CN112574199B - Kras-G12C抑制剂杂环化合物 - Google Patents

Kras-G12C抑制剂杂环化合物 Download PDF

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Abstract

本申请涉及一类Kras‑G12C抑制剂杂环化合物，及其制备方法和该类化合物在肿瘤疾病，如肺癌、结直肠癌和胰腺癌等中的预防和治疗用途。在制备过程中，通过缩合反应、分子内关环反应、氯代反应、SN2反应、偶联反应、脱保护等一系列反应，得到本发明化合物。

Description

Kras-G12C抑制剂杂环化合物
技术领域
本申请涉及一类新型KRAS-G12C抑制剂，及其制备方法和该类化合物在肿瘤疾病，如肺癌、结直肠癌和胰腺癌等中的预防和治疗用途。本发明还涉及包含式（I）所示化合物的药物组合物及制备方法，以及所述化合物在肿瘤疾病,如肺癌、结直肠癌等中的预防和治疗用途。
背景技术
RAS蛋白是一类与GTP/GDP结合并具有GTP水解酶活性的小G蛋白。作为分子开关,RAS通过结合GTP而激活下游MAPK及PI3K-AKT等信号通路, 从而调控细胞生长、增殖、分化和凋亡等生命过程, 其突变与癌症发生发展密切相关。其有三个家族成员: HRAS、 KRAS和NRAS。KRAS突变是RAS家族中最常见的突变类型。 KRAS突变将导致其丧失GTP水解酶活性,从而持续激活下游信号通路, 促使细胞增殖失控而癌变; 同时,KRAS突变是肿瘤细胞的维持生长增殖所必需条件, 也是肿瘤获得性耐药的关键原因之一。据统计, RAS突变频率最高的5种癌症分别是胰腺导管腺癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、肺癌和皮肤黑色素瘤。肺癌中，肺腺癌的32％中可见RAS基因的突变，其中KRAS突变占96％。KRAS突变有多种类型，其中最常见的突变之一是G12C突变, 在非小细胞肺癌中发生的比例约为14%，在结肠癌中的比例约为4%，在胰腺癌中的比例约为2.9%。近年来，针对G12C突变KRAS，在被称为开关II的区域附近显示出变构口袋的存在(Nature,503,548,2013)，并且报道了通过与突变半胱氨酸形成共价键而不可逆地与G12C突变KRAS结合的化合物(Nature,503,548,2013、Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.,53,199,2014、CancerDiscov.,6,316,2016)。G12C突变KRAS选择性抑制剂通过与G12C突变KRAS形成共价键来抑制从非活性型向活性型的转变、切断下游信号，由此诱导癌细胞死亡。
到目前为止，已报道了多种选择性靶向KRAS-G12C的小分子抑制剂（WO2015054572、WO2017201161、WO2018217651、WO2019051291等），其中有部分候选药物（AMG510，MRTX849等）处于临床试验研究阶段，但此类分子的活性和药代动力学性能均有较大改进空间。本领域研究人员的技术诉求是：1）不断优化化合物分子结构，旨在提高化合物的活性和靶向性，减少药物的使用量，从而降低毒副作用；2）通过优化化合物的结构，得到药代动力学更为优异的化合物。
在相关专利中（WO2019051291A1）的化合物分子中吡啶2位的基团的最优选择为异丙基等未取代烷基。在其他的一些专利中（WO2019213516A1）引入了氨基、烷氧基、卤素等各类取代基团，这些化合物要么存在活性不高，要么存在半衰期过短或血药浓度不高等缺陷。
本申请的研发人员通过一系列探索，开发出了一类以KRAS-G12C为靶点的新型含氟杂环小分子化合物，有着出乎意料的优异活性和药代动力学性能，能够用于治疗肿瘤疾病如肺癌、结直肠癌、胰腺癌等。这类衍生物不仅能够提高这类化合物活性，还能够有效地延长化合物的半衰期以及提高血药浓度等。
发明内容
本发明提供式（I）化合物或其药学上可接受的盐，
Figure 160874DEST_PATH_IMAGE001
其中，
R1选自三氟甲基或二氟甲基；
R2选自-NH2或-OH。
本发明进一步提供式（II）或（III）化合物或其药学上可接受的盐，
Figure 373681DEST_PATH_IMAGE002
在一些实施方式中，
Figure 208299DEST_PATH_IMAGE003
为
Figure 481148DEST_PATH_IMAGE004
，优选为
Figure 882174DEST_PATH_IMAGE005
。
在一些实施方式中，R2为-NH2。
在另一方面，本发明还提供以下化合物或其药学上可接受的盐，
Figure 633092DEST_PATH_IMAGE006
Figure 567288DEST_PATH_IMAGE007
Figure 135672DEST_PATH_IMAGE008
Figure 23994DEST_PATH_IMAGE009
Figure 578603DEST_PATH_IMAGE010
。
在另一方面，本发明还提供以下化合物或其药学上可接受的盐，
Figure 868770DEST_PATH_IMAGE011
Figure 984887DEST_PATH_IMAGE012
。
在另一方面，本发明还提供以下化合物或其药学上可接受的盐，
Figure 94926DEST_PATH_IMAGE013
Figure 453226DEST_PATH_IMAGE014
Figure 722533DEST_PATH_IMAGE015
Figure 773666DEST_PATH_IMAGE016
。
另一方面，本申请提供药物组合物，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本申请的药物组合物还包括药学上可接受的辅料。
另一方面，本申请提供治疗哺乳动物由KRAS突变介导的疾病的方法，包括对需要该治疗的哺乳动物，优选人类，给予治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物。
另一方面，本申请提供本发明化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在制备治疗由KRAS突变介导的疾病的药物中的用途。
在本申请的部分实施方式中，所述由KRAS突变介导的疾病为癌症。优选地，所述癌症为实体瘤或血液肿瘤，更优选地，所述癌症为肺癌、结肠癌、或胰腺癌。
定义
除非另有说明，本申请中所用的下列术语具有下列含义。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照本领域普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
术语“治疗”意为将本申请所述化合物或制剂进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括：
(i) 预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病状态时；
(ii) 抑制疾病或疾病状态，即遏制其发展；
(iii) 缓解疾病或疾病状态，即使该疾病或疾病状态消退。
术语“治疗有效量”意指(i) 治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii) 减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii) 预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本申请化合物的用量。构成“治疗有效量”的本申请化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
作为药学上可接受的盐，例如，可以提及金属盐、铵盐、与有机碱形成的盐、与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与碱性或者酸性氨基酸形成的盐等。
术语“药物组合物”是指一种或多种本申请的化合物或其盐与药学上可接受的辅料组成的混合物。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本申请的化合物。
术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/ 或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。
本申请还包括与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本申请化合物。可结合到本申请化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、123I、125I和36Cl等。
某些同位素标记的本申请化合物（例如用3H及14C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化（即3H）和碳-14（即14C）同位素对于由于它们易于制备和可检测性是尤其优选的。正电子发射同位素，诸如15O、13N、11C和18F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究以测定底物占有率。通常可以通过与公开于下文的方案和/或实施例中的那些类似的下列程序，通过同位素标记试剂取代未经同位素标记的试剂来制备同位素标记的本申请化合物。
本申请化合物可以是不对称的，例如，具有一个或多个立体异构体。除非另有说明，所有立体异构体都包括，如对映异构体和非对映异构体。本申请的含有不对称碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。
本申请的药物组合物可通过将本申请的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
本申请的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本申请的实施例。
本申请具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本申请的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本申请的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
合成方法
流程1
Figure 869536DEST_PATH_IMAGE017
可按照流程1中所述路线制备本申请化合物。流程1中反应所得的每一个产物可以通过传统分离技术来得到，这种传统技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱分离等。起始原料可以通过自己合成或从商业机构（例如，但不限于Adrich或Sigma）购买获得。这些原料可以使用常规手段进行表征，比如物理常数和光谱数据。本申请所描述的化合物可以使用合成方法得到单一的异构体或者是异构体的混合物。
在流程1中，原料1和原料2进行缩合反应得到中间体3，中间体3在碱作用下发生分子内关环反应得到中间体4，接着三氯氧磷氯代得到中间体5。中间体5与化合物6进行SN2反应得到中间体7,接着经过钯催化的偶联反应接上芳香化合物8得到中间体9，中间体9脱去保户基后与烯酸酰氯发生缩合反应得到化合物10。
本发明实施例的有益效果是：
本发明实施例提供了一类以KRAS-G12C为靶点的新型含氟杂环小分子化合物，有着出乎意料的优异活性和药代动力学性能，能够用于治疗肿瘤疾病如肺癌、结直肠癌、胰腺癌等。这类衍生物不仅能够提高这类化合物活性，还能够有效地延长化合物的半衰期以及提高血药浓度等。
附图说明
图1为实施例20的单晶图谱
图2为实施例23的药代动力学谱图
图3为实施例26的药代动力学谱图
图4为实施例30的药代动力学谱图。
具体实施方式
下述非限制性实施例仅仅是说明性的，不以任何方式限制本申请。
除非另有说明，否则温度是摄氏温度。试剂购自国药集团化学试剂北京有限公司，阿法埃莎（Alfa Aesar）、或北京百灵威科技有限公司等商业供应商，并且这些试剂可直接使用无需进一步纯化，除非另有说明。
除非另有说明，否则下列反应在无水溶剂中、氮气或氩气的正压下或使用干燥管进行；反应瓶上装有橡胶隔膜，以便通过注射器加入底物和试剂；玻璃器皿烘干和/或加热干燥。
除非另有说明，否则柱色谱纯化使用青岛海洋化工厂的200-300目硅胶；制备薄层色谱分离使用烟台市化学工业研究所生产的薄层色谱硅胶预制板（HSGF254）；MS的测定用Thermo LCQ Fleet型（ESI）液相色谱-质谱联用仪。
核磁数据（1H NMR）使用Varian设备于400 MHz下运行。核磁数据使用的溶剂有CDCl3、CD3OD、D2O、DMSO- d 6 等，以四甲基硅烷（0.00 ppm）为基准或以残留溶剂为基准（CDCl3：7.26ppm；CD3OD：3.31ppm；D2O：4.79ppm；DMSO- d 6 ：2.50ppm）。当标明峰形多样性时，以下简写表示不同峰形：s（单峰）、 d（双重峰）、t（三重峰）、q（四重峰）、m（多重峰）、br（宽峰）、dd（双双重峰）、dt（双三重峰）。如果给出了耦合常数，则以Hertz（Hz）为单位。
缩略语：
CDCl<sub>3</sub> 氘代氯仿
DCM 二氯甲烷
DIEA N,N-二异丙基乙胺
DAST 二乙胺基三氟化硫
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
EtOAc 乙酸乙酯
Pd/C 钯碳
MeOH 甲醇
MS 质谱
PE 石油醚
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
Rf 比移值
实施例 1
4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-1-[2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 31527DEST_PATH_IMAGE018
步骤A：1-甲基-2-硝基-3-乙烯基吡啶
Figure 765127DEST_PATH_IMAGE019
在氮气保护下，将2-溴-3-硝基-4-甲基吡啶（1 g）、Pd(dppf)Cl2（337 mg）、碳酸钾（2 g）、乙烯三氟硼酸钾（0.94 g）溶于1,4-二氧六环/水（35 mL/5 mL）混合溶剂中，将体系升温至120℃搅拌过夜。冷却至室温，减压浓缩，残留物加入乙酸乙酯溶解，垫硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（603 m g）。
步骤B：2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基-3-硝基吡啶
Figure 721582DEST_PATH_IMAGE020
在氮气保护下，向装有四氢呋喃（3 ml）的封管中依次加入1-甲基-2-硝基-3-乙烯基吡啶（100mg）、NaI（99 mg）、三乙基(三氟甲基)硅烷（170 mg），封闭封管，随后升温至70℃搅拌过夜。冷却至室温，垫硅藻土过滤，减压旋干溶剂，残留物经硅胶制备板（EtOAc/PE =1/2）分离得到产物（27 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.49 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 5.2Hz, 1H), 2.84-2.92 (m, 1H), 2.43-2.52 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 1.80-1.89 (m,1H)。
步骤C：2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-胺
Figure 567397DEST_PATH_IMAGE021
在氢气氛围下，向异丙醇（10 ml）中依次加入2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基-3-硝基吡啶（91mg）、Pd/C（22 mg），随后升温至30℃搅拌过夜。冷却至室温，垫硅藻土过滤，减压旋干溶剂，残留物经硅胶制备板（EtOAc）分离得到产物（45 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 7.89 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 5.2Hz, 1H), 3.73 (s, 2H), 2.66-2.73 (m, 1H), 2.28-2.37 (m, 1H), 2.19 (s, 3H),1.79-1.88 (m, 1H)。
步骤D：2,6-二氯-5-氟烟酰胺
Figure 392134DEST_PATH_IMAGE022
冰水冷却下向2,6-二氯-5-氟烟酸（5.0 g）的二氯甲烷（25 mL）溶液中依次慢慢滴加草酰氯（3 mL）和DMF（0.1 mL），加完升温至室温搅拌2小时。减压浓缩，残留物加入无水THF（20 mL），冰水冷却下慢慢滴加氨水（10 mL），加完升温至室温搅拌1小时，加水（20 mL），乙酸乙酯萃取（3×30 mL）。合并萃取液，依次用饱和碳酸氢钠溶液、水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到白色固体产物（4.50 g），直接用于下一步反应。
步骤E：2,6-二氯-N-[(2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酰基]-5-氟烟酰胺
Figure 511400DEST_PATH_IMAGE023
0℃下，向2,6-二氯-5-氟烟酰胺（52 mg）的THF（10 mL）滴加草酰氯（60 mg），加完升温至75℃搅拌1小时。冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，残余物溶于四氢呋喃（5 mL）中，将2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-胺（45 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液缓慢加入到上述反应液中，加完室温搅拌1小时。减压浓缩，得到产物粗品（100 mg），直接用于下一步反应。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 10.55 (s, 1H), 9.97 (s, 1H), 8.38 (d, J = 5.2Hz, 1H), 7.88 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 2.89-2.97 (m,1H), 2.30-2.39 (m, 4H), 1.76-1.85 (m, 1H)。
步骤F： 7-氯-1-[2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
Figure 373176DEST_PATH_IMAGE024
在0℃下，向2,6-二氯-N-[(2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酰基]-5-氟烟酰胺（100mg,）的THF（5 mL）溶液中加入1 N双(三甲基硅烷基)氨基钾四氢呋喃溶液（0.52 mL），在0℃下搅拌5小时。加入氯化铵饱和水溶液（10 mL）淬灭反应，乙酸乙酯（30 mL）萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶制备板（EtOAc/PE = 1/1）分离得到产物（60 mg）。
步骤G：4,7-二氯-1-[2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 210682DEST_PATH_IMAGE025
0℃下，向7-氯-1-[2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（60 mg）的乙腈（5 mL）溶液中依次加入DIEA（51.6 mg）、三氯氧磷（36 mg），升温至80℃搅拌2小时。冷却至室温，减压浓缩，得到产物粗品（117 mg），直接用于下一步反应。
步骤H：(3S)-4-{7-氯-1-[2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧-1,2-二氢吡啶基[ 2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 947432DEST_PATH_IMAGE026
室温下，将4,7-二氯-1-[2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（117 mg）溶解于乙腈（8mL），冷却至0℃并在0℃下依次加入DIEA（101mg）、(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（38 mg），随后升至室温搅拌2小时。加水淬灭，DCM（10mL）萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶制备板（EtOAc/PE = 1/1）分离得到产物（40 mg）。
步骤I：(2-氟-6-羟基苯基)三氟硼酸钾
Figure 921204DEST_PATH_IMAGE027
在室温下，将2-氟-6-羟基苯硼酸（3 g）溶于乙腈（100 mL），加入氟化钾水溶液（10mL, 0.724 g/mL），混合溶液在室温下搅拌2分钟，滴加入酒石酸的四氢呋喃溶液（30 mL,0.241 g/mL），室温下搅拌1小时。过滤，滤液减压浓缩，用异丙醇打浆，过滤，用少量异丙醇洗涤滤饼，干燥滤饼得到产物（2.4 g）。
1H NMR (400 MHz, DMSO), 8.04 (q, J = 14.8 Hz, 1H), 6.87-6.93 (m, 1H),6.27-6.33 (m, 2H)。
步骤J：(3S)-4-{1-[2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 219462DEST_PATH_IMAGE028
在氮气保护下，将(3S)-4-{7-氯-1-[2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧-1,2-二氢吡啶基[ 2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（40mg）、（2-氟-6-羟基苯基）三氟硼酸钾（31 mg）、Pd(dppf)Cl2（5.5 mg）、醋酸钾（28 mg）加入1,4-二氧六环/水（5 mL/0.05 mL）混合溶剂中，升温至90℃搅拌1小时。冷却至室温，减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解，垫硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶制备板（EtOAc/PE = 1/1）分离得到产物（42 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.37 (s, 1H), 8.51 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.86-7.91 (m, 1H), 7.22-7.29 (m, 2H), 6.63-6.67 (m, 2H), 4.64-5.12 (m, 1H), 3.86-4.62 (m, 3H), 3.46-3.85 (m, 1H), 2.87-3.39 (m, 2H), 2.26-2.42 (m, 2H), 2.13(s, 1.5H), 2.11 (s, 1.5H), 1.42-1.65 (m, 13H)。
步骤K：1-(2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-((S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 403318DEST_PATH_IMAGE029
0℃下，向(3S)-4-{1-[2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（42mg）的DCM（1.5 mL）溶液中加入三氟乙酸（0.5 mL），升至室温搅拌0.5小时。减压浓缩，得到产物粗品，直接用于下一步反应。
步骤L：4-((S)-4-丙烯酰-2-甲基哌嗪-1-基)-1-[2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 445224DEST_PATH_IMAGE030
在0℃下，向1-(2-(2,2-二氟环丙基)-4-甲基吡啶-3-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-((S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（25 mg）的DCM（3 mL）溶液中，依次加入DIEA（22 mg）、丙烯酰氯（2.2 mg），0℃搅拌15分钟。加入饱和碳酸氢钠水溶液（5 mL）淬灭反应，DCM（10 mL）萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EtOAc/PE = 3/1）纯化得到产物（8 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.37 (s, 1H), 8.54 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.88-7.92 (m, 1H), 7.26-7.31 (m, 2H), 6.50-6.72 (m, 3H), 6.39 (d, J = 16.8 Hz,1H), 5.80 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.17-5.30 (m, 0.3H), 4.62-5.03 (m, 1.7H),4.34-4.59 (m, 1H), 3.94-4.28 (m, 1H), 3.76-3.93 (m, 1H), 3.41-3.75 (m, 2H),2.87-3.31 (m, 1H), 2.25-2.46 (m, 1H), 2.14 (s, 1.5H), 2.13 (s, 1.5H), 1.42-1.70 (m, 4H)。
实施例2
4-((S)-2-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-1-[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6 -羟基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 774967DEST_PATH_IMAGE031
步骤A：2,4-二甲基-3-硝基吡啶
Figure 244126DEST_PATH_IMAGE032
氮气保护下，将2-溴-4-甲基-3-硝基吡啶（2.4 g）、三甲基环三硼氧烷（2.8 g）、Pd(dppf)Cl2（0.4 g）和碳酸钾（4.6 g）分散于1,4-二氧六环（30 mL）和H2O（5 mL）的混合溶剂中，随后升温至120℃回流3小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（1.6 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.42 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 4.8Hz, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.31 (s, 3H)。
步骤B：4-甲基-3-硝基苯甲醛
Figure 525065DEST_PATH_IMAGE033
室温下，将2,4-二甲基-3-硝基吡啶（1.6 g）和二氧化硒（1.8 g）分散于1,4-二氧六环（30 ml）中，随后升温至100℃回流过夜。冷却至室温，反应混合物垫硅藻土过滤，乙酸乙酯（30 ml）洗涤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（0.8 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 10.01 (s, 1H), 8.74 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.52(d, J = 5.2 Hz, 1H), 2.40 (s, 3H)。
步骤C：2-(二氟甲基)-4-甲基-3-硝基吡啶
Figure 636241DEST_PATH_IMAGE034
0℃下，向4-甲基-3-硝基苯甲醛（0.8 g）的二氯甲烷（10 mL）溶液中缓慢加入DAST（1.6 g），升至室温（20℃）搅拌2小时。冷却下，滴加饱和碳酸氢钠溶液至没有气泡产生，搅拌15分钟，分层，有机相分离，水相用二氯甲烷萃取。合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（0.28 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.64 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 4.8Hz, 1H), 6.77 (t, J = 54.4 Hz, 1H), 2.43 (s, 3H)。
步骤D： 2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-胺
Figure 443660DEST_PATH_IMAGE035
向2-(二氟甲基)-4-甲基-3-硝基吡啶（0.28 g）的异丙醇（5 mL）溶液中加入Pd/C（60 mg），随后用氢气充分换气后搅拌过夜。通过硅藻土过滤，将滤液减压浓缩得到产物（192 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 7.88 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 4.8Hz, 1H), 6.68 (t, J = 54.8 Hz, 1H), 4.20 (s, 2H), 2.20 (s, 3H)。
步骤E： 2,6-二氯-N-{[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酰基}-5-氟烟酰胺
Figure 847834DEST_PATH_IMAGE036
0℃下，向2,6-二氯-5-氟烟酰胺（254 mg）的四氢呋喃（20 mL）溶液中加入草酰氯（310 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液，升至80℃搅拌1小时。冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，后溶于四氢呋喃中，将2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-胺（192 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液缓慢加入到上述反应液中，后室温搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液（5 mL），后加入乙酸乙酯（15 mL），有机相依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（380 mg），直接进行下一步。
步骤F：7-氯-1-[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-4-羟基吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 616070DEST_PATH_IMAGE037
0℃下，向2,6-二氯-N-{[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酰基}-5-氟烟酰胺（380 mg）的四氢呋喃（20 mL）溶液中加入KHMDS（1 N）的四氢呋喃（2 mL）溶液，升至室温（20℃）搅拌2小时，加入饱和氯化铵水溶液（10 mL），后加入乙酸乙酯（20 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（180mg），直接进行下一步。
步骤G： 4,7-二氯-1-[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 999778DEST_PATH_IMAGE038
向7-氯-1-[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-4-羟基吡啶[2,3-d]嘧啶-2-酮（180 mg）的乙腈（10 mL）溶液中加入三氯氧磷（153 mg）和DIEA（200 mg）。升至80℃搅拌1小时。冷至室温，减压浓缩得到产物，直接进行下一步。
步骤H：(S)-4-{7-氯-1-[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 802649DEST_PATH_IMAGE039
室温下，向4,7-二氯-1-[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-酮的乙腈（10 ml）溶液中加入(S)-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（120 mg）和DIEA（200mg），室温下搅拌1小时，加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE= 1/3）纯化得到产物（58 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.59 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 7.2Hz, 0.5H), 7.73 (d, J = 7.2 Hz, 0.5H), 7.44 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.40-6.68(m, 1H), 4.53-5.02 (m, 1H), 3.84-4.49 (m, 3H), 3.42-3.76 (m, 1H), 2.86-3.40(m, 2H), 2.13 (s, 1.5H), 2.10 (s, 1.5H), 1.51 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.48 (s,9H), 1.39 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H)。
