CN112611857A - 一种实验动物癫痫指标的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种实验动物癫痫指标的检测方法，属于生物技术领域。本发明通过对比实验癫痫动物脑内GABA的含量下降比例和血液中抗氧化酶的活性下降比例及丙二醛的含量上升比例相同，可以用血液中抗氧化酶酶活和丙二醛含量作为实验动物癫痫指标。血液中抗氧化酶包括超氧化物歧化酶、过氧化物酶、谷胱甘肽过氧化物酶。
Description
技术领域
本发明涉及一种实验动物癫痫指标的检测方法，属于生物技术领域。
背景技术
癫痫是以神经元过度放电导致重复性、发作性、刻板性和短暂性的中枢神经功能失常为特征的慢性脑部疾病，据中国最新流行病学资料显示，国内癫痫的总体患病率为7.0‰，年发病率为28.8/10万，中国约有900万左右的癫痫患者，同时每年新增加癫痫患者约40万，在中国癫痫已经成为神经科仅次于头痛的第二大常见病。
癫痫的发病是由中枢神经系统兴奋与抑制之间不平衡导致的，其主要与离子通道、神经递质及神经胶质细胞的改变有关。基因突变会导致离子通道功能异常，即有缺陷的基因编码有缺陷的离子通道蛋白而发病，其中钠离子、钾离子、钙离子通道与癫痫相关性的研究较为明确；当兴奋性神经递质过多或抑制性递质过少，都能使兴奋与抑制间失衡，使神经元过度放电，引起癫痫；当星形胶质细胞对谷氨酸或γ氨基丁酸的摄取能力发生改变时可导致癫痫发作。中枢神经系统中重要的抑制性神经性神经递质有γ-氨基丁酸（GABA）和甘氨酸，兴奋性神经递质包括谷氨酸（Glu）和天冬氨酸。
Tower（Mckhann G M, Tower D B. gamma-Aminobutyric acid: a substratefor oxidative metabolism of cerebral cortex[J]. The American journal ofphysiology, 1959, 196(1): 36-38.）首次提出癫痫发生与脑内GABA有关，实验显示，实验性惊厥动物—猫的脑组织中GABA含量明显减少。
癫痫实验动物目前检测方法有检测实验动物脑内的GABA含量和脑电图检测。曾春梅（曾春梅,雷丹青,孙兰凤,韦雷,何敏,吴原.致痫大鼠海马谷氨酸及γ-氨基丁酸在痫性发作后含量变化规律[J].南京医科大学学报(自然科学版), 2019, 39(11): 1571-1574+1588.）研究发现当GABA含量减少或缺失，癫痫发作增加或持续；当GABA含量增加，则可以终止癫痫发作，此方法操作难度大，且实验动物只能用一次。肖文卿（肖文卿. 基于小波变换的小鼠癫痫模型脑电信号自动分类[D]. 南方医科大学, 2019.）利用脑电信号对小鼠癫痫模型进行分类，脑电图检测方法仪器价格昂贵，无法得到广泛应用。
吕珊珊（吕珊珊. 礞石滚痰汤对戊四氮致痫小鼠的影响[D]. 南京中医药大学,2017.）研究发现当GABA降低到一定程度时可诱发癫痫，正常实验小鼠脑内GABA含量为7.04-7.12μg/mg，癫痫实验小鼠脑内GABA含量为4.97-6.35μg/mg，癫痫实验动物脑内GABA含量比正常实验动物脑内GABA含量下降9.80%-30.19%。
2009年，Freitas等（Freitas R M D, Nascimento K G D, Ferreira P M P, etal. Neurochemical changes on oxidative stress in rat hippocampus duringacutephase ofpilocarpine-induced seizures[J]. Pharmacology Biochemistry andBehavior, 2010, 94: 341-345.）通过大鼠实验证实，氧化应激在癫痫发病中起重要作用，且癫痫的持续时间与氧化损伤呈正相关。实验动物体内利用抗氧化酶减轻氧化应激带来的伤害，抗氧化酶包括：过氧化氢酶（CAT）、过氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）。实验动物发生氧化应激时会产生过氧化损伤标记物，最常用的脂质过氧化损伤标记物为丙二醛（MDA）。可以将实验动物外周血中的抗氧化酶酶活和丙二醛的含量作为实验动物癫痫的检测指标。
以实验动物脑内GABA含量作为检测指标取脑操作难度大，且实验动物只可利用一次，因此可以以实验动物外周血中的抗氧化酶酶活和丙二醛的含量作为实验动物癫痫的检测指标，大批量检测。
发明内容
