CN112552390A - 具有抑制肝癌转移功能的小肽及其制备方法与应用 - Google Patents

具有抑制肝癌转移功能的小肽及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112552390A
CN112552390A CN202011641680.7A CN202011641680A CN112552390A CN 112552390 A CN112552390 A CN 112552390A CN 202011641680 A CN202011641680 A CN 202011641680A CN 112552390 A CN112552390 A CN 112552390A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
liver cancer
nucleotide
small peptide
orf
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202011641680.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112552390B (zh
Inventor
曾春贤
黄宁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Hospital of Southern Medical University
Original Assignee
Shenzhen Hospital of Southern Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen Hospital of Southern Medical University filed Critical Shenzhen Hospital of Southern Medical University
Priority to CN202011641680.7A priority Critical patent/CN112552390B/zh
Publication of CN112552390A publication Critical patent/CN112552390A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112552390B publication Critical patent/CN112552390B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了具有抑制肝癌转移功能的小肽及其制备方法与应用，其中，所述小分子肽具有SEQ ID NO.1至4所示的氨基酸序列或SEQ ID NO.1至4中任一所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰后且具有抑制肝癌转移功能的序列。本发明还提供了该小肽的制备方法，并得到了介导其快速降解的氨基酸位点。本发明中的小肽被发现具有抑制肝癌细胞侵袭转移的功能，抑制肝癌细胞迁移能力强，具有开发新型抗肝癌细胞转移药物或其他制剂的应用潜力。

Description

具有抑制肝癌转移功能的小肽及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于生物活性肽领域，具体涉及具有抑制肝癌转移功能的小肽及其制备方法与应用。
背景技术
肝细胞肝癌(简称肝癌)是世界范围内常见的高发病率、高致死率的恶性肿瘤之一，每年会导致超过60万人死亡，严重危害人们的生命健康。大多数的肝癌患者在确诊时早已进入肝癌晚期，并可能已发生癌细胞转移的情况，可适用的治疗方法有限且预后较差。对于早期肝癌患者来说，手术切除是目前最主要的治疗手段，但其预后效果不佳，术后容易复发转移，从而造成肝癌病人死亡。
miR-122是肝脏特异性高表达miRNA，占肝细胞中miRNA总表达量的70％，其在肝脏脂代谢、铁离子平衡调节、肝炎病毒复制感染、肝纤维化、肝癌等肝脏生理病理过程中发挥重要作用。长期以来，miRNA初始转录本(pri-miRNA)被认为是不具备编码蛋白功能的ncRNA。pri-miR-122在正常肝细胞中稳定存在，且具有较高丰度，但未有任何高价值的应用。
因此，开发出一种具有抑制肝癌转移功能的小肽将对于肝细胞肝癌的预防和治疗将具有极高的价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种小分子肽；
本发明的另一目的在于提供编码上述的小分子肽的基因；
本发明的另一目的在于提供一种载体；
本发明的另一目的在于提供一种细胞系；
本发明的另一目的在于提供一种药物组合物；
本发明的另一目的在于提供上述小分子肽或上述的核苷酸在制备抑制细胞迁移制剂中的应用；
本发明的另一目的在于提供上述小分子肽或上述的核苷酸在制备肝癌治疗药物中的应用。
本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一个方面，提供：
一种小分子肽，该小分子肽具有如下(1)至(5)所示的氨基酸序列：
(1)SEQ ID NO.1；
上述SEQ ID NO.1的具体氨基酸序列为：
MGIHWLALYFGTIVIVPNGSQMSKTLRNNSESLAGKPHLNAAHTFMIHYKGFKVMRCLCPKKKKSTPACPASLTTSHFFPPGTIYCQEENQTP(SEQ ID NO.1)；
