稳定剂包括150～180mMNaCl、100～140mM的聚赖氨酸盐酸盐及水。
进一步地，多肽产品为多肽药物或多肽试剂；优选地，多肽药物的剂型为如下任意一种：气雾剂、溶液剂、滴丸、悬混剂、乳剂、脂质体、透皮剂、片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、栓剂或冻干粉针剂；优选地，多肽药物的给药方式选自任意一种：呼吸道给药、粘膜给药、腔道给药、注射给药或表面给药；优选地，呼吸道给药为经鼻腔给药；优选地，腔道给药选自经直肠、阴道或舌下给药；优选地，注射给药选自皮下注射、静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、脑池内注射或灌输。
进一步地，多肽产品中多肽的浓度为3～10μM，优选为5～8μM。
根据本申请的第三个方面，提供了一种检测SARS-CoV-2的试剂盒，试剂盒包括检测试剂或检测芯片，检测试剂包括上述任一种多肽，或者检测芯片上设置有上述任一种多肽。
根据本申请的第四个方面，提供了上述任一种多肽在制备预防和/或治疗COVID-19的药物中的应用。
根据本申请的第五个方面，提供了上述任一种多肽在制备检测SARS-CoV-2的试剂盒中的应用。
应用本发明的技术方案，本申请中所提供的多肽，尤其是SEQ ID NO：1至SEQ IDNO：8所示的多肽，均能够竞争性地降低或抑制S蛋白与ACE2蛋白的结合，从而减弱或抑制新冠病毒对人体的感染作用。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1示出了根据本发明的实施例3中的SEQ ID NO：7所示的多肽与S蛋白特异性结合的示意图；以及
图2示出了根据本发明的实施例3中的SEQ ID NO：8所示的多肽与S蛋白特异性结合的示意图。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
新冠肺炎由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起。新型冠状病毒属于β属的冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，直径60～140nm。具有5个必需基因，分别针对核蛋白(N)、病毒包膜(E)、基质蛋白(M)和刺突蛋白(S)4种结构蛋白及RNA依赖性的RNA聚合酶(RdRp)。核蛋白(N)包裹RNA基因组构成核衣壳，外面围绕着病毒包膜(E)，病毒包膜包埋有基质蛋白(M)和刺突蛋白(S)等蛋白。刺突蛋白通过结合血管紧张素转化酶2(ACE-2)进入细胞。体外分离培养时，新型冠状病毒96个小时左右即可在人呼吸道上皮细胞内发现，而在VeroE6和Huh-7细胞系中分离培养约需4～6天。冠状病毒对紫外线和热敏感，56℃30分钟、乙醚、75％乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒，氯己定不能有效灭活病毒。
为了开发针对SARS-CoV-2的相关药物或检测/诊断试剂，本申请针对与人受体蛋白hACE2结合的刺突蛋白，利用多肽芯片技术筛选了一批能够抑制刺突蛋白与人受体蛋白hACE2结合的多肽。在此基础上，申请人提出了本申请的技术方案。
多肽芯片是一种基于衬底材料的芯片，芯片上包括预先设计数量、位置和序列的特征，一个特征是一簇序列相同的多肽，特征与特征之间的多肽序列往往是不一样的，这些特征组成一个高密度多肽阵列。
多肽芯片技术是基于多肽芯片的检测技术，其利用多肽芯片上的种类繁多的多肽与样本的接触，然后利用荧光检测技术图像采集技术采集多肽芯片上各个特征信号(具体可表现为携带各个特征信号的荧光图像)，进而输出芯片中每个特征的信号强度，即多肽芯片检测结果数据。输出样本检测信号，基于多肽芯片检测结果数据输出的样本检测信号，可实现对与多肽芯片上的多肽结合的样本中的待测物的分析，样本的分析等。
在本申请第一种典型的实施方式中，提供了一种多肽，该多肽能够特异性地与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合，从而竞争性抑制SARS-CoV-2的刺突蛋白与hACE2结合。
在一种优选的实施例中，该多肽能够特异性地与SARS-CoV-2的刺突蛋白的受体结合区域结合。
在另一种优选的实施例中，该多肽能够特异性地与hACE2蛋白结合，从而抑制其与SARS-CoV-2的刺突蛋白的结合。
在一种优选的实施例中，多肽选自SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：8中的任意一条或多条。这些多肽均能够特异性地与hACE2蛋白结合，从而竞争性地抑制SARS-CoV-2的刺突蛋白与hACE2蛋白结合。
