CN112566898A - 12(s)-脂氧合酶（12-lox）的选择性抑制剂及其使用方法 - Google Patents

12(s)-脂氧合酶（12-lox）的选择性抑制剂及其使用方法 Download PDF

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Abstract

本文公开了12(S)‑脂氧合酶(12‑LOX)的小分子抑制剂，以及使用所述小分子抑制12‑LOX活化并治疗疾病，如血小板止血和血栓形成的方法。具体地说，本文公开了式(I)的化合物及其药学上可接受的盐：其中取代基如所描述。

Description

12(S)-脂氧合酶(12-LOX)的选择性抑制剂及其使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年4月17日提交的美国临时专利申请第62/658,936号的优先权，其全部公开内容通过引用并入于此。
技术领域
本公开涉及12(S)-脂氧合酶(“12-LOX”)的小分子抑制剂，和使用该小分子抑制12-LOX活化并治疗疾病如血小板止血和血栓形成的方法。
背景技术
血管损伤部位处的血小板粘附和聚集对于维持正常止血和防止失血是必不可少的。然而，当动脉粥样硬化斑块破裂损害血管壁的完整性时，相同的过程也可能导致动脉血栓形成和血管闭塞的形成。参见Ruggeri ZM,《自然·医学(Nat Med.)》,8:1227-1234(2002)。过度的血小板活化和聚集可能导致闭塞性血栓形成，并导致严重后果，如心肌梗塞、缺血性中风和肺栓塞，这是全世界发病率和死亡率的主要原因。参见Go等人,《循环(Circulation》》,129:399-410(2014)。抗血小板疗法由于其在防止异常血小板活化方面的效果而被认为是黄金标准，并且在治疗心血管动脉粥样硬化性事件以降低发病率和死亡率方面起着举足轻重的作用。参见Steg等人,《血栓形成与止血杂志(J Thromb Haemost)》,9(suppl1):325-332(2011)。当前批准的抗血小板疗法通过靶向血小板酶、受体和糖蛋白来抑制血小板功能。参见Ikei等人,《脂类研究杂志(J.Lipid Res.)》53:2546-2559(2012)。尽管这些治疗方法限制了血小板功能，但它们通常导致伴随的出血风险增加。因此，需要鉴定限制出血的新型抗血小板治疗靶标。
一种主要在人血小板中表达的氧合酶血小板12(S)-脂氧合酶(“12-LOX”)利用从磷脂中释放的花生四烯酸作为底物形成生物活性代谢物(12-(S)-氢过氧二十碳四烯酸和12-(S)-羟基二十碳四烯酸(12(S)-HETrE))，这两者物质已显示出调节生物过程，如整合素活化、血管高血压和某些类型癌症的进展。参见Steele等人,《癌症流行病学、生物标记与预防(Cancer Epidemiol Biomarkers Prev)》,8:467-483(1999)和Ghosh等人,《美国国家科学院院刊(Proc Natl Acad Sci U S A.)》95:13182-13187(1998)。由12-LOX氧化产生的生物活性脂质产物已显示出在血小板活化、颗粒分泌和体外血凝块回缩中起一定作用，表明12-LOX在调节血小板功能中的重要作用。参见Ikei等人。最近，已经确定了12-LOX活性在调节血小板中中的蛋白酶活化受体-4介导的(“PAR4介导的”)和糖蛋白VI介导的(“GPVI介导的”)信号传导路径中的关键作用。参见Kenyon等人,《药物化学杂志(J Med Chem.)》54:5485-5497(2011)；Luci等人,《药物化学杂志》57:495-506(2014)；Yeung等人,《血栓形成与止血(Thromb Haemost.)》110:569-581(2013)。
最近鉴定出一种下文所示的12-LOX抑制剂，ML355，并且它已显示出可在体外预防血栓形成，且对比旁系同源物5-人脂氧合酶、网织细胞15-人脂氧合酶1型和上皮15-人脂氧合酶2型的选择性>50倍，并且对比牛环氧合酶(“COX”)-1和人COX-2的选择性>100倍。
Figure BDA0002841495940000021
此外，最近报道了12-LOX对于FcγRIIa介导的血小板活化是必不可少的，这表明12-LOX也可能是限制免疫介导的血栓形成的潜在治疗靶标。参见Luci等人。ML355还已显示出可在体内削弱血栓配制和血管闭塞，且对止血的影响最小。参见Adili等人,《动脉硬化、血栓形成和血管生物学(Arterioscler Thromb Vasc Biol.)》37(10):1828-1839(2017)。因此，ML355治疗可能是针对肝素诱导的血小板减少症和血栓形成(“HITT”)的发病机理的理想疗法，以防止HITT的血栓性并发症的发生并限制其进展，因为(1)抑制12-LOX下调血小板反应性并从血小板颗粒中释放PF4(2)抑制12-LOX防止FcγRIIa依赖性免疫介导的血小板活化和血小板清除，以及(3)ML355抑制12-LOX有效抑制血栓形成而无出血并发症，这转化为目前使用凝血酶抑制剂进行临床治疗的更安全替代方案。ML355还已显示出具有合理的药代动力学、在临床前研究中具有相对好的耐受性，并且可以经口给予。然而，ML355的溶解度有限，这大幅地降低了其临床使用。
因此，需要能够治疗和/或预防血小板止血和血栓形成的ML355类似物，其表现出超过ML355的改进的体内效力和溶解性而不引起出血。
发明内容
本文提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002841495940000031
其中：R2是卤基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基；R1、R3、R4和R5中的每一个独立地是H、卤基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基；Ra和Rb中的每一个独立地是OH、OC1-3烷基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基、OC3-8氟环烷基或卤基；Rc、Rd、Re中的每一个独立地是H、OH、OC1-3烷基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基、OC3-8氟环烷基或卤基。
在一些实施例中，R2是卤基(例如，Br、Cl或F)。在各种实施例中，R2是Cl或F。在一些情况下，R2是Cl。在各种情况下，R2是C1-3氟烷基(例如，CH2F、CHF2或CF3)、C3-8氟环烷基(例如，被F、CH2F、CHF2或CF3取代的环丙基、环丁基、环戊基或环己基)、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基。在一些实施例中，R2是CF3或
Figure BDA0002841495940000032
在一些情况下，R1、R3、R4和R5中的每一个是H。在各种情况下，R1、R3、R4和R5中的一个或多个是卤基(例如，Br、Cl或F)、C1-3氟烷基(例如，CH2F、CHF2或CF3)、C3-8氟环烷基(例如，被F、CH2F、CHF2或CF3取代的环丙基、环丁基、环戊基或环己基)、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基。在一些实施例中，R1、R3、R4和R5中的一个或多个是F、Cl、CF3或
Figure BDA0002841495940000041
在各种实施例中，R1是H或F；R2是Cl、CF3或
Figure BDA0002841495940000042
R3是H或F；R4是H；并且R5是H。
在一些情况下，Ra和Rb中的每一个独立地是OH或OC1-3烷基。在各种情况下，Ra和Rb中的一个是OH或OC1-3烷基；并且Ra和Rb中的另一个是C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基、OC3-8氟环烷基或卤基。在一些实施例中，OC1-3烷基是OCH3。在各种实施例中，Ra和Rb中的每一个独立地是C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基、OC3-8氟环烷基或卤基。在一些情况下，Ra和Rb中的至少一个是CF3、
