CN112603890A - 一种乐伐替尼脂质体及其药物组合物和其制备方法及处方工艺优化方法 - Google Patents

一种乐伐替尼脂质体及其药物组合物和其制备方法及处方工艺优化方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种乐伐替尼脂质体(Lenvatinib，Len)及其药物组合物和其制备方法及处方工艺优化方法，所述脂质体含有乐伐替尼、磷脂、两亲性衍生物、胆固醇和梯度建立物质，所述胆固醇与所述磷脂的重量比为1:2～1:10，所述乐伐替尼与所述磷脂的重量比为1:10～1:40，所述两亲性衍生物与所述磷脂的重量比为1:2～1:10，所述磷脂为甘油磷脂或鞘磷脂，所述梯度采用pH梯度法或胺梯度法，所述梯度建立物质溶液的浓度为100～300mM。Len脂质体可以通过“SA‑Siglec1”途径主动靶向肿瘤部位，Len脂质体具有高包封率、高稳定性、高主动靶向性、高肿瘤抑制率等优点，具备较好的临床应用潜力和产品开发价值。

Description

一种乐伐替尼脂质体及其药物组合物和其制备方法及处方工 艺优化方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种乐伐替尼脂质体及其药物组合物和其制备方法及处方工艺优化方法。
背景技术
全球范围内，肝癌的死亡率在所有恶性肿瘤中排在第二位，而晚期肝癌的愈后效果尤其不好。因此，开发一种肝癌靶向药物，尤其是针对晚期肝癌的靶向药物具有重大社会和经济效益。
Figure BDA0002845370720000011
乐伐替尼(Lenvatinib，Len)，其结构为式(II)，是一种多靶点酪氨酸激酶抑制剂，可作用于血管内皮生长因子受体1～3型(VEGFR 1～3)、成纤维细胞生长因子受体1～4型(FGFR 1～4)、RET、KIT以及血小板衍生生长因子受体α(PDGFR-α) 等产生新生血管抑制和抗肿瘤作用。2015年2月，由日本卫材公司研发甲磺酸乐伐替尼胶囊——乐卫玛(LenvimaTM)成功获得FDA批准用于晚期放射性-碘难治性分化型甲状腺癌的治疗，随后又相继批准用于肾癌联合用药治疗和肝癌的临床一线用药。乐伐替尼是肝癌新药中最耀眼的明星，其临床客观缓解率是索拉非尼的327％(40.6％V S 12.4％)，无进展生存期是索拉非尼的203％(7.3个月vs 3.6个月)；相较于索拉菲尼，针对中国肝癌患者的总生存期提高了5个月(15个月vs 10.2个月，P＝0.02620)。因此，乐伐替尼显著优于上一代肝癌靶向药物索拉菲尼。
尽管乐伐替尼的临床效果优异，但其仍存在一些不良反应。乐伐替尼胶囊(LenvimaTM)需要通过口服给药，易出现消化道不良反应，例如：口腔炎、腹泻、呕吐等，严重者导致消化道出血，甚至胃肠道穿孔和瘘道形成。有研究报道，部分患者使用乐伐替尼出现了高血压和动脉血栓栓塞等不良反应，只能选择降低给药频率或更换其他药物。因此，亟需开发一种生物相容性好、肿瘤靶向性高的新型乐伐替尼药物制剂。
脂质体(liposome)是由磷脂和(或)胆固醇为基本膜材构建而成具有类似生物膜双分子层结构的封闭囊泡。脂质体已在药物递送系统中得到了广泛的应用，其具有良好的生物相容性、生物可降解性、无毒无免疫原性等优势，尤其是脂质体可以利用单核吞噬细胞系统(Mononuclear phagocyte system，MPS)被动靶向肝脏，同时利用“唾液酸-Siglec1”受体-配体介导的途径主动靶向肝脏。
发明内容
本发明的目的在于基于现有技术的基础及现状，提供一种乐伐替尼脂质体及其药物组合物和其制备方法及处方工艺优化方法，利用乐伐替尼脂质体，主动靶向免疫细胞，对疾病进行免疫治疗，同时解决现有乐伐替尼生物利用度低的问题。
本发明是通过如下技术方案实现的：
本发明提供一种乐伐替尼脂质体，所述脂质体含有乐伐替尼、磷脂、两亲性衍生物、胆固醇和梯度建立物质，所述胆固醇与所述磷脂的重量比为1:2～1:10，所述乐伐替尼与所述磷脂的重量比为1:10～1:40，所述两亲性衍生物与所述磷脂的重量比为 1:2～1:10，所述磷脂为甘油磷脂或鞘磷脂，所述两亲性衍生物选自聚甘油与脂肪酸连接形成的两亲性脂质衍生物、唾液酸与聚甘油脂肪酸酯连接形成的两亲性脂质衍生物、聚乙二醇与磷脂连接形成的两亲性脂质衍生物、聚乙二醇与胆固醇连接形成的两亲性脂质衍生物、聚乙烯吡咯烷酮与脂质相连形成的两亲性脂质衍生物中的一种或多种，所述梯度建立物质选自枸橼酸-枸橼酸钠溶液、酒石酸-酒石酸钠溶液、苹果酸-苹果酸钠溶液、磷酸二氢钠溶液、硫酸铵溶液、乙二胺四乙酸铵溶液中的一种或多种，所述梯度建立物质溶液的浓度为100～300mM，也即所述梯度建立物质溶液在所述脂质体中的含量为10％～30％。脂质体中加入磷酸钠、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠中的一种或多种作为pH调节剂，并通过如下方法制备：
(a)制备空白脂质体：
在50～70℃下以乙醇、乙醇-水混合溶剂作为溶媒溶解磷脂、胆固醇和可以选择性加入的两亲性衍生物的混合物，得到脂质混合物，磷脂重量与溶媒的体积之比约为 1:1～1:6(g/mL)；在此步骤中，脂质混合物还可以采用如下方法制备：在50～70℃下使用叔丁醇或叔丁醇-水混合溶剂作为溶媒溶解磷脂、胆固醇和可以选择性加入的两亲性衍生物的混合物，将此混合物进行冻干得到脂质混合物；配制浓度为0.1～0.4mol/L 的梯度建立物质溶液，其中可以选择性的加入多阴离子大分子，在50～70℃下将该溶液与脂质混合物混合并搅拌，得到脂质体初品；将所得的脂质体初品通过微射流、挤出、高压均质或超声减小粒径，得到空白脂质体；
(b)：通过离子交换、透析、凝胶色谱分离、加入调节试剂等方法，建立脂质体跨膜离子梯度，跨膜离子浓度比值为102～104，获得梯度脂质体；
(c)：将(b)所得的梯度脂质体混悬液与乐伐替尼溶液混合，于50～70℃下孵育 3-30min，得到乐伐替尼脂质体。