本发明的目的是为了克服实验动物癫痫检测时取脑操作难度大、实验动物只能用一次的不足，提供了一套既可以快速检测实验动物癫痫，又可以多次检测的方法，并且该方法与实验动物脑内GABA含量变化高度吻合，相对标准偏差不高于3%。
本发明是一种实验动物癫痫指标的检测方法，步骤如下：
①检测正常实验动物血液中抗氧化酶酶活和丙二醛的含量
取正常实验动物的新鲜血液，加入抗凝剂，检测过氧化氢酶、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶酶活和丙二醛的含量。
所述抗凝剂为肝素抗凝剂，目的是阻止血液凝固；
所述正常实验动物血液中过氧化氢酶酶活85.18-92.76U/g，SOD酶活3.50-4.34U/mL，谷胱甘肽过氧化物酶酶活85.36-91.46μmol/L，丙二醛含量13.44-15.46 nmol/mL。
②检测癫痫实验动物血液中抗氧化酶酶活和丙二醛的含量
取癫痫实验动物的新鲜血液，加入抗凝剂，检测过氧化氢酶、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶酶活和丙二醛的含量。
所述抗凝剂为肝素抗凝剂，目的是阻止血液凝固；
所述癫痫实验动物血液中过氧化氢酶酶活65.07-76.65U/g，SOD酶活3.02-3.28U/mL，谷胱甘肽过氧化物酶酶活62.29-76.81μmol/L，丙二醛含量16.68-17.43 nmol/mL；
所述癫痫实验动物血液中过氧化氢酶酶活比正常实验动物降低10.01%-29.85%；
所述癫痫实验动物血液中SOD酶活比正常实验动物降低6.28%-30.41%；
所述癫痫实验动物血液中谷胱甘肽过氧化物酶酶活比正常实验动物降低10.02%-31.89%；
所述癫痫实验动物血液中丙二醛含量比正常实验动物升高7.89%-29.70%。
采用本方法测定癫痫实验动物癫痫指标，癫痫实验动物血液中抗氧化酶酶活下降比例和丙二醛含量上升比例相同，与癫痫实验动物脑内GABA含量下降比例高度吻合。
实施例1：
①检测正常实验动物血液中抗氧化酶酶活和丙二醛的含量
取正常实验动物的新鲜血液，加入抗凝剂，检测过氧化氢酶、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶酶活和丙二醛的含量。
所述抗凝剂为肝素抗凝剂，目的是阻止血液凝固；
所述正常实验动物血液中过氧化氢酶酶活87.18U/g，SOD酶活3.98 U/mL，谷胱甘肽过氧化物酶酶活85.36μmol/L，丙二醛含量13.54 nmol/mL。
②检测癫痫实验动物血液中抗氧化酶酶活和丙二醛的含量
取实验动物的新鲜血液，加入抗凝剂，检测过氧化氢酶、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶酶活和丙二醛的含量。
所述抗凝剂为肝素抗凝剂，目的是阻止血液凝固；
所述癫痫实验动物血液中过氧化氢酶酶活66.22U/g，SOD酶活3.02 U/mL，谷胱甘肽过氧化物酶酶活64.97μmol/L，丙二醛含量16.78 nmol/mL；
所述癫痫实验动物血液中过氧化氢酶酶活比正常实验动物降低24.04%；
所述癫痫实验动物血液中SOD酶活比正常实验动物降低24.12%；
所述癫痫实验动物血液中谷胱甘肽过氧化物酶酶活比正常实验动物降低23.88%；
所述癫痫实验动物血液中丙二醛含量比正常实验动物升高23.95%。
采用本方法测定癫痫实验动物癫痫指标，血液中抗氧化酶酶活下降24.01%、丙二醛含量上升23.95%，癫痫实验动物脑内GABA下降比例高度吻合。
实施例2：
①检测正常实验动物血液中抗氧化酶酶活和丙二醛的含量
取正常实验动物的新鲜血液，加入抗凝剂，检测过氧化氢酶、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶酶活和丙二醛的含量。
所述抗凝剂为肝素抗凝剂，目的是阻止血液凝固；
所述正常实验动物血液中过氧化氢酶酶活92.76U/g，SOD酶活4.34 U/mL，谷胱甘肽过氧化物酶酶活91.46μmol/L，丙二醛含量13.44nmol/mL。
②检测实验动物血液中抗氧化酶酶活和丙二醛的含量
取实验动物的新鲜血液，加入抗凝剂，检测过氧化氢酶、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶酶活和丙二醛的含量。
所述抗凝剂为肝素抗凝剂，目的是阻止血液凝固；
所述癫痫实验动物血液中过氧化氢酶酶活65.07U/g，SOD酶活3.02 U/mL，谷胱甘肽过氧化物酶酶活62.29μmol/L，丙二醛含量17.43 nmol/mL；