上述SEQ ID NO.1为发明人利用pri-miR-122得到的新的小肽，长度为93个氨基酸，命名为miPEP-122。
miPEP-122的第24位(K24)、第36位(K36)、第50位(K50)赖氨酸是影响其分子稳定性关键位点，分别敲除第24位(K24)、第36位(K36)、第50位(K50)赖氨酸均可以显著提高miPEP-122的稳定性及表达水平。
(2)SEQ ID NO.2；
上述SEQ ID NO.2的具体氨基酸序列为：
MGIHWLALYFGTIVIVPNGSQMSTLRNNSESLAGKPHLNAAHTFMIHYKGFKVMRCLCPKKKKSTPACPASLTTSHFFPPGTIYCQEENQTP(SEQ ID NO.2)；
与上述SEQ ID NO.1相比，上述SEQ ID NO.2缺少了上述SEQ ID NO.1中的第24位赖氨酸(K24)；
(3)SEQ ID NO.3；
上述SEQ ID NO.3的具体氨基酸序列为：
MGIHWLALYFGTIVIVPNGSQMSKTLRNNSESLAGPHLNAAHTFMIHYKGFKVMRCLCPKKKKSTPACPASLTTSHFFPPGTIYCQEENQTP(SEQ ID NO.3)；
与上述SEQ ID NO.1相比，上述SEQ ID NO.3缺少了上述SEQ ID NO.1中的第36位赖氨酸(K36)；
(4)SEQ ID NO.4；
上述SEQ ID NO.4的具体氨基酸序列为：
MGIHWLALYFGTIVIVPNGSQMSKTLRNNSESLAGKPHLNAAHTFMIHYGFKVMRCLCPKKKKSTPACPASLTTSHFFPPGTIYCQEENQTP(SEQ ID NO.4)；
与上述SEQ ID NO.1相比，上述SEQ ID NO.4缺少了上述SEQ ID NO.1中的第50位赖氨酸(K50)；
(5)SEQ ID NO.1至4中任一所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰后且具有抑制肝癌转移功能的序列。
与上述SEQ ID NO.1相比，上述SEQ ID NO.2至4的稳定性和表达水平更高。
小肽作为蛋白分子，是生物功能直接的执行者；蛋白之间的相互作用受其结构影响，因此蛋白发挥作用的特异性强；而且小肽分子量小，易于加工生成，且容易导入细胞中，因此，小肽具有更高的研究价值。
本发明的第二个方面，提供：
编码上述的小分子肽的核苷酸。
进一步地，上述基因包括如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。
上述SEQ ID NO.5的核苷酸序列为：
5’-ATGGGCATTCACTGGCTCGCATTATATTTTGGGACCATTGTAATTGTTCCAAACGGGAGCCAAATGAGCAAAACTTTGCGAAATAATTCTGAGTCCCTTGCTGGAAAGCCTCACCTGAATGCAGCCCACACATTTATGATACACTACAAAGGCTTCAAGGTCATGAGATGCCTCTGTCCAAAGAAGAAGAAGAGCACCCCTGCCTGCCCTGCATCTCTTACCACCTCTCATTTCTTCCCTCCTGGCACCATCTACTGTCAAGAAGAGAATCAGACTCCCTGA-3’(SEQ IDNO.5)。
在本发明的实施例中，上述miPEP-122被发现是从上述SEQ ID NO.5序列5’端开始的第1个ATG(翻译起始密码子)开始翻译，得到SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
上述的小分子肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)用编码上述的小分子肽的核苷酸序列构建表达载体；
(2)将上述表达载体转染至细胞中，上述细胞即可表达出上述的小分子肽；
其中，上述细胞为真核细胞。
进一步地，上述制备方法还包括：在将上述表达载体转染至上述细胞中后，加入蛋白酶体抑制剂。
更进一步地，上述蛋白酶体抑制剂包括MG-132。
本发明的第三个方面，提供：
一种载体，该载体含有上述的核苷酸。
上述载体包括任意蛋白表达载体。
本发明的第四个方面，提供：
一种细胞系，该细胞系含有上述的载体。
上述细胞包括任意真核生物细胞。
进一步地，上述细胞系中还含有蛋白酶体抑制剂。
更进一步地，上述蛋白酶体抑制剂包括MG-132。
进一步地，上述细胞系包括肝癌细胞。
本发明的第五个方面，提供：
一种药物组合物，该药物组合物含有药学上有效剂量的上述的小分子肽或上述的核苷酸或上述的载体或上述的细胞系。
本发明的第六个方面，提供：
上述的小分子肽或上述的核苷酸在制备抑制细胞迁移制剂中的应用。
上述的基因源自pri-miRNA，本发明还公开了部分pri-miRNA是具备蛋白编码功能的，该部分pri-miRNA翻译生成的小肽(包括上述的小分子肽)可能参与发育、肿瘤等生理及病理过程。而目前现有技术对于miR-122的初始转录本pri-miRNA其能否编码蛋白分子未有任何公开。
本发明的第七个方面，提供：
上述的小分子肽或上述的核苷酸在制备肝癌治疗药物中的应用。
本发明的有益效果是：
1.本发明通过鉴定pri-miR-122，发现其能够编码一段新的小肽分子，并得到介导其快速降解的氨基酸位点；