Figure BDA0002841495940000043
F或Cl。在各种情况下，Rc、Rd和Re各自是H。在一些实施例中，Rc、Rd和Re中的一个或多个是卤基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基。在一些实施例中，Rc、Rd和Re中的一个或多个是F、Cl、CF3或
Figure BDA0002841495940000044
本公开的特别考虑的化合物包括表A中列出的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，本文提供选自由A1、A2、A3、A4、A5和A6组成的组的化合物或其盐。在一些情况下，本公开提供一种具有以下结构的化合物或其盐：
Figure BDA0002841495940000045
本公开还提供了一种药物组合物，其包含本文所述的化合物和药学上可接受的载剂。
本公开进一步提供了抑制细胞中的(S)-脂氧合酶(“12-LOX”)活化的方法，其包含使细胞与有效抑制12-LOX活化的量的本文所述的化合物或组合物接触。
本公开再进一步本公开的另一方面，提供了一种抑制血小板因子4(“PF4”)在细胞中释放的方法，其包含使细胞与有效抑制PF4释放的量的本文所述的化合物或组合物接触。
本公开还提供了一种抑制细胞中PF4-肝素复合物形成的方法，其包含使细胞与有效抑制PF4-肝素复合物形成的量的本文所述的化合物或组合物接触。
本公开进一步提供了一种抑制细胞中血小板活化的方法，其包含使细胞与有效抑制血小板活化的量的本文所述的化合物或组合物接触。在一些实施例中，血小板活化是FcγRIIa介导的血小板活化。
本公开再进一步提供了一种抑制细胞中凝血酶、蛋白酶活化受体-4(“PAR4”)和/或糖蛋白VI(“GPVI”)信号传导的方法，其包含使细胞与有效抑制PAR4和/或GPVI信号传导的量的本文所述的化合物或组合物接触。
本公开还提供了一种在有需要的受试者中治疗血栓性病症的方法，其包含向受试者施用治疗有效量的本文所述的化合物或组合物。血栓性病症的实例包括动脉血栓形成、深静脉血栓形成(“DVT”)、肺栓塞(“PE”)、缺血性中风、免疫性血小板减少症(“ITP”)、肝素诱发的血小板减少症(“HIT”)和肝素诱发的血小板减少症和血栓形成(“HITT”)。
本文还提供了一种预防受试者中血栓形成的方法，其包含向受试者施用治疗有效量的本文所述的化合物或组合物。
本文进一步提供了一种在有需要的受试者中治疗血小板减少症的方法，其包含向受试者施用治疗有效量的本文所述的化合物或组合物。
本领域普通技术人员将结合图式，从对以下详细描述的回顾清楚另外的方面和优点。下文的描述包括具体实施例，应理解本公开是说明性的，并且不旨在将本发明限制于本文所述的具体实施例。
附图说明
图1描绘了如实例部分中进一步所述的，在3个时间点(2小时、4小时和7小时)监测的小鼠(n＝3)血浆中口服或IV施用的化合物A1、A2和A4的浓度(30mg/kg)。
图2描绘了如实例部分中进一步所述的，在1μM、5μM、10μM和20μM下化合物A1-A7的胶原蛋白诱发的血小板聚集的百分比。
图3描绘了如实例部分中进一步所述的，在1μM、5μM、10μM和20μM下化合物A1-A7的凝血酶诱发的血小板聚集的百分比。
图4描绘了如实例部分中进一步所述的，在用聚乙二醇(“PEG”；对照，上)处理的野生型(“WT”)对照动物和用化合物A1(3mg/kg，一天两次持续2天；下)处理的WT中的睾提肌小动脉中正在形成的血栓中的血小板积聚(绿色)和纤维蛋白形成(红色)的代表性图像，表明血小板12(S)-脂氧合酶(“12-LOX”)的抑制作用会削弱激光诱发的睾提肌小动脉血栓形成模型中的血栓形成。
图5描绘了如实例部分中进一步所述的，在肝素诱导的血小板减少和血栓形成(“HITT”)后四小时，来自对照(PEG媒剂)和A1处理(15mg/kg)小鼠的小鼠肺中血小板积聚(绿色)的代表性图像，表明本文公开的化合物可以抑制小鼠肺中的血小板减少症和血栓形成。
具体实施方式
本文公开了具有式(I)的结构的化合物：
Figure BDA0002841495940000061
或其药学上可接受的盐，其可以抑制12(S)-脂氧合酶(“12-LOX”)，并用于治疗和预防与血小板止血和血栓形成有关的疾病。本文公开的化合物表现出超过与ML355的改进的体内溶解度和效力(例如，效力比ML355高至少10倍)，而不会引起出血。
本文公开的化合物可以剂量依赖性地抑制人血小板聚集和12-LOX氧脂素的产生。通过药代动力学评估，在小鼠中口服施用本文公开的化合物显示合理的血浆药物水平。同样，本文公开的化合物可以在小鼠中的FeCl3诱发的肠系膜、激光诱发的睾提肌小动脉血栓形成和免疫介导的抗GPIX体内模型中削弱血栓生长和血管闭塞。重要的是，在小鼠中响应于对隐静脉的激光切除或在睾提肌微脉管激光诱发的破裂模型中，在用本文所述的化合物治疗之后，止血性栓塞形成和出血是最少的。
定义
如本文所用，术语“烷基”是指含有一到三十个碳原子(例如，一到二十个碳原子或一到十个碳原子)的直链和支链饱和烃基。术语Cn意指烷基具有“n”个碳原子。例如，C4烷基是指具有4个碳原子的烷基。C1-7烷基是指具有涵盖整个范围(例如，1至7个碳原子)以及所有亚组(例如，1-6、2-7、1-5、3-6、1、2、3、4、5、6和7个碳原子)的碳原子数的烷基。烷基的非限制性实例包含甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基(2-甲基丙基)、叔丁基(1,1-二甲基乙基)、3,3-二甲基戊基和2-乙基己基。除非另有说明，否则烷基可以是未经取代的烷基或经取代的烷基。例如，烷基可以被一个或多个氟原子取代以形成氟烷基(例如，甲基可以被1至3个氟原子取代以提供CH2F、CHF2或CF3)。
如本文所用，术语“环烷基”是指含有三到八个碳原子(例如，3、4、5、6、7或8个碳原子)的脂肪族环状烃基。术语Cn意指环烷基具有“n”个碳原子。例如，C5环烷基是指在环中具有5个碳原子的环烷基。C5-8环烷基是指具有涵盖整个范围(例如，5至8个碳原子)以及所有亚组(例如，5-6、6-8、7-8、5-7、5、6、7和8个碳原子)的碳原子数的环烷基。环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。本文所述的环烷基可以是单独的，或与另一个环烷基、杂环烷基、芳基和/或杂芳基稠合。当环烷基与另一个环烷基稠合时，则每一个环烷基可以含有三至八个碳原子。除非另有说明，否则环烷基可以是经取代的或未经取代的，例如任选地被例如一至三个基团取代，所述基团独立地选择烷基、亚烷基-OH、C(O)NH2、NH2、氧代(＝O)、芳基、卤代烷基、卤基和OH。在一些情况下，环烷基可以被一个或多个(例如1至3个)氟基团取代。
如本文所用，术语“卤基”是指氟基、氯基、溴基或碘基。术语“卤代烷基”是指被至少一个(例如，1、2、3、4、5或1-5或1-3个)卤素取代的烷基。“氟烷基”是指其中卤基是氟基的卤代烷基。
如本文所用，术语“经取代的”，当用于修饰化学官能团时，是指官能团上的至少一个氢自由基被取代基替代。取代基可以包括但不限于烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、杂环烷基、硫醚、聚硫醚、芳基、杂芳基、羟基、氧基、烷氧基、杂烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、酯、硫酯、羧基、氰基、硝基、氨基、酰胺基、乙酰胺和卤基(例如氟基、氯基、溴基或碘基)。当化学官能团包括多于一个取代基时，这些取代基可键合至同一个碳原子或两个或更多个不同的碳原子。经取代的化学官能团本身可以包括一个或多个取代基。
如本文所用，术语“治疗有效量”意指改善、减轻或消除特定疾病或病状的一种或多种症状或者预防或延迟特定疾病或病状的多种症状中的一种的发作的化合物或治疗活性化合物的组合的量。