在一些实施例中，所述磷脂选自天然磷脂、半合成磷脂以及人工合成磷脂中的一种或多种。
进一步地，所述磷脂选自大豆磷脂、氢化大豆磷脂、蛋黄磷脂、氢化蛋黄磷脂、二山嵛酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二反式油酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰 -2-油酰磷脂酰胆碱、单棕榈酰磷脂酰胆碱、单硬酯酰胆碱、蛋黄脂酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、蛋黄磷脂酰甘油、大豆磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二油酰磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、蛋黄鞘磷脂、二硬脂酰鞘磷脂、二棕榈酰鞘磷脂、大豆磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二油酰磷脂酰肌醇、大豆磷脂酸、蛋黄磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸中的一种或多种。
在一些实施例中，所述脂质体中进一步含有多阴离子大分子，多阴离子大分子选自海藻酸、聚唾液酸、右旋糖酐硫酸酯、硫酸葡聚糖、聚谷氨酸、植酸、乳糖酸、果糖酸、透明质酸或它们的盐及复合物中的一种或多种。
优选地，采用唾液酸-十聚甘油-硬脂酸酯(SA-PG10-C18)作为主动靶向材料，选择经典的脂质体处方，所述的乐伐替尼脂质体组成质量比为氢化大豆磷脂(HSPC)/胆固醇(CH)/唾液酸-十聚甘油-硬脂酸酯(SA-PG10-C18)/乐伐替尼(Len)＝100mg/33mg/33 mg/5mg，制备10mL脂质体。
本发明还提供一种药物组合物，所述药物组合物包含所述的乐伐替尼脂质体以及至少一种药学上可接受的附加剂，所述附加剂选自无机盐类、蛋白类、糖类和核酸类中的一种或多种。
在一些实施例中，所述无机盐类包括：磷酸钠、氢氧化钠、碳酸钠、草酸钠、醋酸钠、磷酸钾、氢氧化钾、碳酸钾、草酸钾、醋酸钾中的一种或多种；所述蛋白类包括：PD-1/PD-L1单抗、HER2单抗、CD20单抗、VEGF/VEGFR单抗、EGFR单抗、 CTLA-4单抗、CD38单抗、CD30单抗、CD52单抗、CD319单抗、CD3/CD19单抗、 CD2单抗、CD22单抗、CCR4单抗、CD33单抗、CD3/EPCAM单抗、胰岛素、免疫球蛋白、血浆白蛋白中的一种或多种；所述糖类包括：核糖、脱氧核糖、葡萄糖、甘露糖、果糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、淀粉、纤维素中的一种或多种；所述核酸类包括：质粒核酸、反义核苷酸、核酶、小干扰核糖核酸、微小核糖核酸中的一种或多种。
本发明还提供一种所述乐伐替尼脂质体的处方工艺优化方法，所述处方工艺优化方法包括：采用Len包封率、脂质体粒径、脂质体放置稳定性为指标，改变Len脂质体的磷脂种类、各组分比例、制备方法、多阴离子种类、多阴离子比例、两亲性衍生物种类、两亲性衍生物比例中的一种或多种。
综上所述，乐伐替尼作为一种新型一线口服肝癌治疗药物，其仍然存在一些消化道不良反应。因此，我们开发了一种生物相容性好、肿瘤主动靶向能力的新型乐伐替尼药物制剂。首先，以唾液酸-十聚甘油-硬脂酸酯、磷脂和胆固醇作为基本膜材，采用主动载药技术(如图1所示)成功制备并优化了Len脂质体，并对Len脂质体理化性质进行表征；然后，采用流式细胞仪分析巨噬细胞对Len脂质体的体外细胞摄取情况；最后，构建H22肿瘤荷瘤小鼠模型，对Len脂质体的组织分布和抑瘤效果进行研究。结果显示，主动载药技术制备的Len脂质体包封率为94.7±1.6％，平均粒径为111.5± 3.4nm，Zeta电位为-22.7±3.5mV，粒径均一稳定；通过体外细胞摄取实验和体内抗肿瘤研究，证明Len脂质体可以通过“SA-Siglec1”配体-受体途径高效主动靶向肿瘤部位，Len脂质体在H22肿瘤部位浓度是Len注射液的367％，Len脂质体肿瘤抑制率是Len注射液的188％。因此，主动载药法制备的Len脂质体具有高包封率、高稳定性、高主动靶向性、高肿瘤抑制率等优点，具备较好的临床应用潜力和产品开发价值。
附图说明
图1为Len脂质体pH梯度法主动载药机制。
图2为唾液酸-十聚甘油-硬脂酸酯(SA-PG10-C18)的1H-NMR表征。
图3为(A)Len和(B)空白脂质体的200～800nm紫外可见全波长扫描。
图4为Len的标准曲线。
图5为不同浓度水化介质制备Len脂质体的包封率(n＝3)。
图6为不同跨膜pH梯度制备Len脂质体的包封率(n＝3)。
图7为不同载药温度制备Len脂质体的包封率(n＝3)。
图8为不同药脂比制备Len脂质体的包封率(n＝3)。
图9为Len脂质体(I主动载药pH梯度法，II被动载药改良乙醇注入法)。
图10为Len脂质体的(A和C)粒径和(B和D)Zeta电位(A和B：主动载药； C和D：被动载药)。
图11为Len脂质体透射电子显微镜成像(A：主动载药；B：被动载药)。
图12为Len脂质体的体外释放(Len-S：Len溶液，Len-P-SL：被动载药Len脂质体，Len-R-SL：主动载药Len脂质体)。
图13为单核巨噬细胞对Len脂质体体外细胞摄取。
图14为Len脂质体H22荷瘤小鼠体内组织分布。
图15为通过Len-R-SL治疗的H22荷瘤小鼠肿瘤生长曲线。
具体实施方式
下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通与/或改变都将落入本发明保护范围。
材料来源：
