CN112575016B - 原核生物中无膜细胞器的构建及应用 - Google Patents

原核生物中无膜细胞器的构建及应用 Download PDF

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Abstract

一种原核生物大肠杆菌中无膜细胞器的构建及应用，通过构建由如Seq ID No.1所示络新妇蜘蛛(Nephila clavipes)牵引丝蛋白MaSp1的重复肽段单体的串联体构成的蛋白质和由如Seq ID No.2所示的MaSp2重复肽段单体的串联体构成的蛋白质的重组蛛丝蛋白或类节肢弹性蛋白的表达载体并导入表达宿主中，经过诱导表达后形成可溶蛋白富集相，即无膜区室；无膜区室的组分蛋白以可溶状态存在，最大限度的保留了其生物活性。本发明首次通过大肠杆菌内的无膜细胞器生产1,3‑丙二胺，并首次在无膜细胞器内合成纳米颗粒，比起化学方法合成更加的温和与环保。

Description

原核生物中无膜细胞器的构建及应用
技术领域
本发明涉及的是一种生物工程领域的技术，具体是一种原核生物中无膜细胞器的构建及应用。
背景技术
区室化是细胞内部一种重要的生理过程，其使得不同的代谢途径局限于细胞内的特定区域。真核细胞中最常见的区室就是线粒体、叶绿体这些传统细胞器，这些细胞器都有单层或者双层，以磷脂双分子层为骨架的细胞器膜；原核细胞中最常见的区室称为细菌微区室(bacterial microcompartments)，其包括有蛋白质组成的外壳和具有酶活性的核心区。近些年来研究者们发现真核细胞内存在着各式各样的无膜细胞器，这些无膜细胞器主要由蛋白质和核酸组成，其没有外层的膜状结构，却能在细胞质或者细胞核中形成独立的区室结构。与传统的有膜细胞器相比，这些无膜细胞器内外物质交换更加迅速，并且能够对环境刺激快速做出响应。
现有技术在原核细胞内主要的区室化策略是过表达多个细菌微区室相关蛋白来模仿天然的细菌微区室，其主要缺陷和不足在于：形成细菌微区室需要多种蛋白的参与，增加了人工合成的复杂度；所形成的区室与细胞质之间有一层蛋白质构成的物理屏障，阻碍区室内外的物质交换。
发明内容
本发明针对现有技术存在的上述不足，提出一种原核生物大肠杆菌中无膜细胞器的构建及应用，利用重组蛛丝蛋白和类节肢弹性蛋白成功在大肠杆菌中构建了无膜区室，通过DNA重组技术将蛛丝蛋白或类节肢弹性蛋白与不同货物蛋白融合，实现目标功能蛋白的胞内共定位，以此构建具有生物活性的无膜区室。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明涉及一种原核生物中无膜细胞器的构建方法，通过构建重组蛛丝蛋白或类节肢弹性蛋白的表达载体并导入表达宿主中，经过诱导表达后形成可溶蛋白富集相，即无膜区室。
所述的重组蜘蛛丝蛋白包括：由如Seq ID No.1所示络新妇蜘蛛(Nephilaclavipes)牵引丝蛋白MaSp1的重复肽段单体(GRGGLGGQGAGAAAAAGGAGQGGYGGLGSQG)的串联体构成的蛋白质和由如Seq ID No.2所示的MaSp2重复肽段单体(GPGGYGPGQQGPSGPGSA8GPGGYGPGQQ)的串联体构成的蛋白质。
所述的类节肢弹性蛋白是指：由如Seq ID No.3所示的类节肢弹性蛋白保守肽段(GGRPSDSYGAPGGGN)串联体构成的蛋白质。
所述的重组蛛丝蛋白重复肽段的氨基酸序列来源于文献Hinman,M.B.,Lewis,R.V.J Biol Chem,1992,267,19320–19324.。
所述的类节肢弹性蛋白保守肽段的氨基酸序列来源于文献Ardell,D.H.,Andersen,S.O.Insect biochemistry and molecular biology,2001,31,965-970.。
所述的表达载体是指：4-64个所述重组蛛丝蛋白重复肽段串联体的表达质粒载体或4-64个所述类节肢弹性蛋白保守肽段串联体的表达质粒载体。
所述的表达宿主为大肠杆菌。
本发明涉及一种基于无膜细胞器的应用方法，通过构建至少一种由蛛丝蛋白或类节肢弹性蛋白与目标功能蛋白构成的融合蛋白的表达载体并导入表达宿主，经诱导表达后将目标功能蛋白定位在无膜区室中。
所述的融合蛋白包括来源于结构蛋白的内在无序结构域以及由连接肽相连接的目标功能蛋白，其中：无序结构域为4-64个所述重组蛛丝蛋白重复肽段串联体或4-64个所述类节肢弹性蛋白保守肽段串联体。
所述的目标功能蛋白为荧光蛋白和酶等具有生物活性的蛋白。
所述的连接肽为(GGS)4。
优选地，所述的融合蛋白为两种以上以定位多个目标功能蛋白。
所述的诱导表达是指：将所述蛋白表达质粒转入市售的大肠杆菌BL21(DE3)，对重组菌进行培养，并用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。
本发明涉及上述无膜细胞器的应用，将其用于生物催化与合成，具体为：用于生产1,3-丙二胺以及在胞内合成纳米颗粒。
技术效果