为进一步提高某些多肽的亲和性，在一些优选的实施例中，上述多肽中的任一条或多条肽段为修饰后的肽段。具体的修饰可以是化学基团修饰，也可以是氨基酸修饰。优选化学基团修饰为PEG修饰，优选地，PEG修饰为直链PEG修饰、具有单官能团的PEG修饰或者具有双官能团的PEG修饰((功能性官能团可以是-NHS、-OH、-Mal、-NH2或-COOH，单官能团选自其中任意一种，双官能团选自其中任意两种)；优选地，PEG修饰的位点选自多肽的N端、C端、Lys侧链和Cys侧链中的任意一个或多个；优选地，PEG修饰为分子量为500～40000的PEG修饰；优选地，氨基酸修饰为亲水性氨基酸修饰或半胱氨酸修饰。优选地，氨基酸修饰为亲水性氨基酸修饰或半胱氨酸修饰；优选地，亲水性氨基酸修饰为在N端、C端或者NC两端添加1-4个亲水性氨基酸；优选地，亲水性氨基酸为Glu、Lys、Ser或Gly；优选地，1-4个亲水性氨基酸选自如下任意一种：Glu-Glu、Lys-Lys或Ser-Gly-Ser。
上述PEG修饰或亲水性氨基酸修饰能够增加多肽的亲水性。PEG修饰具有半衰期延长、毒副作用减少以及物理、化学和生物稳定性增强等优势。
在某些实施例中，为了更好地实现对多肽的定向偶联，上述多肽中的任一条或多条肽段可以为半胱氨酸修饰的肽段。具体地，包括但不限于在肽段的N端、C端或者NC两端添加，或者在肽段的肽链中间添加半胱氨酸。当在肽段的肽链中间添加半胱氨酸时，一个或多个半胱氨酸可以插入肽链中间(即插入两个氨基酸残基之间)，也可以将一个或多个半胱氨酸以支链形式连接于肽链的中间(即作为肽链中间的某个氨基酸的侧链)。
在本申请第二种典型的实施方式中，提供了一种多肽产品，该多肽产品包括上述任一种多肽。上述多肽可以作为一种多肽药物产品，能够通过与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合，从而降低或抑制刺突蛋白与hACE2蛋白结合，从而减弱或阻断SARS-CoV-2对人体的感染。即这种多肽药物产品可以用来预防和/或治疗COVID-19。上述多肽也可以作为一种检测或诊断产品，通过与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合特异性结合，判断待测样本中是否含有SARS-CoV-2，即可以用来诊断待检样本是否为SARS-CoV-2阳性样本。
为了进一步提高其有效成分——多肽的稳定性，该多肽产品中还包括多肽稳定剂，任何能够维持多肽存储稳定性的试剂或成分均可作为本申请的多肽稳定剂。
在本申请一种优选的实施例中，上述多肽稳定剂包括150～180mM NaCl、100～140mM的聚赖氨酸盐酸盐及水。更优选地，多肽稳定剂包括153～158mM NaCl、110～130mM的聚赖氨酸盐酸盐及水；进一步优选地，多肽稳定剂包括154mM NaCl、126.4mM的聚赖氨酸盐酸盐及水。具体地，多肽稳定剂中，NaCl的浓度可以是150mM、151mM、152mM、153mM、154mM、155mM、156mM、157mM、158mM、159mM、160mM、161mM、162mM、163mM、164mM、165mM、166mM、167mM、168mM、169mM、170mM、171mM、172mM、173mM、174mM、175mM、176mM、177mM、178mM、179mM或180mM；聚赖氨酸盐酸盐的浓度可以是110mM、111mM、112mM、113mM、114mM、115mM、116mM、117mM、118mM、119mM、120mM、121mM、122mM、123mM、124mM、125mM、126mM、127mM、128mM、129mM、130mM、131mM、132mM、133mM、134mM、135mM、136mM、137mM、138mM、139mM或140mM。
在本申请一种优选的实施例中，上述多肽产品中多肽的浓度为3～10μM，优选为5～8μM，更优选为5μM。更具体地，可以是3μM、4μM、5μM、6μM、7μM、8μM、9μM或10μM。
在一些优选的实施例中，上述多肽产品为多肽药物，具体地可以是多肽、上述各种修饰的多肽或者其立体异构体、其衍生物或其可溶性盐。该多肽药物具体的制剂形式不限，本申请中包括但限于气雾剂、溶液剂、滴丸、悬混剂、乳剂、脂质体、透皮剂、片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、栓剂或冻干粉针剂。根据具体剂型的不同，上述多肽药物可以选择合适的给药方式，本申请中的给药方式选自如下任意一种：呼吸道给药、粘膜给药、腔道给药、注射给药或表面给药。优选地，呼吸道给药为经鼻腔给药；优选地，腔道给药选自经直肠、阴道或舌下给药；优选地，注射给药选自皮下注射、静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、脑池内注射或灌输。
