CN112575090B - 一种检测brca基因突变的pcr反应试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，包括一体安装的检测棒，所述检测棒包括前套管，及活动安装于前套管内侧的中间管，及旋接于中间管后端的尾旋管；所述前套管包括前段封闭，后端中空的反应检测管段，及两端中空的导向管段；反应检测管段其开放端固定有进样漏斗；所述进样漏斗内侧固定有顶针，所述进样漏斗底部设置有蜡封；所述反应检测管段和导向管段通过软套连通；本发明的检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，采用一体式检测棒，扩增过程采用全闭管操作，能够大大避免交叉污染的风险，从而保证检测BRCA基因突变的精确性，另外，整个扩增过程简单方便，扩增操作效率高。

Description

一种检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒
技术领域
本发明涉及一种反应试剂盒，具体涉及一种检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，属于反应试剂盒技术领域。
背景技术
BRCA是具有抑制恶性肿瘤发生的基因，在调节人体细胞的复制、遗传物质DNA损伤修复、细胞的正常生长方面有重要作用，已发现的BRCA的突变有数百种之多，有些与遗传性乳腺癌和卵巢癌有关，总结BRCA基因突变相关的癌症的终身风险显示，有BRCA基因突变者患乳腺癌和卵巢癌的风险分别是50％-85％和15％-45％，与普通妇女相比，这些都是很高的患癌几率，由于BRCA基因的突变对家族性乳腺癌、卵巢癌的发生有一定的联系，所以检测BRCA的突变基因对相关癌症的诊断、预防和治疗有重要的临床意义，现有技术中， BRCA基因突变检测方法主要为限制小片段长度多态性分析法(RFLP法)和DNA直接测序法，RFLP法是将PCR与限制性酶切相结合的方法；目前的检测试剂易被外界细菌感染，非闭管操作，难以避免交叉污染。
发明内容
为解决上述问题，本发明提出了一种检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，采用一体式检测棒，扩增过程采用全闭管操作，能够大大避免交叉污染的风险，另外，整个扩增过程简单方便。
本发明的检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，包括一体安装的检测棒，所述检测棒包括前套管，及活动安装于前套管内侧的中间管，及旋接于中间管后端的尾旋管；
所述前套管包括前段封闭，后端中空的反应检测管段，及两端中空的导向管段；反应检测管段其开放端固定有进样漏斗；所述进样漏斗内侧固定有顶针，所述进样漏斗底部设置有蜡封；所述反应检测管段和导向管段通过软套连通；所述反应检测管段和导向管段外部卡接或旋接有硬管段；所述导向管段内侧设置有多个滑头；所述前套管内侧蜡封有BRCA基因突变的PCR扩增体系试剂；
所述中间管包括相互压合粘结密封的第一管体和第二管体；所述第一管体和第二管体相互靠近一端一体制成有第一喉段和第二喉段；所述第一喉段和第二喉段内侧之间卡接有滤头；所述滤头包括一体制成的封闭管段和滤孔管段；所述封闭管段远离滤孔管段一端设置有上滤网；所述滤孔管段远离封闭管段一端设置有多个刺针；所述封闭管段上设置有进样螺旋孔；所述第二管体上正对进样螺旋孔设置有外端孔；所述进样螺旋孔和外端孔之间旋接有进样嘴；所述进样嘴通过封盖密封；所述第一管体顶部一体制成有轴向截面为梯形结构的导向嘴；所述导向嘴与软套活动嵌合；所述第一管体和第二管体外部轴向开设有多条滑槽；所述滑槽和滑头配合安装；所述滑槽于第一管体和第二管体之间、第一管体或第二管体上设置有直角卡槽；所述滑头活动滑入直角卡槽并与直角卡槽卡合；
所述尾旋管包括中间内凹，两端螺纹结构的尾管体；所述尾管体远离中间管一端密封，且内部设置有裂解球；所述尾管体中间端套接有抗菌棉；且外部包覆有外封套；
所述中间管或尾旋管内侧设置有样本缓冲稀释液。
进一步地，所述裂解球包括裂解液，所述裂解液通过包衣球形封装。
进一步地，所述样本缓冲稀释液注于尾旋管内侧，所述稀释球和样本缓冲稀释液通过薄膜封装于尾管体内侧；所述导向嘴处设置有膜封层；所述顶针为用于穿刺膜封层，并与膜封层活动压紧的凸型结构。