本发明首次在原核细胞中利用蛋白的液-液相分离构建了无膜区室，仅需要表达一种蛋白；所形成的的无膜区室由于与细胞质没有物理屏障，其物质交换更加迅速；无膜区室的组分蛋白以可溶状态存在，最大限度的保留了其生物活性。本发明首次通过大肠杆菌内的无膜细胞器生产1,3-丙二胺，并首次在无膜细胞器内合成纳米颗粒，比起化学方法合成更加的温和与环保。
附图说明
图1为实施例1SDS-PAGE验证目标蛋白的可溶性示意图；
图2为实施例1大肠杆菌胞内区室示意图；
图3为实施例1大肠杆菌胞内区室示意图；
图4为实施例2大肠杆菌胞内区室示意图；
图5为实施例3大肠杆菌胞内区室示意图；
图6为实施例4大肠杆菌胞内区室示意图；
图7为实施例5大肠杆菌胞内区室示意图；
图8为实施例5中1.3-丙二胺产量示意图。
具体实施方式
实施例1
诱导大肠杆菌形成无膜区室
本实施例具体步骤包括：构建由16个蜘蛛牵引丝蛋白MaSp1重复肽段单体(氨基酸组成为GRGGLGGQGAGAAAAAGGAGQGGYGGLGSQG)串联体构成的蛋白质表达载体pET28a4-MaspI16，将其转化进入表达宿主细胞大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中，将该重组表达菌株在含卡那霉素(0.05mg/mL)的4mL LB培养基中37℃/220rpm过夜培养，以1％的接种量转入含卡那霉素的20mL LB培养基中，37℃/220rpm培养至OD600为0.6左右时，加入200μM IPTG,继续培养6h，取样，通过SDS-PAGE验证目标蛋白的可溶性，如图1；通过Tht染色在显微镜下观察大肠杆菌胞内区室，如图2；通过透射电子显微镜(TEM)观察大肠杆菌胞内区室，如图3。
所述的LB培养基的成分包括：10g/L胰蛋白胨、5g/L酵母粉和10g/L
所述的Tht染色包括以下操作：将收取的细胞用含有0.1mg/mL的硫黄素T的PBS溶液重悬，室温染色10min后，用PBS洗涤两次。
所述透射电子显微镜制样包括以下操作：
对于完整细胞的TEM制样，收集的细胞在用去离子水冲洗重悬之后,取10μL菌液滴加到铜网上并静置15min，然后用滤纸吸去铜网上多余的菌液，自然风干。
对于细胞切片的TEM制样，收集的细胞用含有2.5％戊二醛的PBS重悬并在室温过夜固定，在用0.1M PB(pH 7.4)冲洗后用1％锇酸固定2h，接着用乙醇和丙酮逐级脱水，再在环氧树脂中55℃孵育2天。固化的树脂块用超薄切片机切下厚度50到100nm的切片，切下的薄片用柠檬酸铅和醋酸铀染色并润洗后挑于铜网上，自然风干。
实施例2
构建具有荧光活性的无膜区室
本实施例具体步骤包括：构建16个重组蛛丝蛋白Masp1重复肽段串联体与GFPmut蛋白融合蛋白表达载体pET28a4-MaspI16-gfp；融合蛋白的GFPmut肽段如Seq ID No.4所示的由连接肽(氨基酸组成为GGSGGSGGSGGS)连接于肽段串联体C端。
将以上表达载体转化进入表达宿主细胞大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中，将该重组表达菌株在含卡那霉素(0.05mg/mL)的4mL LB培养基中37℃/220rpm过夜培养，以1％的接种量转入含卡那霉素的20mL LB培养基中，37℃/220rpm培养至OD600为0.6左右时，加入200μM IPTG,继续培养6h，取样，荧光显微镜下观察大肠杆菌胞内区室，如图4。
所述的LB培养基的成分包括：10g/L胰蛋白胨、5g/L酵母粉和10g/L
实施例3
两个荧光蛋白在无膜区室中的共定位
本实施例具体步骤包括：构建16个重组蛛丝蛋白Masp1重复肽段串联体与GFPmut蛋白融合蛋白表达载体PET28a4-MaspI16-gfp；构建16个重组蛛丝蛋白Masp1重复肽段串联体与mcherry蛋白融合蛋白表达载体PACYC-MaspI16-rfp；构建16个重组蛛丝蛋白Masp2重复肽段串联体与mcherry蛋白融合蛋白表达载体PACYC-MaspII16-rfp；构建32个类节肢弹性蛋白保守肽段串联体与mcherry蛋白融合蛋白表达载体PACYC-R32-rfp
将pET28a4-MaspI16-gfp与pACYC-MaspI16-rfp/pACYC-MaspII16-rfp/pACYC-R32-rfp中的任意一个表达载体共同转化进入表达宿主细胞大肠杆菌Escherichia coliBL21(DE3)中，将该重组表达菌株在含卡那霉素(0.05mg/mL)与氯霉素(0.03mg/mL)的4mLLB培养基中37℃/220rpm过夜培养，以1％的接种量转入含卡那霉素与氯霉素的20mL LB培养基中，37℃/220rpm培养至OD600为0.6左右时，加入200μM IPTG,30℃继续培养6h，取样，荧光显微镜下观察大肠杆菌胞内区室，如图5。
实施例4
将金属硫蛋白定位于无膜区室中用于生产Se纳米材料
本实施例具体步骤包括：构建16个重组蛛丝蛋白Masp1重复肽段串联体与金属硫蛋白metallothionein(MT，来源于恶臭假单胞菌KT2400)融合蛋白表达载体pET28a4-MaspI16-MT；融合蛋白的MT肽段如Seq ID No.4所示的由连接肽(氨基酸组成为GGSGGSGGSGGS)连接于重组蛛丝蛋白肽段串联体C端。
将以上表达载体转化进入表达宿主细胞大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中，将该重组表达菌株在含卡那霉素(0.05mg/mL)的4mL LB培养基中37℃/220rpm过夜培养，以1％的接种量转入含卡那霉素的20mL LB培养基中，37℃/220rpm培养至OD600为0.6左右时，加入200μM IPTG，30℃继续培养1h，加入5mM的亚硒酸钠，继续培养6h，取样，用透射电子显微镜观察大肠杆菌胞内区室，如图6。
实施例5
将代谢通路中的两个酶定位于无膜区室中用于1,3-丙二胺的生产
本实施例具体步骤包括：构建16个重组蛛丝蛋白Masp1重复肽段串联体与Ddc蛋白融合蛋白表达载体pET28a4-MaspI16-ddc；构建16个重组蛛丝蛋白Masp1重复肽段串联体与Dat蛋白融合蛋白表达载体pACYC-MaspI16-dat。
将以上两个表达载体共转化进入表达宿主细胞大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中，将该重组表达菌株在含卡那霉素(0.05mg/mL)与氯霉素(0.03mg/mL)的4mL R/2培养基中37℃/220rpm过夜培养，以1％的接种量转入含卡那霉素与氯霉素的50mL R/2培养基中，37℃/220rpm培养至OD600为1.4左右时，加入IPTG诱导，30℃继续培养10h，取样，用透射电子显微镜观察大肠杆菌胞内区室，如图7。
所述的Dat蛋白为L-2,4diaminobutyrate:α-ketoglutarate 4-aminotransferase
所述的Ddc蛋白为L-2,4-diaminobutyrate decarboxylase，Dat与Ddc序列来自ATCC19606鲍曼不动杆菌
所述的R/2培养基的成分包括：组分A，2g/L(NH4)2HPO4、6.75g/L KH2PO4、0.93g/L一水合柠檬酸、0.5％(v/v)微量金属；组分B，10g/L葡萄糖、0.7g/L七水合硫酸镁。
如图8所示，为本实施例在不同IPTG浓度下1,3-丙二胺产量示意图。
首次在细菌中构建出无膜细胞器，也是首次利用重组结构蛋白构建无膜细胞器。
在宿主细胞中诱导表达目标蛋白，目标蛋白含有来源于结构蛋白的内在无序结构域，所述蛋白在诱导表达后会在胞内自发经历液-液相分离在胞内形成液态的浓缩相，即所述的无膜区室,通过融合表达具有功能的肽段，可以进一步设计出具有各种生物活性的无膜细胞器。
在诱导表达后所述蛋白会在细胞两极聚集，且仍以可溶形式存在；含有所述内在无序结构域的不同蛋白能实现在胞内的共定位；通过融合表达代谢途径中的酶可以合成1，3-丙二胺，通过融合表达金属硫蛋白可以在无膜细胞膜中合成纳米颗粒。
现有技术还无法在原核细胞中构建无膜细胞器，也未有技术涉及通过改造结构蛋白构建无膜细胞器的方法。
上述具体实施可由本领域技术人员在不背离本发明原理和宗旨的前提下以不同的方式对其进行局部调整，本发明的保护范围以权利要求书为准且不由上述具体实施所限，在其范围内的各个实现方案均受本发明之约束。
序列表
<110> 上海交通大学
<120> 原核生物中无膜细胞器的构建及应用
<130> fnb757e
<141> 2019-09-27
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 31
<212> PRT
<213> 络新妇蜘蛛牵引丝蛋白重复肽段单体(MaSp1)
<400> 1
Gly Arg Gly Gly Leu Gly Gly Gln Gly Ala Gly Ala Ala Ala Ala Ala
1 5 10 15
Gly Gly Ala Gly Gln Gly Gly Tyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly
20 25 30
<210> 2
<211> 28
<212> PRT
<213> 络新妇蜘蛛牵引丝蛋白重复肽段单体(MaSp2)
<400> 2
Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln Gly Pro Ser Gly Pro Gly
1 5 10 15
Ser Ala Gly Pro Gly Gly Tyr Gly Pro Gly Gln Gln
20 25
<210> 3
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列()
<400> 3
Gly Gly Arg Pro Ser Asp Ser Tyr Gly Ala Pro Gly Gly Gly Asn
1 5 10 15
<210> 4
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列()
<400> 4
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
1 5 10