上述多肽药物的具体给药剂量可以是预防有效量或治疗有效量的，具体在临床上，医生根据施用个体的年龄、体重、病情轻重等因素综合考虑确定。
在本申请第三种典型的实施例中，还提供了一种检测SARS-CoV-2的试剂盒，该试剂盒包括检测试剂或检测芯片，检测试剂包括上述任一种多肽，或者检测芯片上设置有上述任一种多肽。此处检测试剂或检测芯片中的多肽为上述能够特异性地与SARS-CoV-2的刺突蛋白的受体结合区域结合的多肽。更优选为SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：8所示的多肽。
在本申请第四种典型的实施方式中，还提供了上述任一种多肽在制备治疗COVID-19的药物中的应用。具体的药物剂型及给药方式如前述。
在本申请第五种典型的实施方式中，还提供了上述任一种多肽在制备检测SARS-CoV-2的试剂盒中的应用。
下面将结合具体的实施例来进一步说明本申请的有益效果。
实施例1多肽的筛选
在本实施例中，通过以刺突蛋白(S)的受体结合区域(RBD，即S蛋白的第319位氨基酸至第541位的氨基酸)作为目标靶点蛋白，进行具有抗新型冠状病毒的候选多肽药物的筛选。其具体筛选步骤如下：
1.对新型冠状病毒S-RBD蛋白(重组蛋白，具体序列为SEQ ID NO：9)进行荧光标 记。具体采用荧光标记试剂盒(Alexa
Figure BDA0002831337210000051
555Protein Labeling Kit(A20174))进行荧光标记，具体流程如下。
(1)S-RBD蛋白荧光标记实验操作流程：
a.配制1M的碳酸钠缓冲溶液：加入1ml的蒸馏水至组分B玻璃瓶中(84mg的碳酸钠)，混匀使其溶解。
b.稀释蛋白：若蛋白浓度大于2mg/mL，需将蛋白稀释至2mg/mL(例如：1mg蛋白溶于0.5mL 1X PBS或者0.1M碳酸钠缓冲溶液)。
c.调节pH：加入50μL 1M碳酸钠缓冲溶液(来自步骤a)至0.5mL含蛋白的1X PBS；最终pH值为7.5–8.3。若蛋白已置于碳酸钠缓冲溶液(pH 8.0–8.3)或者PBS(pH 8.0)则可略过这一步。
d.配置标记反应混合液：加入蛋白溶液(来自步骤c)至装有反应染料的一个玻璃瓶中(组份A)。盖上瓶盖，温和倒置或经枪头轻微吹打混合均匀。搅拌反应混合液，避免起泡。
e.孵育标记反应：于室温下低速磁力搅拌1小时。注意避免溶液起泡。
注意：因准备提纯柱需时～15分钟，可于第e步标记反应时开始填充提纯柱。
(2)纯化已标记S-RBD蛋白实验操作流程：
a.准备纯化柱/纯化树脂：组装纯化柱，加入纯化树脂(组份C)至顶端3cm处。加入1X PBS检查缓冲液是否能够流通。若缓冲液流动受阻，移除树脂，清洁玻璃滤头并重新装填树脂/缓冲液。加入标记蛋白前需待多余缓冲液排出。
b.配置1X洗脱缓冲剂：于室温用蒸馏水将10X洗脱缓冲液(组份D)稀释10倍。正常情况下，单次提纯用量不超过10mL。
c.蛋白质提纯：移开漏斗。倒入反应液至提纯柱树脂上；等待反应液融入树脂。用洗脱缓冲剂或1X PBS洗提蛋白质，收集并保留所有余液。
d.计算DOL(标记程度)并且储存标记蛋白。
2.对已做好荧光标记的新冠S-RBD蛋白做浓度梯度稀释，通过多肽芯片检测与S- RBD发生相互作用的特异性肽段，这些肽段的荧光信号随着稀释度的升高而降低。
多肽芯片检测方法如下：
1)样本制备
将已做好荧光标记的S-RBD蛋白的实验浓度设定为7个浓度梯度(1:500、1:1000、1:5000、1:10000、1:50000、1：500000及1：5000000系列稀释)的待测样本备用。
2)芯片的水化和组装
将芯片置于芯片水化用具中，加入超纯水没过芯片，在轨道摇床上55±5rpm/min，水化20min。然后用异丙醇喷洒芯片表面后将芯片放入离心机离心干燥。干燥好的芯片按照实验设计的位置组装成assay cassette。
3)样本与芯片孵育结合
将稀释好的样本按照90μL/孔加入组装好的芯片上，置于恒温振荡仪上振荡孵育1小时。
4)样本清洗
将assay cassette置于洗板机进行清洗。
5)成像
将assay cassette中的芯片进行拆卸、清洗、干燥后组装进imaging cassette，放入Molecular Device公司的ImageXpress micro 4成像仪进行扫描成像。最终每个检测样本得到一张TIFF图片文件，即为原始数据。