步骤I：(S)-4-{1-[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 109216DEST_PATH_IMAGE040
氮气保护下，将(S)-4-{7-氯-1-[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（58 mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（50 mg）、Pd(dppf)Cl2（10mg）和醋酸钾（40mg）分散于1,4-二氧六环（10mL）和H2O（1 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃回流1小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（45 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.13 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 5.2Hz, 1H), 7.88 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.24-7.30 (m,1H), 6.46-6.74 (m, 3H), 4.72-5.15 (m, 1H), 3.88-4.56 (m, 3H), 3.52-3.82 (m,1H), 2.96-3.42 (m, 2H), 2.18 (s, 1.5H), 2.15 (s, 1.5H), 1.54 (d, J = 6.0 Hz,1.5H), 1.50 (s, 9H), 1.46 (d, J = 6.0 Hz, 1.5H)。
步骤J：1-[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-((S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 630327DEST_PATH_IMAGE041
室温下，将(S)-4-{1-[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(12 mg)加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤K： 4-((S)-2-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-1-[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6 -羟基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 676780DEST_PATH_IMAGE042
0℃下，将上步反应得到的1-[2-(二氟甲基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（100 mg）溶于DCM（3 ml），随后缓慢滴加丙烯酰氯（5 mg）的DCM（2.5 mL）溶液，在室温下搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（19 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.02-9.15 (brs, 1H), 8.64 (d, J = 5.2 Hz,1H), 7.89 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.24-7.30 (m, 1H),6.46-6.73 (m, 4H), 6.40 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 11.6 Hz, 1H),4.21-5.22 (m, 3H), 3.46-4.09 (m, 3H), 2.93-3.32 (m, 1H), 2.17 (s, 1.5H), 2.15(s, 1.5H), 1.42-1.64 (m, 3H)。
实施例3
4-((S)-2-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-1-[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6 -羟基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 334158DEST_PATH_IMAGE043
步骤A：2-(1-乙氧基乙烯基)-4-甲基-3-硝基吡啶
Figure 581599DEST_PATH_IMAGE044
氮气保护下，将2-溴-4-甲基-3-硝基吡啶（1.1 g）、三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡（2.2 g）和Pd(dppf)Cl2（0.2 g）分散于1,4-二氧六环（30 mL）中，随后升温至120℃回流24小时。冷却至室温，加入饱和KF水溶液（50 mL）继续搅拌1小时，后将反应混合物垫硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯（50 mL×3）萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（0.9 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.49 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 5.2Hz, 1H), 5.15 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.87 (q, J = 7.2Hz, 2H), 2.34 (s, 3H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤B：1-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)乙-1-酮
Figure 822963DEST_PATH_IMAGE045
室温下，将2-(1-乙氧基乙烯基)-4-甲基-3-硝基吡啶（0.9 g）溶于THF（20 mL）中，加入盐酸（4 N）溶液（20 mL），随后搅拌至反应完全。用氢氧化钠（1 N）溶液调至pH=7-8，后用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到产物（0.75 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 4.8Hz, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.37 (s, 3H)。
步骤C：2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基-3-硝基吡啶
Figure 814052DEST_PATH_IMAGE046
0℃下，向1-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)乙-1-酮（0.4 g）的二氯甲烷（10 mL）溶液中缓慢加入DAST（0.8 g），升至50℃反应过夜。降至室温，向反应液中缓慢滴加饱和碳酸氢钠溶液至没有气泡产生，搅拌15分钟，分层，有机相分离，水相用二氯甲烷萃取。合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（0.2 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.55 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 5.2Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.01 (t, J = 19.2 Hz, 3H)。
步骤D：
Figure 325936DEST_PATH_IMAGE047
向2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基-3-硝基吡啶（0.2 g）的异丙醇溶液（5 mL）加入Pd/C（80 mg），随后用氢气充分换气后搅拌过夜。通过硅藻土过滤，将滤液减压浓缩得到产物（140 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 7.85 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 4.8Hz, 1H), 4.24 (s, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.09 (t, J = 20.0 Hz, 3H)。
步骤E： 2,6-二氯-N-{[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酰基}-5-氟烟酰胺
Figure 603334DEST_PATH_IMAGE048
0℃下，向2,6-二氯-5-氟烟酰胺（124 mg）的四氢呋喃（20 mL）溶液中加入草酰氯（150 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液，升至80℃搅拌1小时。冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，后溶于四氢呋喃（2 mL）中，将2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-胺（102 mg）的四氢呋喃（2mL）溶液缓慢加入到上述反应液中，室温搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液（5 mL）和乙酸乙酯（15 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（240 mg），直接进行下一步。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 10.17 (s, 1H), 10.01 (s, 1H), 8.39 (d, J =4.8 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 2.33 (s,3H), 2.08 (t, J = 19.6 Hz, 3H)。
步骤F：7-氯-1-[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-4-羟基吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 833458DEST_PATH_IMAGE049
0℃下，向2,6-二氯-N-{[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酰基}-5-氟烟酰胺（240 mg）的四氢呋喃（20 mL）溶液中加入KHMDS（1 N）的四氢呋喃溶液（1.5 mL），升至室温（20℃）搅拌2小时，加入饱和氯化铵水溶液（10 mL）和乙酸乙酯（20 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到产物,直接进行下一步。
步骤G： 4,7-二氯-1-[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 864124DEST_PATH_IMAGE050
向7-氯-1-[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-4-羟基吡啶[2,3-d]嘧啶-2-酮的乙腈（10 mL）溶液加入三氯氧磷（180 mg）和DIEA（228 mg）。升至80℃搅拌1小时。冷至室温，减压浓缩得到产物，直接进行下一步。
步骤H：(S)-4-{7-氯-1-[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 496094DEST_PATH_IMAGE051
室温下，向4,7-二氯-1-[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-酮的乙腈（10 ml）溶液中加入(S)-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（100 mg）和DIEA（220 mg），室温下搅拌1小时，加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE= 1/1）纯化得到产物（107 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.57 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.0Hz, 0.5H), 7.71 (d, J = 8.0 Hz, 0.5H), 7.40 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.54-4.96(m, 1H), 3.82-4.48 (m, 3H), 3.42-3.78 (m, 1H), 2.88-3.40 (m, 2H), 2.11 (s,1.5H), 2.09 (s, 1.5H), 1.90-2.01 (m, 3H), 1.46-1.53 (m, 10.5H), 1.38 (d, J =6.8 Hz, 1.5H)。
步骤I：(S)-4-{1-[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 819759DEST_PATH_IMAGE052
氮气保护下，将(S)-4-{7-氯-1-[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（107 mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（100 mg）、Pd(dppf)Cl2（20mg）和醋酸钾（80mg）分散于1,4-二氧六环（10 mL）和H2O（1 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃回流1小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（79 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.21 (s, 0.5H), 9.19 (s, 0.5H), 8.61 (d, J =4.8 Hz, 1H), 7.86 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.24-7.29(m, 1H), 6.64-6.69 (m, 2H), 4.70-5.02 (m, 1H), 3.88-4.50 (m, 3H), 3.44-3.78(m, 1H), 2.98-3.42 (m, 2H), 2.17 (s, 1.5H), 2.14 (s, 1.5H), 1.94-2.04 (m,3H), 1.49-1.54 (m, 10.5H), 1.45 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H)。
步骤J：1-[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 802759DEST_PATH_IMAGE053
室温下，将(S)-4-{1-[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(79mg)加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液(2 ml)（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤K： 4-((S)-2-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-1-[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6 -羟基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 368607DEST_PATH_IMAGE054
0℃下，将上步反应得到的1-[2-(1,1-二氟乙基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（200mg）溶于DCM (10 ml)，随后缓慢滴加丙烯酰氯（9 mg）的DCM（4.5 mL）溶液，在室温下搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（49 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.15-9.21 (brs, 1H), 8.61 (d, J = 5.2 Hz,1H), 7.87 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.24-7.30 (m, 1H),6.50-6.68 (m, 3H), 6.40 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 10.8 Hz, 1H),4.21-5.18 (m, 3H), 3.42-4.09 (m, 3H), 2.96-3.30 (m, 1H), 2.11-2.20 (m, 3H),1.94-2.04 (m, 3H), 1.41-1.58 (m, 3H)。
实施例4
4-((S)-2-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-1-[2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6 -羟基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 714137DEST_PATH_IMAGE055
步骤A：2-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)丙-2-醇
Figure 739862DEST_PATH_IMAGE056
将1-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)乙-1-酮（180mg）溶于THF（30 mL）溶液中，后冷却至-70℃，随后用注射器将甲基溴化镁（3 N）的THF（0.4 mL）溶液缓慢加入到反应液中，继续搅拌5小时。升至室温，加入饱和氯化铵水溶液后搅拌15分钟，反应液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/7）分离得到产物（172mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.46 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 4.8Hz, 1H), 3.56 (s, 1H), 2.30 (s, 3H), 1.60 (s, 6H)。
步骤B：2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基-3-硝基吡啶
Figure 678999DEST_PATH_IMAGE057
0℃下，向2-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)丙-2-醇（172 mg）的二氯甲烷（10 mL）溶液中缓慢加入DAST（0.4 g），升至室温继续搅拌3小时。向反应液中缓慢滴加饱和碳酸氢钠溶液至没有气泡产生，搅拌15分钟，分层，有机相分离，水相用二氯甲烷萃取。合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE= 1/6）纯化得到产物（150 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.47 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 4.8Hz, 1H), 2.31 (s, 3H), 1.77 (d, J = 22.4 Hz, 6H)。
步骤C： 2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-胺
Figure 550004DEST_PATH_IMAGE058
向2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基-3-硝基吡啶（150 mg）的异丙醇溶液（5 mL）加入Pd/C（30 mg），随后用氢气充分换气后搅拌5小时。通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE= 1/3）纯化得到产物（64 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 7.80 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 4.8Hz, 1H), 4.08-4.52 (brs, 2H), 2.13 (s, 3H), 1.78 (d, J = 22.8 Hz, 6H)。
步骤D： 2,6-二氯-N-{[2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酰基}-5-氟烟酰胺
Figure 386592DEST_PATH_IMAGE059
0℃下，向2,6-二氯-5-氟烟酰胺（80 mg）的四氢呋喃（10 mL）溶液中加入草酰氯（97 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液，升至80℃搅拌1小时。冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，后溶于四氢呋喃（2 mL）中，将2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-胺（64 mg）的四氢呋喃（2mL）溶液缓慢加入到上述反应液中，后室温搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液（5 mL），后加入乙酸乙酯（15 mL），有机相依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（160 mg），直接进行下一步。
步骤E：7-氯-1-[2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-4-羟基吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 317639DEST_PATH_IMAGE060
0℃下，向2,6-二氯-N-{[2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酰基}-5-氟烟酰胺（160 mg）的四氢呋喃（20 mL）溶液中加入KHMDS（1 N）的四氢呋喃溶液（1.0 mL），升至室温（20℃）搅拌2小时，加入饱和氯化铵水溶液（10 mL），后加入乙酸乙酯（20 mL），有机相依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE= 1/2）纯化得到产物（46 mg）
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.53 (s, 1H), 8.53 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.21(d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.68 (d, J =23.2 Hz, 3H), 1.57 (d, J = 23.2 Hz, 3H)。
步骤F： 4,7-二氯-1-[2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 9651DEST_PATH_IMAGE061
向7-氯-1-[2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-4-羟基吡啶[2,3-d]嘧啶-2-酮（46 m g）的乙腈（10 mL）溶液加入三氯氧磷（40 mg）和DIEA（50 mg）。升至80℃搅拌1小时。冷至室温，减压浓缩得到产物，直接进行下一步。
步骤G：(S)-4-{7-氯-1-[2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 543401DEST_PATH_IMAGE062
室温下，向4,7-二氯-1-[2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-酮的乙腈（10 ml）溶液中加入(S)-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（30 mg）和DIEA（50mg），室温下搅拌1小时，加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE= 1/3）纯化得到产物（50 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.47 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.70-7.73 (m, 1H),7.21 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.58-4.82 (m, 1H), 3.78-4.32 (m, 3H), 3.42-3.68 (m,1H), 2.92-3.38 (m, 2H), 2.08 (s, 1.5H), 2.06 (s, 1.5H), 1.56-1.68 (m, 6H),1.48 (s, 9H), 1.44 (d, J = 6.4 Hz, 1.5H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 1.5H)。
步骤H：(S)-4-{1-[2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 738890DEST_PATH_IMAGE063
氮气保护下，将(S)-4-{7-氯-1-[2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（50 mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（44 mg）、Pd(dppf)Cl2（8mg）和醋酸钾（39mg）分散于1,4-二氧六环（10 mL）和H2O（1 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃回流1小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（31 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.53 (s, 1H), 8.54 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.83-7.87 (m, 1H), 7.23-7.28 (m, 2H), 6.64-6.69 (m, 2H), 4.72-4.92 (m, 1H), 3.86-4.40 (m, 3H), 3.52-3.74 (m, 1H), 3.02-3.38 (m, 2H), 2.13 (s, 1.5H), 2.10 (s,1.5H), 1.67-1.70 (m, 3H), 1.62-1.64 (m, 3H), 1.45-1.49 (m, 12H)。
步骤I：1-[2-(2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 339373DEST_PATH_IMAGE064
室温下，将(S)-4-{1-[2-(2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(31 mg)加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤J： 4-((S)-2-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-1-[2-(2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6 -羟基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 253102DEST_PATH_IMAGE065
0℃下，将上步反应得到的1-[2-(2-(2-氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（33 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（3.6 mg）的DCM（2 mL）溶液，在室温下搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（9 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.50 (s, 1H), 8.55 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.84-7.88 (m, 1H), 7.23-7.30 (m, 2H), 6.52-6.69 (m, 3H), 6.39 (dd, J = 16.4 Hz,1.2 Hz, 1H), 5.79 (dd, J = 10.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 4.97-5.09 (m, 0.5H), 4.68-4.84 (m, 1H), 4.44-4.58 (m, 1H), 4.23-4.36 (m, 0.5H), 3.50-4.04 (m, 3H),2.97-3.30 (m, 1H), 2.07-2.15 (m, 3H), 1.68-1.70 (m, 3H), 1.62-1.64 (m, 3H),1.41-1.54 (m, 3H)。
实施例5
4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-1-[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6 -羟基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 465909DEST_PATH_IMAGE066
步骤A：(E)-2-(2-溴-3-硝基吡啶-4-基)-N,N-二甲基乙烯-1-胺
Figure 47063DEST_PATH_IMAGE067
在氮气保护下，将2-溴-4-甲基-3硝基吡啶（1g）、N'N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛（1.65 g）溶于DMF（6 mL）中，将体系升温至100℃搅拌过夜。降至室温，加入DCM（50 mL）稀释，用水（20 mL）洗涤3次，有机相减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/1）分离得到产物（1.068 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 7.65 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 12.8Hz, 1H), 6.96 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 2.71 (s, 6H)。
步骤B：2-溴-3-硝基异烟醛
Figure 178967DEST_PATH_IMAGE068
在室温下，将(E)-2-(2-溴-3-硝基吡啶-4-基)-N,N-二甲基乙烯-1-胺（1.198 g）溶于四氢呋喃/水（15 mL/15 mL）混合溶剂中，在搅拌下分批加入高碘酸钠（2.8 g），搅拌2小时。垫硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/1）分离得到产物（742 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.95 (s, 1H), 8.78 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.80(d, J = 4.8 Hz, 1H)。
步骤C：2-溴-4-(二氟甲基)-3-硝基吡啶
Figure 347037DEST_PATH_IMAGE069
在0℃下，将2-溴-3-硝基异烟醛（742 mg）溶于二氯甲烷（15 mL）中，在搅拌下分批加入二乙胺基三氟化硫（5.23 g），0℃下搅拌3小时。加入饱和碳酸氢钠溶液调节混合溶液pH至8，分液并用无水硫酸钠干燥有机相，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/1）分离得到产物（560 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.68 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 4.8Hz, 1H), 6.81(t, J=54.0 Hz, 1H)。
步骤D： 4-(二氟甲基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶
Figure 97955DEST_PATH_IMAGE070
氮气保护下，将2-溴-4-(二氟甲基)-3-硝基吡啶（253mg）、异丙烯基硼酸频哪醇酯（300mg）、Pd(dppf)Cl2（50mg）和碳酸钾（300mg）分散于1,4-二氧六环（20 mL）和H2O（4 mL）的混合溶剂中，随后升温至120℃回流3小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（200mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.12 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 5.2Hz, 1H), 6.86 (t, J = 54.4 Hz, 1H), 5.35 (s, 1H), 5.17 (s, 1H), 2.20 (s, 3H)。