2.本发明中新发现的小肽分子具有抑制肝癌细胞侵袭转移的功能，抑制肝癌细胞迁移能力强，具有开发新型抗肝癌细胞转移药物或其他制剂的应用潜力。
附图说明
图1为核糖体蔗糖密度梯度离心分离Huh-7细胞中的多聚核糖体的示意图(A)和qPCR检测分离出来的各组分中不同RNA分子含量的结果对比图(B)，其中，阳性对照为β-actin，阴性对照为tRNA；
图2为GFP融合报告基因示意图(A)以及将p-ORF-GFPmut载体转染细胞48h后绿色荧光蛋白表达情况(B)；
图3为使用WB检测Flag标签表达情况；
图4为分别单独突变6个ATG后的Flag标签表达情况(A)以及(B)突变第三个ATG后使用WB检测Flag标签表达情况；
图5为介导miPEP-122快速降解的氨基酸位点的鉴定；
图6为在SNU449细胞中过表达miPEP-122以及阴性对照(Ctrl)48小时后转移小室实验效果图(A)以及迁移细胞数(B)。
具体实施方式
为了使本发明的发明目的、技术方案及其技术效果更加清晰，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明。
所使用的实验材料和试剂，若无特别说明，均为常规可从商业途径所获得的耗材和试剂。
pri-miR-122的翻译验证试验
蔗糖密度梯度离心分离细胞中的多核糖体的分离原理：
如果一条RNA上结合的核糖体数量越多，在梯度离心时该RNA沉降速率就会越快，因此，结合有不同数量核糖体的RNA通过离心就可以在溶液中分开。用qPCR检测从细胞中分离出来的各组分中目标RNA的含量，即可反映目标RNA与核糖体结合的情况，鉴别出正在翻译的RNA。
以含有pri-miR-122的Huh-7细胞为原材料，pri-miRNA是miR-122的初始转录本，miR-122可抑制蛋白编码基因的翻译，通过降低蛋白表达水平间接发挥生物学功能。而且miR-122可同时抑制多个不同功能的靶基因，但特异性较弱，其对单个靶基因的抑制效果弱，功能往往不够显著。
采用蔗糖密度梯度离心分离细胞中的多核糖体，加入pri-miR-122(阳性对照β-actin mRNA，阴性对照为tRNA)，使其与多核糖体结合。通过qPCR检测pri-miR-122、β-actinmRNA、tRNA分子在各组分中的分布情况(图1中A)。
结果如图1中B所示。qPCR结果显示：与阳性对照β-actin mRNA结果相似，pri-miR-122富集于沉降系数较大的组分，而阴性对照tRNA则富集于沉降系数较小的组分，说明pri-miR-122可能与若干个核糖体结合形成多核糖体。
使用ORF finder软件分析得到的pri-miR-122序列，预测出一批可能编码蛋白的序列(命名为ORF)，筛选出编码长度大于50个氨基酸的ORF进行后续验证，分别命名为：ORF-1、ORF-2、ORF-3(即miPEP-122或SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列)、ORF-4、ORF-5、ORF-6。
ORF样品翻译潜能筛选试验
GFP融合基因报告系统的翻译潜能筛选原理：
剪切掉GFP mRNA的5’端序列(去除翻译起始密码子)，会使该序列不能被翻译，但不会影响其3’端编码GFP发光基团的序列，因此，如果该序列被翻译，仍能被激发出绿光。因此，可以利用该截短的GFP mRNA序列(GFPmut)构建报告基因载体p-GFPmut，以检测目标序列的翻译起始活性(编码蛋白潜能)。
将上述ORF-1、ORF-2、ORF-3、ORF-4、ORF-5、ORF-6按照读码框插入到GFPmut的5’端构建p-ORF-GFPmut载体，转染细胞48h后，用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况。若出现荧光，则说明该样品具有翻译潜能，若否，则无翻译潜能。
本发明实施例中构建的删除翻译起始密码子的GFP报告基因载体p-GFPmut如图2中A所示，该载体不能被正常翻译(图2B)。可以发现，仅ORF-1、ORF-3、ORF-6转染细胞后，能被激发出绿色荧光，说明ORF-1、ORF-3、ORF-6能介导截短GFP的翻译，ORF-1、ORF-3、ORF-6具有翻译潜能。
蛋白印迹检测(WB)检测ORF-1、ORF-3、ORF-6的翻译功能
检测原理：
在检测样品3’端插入Flag标签序列构建p-检测样品-Flag载体，转染细胞后通过WB检测Flag标签，若结果为阳性，则说明该ORF能被翻译。
在ORF-1、ORF-3、ORF-6核酸序列的3’端分别插入Flag序列，分别构建p-ORF-1-Flag、p-ORF-3-Flag、p-ORF-6-Flag载体，转染细胞48h后，加入20uM MG-132处理12h，通过WB检测Flag标签表达情况。不加MG-132单纯转染载体(Ctrl)作为对照。
结果如图3所示。单纯转染载体(Ctrl)检测不到目标分子表达，说明该小肽可能是快速降解的蛋白。使用MG-132(蛋白酶体抑制剂)处理细胞，以阻断蛋白质降解，发现仅有ORF-3能介导Flag标签的表达，由此初步鉴定ORF-3可编码一个新的小肽，命名为miPEP-122。
miPEP-122的翻译起始密码子的鉴定
将ORF-3序列中的6个翻译起始密码子(ATG)分别突变为TAC，构建p-miPEP-122-mut-Flag载体(分别为p-miPEP-122-mut1-Flag、p-miPEP-122-mut2-Flag、p-miPEP-122-mut3-Flag、p-miPEP-122-mut4-Flag、p-miPEP-122-mut5-Flag、p-miPEP-122-mut6-Flag)，使用WB检测p-miPEP-122-mut-Flag载体中miPEP-122的翻译。