如本文所用，术语“患者”和“受试者”可以互换使用，并且意指动物(如狗、猫、牛、马和绵羊(例如，非人类动物))和人类。特定的患者或受试者是哺乳动物(例如，人类)。术语患者和受试者包括男性和女性。
如本文所用，术语“治疗(treating、treat或treatment等)”包括预防性(例如，预防性)治疗和缓解性治疗。在一些情况下，治疗是指治疗本文所公开的病症或疾病的症状。
化合物
本文提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002841495940000091
其中：
R2是卤基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基；
R1、R3、R4和R5中的每一个独立地是H、卤基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基；
Ra和Rb中的每一个独立地是OH、OC1-3烷基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基、OC3-8氟环烷基或卤基；并且
Rc、Rd、Re中的每一个独立是H、OH、OC1-3烷基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基、OC3-8氟环烷基或卤基。
在一些实施例中，R2是卤基(例如，Br、Cl或F)。在各种实施例中，R2是Cl或F。在一些情况下，R2是Cl。在各种情况下，R2是C1-3氟烷基(例如，CH2F、CHF2或CF3)、C3-8氟环烷基(例如，被F、CH2F、CHF2或CF3取代的环丙基、环丁基、环戊基或环己基)、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基。在一些实施例中，R2是CF3或
Figure BDA0002841495940000092
在一些情况下，R1、R3、R4和R5中的每一个是H。在各种情况下，R1、R3、R4和R5中的一个或多个是卤基(例如，Br、Cl或F)、C1-3氟烷基(例如，CH2F、CHF2或CF3)、C3-8氟环烷基(例如，被F、CH2F、CHF2或CF3取代的环丙基、环丁基、环戊基或环己基)、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基。在一些实施例中，R1、R3、R4和R5中的一个或多个是F、Cl、CF3或
Figure BDA0002841495940000101
在各种实施例中，R1是H或F；R2是Cl、CF3或
Figure BDA0002841495940000102
R3是H或F；R4是H；并且R5是H。
在一些情况下，Ra和Rb中的每一个独立地是OH或OC1-3烷基。在各种情况下，Ra和Rb中的一个是OH或OC1-3烷基；并且Ra和Rb中的另一个是C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基、OC3-8氟环烷基或卤基。在一些实施例中，OC1-3烷基是OCH3。在各种实施例中，Ra和Rb中的每一个独立地是C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基、OC3-8氟环烷基或卤基。在一些情况下，Ra和Rb中的至少一个是CF3、
Figure BDA0002841495940000103
F或Cl。在各种情况下，Rc、Rd和Re各自是H。在一些实施例中，Rc、Rd和Re中的一个或多个是卤基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基。在一些实施例中，Rc、Rd和Re中的一个或多个是F、Cl、CF3或
Figure BDA0002841495940000104
本公开的特别考虑的化合物包括表A中列出的化合物或其药学上可接受的盐：
表A
Figure BDA0002841495940000105
Figure BDA0002841495940000111
在一些实施例中，本文提供选自由A1、A2、A3、A4、A5和A6组成的组的化合物或其盐。在一些情况下，本公开提供一种具有以下结构的化合物或其盐：
Figure BDA0002841495940000112
化合物合成
可以使用本领域技术人员已知的常规技术和容易获得的起始材料合成本文提供的化合物。通常，本文提供的化合物可通过标准有机化学合成方法方便地获得。
例如，具有间氯苯胺基团的化合物可以通过以下来合成：使适当的3-氯苯胺与4-硝基苯磺酰氯反应以形成所需的N-(3-氯苯基)-4-硝基苯磺酰胺化合物，将硝基还原为氨基，并且然后使氨基与适当的苯甲醛基反应，以形成所需的化合物，如实例部分中的流程1中所示。
具有其它取代模式的化合物可以通过以下来合成：使4-氨基苯磺酰胺与适当的苯甲醛基团反应以形成4-(苄基)氨基苯磺酰胺化合物，并将该化合物与适当的芳基溴化物基团偶合，得到所需化合物，如实例部分中的流程2中所示。
用于制备本文公开的抑制剂的其他合成方法可以在实例部分中找到。
使用方法
维持止血需要足够的血小板反应性。然而，过多的血小板反应性也可能导致闭塞性血栓的形成。血小板12(S)-脂氧合酶(“12-LOX”)，一种在血小板中高度表达的氧合酶，已被证明可以调节血小板功能和离体血栓形成，支持12-LOX在体内血栓形成的调节中的关键作用。已经发现本文所述的化合物(例如，式(I)的化合物、表A中列出的化合物以及前述的药学上可接受的盐)能够在体内靶向12-LOX，这对血栓形成和止血有影响。因此，本文提供了一种抑制细胞中12-LOX的方法，其包含使细胞与有效抑制12-LOX活化的量的本文公开的化合物(例如式(I)的化合物、表A中列出的化合物或前述的药学上可接受的盐)接触。在一些实施例中，接触是在体内。在各种实施例中，接触是在体外。
12-LOX已显示出减弱人血小板活化中的凝血酶PAR4介导的信号传导路径和GPVI介导的信号传导路径。因此，本文还提供了一种抑制细胞中凝血酶PAR4和/或GPVI信号传导的方法，其包含使细胞与有效抑制PAR4和/或GPVI信号传导的量的本文公开的化合物(例如，式(I)的化合物、表A中列出的化合物或前述的药学上可接受的盐)接触。此外，本文所述的化合物对12-LOX的药理学抑制可以减弱血小板活化，如FcγRIIa介导的血小板活化。因此，本文还公开了一种抑制细胞中血小板活化，如FcγRIIa介导的血小板活化的方法，其包含使细胞与有效抑制血小板活化的量的本文公开的化合物(例如式(I)的化合物、表A中列出的化合物或其药学上可接受的盐)接触。在一些实施例中，接触是在体内。在各种实施例中，接触是在体外。
本文公开的化合物(例如，式(I)的化合物、表A中列出的化合物或前述的药学上可接受的盐)也可以防止在细胞中血小板因子4(“PF4”)的释放和PF4-肝素复合物的形成。因此，本文还提供了抑制细胞中PF4释放和/或PF4-肝素复合物形成的方法，其包含使细胞与有效抑制PF4释放和/或PF4-肝素复合物形成的量的本文公开的化合物(例如，式(I)的化合物、表A中列出的化合物或前述的药学上可接受的盐)接触。在一些实施例中，接触是在体内。在各种实施例中，接触是在体外。
本文还提供向有需要的受试者施用治疗有效量的本文公开的化合物(例如，式(I)的化合物、表A中列出的化合物或前述的药学上可接受的盐)。本文公开的化合物在有需要的受试者中抑制血小板活化、血小板减少症和/或血栓形成的能力提供了在治疗多种血栓性病症方面的治疗功效。可以通过施用本文公开的化合物来治疗或预防的特别考虑的血栓性病症包括动脉血栓形成、深静脉血栓形成(“DVT”)、肺栓塞(“PE”)、缺血性中风、免疫性血小板减少症(“ITP”)、肝素诱发的血小板减少症(“HIT”)以及肝素诱发的血小板减少症和血栓形成(“HITT”)。本文进一步提供了在受试者中预防血栓形成和/或治疗血小板减少症的方法，其包含向受试者施用治疗有效量的本文公开的化合物(例如，式(I)的化合物、表A中列出的化合物或前述的药学上可接受的盐)，其量实现在受试者中预防血栓形成和/或治疗血小板减少症。