本实施例中，采用的多肽技术平台捕获靶点蛋白与多肽芯片集合的信号，再将信号转换获得数据。其中，多肽芯片技术所使用到的仪器设备包括多肽芯片(比如HealthTell V13芯片，型号为P/N:600001V13 Slides)，荧光成像仪(比如Melecular DeviceImage Xpress Micro-4),芯片离心机(比如Labnet C1303T-230V)，洗板机(比如BioTekInstruments，405TSUVS)，96孔板轨道式振荡器(比如Thermo scientific，88880026)，恒温混匀器(比如Eppendorf Thermomixer C)。
4.数据预处理
1)提取特征的荧光强度数值，输出1个GPR5数据文件和1个corner images文件。其中，GPR5文件包含了一个样本的所有信息和所有特征的荧光强度信息。
2)从所有样本的GPR5数据文件中提取特征的荧光强度信息，生成原始荧光强度(FG，foreground)数据矩阵。然后对每个样本的数据分别进行对数转换得到LFG(log-transferred foreground)数据矩阵、进行z-score的标准化处理获得NLFG(normalizedand log-transferred foreground)数据矩阵。该步骤还会生成一个样本芯片信息文件，该文件包括了样本阵列位置、所用芯片编号等信息。
5.质控
通过Health Tell自带的质控方法对样本和系统进行质控，结果显示是合格的。
6.筛选能与S-RBD蛋白特异性结合的多肽序列：取排除背景信号后，在不存在过饱和现象下的信号强度排序在不同浓度下均靠前的信号肽段。
6.1)将各信号强度转化成log10值，然后对于每个浓度的S-RBD蛋白样本(每个样本三次技术重复)，逐个特征计算三次技术重复的log10值的中位数；
6.2)对于每个浓度的中位数样本，将数值转换为rank(descending，对于数值相同的特征，使用method＝min(lowest rank in group))排序；
6.3)对于一个肽段而言，如果某肽段在70％以上的浓度中的rank排序均在前100以内，将该肽段纳入候选；
6.4)从所有候选肽段中，去除无关样本(即在空白对照、阳性标准品中rank排序前5000的肽段)；
6.5)根据rank均值，对肽段进行排序，挑选出排名靠前的肽段。
7.上述筛选到的候选多肽序列为：
SEQ ID NO：1：YAYEYVFFSE；
SEQ ID NO：2：PFFFFEG；
SEQ ID NO：3：QVVEVFWLFD；
SEQ ID NO：4：NYVFFFEG；
SEQ ID NO：5：RLEFLFLFE；
SEQ ID NO：6：QYLFFLEG；
SEQ ID NO：7：PVFLVFPQRG；
SEQ ID NO：8：QSLFLEVFS。
实施例2多肽验证
利用blast软件，将上述所有候选肽段与目标蛋白(S蛋白)进行比对，挑选bitscore>14作为能够比对上的阈值，表明该肽段与目标蛋白序列之间一定的具有相似性。根据该结果，对以上肽段做进一步注释。根据具体需求，调整结果(比如，希望加入一两个“能够比对到目标蛋白的序列”，则可以从比对结果中挑选，即使其排名并非最高的)。
基于S蛋白序列比对分析，计算候选多肽与S蛋白序列的相似度，并基于此，可以将候选多肽序列归为不同类型：
a)与S蛋白序列相似相匹配的肽段(2条)，即对应多肽为S蛋白潜在的线性表位，或可以解释与S蛋白结合的科学性；
b)与S蛋白序列不匹配，但具有高信号强度的肽段(其余6条)，可能是蛋白的非线性结合表位，或可能来源于未知的结合表位。
实施例3
上述多肽序列在S-RBD蛋白已知结合位点的验证结果，以及对潜在结合位点的挖掘
与S-RBD蛋白结合且信号强度排序靠前的肽段中，如果这些肽段与S-RBD蛋白的结合力弱或非S-RBD蛋白特异性结合肽段，则在S-RBD蛋白的浓度降低后，这些肽段的信号强度会随着浓度而变弱，使得排序相对于其他肽段靠后。反之，如果肽段信号强度不随着S-RBD蛋白的浓度降低而变弱，在肽段排序中体现为保持靠前，则可验证肽段与S-RBD蛋白特异性结合，且结合力强。
新冠病毒的S-RBD蛋白通过与宿主细胞上的血管紧张素转化酶2(ACE2)结合，介导新冠病毒进入细胞进行感染。当多肽与S-RBD蛋白结合后，使S-RBD蛋白无法与ACE2受体结合或结合力变弱，从而阻断或降低病毒对宿主细胞的感染，具有竞争抑制病毒感染的作用。
具体设计验证试验如下：对S-RBD蛋白浓度设计7个稀释浓度(稀释倍数分别为：500、1000、5000、10000、50000、500000、5000000)，另外设计空白对照组与阳性标准品对照组。试验结果如表1，上述候选多肽随着浓度稀释度的增加，在全部肽段信号排名中仍保持前列，而不随着浓度梯度的增加而降低。同一肽段信号在空白对照和标准品对照中，与S-RBD结合信号相比，信号的排名具有显著差异，表明这些多肽与S-RBD蛋白特异性的强结合力。