结果如图4A所示。p-miPEP-122-mut1-Flag、p-miPEP-122-mut2-Flag、p-miPEP-122-mut3-Flag、p-miPEP-122-mut4-Flag、p-miPEP-122-mut5-Flag、p-miPEP-122-mut6-Flag均显示出荧光，说明单独突变6个ATG均不能完全阻断miPEP-122的翻译。发明人猜测数个位置相近ATG可能相互协同补偿，共同介导miPEP-122的翻译起始。
因此，进一步在ORF-3序列中第二与第三个ATG之间插入一个碱基，得到p-miPEP-122-mut-S1-Flag载体；在紧接第三个ATG之后插入一个碱基，得到p-miPEP-122-mut-S2-Flag载体，转染细胞48h后加入20M MG-132处理12h，使用WB检测Flag标签表达情况。
结果如图4B所示。p-miPEP-122-mut-S1-Flag、p-miPEP-122-mut-S2-Flag两个载体均会有移码突变。WB检测发现p-miPEP-122-mut-S1-Flag载体翻译出Flag标签蛋白的能力被显著削弱，而p-miPEP-122-mut-S2-Flag则完全不能翻译出Flag标签蛋白。说明miPEP-122是从第3个ATG开始翻译，翻译得到的miPEP-122氨基酸序列为：
MGIHWLALYFGTIVIVPNGSQMSKTLRNNSESLAGKPHLNAAHTFMIHYGFKVMRCLCPKKKKSTPACPASLTTSHFFPPGTIYCQEENQTP(SEQ ID NO.4)。
翻译SEQ ID NO.1氨基酸序列的序列为：
5’-ATGGGCATTCACTGGCTCGCATTATATTTTGGGACCATTGTAATTGTTCCAAACGGGAGCCAAATGAGCAAAACTTTGCGAAATAATTCTGAGTCCCTTGCTGGAAAGCCTCACCTGAATGCAGCCCACACATTTATGATACACTACAAAGGCTTCAAGGTCATGAGATGCCTCTGTCCAAAGAAGAAGAAGAGCACCCCTGCCTGCCCTGCATCTCTTACCACCTCTCATTTCTTCCCTCCTGGCACCATCTACTGTCAAGAAGAGAATCAGACTCCCTGA-3’(SEQ IDNO.5)。
介导miPEP-122快速降解的氨基酸位点鉴定试验
检测原理：
蛋白分子中赖氨酸位点的泛素化会介导其蛋白酶体产生依赖性降解。
构建miPEP-122载体，转染239T细胞，使用MG132处理细胞(+miPEP-122)或不做处理(-miPEP-122)，通过免疫印迹实验检测miPEP-122分子的表达，GAPDH作为内参对照。同时，构建删除第24位(K24，del-K24)、第36位(K36，del-K36)、第50位(K50，del-K50)赖氨酸的miPEP-122突变体，不使用MG132处理细胞(-)，通过免疫印迹实验检测miPEP-122分子的表达。
其中，删除第24位(K24，del-K24)、第36位(K36，del-K36)、第50位(K50，del-K50)赖氨酸的氨基酸序列具体为：
del-K24的具体氨基酸序列为：
MGIHWLALYFGTIVIVPNGSQMSTLRNNSESLAGKPHLNAAHTFMIHYKGFKVMRCLCPKKKKSTPACPASLTTSHFFPPGTIYCQEENQTP(SEQ ID NO.2)；
del-K36的具体氨基酸序列为：
MGIHWLALYFGTIVIVPNGSQMSKTLRNNSESLAGPHLNAAHTFMIHYKGFKVMRCLCPKKKKSTPACPASLTTSHFFPPGTIYCQEENQTP(SEQ ID NO.3)；
del-K50的具体氨基酸序列为：
MGIHWLALYFGTIVIVPNGSQMSKTLRNNSESLAGKPHLNAAHTFMIHYGFKVMRCLCPKKKKSTPACPASLTTSHFFPPGTIYCQEENQTP(SEQ ID NO.4)。
结果如图5所示。加入蛋白酶体抑制剂MG-132(20uM)处理或者分别删除miPEP-122分子中第24位(K24)、第36位(K36)、第50位(K50)赖氨酸残基，均可以显著提高miPEP-122的稳定性及表达水平，说明第24位(K24)、第36位(K36)、第50位(K50)赖氨酸残基介导了miPEP-122的快速降解。
体外检测miPEP-122的抑制细胞迁移能力
运用转移小室(transwell)实验检测细胞的迁移能力。其中，本实施中的转移小室包括上、下两个小室，上室底部是一张具有8μm孔径的聚碳酸酯膜。
实验原理为：
将重悬于无血清培养液的细胞接种于上室，在下室的血清或细胞因子的趋化下，细胞能穿过膜上小孔并迁移至聚碳酸酯膜的下方，通过计算爬行过膜的细胞数反映细胞的迁移能力。如果在上室的聚碳酸酯膜上铺基质胶，则能模拟体内基底膜结构。
在转移小室上室的聚碳酸酯膜上铺基质胶，使用慢病毒感染肝癌细胞(SNU449)来过表达miPEP-122，空载体为阴性对照(Ctrl)，检测肿瘤细胞降解并穿透转移小室中基质胶的能力来评估其侵袭能力。