本发明中，所用甲磺酸乐伐替尼(Lenvatinib mesylate，Len)购买自济南凯恩医药科技有限公司，HPLC纯度≥99％，批号：190401；氢化大豆磷脂(Hydrogenated soybeanphospholipids，HSPC)，购买自德国Lipoid GmbH公司，批号： 525600-2180653-01/026--031(6)；胆固醇(Cholesterol，CH)，购买自上海艾韦特医药科技有限公司，批号：B40333；葡聚糖凝胶G50(Sephadex G50)，购买自北京索莱宝科技有限公司，批号：S8151；氯型717型阴离子交换树脂，购买自国药集团化学试剂有限公司，批号：20180309；柠檬酸(C6H8O7·H2O)，购买自西陇化工股份有限公司，批号：1029054-01-09；磷酸钠(Na3PO4)，购买自天津希恩思生化科技有限公司，批号：S-42550；磷酸二氢钾(KH2PO4)，上海麦克林生化科技有限公司，批号：P815662；氢氧化钠(NaOH)，购买自上海麦克林生化科技有限公司，批号：S817968；异丙醇 (C3H8O)，购买自上海麦克林生化科技有限公司，批号：I811925；无水乙醇(C2H6O)，购买自上海麦克林生化科技有限公司，批号：E809061；甲醇(CH4O)，购买自上海麦克林生化科技有限公司，批号：M813907；其余试剂均为分析纯。
实施例1唾液酸-十聚甘油-硬脂酸酯(SA-PG10-C18)的合成和表征
本发明所述的SA-PG10-C18制备过程：首先，投料比例为唾液酸(SA)/十聚甘油- 硬脂酸酯(PG10-C18)/N-羟基丁二酰亚胺(NHS)/1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)/三乙胺(TEA)＝2:1:2:4:4(摩尔比)；将适量SA溶在5mL的甲酰胺(FA)，按比例加入EDC/NHS，4℃下活化90min，此时体系澄清；再将溶解在2mL 的FA中的PG10-C18加入反应体系中，加入TEA，室温搅拌反应48h，反应溶液澄清；然后将反应液转移至透析袋(截留分子量10kDa)中，透析介质为浓盐酸-水(V/V，1:100) 体系，透析体积为1000mL透析，每隔4小时更换透析介质，累计透析24h；最后，旋转蒸发除去部分水，将剩余物质冷冻干燥，得到白色絮状物质，即为合成物质唾液酸- 十聚甘油-硬脂酸酯(SA-PG10-C18)，结构如式(I)所示。
在IR光谱中，SA-PG10-C18在1739cm-1处出现一个吸收峰，是生成酯的羰基(vC＝O) 振动峰，同时相对于SA，其在2919.5，2849.3cm-1处烷基链的伸缩振动峰加强，同时在721cm-1处有直链碳数大于7的峰。
Figure BDA0002845370720000071
如图2所示，SA的特征峰(–COCH3)在δ1.99ppm可以检测到。δ1.23ppm和δ0.90ppm处的两个峰分别对应于PG10-C18中的-CH2-和-CH3上的H，其余各峰与SA相似。综上所述，成功合成并纯化得到SA-PG10-C18。
实施例2Len紫外检测波长测定与标准曲线建立
首先，采用异丙醇/水(90/10v/v)配制乐伐替尼(Len)药物溶液，药物浓度为0.1mg/mL。然后，以异丙醇/水(90/10v/v)作为空白溶剂，利用UV2700紫外分光光度计对0.1mg/mL的Len药物溶液进行200～800nm全波长扫描，确定最适Len紫外检测波长。
精密称定Len原料药10.0mg，置于100mL容量瓶中，以异丙醇/水(90/10v/v) 溶解并稀释至刻度，制成质量浓度为100μg·mL-1的Len溶液作为储备液。分别精密移取储备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL置于10mL容量瓶中，以异丙醇/水(90/10v/v) 稀释至刻度，即得质量浓度分别为5.0、10.0、20.0、30.0、40.0μg·mL-1的Len系列标准溶液。在最适波长处测定吸光度值，并以Len溶液吸光度(A)对Len浓度(C，μg·mL-1) 进行线性回归，建立标准曲线。
如图3所示，Len异丙醇溶液与空白脂质体异丙醇溶液的200～800nm紫外扫描结果表明，Len在211、245、290、300、329nm波长处均有吸收峰，但223nm波长较短，存在末端吸收干扰；空白脂质体在245nm波长下存在紫外吸收，存在药物辅料干扰。因此，在Len不受干扰的紫外吸收峰中，优选峰值较高的300nm处为最适紫外检测波长。
如图4所示，Len药物溶液在300nm处的标准曲线为:A＝0.0255C+0.0029，相关系数R＝0.9997，Len质量浓度在5.0～40.0μg·mL-1内线性关系良好。
实施例3采用薄膜分散法制备乐伐替尼脂质体
本发明所述的Len脂质体制备过程：采用经典的脂质体处方，其组成为 HSPC/CH/SA-PG10-C18/Len＝100mg/33mg/33mg/5mg，制备10mL脂质体。精密称定处方量的HSPC、CH和SA-PG10-C18置于500mL圆底烧瓶中，加入10mL无水乙醇，完全溶解HSPC、CH和SA-PG10-C18之后，在65℃水浴加热，转速为30rpm，真空度为0.09MPa条件下，旋转蒸发除去无水乙醇，在圆底烧瓶壁上形成脂质膜；然后，精密称定5mg Len，完全溶解于10mL含有10％乙醇的水溶液中，将Len溶液加入圆底烧瓶中，在转速为30rpm，室温常压条件下水化脂质膜30min；利用超声波细胞粉碎仪分散脂质体，采用100W分散2min，200W分散4min，将脂质体通过0.8μm微孔滤膜整粒，即得Len脂质体。
实施例4采用逆向蒸发法制备乐伐替尼脂质体