所述癫痫实验动物血液中过氧化氢酶酶活比正常实验动物降低29.85%；
所述癫痫实验动物血液中SOD酶活比正常实验动物降低30.41%；
所述癫痫实验动物血液中谷胱甘肽过氧化物酶酶活比正常实验动物降低31.89%；
所述癫痫实验动物血液中丙二醛含量比正常实验动物升高29.70%。
采用本方法测定癫痫实验动物癫痫指标，血液中抗氧化酶酶活下降30.71%、丙二醛含量上升29.70%，癫痫实验动物脑内GABA下降比例高度吻合。
实施例3：
①检测正常实验动物血液中抗氧化酶酶活和丙二醛的含量
取正常实验动物的新鲜血液，加入抗凝剂，检测过氧化氢酶、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶酶活和丙二醛的含量。
所述抗凝剂为肝素抗凝剂，目的是阻止血液凝固；
所述正常实验动物血液中过氧化氢酶酶活85.18U/g，SOD酶活3.50U/mL，谷胱甘肽过氧化物酶酶活85.36μmol/L，丙二醛含量15.46nmol/mL。
②检测实验动物血液中抗氧化酶酶活和丙二醛的含量
取实验动物的新鲜血液，加入抗凝剂，检测过氧化氢酶、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶酶活和丙二醛的含量。
所述抗凝剂为肝素抗凝剂，目的是阻止血液凝固；
所述癫痫实验动物血液中过氧化氢酶酶活76.65U/g，SOD酶活3.28U/mL，谷胱甘肽过氧化物酶酶活76.81μmol/L，丙二醛含量16.68nmol/mL；
所述癫痫实验动物血液中过氧化氢酶酶活比正常实验动物降低10.01%；
所述癫痫实验动物血液中SOD酶活比正常实验动物降低6.28%；
所述癫痫实验动物血液中谷胱甘肽过氧化物酶酶活比正常实验动物降低10.02%；
所述癫痫实验动物血液中丙二醛含量比正常实验动物升高7.89%。
采用本方法测定癫痫实验动物癫痫指标，血液中抗氧化酶酶活下降8.77%，丙二醛含量上升7.89%，癫痫实验动物脑内GABA下降比例高度吻合。
Claims (8)
1.一种实验动物癫痫指标的检测方法，步骤如下：
①检测正常实验动物血液中抗氧化酶酶活和丙二醛的含量
取正常实验动物的新鲜血液，加入抗凝剂，检测过氧化氢酶、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶酶活和丙二醛的含量；
②检测癫痫实验动物血液中抗氧化酶酶活和丙二醛的含量
取癫痫实验动物的新鲜血液，加入抗凝剂，检测过氧化氢酶、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶酶活和丙二醛的含量。
2.如权利要求1所述的一种实验动物癫痫指标的检测方法，所述抗凝剂为肝素抗凝剂，目的是阻止血液凝固。
3.如权利要求1所述的一种实验动物癫痫指标的检测方法，所述正常实验动物血液中过氧化氢酶酶活85.18-92.76U/g，SOD酶活3.50-4.34 U/mL，谷胱甘肽过氧化物酶酶活85.36-91.46μmol/L，丙二醛含量13.44-15.46 nmol/mL。
4.如权利要求1所述的一种实验动物癫痫指标的检测方法，所述癫痫实验动物血液中过氧化氢酶酶活65.07-76.65U/g，SOD酶活3.02-3.28 U/mL，谷胱甘肽过氧化物酶酶活62.29-76.81μmol/L，丙二醛含量16.68-17.43 nmol/mL。
5.如权利要求1所述的一种实验动物癫痫指标的检测方法，所述癫痫实验动物血液中过氧化氢酶酶活比正常实验动物降低10.01%-29.85%。
6.如权利要求1所述的一种实验动物癫痫指标的检测方法，所述癫痫实验动物血液中SOD酶活比正常实验动物降低6.28%-30.41%。
7.如权利要求1所述的一种实验动物癫痫指标的检测方法，所述癫痫实验动物血液中谷胱甘肽过氧化物酶酶活比正常实验动物降低10.02%-31.89%。
8.如权利要求1所述的一种实验动物癫痫指标的检测方法，所述癫痫实验动物血液中丙二醛含量比正常实验动物升高7.89%-29.70%。
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| CN107982280A (zh) * | 2017-11-16 | 2018-05-04 | 吴文国 | 延缓衰老的营养组合物及应用 |
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