结果如图6所示，miPEP-122能显著抑制SNU449细胞的迁移能力，说明miPEP-122具有抑制肝癌转移的功能。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 南方医科大学深圳医院
<120> 具有抑制肝癌转移功能的小肽及其制备方法与应用
<130>
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 93
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Met Gly Ile His Trp Leu Ala Leu Tyr Phe Gly Thr Ile Val Ile Val
1 5 10 15
Pro Asn Gly Ser Gln Met Ser Lys Thr Leu Arg Asn Asn Ser Glu Ser
20 25 30
Leu Ala Gly Lys Pro His Leu Asn Ala Ala His Thr Phe Met Ile His
35 40 45
Tyr Lys Gly Phe Lys Val Met Arg Cys Leu Cys Pro Lys Lys Lys Lys
50 55 60
Ser Thr Pro Ala Cys Pro Ala Ser Leu Thr Thr Ser His Phe Phe Pro
65 70 75 80
Pro Gly Thr Ile Tyr Cys Gln Glu Glu Asn Gln Thr Pro
85 90
<210> 2
<211> 92
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Met Gly Ile His Trp Leu Ala Leu Tyr Phe Gly Thr Ile Val Ile Val
1 5 10 15
Pro Asn Gly Ser Gln Met Ser Thr Leu Arg Asn Asn Ser Glu Ser Leu
20 25 30
Ala Gly Lys Pro His Leu Asn Ala Ala His Thr Phe Met Ile His Tyr
35 40 45
Lys Gly Phe Lys Val Met Arg Cys Leu Cys Pro Lys Lys Lys Lys Ser
50 55 60
Thr Pro Ala Cys Pro Ala Ser Leu Thr Thr Ser His Phe Phe Pro Pro
65 70 75 80
Gly Thr Ile Tyr Cys Gln Glu Glu Asn Gln Thr Pro
85 90
<210> 3
<211> 92
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Met Gly Ile His Trp Leu Ala Leu Tyr Phe Gly Thr Ile Val Ile Val
1 5 10 15
Pro Asn Gly Ser Gln Met Ser Lys Thr Leu Arg Asn Asn Ser Glu Ser
20 25 30
Leu Ala Gly Pro His Leu Asn Ala Ala His Thr Phe Met Ile His Tyr
35 40 45
Lys Gly Phe Lys Val Met Arg Cys Leu Cys Pro Lys Lys Lys Lys Ser
50 55 60
Thr Pro Ala Cys Pro Ala Ser Leu Thr Thr Ser His Phe Phe Pro Pro
65 70 75 80
Gly Thr Ile Tyr Cys Gln Glu Glu Asn Gln Thr Pro
85 90
<210> 4
<211> 92
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Met Gly Ile His Trp Leu Ala Leu Tyr Phe Gly Thr Ile Val Ile Val
1 5 10 15
Pro Asn Gly Ser Gln Met Ser Lys Thr Leu Arg Asn Asn Ser Glu Ser
20 25 30
Leu Ala Gly Lys Pro His Leu Asn Ala Ala His Thr Phe Met Ile His
35 40 45
Tyr Gly Phe Lys Val Met Arg Cys Leu Cys Pro Lys Lys Lys Lys Ser
50 55 60
Thr Pro Ala Cys Pro Ala Ser Leu Thr Thr Ser His Phe Phe Pro Pro
65 70 75 80
Gly Thr Ile Tyr Cys Gln Glu Glu Asn Gln Thr Pro
85 90
<210> 5
<211> 282
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
atgggcattc actggctcgc attatatttt gggaccattg taattgttcc aaacgggagc 60
caaatgagca aaactttgcg aaataattct gagtcccttg ctggaaagcc tcacctgaat 120