进一步地，所述样本缓冲稀释液通过包衣封闭于稀释球内，所述稀释球通过蜡封或点胶设置于第一管体内侧顶部；所述顶针为用于穿刺膜封层，并与膜封层活动压紧的凸型结构。
进一步地，所述导向嘴前端外部套接有柔性保护环。
进一步地，所述软套外部套接有弹性封闭环。
进一步地，所述进样嘴处活动插接采集拭子或进样杯。
进一步地，安装待用的所述检测棒其初始状态如下：
所述前套管其滑头初始状态为与第一喉段卡接，所述尾旋管其上端螺纹与中间管底部旋接。
进一步地，所述试剂盒检测过程如下：
a、进样，将已完成灭菌组装的检测棒从试剂盒中取出，并卧式放置于配备的架子上，接着，旋开封盖，并使进样嘴与桌面呈锐角夹角，接着，插入进样杯或采集拭子，从而将检测样品送入到滤头；并通过封盖将进样嘴封闭；
b、样品扩增前处理，包括缓冲稀释和裂解；
所述缓冲稀释具体如下：
根据样品类型选择上安装的样本缓冲稀释液或下安装的样本缓冲稀释液；
当样品为采集拭子时，选择上安装的样本缓冲稀释液，即选择样本缓冲稀释液安装于中间管的试剂盒，样品处理时，将初始状态下的前套管其滑头滑入到滑槽内，此时，通过前套管的顶针穿刺稀释球的包衣，同时，顶针压紧导向嘴处的膜封层；使样本缓冲稀释液被释放，并充分浸泡采集拭子，浸泡液通过滤头导入到尾旋管，通过将检测棒正立或倒立两次，最后将检测棒正立于架子上静置；从而使缓冲稀释液充分对采集释子进行稀释处理后，集中到尾旋管内，
当样品为体液时，选择样本缓冲稀释液安装于尾旋管的试剂盒，将初始状态下的尾旋管上旋，使尾旋管其上端螺纹和抗菌棉进入到中间管内侧，此时，外封套随着尾旋管内旋，依次被向外顶出直到；尾旋管其下端螺纹顶部旋入到中间管上，此时，尾管体上的薄膜被刺针完全穿刺，当前状态下，裂解球仍处于封装状态；接着，通过将检测棒正立或倒立两次，最后将检测棒正立于架子上静置；从而使缓冲稀释液充分对体液进行稀释处理后，集中到尾旋管内，
当完成体液或采集拭子被缓冲稀释液处理，并集中到尾旋管后，此时送入到离心设备上进行一次离心处理，
接着，将尾旋管上旋，使刺针将裂解球充分穿刺后，将裂解液完全释放，此时，将检测棒轻微晃动后，送入到离心设备进行二次离心处理；二次离心处理后完成样品扩增前处理；
其中，一次离心时，尾旋管和中间管离心转动，前套管通过夹持件夹持，其转动力通过第一喉段释放，从而保持前套管不动；二次离心时，将滑头通过滑槽进入到直角卡槽，并脱离夹持件，此时，整个检测棒转动，从而对前套管内侧的PCR扩增体系试剂进行预混合；
c、样品扩增，将检测棒倒置，接着，对漏斗的蜡封进行加热解封；并将滑头滑入到第二喉段，此时，导向嘴将软套进行外压，并延伸到漏斗处，完成预处理的样品进入到前套管，并静置至少30s后，将硬管段旋接脱离反应检测管段和导向管段，此时，通过强力夹或绑扎线对软套进行二次锁紧，并重新将硬管段重新旋回反应检测管段和导向管段；接着，将前套管其滑头送入到中间管其滑槽，并将前套管和中间管脱离，此时，完成预处理的样品和BRCA基因突变的PCR扩增体系试剂混合进行扩增；BRCA基因突变的PCR扩增体系试剂的PCR反应缓冲液、DNA聚合酶、BRCA基因突变的反应特异性引物、探针以及保护剂充分融合，并送入扩增设备上进行离心振动扩增；
d、样品扩增，对扩增产物进行测序和分析，完成全编码区的突变位点检测。
本发明与现有技术相比较，本发明的检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，采用一体式检测棒，扩增过程采用全闭管操作，能够大大避免交叉污染的风险，从而保证检测BRCA基因突变的精确性，另外，整个扩增过程简单方便，扩增操作效率高。
附图说明
图1为本发明的实施例1整体结构示意图。
图2为本发明的实施例2整体结构示意图。
图3为本发明的实施例2漏斗结构示意图。
具体实施方式
实施例1：
如图1河图3所示的检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，包括一体安装的检测棒，所述检测棒包括前套管，及活动安装于前套管内侧的中间管，及旋接于中间管后端的尾旋管；