本发明所述的Len脂质体制备过程：采用经典的脂质体处方，其组成为 HSPC/CH/SA-PG10-C18/Len＝100mg/33mg/33mg/5mg，制备10mL脂质体。精密称定处方量的HSPC、CH和SA-PG10-C18置于500mL圆底烧瓶中，加入30mL二氯甲烷/ 异丙醚混合溶剂(50/50v/v)，完全溶解HSPC和CH；然后，精密称定5mg Len，完全溶解于10mL含有10％乙醇的水溶液中，将Len溶液加入圆底烧瓶中，在水浴超声中快速振摇分散，形成W/O型乳剂；在65℃水浴加热，转速为30rpm，真空度为0.09 MPa条件下，旋转蒸发完全除去有机溶剂，采用蒸馏水稀释脂质体至10mL；利用超声波细胞粉碎仪分散脂质体，采用100W分散2min，200W分散4min，将脂质体通过 0.8μm微孔滤膜整粒，即得Len脂质体。
实施例5采用改良乙醇注入法制备乐伐替尼脂质体
本发明所述的Len脂质体制备过程：采用经典的脂质体处方，其组成为 HSPC/CH/SA-PG10-C18/Len＝100mg/33mg/33mg/5mg，制备10mL脂质体。精密称定处方量的HSPC、CH和SA-PG10-C18置于25mL西林瓶中，加入0.5mL无水乙醇，在恒温加热磁力搅拌器65℃水浴加热，完全溶解HSPC和CH，加入磁力搅拌子，挥发除去大部分乙醇；然后，精密称定5mg Len，完全溶解于10mL含有10％乙醇的水溶液中，将加热至65℃的Len溶液快速加入西林瓶中；在65℃水浴，60rpm转速条件下，孵育20min；利用超声波细胞粉碎仪分散脂质体，采用100W分散2min，200W分散 4min，将脂质体通过0.8μm微孔滤膜整粒，即得Len脂质体。
实施例6Len脂质体包封率测定
采用葡聚糖凝胶G50制备成凝胶微柱(柱体积约为1mL)离心法测定Len脂质体包封率。移取两份100μL Len脂质体，一份直接置于5mL容量瓶中，加200μL蒸馏水，加入异丙醇/水(90/10v/v)至刻度并摇匀，采用紫外分光光度计于300nm处测定吸光度，记为Abefore；另一份上样于葡聚糖凝胶G50微柱顶端，2000rpm离心2min，继续加100μL蒸馏水于柱顶端，2000rpm离心2min洗脱，连续操作2次合并洗脱液，将合并洗脱液转移至5mL容量瓶中，加入异丙醇/水(90/10v/v)破乳并稀释至刻度摇匀后，采用紫外分光光度计于最适吸收波长处测定吸光度，记为Aafter。Len脂质体包封率(Encapsulation efficiency，EE)计算公式为EE(％)＝Aafter/Abefore×100％。
实施例7被动载药Len脂质体的最优制备工艺
采用薄膜分散法、逆向蒸发法和改良乙醇注入法这3种被动载药工艺制备Len脂质体并测定其包封率，结果如表1所示。虽然有研究报道逆相蒸发法比较适宜制备水溶性药物，但是逆相蒸发法制备的Len脂质体包封率最低，仅为12.5±2.7％。这是由于Len在10％的乙醇水溶液中具有较好的溶解效果，当乙醇与二氯甲烷、异丙醚等互溶之后，导致水相中的Len溶解度下降，并出现颗粒状析出。因此，在逆相蒸发法制备脂质体过程中，大量Len没有被有效包封入脂质体，导致包封率较低。薄膜分散法与改良乙醇注入法制备的Len脂质体包封率无显著性差异，分别为25.4±3.1％和28.4± 2.6％，但薄膜分散法制备过程时间较长，操作繁琐，且在转移脂质体过程中易出现制剂损失。因此，优选乙醇注入法作为Len脂质体被动载药工艺。为了保证实验的平行性，主动载药技术也选择乙醇注入法制备空白脂质体。
表1薄膜分散法、逆相蒸发法和改良乙醇注入法制备Len脂质体的包封率和药物含量 (n＝3)
Figure BDA0002845370720000101
实施例8pH梯度法法制备乐伐替尼脂质体
本发明所述的Len脂质体制备过程：采用经典的脂质体处方，其组成为 HSPC/CH/SA-PG10-C18/Len＝100mg/33mg/33mg/5mg，制备10mL脂质体。首先，采用改良乙醇注入法制备空白脂质体，将处方量的HSPC、CH和SA-PG10-C18置于10mL 西林瓶中，加入0.5mL无水乙醇，在恒温加热磁力搅拌器65℃水浴加热，完全溶解 HSPC、CH和SA-PG10-C18，加入磁力搅拌子，挥发除去大部分乙醇；然后，将加热至 65℃的200mM pH 3.0柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液4mL快速加入西林瓶中；在65℃水浴，60rpm转速条件下，孵育20min；利用超声波细胞粉碎仪分散脂质体，采用100W分散2min，200W分散4min，将脂质体通过0.8μm微孔滤膜整粒，即得空白脂质体，磷脂浓度为25mg/mL。
然后，在冰水浴条件下，使用Na3PO4溶液将脂质体外水相调节至pH 7.0，即得梯度脂质体，磷脂浓度为20mg/mL。
最后，移取0.5mL梯度脂质体，加入1mL Len溶液(1mg/mL)，以药脂比1/10 (w/w)进行载药，在60℃下孵育20min，采用冰水浴终止载药3min，即得pH梯度法制备的Len脂质体。
实施例9考察不同浓度水化介质制备Len脂质体的包封率
首先，为了比较不同水化介质浓度对pH梯度法制备Len脂质体的影响，配制50、100、200、300、400mM的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液作为水化介质制备空白脂质体，其余步骤均按照薄膜分散法、逆向蒸发法和改良乙醇注入法这3种被动载药工艺制备Len 脂质体进行。
然后，为了研究外水相阴离子(柠檬酸根阴离子)对pH梯度法制备Len脂质体的影响，采用氯型717型阴离子交换树脂微柱(柱体积约为2mL)置换空白脂质体外水相柠檬酸根阴离子，移取0.5mL空白脂质体上样于阴离子交换树脂微柱顶端，2000rpm 离心2min，收集洗脱下来的空白脂质体，调节脂质体外水相pH，制备梯度脂质体，其余步骤均按照薄膜分散法、逆向蒸发法和改良乙醇注入法这3种被动载药工艺制备 Len脂质体进行。