其中，多肽PVFLVFPQRG和QSLFLEVFS与S-RBD的结合位置如表1及图1和图2所示，图1和图2中分别标注了多肽与S蛋白的结合位点(图示的两条多肽与S蛋白结合的方向不同，因而看上去结构有所不同，图1中GLN6表示位于箭头所示的位置6的氨基酸为谷氨酰胺；图2中PRO60表示位于箭头所指位置60的氨基酸为脯氨酸)。
表1候选多肽在S-RBD蛋白已知结合位点与潜在结合位点在不同浓度稀释度下的结合强度排序
Figure BDA0002831337210000091
从上表中的结合力强度排序可以看出，相比对照，上述8条多肽序列与S蛋白的结合力均较强。
在一种其他具体的实施例中，将本发明的肽段配置成水溶液作为实验组，设置阳性对照和阴性对照，分别与SARS-CoV-2伪病毒在环境温度下分别混合孵化，孵化后接种到预先制备好的细胞中孵化，即进行伪病毒中和实验。中和实验表明，本发明申请的多肽均能在一定程度上阻断伪病毒对宿主细胞的感染。根据阻断的结果可以进一步评价各肽段抗SARS-CoV-2感染的能力。
从上述实施例的描述可以看出，本申请中所筛选的多肽，均能够竞争性地降低或抑制S蛋白与ACE2蛋白的结合，从而减弱或抑制新冠病毒对人体的感染作用。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 珠海碳云智能科技有限公司
<120> 多肽、包含其的多肽产品、试剂盒及应用
<130> PN145295SZTY
<160> 9
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(10)
<223> 与S-RBD特异结合的候选多肽
<400> 1
Tyr Ala Tyr Glu Tyr Val Phe Phe Ser Glu
1 5 10
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(7)
<223> 与S-RBD特异结合的候选多肽
<400> 2
Pro Phe Phe Phe Phe Glu Gly
1 5
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(10)
<223> 与S-RBD特异结合的候选多肽
<400> 3
Gln Val Val Glu Val Phe Trp Leu Phe Asp
1 5 10
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(8)
<223> 与S-RBD特异结合的候选多肽
<400> 4
Asn Tyr Val Phe Phe Phe Glu Gly
1 5
<210> 5
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(9)
<223> 与S-RBD特异结合的候选多肽
<400> 5
Arg Leu Glu Phe Leu Phe Leu Phe Glu
1 5
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(8)
<223> 与S-RBD特异结合的候选多肽
<400> 6
Gln Tyr Leu Phe Phe Leu Glu Gly
1 5
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Pro Val Phe Leu Val Phe Pro Gln Arg Gly
1 5 10
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(9)
<223> 与S-RBD特异结合的候选多肽
<400> 8
Gln Ser Leu Phe Leu Glu Val Phe Ser
1 5
<210> 9
<211> 201
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(201)
<223> S-RBD
<400> 9
Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr
1 5 10 15
Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys
20 25 30
Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe
35 40 45
Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr
50 55 60
Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln
65 70 75 80
Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu
85 90 95
Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu
100 105 110
Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg
115 120 125
Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr
130 135 140
Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr
165 170 175
Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro
180 185 190
Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser
195 200

Claims (10)

1.一种多肽，其特征在于，所述多肽能够特异性地与SARS-CoV-2的刺突蛋白结合，从而竞争性抑制所述刺突蛋白与hACE2结合。
2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽能够特异性地与SARS-CoV-2的刺突蛋白的受体结合区域结合。
3.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽选自SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：8中的任意一条或多条；
优选地，所述多肽为修饰后的肽段；
优选地，所述修饰为化学基团修饰或氨基酸修饰；
优选地，所述化学基团修饰为PEG修饰；
优选地，所述PEG修饰为直链PEG修饰、具有单官能团的PEG修饰或者具有双官能团的PEG修饰；
优选地，所述PEG修饰的位点选自所述多肽的N端、C端、Lys侧链和Cys侧链中的任意一个或多个；
优选地，所述PEG修饰为分子量为500～40000的PEG修饰；
优选地，所述氨基酸修饰为亲水性氨基酸修饰或半胱氨酸修饰；
优选地，所述亲水性氨基酸修饰为在所述多肽的N端、C端或者NC两端添加1-4个亲水性氨基酸，更优选地，所述亲水性氨基酸为Glu、Lys、Ser或Gly；进一步优选地，所述1-4个亲水性氨基酸选自如下任意一种：Glu-Glu、Lys-Lys或Ser-Gly-Ser；
优选地，所述半胱氨酸修饰为在所述多肽的如下任一位置添加半胱氨酸：N端、C端、NC两端或肽链中间；
更优选地，在所述肽链中间添加半胱氨酸包括在所述肽链中间插入一个或多个半胱氨酸，或者一个或多个半胱氨酸以支链形式连接于所述肽链的中间。
4.一种多肽产品，其特征在于，所述多肽产品包括权利要求1至3中任一项所述的多肽。
5.根据权利要求4所述的多肽产品，其特征在于，所述多肽产品还包括多肽稳定剂；
优选地，所述多肽稳定剂包括150～180mM NaCl、100～140mM的聚赖氨酸盐酸盐及水。
6.根据权利要求5所述的多肽产品，其特征在于，所述多肽产品为多肽药物或多肽试剂；
优选地，所述多肽药物的剂型为如下任意一种：气雾剂、溶液剂、滴丸、悬混剂、乳剂、脂质体、透皮剂、片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、栓剂或冻干粉针剂；
优选地，所述多肽药物的给药方式选自任意一种：呼吸道给药、粘膜给药、腔道给药、注射给药或表面给药；
优选地，所述呼吸道给药为经鼻腔给药；
优选地，所述腔道给药选自经直肠、阴道或舌下给药；
优选地，所述注射给药选自皮下注射、静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、脑池内注射或灌输。
7.根据权利要求6所述的多肽产品，其特征在于，所述多肽产品中所述多肽的浓度为3～10μM，优选为5～8μM。
8.一种检测SARS-CoV-2的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测试剂或检测芯片，所述检测试剂包括权利要求1至3中任一项所述的多肽，或者所述检测芯片上设置有权利要求1至3中任一项所述的多肽。
9.权利要求1至3中任一项所述的多肽在制备预防和/或治疗COVID-19的药物中的应用。
10.权利要求1至3中任一项所述的多肽在制备检测SARS-CoV-2的试剂盒中的应用。
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