gcagcccaca catttatgat acactacaaa ggcttcaagg tcatgagatg cctctgtcca 180
aagaagaaga agagcacccc tgcctgccct gcatctctta ccacctctca tttcttccct 240
cctggcacca tctactgtca agaagagaat cagactccct ga 282

Claims (10)

1.一种小分子肽，其特征在于，所述小分子肽具有如下(1)至(5)所示的氨基酸序列：
(1)SEQ ID NO.1；
(2)SEQ ID NO.2；
(3)SEQ ID NO.3；
(4)SEQ ID NO.4；
(5)SEQ ID NO.1至4中任一所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰后且具有抑制肝癌转移功能的序列。
2.编码权利要求1所述的小分子肽的核苷酸。
3.根据权利要求2所述的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸包括如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。
4.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求2或3所述的核苷酸。
5.一种细胞系，其特征在于，所述细胞系含有权利要求4所述的载体。
6.根据权利要求5所述的细胞系，其特征在于，所述细胞系中还含有蛋白酶体抑制剂。
7.根据权利要求5或6所述的细胞系，其特征在于，所述细胞系包括肝癌细胞。
8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有药学上有效剂量的权利要求1所述的小分子肽或权利要求2或3所述的核苷酸或权利要求4所述的载体或权利要求5至7任一项所述的细胞系。
9.权利要求1所述的小分子肽或权利要求2或3所述的核苷酸在制备抑制细胞迁移制剂中的应用。
10.权利要求1所述的小分子肽或权利要求2或3所述的核苷酸在制备肝癌治疗药物中的应用。
CN202011641680.7A 2020-12-31 2020-12-31 具有抑制肝癌转移功能的小肽及其制备方法与应用 Active CN112552390B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011641680.7A CN112552390B (zh) 2020-12-31 2020-12-31 具有抑制肝癌转移功能的小肽及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011641680.7A CN112552390B (zh) 2020-12-31 2020-12-31 具有抑制肝癌转移功能的小肽及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112552390A true CN112552390A (zh) 2021-03-26
CN112552390B CN112552390B (zh) 2022-03-29

Family

ID=75035099

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011641680.7A Active CN112552390B (zh) 2020-12-31 2020-12-31 具有抑制肝癌转移功能的小肽及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112552390B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102580117A (zh) * 2012-01-17 2012-07-18 杨德业 miRNA-122抑制剂在制备治疗先天性心脏病的药物中的应用
WO2015175748A1 (en) * 2014-05-14 2015-11-19 Evorx Technologies, Inc. Methods and compositions for controlling gene expression and treating cancer
EP3254683A1 (en) * 2016-06-06 2017-12-13 Medizinische Hochschule Hannover Medicament for the treatment of acute liver failure

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102580117A (zh) * 2012-01-17 2012-07-18 杨德业 miRNA-122抑制剂在制备治疗先天性心脏病的药物中的应用
WO2015175748A1 (en) * 2014-05-14 2015-11-19 Evorx Technologies, Inc. Methods and compositions for controlling gene expression and treating cancer
EP3254683A1 (en) * 2016-06-06 2017-12-13 Medizinische Hochschule Hannover Medicament for the treatment of acute liver failure