结果显示，水化介质浓度对脂质体包封率有重要影响。如图5所示，随着水化介质浓度从50mM增大到200mM过程中，Len脂质体包封率先升高后下降的趋势，当水化介质浓度达到200mM时，包封率最高。这可能是由于当柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液浓度较低时，脂质体内水相pH缓冲能力较弱，随着Len不断装载入内水相，内水相 pH迅速升高，跨膜pH梯度下降，pH梯度法的动力源逐渐丧失，导致Len包封率随着水化介质浓度增大而升高；当柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液浓度达到和超过300mM时，脂质体外水相中的柠檬酸根离子易与Len药物溶液形成低溶解度复合物，不利于Len主动载药进入脂质体内水相，导致Len脂质体包封率随着水化介质浓度继续增大而下降。进一步采用氯型阴离子交换树脂将梯度脂质体外水相的柠檬酸根离子置换成氯离子，考察不同外水相阴离子制备Len脂质体的包封率。当梯度脂质体外水相阴离子置换成氯离子之后，相较于柠檬酸根离子存在时，各组Len脂质体包封率提高了2～45％。
因此，pH梯度法优选200mM的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液作为水化介质制备空白脂质体，并且载药之前需要将外水相柠檬酸根离子置换成氯离子。
实施例10测定不同跨膜pH梯度制备Len脂质体的包封率
为了考察不同跨膜pH梯度对pH梯度法制备Len脂质体的影响，通过调节空白脂质体外水相至pH 4.0、5.0、6.0、7.0、8.0，即分别制备跨膜pH梯度分别为1.0、2.0、 3.0、4.0、5.0的梯度脂质体，其余步骤均按照薄膜分散法、逆向蒸发法和改良乙醇注入法这3种被动载药工艺制备Len脂质体进行。
根据Henderson-Hasselbalch理论，脂质体每个跨膜pH单位的变化，会产生分子型与离子型药物浓度10倍变化，当达到3个单位的跨膜pH梯度时，理论上能够将99.9％的药物装载入脂质体。
如图6所示，随着跨膜pH梯度的增大，Len脂质体包封率先升高后下降的趋势，当跨膜pH梯度达到3个单位时，包封率最高。这可能是由于当跨膜pH梯度小于3个单位时，即当外水相pH值小于6，脂质体外水相呈弱酸性，Len的溶解度较大，随着跨膜pH梯度逐渐增大(内水相pH不变，外水相pH逐渐增大)，极性较小的分子型 Len比例逐渐增加，Len脂质体载药效率显著提升，包封率增大；但当跨膜pH梯度大于3个单位时，即当外水相pH值大于6，脂质体外水相呈中性或偏碱性，Len的溶解度急剧下降，随着跨膜pH梯度继续增大，Len大量析出，导致Len脂质体包封率快速下降。因此，Len脂质体的载药过程优选3个单位跨膜pH梯度。
实施例11测定不同载药温度制备Len脂质体的包封率
为了研究不同载药温度对pH梯度法制备Len脂质体的影响，通过调节梯度脂质体载药过程的孵育温度至30、40、50、60、70℃，其余步骤均按照薄膜分散法、逆向蒸发法和改良乙醇注入法这3种被动载药工艺制备Len脂质体进行。
脂质体主动载药过程可以采用经典Arrhenius化学动力学方程进行解释。可由dlnk/dT＝Ea/RT2式中，k为速率常数，R为摩尔气体常数，T为热力学温度，Ea为表观活化能。对于同一脂质体主动载药过程，Ea(跨膜活化能)为定值，当T(孵育温度)升高时，k(载药速率)增大，Len脂质体快速达到载药平衡，但不会增大Len脂质体最大包封率。
如图7所示，随着载药温度的增大，Len脂质体包封率先升高后稳定的趋势。由于载药温度较低时，Len分子热运动不足以克服Ea(跨膜活化能)，无法有效装载入脂质体，包封率较低；随着载药温度逐渐升高，一方面，Len分子动能增大，Len具备较强的跨膜能力，另一方面，HSPC的相变温度为55℃左右，当载药温度超过相变温度，脂质体膜的流动性显著增强，更加有利于Len进入脂质体。然而，磷脂分子易在高温下氧化和降解，因此，优选60℃作为Len脂质体的载药温度。
实施例12测定不同药脂比制备Len脂质体的包封率
为了考察不同药脂比对pH梯度法制备Len脂质体的影响，调节梯度脂质体载药过程中Len/HSPC的比例至1/5、1/10、1/20、1/30、1/40(w/w)，其余步骤均按照薄膜分散法、逆向蒸发法和改良乙醇注入法这3种被动载药工艺制备Len脂质体进行。
以Len/HSPC比例1/5、1/10、1/20、1/30(w/w)进行主动载药，结果如图8所示。随着药脂比的降低，Len脂质体的包封率逐渐升高，但当药脂比达到1/20之后，包封率基本不变。因此，Len脂质体优选以1/20(w/w)药脂比进行主动载药。
实施例13主动载药Len脂质体最优处方工艺的确定
请参考图9，经过一系列单因素考察，确定主动载药Len脂质体的最优处方工艺为：脂质体处方组成为HSPC/CH/SA-PG10-C18/Len＝100mg/33mg/33mg/5mg，采用200 mM pH 3.0柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液作为水化介质，利用氯型阴离子交换树脂将空白脂质体外水相柠檬酸根离子置换成氯离子，使用Na3PO4溶液将脂质体外水相调节至pH 6.0，即得梯度脂质体；然后，按Len/HSPC＝1/20(w/w)混合梯度脂质体和Len药物溶液，在60℃下孵育载药20min，采用冰水浴终止载药3min，即得pH梯度法制备的最优 Len脂质体，其包封率达到94.7±1.6％，药物含量为0.95±0.02mg·mL-1。
实施例14测定Len脂质体粒径和Zeta电位
取适量Len脂质体，经蒸馏水稀释后移取1.5mL于样品池内，采用基于动态光散射原理的Zetasizer nano ZS90粒径测定仪测定脂质体的粒径；然后，将稀释完的样品装入Zeta电位样品池中，利用Smoluchowski方程将测得的微粒迁移率转换为Zeta电位。
采用马尔文激光粒度仪分别对主动载药技术(pH梯度法)和被动载药工艺(改良乙醇注入法)制备的Len脂质体平均粒径、粒径分布与Zeta电位进行测定。如图10A 和10C所示，主动载药技术与被动载药工艺制备的Len脂质体平均粒径分别为111.5± 3.4nm和150.6±11.7nm，多分散系数PDI分别为0.085和0.436。因此，主动载药法制备的Len脂质体粒径较小且均一。如图10B和10D所示，主动载药技术与被动载药工艺的Len脂质体具有相似的Zeta电位，分别为-22.7±3.5mV和-25.9±1.8mV。
实施例15Len脂质体微观形态观察
将Len脂质体稀释至磷脂浓度10mg/mL，吸取20μL脂质体滴加在覆盖碳膜的铜网上，用2％(w/v)磷钨酸进行负染1min，用滤纸吸取剩余液体，红外灯下烘干后，置于透射电镜下观察Len脂质体的微观形态并拍照。
Len脂质体透射电子显微镜成像结果如图11所示。脂质体为球形或椭球形封闭囊泡，具有明显的磷脂双分子层结构，典型大单室脂质体，Len脂质体的平均粒径与马尔文激光粒度仪测定的数据基本一致。
实施例16Len脂质体体外释放性质考察
分别精密移取含有2mg Len的游离Len溶液(Free Len)、被动载药Len脂质体(Len-P-SL)、主动载药Len脂质体(Len-R-SL)，分别加入至透析袋中，两端夹好后，置于100mL释放介质(含有0.5％(w/v)Tween 80的10mM PBS)中，在37±2℃恒温、避光、20rpm条件下水浴恒温震荡孵育。分别于0、0.5、1、2、4、8、12、24h 分别吸取1.0mL透析液，并补加等量同温空白释放介质。
透析液用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液用HPLC法测定其中药物浓度。采用0.01mM KH2PO4(磷酸调节至pH 3.0)水溶液与甲醇比例为30:70(v/v)作为流动相，Diamonsil C18色谱柱作为固定相，利用安捷伦1200HPLC系统对透析液中的Len进行分离和检测。
根据透析液中的药物浓度计算制剂的累计药物释放量，计算公式如下：
Figure BDA0002845370720000151
V0为释放介质体积，V为取样体积，Cn为第n次取样时浓度，M为药物总量，1<i≤n 整数。
如图12所示，Len溶液与被动载药工艺制备的Len脂质体分别在4h和12h内完全释放药物，而主动载药技术制备的Len脂质体在24h内仅释放54％的药物。结果表明，两种Len脂质体较Len溶液均表现出明显的缓释特征，主动载药法制备的Len脂质体释放较缓慢，且稳定性较好，具备后续开发潜力。
实施例17单核巨噬细胞对Len脂质体体外细胞摄取实验
采用密度梯度离心方法分离动物模型外周血和骨髓的单核细胞，或正常鼠腹腔注射4％巯乙基淀粉肉汤(2mL/只)48～72h后提取巨噬细胞，贴壁培养2h，纯化细胞，用PBS洗一遍后加适量的新鲜培养基轻轻吹打细胞，使之成为细胞悬液，配制成浓度为 2.5×105个/mL的细胞悬液，以5×105/孔的密度接种到6孔培养板中，每孔加2mL培养体系，置于37℃，5％CO2培养箱中培养2h。取出培养板后，更换含有无菌Len溶液(Free Len)与Len-R-SL(Len给药剂量为5mg·kg-1)的培养液100μL，于5％CO2、37℃的培养箱中培养2h，收集细胞，1500rpm离心5min，去除上清液。加入PBS重悬细胞清洗， 1500rpm离心5min，弃去上清，加入200μL PBS重新分散细胞，在流式细胞仪上检测样品的荧光强度，每个样品收集1×104个细胞，通过PE通道检测。用FlowJo 7.6.1软件分析数据，得到平均荧光强度。
如图13所示，Len-R-SL通过载体表面的“唾液酸-Siglec1(SA-Siglec1)”配体-受体介导内吞途径，被高表达Siglec1的单核巨噬细胞细胞主动摄取，摄取量显著大于对照组；然而，游离Len溶液组摄取量显著低于主动靶向脂质体组，这也再次证明单核巨噬细胞通过“SA-Siglec1”配体-受体介导内吞途径快速摄取Len-R-SL。
实施例18Len脂质体H22荷瘤小鼠体内组织分布
液氮中取出H22细胞冻存管，迅速置于37℃水中复苏。将复苏的H22细胞悬液接种于昆明小鼠腹腔内(0.5mL/只)，6～7天后在无菌条件下抽取乳白色粘稠腹水，台酚蓝染色后在倒置显微镜下计数，当肿瘤细胞活度大于95％时加生理盐水稀释成细胞混悬液，调整瘤细胞数至2.0×107cells·mL-1。采用75％乙醇消毒，将H22细胞混悬液接种于小鼠右前腋下的皮下组织，每只小鼠接种0.1mL，共接种18只。
荷瘤后约7～14天，当H22荷瘤小鼠的肿瘤体积达到500mm3且未出现破损，将小鼠随机分成3组，每组6只，尾静脉注射1次，分别给药Len溶液(Free Len)、Len-R-SL、 Len-R-SL(SA)(该组表示游离SA溶液与Len-R-SL混合后注射)，Len给药剂量为 5mg·kg-1。于注射后24h，处死所有小鼠，测定肿瘤、心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺中的药物浓度(μg·g-1)。
如图14所示，Len-R-SL在肿瘤部位的累积量显著高于Len-R-SL(SA)，这是由于Len-R-SL通过载体表面的“唾液酸-Siglec1(SA-Siglec1)”配体-受体介导内吞途径，通过单核巨噬细胞细胞主动摄取后递送至肿瘤部位，Len-R-SL在H22肿瘤的浓度是 Len注射液的367％；而Len-R-SL(SA)组存在大量游离的SA竞争性占据了巨噬细胞表面的SA受体——Siglec1，因此，Len-R-SL(SA)组肿瘤部位的Len-R-SL累积量显著下降，肿瘤药物浓度仅为Len-R-SL组的52％；游离Len溶液主要分布于肾脏，这是由于Len溶液主要通过肾脏排泄，而Len-R-SL(SA)通过长时间的循环过程，可能有部分Len泄漏，导致肾脏累积量增加。
实施例19Len脂质体H22荷瘤小鼠体内抗肿瘤研究
液氮中取出H22细胞冻存管，迅速置于37℃水中复苏。将复苏的H22细胞悬液接种于昆明小鼠腹腔内(0.5mL/只)，6～7天后在无菌条件下抽取乳白色粘稠腹水，台酚蓝染色后在倒置显微镜下计数，当肿瘤细胞活度大于95％时加生理盐水稀释成细胞混悬液，调整瘤细胞数至2.0×107cells·mL-1。采用75％乙醇消毒，将H22细胞混悬液接种于小鼠右前腋下的皮下组织，每只小鼠接种0.1mL，共接种18只。
荷瘤后第3天，将小鼠随机分成3组，即5％Glu、Len溶液(Free Len)与Len-R-SL组，每组6只。于接种后第3、6、9、12和15天分别尾静脉注射给药，各给药组的Len 剂量均为5.0mg·kg-1，对照组给予5％Glu的剂量为5.0mL·kg-1。在整个药效学试验期间，采用游标卡尺测量并记录肿瘤长径(a)和短径(b)、死亡事件等数据，基于上述数据对各Len制剂的疗效进行全面评价。
肿瘤体积(Tumor volume，V，mm3)：V＝1/2×a×b2
统计学分析采用SPSS16.0统计分析软件进行单因素方差分析，计算得到概率p值：当p>0.05时，认为二者之间无显著性差异；当p<0.05时，认为二者之间存在显著性差异；当p<0.01时，认为二者之间存在极显著性差异。
如图15所示，在荷瘤后27天的试验过程中，对照组(5％Glu)荷瘤鼠的肿瘤体积持续增长。与5％Glu组相比，Len注射液和Len-R-SL组均能够有效抑制了肿瘤生长(p<0.05)。其中，Len-R-SL的抑瘤效果最好，27天后肿瘤体积最小，平均肿瘤体积为1520mm3，Len-R-SL肿瘤抑制率是Len注射液的188％，显著优于Len注射液组。尽管Free Len的有一定的抑瘤作用，但是其非特异性杀伤作用，导致小鼠脱毛、体重显著下降等现象。Len-R-SL可以有效利用“SA-Siglec1”受体-配体途径主动靶向H22肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)，抑制肿瘤细胞，并重塑肿瘤微环境。因此， Len-R-SL不但具有较好的抑瘤能力，同时具有较低的非特异性毒性，具备临床开发价值。
本文所描述的概念在不偏离其精神和特性的情况下可以实施成其它形式。所公开的具体实施例应被视为例示性而不是限制性的。因此，本发明的范围是由所附的权利要求，而不是根据之前的这些描述进行确定。在权利要求的字面意义及等同范围内的任何改变都应属于这些权利要求的范围。

Claims (10)

1.一种乐伐替尼脂质体，其特征在于，所述脂质体含有乐伐替尼、磷脂、两亲性衍生物、胆固醇和梯度建立物质，所述胆固醇与所述磷脂的重量比为1:2～1:10，所述乐伐替尼与所述磷脂的重量比为1:10～1:40，所述两亲性衍生物与所述磷脂的重量比为1:2～1:10，所述磷脂为甘油磷脂或鞘磷脂，所述两亲性衍生物选自聚甘油与脂肪酸连接形成的两亲性脂质衍生物、唾液酸与聚甘油脂肪酸酯连接形成的两亲性脂质衍生物、聚乙二醇与磷脂连接形成的两亲性脂质衍生物、聚乙二醇与胆固醇连接形成的两亲性脂质衍生物、聚乙烯吡咯烷酮与脂质相连形成的两亲性脂质衍生物中的一种或多种，所述梯度建立物质选自枸橼酸-枸橼酸钠溶液、酒石酸-酒石酸钠溶液、苹果酸-苹果酸钠溶液、磷酸二氢钠溶液、硫酸铵溶液、乙二胺四乙酸铵溶液中的一种或多种，所述梯度建立物质溶液的浓度为100～300mM。
2.如权利要求1所述的乐伐替尼脂质体，其特征在于，所述磷脂选自天然磷脂、半合成磷脂以及人工合成磷脂中的一种或多种。
3.如权利要求2所述的乐伐替尼脂质体，其特征在于，所述磷脂选自大豆磷脂、氢化大豆磷脂、蛋黄磷脂、氢化蛋黄磷脂、二山嵛酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二反式油酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰胆碱、单棕榈酰磷脂酰胆碱、单硬酯酰胆碱、蛋黄脂酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、蛋黄磷脂酰甘油、大豆磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二油酰磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、蛋黄鞘磷脂、二硬脂酰鞘磷脂、二棕榈酰鞘磷脂、大豆磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二油酰磷脂酰肌醇、大豆磷脂酸、蛋黄磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸中的一种或多种。
4.如权利要求1所述的乐伐替尼脂质体，其特征在于，所述脂质体中进一步含有多阴离子大分子，所述多阴离子大分子选自海藻酸、聚唾液酸、右旋糖酐硫酸酯、硫酸葡聚糖、聚谷氨酸、植酸、乳糖酸、果糖酸、透明质酸或它们的盐及复合物中的一种或多种。
5.如权利要求4所述的乐伐替尼脂质体，其特征在于，所述多阴离子大分子与所述乐伐替尼的重量比为10:1～1:100。
6.一种如权利要求1-5任意一项所述的乐伐替尼脂质体的制备方法，其特征在于，在所述脂质体中加入磷酸钠、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠中的一种或多种作为pH调节剂，并通过如下方法制备：
(a)制备空白脂质体：
在50～70℃下以乙醇、乙醇-水混合溶剂作为溶媒溶解磷脂、胆固醇和两亲性衍生物的混合物，得到脂质混合物，磷脂重量与溶媒的体积之比为1:1～1:6(g/mL)；
配制浓度为0.1～0.4mol/L的梯度建立物质溶液，选择性的加入多阴离子大分子，在50～70℃下将该溶液与脂质混合物混合并搅拌，得到脂质体初品；将所得的脂质体初品通过微射流、挤出、高压均质或超声减小粒径，得到空白脂质体；
(b)：通过离子交换、透析、凝胶色谱分离或加入调节试剂的方法，建立脂质体跨膜离子梯度，跨膜离子浓度比值为102～104，获得梯度脂质体；
(c)：将(b)所得的梯度脂质体混悬液与乐伐替尼溶液混合，于50～70℃下孵育3-30min，得到乐伐替尼脂质体。
7.一种如权利要求1-5任意一项所述的乐伐替尼脂质体的制备方法，其特征在于，在所述脂质体中加入磷酸钠、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠中的一种或多种作为pH调节剂，并通过如下方法制备：
(a)制备空白脂质体：
在50～70℃下使用叔丁醇或叔丁醇-水混合溶剂作为溶媒溶解磷脂、胆固醇和两亲性衍生物的混合物，将此混合物进行冻干得到脂质混合物，磷脂重量与溶媒的体积之比为1:1～1:6(g/mL)；
配制浓度为0.1～0.4mol/L的梯度建立物质溶液，选择性的加入多阴离子大分子，在50～70℃下将该溶液与脂质混合物混合并搅拌，得到脂质体初品；将所得的脂质体初品通过微射流、挤出、高压均质或超声减小粒径，得到空白脂质体；
(b)：通过离子交换、透析、凝胶色谱分离或加入调节试剂的方法，建立脂质体跨膜离子梯度，跨膜离子浓度比值为102～104，获得梯度脂质体；
(c)：将(b)所得的梯度脂质体混悬液与乐伐替尼溶液混合，于50～70℃下孵育3-30min，得到乐伐替尼脂质体。
8.一种药物组合物，其特征在于，其含有权利要求1至5中任意一项所述的乐伐替尼脂质体以及至少一种药学上可接受的附加剂，所述附加剂选自无机盐类、蛋白类、糖类和核酸类中的一种或多种。
9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述无机盐类包括：磷酸钠、氢氧化钠、碳酸钠、草酸钠、醋酸钠、磷酸钾、氢氧化钾、碳酸钾、草酸钾、醋酸钾中的一种或多种；所述蛋白类包括：PD-1/PD-L1单抗、HER2单抗、CD20单抗、VEGF/VEGFR单抗、EGFR单抗、CTLA-4单抗、CD38单抗、CD30单抗、CD52单抗、CD319单抗、CD3/CD19单抗、CD2单抗、CD22单抗、CCR4单抗、CD33单抗、CD3/EPCAM单抗、胰岛素、免疫球蛋白、血浆白蛋白中的一种或多种；所述糖类包括：核糖、脱氧核糖、葡萄糖、甘露糖、果糖、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、淀粉、纤维素中的一种或多种；所述核酸类包括：质粒核酸、反义核苷酸、核酶、小干扰核糖核酸、微小核糖核酸中的一种或多种。
10.一种如权利要求1-5任意一项所述的乐伐替尼脂质体的处方工艺优化方法，其特征在于，所述处方工艺优化方法包括：采用Len包封率、脂质体粒径、脂质体放置稳定性为指标，改变Len脂质体的磷脂种类、各组分比例、制备方法、多阴离子种类、多阴离子比例、两亲性衍生物种类、两亲性衍生物比例中的一种或多种。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023190709A1 (ja) 2022-03-31 2023-10-05 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 リポソーム組成物およびリポソームを含む医薬組成物

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103479578A (zh) * 2012-06-14 2014-01-01 沈阳药科大学 一种马来酸匹杉琼的脂质体制剂及其制备工艺
CN103720655A (zh) * 2012-10-11 2014-04-16 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 一种d型多肽介导的靶向脂质体及其制备方法和应用
CN106727325A (zh) * 2016-12-29 2017-05-31 青岛黄海制药有限责任公司 一种甲磺酸伊马替尼的脂质体制剂及其制备方法
CN111920768A (zh) * 2019-05-13 2020-11-13 复旦大学 一种包载分子靶向药物脂质体及其在制备治疗肿瘤药物中的应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103479578A (zh) * 2012-06-14 2014-01-01 沈阳药科大学 一种马来酸匹杉琼的脂质体制剂及其制备工艺
CN103720655A (zh) * 2012-10-11 2014-04-16 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 一种d型多肽介导的靶向脂质体及其制备方法和应用
CN106727325A (zh) * 2016-12-29 2017-05-31 青岛黄海制药有限责任公司 一种甲磺酸伊马替尼的脂质体制剂及其制备方法
CN111920768A (zh) * 2019-05-13 2020-11-13 复旦大学 一种包载分子靶向药物脂质体及其在制备治疗肿瘤药物中的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张茂清: "《现代药理学与药物治疗基础》", 31 May 2019, 吉林科学技术出版社 *
杨明: "《中药药剂学》", 31 July 2016, 中国中医药出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023190709A1 (ja) 2022-03-31 2023-10-05 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 リポソーム組成物およびリポソームを含む医薬組成物

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