步骤E： 4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-胺
Figure 268036DEST_PATH_IMAGE071
向4-(二氟甲基)-3-硝基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶（200 mg）的异丙醇（5 mL）溶液加入Pd/C（60 mg），随后用氢气充分换气后搅拌过夜。通过硅藻土过滤，将滤液旋干得到产物（150 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.04 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 4.8Hz, 1H), 6.58 (t, J = 54.8 Hz, 1H), 4.09 (s, 2H), 3.01-3.08 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。
步骤F： 2,6-二氯-N-{[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]氨基甲酰基}-5-氟烟酰胺
Figure 711787DEST_PATH_IMAGE072
0℃下，向2,6-二氯-5-氟烟酰胺（93 mg）的四氢呋喃（30 mL）溶液中加入草酰氯（115 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液，升至80℃搅拌1小时。冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，后溶于四氢呋喃中，将4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-胺（83 mg）的四氢呋喃溶液（2 mL）缓慢加入到上述反应液中，后室温搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液（5 mL），后加入乙酸乙酯（15 mL），有机相依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（189 mg），直接进行下一步。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 10.21 (s, 1H), 9.98 (s, 1H), 8.70 (d, J = 4.8Hz, 1H), 7.87 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.73 (t, J =54.4 Hz, 1H), 3.25-3.32 (m, 1H), 1.25 (d, J = 6.4 Hz, 6H)。
步骤G：7-氯-1-[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]-6-氟-4-羟基吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 98644DEST_PATH_IMAGE073
0℃下，向2,6-二氯-N-{[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]氨基甲酰基}-5-氟烟酰胺（189 mg）的四氢呋喃（20 mL）溶液中加入KHMDS（1 N）的四氢呋喃溶液（1.2 mL），升至室温（20℃）搅拌2小时，加入饱和氯化铵水溶液（10 mL），后加入乙酸乙酯（20 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（173 mg），直接进行下一步。
步骤H： 4,7-二氯-1-[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 918832DEST_PATH_IMAGE074
向7-氯-1-[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]-6-氟-4-羟基吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（173 mg）的乙腈（10 mL）溶液加入三氯氧磷（138 mg）和DIEA（174 mg）。升至80℃搅拌1小时。冷至室温，减压浓缩得到产物，直接进行下一步。
步骤I：(S)-4-{7-氯-1-[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 68054DEST_PATH_IMAGE075
室温下，向4,7-二氯-1-[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的乙腈（10 ml）溶液中加入(S)-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（120 m g）和DIEA（200 mg），室温下搅拌1小时，加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE= 3/1）纯化得到产物（73 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.81 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.75-7.78 (m, 1H),7.43-7.46 (m, 1H), 6.38-6.66 (m, 1H), 4.60-4.96 (m, 1H), 3.82-4.42 (m, 3H),3.48-3.78 (m, 1H), 2.92-3.38 (m, 2H), 2.52-2.68 (m, 1H), 1.42-1.52 (m, 12H),1.16-1.19 (m, 3H), 1.11-1.14 (m, 3H)。
步骤J：(S)-4-{1-[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 948285DEST_PATH_IMAGE076
氮气保护下，将(S)-4-{7-氯-1-[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（73 mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（60 mg）、Pd(dppf)Cl2（12mg）和醋酸钾（55mg）分散于1,4-二氧六环（10mL）和H2O（1 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃回流1小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（35 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.97 (s, 0.6H), 8.96 (s, 0.4H), 8.88 (d, J =5.2 Hz, 1H), 7.87-7.91 (m, 1H), 7.54 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.23-7.29 (m, 1H),6.47-6.76 (m, 3H), 4.72-5.12 (m, 1H), 3.88-4.60 (m, 3H), 3.50-3.86 (m, 1H),2.98-3.42 (m, 2H), 2.72-2.86 (m, 1H), 1.47-1.52 (m, 12H), 1.19-1.22 (m, 3H),1.04-1.07 (m, 3H)。
步骤K：1-[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 58324DEST_PATH_IMAGE077
室温下，将(S)-4-{1-[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(15 mg)加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤L： 4-((S)-2-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-1-[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6 -羟基苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 935667DEST_PATH_IMAGE078
0℃下，将上步反应得到的1-[4-(二氟甲基)-2-异丙基吡啶-3-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-4-( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（100mg）溶于DCM（10 ml），随后缓慢滴加丙烯酰氯（1 mg）的DCM（0.5 mL）溶液，加完升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（6mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.93-8.96 (m, 1H), 8.89 (d, J = 4.8 Hz, 1H),7.88-7.92 (m, 1H), 7.54 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.24-7.30 (m, 1H), 6.46-6.75 (m,4H), 6.41 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 10.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.38-5.30(m, 2H), 3.46-4.55 (m, 4H), 2.98-3.34 (m, 1H), 2.66-2.88 (m, 1H), 1.38-1.47(m, 3H), 1.19-1.22 (m, 3H), 1.05-1.07 (m, 3H)。
实施例6
4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 80340DEST_PATH_IMAGE079
步骤A：4-甲基-3-硝基-2-{1,1,1-三氟-2-[(三甲基甲硅烷基)氧基]丙-2-基}吡啶
Figure 600314DEST_PATH_IMAGE080
0℃下，将1-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)乙-1-酮（7.7 g）和醋酸钾（4.3 g）分散于DMSO（30 mL）中，后将三氟甲基三甲基硅烷（13 g）缓慢加入到上述反应液中，升至室温搅拌5小时，用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，后用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩得到产物（12.9 g），直接进行下一步。
步骤B：1,1,1-三氟-2-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)丙-2-醇
Figure 463228DEST_PATH_IMAGE081
室温下，将4-甲基-3-硝基-2-{1,1,1-三氟-2-[(三甲基甲硅烷基)氧基]丙-2-基}吡啶（12.9 g）和碳酸钾（5.5 g）分散于甲醇（30 ml）中，随后搅拌1小时。反应混合物垫硅藻土过滤，甲醇（30 ml）洗涤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（6.2 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.55 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 4.8Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 2.31 (s, 3H), 1.76 (s, 3H)。
步骤C：4-甲基-3-硝基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶
Figure 484274DEST_PATH_IMAGE082
0℃下，向1,1,1-三氟-2-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)丙-2-醇（6.2 g）的二氯甲烷（10 mL）溶液中缓慢加入DAST（7.6 g），加完慢慢升至室温（20℃）搅拌过夜。冷却下，滴加饱和碳酸氢钠溶液至没有气泡产生，搅拌15分钟，分层，有机相分离，水相用二氯甲烷萃取。合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（5.1 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.61 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 5.2Hz, 1H), 6.20 (s, 1H), 5.82 (s, 1H), 2.40 (s, 3H)。
步骤D： 4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺
Figure 981989DEST_PATH_IMAGE083
向4-甲基-3-硝基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶（0.4 g）的甲醇（10 mL）和水（10 mL）的混合溶液中加入还原铁粉（0.48 g）和氯化铵（0.45 g），随后室温搅拌过夜。后反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（0.27 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 7.96 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 4.4Hz, 1H), 6.28-6.29 (m, 1H), 5.83-5.84 (m, 1H), 3.74 (s, 2H), 2.18 (s, 3H)。
步骤E： 2,6-二氯-5-氟-N-{[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]氨基甲酰基}烟酰胺
Figure 204023DEST_PATH_IMAGE084
0℃下，向2,6-二氯-5-氟烟酰胺（240 mg）的四氢呋喃（30 mL）溶液中加入草酰氯（260 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液，升至80℃搅拌1小时。冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，后溶于四氢呋喃（2 mL）中，将4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺（202 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液缓慢加入到上述反应液中，后室温搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液（5mL），后加入乙酸乙酯（15 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（480 mg），直接进行下一步。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.96 (s, 1H), 9.87 (s, 1H), 8.48 (d, J = 5.2Hz, 1H), 7.87 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.19-6.21 (m,1H), 5.78-5.80 (m, 1H), 2.35 (s, 3H)。
步骤F： 7-氯-6-氟-4-羟基-1-[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 288654DEST_PATH_IMAGE085
0℃下，向2,6-二氯-5-氟-N-{[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]氨基甲酰基}烟酰胺（156 mg）的四氢呋喃（10 mL）溶液中加入KHMDS（1 N）的四氢呋喃溶液（1 mL），升至室温搅拌2小时，加入饱和氯化铵水溶液（10 mL），后加入乙酸乙酯（20 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（140 mg），直接进行下一步。
步骤G： 4,7-二氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 988756DEST_PATH_IMAGE086
向7-氯-6-氟-4-羟基-1-[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（140 mg）的乙腈（10 mL）溶液加入三氯氧磷（100 mg）和DIEA（135mg）。升至80℃搅拌1小时。冷至室温，减压浓缩得到产物，直接进行下一步。
步骤H：(S)-4-{7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 343908DEST_PATH_IMAGE087
室温下，向4,7-二氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的乙腈（10 ml）溶液中加入(S)-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（84mg）和DIEA（135 mg），室温下搅拌1小时，加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE=1/1）纯化得到产物（60 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.60 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.70-7.74 (m, 1H),7.34 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.92-5.96 (m, 1H), 5.78-5.81 (m, 1H), 4.57-4.88 (m,1H), 3.82-4.44 (m, 3H), 3.46-3.74 (m, 1H), 2.84-3.34 (m, 2H), 2.11 (s, 1.5H),2.09 (s, 1.5H), 1.45-1.51 (m, 10.5H), 1.40 (d, J = 6.4Hz, 1.5H)。
步骤I：(3S)-4-{6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 595898DEST_PATH_IMAGE088
氮气保护下，将(S)-4-{7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（34mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（30 mg）、Pd(dppf)Cl2（5mg）和醋酸钾（24mg）分散于1,4-二氧六环（10 mL）和H2O（1 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃回流1小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（11 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.26 (s, 0.67H), 9.25 (s, 0.33H), 8.67 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 9.6 Hz, 0.34H), 7.84 (d, J = 9.6 Hz, 0.66H), 7.42(d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.24-7.31 (m, 1H), 6.65-6.69 (m, 2H), 6.01-6.03 (m, 1H),5.85-5.88 (m, 1H), 4.84-5.08 (brs, 0.34H), 4.64-4.77 (m, 0.66H), 3.85-4.62(m, 3H), 3.45-3.82 (m, 1H), 2.89-3.40 (m, 2H), 2.14 (s, 1H), 2.10 (s, 2H),1.53-1.58 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 1.41 (d, J = 6.4 Hz, 1H)。
步骤J： 6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]-4 -( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 433404DEST_PATH_IMAGE089
室温下，将(3S)-4-{6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11 mg)加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（1 mL）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤K：4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 671618DEST_PATH_IMAGE090
0℃下，将上步反应得到的6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶-3-基]-4 -( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（100 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（1 mg）的DCM（0.5 mL）溶液，加完升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（5 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.22 (s, 1H), 8.68 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.85(d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.24-7.32 (m, 1H), 6.50-6.71(m, 3H), 6.40 (dd, J = 16.8 Hz, 2.0 Hz, 1H), 6.01-6.03 (m, 1H), 5.85-5.88 (m,1H), 5.81 (dd, J = 10.8 Hz, 1.6 Hz, 1H), 4.62-4.98 (m, 2H), 4.40-4.60 (m,1H), 3.78-4.10 (m, 1H), 3.42-3.74 (m, 2H), 3.04-3.18 (m, 1H), 2.09-2.17 (m,3H), 1.50-1.63 (m, 3H)。
实施例7
(1S)-4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 645390DEST_PATH_IMAGE091
步骤A： 4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺
Figure 442183DEST_PATH_IMAGE092
向4-甲基-3-硝基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶（0.34 g）的四氢呋喃（10mL）溶液中加入钯碳（40 mg），随后用氢气充分换气后搅拌5小时。通过硅藻土过滤，滤液浓缩得到产物（0.27 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.01 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 4.4Hz, 1H), 3.48-3.80 (m, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.57 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤B： 2,6-二氯-5-氟-N-{[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]氨基甲酰基}烟酰胺
Figure 501406DEST_PATH_IMAGE093
0℃下，向2,6-二氯-5-氟烟酰胺（200 mg）的四氢呋喃（30 mL）溶液中加入草酰氯（381 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液，升至80℃搅拌1小时。冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，后溶于四氢呋喃（10 mL）中，将4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺（209 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液缓慢加入到上述反应液中，后室温搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液（5mL），后加入乙酸乙酯（15 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（400 mg），直接进行下一步。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 10.01 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 8.49 (d, J = 5.2Hz, 1H), 7.88 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.85-3.94 (m,1H), 2.29 (s, 3H), 1.54 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤C： 7-氯-6-氟-4-羟基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 543311DEST_PATH_IMAGE094
0℃下，向2,6-二氯-5-氟-N-{[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]氨基甲酰基}烟酰胺（400 mg）的四氢呋喃（10 mL）溶液中加入KHMDS（1 N）的四氢呋喃溶液（3mL），升至室温（20℃）搅拌2小时，加入饱和氯化铵水溶液（10 mL），后加入乙酸乙酯（20mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（330 mg），直接进行下一步。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.97 (s, 1H), 8.67 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.27(d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.21-3.29 (m, 1H), 2.13 (s,3H), 1.44 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
步骤D： 4,7-二氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 496223DEST_PATH_IMAGE095
向7-氯-6-氟-4-羟基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（330 m g）的乙腈（10 mL）溶液加入三氯氧磷（264 mg）和DIEA（277 mg）。升至80℃搅拌1小时。冷至室温，减压浓缩得到产物，直接进行下一步。
步骤E：(3S)-4-{(1S)-7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 965382DEST_PATH_IMAGE096
室温下，向4,7-二氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的乙腈（10 ml）溶液中加入(S)-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（192mg）和DIEA（207 mg），室温下搅拌1小时，加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE=3/1）纯化得到产物（150 mg）。纯化得到R手性轴产物（151 mg）和S手性轴产物（150 mg）。
R手性轴产物（Rf = 0.55）：1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.61 (d, J = 4.8 Hz,1H), 7.80 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.60-4.88 (m, 1H),3.82-4.44 (m, 3H), 3.46-3.78 (m, 1H), 2.97-3.38 (m, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.46-4.52 (m, 12H), 1.41 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
S手性轴产物（Rf = 0.56）：1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.62 (d, J = 4.8 Hz,1H), 7.80-7.82 (m, 1H), 7.26 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.58-5.01 (m, 1H), 3.84-4.41 (m, 3H), 3.52-3.80 (m, 1H), 2.94-3.38 (m, 3H), 2.05 (s, 1.5H), 2.03 (s,1.5H), 1.45-1.52 (m, 12H), 1.39-1.42 (m, 3H)。
步骤F：(3S)-4-{(1S)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 7506DEST_PATH_IMAGE097
氮气保护下，将上步反应得到的S手性轴产物(3S)-4-{(1S)-7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（61 mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（46 mg）、Pd(dppf)Cl2（10mg）和醋酸钾（43mg）分散于1,4-二氧六环（10 mL）和H2O（1 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃回流1小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（34 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.19 (s, 0.5H), 9.17 (s, 0.5H), 8.68 (d, J =5.2 Hz, 1H), 7.89-7.94 (m, 1H), 7.35 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.24-7.31 (m, 1H),6.66-6.70 (m, 2H), 4.60-4.82 (m, 1H), 3.84-4.55 (m, 3H), 3.42-3.78 (m, 1H),2.94-3.40 (m, 3H), 2.05 (s, 1.5H), 2.03 (s, 1.5H), 1.48-1.51 (m, 10.5H), 1.42(d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.29-1.32 (m, 3H)。
步骤G：(1S)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-4 -( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 853103DEST_PATH_IMAGE098
室温下，将(3S)-4-{(1S)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（32 mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤H：(1S)-4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 801467DEST_PATH_IMAGE099
0℃下，将上步反应得到的(1S)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-4–((S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（100 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（5 mg）的DCM（2.5 mL）溶液，升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（17 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.12-9.21 (brs, 1H), 8.69 (d, J = 4.8 Hz,1H), 7.91 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.26-7.32 (m, 1H),6.52-6.71 (m, 3H), 6.41 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 10.8 Hz, 2.0 Hz,1H), 4.63-4.96 (m, 2H), 4.42-4.60 (m, 1H), 3.83-4.24 (m, 2H), 3.41-3.76 (m,2H), 3.14-3.28 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 1.56-1.66 (m, 3H), 1.31 (d, J = 7.2 Hz,3H)。