在下文的实例部分中可以找到使用本文公开的化合物抑制12-LOX的进一步指导，如式(I)的化合物、表A中列出的化合物或前述的药学上可接受的盐。
药物配制物、剂量和施用途径
本文提供的方法包括制造和/或使用药物组合物，所述药物组合物包括本文提供的化合物中的一种或多种。还包括药物组合物本身。药物组合物通常包括药学上可接受的载剂。因此，本文提供了药物配制物，所述药物配制物包括如本文先前所述的本文所述的化合物(例如，式(I)的化合物、表A中列出的化合物或前述的药学上可接受的盐)和一种或多种药学上可接受的载剂。
短语“药学上可接受的”在本文中用以指在合理医学判断范围内，适用于与人类和动物的组织接触而无过量毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理效益/风险比相称的那些配体、材料、组合物和/或剂型。
如本文所用，短语“药学上可接受的载剂”意指药学上可接受的材料、组合物或媒剂，如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。如本文所用，措辞“药学上可接受的载剂”包括与药物施用相容的缓冲液、用于注射的无菌水、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。每种载剂在与配制物的其它成分相容且对患者无害的意义上必须是“可接受的”。可充当药学上可接受的载剂的材料的一些实例包括：(1)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉、马铃薯淀粉和经取代或未经取代的β-环糊精；(3)纤维素和其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)粉末状黄芪胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，如可可油和栓剂蜡；(9)油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二元醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)褐藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸缓冲溶液；和(21)在药物配制物中采用的其它无毒相容的物质。在某些实施例中，本文提供的药物组合物为非热原性的，即，当向患者施用时不诱发明显温度升高。
术语“药学上可接受的盐”是指本文提供的化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐。这些盐可以在本文提供的化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过使游离碱形式的化合物与合适的有机酸或无机酸单独反应并分离因此形成的盐来制备。代表性的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、醋酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月硅酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐(naphthylate)、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖醛酸盐、十二烷基磺酸盐和氨基酸盐等。参见，例如，Berge等人,(1977)“药用盐(Pharmaceutical Salts)”,《药物科学杂志(J.Pharm.Sci)》66:1-19。
在一些实施例中，本文提供的化合物可含有一种或多种酸性官能团并且因此能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。在这些情况下，术语“药学上可接受的盐”是指本文提供的化合物的相对无毒的无机和有机碱加成盐。这些盐可同样地在化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或通过单独地使纯化的化合物以其游离酸形式与合适的碱(如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)、与氨或与药学上可接受的有机伯胺、仲胺或叔胺反应来制备。代表性碱或碱土金属盐包括锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等。适用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等(参见例如Berge等人，同前文献)。
润湿剂、乳化剂和润滑剂，如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁、以及着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和香味剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于组合物中。
如本领域所公知的，如本文所描述制备的组合物可根据待治疗的病症和患者的年龄、状况和体重以各种形式施用。举例来说，在组合物经口施用的情况下，它们可被配制成片剂、胶囊、细粒、粉末或糖浆；或对于肠胃外施用，它们可被配制成注射剂(静脉内、肌内或皮下)、滴注制剂或栓剂。为了通过眼粘膜途径施用，它们可被配制成滴眼剂或眼药膏。这些配制物可通过常规方式结合本文所描述的方法制备，并且如果需要，可将活性成分与任何常规的添加剂或赋形剂混合，如粘结剂、崩解剂、润滑剂、矫正药、增溶剂、助悬剂、乳化剂或包衣剂。
可改变在本文提供的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平，以便获得“治疗有效量”，其为有效地实现针对特定患者、组合物和施用模式的期望治疗反应而对患者无毒的活性成分的量。
在药学上可接受的混合物中的本文提供的化合物的浓度将根据几个因素变化，包括待施用的化合物的剂量、采用的(一种或多种)化合物的药代动力学特性和施用途径。在一些实施例中，本文提供的组合物可以以含有约0.1-10％w/v的本文公开的化合物以及其它物质的水溶液提供，用于肠胃外施用。典型的剂量范围可包括每天约0.01至约50mg/kg体重，以1-4个分剂量给予。每个分剂量可含有相同或不同的化合物。剂量将为根据几个因素的治疗有效量，包括患者的整体健康状况以及所选择的(一种或多种)化合物的配制物和施用途径。
可制备含有在0.005％至100％范围内的如本文所述的化合物的剂型或组合物，其中其余部分由无毒载剂构成。这些组合物的制备方法是本领域技术人员已知的。预期的组合物可含有0.001％-100％活性成分，在一个实施例中，0.1％-95％，在另一个实施例中，75％-85％。尽管剂量将根据患者的症状、年龄和体重、待治疗或预防的病症的性质和严重程度、施用途径和药物形式而变化，但一般来说，建议成年患者的日剂量为0.01至2000mg的化合物，并且这可以单次剂量或以分剂量施用。可与载剂材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将通常是化合物产生治疗效果的量。
在禁止对人体实践的方法申请专利的司法管辖区中，将组合物“施用于”人类受试者的含义应限于规定一种人类受试者可以通过任何技术(例如，经口、吸入、局部施用、注射、插入等)自行施用的受控物质。旨在与定义专利主题的法律或法规相一致的最广泛的合理解释。在不禁止对人体实践的方法申请专利的司法管辖区中，组合物的“施用”既包括对人体实践的方法，又包括前述活动。
其他实施例
应理解，虽然已经结合其具体描述对本公开进行了描述，但前面的描述旨在说明而非限制本公开的范围，本公开的范围由所附权利要求书的范围限定。其他方面、优点以及修改都处于以下权利要求的范围内。
实例
提供以下实例用于说明，并且不旨在限制本发明的范围。
流程1.间氯化合物的通用流程
Figure BDA0002841495940000171
流程2.其他替代模式的通用方案
Figure BDA0002841495940000181