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHUNXIAN ZENG等: ""Identification of a novel TGF-β-miR-122-fibronectin 1/serum response factor signaling cascade and its implication in hepatic fibrogenesis"", 《ONCOTARGET》 *
PAUL N VALDMANIS等: ""miR-122 removal in the liver activates imprinted microRNAs and enables more effective microRNA-mediated gene repression"", 《NAT COMMUN》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112552390B (zh) 2022-03-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Shi et al. Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1 regulates RNA synthesis of a cytoplasmic virus
US20150010647A1 (en) Methods for Identifying Fragile Histidine Triad (FHIT) Interaction and Uses Thereof
US8618273B2 (en) Partial fragment of REIC/Dkk-3 gene and cancer therapeutic agent comprising the same
KR20100099249A (ko) 세포막 재봉합을 조절하기 위한 조성물 및 방법
Bacharach et al. The carboxy-terminal fragment of nucleolin interacts with the nucleocapsid domain of retroviral gag proteins and inhibits virion assembly
CN112552390B (zh) 具有抑制肝癌转移功能的小肽及其制备方法与应用
CA2251818A1 (en) Mammalian genes involved in viral infection and tumor suppression
AU684930B2 (en) DNA encoding CAI resistance proteins and uses thereof
CN113995829B (zh) Grp78调控抗乙型肝炎病毒颗粒分泌的抑制剂
CN114045335A (zh) circSpred1基因作为标志物在纤维化肝脏、肝癌的诊断和药物制备中的应用
Zhang et al. Cloning and functional identification of a novel BCA3 splice
EP0783317B1 (en) Mimetics of senescent cell derived inhibitors of dna synthesis
CN114149496B (zh) 肿瘤血管发生调控蛋白及其应用
TW200405006A (en) Treatment of liver diseases
US20070048736A1 (en) Hepatitis
US20230038883A1 (en) Specific host factor of hepatitis b virus infection, and use thereof
JP7417274B2 (ja) Ｂ型肝炎ウイルス複製阻害剤及びそれを含むｂ型肝炎治療用医薬組成物
CN118165087A (zh) 微肽LINC00957-Peptide及其在治疗癌症中的应用
CN114032216A (zh) 双皮质肾上腺素样激酶1的新用途
Wang et al. A Novel Protein-Encoding Circular RNA CCDC7 19-15 Inhibits the Progression of Prostate Cancer by Up-Regulating FLRT3
US20070025967A1 (en) Zap protein and related compositions and methods
CN116004674A (zh) 一种pten基因下游核苷酸序列及其编码的多肽
WO2021034634A2 (en) Compositions and methods utilizing a novel human foxo3 isoform
US6790936B1 (en) CAI resistance proteins and uses thereof
WO2023250446A2 (en) ENGINEERED tRNA AND METHODS OF USE

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant