CN112592886A - 一种收集ivf-et患者胚胎培养液的方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种收集常规IVF‑ET患者胚胎培养液的方法，为非ICSI患者提供无创性评估胚胎质量的可能性，既有助于减少不必要的侵袭性操作如ICSI，同时有助于提高助孕技术的安全性。

Description

一种收集IVF-ET患者胚胎培养液的方法及其应用
技术领域
本发明具体涉及一种收集IVF-ET患者胚胎培养液的方法及其应用。
背景技术
精准选择优质胚胎进行宫腔内移植是提高人类辅助生殖技术治疗效果和安全性的一个有效措施。但是传统的胚胎评估方法或仅凭肉眼判断，主观成分较大；亦或需要对胚胎进行有创操作，造成胚胎损伤。因此临床实践中仍需探寻一种高效、精准的无创性胚胎检测方法。目前，临床中尝试通过对胚胎培养液的各种物质进行检测(包括基因层面及蛋白代谢层面)，实现无创性预判胚胎发育潜能。但是既往研究中，为避免受精过程中，包裹受精卵的颗粒细胞对于培养液成分的干扰，进行培养液物质检测时必须采用卵胞浆内单精子显微注射技术(introcytoplasmic sperm injection，ICSI)，即通过有创的方式将精子直接注入卵母细胞胞浆内。其实自ICSI技术诞生至今，关于此技术安全性的争议就从未停止。作为一项人为的体外操作，其远期安全性仍然有待评估。这一局限性不仅致使较大一部分接受常规体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer，IVF-ET)的患者不能进行无创性胚胎评估，更有可能因为无创评估而增加不必要的ICSI操作，从而引起无法预期的后果。
发明内容
针对于背景技术中存在的问题与限制，本发明的目的在于提供一种收集IVF-ET患者胚胎培养液的方法。
本发明所提供的一种收集IVF-ET患者胚胎培养液的方法，包括体外受精后第一天，将所有胚胎先于冲洗液中进行冲洗，后将冲洗后的胚胎置于生长液中单滴单胚胎培养，之后将胚胎转移至囊胚培养液中继续单滴单胚胎培养后，单样本单管收集囊胚培养液即得到IVF-ET患者胚胎培养液。
上述方法中，将所有胚胎先于冲洗液中进行冲洗可通过反复吹打进行。
上述方法中，所述冲洗可在培养皿中进行。
上述方法中，所述胚胎置于生长液中单滴单胚胎培养，培养时间为48±2小时，优选为48小时。
上述方法中，所述胚胎置于生长液中单滴单胚胎培养可在培养皿中进行。
上述方法中，所述将胚胎转移至囊胚培养液中继续单滴单胚胎培养，培养时间为72±2小时，优选为72小时。
上述方法中，所述将胚胎转移至囊胚培养液中继续单滴单胚胎培养可在培养皿中进行。
上述方法中，所述单滴单胚胎培养，培养条件为体积百分含量(6±0.2)％的CO2、体积百分含量(5±0.2)％的O2；优选为体积百分含量6％的CO2、体积百分含量5％的O2。
上述收集IVF-ET患者胚胎培养液的方法在无创评价胚胎质量中的应用属于本发明的保护范围。
上述收集IVF-ET患者胚胎培养液的方法在无创评价胚胎发育潜能中的应用也属于本发明的保护范围。
本发明所提供的一种收集常规IVF-ET患者胚胎培养液的方法，为非ICSI患者提供无创性评估胚胎质量的可能性，既有助于减少不必要的侵袭性操作如ICSI，同时有助于提高助孕技术的安全性。
附图说明
图1为本发明实施例1冲洗皿、生长皿和囊胚培养皿中胚胎的分布的示意图。其中，1-9每个数字代表一个单滴单胚胎。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
本实施例提供的收集IVF-ET患者胚胎培养液的方法如下：
于取卵前一天制备冲洗皿和生长皿，于取卵后第二天制备囊胚培养皿，其中，冲洗皿是含有冲洗液(G-1TMv5 Plus，10128,Vitrolife，北京爱维福医疗器械有限责任公司)的培养皿(3001皿)，生长皿是含有生长液(G-1TMv5 Plus，10128,Vitrolife，北京爱维福医疗器械有限责任公司)的培养皿(3001皿)，囊胚培养皿是含有囊胚培养液(G-2TM v5 Plus，10132,Vitrolife，北京爱维福医疗器械有限责任公司)的培养皿(3001皿)；按常规操作进行体外受精操作(可参考文献“Wenhui Zhou,Dapeng Chu Wei Sha,Lei Fu,YuanLi.Effects of granulocyte-macrophage colony-stimulating factorsupplementation in culture medium on embryo quality and pregnancy outcome ofwomen aged over 35years”)。至受精后第一天，将所有胚胎先于冲洗皿中反复吹打，以减少颗粒细胞来源的污染，完成充分脱颗粒细胞操作，后将胚胎置于生长皿中单滴单胚胎培养，减少不同胚胎间代谢产物的交叉污染，培养48±2小时(培养条件为体积百分含量6％的CO2、体积百分含量5％的O2)后，将胚胎按原顺序依次转移至囊胚培养皿，继续培养72±2小时(培养条件为体积百分含量6％的CO2、体积百分含量5％的O2)后单样本单管收集囊胚培养液即得到胚胎培养液，并保存至-80℃冰箱中，以减少检测物质的降解。
本方法主要收集的是患者在治疗过程中无临床应用价值的废弃的胚胎培养液，没有对患者或胚胎进行额外的体外操作。本方法因涉及人类样本信息，已申请首都医科大学附属北京朝阳医院伦理审查。预实验中，研究小组按照此方法收集了17份人类废弃胚胎培养液并进行单细胞全基因组扩增+高通量测序，结果显示，收集液体的纯度和浓度可达到检测要求，并能进行染色体非整倍性分析。结果表明通过胚胎培养液游离DNA检测可以评估胚胎染色体情况，在检测的17例样本中，发现10例胚胎培养液存在明显染色体拷贝数异常。
以上实施例表明本发明的收集方法可摒除外源细胞干扰，获得常规IVF-ET患者的胚胎培养液，并利于下一步的无创性检测与胚胎评估。有利于选择优质胚胎进行移植，并提高不孕症治疗的成功率。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

Claims (6)

1.一种收集IVF-ET患者胚胎培养液的方法，其特征在于：包括体外受精后第一天，将所有胚胎先于冲洗液中进行冲洗，后将冲洗后的胚胎置于生长液中单滴单胚胎培养，之后将胚胎转移至囊胚培养液中继续单滴单胚胎培养后，单样本单管收集囊胚培养液即得到IVF-ET患者胚胎培养液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述胚胎置于生长液中单滴单胚胎培养，培养时间为48±2小时。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述将胚胎转移至囊胚培养液中继续单滴单胚胎培养，培养时间为72±2小时。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述单滴单胚胎培养，培养条件为体积百分含量(6±0.2)％的CO2、体积百分含量(5±0.2)％的O2。
5.权利要求1-4任一项所述的方法在无创评价胚胎质量中的应用。
6.权利要求1-4任一项所述的方法在无创评价胚胎发育潜能中的应用。
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US20170002414A1 (en) * 2014-01-30 2017-01-05 Pécsi Tudományegyetem Preimplantation assessment of embryos through detection of free embryonic dna

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Title
付磊等: "不同促排卵方案在体外受精-胚胎移植中应用的比较", 《武汉大学学报(医学版)》 *

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