N-(3-氯苯基)-4-((2-羟基-3-甲氧基苄基)氨基)苯磺酰胺(A1)的合成
Figure BDA0002841495940000182
4-氨基-N-(3-氯苯基)苯磺酰胺(2A)(Zheng等人,《生物有机和药物化学(Biorganic and Medicinal Chemistry)》2007,15,1014-1021)(0.20g，0.71mmol)在乙醇(5mL)中的溶液用邻香兰素(0.14g，0.92mmol)处理。将得到的悬浮液回流8小时。将混合物冷却至室温，用硼氢化钠(67mg，1.8mmol)谨慎处理，并在室温下搅拌过夜。将混合物用甲醇和水处理，并搅拌1.5小时。过滤固体，并用乙醇和二氯甲烷充分洗涤，并将滤液浓缩，得到油状物。该残余物通过硅胶色谱法，用5％甲醇/二氯甲烷溶液洗脱来纯化，得到0.071g标题化合物。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.47-7.38(m,2H),7.18-7.04(m,2H),6.97(dddd,J＝7.8,5.7,2.1,1.0Hz,2H),6.78(ddd,J＝14.1,7.8,1.7Hz,2H),6.69(t,J＝7.8Hz,1H),6.60-6.49(m,2H),4.30(s,2H),3.83(s,3H)。HRMS：测量的，m/z＝419.0825(预测的m/z＝419.0827)。HPLC：93.6％(保留时间，在250nm波长下6.89分钟。流动相：90:10水:乙腈→90:10乙腈:水，历时13分钟，向水和乙腈中添加0.1％TFA。)
4-((2-羟基-3-甲氧基苄基)氨基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)苯磺酰胺(A2)的合成
Figure BDA0002841495940000191
将4-((2-羟基-3-甲氧基苄基)氨基)苯磺酰胺(5A)(Luci等人,《药物化学杂志(Journal of Medicinal Chemistry)》2014,57(2),495-506)(0.22g，0.73mmol)、1-溴-3-(三氟甲基)苯(0.20g，0.88mmol)、N,N-二甲基乙二胺(0.032g，0.37mmol)、碳酸钾(0.25g，1.8mmol)、碘化铜(I)(7.0mg，0.037mmol)和乙腈(7mL)的混合物在密封管中用氮气脱气(持续15分钟)，然后加热到70℃持续24小时。将混合物冷却至室温，并用饱和氯化铵水溶液(40mL)处理。用乙酸乙酯萃取深蓝色溶液，直到有机层澄清(3×30mL)。合并的有机萃取物用水(25mL)和盐水(25mL)洗涤，用硫酸镁干燥，并浓缩，得到油状物。粗产物通过硅胶色谱法，用4％甲醇/二氯甲烷溶液洗脱来纯化，得到0.117g标题化合物。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.50-7.40(m,2H),7.40-7.21(m,4H),6.82-6.73(m,2H),6.67(t,J＝7.8Hz,1H),6.61-6.49(m,2H),4.29(s,2H),3.81(s,3H)。HPLC：100％(保留时间，在250nm波长下6.97分钟。流动相：90:10水:乙腈→90:10乙腈:水，历时13分钟，向水和ACN中添加0.1％TFA。)HRMS：测量的m/z＝453.1089[M+H]+(预测的m/z＝453.1090)。
N-(3-氯-2-氟苯基)-4-((2-羟基-3-甲氧基苄基)氨基)苯磺酰胺(A3)的合成
Figure BDA0002841495940000201
用3等份的4-硝基苯磺酰氯(0.84g，3.8mmol)处理3-氯-2-氟苯胺(0.50g，3.4mmol)在吡啶(2mL)中的溶液。将得到的混合物在100℃下加热3小时，然后冷却至室温。反应混合物用2N HCl酸化，并用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。合并的萃取物用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并浓缩，得到油状物。将残余物溶于己烷中，并再次浓缩，得到灰白色粉末，将其悬浮在1:10乙酸乙酯:己烷中并研磨。滤出固体，用己烷充分洗涤，并风干，得到0.99g的N-(3-氯-2-氟-苯基)-4-硝基苯磺酰胺(1B)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.82(s,1H),8.44-8.34(m,2H),8.03-7.94(m,2H),7.42(td,J＝7.4,6.9,2.3Hz,1H),7.26-7.08(m,2H)。
将N-(3-氯-2-氟-苯基)-4-硝基苯磺酰胺(1B)(0.95g，2.9mmol)在THF(10mL)中的溶液用锡(1.2g，10mmol)和浓HCl(4.3mL)处理，按此顺序；在4分钟内逐渐添加HCl。将得到的悬浮液回流2.5小时，然后冷却至室温。滴加2N NaOH使混合物呈碱性。形成的悬浮液通过硅藻土过滤；将硅藻土饼用水和乙酸乙酯充分洗涤。将滤液转移至分液漏斗中，在其中分离水层，并用乙酸乙酯(50mL)再次萃取。合并有机萃取物，用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，并用硫酸镁干燥。浓缩得到半固体，将其与醚一起磨碎，得到0.39g呈固体形式的4-氨基-N-(3-氯-2-氟-苯基)苯磺酰胺(2B)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.92(s,1H),7.34(d,J＝8.6Hz,2H),7.28(td,J＝7.4,6.6,1.6Hz,1H),7.19(td,J＝7.7,7.1,1.7Hz,1H),7.10(td,J＝8.1,1.4Hz,1H),6.57-6.48(m,2H),6.02(s,2H)。
用邻香兰素(0.14g，0.94mmol)处理4-氨基-N-(3-氯-2-氟-苯基)苯磺酰胺(2B)(0.19g，0.63mmol)在乙醇(5mL)中的溶液。将得到的悬浮液回流24小时，然后冷却至室温。将反应混合物用硼氢化钠(0.071g，1.9mmol)谨慎处理，在室温下搅拌过夜，用甲醇和水处理，并搅拌30分钟。将固体通过硅藻土过滤，并将硅藻土饼用乙醇和二氯甲烷充分洗涤。浓缩滤液，得到油状物。该残余物通过硅胶色谱法，用5％甲醇/二氯甲烷溶液洗脱来纯化，得到0.101g标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.92(s,1H),8.72(s,1H),7.37(d,J＝8.8Hz,2H),7.26(t,J＝7.3Hz,1H),7.18(t,J＝7.3Hz,1H),7.08(dd,J＝8.8,7.5Hz,1H),6.95(t,J＝5.8Hz,1H),6.87-6.79(m,1H),6.76-6.65(m,2H),6.56(d,J＝8.9Hz,2H),4.20(d,J＝5.7Hz,2H),3.77(s,3H)。HRMS：测量的，m/z为[M+H]+＝437.0736(预测的m/z＝437.0733)。HPLC：94.8％(保留时间，在250nm波长下6.86分钟。流动相：90:10水:乙腈→90:10乙腈:水，历时13分钟，向水和乙腈中添加0.1％TFA。)
4-((2-羟基-3-甲氧基苄基)氨基)-N-(3-(1-(三氟甲基)环丙基)苯基)苯磺酰胺 (A4)的合成
Figure BDA0002841495940000211