所述前套管包括前段封闭，后端中空的反应检测管段1，及两端中空的导向管段2；反应检测管段1其开放端固定有进样漏斗3；所述进样漏斗3内侧固定有顶针4，所述进样漏斗3底部设置有蜡封10；所述反应检测管段1和导向管段2通过软套5连通；所述反应检测管段1和导向管段2外部卡接或旋接有硬管段7；所述导向管段2内侧设置有多个滑头8；所述前套管内侧蜡封有BRCA基因突变的PCR扩增体系试剂9；
所述中间管包括相互压合粘结密封的第一管体11和第二管体12；所述第一管体11和第二管体12相互靠近一端一体制成有第一喉段13和第二喉段14；所述第一喉段13和第二喉段14之间卡接有滤头15；所述滤头15包括一体制成的封闭管段151和滤孔管段152；所述封闭管段151远离滤孔管段152一端设置有上滤网153；所述滤孔管段152远离封闭管段151一端设置有多个刺针154；所述封闭管段151上设置有进样螺旋孔155；所述第二管体12上正对进样螺旋孔设置有外端孔；所述进样螺旋孔155和外端孔之间旋接有进样嘴16；所述进样嘴16通过封盖17密封；所述第一管体11顶部一体制成有轴向截面为梯形结构的导向嘴18；所述导向嘴18与软套5活动嵌合；所述第一管体11和第二管体12外部轴向开设有多条滑槽20；所述滑槽20和滑头8配合安装；所述滑槽8于第一管体11和第二管体12之间、第一管体11或第二管体12上设置有直角卡槽21；所述滑头8活动滑入直角卡槽并与直角卡槽21卡合；
所述尾旋管包括中间内凹，两端螺纹结构23的尾管体22；所述尾管体22远离中间管一端密封，且内部设置有裂解球24；所述尾管体22中间端套接有抗菌棉25；且外部包覆有外封套26；
所述中间管或尾旋管内侧设置有样本缓冲稀释液27。
其中，所述裂解球24包括裂解液，所述裂解液通过包衣球形封装。
所述样本缓冲稀释液27注于尾旋管内侧，所述稀释球24和样本缓冲稀释液27通过薄膜封装于尾管体内侧；所述导向嘴18处设置有膜封层；所述顶针4为用于穿刺膜封层，并与膜封层活动压紧的凸型结构。
其中，所述导向嘴18前端外部套接有柔性保护环19。所述软套5外部套接有弹性封闭环6。所述进样嘴16处活动插接采集拭子或进样杯。安装待用的所述检测棒其初始状态如下：所述前套管其滑头初始状态为与第一喉段卡接，所述尾旋管其上端螺纹与中间管底部旋接。
实施例2：
如图2所示的检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，所述样本缓冲稀释液27通过包衣封闭于稀释球28内，所述稀释球28通过蜡封或点胶设置于第一管体11内侧顶部；所述顶针4为与膜封层活动压紧的凸型结构。
其中，所述试剂盒检测过程如下：
a、进样，将已完成灭菌组装的检测棒从试剂盒中取出，并卧式放置于配备的架子上，接着，旋开封盖，并使进样嘴与桌面呈锐角夹角，接着，插入进样杯或采集拭子，从而将检测样品送入到滤头；并通过封盖将进样嘴封闭；
b、样品扩增前处理，包括缓冲稀释和裂解；
所述缓冲稀释具体如下：
根据样品类型选择上安装的样本缓冲稀释液或下安装的样本缓冲稀释液；
当样品为采集拭子时，选择上安装的样本缓冲稀释液，即选择样本缓冲稀释液安装于中间管的试剂盒，样品处理时，将初始状态下的前套管其滑头滑入到滑槽内，此时，通过前套管的顶针穿刺稀释球的包衣，同时，顶针压紧导向嘴处的膜封层；使样本缓冲稀释液被释放，并充分浸泡采集拭子，浸泡液通过滤头导入到尾旋管，通过将检测棒正立或倒立两次，最后将检测棒正立于架子上静置；从而使缓冲稀释液充分对采集释子进行稀释处理后，集中到尾旋管内，
当样品为体液时，选择样本缓冲稀释液安装于尾旋管的试剂盒，将初始状态下的尾旋管上旋，使尾旋管其上端螺纹和抗菌棉进入到中间管内侧，此时，外封套随着尾旋管内旋，依次被向外顶出直到；尾旋管其下端螺纹顶部旋入到中间管上，此时，尾管体上的薄膜被刺针完全穿刺，当前状态下，裂解球仍处于封装状态；接着，通过将检测棒正立或倒立两次，最后将检测棒正立于架子上静置；从而使缓冲稀释液充分对体液进行稀释处理后，集中到尾旋管内，
当完成体液或采集拭子被缓冲稀释液处理，并集中到尾旋管后，此时送入到离心设备上进行一次离心处理，
接着，将尾旋管上旋，使刺针将裂解球充分穿刺后，将裂解液完全释放，此时，将检测棒轻微晃动后，送入到离心设备进行二次离心处理；二次离心处理后完成样品扩增前处理；