Claims (6)

1.一种原核生物中无膜细胞器的应用，其特征在于，通过构建重组蛛丝蛋白或类节肢弹性蛋白的表达载体并导入表达宿主中，经过诱导表达后形成可溶蛋白富集相，即无膜区室并将目标功能蛋白定位在无膜区室中；
所述的表达载体包括：pET28a4-MaspI16、pET28a4-MaspI16-gfp、pET28a4-MaspI16-MT、PACYC-MaspI16-rfp、PACYC-MaspII16-rfp、PACYC-R32-rfp、pET28a4-MaspI16-ddc和pACYC-MaspI16-dat；
所述的重组蜘蛛丝蛋白包括：由如Seq ID No.1所示络新妇蜘蛛(Nephila clavipes)牵引丝蛋白MaSp1的重复肽段单体的串联体构成的蛋白质和由如Seq ID No.2所示的MaSp2重复肽段单体的串联体构成的蛋白质；
所述的类节肢弹性蛋白是指：由如Seq ID No.3所示的类节肢弹性蛋白保守肽段串联体构成的蛋白质。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征是，所述的重组蛛丝蛋白或类节肢弹性蛋白包括来源于结构蛋白的内在无序结构域以及由连接肽相连接的目标功能蛋白，其中：无序结构域为16个所述重组蛛丝蛋白重复肽段串联体或32个所述类节肢弹性蛋白保守肽段串联体。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征是，所述的目标功能蛋白为荧光蛋白和酶等具有生物活性的蛋白。
4. 根据权利要求3所述的应用，其特征是，所述的连接肽如Seq ID No.4所示，为(GGS)4。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征是，所述的诱导表达是指：将所述蛋白表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)，对重组菌进行培养，并用异丙基硫代半乳糖苷诱导表达。
6.一种根据上述任一权利要求所述的无膜细胞器的应用，其特征在于，将其用于生物催化与合成，具体为：用于生产1,3-丙二胺以及在胞内合成纳米颗粒。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104946710A (zh) * 2015-05-27 2015-09-30 上海交通大学 蜘蛛牵引丝蛋白优化表达方法
WO2019082935A1 (ja) * 2017-10-26 2019-05-02 国立研究開発法人理化学研究所 クモ糸タンパク質を光合成細菌にて発現させるためのヌクレオチド構築物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104946710A (zh) * 2015-05-27 2015-09-30 上海交通大学 蜘蛛牵引丝蛋白优化表达方法
WO2019082935A1 (ja) * 2017-10-26 2019-05-02 国立研究開発法人理化学研究所 クモ糸タンパク質を光合成細菌にて発現させるためのヌクレオチド構築物

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Conformation and dynamics of soluble repetitive domain elucidates the initial beta-sheet formation of spider silk;Oktaviani, NA等;《NATURE COMMUNICATIONS》;20180529;第9卷;第7页右栏-第8页左栏、Discussion *
Responsive Protein Hydrogels Assembled from Spider Silk Carboxyl-Terminal Domain and Resilin Copolymers;Fang Luo等;《Polymers》;20180814;第10卷(第8期);3.1部分 *

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