将4-((2-羟基-3-甲氧基苄基)氨基)苯磺酰胺(5A)(Luci等人,《药物化学杂志》2014,57(2),495-506)(0.40g，1.3mmol)、1-溴-3-(1-(三氟甲基)环丙基)苯(0.41g，1.6mmol)、N,N-二甲基乙二胺(0.057g，0.65mmol)、碳酸钾(0.45g，3.2mmol)、碘化铜(I)(12mg，0.065mmol)和二恶烷(5mL)的混合物在密封管中用氮气脱气(持续10分钟)，然后加热到80℃持续2天。将混合物冷却至室温，并用饱和氯化铵水溶液(50mL)处理。用二氯甲烷(4×40mL)萃取深色溶液。合并的有机萃取物用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用硫酸镁干燥，并浓缩，得到油状物。粗产物通过硅胶色谱法，用4％甲醇/二氯甲烷溶液洗脱来纯化，得到0.091g标题化合物。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.44-7.34(m,2H),7.22-7.10(m,3H),7.02(ddd,J＝7.8,2.2,1.3Hz,1H),6.79(ddd,J＝18.8,7.9,1.6Hz,2H),6.70(t,J＝7.8Hz,1H),6.59-6.51(m,2H),4.31(s,2H),3.84(s,3H),1.31-1.23(m,2H),0.94-0.83(m,2H)。微量的乙醚。HPLC：98.9％(保留时间，在波长250nm下7.39分钟。流动相：90:10水:乙腈→90:10乙腈:水，历时13分钟，向水和乙腈中添加0.1％TFA。)HRMS：测量的，m/z为[M+H]+＝493.1402(预测的m/z＝493.1403)。
N-(3-氯-4-氟苯基)-4-((2-羟基-3-甲氧基苄基)氨基)苯磺酰胺(A5)的合成
Figure BDA0002841495940000221
用3等份的4-硝基苯磺酰氯(0.84g，3.8mmol)处理3-氯-4-氟苯胺(0.50g，3.4mmol)在吡啶(1.7mL)中的溶液。将得到的混合物在100℃下加热3.5小时。然后将溶液冷却至室温，用2N HCl酸化并用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。合并的萃取液用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并浓缩，得到固体。将该材料与1:10乙酸乙酯:己烷一起磨碎，过滤，并风干，得到1.0g的N-(3-氯-4-氟苯基)-4-硝基苯磺酰胺(3)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),8.43-8.31(m,2H),8.04-7.89(m,2H),7.31(t,J＝9.0Hz,1H),7.23(dd,J＝6.5,2.6Hz,1H),7.05(ddd,J＝8.8,4.1,2.6Hz,1H)。
将N-(3-氯-4-氟苯基)-4-硝基苯磺酰胺(3)(1.0g，3.0mmol)在THF(10mL)中的溶液用锡(1.3.g，11mmol)和浓HCl(4.5mL)处理，按此顺序；在4.5分钟内逐渐添加HCl。将得到的悬浮液回流3.5小时，然后在室温下搅拌过夜。滴加2N NaOH使混合物呈碱性，并通过硅藻土过滤形成的浓稠悬浮液。将硅藻土饼用乙酸乙酯充分洗涤，并将滤液转移至分液漏斗中；分离水层，并用乙酸乙酯(3×30mL)再次萃取。合并有机层，用水(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤，并用硫酸镁干燥。浓缩得到油状物，其在静置时固化。粗产物通过硅胶色谱法，用1:1己烷:乙酸乙酯洗脱来纯化，得到0.45g的4-氨基-N-(3-氯-4-氟-苯基)苯磺酰胺(4)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.04(s,1H),7.40-7.33(m,2H),7.27(t,J＝9.1Hz,1H),7.14(dd,J＝6.6,2.7Hz,1H),7.01(ddd,J＝8.9,4.2,2.7Hz,1H),6.56-6.49(m,2H),6.02(s,2H)。
用邻香兰素(0.17g，1.1mmol)处理4-氨基-N-(3-氯-4-氟-苯基)苯磺酰胺(4)(0.23g，0.75mmol)在乙醇(5mL)中的溶液；将得到的悬浮液回流24小时。将悬浮液冷却至室温，用硼氢化钠(0.085g，2.3mmol)谨慎处理，并在室温搅拌过夜。将混合物用甲醇和水处理，并搅拌30分钟。将固体通过硅藻土过滤，并将硅藻土饼用乙醇和二氯甲烷充分洗涤。浓缩滤液，得到油状物。产物通过硅胶色谱法，用2％甲醇/二氯甲烷溶液洗脱来纯化，得到0.93g标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),8.76(s,1H),7.39(s,2H),7.26(t,J＝9.1Hz,1H),7.14(dd,J＝6.6,2.6Hz,1H),7.08-6.91(m,2H),6.83(dd,J＝7.6,1.9Hz,1H),6.76-6.60(m,2H),6.56(d,J＝8.7Hz,2H),4.19(d,J＝5.8Hz,2H),3.77(s,3H)。HPLC：98.3％(保留时间，在250nm波长下7.13分钟。流动相：90:10水:乙腈→90:10乙腈:水，历时13分钟，同时向水和ACN中添加0.1％TFA。)HRMS：测量的m/z为[M+H]+＝437.0728(预测的m/z＝437.0733)。
4-((2-羟基-3-(三氟甲基)苄基)氨基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)苯磺酰胺(A6)的 合成
Figure BDA0002841495940000231
将4-氨基苯磺酰胺(0.40g，2.3mmol)、2-羟基-3-(三氟甲基)苯甲醛(Filippova等人,《四面体(Tetrahedron)》2016,72(41),6572-6577)(0.51g，2.7mmol)和乙醇(10mL)的溶液回流过夜，然后冷却至室温。将得到的悬浮液用硼氢化钠(0.13g，3.5mmol)处理，并在室温下搅拌过夜。将溶液浓缩，并将残余物在水和二氯甲烷之间分配。分离水层，并用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩。将该材料通过硅胶色谱法，用5％甲醇/二氯甲烷溶液洗脱来纯化，得到0.25g的4-((2-羟基-3-甲氧基苄基)氨基)苯磺酰胺(5B)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.66-7.58(m,2H),7.43(dd,J＝7.3,5.5Hz,2H),6.93(t,J＝7.7Hz,1H),6.70-6.65(m,2H),4.43(s,2H)。
将4-((2-羟基-3-甲氧基苄基)氨基)苯磺酰胺(5B)(0.12g，0.36mmol)、1-溴-3-(三氟甲基)苯(0.097g，0.43mmol)、N,N-二甲基乙二胺(16mg，0.18mmol)、碳酸钾(0.13g，0.90mmol)、碘化铜(I)(3mg，0.018mmol)和乙腈(5mL)的混合物在密封管中用氮气脱气(持续10分钟)，然后加热到70℃持续24小时。将混合物冷却至室温，并用饱和氯化铵水溶液(30mL)处理。用乙酸乙酯萃取深蓝色溶液，直到有机层澄清(3×30mL)。合并的有机萃取物用水(25mL)和盐水(25mL)洗涤，用硫酸镁干燥，并浓缩，得到油状物。粗产物通过制备型薄层色谱法(prep TLC)，用4％甲醇/二氯甲烷溶液洗脱来纯化，得到0.060g标题化合物。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.35(s,1H),9.59(s,1H),7.44(dd,J＝12.3,8.3Hz,4H),7.31(d,J＝13.6Hz,4H),7.01(s,1H),6.92(t,J＝7.8Hz,1H),6.58(d,J＝8.7Hz,2H),4.31(d,J＝5.4Hz,2H)。HPLC：94.2％(保留时间，在波长250nm下7.54分钟。流动相：90:10水:乙腈→90:10乙腈:水，历时13分钟，向水和ACN中添加0.1％TFA。)HRMS：测量的m/z＝491.0859[M+H]+(预测的m/z＝491.0859)。
4-((2-羟基-3-甲氧基苄基)氨基)-N-(1-甲基-1H-吲哚-2-基)苯磺酰胺(A7)的合 成