实施例8
4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 441527DEST_PATH_IMAGE100
步骤A：2,5,6-三氯烟酰胺
Figure 334397DEST_PATH_IMAGE101
冰水冷却下，向2,5,6-三氯烟酸（1.0 g）的二氯甲烷（15 mL）溶液中依次慢慢滴加草酰氯（0.60 mL）和DMF（0.05 mL），加完升温至室温搅拌2小时。减压浓缩，残留物加入无水THF（10 mL），冰水冷却下慢慢滴加氨水（2 mL），加完升温至室温搅拌1小时，加水（20 mL），乙酸乙酯萃取（3×20 mL）。合并萃取液，依次用饱和碳酸氢钠溶液、水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到白色固体产物（0.90 g），直接用于下一步反应。
步骤B： 2,5,6-三氯-N-{[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]氨基甲酰基}-烟酰胺
Figure 216640DEST_PATH_IMAGE102
0℃下，向2,5,6-三氯烟酰胺（215 mg）的四氢呋喃（10 mL）溶液中加入草酰氯（0.25 mL），升至70℃搅拌1小时。冷却至室温，减压浓缩。残留物溶于四氢呋喃（5 mL）中，将4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-氨基（195 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液缓慢加入到上述反应液中，后室温搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液（5 mL），后加入乙酸乙酯（15mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（440 mg），直接进行下一步。
步骤C：6,7-二氯-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)二酮
Figure 19511DEST_PATH_IMAGE103
0℃下，向2,5,6-三氯-N-{[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]氨基甲酰基}-烟酰胺（440 mg）的四氢呋喃（20 mL）溶液中加入KHMDS（1 N）的四氢呋喃溶液（3.3mL），升至室温（20℃）搅拌2小时，加入饱和氯化铵水溶液（10 mL），后加入乙酸乙酯（20mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/10-1/1）分离得到产物（0.30 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.25 (s, 1H), 8.66 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.55(s, 1H), 7.29 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.21-3.29 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 1.44 (d,J = 6.8 Hz, 3H)。
步骤D： 4,6,7-三氯-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 96051DEST_PATH_IMAGE104
向6,7-二氯-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)二酮（90 m g）的乙腈（3 mL）溶液加入三氯氧磷（0.10 mL）和DIEA（0.20 mL）。升至80℃搅拌1小时。冷至室温，减压浓缩得到产物，直接进行下一步。
步骤E：(3S)-4-{6,7-二氯-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 351583DEST_PATH_IMAGE105
室温下，向4,6,7-三氯-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（90 m g）的乙腈（3 ml）溶液中加入(S)-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（50 m g）和DIEA（0.20 mL），室温下搅拌1小时，加水（10 ml）淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EtOAc/PE= 3/1）纯化得到产物（80 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.61 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.06 (s, 0.5H),8.05 (s,. 0.5H), 7.25 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.58-5.06 (m, 1H), 3.84-4.44 (m,3H), 3.49-3.82 (m, 1H), 2.92-3.42 (m, 3H), 2.04 (s, 1.5H), 2.02 (s, 1.5H),1.40-1.52 (m, 15H)。
步骤F：(3S)-4-{6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]- 2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 40447DEST_PATH_IMAGE106
氮气保护下，将(3S)-4-{6,7-二氯-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（35 mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（38 mg）、Pd(dppf)Cl2（10mg）和醋酸钾（30mg）分散于1,4-二氧六环（3 mL）和水（0.5 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃搅拌1小时。冷却至室温，加水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，减压浓缩，通过制备硅胶板层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（30 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.61 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.10-8.15 (m, 2H),7.22-7.29 (m, 2H), 6.64-6.68 (m, 2H), 4.40-5.30 (m, 2H), 3.90-4.38 (m, 3H),2.90-3.89 (m, 3H), 2.03 (s, 1.5H), 2.01 (s, 1.5H), 1.55-1.62 (m, 1.5H), 1.50(s, 9H), 1.42 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.26-1.29 (m, 3H)。
步骤G：6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-4-( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 697824DEST_PATH_IMAGE107
室温下，将(3S)-4-{6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(30 mg)加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤H： 4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 804320DEST_PATH_IMAGE108
0℃下，将上步反应得到的6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-4-((S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶基[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（25mg）和DIEA（100 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（3 mg）的DCM（0.5 mL）溶液，加完升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（18 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.64 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.92-8.04 (brs, 1H), 7.26-7.32 (m, 2H), 6.67-6.71 (m, 2H), 6.51-6.65 (m, 1H), 6.41(d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.81 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.42-4.99 (m, 2H), 3.58-4.38(m, 3H), 3.38-3.56 (m, 2H), 2.90-3.34 (m, 1H), 2.04 (s, 1.5H), 2.03 (s,1.5H), 1.39-1.68 (m, 3H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
实施例9
4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 812728DEST_PATH_IMAGE109
步骤A：(2R,5S)-4-{6,7-二氯-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 538238DEST_PATH_IMAGE110
室温下，向4,6,7-三氯-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（210 m g）的乙腈（10 ml）溶液中加入 (2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（123 m g）和DIEA（0.40 mL），室温下搅拌1小时，加水（10 mL）淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EtOAc/PE= 2/1）纯化得到产物（200 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.58-8.62 (m, 1H), 8.01-8.06 (m, 1H), 7.24-7.27 (m, 1H), 4.74-5.02 (m, 1H), 4.47-4.59 (m, 0.5H), 4.27-4.40 (m, 0.5H),3.70-4.01 (m, 3H), 3.37-3.60 (m, 1H), 3.14-3.26 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 1.48(s, 9H), 1.38-1.42 (m, 3H), 1.16-1.25 (m, 6H)。
步骤B：(2R,5S)-4-{6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 548657DEST_PATH_IMAGE111
氮气保护下，将(2R,5S)-4-{6,7-二氯-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（37 mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（40 mg）、Pd(dppf)Cl2（10mg）和醋酸钾（30mg）分散于1,4-二氧六环（3 mL）和水（0.5 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃搅拌1小时。冷却至室温，加水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，减压浓缩，通过制备硅胶板层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（30 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.63 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.07-8.22 (m, 2H),7.23-7.32 (m, 2H), 6.65-6.70 (m, 2H), 4.99-5.19 (m, 0.5H), 4.73-4.93 (m,0.5H), 4.26-4.70 (m, 1.5H), 3.70-4.07 (m, 2.5H), 3.30-3.67 (m, 2H), 2.07 (s,1.5H), 2.03 (s, 1.5H), 1.47-1.60 (m, 12H), 1.17-1.38 (m, 6H)。
步骤G：6-氯-4-( (2S,5R)- 2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 967000DEST_PATH_IMAGE112
室温下，将((2R,5S)-4-{6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(30 mg)加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤J： 4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 931545DEST_PATH_IMAGE113
0℃下，将上步反应得到的6-氯-4-( (2S,5R)- 2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（25 mg）和DIEA（100 mg）溶于DCM (2 ml)，随后缓慢滴加丙烯酰氯（3 mg）的DCM（0.5 ml）溶液，加完升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（12 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.62-8.66 (m, 1H), 8.03-8.22 (m, 2H), 7.26-7.34 (m, 2H), 6.51-6.71 (m, 3H), 6.35-6.43 (m, 1H), 5.78-5.84 (m, 1H), 5.26-5.36 (m, 0.5H), 4.94-5.20 (m, 1H), 4.70-4.84 (m, 0.5H), 4.23-4.54 (m, 1H),4.06-4.12 (m, 0.5H), 3.90-3.97 (m, 1H), 3.56-3.82 (m, 1.5H), 3.27-3.46 (m,1H), 2.08 (s, 1.5H), 2.04 (s, 1.5H), 1.40-1.61 (m, 3H), 1.21-1.35 (m, 6H)。
实施例 10
(1R)-4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 726326DEST_PATH_IMAGE114
步骤A：(3S)-4-{(1R)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 217350DEST_PATH_IMAGE115
氮气保护下，将实施例7步骤E得到的R手性轴产物(3S)-4-{(1R)-7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（53 mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（66 mg）、Pd(dppf)Cl2（10mg）和醋酸钾（40mg）分散于1,4-二氧六环（10 mL）和H2O（1 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃回流1小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（60 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.18 (s, 1H), 8.68 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.90(d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.26-7.31 (m, 1H), 6.66-6.70(m, 2H), 4.44-4.82 (m, 2H), 3.78-4.38 (m, 3H), 3.42-3.62 (m, 1H), 3.09-3.38(m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.53-1.65 (m, 9H), 1.50 (s, 3H), 1.30 (d, J = 7.2 Hz,3H)。
步骤B：(1R)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-4 -( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 302200DEST_PATH_IMAGE116
室温下，将(1R)-(3S)-4-{6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（59 mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤C：(1R)-4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 19620DEST_PATH_IMAGE117
0℃下，将上步反应得到的(1R)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-4 -( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（100 mg）溶于DCM（3 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（8 mg）的DCM（4 mL）溶液，升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（34 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.15 (s, 1H), 8.68 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.91(d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.26-7.32 (m, 1H), 6.50-6.71(m, 3H), 6.40 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 10.4 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.62-4.98 (m, 2H), 4.42-4.57 (m, 1H), 3.82-4.07 (m, 1H), 3.40-3.77 (m, 3H), 3.12-3.30 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 1.50-1.70 (m, 3H), 1.30 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
实施例 11
4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 86933DEST_PATH_IMAGE118
步骤A：(3S)-4-{6-氯-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]- 2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 573409DEST_PATH_IMAGE119
氮气保护下，将3S)-4-{6,7-二氯-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基] -2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（30 mg）、2- -羟基苯硼酸（21 mg）、Pd(dppf)Cl2（10mg）和醋酸钾（25mg）分散于1,4-二氧六环（3 mL）和水（0.5 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃搅拌1小时。冷却至室温，加水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，减压浓缩，通过制备硅胶板层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（10mg）。
步骤B：6-氯-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-4-( (S)- 2-甲基哌嗪-1-基)吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 832090DEST_PATH_IMAGE120
室温下，将(3S)-4-{6-氯-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]- 2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（10mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤C： 4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 36807DEST_PATH_IMAGE121
0℃下，将上步反应得到的6-氯-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-4-((S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶基[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（8 mg）和DIEA（100 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（1 mg）的DCM（0.5 mL）溶液，加完升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（3 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.70 (s, 1H), 8.70 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.18(s, 1H), 8.07 (dd, J = 8.4 Hz, 2.4 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.28-7.33 (m, 1H), 6.89 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.51-6.69(m, 1H), 6.37-6.45 (m, 1H), 5.82 (dd, J = 10.8 Hz, 1.6 Hz, 1H), 5.38-5.51 (m,0.3H), 4.62-5.08 (m, 1.7H), 4.38-4.49 (m, 1H), 3.84-4.12 (m, 1H), 3.12-3.81(m, 4H), 2.06 (s, 3H), 1.24-1.29 (m, 6H)。
实施例 12
4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 766865DEST_PATH_IMAGE122
步骤A：(2R,5S)-4-{6-氯-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]- 2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 373427DEST_PATH_IMAGE123
氮气保护下，将(2R,5S)-4-{6,7-二氯-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基] -2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（40 mg）、2-羟基苯硼酸（27 mg）、Pd(dppf)Cl2（10mg）和醋酸钾（32mg）分散于1,4-二氧六环（3 mL）和水（0.5 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃搅拌1小时。冷却至室温，加水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，减压浓缩，通过制备硅胶板层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（15 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.81 (s, 0.5H), 9.78 (s, 0.5H), 8.68-8.70 (m,1H), 8.21 (s, 0.5H), 8.13 (s, 0.5H), 8.06-8.10 (m, 1H), 7.26-7.37 (m, 2H),6.81-6.92 (m, 2H), 4.17-5.18 (m, 3H), 3.32-4.08 (m, 4H), 2.10 (s, 1.5H), 2.07(s, 1.5H), 1.50 (s, 9H), 1.34-1.42 (m, 3H), 1.70-1.29 (m, 6H)。
步骤B：6-氯-4-( (2S,5R)- 2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 304474DEST_PATH_IMAGE124
室温下，将(2R,5S)-4-{6-氯-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]- 2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（15 mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤C： 4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氯-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 966793DEST_PATH_IMAGE125
0℃下，将上步反应得到的6-氯-4-( (2S,5R)- 2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（13 mg）和DIEA（100 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（1.5 mg）的DCM（0.5mL）溶液，加完室温下搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（10 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.74-9.79 (m, 1H), 8.69 (d, J = 4.8 Hz, 1H),8.07-8.23 (m, 2H), 7.34-7.37 (m, 1H), 7.30 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.89 (t, J =8.0 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.51-6.68 (m, 1H), 6.34-6.42 (m, 1H),5.77-5.82 (m, 1H), 5.26-5.34 (m, 0.4H), 4.97-5.18 (m, 1H), 4.66-4.83 (m,0.4H), 4.31-4.53 (m, 0.8H), 4.04-4.24 (m, 0.8H), 3.54-3.96 (m, 2.4H), 3.27-3.45 (m, 1.2H), 2.10 (s, 1.7H), 2.07 (s, 1.3H), 1.41-1.60 (m, 3H), 1.20-1.36(m, 6H)。
实施例 13
(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 641488DEST_PATH_IMAGE126
步骤A：(2R,5S)-4-{7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 102556DEST_PATH_IMAGE127
室温下，向4,7-二氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的乙腈（10 ml）溶液中加入(2R,5S)- 2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（118 m g）和DIEA（200 m g），室温下搅拌1小时，加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE= 1/3）纯化得到产物（236 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.60-8.62 (m, 1H), 7.77-7.82 (m, 1H), 7.25-7.27 (m, 1H), 4.71-5.02 (m, 1H), 4.46-4.60 (m, 0.5H), 4.26-4.42 (m, 0.5H),3.68-4.02 (m, 3H), 3.37-3.62 (m, 1H), 3.16-3.26 (m, 1H), 2.05 (s, 1.5H), 2.04(s, 1.5H), 1.48 (s, 9H), 1.42 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.39 (d, J = 7.2 Hz, 3H),1.23 (d, J = 7.2 Hz, 1.5H), 1.18 (d, J = 7.2 Hz, 1.5H)。
步骤B：(2R,5S)-4-{(1R)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 63559DEST_PATH_IMAGE128
氮气保护下，将((2R,5S)-4-{7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（82 mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（89 mg）、Pd(dppf)Cl2（5mg）和醋酸钾（54mg）分散于1,4-二氧六环（10 mL）和H2O（1 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃回流1小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到R手性轴产物（40 mg）和S手性轴产物（35 mg）。
R手性轴产物（Rf = 0.63）: 1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.21 (s, 1H), 8.67(d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.85-7.93 (m, 1H),7.34 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.25-7.31(m, 1H), 6.66-6.70 (m, 2H), 4.72-4.87 (m, 1H), 4.27-4.70 (m, 2H), 3.28-3.99(m, 4H), 2.04 (s, 3H), 1.58 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.47-1.53 (m, 10.5H),1.28-1.42 (m, 6H)。
S手性轴产物（Rf = 0.64）: 1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.27 (s, 1H), 8.66(d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.87-7.91 (m, 1H), 7.35 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.26-7.31(m, 1H), 6.60-6.70 (m, 2H), 4.96-5.19 (m, 1H), 4.52-4.60 (m, 0.5H), 4.32-4.42(m, 0.5H), 3.72-4.07 (m, 3H), 3.52-3.68 (m, 1H), 3.35-3.44 (m, 1H), 2.08 (s,3H), 1.49 (s, 9H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.30 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.15-1.21 (m, 3H)。