其中，一次离心时，尾旋管和中间管离心转动，前套管通过夹持件夹持，其转动力通过第一喉段释放，从而保持前套管不动；二次离心时，将滑头通过滑槽进入到直角卡槽，并脱离夹持件，此时，整个检测棒转动，从而对前套管内侧的PCR扩增体系试剂进行预混合；
c、样品扩增，将检测棒倒置，接着，对漏斗的蜡封进行加热解封；并将滑头滑入到第二喉段，此时，导向嘴将软套进行外压，并延伸到漏斗处，完成预处理的样品进入到前套管，并静置至少30s后，将硬管段旋接脱离反应检测管段和导向管段，此时，通过强力夹或绑扎线对软套进行二次锁紧，并重新将硬管段重新旋回反应检测管段和导向管段；接着，将前套管其滑头送入到中间管其滑槽，并将前套管和中间管脱离，此时，完成预处理的样品和BRCA基因突变的PCR扩增体系试剂混合进行扩增；BRCA基因突变的PCR扩增体系试剂的PCR反应缓冲液、DNA聚合酶、BRCA基因突变的反应特异性引物、探针以及保护剂充分融合，并送入扩增设备上进行离心振动扩增；
d、样品扩增，对扩增产物进行测序和分析，完成全编码区的突变位点检测。
上述实施例，仅是本发明的较佳实施方式，故凡依本发明专利申请范围所述的构造、特征及原理所做的等效变化或修饰，均包括于本发明专利申请范围内。

Claims (5)

1.一种检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，其特征在于：包括一体安装的检测棒，所述检测棒包括前套管，及活动安装于前套管内侧的中间管，及旋接于中间管后端的尾旋管；
所述前套管包括前段封闭，后端中空的反应检测管段，及两端中空的导向管段；反应检测管段其开放端固定有进样漏斗；所述进样漏斗内侧固定有顶针，所述进样漏斗底部设置有蜡封；所述反应检测管段和导向管段通过软套连通；所述反应检测管段和导向管段外部卡接或旋接有硬管段；所述导向管段内侧设置有多个滑头；所述前套管内侧蜡封有BRCA基因突变的PCR扩增体系试剂；
所述中间管包括相互压合粘结密封的第一管体和第二管体；所述第一管体和第二管体相互靠近一端一体制成有第一喉段和第二喉段；所述第一喉段和第二喉段内侧之间卡接有滤头；所述滤头包括一体制成的封闭管段和滤孔管段；所述封闭管段远离滤孔管段一端设置有上滤网；所述滤孔管段远离封闭管段一端设置有多个刺针；所述封闭管段上设置有进样螺旋孔；所述第二管体上正对进样螺旋孔设置有外端孔；所述进样螺旋孔和外端孔之间旋接有进样嘴；所述进样嘴通过封盖密封；所述第一管体顶部一体制成有轴向截面为梯形结构的导向嘴；所述导向嘴与软套活动嵌合；所述第一管体和第二管体外部轴向开设有多条滑槽；所述滑槽和滑头配合安装；所述滑槽于第一管体和第二管体之间、第一管体或第二管体上设置有直角卡槽；所述滑头活动滑入直角卡槽并与直角卡槽卡合；
所述尾旋管包括中间内凹，两端螺纹结构的尾管体；所述尾管体远离中间管一端密封，且内部设置有裂解球；所述尾管体中间端套接有抗菌棉；且外部包覆有外封套；
所述中间管或尾旋管内侧设置有样本缓冲稀释液；
所述裂解球包括裂解液，所述裂解液通过包衣球形封装；
所述样本缓冲稀释液注于尾旋管内侧，所述稀释球和样本缓冲稀释液通过薄膜封装于尾管体内侧；所述导向嘴处设置有膜封层；所述顶针为用于穿刺膜封层，并与膜封层活动压紧的凸型结构;所述样本缓冲稀释液通过包衣封闭于稀释球内，所述稀释球通过蜡封或点胶设置于第一管体内侧顶部；所述顶针为用于穿刺膜封层，并与膜封层活动压紧的凸型结构。
2.根据权利要求1所述的检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，其特征在于：所述导向嘴前端外部套接有柔性保护环。
3.根据权利要求2所述的检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，其特征在于：所述软套外部套接有弹性封闭环。
4.根据权利要求3所述的检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，其特征在于：所述进样嘴处活动插接采集拭子或进样杯。
5.根据权利要求4所述的检测BRCA基因突变的PCR反应试剂盒，其特征在于：安装待用的所述检测棒其初始状态如下：
所述前套管其滑头初始状态为与第一喉段卡接，所述尾旋管其上端螺纹与中间管底部旋接。
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