Figure BDA0002841495940000241
将4-((2-羟基-3-甲氧基苄基)氨基)苯磺酰胺(5A)2(Luci等人,《药物化学杂志》2014,57(2),495-506)(0.40g，1.3mmol)(0.40g,1.3.mmol)、2-溴-1-甲基苯并咪唑(0.33g，1.6mmol)、N,N-二甲基乙二胺(0.057g，0.65mmol)、碳酸钾(0.45g，3.2mmol)、碘化铜(I)(12mg，0.065mmol)和二恶烷(5mL)的混合物在密封管中用氮气脱气(持续10分钟)，然后加热到80℃持续3天。将混合物冷却至室温，并用饱和氯化铵水溶液(50mL)处理。溶液用二氯甲烷(5×40mL)萃取。合并的有机萃取物用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。将残余物用乙酸乙酯磨碎，并将形成的固体过滤并用乙酸乙酯充分洗涤。浓缩滤液，并将该残余物通过硅胶色谱法，用5％甲醇/二氯甲烷溶液洗脱来纯化。产量：0.11g标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.61(s,1H),8.73(s,1H),7.56(d,J＝8.6Hz,2H),7.42-7.29(m,2H),7.14(ddd,J＝7.3,5.2,1.5Hz,2H),6.86-6.77(m,1H),6.74(dd,J＝9.0,7.0Hz,2H),6.66(t,J＝7.8Hz,1H),6.54(d,J＝8.6Hz,2H),4.20(d,J＝5.8Hz,2H),3.76(s,3H),3.38(s,3H)。HRMS：测量的m/z为[M+H]+＝439.1437(预测的m/z＝439.1435)。
小鼠血浆中抑制剂的药代动力学研究
在经口口服化合物施用(“PO”)和静脉内(“IV”)施用后，测定化合物A1、A2和A4在小鼠中的血浆浓度
特异性。空白血浆和空白血浆/加标有内标物(CE302)的色谱图表明，空白血浆对化合物A1、A2和A4和IS的测定没有显著干扰。
校准曲线。浓度范围从以下进行评估，对于化合物A2为2.5-5000ng/ml，对于化合物A4为1-5000ng/ml，和对于化合物A1为5-5000ng/ml。使用加权(1/X2)的线性回归构建曲线。通过绘制峰面积比(y)对浓度(x)(以ng/mL为单位)进行线性回归分析。峰面积比与浓度之间关系的线性由线性回归获得的相关系数(R)证明。
仪器条件。下面示出了所测试化合物的LC-MS和质谱分析条件。
Figure BDA0002841495940000261
结果。IV和PO给药组的单独和平均化合物A1、A2和A4浓度-时间数据列于表1中，并以图形方式呈现于图1中。
表1.PO和IV施用后在2、4和7小时的小鼠血浆中的化合物A1、A2和A4浓度。
Figure BDA0002841495940000271
Figure BDA0002841495940000272
*离群值
Figure BDA0002841495940000273
*离群值
洗涤后的人血小板的制备
柠檬酸化的全血进行离心(200g，持续10分钟)以分离富血小板的血浆。用酸性柠檬酸右旋糖(2.5％柠檬酸钠、1.5％柠檬酸、2.0％D-葡萄糖)和腺苷三磷酸双磷酸酶(0.02U/mL)处理富血小板血浆，且接着离心(2000g，持续10分钟)以使血小板沉淀。除非另外说明，否则血小板以3.0×108血小板/mL再悬浮于台氏缓冲液(Tyrode’s buffer)(10mMHEPES、12mM NaHCO3、127mM NaCl、5mM KCl、0.5mM NaH2PO4、1mM MgCl2和5mM葡萄糖)中。
血小板聚集
将洗涤后的人血小板制备为3×108血小板/ml，并在4通道Lumi凝集计(ChonologInc，型号700D)中以1100RPM在37℃下的搅拌条件下测量聚集。将血小板与浓度增加的本文所述化合物(1μM至20μM)孵育10分钟，并且通过EC80浓度的凝血酶或胶原蛋白诱发血小板聚集。用来自5名独立志愿者的血小板重复每种情况(N＝5)。如果与ML355处理的情况相比，聚集显著减少，则认是聚集抑制是统计显著的。*，P<.05；**，P<.01；***，P<.001；****，P<.0001。见图2和图3。
在小鼠中口服施用后的体内药代动力学
向小鼠经口施用化合物A1(30mg/kg)，并且在8个时间点(0.25、0.5、1、2、4、8、12和24小时)监测小鼠(n＝3)中血浆的药物浓度并且通过如同以上所描述的PK分析评估小鼠中血浆的药物浓度。
针对体内研究对实验小鼠的化合物预处理
C57BL/6野生型(WT)对照小鼠购自杰克逊实验室(Jackson Laboratories)(美国缅因州巴尔港(Bar Harbor,ME,USA))并且饲养于密歇根大学的研究机构中。合成化合物A1并专门配制在聚乙二醇300(PEG 300)中，用于在小鼠中进行口服管饲给药，用于体内血栓形成和止血研究。对于激光诱发的睾提肌小动脉血栓形成模型，通过每天口服施用2次持续2天，用化合物A1(3mg/kg)或用PEG 300处理小鼠，之后在第三天进行活体显微镜检查研究。
激光诱发的睾提肌小动脉血栓形成模型
如上所述麻醉成年小鼠(10-12周龄)，并按详细说明进行手术制备，并插入气管导管以促进呼吸。在整个实验过程中，准备睾提肌并用预热的碳酸氢盐缓冲盐水灌注。DyLight 488结合的大鼠抗小鼠血小板GP1bβ抗体(0.1μg/g；EMFRET Analytics)和AlexaFluor 647结合的抗纤维蛋白(0.3μg/g)或Alexa Flour 647大鼠抗小鼠CD62P(3μg/小鼠)在血管损伤之前通过颈静脉插管施用。通过激光切除系统(Ablate！光消融系统；Intelligent Imaging Innovations，美国科罗拉多州丹佛(Denver,CO,USA))，在每只小鼠的小动脉(直径为30-50μm)中诱发出多个独立的血栓。用配备固体激光发射系统(LaserStack；Intelligent Imaging Innovations)和高速sCMOS相机的Zeiss AxioExaminer Z1荧光显微镜在63倍水浸物镜下实时获取损伤的小动脉部位处的血栓形成的图像。使用Slidebook程序，在减去在血管未损伤部分上定义的荧光背景后，分析所有捕获的图像在血栓形成过程中荧光强度的变化。
在用聚乙二醇(“PEG”；对照，上)处理的野生型(“WT”)对照动物和用化合物A1(3mg/kg，一天两次持续2天；下)处理的WT中的睾提肌小动脉中正在形成的血栓中的血小板积聚(绿色)和纤维蛋白形成(红色)的代表性图像示于图4中。
抗GPIX诱发的HITT肺血栓形成模型
如上所述麻醉在其血小板上表达人FcγRIIa受体的成年转基因小鼠(10-12周龄)，并在IV团注0.75mg/kg抗GPIX以在血小板上诱导FcγRIIa受体的活化从而模拟在小鼠中的肝素诱发的血小板减少症和血栓形成(“HITT”)之前30分钟，经口管饲15mg/kg的A1或对照媒剂。将抗GPIX抗体与DyLight 488结合，以观察其与血小板的结合以及血小板在肺中的积聚。抗GPIX诱导后4小时，处死动物，并使用Li-COR Odyssey成像仪观察肺部。
来自对照(PEG媒剂)和A1处理的(15mg/kg)小鼠的小鼠肺中血小板积聚(绿色)的代表性图像示于图5中
给出前述描述仅是清楚理解，并且不应自其理解是不必要的限制，因是本发明范围内的修改可对于所属领域普通技术人员显而易知。
在本说明书全文以及随附权利要求书中，除非上下文另外要求，否则措辞“包含(comprise)”和变化形式(例如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”)应理解成暗示纳入所述整数或步骤或整数或步骤的群组，但不排除任何其它整数或步骤或整数或步骤的群组。
在整个说明书中，除非以其它方式描述，否则当将组合物描述是包括组分或材料时，设想组合物也可主要由所述组分或材料的任何组合组成或由其组成。同样，除非以其它方式描述，否则当将方法描述是包括具体步骤时，设想方法也可主要由所述步骤的任何组合组成或由其组成。在不存在非特定公开于本文中的任何要素或步骤的情况下，可适当地实践本文所说明性地公开的本发明。
本文中所公开的方法和其个别步骤的实践可手动地和/或借助于电子设备或由电子设备提供的自动化来执行。尽管已经参考具体实施例描述了多种方法，但是所属领域的普通技术人员将容易了解，可使用与方法相关联的行是的其它执行方式。举例来说，除非以其它方式描述，否则在不背离方法的范围或精神的情况下，可改变各种步骤的次序。另外，可将个别步骤中的一些组合、省略或进一步再分成额外步骤。
本文中所引用的所有专利、出版物以及参考文献在此以引用的方式全部并入。在本公开与所并入的专利、出版物以及参考文献之间发生冲突的情况下，应以本公开为准。

Claims (30)

1.一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002841495930000011
其中：
R2是卤基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基；
R1、R3、R4和R5中的每一个独立地是H、卤基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基；
Ra和Rb中的每一个独立地是OH、OC1-3烷基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基、OC3-8氟环烷基或卤基；并且
Rc、Rd、Re中的每一个独立是H、OH、OC1-3烷基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基、OC3-8氟环烷基或卤基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R2是卤基。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中R2是Cl或F。
4.根据权利要求3所述的化合物，其中R2是Cl。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中R2是C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中R2是CF3或
Figure FDA0002841495930000012
7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中R1、R3、R4和R5中的每一个是H。
8.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中R1、R3、R4和R5中的一个或多个是卤基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基。
9.根据权利要求8所述的化合物，其中R1、R3、R4和R5中的一个或多个是F、Cl、CF3或
Figure FDA0002841495930000021
10.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是H或F；R2是Cl、CF3或
Figure FDA0002841495930000022
R3是H或F；R4是H；并且R5是H。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中Ra和Rb中的每一个独立地是OH或OC1-3烷基。
12.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中Ra和Rb中的一个是OH或OC1-3烷基；并且Ra和Rb中的另一个是C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基、OC3-8氟环烷基或卤基。
13.根据权利要求11或12所述的化合物，其中OC1-3烷基是OCH3。
14.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物，其中Ra和Rb中的每一个独立地是C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基、OC3-8氟环烷基或卤基。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的化合物，其中Ra和Rb中的至少一个是CF3、
Figure FDA0002841495930000023
F或Cl。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中Rc、Rd和Re各自是H。
17.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物，其中Rc、Rd和Re中的一个或多个是卤基、C1-3氟烷基、C3-8氟环烷基、OC1-3氟烷基或OC3-8氟环烷基。
18.根据权利要求17所述的化合物，其中Rc、Rd和Re中的一个或多个是F、Cl、CF3或
Figure FDA0002841495930000024
19.一种化合物，其选自由以下组成的组：
Figure FDA0002841495930000031
Figure FDA0002841495930000032
Figure FDA0002841495930000033
或其药学上可接受的盐。
20.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至19中任一项所述的化合物和药学上可接受的载剂。
21.一种抑制细胞中(S)-脂氧合酶(“12-LOX”)活化的方法，其包含使所述细胞与有效抑制12-LOX活化的量的根据权利要求1至19中任一项所述的化合物或根据权利要求20所述的组合物接触。
22.一种抑制细胞中血小板因子4(“PF4”)释放的方法，其包含使所述细胞与有效抑制PF4释放的量的根据权利要求1至19中任一项所述的化合物或根据权利要求20所述的组合物接触。
23.一种抑制细胞中PF4-肝素复合物形成的方法，其包含使所述细胞与有效抑制PF4-肝素复合物形成的量的根据权利要求1至19中任一项所述的化合物或根据权利要求20所述的组合物接触。
24.一种抑制细胞中血小板活化的方法，其包含使所述细胞与有效抑制血小板活化的量的根据权利要求1至19中任一项所述的化合物或根据权利要求20所述的组合物接触。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述血小板活化是FcγRIIa介导的血小板活化。
26.一种抑制细胞中凝血酶、蛋白酶活化受体-4(“PAR4”)和/或糖蛋白VI(“GPVI”)信号传导的方法，其包含使所述细胞与有效抑制PAR4和/或GPVI信号传导的量的根据权利要求1至19中任一项所述的化合物或根据权利要求20所述的组合物接触。
27.一种在有需要的受试者中治疗血栓性病症的方法，其包含向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至19中任一项所述的化合物或根据权利要求20所述的组合物。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述血栓性病症选自动脉血栓形成、深静脉血栓形成(“DVT”)、肺栓塞(“PE”)、缺血性中风、免疫性血小板减少症(“ITP”)、肝素诱发的血小板减少症(“HIT”)以及肝素诱发的血小板减少症和血栓形成(“HITT”)。
29.一种预防受试者中血栓形成的方法，其包含向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至19中任一项所述的化合物或根据权利要求20所述的组合物。
30.一种在有需要的受试者中治疗血小板减少症的方法，其包含向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至19中任一项所述的化合物或根据权利要求20所述的组合物。
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