步骤C：(1R) -4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1， 1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 242868DEST_PATH_IMAGE129
室温下，将上步反应得到的R手性轴产物(2R,5S)-4-{(1R)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（40mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤D：(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 954209DEST_PATH_IMAGE130
0℃下，将上步反应得到的(1R)-4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1， 1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（100 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（5 mg）的DCM（2.5 mL）溶液，升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（22 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.20 (s, 0.5H), 9.17 (s, 0.5H), 8.68 (d, J =4.8 Hz, 1H), 7.92-7.97 (m, 1H), 7.35 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.26-7.32 (m, 1H),6.51-6.71 (m, 3H), 6.36-6.43 (m, 1H), 5.78-5.83 (m, 1H), 5.10-5.19 (m, 0.5H),4.94-5.02 (m, 0.5H), 4.72-4.83 (m, 1H), 4.52 (d, J = 13.6 Hz, 0.5H), 4.36-4.45 (m, 0.5H), 4.28 (d, J = 14.0 Hz, 0.5H), 3.71-3.83 (m, 1.5H), 3.61-3.66(m, 0.5H), 3.39-3.51 (m, 1H), 3.27-3.32 (m, 0.5H), 2.06 (s, 1.5H), 2.05 (s,1.5H), 1.61 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.49 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.45 (d, J =7.2 Hz, 3H), 1.32 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.30 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H)。
实施例 14
(1S)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 269784DEST_PATH_IMAGE131
步骤A：(1S) -4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1， 1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 542634DEST_PATH_IMAGE132
室温下，将实施例13步骤B得到的S手性轴产物(2R,5S)-4-{(1S)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（35 mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤B：(1S)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 678080DEST_PATH_IMAGE133
0℃下，将上步反应得到的(1S) -4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（100 mg）溶于DCM（3 ml），随后缓慢滴加丙烯酰氯（4 mg）的DCM（2 mL）溶液，升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（17 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.25 (s, 0.6H), 9.23 (s, 0.4H), 8.68 (d, J =5.2 Hz, 1H), 7.87-7.93 (m, 1H), 7.36 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.27-7.33 (m, 1H),6.51-6.72 (m, 3H), 6.35-6.43 (m, 1H), 5.77-5.82 (m, 1H), 5.23-5.33 (m, 0.6H),4.99-5.09 (m, 1H), 4.32-4.46 (m, 0.8H), 4.06-4.15 (m, 1H), 3.91-3.97 (m,1.6H), 3.68-3.72 (m, 0.6H), 3.54-3.60 (m, 0.4H), 3.34-3.42 (m, 1H), 2.09 (s,3H), 1.41 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.30-1.35 (m, 3H), 1.20-1.24 (m, 3H)。
实施例 15
4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 455762DEST_PATH_IMAGE134
步骤A：(3S)-4-{6-氟-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 750477DEST_PATH_IMAGE135
氮气保护下，将实施例7步骤E得到的手性轴未分离产物(S)-4-{7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（75 mg）、2-羟基苯硼酸（54 mg）、Pd(dppf)Cl2（6mg）和醋酸钾（51mg）分散于1,4-二氧六环（10 mL）和H2O（1 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃回流1小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（27 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 10.90 (s, 1H), 8.72 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.04(d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 7.30-7.35 (m, 2H), 6.90 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.67-4.87 (m, 1H), 3.88-4.64 (m,3H), 3.02-3.70 (m, 4H), 2.04-2.09 (m, 3H), 1.46-1.62 (m, 12H), 1030-1.33 (m,3H)。
步骤B： 6-氟-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-4 -( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 928649DEST_PATH_IMAGE136
室温下，将(3S)-4-{6-氟-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（27 mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤C：4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 82550DEST_PATH_IMAGE137
0℃下，将上步反应得到的6-氟-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-4 -( (S)-2-甲基哌嗪-1-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（100 mg）溶于DCM（3 ml），随后缓慢滴加丙烯酰氯（3 mg）的DCM（1.5 mL）溶液，升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（10mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 10.89 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 5.2Hz, 1H), 8.06 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 7.36 (d, J =5.2 Hz, 1H), 7.33 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.91 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.84 (d, J =8.4 Hz, 1H), 6.52-6.69 (m, 1H), 6.40 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 10.8Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.94-5.03 (m, 0.5H), 4.65-4.83 (m, 1.5H), 4.34-4.49 (m, 1H),3.82-4.08 (m, 1H), 3.58-3.80 (m, 1.5H), 3.10-3.57 (m, 2.5H), 2.07 (s, 1.5H),2.05 (s, 1.5H), 1.48-1.66 (m, 3H), 1.28-1.37 (m, 3H)。
实施例 16
(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氟-6-羟基苯基)-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 637159DEST_PATH_IMAGE138
步骤A：2 -氯-5-甲基烟酸甲酯
Figure 425861DEST_PATH_IMAGE139
冰水冷却下向2-氯-5-甲基烟酸（1.0 g）的甲醇（15 mL）溶液中依次慢慢滴加氯化亚砜（0.60 mL）和DMF（0.05 mL），加完升温回流搅拌2小时。冷却至室温，减压浓缩，残留物加入饱和碳酸氢钠溶液（20 mL），乙酸乙酯萃取（3×20 mL）。合并萃取液，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（DCM/PE = 1/10-1/1）分离得到产物（0.70 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.31 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 2.4Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 2.34 (s, 3H)。
步骤B： 2 -氯-3-(甲氧羰基)-5-甲基吡啶-1-氮氧化物
Figure 774934DEST_PATH_IMAGE140
0℃下，向2 -氯-5-甲基烟酸甲酯（700 mg）的氯仿（10 mL）溶液中分批加入85%间氯过氧苯甲酸（1.50 g），升至45℃搅拌24小时。冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，得残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/1-10/1）分离得到产物（0.50 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.31 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 3.95 (s, 3H),2.32 (s, 3H)。
步骤C：2 ,6-二-氯-5-甲基烟酸甲酯
Figure 150552DEST_PATH_IMAGE141
0℃下，向2 -氯-3-(甲氧羰基)-5-甲基吡啶-1-氮氧化物（500 mg）的DMF（10 mL）溶液中慢慢滴加三氯氧磷（0.40 mL），升至室温搅拌16小时。冰水浴冷却下，慢慢加入饱和碳酸氢钠水溶液（50 mL），乙酸乙酯萃取（3×20 mL）。合并萃取液，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（DCM/PE = 1/10-2/1）分离得到产物（0.35 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.04 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.38 (s, 3H)。
步骤D： 2 ,6-二-氯-5-甲基烟酸
Figure 633486DEST_PATH_IMAGE142
向2 ,6-二-氯-5-甲基烟酸甲酯（0.35 g）的四氢呋喃（10 mL）溶液加入氢氧化锂（0.23 g）的水（5 mL）溶液。室温搅拌2小时。冰水浴冷却下，慢慢加入6 N盐酸调pH至5-6，乙酸乙酯萃取（3×20 mL）。合并萃取液，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到产物（168mg）。
1H NMR (400 MHz, d6-DMSO), 13.74-13.98 (brs, 1H), 8.24 (s, 1H), 2.33(s, 3H)。
步骤E： 2 ,6-二-氯-5-甲基烟酰胺
Figure 778159DEST_PATH_IMAGE143
0℃下，向2 ,6-二-氯-5-甲基烟酸（168 m g）的二氯甲烷（5 ml）溶液中依次慢慢滴加草酰氯（0.14 mL）和DMF（0.05 mL），升至室温搅拌1小时。减压浓缩，加入无水四氢呋喃（5 ml），冰水冷却下，慢慢滴加氨水（1 ml），加完升室温搅拌1小时，加水稀释，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩得到产物（160mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.12 (s, 1H), 6.60-6.84 (brs, 1H), 6.13-6.37(brs, 1H), 2.39 (s, 3H)。
步骤F：2,6-二氯-5-甲基-N-{[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]氨基甲酰基}-烟酰胺
Figure 65177DEST_PATH_IMAGE144
0℃下，向2 ,6-二-氯-5-甲基烟酰胺（177 mg）的四氢呋喃（10 mL）溶液中加入草酰氯（0.20 mL），升至70℃搅拌1小时。冷却至室温，减压浓缩。残留物溶于四氢呋喃（5 mL）中，将4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-氨基（160 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液缓慢加入到上述反应液中，后室温搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液（5 mL），后加入乙酸乙酯（15 mL），有机相依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（340 mg），直接进行下一步。
步骤G：7-氯-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)二酮
Figure 662512DEST_PATH_IMAGE145
0℃下，向2,6-二氯-5-甲基-N-{[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]氨基甲酰基}-烟酰胺（340 mg）的四氢呋喃（20 mL）溶液中加入KHMDS（1 N）的四氢呋喃溶液（2.5 mL），升至室温搅拌2小时，加入饱和氯化铵水溶液（10 mL），后加入乙酸乙酯（20 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/1）分离得到产物（0.20 g）。
1H NMR (400 MHz, DMSO), 12.02 (s, 1H), 8.55-8.57 (m, 1H), 8.38-8.39(m, 1H), 7.41-7.43 (m, 1H), 3.84-3.94 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.02 (s, 2.4H),1.98 (s, 0.6H), 1.28 (d, J = 6.8Hz, 0.6H), 1.23 (d, J = 6.8 Hz, 2.4H)。
步骤H： 4,7-二氯-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 824503DEST_PATH_IMAGE146
向7-氯-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)二酮（100 m g）的乙腈（3 mL）溶液加入三氯氧磷（0.10 mL）和DIEA（0.20mL）。升至80℃搅拌1小时。冷至室温，减压浓缩得到产物，直接进行下一步。
步骤I：(2R,5S)-4-{(1R)-7-氯-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基] -2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 823683DEST_PATH_IMAGE147
室温下，向4,7-二氯-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（100 m g）的乙腈（5 ml）溶液中加入 (2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（62 m g）和DIEA（0.20 mL），室温下搅拌1小时，加水（10 ml）淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EtOAc/PE= 3/1）纯化得到R手性轴产物（75 mg）和S手性轴产物（40mg）。
R手性轴产物（Rf = 0.60）：1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.56-8.58 (m, 1H),7.80-7.85 (m, 1H), 7.23 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.76-5.05 (m, 1H), 4.25-4.55 (m,1H), 3.66-4.01 (m, 3H), 3.38-3.61 (m, 1H), 3.16-3.28 (m, 1H), 2.39 (s, 1.5H),2.38 (s, 1.5H), 2.04 (s, 1.5H), 2.03 (s, 1.5H), 1.47 (s, 9H), 1.34-1.41 (m,6H), 1.13-1.21 (m, 3H)。
S手性轴产物（Rf = 0.59）：1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.59 (d, J = 4.8 Hz,1H), 7.82 (s, 0.5H), 7.79 (s, 0.5H), 7.22-7.25 (m, 1H), 4.83-5.05 (m, 1H),4.46-4.57 (m, 0.5H), 4.27-4.39 (m, 0.5H), 3.73-4.13 (m, 3H), 3.25-3.59 (m,2H), 2.39 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.46-1.50 (m, 12H), 1.36-1.42 (m, 3H), 1.15-1.24 (m, 3H)。
步骤J：(2R,5S)-4-{(1R)-7-(2-氟-6-羟基苯基)-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 544252DEST_PATH_IMAGE148
氮气保护下，将上步反应得到的R手性轴产物(2R,5S)-4-{(1R)-7-氯-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基] -2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（75 mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（70 mg）、Pd(dppf)Cl2（15mg）和醋酸钾（62mg）分散于1,4-二氧六环（4 mL）和水（0.5mL）的混合溶剂中，随后升温至90℃搅拌7小时。冷却至室温，加水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物通过制备硅胶板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（40 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.88-8.96 (m, 1H), 8.61-8.63 (m, 1H), 7.94-8.04 (m, 1H), 7.28-7.32 (m, 1H), 7.19-7.26 (m, 1H), 6.62-6.68 (m, 2H), 5.01-5.24 (m, 0.5H), 4.74-4.92 (m, 0.5H), 4.26-4.68 (m, 1.5H), 3.31-4.14 (m,4.5H), 2.32-2.34 (m, 3H), 2.02-2.07 (m, 3H), 1.38-1.57 (m, 12H), 1.16-1.35(m, 6H)。
步骤K：(1R)-4-( (2S,5R)- 2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氟-6-羟基苯基)-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 487937DEST_PATH_IMAGE149
室温下，将(2R,5S)-4-{(1R)-7-(2-氟-6-羟基苯基)-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（40 mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤L：(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氟-6-羟基苯基)-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 188040DEST_PATH_IMAGE150
0℃下，将上步反应得到的(1R)-4-( (2S,5R)- 2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氟-6-羟基苯基)-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-吡啶基[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（34 mg）和DIEA（100 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（3 mg）的DCM（0.5 mL）溶液，加完升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（20 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.82-8.94 (m, 1H), 8.65 (d, J = 5.2 Hz, 1H),7.94-8.06 (m, 1H), 7.31-7.34 (m, 1H), 7.21-7.28 (m, 1H), 6.52-6.69 (m, 3H),6.34-6.43 (m, 1H), 5.77-5.82 (m, 1H), 5.30-5.39 (m, 0.5H), 4.97-5.19 (m, 1H),4.76-4.85 (m, 0.5H), 4.26-4.52 (m, 1H), 4.07-4.16 (m, 0.5H), 3.90-4.01 (m,1H), 3.27-3.81 (m, 2.5H), 2.35 (s, 1.5H), 2.34 (s, 1.5H), 2.07 (s, 1.5H),2.04 (s, 1.5H), 1.46-1.61 (m, 3H), 1.19-1.42 (m, 6H)。
实施例 17
4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 307306DEST_PATH_IMAGE151
步骤A：(2R,5S)-4-{6-氟-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 434662DEST_PATH_IMAGE152
氮气保护下，将(2R,5S)-4-{7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（76 mg）、2-羟基苯硼酸（50 mg）、Pd(dppf)Cl2（6mg）和醋酸钾（51mg）分散于1,4-二氧六环（10 mL）和H2O（1 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃回流1小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（55 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 10.98 (s, 0.5H), 10.95 (s, 0.5H),8.72 (d, J =4.8 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.86-7.90 (m, 1H), 7.30-7.37 (m, 2H),6.90 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.75-5.6 (m, 1H), 4.50-4.66 (m, 0.5H),4.30-4.48 (m, 0.75H), 4.14-4.24 (m, 0.25H), 3.46-4.05 (m,3.5H), 3.31-3.43 (m, 1H), 2.11 (s, 1.5H), 2.08 (s, 1.5H), 1.45-1.56 (m,10.5H), 1.39-1.42 (m, 1.5H), 1.28-1.36 (m, 4.5H), 1.17-1.21 (m, 1.5H)。
步骤B： 4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 791211DEST_PATH_IMAGE153
室温下，将(2R,5S)-4-{6-氟-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(55 mg)加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤C：4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 29425DEST_PATH_IMAGE154
0℃下，将上步反应得到的4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟-7-(2-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（130 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（6 mg）的DCM（3 mL）溶液，升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（35mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 10.97 (s, 0.5H), 10.95 (s, 0.5H), 8.72-8.74(m, 1H), 8.07 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.86-7.95 (m, 1H), 7.31-7.38 (m, 2H), 6.91(t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.51-6.68 (m, 1H), 6.34-6.42(m, 1H), 5.77-5.82 (m, 1H), 5.21-5.31 (m, 0.25H), 4.92-5.15 (m, 1H), 4.75-4.85 (m, 0.25H), 4.59-4.68 (m, 0.25H), 4.30-4.51 (m, 1H), 3.81-4.19 (m, 2H),3.64-3.73 (m, 1H), 3.52-3.57 (m, 0.25H), 3.28-3.43 (m, 1H), 2.08-2.11 (m,3H), 1.20-1.57 (m, 9H)。
实施例 18
(1S)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氟-6-羟基苯基)-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 3197DEST_PATH_IMAGE155
步骤A： (2R,5S)-4-{(1S)-7-(2-氟-6-羟基苯基)-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 426088DEST_PATH_IMAGE156
氮气保护下，将实施例16步骤I得到的S轴手性产物(2R,5S)-4-{(1S)-7-氯-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基] -2-氧代-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（40 mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（44mg）、Pd(dppf)Cl2（10mg）和醋酸钾（33mg）分散于1,4-二氧六环（3 mL）和水（0.5 mL）的混合溶剂中，随后升温至90℃搅拌7小时。冷却至室温，加水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，减压浓缩，通过制备硅胶板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（17 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.82 (s, 0.5H), 8.79 (s, 0.5H), 8.63-8.65 (m,1H), 8.01 (s, 0.5H), 7.97 (s, 0.5H), 7.26-7.29 (m, 1H), 7.19-7.24 (m, 1H),6.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.60-6.66 (m, 1H), 4.90-5.10 (m, 1H), 4.52-4.65 (m,0.5H), 4.32-4.47 (m, 0.5H), 4.02-4.31 (m, 1H), 3.50-3.97 (m, 2H), 3.42-3.62(m, 2H), 2.33 (s, 1.5H), 2.32 (s, 1.5H), 2.04 (s, 1.5H), 2.02 (s, 1.5H),1.42-1.54 (m, 15H), 1.31 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.22-1.26 (m, 1.5H)。
步骤B： (1S)-4-( (2S,5R)- 2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氟-6-羟基苯基)-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 219732DEST_PATH_IMAGE157
室温下，将(1S)-(2R,5S)-4-{7-(2-氟-6-羟基苯基)-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（17 mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤C：(1S)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氟-6-羟基苯基)-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)吡啶-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 25752DEST_PATH_IMAGE158
0℃下，将上步反应得到的(1S)-4-( (2S,5R)- 2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氟-6-羟基苯基)-6-甲基-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)-吡啶-3-基]-吡啶基 [2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(14 mg)和DIEA（100 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（1.4 mg）的DCM（2 mL）溶液，加完升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（10 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.75-8.80 (m, 1H), 8.64-8.65 (m, 1H), 7.97-8.01 (m, 1H), 7.20-7.30 (m, 2H), 6.52-6.71 (m, 3H), 6.36-6.43 (m, 1H), 5.77-5.82 (m, 1H), 4.92-5.26 (m, 1.7H), 4.32-4.51 (m, 1.3H), 3.70-4.51 (m, 3H),3.41-3.54 (m, 1H), 2.32-2.36 (m, 3H), 2.01-2.06 (m, 3H), 1.43-1.54 (m, 6H),1.28-1.39 (m, 3H)。
实施例 19
(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（异构体1）
Figure 854031DEST_PATH_IMAGE159
步骤A：4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺（异构体-1）(+)-二对甲苯酰-D-酒石酸盐
Figure 323189DEST_PATH_IMAGE160
将4-甲基-3-硝基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶（2 g）和(+)-二对甲苯酰-D-酒石酸（2.1 g）加入到90%的异丙醇（2 ml）中，升温至90℃搅拌2小时。冷却至室温搅拌过夜，过滤，收集固体（2.3 g），将其用90%异丙醇重结晶3次，得到纯4-甲基-3-硝基-2-((R)-3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶的(+)-二对甲苯酰-D-酒石酸盐（0.3 g）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6), 12.9-13.9 (brs, 2H), 7.87 (d, J = 8.4 Hz,4H), 7.69 (d, J = 4.4 Hz,1H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz,4H), 6.89 (d, J = 4.4 Hz,1H) , 5.79 (s, 2H), 4.46-4.52 (brs, 2H), 4.11-4.22 (m, 1H), 2.46 (s, 6H),2.07 (s, 3H), 1.35 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤B：4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺
Figure 869708DEST_PATH_IMAGE161
室温下，将4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺 (+)-二对甲苯酰-D-酒石酸盐（0.30 g）加入DCM（20 mL），滴加饱和NaHCO3水溶液（10 ml），加完继续在室温下搅拌0.5小时。有机相分离，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（100 mg），直接进行下一步。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.01 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 4.4Hz, 1H), 3.48-3.80 (m, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.57 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
HPLC RT = 9.23 min (柱：Chiralcel IC柱 4.6*250mm, 3μm；柱温：30℃；流速：1.0 mL/min；波长：230 nm；流动相：正己烷:乙醇（0.3%二乙胺）=98:2)。
步骤C： 2,6-二氯-5-氟-N-{[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]氨基甲酰基}烟酰胺
Figure 574359DEST_PATH_IMAGE162
0℃下，向2,6-二氯-5-氟烟酰胺（200 mg）的四氢呋喃（30 mL）溶液中加入草酰氯（381 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液，升至80℃搅拌1小时。冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，后溶于四氢呋喃（10 mL）中，将4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺（209 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液缓慢加入到上述反应液中，后室温搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液（5 mL），后加入乙酸乙酯（15 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（400 mg），直接进行下一步。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 10.01 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 8.49 (d, J = 5.2Hz, 1H), 7.88 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.85-3.94 (m,1H), 2.29 (s, 3H), 1.54 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤D：(R)-7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
Figure 24188DEST_PATH_IMAGE163
0℃下，向2,6-二氯-5-氟-N-{[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]氨基甲酰基}烟酰胺（340 mg）的四氢呋喃（10 mL）溶液中加入KHMDS（1 N）的四氢呋喃溶液（2.5 mL），升至室温搅拌1小时，加入饱和氯化铵水溶液（10 mL），后加入乙酸乙酯（20 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE= 1/1）纯化得到R轴手性产物产物（15 mg）和S轴手性产物产物（60mg）。
R轴手性产物产物（Rf = 0.60）：1H NMR (400MHz, CDCl3) 8.98 (s, 1H), 8.68(d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 4.8 Hz, 1H),3.29-3.40 (m, 1H), 2.08 (s, 3H), 1.50 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
S轴手性产物产物（Rf = 0.62）：1H NMR (400MHz, CDCl3) 9.32 (s, 1H), 8.67(d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 4.8 Hz, 1H),3.19-3.30 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 1.44 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
步骤E：(R)-4,7-二氯-6-氟-1-[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 664248DEST_PATH_IMAGE164
向(R)-7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（15 m g）的乙腈（2 mL）溶液加入三氯氧磷（20 mg）和DIEA（50 m g）。升至80℃搅拌1小时。冷至室温，减压浓缩得到产物，直接进行下一步。
步骤F：(2R,5S)-4-{7-氯-6-氟-(1R)-1-[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 432484DEST_PATH_IMAGE165
室温下，向(R)-4,7-二氯-6-氟-1-[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（15 m g）的乙腈（10 ml）溶液中加入(2R,5S)- 2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（9 m g）和DIEA（20 m g），室温下搅拌1小时，加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE= 2/1）纯化得到产物（10 mg）。
1H NMR (400MHz, CDCl3) 8.62 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.6 Hz,1H), 7.25 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.81-4.98 (m, 1H), 4.51-4.60 (m, 0.5H), 4.30-4.42 (m, 0.5H), 3.41-4.14 (m, 4H), 3.22-3.55 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.39-1.51(m, 15H), 1.20-1.27 (m, 3H)。
步骤G：(2R,5S)-4-{(1R)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 81771DEST_PATH_IMAGE166
氮气保护下，将(2R,5S)-4-{7-氯-6-氟-(1R)-1-[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（10 mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（11 mg）、Pd(dppf)Cl2（2mg）和醋酸钾（8mg）分散于1,4-二氧六环（2 mL）和H2O（0.3 mL）的混合溶剂中，随后升温至90℃搅拌2小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，向滤液中加入水，然后用乙酸乙酯萃取，有机相减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（6 mg）。
1H NMR (400MHz, CDCl3) 9.15 (s, 1H), 8.68 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.93(d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.24-7.29 (m, 1H), 6.63-6.68(m, 2H), 4.84-5.01 (m, 1H), 4.58-4.66 (m, 0.5H), 4.38-4.48 (m, 0.5H), 4.07-4.30 (m, 1H), 3.64-3.98 (m, 3H), 3.42-3.58 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.46-1.55(m, 15H), 1.32 (d, J = 6.4 Hz, 3H)。
步骤H：(1R) -4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 383177DEST_PATH_IMAGE167
室温下，将上步反应得到的R手性轴产物(2R,5S)-4-{(1R)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（40mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌30分钟。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤I：(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 318772DEST_PATH_IMAGE168
0℃下，将上步反应得到的(1R)-4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-((R)1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（5 mg）和DIEA（20 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（0.6 mg）的DCM（1mL）溶液，升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（4 mg）。
1H NMR (400MHz, CDCl3) 9.12 (s, 0.4H), 9.10 (s, 0.6H), 8.68 (d, J =4.8 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.28 (d, J =6.8 Hz, 1H), 6.52-6.69 (m, 3H), 6.36-6.43 (m, 1H), 5.78-5.83 (m, 1H), 5.22-5.44 (m, 0.4H), 5.06-5.15 (m, 1H), 4.87-4.96 (m, 0.4H), 4.36-4.52 (m, 1.2H),4.10-4.18 (m, 0.6H), 3.70-3.97 (m, 2.4H), 3.40-3.52 (m, 1H), 2.04 (s, 1.8H),2.02 (s, 1.2H), 1.44-1.55 (m, 7.2H), 1.35 (d, J = 7.2 Hz, 1.8H)。
实施例20 (1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 574304DEST_PATH_IMAGE169
步骤A：2-(1-乙氧基乙烯基)-4-甲基-3-硝基吡啶
Figure 761703DEST_PATH_IMAGE170
氮气保护下，将2-溴-4-甲基-3-硝基吡啶（54 g）、三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡（110 g）和Pd(dppf)Cl2（9.5 g）分散于1,4-二氧六环（350 mL）中，随后升温至120℃回流48小时。冷却至室温，加入饱和KF水溶液（1500 mL）继续搅拌12小时，后将反应混合物垫硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯（500 mL×3）萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（42 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.49 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 5.2Hz, 1H), 5.15 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.87 (q, J = 7.2Hz, 2H), 2.34 (s, 3H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤B：1-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)乙-1-酮
Figure 419080DEST_PATH_IMAGE171
室温下，将2-(1-乙氧基乙烯基)-4-甲基-3-硝基吡啶（42 g）溶于THF（250 mL）中，加入盐酸（4 N）溶液（250 mL），随后搅拌至反应完全。用氢氧化钠（1 N）溶液调至pH=7-8，后用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到产物（33 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 4.8Hz, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.37 (s, 3H)。
步骤C：4-甲基-3-硝基-2-{1,1,1-三氟-2-[(三甲基甲硅烷基)氧基]丙-2-基}吡啶
Figure 162128DEST_PATH_IMAGE172
0℃下，将1-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)乙-1-酮（33 g）和醋酸钾（18 g）分散于DMSO（150 mL）中，后将三氟甲基三甲基硅烷（60 g）缓慢加入到上述反应液中，升至室温搅拌15小时，用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，后用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩得到产物（55 g），直接进行下一步。
步骤D：1,1,1-三氟-2-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)丙-2-醇
Figure 639376DEST_PATH_IMAGE173
室温下，将4-甲基-3-硝基-2-{1,1,1-三氟-2-[(三甲基甲硅烷基)氧基]丙-2-基}吡啶（55 g）和碳酸钾（24 g）分散于甲醇（200 ml）中，随后搅拌1小时。反应混合物垫硅藻土过滤，甲醇（100 ml）洗涤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（31 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.55 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 4.8Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 2.31 (s, 3H), 1.76 (s, 3H)。
步骤E：4-甲基-3-硝基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶
Figure 630466DEST_PATH_IMAGE174
0℃下，向1,1,1-三氟-2-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)丙-2-醇（15 g）的二氯甲烷（40 mL）溶液中缓慢加入DAST（21 g），加完慢慢升至室温（20℃）搅拌过夜。冷却下，滴加饱和碳酸氢钠溶液至没有气泡产生，搅拌15分钟，分层，有机相分离，水相用二氯甲烷萃取。合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（8 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.61 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 5.2Hz, 1H), 6.20 (s, 1H), 5.82 (s, 1H), 2.40 (s, 3H)。
步骤F： 4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺
Figure 266984DEST_PATH_IMAGE175
向4-甲基-3-硝基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶（8 g）的四氢呋喃（80 mL）溶液中加入钯碳（400 mg），随后用氢气充分换气后搅拌15小时。通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/3）分离得到产物（5.15 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.01 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 4.4Hz, 1H), 3.48-3.80 (m, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.57 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤G：4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺 (-)-二对甲苯酰-L-酒石酸盐
Figure 419748DEST_PATH_IMAGE176
将4-甲基-3-硝基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶（5.15 g）和(-)-二对甲苯酰-L-酒石酸（9.74 g）加入到丙酮（70 ml）中，升温至80℃搅拌2小时。冷却至室温，过滤，收集固体（7.03 g），将其用丙酮重结晶2次，得到纯4-甲基-3-硝基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶异构体-2的(-)-二对甲苯酰-L-酒石酸盐（4.0 g）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6), 12.9-13.9 (brs, 2H), 7.87 (d, J = 8.4 Hz,4H), 7.69 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 4H), 6.89 (d, J = 4.4 Hz,1H) , 5.79 (s, 2H), 4.46-4.52 (brs, 2H), 4.11-4.22 (m, 1H), 2.46 (s, 6H),2.07 (s, 3H), 1.35 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤H：4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺
Figure 413986DEST_PATH_IMAGE177
室温下，将4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺 (-)-二对甲苯酰-L-酒石酸盐（4.0 g）加入DCM（100 mL），滴加饱和NaHCO3水溶液（40 ml），加完继续在室温下搅拌0.5小时。有机相分离，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（1.1 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.01 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 4.4Hz, 1H), 3.48-3.80 (m, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.57 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
HPLC RT = 8.57 min (柱：Chiralcel IC柱 4.6*250mm, 3μm； 柱温：30℃；流速：1.0 mL/min；波长：230 nm； 流动相：正己烷:乙醇（0.3%二乙胺）=98:2)。
步骤I：2,6-二氯-5-氟烟酰胺
Figure 677608DEST_PATH_IMAGE178
冰水冷却下向2,6-二氯-5-氟烟酸（5.0 g）的二氯甲烷（25 mL）溶液中依次慢慢滴加草酰氯（3 mL）和DMF（0.1 mL），加完升温至室温搅拌2小时。减压浓缩，残留物加入无水THF（20 mL），冰水冷却下慢慢滴加氨水（10 mL），加完升温至室温搅拌1小时，加水（20 mL），乙酸乙酯萃取（3×30 mL）。合并萃取液，依次用饱和碳酸氢钠溶液、水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到白色固体产物（4.50 g），直接用于下一步反应。
步骤J： 2,6-二氯-5-氟-N-{[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]氨基甲酰基}烟酰胺
Figure 309578DEST_PATH_IMAGE179
0℃下，向2,6-二氯-5-氟烟酰胺（1.14 g）的四氢呋喃（10 mL）溶液中加入草酰氯（0.76 mL）的四氢呋喃（2 mL）溶液，升至80℃搅拌1小时。冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，后溶于四氢呋喃（10 mL）中，将4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺（0.93 g）的四氢呋喃（4 mL）溶液缓慢加入到上述反应液中，后室温搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液（50 mL），后加入乙酸乙酯（50 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（1.99 g），直接进行下一步。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 10.01 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 8.49 (d, J = 5.2Hz, 1H), 7.88 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.85-3.94 (m,1H), 2.29 (s, 3H), 1.54 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤K：(R)-7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
Figure 898822DEST_PATH_IMAGE180
0℃下，向2,6-二氯-5-氟-N-{[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]氨基甲酰基}烟酰胺（650 mg）的四氢呋喃（20 mL）溶液中加入KHMDS（1 N）的四氢呋喃溶液（3.7 mL），升至室温搅拌1小时，加入饱和氯化铵水溶液（20 mL），后加入乙酸乙酯（20mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE= 1/1）纯化得到R轴手性产物产物（380 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.69 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.53-8.59 (br, 1H),8.29 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.23-3.30 (m, 1H), 2.15(s, 3H), 1.46 (d, J = 6.8 Hz, 3H) 。
步骤L：(R)-4,7-二氯-6-氟-1-[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 475297DEST_PATH_IMAGE181
向(R)-7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（300 m g）的乙腈（2 mL）溶液加入三氯氧磷（570 mg）和DIEA（0.60 mL）。升至80℃搅拌1小时。冷至室温，减压浓缩得到产物（314 mg），直接进行下一步。
步骤M：(2R,5S)-4-{7-氯-6-氟-(1R)-1-[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 309654DEST_PATH_IMAGE182
冰水浴冷却下，向(R)-4,7-二氯-6-氟-1-[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（314 m g）的乙腈（6 ml）溶液中加入(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（192 m g）和DIEA（0.5 mL），加完，升室温搅拌1小时，加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE= 2/1）纯化得到产物（358 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.62 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 7.2Hz, 1H), 7.26 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.71-4.85 (m, 1H), 4.49-4.61 (m, 0.5H),4.31-4.43 (m, 0.5H), 4.08-4.18 (m, 0.5H), 3.71-4.03 (m, 2.5H), 3.38-3.58 (m,1H), 3.15-3.28 (m, 1H), 2.05 (s, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.38-1.46 (m, 6H), 1.22-1.26 (m, 3H)。
步骤N：(2-氟-6-羟基苯基)三氟硼酸钾
Figure 796131DEST_PATH_IMAGE183
在室温下，将2-氟-6-羟基苯硼酸（3 g）溶于乙腈（100 mL），加入氟化钾水溶液（10mL, 0.724 g/mL），混合溶液在室温下搅拌2分钟，滴加入酒石酸的四氢呋喃溶液（30 mL,0.241 g/mL），室温下搅拌1小时。过滤，滤液减压浓缩，用异丙醇打浆，过滤，用少量异丙醇洗涤滤饼，干燥滤饼得到产物（2.4 g）。
1H NMR (400 MHz, DMSO), 8.04 (q, J = 14.8 Hz, 1H), 6.87-6.93 (m, 1H),6.27-6.33 (m, 2H)。
步骤O：(2R,5S)-4-{(1R)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 290697DEST_PATH_IMAGE184
氮气保护下，将(2R,5S)-4-{7-氯-6-氟-(1R)-1-[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（358 mg）、2-氟-6-羟基苯基三氟硼酸钾（326 mg）、Pd(dppf)Cl2（44 mg）和醋酸钾（294 mg）分散于1,4-二氧六环（6 mL）和H2O（0.6 mL）的混合溶剂中，随后升温至90℃搅拌2小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，向滤液中加入水，然后用乙酸乙酯萃取，有机相减压浓缩，残留物通过硅胶柱层析（PE/EA= 1/3）纯化得到产物（350 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.19-9.23 (m, 1H), 8.67 (d, J = 4.8 Hz, 1H),7.94 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.25-7.31 (m, 1H), 6.66-6.70 (m, 2H), 4.72-4.88 (m, 1H), 4.61-4.70 (m, 0.5H), 4.38-4.50 (m, 1H),4.27-4.37 (m, 0.5H), 3.91-3.99 (m, 0.5H), 3.61-3.87 (m, 2H), 3.41-3.51 (m,1H), 3.30-3.38 (m, 0.5H), 2.05 (s, 3H), 1.57-1.62 (m, 3H), 1.50 (s, 9H), 1.40(d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.34 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.31 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤P：(1R) -4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 495413DEST_PATH_IMAGE185
室温下，将上步反应得到的R手性轴产物(2R,5S)-4-{(1R)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（30mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌30分钟。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤Q： (1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 864953DEST_PATH_IMAGE186
0℃下，将上步反应得到的(1R)-4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-((S)1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（25 mg）和DIEA（100 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（3 mg）的DCM（1mL）溶液，升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（20 mg）。其最终单晶结构确认见附图。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.20 (s, 0.5H), 9.17 (s, 0.5H), 8.68 (d, J =4.8 Hz, 1H), 7.92-7.97 (m, 1H), 7.35 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.26-7.32 (m, 1H),6.51-6.71 (m, 3H), 6.36-6.43 (m, 1H), 5.78-5.83 (m, 1H), 5.10-5.19 (m, 0.5H),4.94-5.02 (m, 0.5H), 4.72-4.83 (m, 1H), 4.52 (d, J = 13.6 Hz, 0.5H), 4.36-4.45 (m, 0.5H), 4.28 (d, J = 14.0 Hz, 0.5H), 3.71-3.83 (m, 1.5H), 3.61-3.66(m, 0.5H), 3.39-3.51 (m, 1H), 3.27-3.32 (m, 0.5H), 2.06 (s, 1.5H), 2.05 (s,1.5H), 1.61 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.49 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.45 (d, J =7.2 Hz, 3H), 1.32 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.30 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H)。
附图1为单晶图谱，以下为参数：
Figure 471514DEST_PATH_IMAGE187
Figure 261616DEST_PATH_IMAGE188
Figure 688049DEST_PATH_IMAGE189
Figure 628323DEST_PATH_IMAGE190
Figure 584997DEST_PATH_IMAGE191
Figure 421366DEST_PATH_IMAGE192
Figure 335095DEST_PATH_IMAGE193
Figure 813481DEST_PATH_IMAGE194
Figure 988111DEST_PATH_IMAGE195
Figure 759495DEST_PATH_IMAGE196
Figure 160521DEST_PATH_IMAGE197
Figure 177018DEST_PATH_IMAGE198
Figure 81520DEST_PATH_IMAGE199
Figure 292315DEST_PATH_IMAGE200
Figure 39692DEST_PATH_IMAGE201
Figure 859880DEST_PATH_IMAGE202
Figure 884468DEST_PATH_IMAGE203
实施例21
(1R)-4-((3R,5S)-4-丙烯酰基-3,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 499120DEST_PATH_IMAGE204
以4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺和(2S,6R)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯为原料，参照实施例19的方法得到最终目标产物。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 9.15 (s, 1H), 8.69 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.09(d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.27-7.33 (m, 1H), 6.66-6.72(m, 2H), 6.62 (dd, J = 16.8 Hz, 10.4 Hz, 1H), 6.42 (dd, J = 16.8 Hz, 2.0 Hz,1H), 5.79 (dd, J = 10.0 Hz, 2.0 Hz, 1H), 4.58-4.88 (m, 2H), 4.28-4.38 (m,2H), 3.68-3.77 (m, 2H), 3.39-3.48 (m, 1H), 2.07 (s, 3H), 1.63 (d, J = 6.8 Hz,3H), 1.47 (d, J = 7.2 Hz, 3H), 1.30 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
实施例22
4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 373273DEST_PATH_IMAGE205
步骤A： 2-氨基-6-氟苯硼酸频哪醇酯
Figure 731573DEST_PATH_IMAGE206
氮气保护下，将2-溴-3-氟苯胺（1.15 g）、联硼频哪醇酯（3.07 g）、四（三苯基膦）钯（0.43 g）和醋酸钾（1.78 g）分散于1,4-二氧六环（30 mL）中，随后升温至120℃回流16小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（PE/DCM= 1/2）纯化得到产物（0.50 g）。
1H NMR(400 MHz, CDCl3) 7.07-7.13 (m, 1H), 6.28-6.35 (m, 2H), 3.70-5.70(br, 2H), 1.34 (s, 12H)。
步骤B：4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 876246DEST_PATH_IMAGE207
以4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺和2-氨基-6-氟苯硼酸频哪醇酯为原料，参照实施例19的方法得到最终目标产物。
1H NMR(400 MHz, CDCl3) 8.59 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.80-7.89 (m, 1H),7.24-7.27 (m, 1H), 7.10-7.15 (m, 1H), 6.46-6.69 (m, 2H), 6.34-6.42 (m, 2H),5.76-5.82 (m, 1H), 5.21-5.31 (m, 0.5H), 4.95-5.16 (m, 1H), 4.65-4.85 (m,0.5H), 4.20-4.52 (m, 3H), 3.29-4.08 (m, 4H), 2.03-2.07 (m, 3H), 1.39-1.58 (m,6H), 1.22-1.30 (m, 3H)。
实施例23
(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 786434DEST_PATH_IMAGE208
以4-甲基-2-(((S)1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺为原料，参照实施例22的方法得到最终目标产物。
1H NMR(400 MHz, CDCl3) 8.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.85-7.90 (m, 1H),7.26 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.10-7.15 (m, 1H), 6.35-6.69 (m, 4H), 5.77-5.83 (m,1H), 5.08-5.17 (m, 0.5H), 4.96-5.04 (m, 0.5H), 4.76-4.86 (m, 0.5H), 4.50 (d,J = 14.0 Hz, 0.5H), 4.06-4.52 (m, 3H), 3.64-3.84 (m, 2.5H), 3.40-3.54 (m,1H), 3.32 (dd, J = 14.0 Hz, 3.2 Hz, 0.5H), 2.05 (s, 1.5H), 2.04 (s, 1.5H),1.57 (d, J = 7.2 Hz, 1.5H), 1.42-1.49 (m, 4.5H), 1.26-1.31 (m, 3H)。
实施例24
(1R)-4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 383768DEST_PATH_IMAGE209
步骤A：(3S)-4-{(1R)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 41365DEST_PATH_IMAGE210
氮气保护下，将(3S)-4-{7-氯-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（35 mg）、2-氟-6-氨基苯基硼酸频哪醇酯（30 mg）、Pd(dppf)Cl2（2mg）和醋酸钾（15mg）分散于1,4-二氧六环（10 mL）和H2O（1 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃回流1小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到R手性轴产物（10 mg）和S手性轴产物（5 mg）。
R手性轴产物（Rf = 0.56）: 1H NMR (400MHz, CDCl3) 8.60 (d, J = 4.8 Hz,1H), 7.82 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.09-7.15 (m, 1H),6.45-6.50 (m, 1H), 6.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.90-4.82 (m, 6H), 3.42-3.64 (m,2H), 3.08-3.40 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.53-1.60 (m, 3H), 1.50 (s, 9H), 1.29(d, J = 6.8 Hz, 3H)。
S手性轴产物（Rf = 0.58）: 1H NMR (400MHz, CDCl3) 8.60 (d, J = 4.8 Hz,1H), 7.85 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.09-7.15 (m, 1H),6.45-6.49 (m, 1H), 6.37 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.59-4.50 (m, 7H), 2.92-3.57 (m,3H), 2.05 (s, 3H), 1.50 (s, 9H), 1.42 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.27 (d, J = 7.2Hz, 3H)。
步骤B：(1R)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]- 4-[(S)-2-甲基哌嗪-1-基]-吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 40545DEST_PATH_IMAGE211
室温下，将上步反应得到的R手性轴产物(3S)-4-{(1R)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（10mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤C：(1R)-4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 731420DEST_PATH_IMAGE212
0℃下，将上步反应得到的(1R)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-4-[(S)-2-甲基哌嗪-1-基]-吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（40 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（1.2 mg）的DCM（2.5 mL）溶液，升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（5mg）。
1H NMR (400MHz, CDCl3) 8.61 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 9.2 Hz,1H), 7.25 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.10-7.15 (m, 1H), 6.52-6.70 (m, 1H), 6.46-6.50 (m, 1H), 6.37-6.42 (m, 2H), 5.81 (dd, J = 10.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 4.66-4.98 (m, 2H), 4.42-4.56 (m, 1H), 4.18-4.38 (br, 2H), 3.82-4.08 (m, 1H), 3.44-3.80 (m, 3H), 3.12-3.32 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.49 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H),1.41 (d, J = 6.8 Hz, 1.5H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
实施例25
(1S)-4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 81630DEST_PATH_IMAGE213
步骤A：(1S)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]- 4-[(S)-2-甲基哌嗪-1-基]-吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 906367DEST_PATH_IMAGE214
室温下，将实施例24步骤B得到的S手性轴产物(3S)-4-{(1S)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（5 mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（2 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤B：(1S)-4-((S)-4-丙烯酰基-2-甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 258588DEST_PATH_IMAGE215
0℃下，将上步反应得到的(1S)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-[4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]-4-[(S)-2-甲基哌嗪-1-基]-吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（20 mg）溶于DCM（3 ml），随后缓慢滴加丙烯酰氯（0.6 mg）的DCM（2 mL）溶液，升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/15）纯化得到产物（2mg）。
1H NMR (400MHz, CDCl3) 8.61 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 9.2 Hz,1H), 7.26 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.10-7.16 (m, 1H), 6.52-6.69 (m, 1H), 6.37-6.50 (m, 3H), 5.81 (dd, J = 10.4 Hz, 1.6 Hz, 1H), 5.32-5.44 (m, 0.5H), 4.95-5.08 (m, 0.5H), 4.73-4.83 (m, 0.5H), 4.46-4.60 (m, 0.5H), 4.16-4.42 (m, 3H),3.84-4.12 (m, 2H), 3.23-3.80 (m, 2.5H), 2.93-3.05 (m, 0.5H), 2.05 (s, 3H),1.51 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.42 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
实施例26
(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基) -4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 651523DEST_PATH_IMAGE216
步骤A：2-(1-乙氧基乙烯基)-4-甲基-3-硝基吡啶
Figure 957871DEST_PATH_IMAGE217
氮气保护下，将2-溴-4-甲基-3-硝基吡啶（1.1 g）、三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡（2.2 g）和Pd(dppf)Cl2（0.2 g）分散于1,4-二氧六环（30 mL）中，随后升温至120℃回流24小时。冷却至室温，加入饱和KF水溶液（50 mL）继续搅拌1小时，后将反应混合物垫硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯（50 mL×3）萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（0.9 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.49 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 5.2Hz, 1H), 5.15 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.49 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 3.87 (q, J = 7.2Hz, 2H), 2.34 (s, 3H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤B：1-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)乙-1-酮
Figure 196085DEST_PATH_IMAGE218
室温下，将2-(1-乙氧基乙烯基)-4-甲基-3-硝基吡啶（0.9 g）溶于THF（20mL）中，加入盐酸（4 N）溶液（20 mL），随后搅拌至反应完全。用氢氧化钠（1 N）溶液调至pH=7-8，后用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到产物（0.75 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 4.8Hz, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.37 (s, 3H)。
步骤C：4-甲基-3-硝基-2-{1,1,1-三氟-2-[(三甲基甲硅烷基)氧基]丙-2-基}吡啶
Figure 936902DEST_PATH_IMAGE219
0℃下，将1-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)乙-1-酮（7.7 g）和醋酸钾（4.3 g）分散于DMSO（30 mL）中，后将三氟甲基三甲基硅烷（13 g）缓慢加入到上述反应液中，升至室温搅拌5小时，用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，后用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩得到产物（12.9 g），直接进行下一步。
步骤D：1,1,1-三氟-2-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)丙-2-醇
Figure 359793DEST_PATH_IMAGE220
室温下，将4-甲基-3-硝基-2-{1,1,1-三氟-2-[(三甲基甲硅烷基)氧基]丙-2-基}吡啶（12.9 g）和碳酸钾（5.5 g）分散于甲醇（30 ml）中，随后搅拌1小时。反应混合物垫硅藻土过滤，甲醇（30 ml）洗涤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（6.2 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.55 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 4.8Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 2.31 (s, 3H), 1.76 (s, 3H)。
步骤E：4-甲基-3-硝基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶
Figure 419016DEST_PATH_IMAGE221
0℃下，向1,1,1-三氟-2-(4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)丙-2-醇（6.2 g）的二氯甲烷（10 mL）溶液中缓慢加入DAST（7.6 g），加完慢慢升至室温（20℃）搅拌过夜。冷却下，滴加饱和碳酸氢钠溶液至没有气泡产生，搅拌15分钟，分层，有机相分离，水相用二氯甲烷萃取。合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/5）分离得到产物（5.1 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.61 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 5.2Hz, 1H), 6.20 (s, 1H), 5.82 (s, 1H), 2.40 (s, 3H)。
步骤F： 2-(1,1-二氟丙-1-烯-2-基)-4-甲基吡啶-3-胺
Figure 460921DEST_PATH_IMAGE222
向4-甲基-3-硝基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶（0.75 g）的异丙醇（10 mL）溶液中加入铂碳（60 mg），随后用氢气充分换气后搅拌13小时。通过硅藻土过滤，滤液浓缩通过硅胶柱层析（EA/PE= 1/4）纯化得到产物（0.12 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 7.96 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 4.8Hz, 1H), 3.10-4.90 (br, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.93-1.95 (m, 3H)。
步骤G： 2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-胺
Figure 554779DEST_PATH_IMAGE223
向2-(1,1-二氟丙-1-烯-2-基)-4-甲基吡啶-3-胺（0.12 g）的异丙醇（5 mL）溶液中加入钯碳（10 mg），随后用氢气充分换气后搅拌6小时。通过硅藻土过滤，滤液浓缩得到产物（0.10 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 7.93 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 4.8Hz, 1H), 6.06 (td, J = 57.2 Hz, 6.8 Hz, 1H), 3.48-3.82 (br, 2H), 3.29-3.41(m, 1H), 2.16 (s, 3H), 1.37 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
步骤H： 2,6-二氯-N-{[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酰基}-5-氟烟酰胺
Figure 522473DEST_PATH_IMAGE224
0℃下，向2,6-二氯-5-氟烟酰胺（100 mg）的四氢呋喃（30 mL）溶液中加入草酰氯（200 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液，升至80℃搅拌1小时。冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，后溶于四氢呋喃（10 mL）中，将2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-胺（100 mg）的四氢呋喃（2 mL）溶液缓慢加入到上述反应液中，后室温搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液（5mL），后加入乙酸乙酯（15 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（200 mg），直接进行下一步。
步骤I： 7-氯-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-4-羟基吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 803412DEST_PATH_IMAGE225
0℃下，向2,6-二氯-N-{[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]氨基甲酰基}-5-氟烟酰胺（200 mg）的四氢呋喃（10 mL）溶液中加入KHMDS（1 N）的四氢呋喃溶液（1.3mL），升至室温（20℃）搅拌2小时，加入饱和氯化铵水溶液（10 mL），后加入乙酸乙酯（20mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（170 mg），直接进行下一步。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.58 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 6.4Hz, 1H), 7.23 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.03 (td, J = 16.8 Hz, 6.4 Hz, 1H), 2.90-2.99 (m, 1H), 2.09 (s, 3H), 1.21 (d, J = 7.6 Hz, 3H)。
步骤J： 4,7-二氯-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟并吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 649009DEST_PATH_IMAGE226
向7-氯-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-4-羟基吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮（170 mg）的乙腈（10 mL）溶液加入三氯氧磷（200 mg）和DIEA（150 mg）。升至80℃搅拌1小时。冷至室温，减压浓缩得到产物，直接进行下一步。
步骤K：(2R,5S)-4-{7-氯-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 456428DEST_PATH_IMAGE227
室温下，向4,7-二氯-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟并吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的乙腈（10 ml）溶液中加入(2R,5S)- 2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（95 mg）和DIEA（100 mg），室温下搅拌1小时，加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE= 1/3）纯化得到产物（70 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.54-8.56 (m, 1H), 7.77-7.83 (m, 1H), 7.22(d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.89-6.20 (m, 1H), 4.74-5.01 (m, 1H), 4.48-4.60 (m,0.5H), 4.28-4.41 (m, 0.5H), 3.71-4.14 (m, 3H), 3.42-3.61 (m, 1H), 2.80-2.96(m, 1H), 2.04 (s, 3H), 1.48 (s, 9H), 1.37-1.45 (m, 3H), 1.19-1.26 (m, 6H)。
步骤L：(2R,5S)-4-{(1R)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 96488DEST_PATH_IMAGE228
氮气保护下，将(2R,5S)-4-{7-氯-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（70 mg）、2-氟-6-氨基苯基硼酸频哪醇酯（72 mg）、Pd(dppf)Cl2（10mg）和醋酸钾（45mg）分散于1,4-二氧六环（15 mL）和H2O（1 mL）的混合溶剂中，随后升温至100℃回流1小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到R手性轴产物（40 mg）和S手性轴产物（32 mg）。
R手性轴产物（Rf = 0.61）: 1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.54 (d, J = 4.8 Hz,1H), 7.87 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.09-7.14 (m, 1H),6.44-6.49 (m, 1H), 6.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.91-6.23 (m, 1H), 4.80-5.08 (m,1H), 4.16-4.66 (m, 4H), 3.71-4.01 (m, 2H), 3.37-3.57 (m, 1H), 3.02-3.20 (m,1H), 2.03-2.07 (m, 3H), 1.39-1.54 (m, 12H), 1.29-1.37 (m, 3H), 1.12-1.16 (m,3H)。
S手性轴产物（Rf = 0.63）:1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.54 (d, J = 4.8 Hz,1H), 7.81-7.88 (m, 1H), 7.20 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.06-7.15 (m, 1H), 6.45-6.49 (m, 1H), 6.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.05 (td, J = 57.2 Hz, 5.2 Hz, 1H),4.95-5.10 (m, 1H), 4.24-4.64 (m, 3H), 3.46-4.04 (m, 4H), 3.01-3.14 (m, 1H),2.06 (s, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.38-1.46 (m, 3H), 1.22-1.26 (m, 3H), 1.13 (d, J= 6.4 Hz, 3H)。
步骤M：(1R)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 649346DEST_PATH_IMAGE229
室温下，将上步反应得到的R手性轴产物(2R,5S)-4-{(1R)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（40mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（5 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤N：(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 298633DEST_PATH_IMAGE230
0℃下，将上步反应得到的(1R)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（40 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（4.6 mg）的DCM（10 mL）溶液，升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（22 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.55 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.82-7.88 (m, 1H),7.21 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.09-7.15 (m, 1H), 6.35-6.68 (m, 4H), 5.90-6.23 (m,1H), 5.77-5.82 (m, 1H), 4.94-2.57 (m, 1.5H), 4.80-4.91 (m, 0.5H), 4.30-4.58(m, 3.5H), 4.12-4.22 (m, 0.5H), 3.81-3.90 (m, 1H), 3.67-3.76 (m, 1H), 3.01-3.18 (m, 1H), 2.03-20.7 (m, 3H), 1.35-1.53 (m, 6H), 1.11-1.16 (m, 3H)。
实施例27
(1S)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基) -4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 835925DEST_PATH_IMAGE231
步骤A：(1S)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 912465DEST_PATH_IMAGE232
室温下，将实施例26步骤L反应得到的S手性轴产物(2R,5S)-4-{(1S)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-6-氟-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（32mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（5 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤B：(1S)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基) -4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 666532DEST_PATH_IMAGE233
0℃下，将上步反应得到的(1S)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-基]-4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（40 mg）溶于DCM（2 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（3.8 mg）的DCM（10 mL）溶液，升至室温搅拌5分钟。加水（10 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（11 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.55 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.80-7.86 (m, 1H),7.21 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.10-7.16 (m, 1H), 6.34-6.66 (m, 4H), 6.05 (td, J =56.8 Hz, 5.6 Hz, 1H), 5.76-5.82 (m, 1H), 4.92-5.28 (m, 2H), 4.22-4.46 (m,3H), 3.82-4.04 (m, 2H), 3.68-3.74 (m, 0.5H), 3.46-3.56 (m, 0.5H), 2.99-3.15(m, 1H), 2.03-2.10 (m, 3H), 1.34-1.45 (m, 4.5H), 1.27-1.28 (m, 1.5H), 1.13(d, J = 6.8 Hz, 3H)。
实施例28
(1S)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基) -4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 978565DEST_PATH_IMAGE234
步骤A： 4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺
Figure 635942DEST_PATH_IMAGE235
向4-甲基-3-硝基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶（0.34 g）的四氢呋喃（10mL）溶液中加入钯碳（40 mg），随后用氢气充分换气后搅拌5小时。通过硅藻土过滤，滤液浓缩得到产物（0.27 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.01 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 4.4Hz, 1H), 3.48-3.80 (m, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.57 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤B：(1S)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基) -4-甲基吡啶-3-基]-6-氟吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 617805DEST_PATH_IMAGE236
以4-甲基-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺为原料代替2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-胺参照实施例26步骤H到L的的方法和实施例27步骤A到B的的方法得到最终目标产物(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氟-6-羟基苯基)-1-[4-甲基-2-((S)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮。
1H NMR(400 MHz, CDCl3) 8.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.84-7.89 (m, 1H),7.23-7.27 (m, 1H), 7.10-7.15 (m, 1H), 6.46-6.70 (m, 2H), 6.34-6.42 (m, 2H),5.76-5.82 (m, 1H), 5.20-5.31 (m, 0.5H), 4.94-5.15 (m, 1H), 4.65-4.85 (m,0.5H), 4.20-4.52 (m, 3H), 3.29-4.08 (m, 4H), 2.03-2.07 (m, 3H), 1.39-1.58 (m,6H), 1.24-1.31(m, 3H)。
实施例29
(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 360633DEST_PATH_IMAGE237
步骤A：4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺（异构体-1）(+)-二对甲苯酰-D-酒石酸盐
Figure 853187DEST_PATH_IMAGE238
将4-甲基-3-硝基-2-(3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶（5.15 g）和(+)-二对甲苯酰-D-酒石酸（9.74 g）加入到丙酮（70 ml）中，升温至80℃搅拌2小时。冷却至室温静置3天，过滤，收集固体（7.0 g），将其用丙酮重结晶2次，得到纯4-甲基-3-硝基-2-((R)-3,3,3-三氟丙-1-烯-2-基)吡啶的(+)-二对甲苯酰-D-酒石酸盐（3.0 g）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6), 12.9-13.9 (brs, 2H), 7.87 (d, J = 8.4 Hz,4H), 7.69 (d, J = 4.4 Hz,1H), 7.37 (d, J = 8.4 Hz,4H), 6.89 (d, J = 4.4 Hz,1H) , 5.79 (s, 2H), 4.46-4.52 (brs, 2H), 4.11-4.22 (m, 1H), 2.46 (s, 6H),2.07 (s, 3H), 1.35 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤B：4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺
Figure 365071DEST_PATH_IMAGE239
室温下，将4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺 (+)-二对甲苯酰-D-酒石酸盐（3.0 g）加入DCM（20 mL），滴加饱和NaHCO3水溶液（50 ml），加完继续在室温下搅拌0.5小时。有机相分离，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到产物（1.0g），直接进行下一步。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.01 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 4.4Hz, 1H), 3.48-3.80 (m, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.57 (d, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤C： (1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 642469DEST_PATH_IMAGE240
以4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-胺为原料代替2-(1,1-二氟丙烷-2-基)-4-甲基吡啶-3-胺参照实施例26步骤H到N的的方法得到最终目标产物(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-6-氟-7-(2-氨基-6-氟苯基)-1-[4-甲基-2-((R)-1,1,1-三氟丙烷-2-基)吡啶-3-基]吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮。
1H NMR(400 MHz, CDCl3) 8.52 (s, , 0.5 H), 8.50 (s, 0.5 H), 7.86-7.92(m, 1H), 7.25 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.10-7.15 (m, 1H), 6.34-6.69 (m, 4H),5.77-5.82 (m, 1H), 4.73-5.10 (m, 2H), 4.02-4.52 (m, 3H), 3.64-3.84 (m, 2 H),3.28-3.50 (m, 2H), 2.05 (s, 1.5H), 2.04 (s, 1.5H), 1.40-1.61 (m, 6 H), 1.25-1.35 (m, 3H)。
实施例30
(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟1-[(2-异丙基-4-甲基吡啶)-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 138172DEST_PATH_IMAGE241
步骤A： 4-甲基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺
Figure 401794DEST_PATH_IMAGE242
氮气保护下，将2-溴-4-甲基吡啶-3-胺（15.8 g）、异丙烯基硼酸频哪醇酯（18.5g）和Pd(dppf)Cl2（1.8 g）分散于1,4-二氧六环（180 mL）和水中（20 mL），随后升温至120℃回流24小时。冷却至室温，后将反应混合物垫硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯（100 mL×3）萃取，合并有机相，减压浓缩，残留物经硅胶柱层析（EtOAc/PE = 1/4）分离得到产物（11 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 7.87 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 4.8Hz, 1H), 5.41-5.42 (m, 1H), 5.19-5.21 (m, 1H), 3.77-3.92 (br, 2H), 2.13 (s,3H), 2.11 (t, J = 1.2 Hz, 3H)。
步骤B： 2-异丙基-4-甲基吡啶-3-胺
Figure 266720DEST_PATH_IMAGE243
向4-甲基-2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-3-胺（11 g）的异丙醇（80 mL）溶液中加入钯碳（1.0 g），随后用氢气充分换气后搅拌12小时。通过硅藻土过滤，滤液浓缩得到产物（10 g）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 7.93 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 4.8Hz, 1H), 3.52-3.66 (br, 2H), 2.98-3.08 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 1.29 (d, J =6.8 Hz, 3H)。
步骤C： 2,6-二氯-5-氟-N-[ (2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酰基]烟酰胺
Figure 121544DEST_PATH_IMAGE244
0℃下，向2,6-二氯-5-氟烟酰胺（14 g）的四氢呋喃（80 mL）溶液中加入草酰氯（25g）的四氢呋喃（20 mL）溶液，升至80℃搅拌2小时。冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，后溶于四氢呋喃（100 mL）中，将2-异丙基-4-甲基吡啶-3-胺（10 g）的四氢呋喃（20 mL）溶液缓慢加入到上述反应液中，后室温搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液（50 mL），后加入乙酸乙酯（100 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（23 g），直接进行下一步。
步骤D： 7-氯-6-氟-4-羟基-1-(2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶[2,3-d]嘧啶--2(1H)-酮
Figure 573385DEST_PATH_IMAGE245
0℃下，向2,6-二氯-5-氟-N-[ (2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)氨基甲酰基]烟酰胺（23 g）的四氢呋喃（100 mL）溶液中加入KHMDS（1 N）的四氢呋喃溶液（165 mL），升至室温（20℃）搅拌2小时，加入饱和氯化铵水溶液（100 mL），后加入乙酸乙酯（100 mL），有机相分离，依次用水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得残留物通过硅胶柱层析（EA/PE= 1/2）纯化得到产物（8.1 g）。
步骤E： (R)-7-氯-6-氟-4-羟基-1-(2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶[2,3-d]嘧啶--2(1H)-酮
Figure 906277DEST_PATH_IMAGE246
向7-氯-6-氟-4-羟基-1-(2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶[2,3-d]嘧啶--2(1H)-酮（1.2 g）的2-甲基四氢呋喃（8.4 mL）溶液中加入D-(+)-二苯甲酰酒石酸（2.47g）），升至75℃搅拌0.5小时，后趁热过滤，向滤液中加入正庚烷（6 mL），降温至65℃，继续搅拌0.5小时，后降温至20℃，静置8小时后析出晶体，将晶体用2-甲基四氢呋喃和正庚烷（7/5）的混合溶剂进行二次重结晶，将二次重结晶的晶体加入饱和的磷酸氢二钠水溶液中，搅拌15分钟后用甲基叔丁基醚进行萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体产物（360 mg，）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.84-8.94 (br, 1H), 8.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H),8.24 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 2.66-2.72 (m, 1H), 2.08(s, 3H), 1.21 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.11 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
HPLC RT = 32.12 min (柱： CHIRALPAK IC-3, 4.6*250mm, 3μm；柱温：30℃；流速: 1.0 ml/min；波长：230 nm；流动相：正己烷：乙醇（0.3%二乙胺）=9:1)。
步骤F： (R)-4,7-二氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 517387DEST_PATH_IMAGE247
向(R)-7-氯-6-氟-4-羟基-1-(2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶[2,3-d]嘧啶--2(1H)-酮（260 mg）的乙腈（20 mL）溶液加入三氯氧磷（228 mg）和DIEA（129 mg）。升至80℃搅拌1小时。冷至室温，减压浓缩得到产物，直接进行下一步。
步骤G： (R)-(2R,5S)-4-{7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-氧-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 507559DEST_PATH_IMAGE248
室温下，向(R)-4,7-二氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮的乙腈（20 ml）溶液中加入(2R,5S)- 2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（177mg）和DIEA（194 mg），室温下搅拌1小时，加水（20 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（EA/PE=1/3）纯化得到产物（312 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.55 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 6.8HZ, 1H), 7.12 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.78-4.98 (m, 1H), 4.48-4.58 (m, 0.6H),4.30-4.41 (m, 0.4H), 3.71-4.05 (m, 3H), 3.43-3.61 (m, 1H), 2.50-2.61 (m, 1H),2.02 (s, 3H), 1.49 (s, 9H), 1.36-1.42 (m, 3H), 1.18-1.23 (m, 6H), 1.11 (d, J= 6.8 Hz, 3H)。
步骤H： (R)-(2R,5S)-4-{7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)- 2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 712275DEST_PATH_IMAGE249
氮气保护下，将(R)-(2R,5S)-4-{7-氯-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)-2-氧-1,2-二氢吡啶基[2,3- d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（312 mg）、2-氟-6-氨基苯基硼酸频哪醇酯（230 mg）、Pd(dppf)Cl2（21mg）和醋酸钾（230mg）分散于1,4-二氧六环（30 mL）和H2O（2 mL）的混合溶剂中，随后升温至90℃回流1小时。冷却至室温，将反应混合物用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯和水萃取，合并有机相，减压浓缩，通过硅胶柱层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（200 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.46 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 9.6Hz, 1H), 7.04-7.10 (m, 2H), 6.40-6.44 (m, 1H), 6.36 (d, J = 8.4 Hz, 1H),4.83-4.98 (m, 1H), 4.50-4.66 (m, 2.4H), 4.32-4.43 (m, 0.6H), 4.04-4.23 (m,1H), 3.73-3.84 (m, 2H), 3.42-3.59 (m, 1H), 2.70-2.78 (m, 1H), 2.02 (s, 3H),1.48 (s, 9H), 1.39-1.46 (m, 3H), 1.28 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.20 (d, J = 7.2Hz, 3H), 1.02 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。
步骤I：(R)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 583279DEST_PATH_IMAGE250
室温下，将上步反应得到的产物(R)-(2R,5S)-4-{7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)- 2-氧代-1,2-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4-基}-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（200mg）加入圆底烧瓶，在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液（15 ml）（TFA/DCM=1:2），随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA，残留物直接用于后续反应。
步骤J：(1R)-4-((2S,5R)-4-丙烯酰基-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-6-氟1-[(2-异丙基-4-甲基吡啶)-3-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮
Figure 189841DEST_PATH_IMAGE251
0℃下，将上步反应得到的(R)-7-(2-氨基-6-氟苯基)-4-[(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-6-氟-1-(2-异丙基-4-甲基吡啶-3-基)吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮和DIEA（650mg）溶于DCM（20 mL），随后缓慢滴加丙烯酰氯（25 mg）的DCM（10 mL）溶液，升至室温搅拌5分钟。加水（15 ml）淬灭反应，用DCM萃取，收集有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物通过硅胶制备板层析（MeOH/DCM= 1/20）纯化得到产物（120 mg）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3), 8.50 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 9.2Hz, 1H), 7.07-7.13 (m, 2H), 6.51-6.67 (m, 1H), 6.32-6.47 (m, 3H), 5.74-5.82(m, 1H), 5.02-5.14 (m, 1H), 4.85-4.95 (m, 0.4H), 4.32-4.56 (m, 3H), 4.06-4.14(m, 1H), 3.84-3.94 (m, 1H), 3.66-3.82 (m, 1H), 3.40-3.48 (m, 0.6H), 2.69-2.80(m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.39-1.49 (m, 4.2H), 1.33 (d, J = 6.8 Hz, 1.8H), 1.22-1.25 (m, 3H), 1.02-1.05 (m, 3H)。
生物活性试验
1.化合物对KRASG12C的体外酶学活性检测
本专利中化合物对KRASG12C的酶学活性（检测化合物的半抑制浓度IC50值）的检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法进行。将化合物从10 mM开始用100% DMSO进行10倍的梯度稀释(共5个浓度)，每个浓度取2 μL的化合物加入到38 μL的反应缓冲液(50 mMHEPES, 150 mM NaCl, 5mM MgCl2, 0.05% Tween 20)中进行稀释混匀。上述稀释化合物每个浓度取2 μL加入到48 μL的反应缓冲液中进行进一步稀释混匀。取24 μL最终稀释后的化合物加入到96孔板(购自CORNING)中，然后加入24 μL的His-KRASG12C(终浓度为1 nM)，将96孔板放于孵育箱中23°C反应1小时后，每孔加入48 μL能够与KRASG12C不可逆结合的生物素标记的标签化合物(终浓度100 nM)，23°C孵育箱中继续反应1小时。取上述反应混合液40 μL加入链霉亲和素包被的96孔板(购自Thermo Fisher Scientific)中，每孔补加60 μL洗涤液(20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 0.05% Tween20, 0.1% BSA)至100 μL，23°C孵育箱中反应1小时。弃去孔内溶液，洗涤液洗涤3次。之后每孔加入洗涤液稀释的anti-RAS抗体(购自Abcam，1:2000稀释) 100 μL，23°C孵育箱中反应1小时。弃去孔内溶液，洗涤液洗涤3次。每孔加入洗涤液稀释的辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔抗体(购自康为世纪，1:5000稀释) 100 μL，23°C孵育箱中反应1小时。弃去孔内溶液，洗涤液洗涤3次。每孔加入100μL 辣根过氧化物酶底物TMB(购自康为世纪)，23°C孵育箱中反应25分钟后，最后每孔加入50 μL 0.5 mol/L H2SO4终止显色反应，在Flexstation 3上读取450 nm下的光吸收值。每个化合物分别在5个浓度下测定其与KRASG12C的结合活性，使用GraphPad Prism软件计算得到该化合物的IC50值。
上述部分化合物的测试结果如表8所示。
表8：化合物的体外酶学活性结果
Figure 353844DEST_PATH_IMAGE252
发明人通过对大量不同化合物的吡啶2号位的异丙基进行三氟取代，大部分化合物的活性较好，说明吡啶2号位的三氟取代的异丙基是较为重要的构效基团，对异丙基采用三氟取代能够明显影响化合物的构效关系。
吡啶2号位的异丙基采用三氟取代后会产生手性，出乎意料的是，S构型的化合物（化合物编号20、23）活性大幅提高，明显优于R构型的化合物（化合物编号19、29），其中，S构型的化合物编号20的活性是R构型的化合物编号19的7倍左右，S构型的化合物编号23的活性也出乎预料地达到了R构型的化合物编号29的7倍以上。
难以预期的是，与吡啶2号位的异丙基未进行三氟取代的化合物（编号30）相比较，化合物编号23（S构型）的活性显著提升，惊人地达到了化合物编号30的7.8倍。而化合物编号29（R构型）的活性明显降低，仅为化合物编号23（S构型）活性的15%。这些显然是根据现有技术无法进行合理预测的。
可见，吡啶2号位的三氟取代的异丙基能够显著影响化合物的构效关系，而R构型的化合物活性较差，S构型的化合物活性明显优于R构型的化合物。
吡啶2号位有较大取代基团时，其与嘧啶酮母核相连单键不能自由转动产生轴手性，不同的构型对化合物活性产生不同影响。R构型化合物（化合物编号10）的活性显著高于S构型化合物（化合物编号7）。
2.化合物抑制NCI-H358细胞增殖的活性测定
人非小细胞肺癌细胞系NCI-H358细胞（购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心）使用RPMI-1640培养基加10%的胎牛血清(FBS，购自Biological Industries，BI)和1%青霉素/链霉素(P/S，购自Thermo Fisher Scientific)进行培养，培养条件为37°C，5%CO2。将NCI-H358细胞以2000个细胞/195μL/孔的浓度铺于96孔板(#3917，购自CORNING)中。24小时后将化合物从10 mM开始用100% DMSO进行 3倍的梯度稀释混匀(共10个浓度)，然后每个浓度取2 μL的化合物加入到48 μL的RPMI-1640培养基中进行稀释混匀。稀释后的化合物每个浓度取5μL加入铺好的细胞悬液中，将化合物与细胞在细胞培养箱中共孵育120小时(5天)。之后去除培养基后加入25 μL的Cell-Titer Glo ®(G7570，购自Promega)试剂，室温摇床反应5- 10分钟。在Envision上读取化学发光值，数据使用GraphPad Prism软件进行处理，计算得到该化合物对细胞增殖抑制的IC50值。
上述部分化合物的测试结果如表9所示。
表9：化合物的体外细胞学活性结果
Figure 904911DEST_PATH_IMAGE253
化合物抑制NCI-H358细胞增殖的活性测定结果与酶学活性趋势较为类似，吡啶2号位的异丙基采用三氟取代后，大部分化合物的活性较好，以化合物编号23和30为对比，化合物编号23（S构型）的细胞抑制活性超出预期地达到了化合物编号30的5.2倍。
3. SD大鼠体内的药代动力学研究：
研究使用10只（每组药物）健康成年雄性大鼠，来源于北京维通利华实验动物技术有限公司的。
实验给药方式为SD大鼠经口单次灌胃给药，给药剂量为5 mg/kg，给药体积为5mL/kg，给药浓度为1 mg/mL。
将化合物混悬于2%羟丙基甲基纤维素，1%吐温80（W/V/V）水溶液中，混悬液浓度为1 mg/mL。
灌胃给药的动物在实验前禁食过夜，禁食时间从给药前10小时至给药后4小时。给药后依次按时间：0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时进行采血。动物通过异氟烷浅麻醉，用玻璃采血管于眼眶静脉丛采血约0.3 mL全血，放于肝素钠抗凝管中，样品于4 oC、4200 rpm离心5 min，血浆转移至离心管中，并放于-80 oC保存直到分析。
血浆样品分析使用乙腈蛋白质沉淀法萃取大鼠血浆中的待测化合物和内标（华法林或普萘洛尔），萃取液通过LC/MS/MS分析。测到的个体动物的血浆浓度-时间数据用WinNonlin（版本5.2.1；Pharsight公司）软件的非房室模型进行分析，得到如下药代动力学参数：最大（峰值）血浆药物浓度Cmax；达峰时间Tmax；半衰期T1/2 和外推到无限长时间的血药浓度-时间曲线下面积AUC0-inf。
表10：化合物的PK测试结果
Figure 579606DEST_PATH_IMAGE254
如上表10和图2-4所示。与化合物编号30相比较，化合物23、26的半衰期T1/2均有明显的提升，作为抗肿瘤药物，较长的半衰期是本领域认可的，因为半衰期的延长意味着可以减少药物的频繁使用，对化合物30吡啶2号位的异丙基采用三氟（化合物23）或二氟（化合物26）取代后，半衰期明显延长，分别提高了33%和74%。最大（峰值）血浆药物浓度Cmax和血药浓度-时间曲线下面积AUC0-inf反应药物在动物体内的暴露量，是影响药效强度的重要指标。通常更高的Cmax和AUC会带来更好的治疗效果。化合物23和26的Cmax分别达到了化合物30的392%和197%。与化合物30相比较，化合物26的AUC0-inf值达到了228%，化合物23的AUC0-inf值更是出乎意料地达到了365%。

Claims (6)

1.以下所示化合物或其药学上可接受的盐，
Figure 775474DEST_PATH_IMAGE001
。
2.一种药物组合物，其包含根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，并任选地包含药学上可接受的辅料。
3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求2所述的药物组合物在制备治疗由KRAS突变介导的疾病的药物中的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其中所述由KRAS突变介导的疾病为癌症。
5.根据权利要求3所述的用途，其中所述由KRAS突变介导的疾病为实体瘤或血液肿瘤。
6.根据权利要求3所述的用途，其中所述由KRAS突变介导的疾病为肺癌、结肠癌、或胰腺癌。
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