CN112494468A - 甲卡西酮调节细胞能量代谢中的应用 - Google Patents

甲卡西酮调节细胞能量代谢中的应用 Download PDF

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CN112494468A CN202011459523.4A CN202011459523A CN112494468A CN 112494468 A CN112494468 A CN 112494468A CN 202011459523 A CN202011459523 A CN 202011459523A CN 112494468 A CN112494468 A CN 112494468A
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Abstract

本发明公开了甲卡西酮调节细胞能量代谢中的应用，涉及生物医药领域，该应用通过甲卡西酮能够抑制细胞线粒体的呼吸功能，降低线粒体线粒体氧化磷酸化相关ATP速率，使总的ATP产生速率降低，为细胞能量代谢的调节以及治疗细胞能量代谢相关疾病的药物研发提供方向。

Description

甲卡西酮调节细胞能量代谢中的应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体而言，涉及甲卡西酮调节细胞能量代谢中的应用。
背景技术
能量代谢，新陈代谢是生命最基本的特征之一，其包括物质代谢和能量代谢两个方面。机体通过物质代谢，从外界摄取营养物质，同时经过体内分解吸收将其中蕴藏的化学能释放出来转化为组织和细胞可以利用的能量，人体利用这些能量来维持生命活动。通常将在物质代谢过程中所伴随的能量的释放、转移、贮存和利用称为能量代谢(energymetabolism)。
在细胞中，能量载体主要由若干对可以相互转换的化学小分子构成，而其中最重要的主要物质就是ATP。人体在工作、运动中会消耗大量的ATP，此时，ATP转变为ADP，当能量进一步缺乏时进而转变为AMP，这相当于电池的放电过程；另一方面，细胞能量丰富时，又将AMP和ADP重新转化为ATP，以保证细胞各项功能的正常运行。
细胞能量代谢是细胞最基本、最重要的活动之一，与细胞的繁殖、分化、凋亡、运动、信号转导以及多种重要疾病的发生密切相关，是生命科学的一个重要领域。如何调节细胞的能量代谢，以实现细胞能量代谢与疾病之间关系的研究，是如今亟待解决的问题之一。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供甲卡西酮调节细胞能量代谢中的应用。
本发明是这样实现的：
第一方面，本发明实施例提供了甲卡西酮在制备用于调节细胞能量代谢的试剂中的应用。
第二方面，本发明实施例提供了甲卡西酮在调节细胞能量代谢中的应用。
第三方面，本发明实施例提供了甲卡西酮在制备用于治疗细胞能量代谢相关疾病的药物中的应用。
第四方面，本发明实施例提供了甲卡西酮在制备用于调节细胞ATP产生速率的试剂中的应用。
第五方面，本发明实施例提供了甲卡西酮在调节细胞ATP产生速率中的应用；所述应用不以疾病的诊断或治疗为直接目的。
第六方面，本发明实施例提供了甲卡西酮在制备用于调节线粒体氧化磷酸化相关ATP速率的产生的试剂中的应用。
第七方面，本发明实施例提供了甲卡西酮在调节线粒体氧化磷酸化相关ATP速率的产生中的应用。
第八方面，本发明实施例提供了甲卡西酮在制备用于调节线粒体氧化磷酸化相关ATP速率的产生的试剂中的应用。
第九方面，本发明实施例提供了甲卡西酮在调节线粒体氧化磷酸化相关ATP速率的产生中的应用。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供了甲卡西酮调节细胞能量代谢中的应用，通过甲卡西酮能够抑制细胞线粒体的呼吸功能，降低线粒体线粒体氧化磷酸化相关ATP速率，使总的ATP产生速率降低，为细胞能量代谢的调节以及治疗细胞能量代谢相关疾病的药物研发提供方向。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为CCK8检测不同浓度左旋/右旋甲卡西酮对LO2细胞处理24h后细胞活力的影响；
图2为CCK8检测不同浓度左旋/右旋甲卡西酮对LO2细胞处理48h后细胞活力的影响；
图3为CCK8检测不同浓度左旋/右旋甲卡西酮对LO2细胞处理72h后细胞活力的影响；
图4为不同浓度左旋/右旋甲卡西酮干预LO2细胞12h后ATP的产生；图4中，A为不同浓度左旋甲卡西酮干预LO2细胞的氧气消耗速率图，B 为不同浓度右旋甲卡西酮干预LO2细胞的氧气消耗速率图，C为不同浓度左旋甲卡西酮干预LO2细胞的ATP产生速率图，D为不同浓度右旋甲卡西酮干预LO2细胞的ATP产生速率图；
图5为不同浓度左旋/右旋甲卡西酮干预LO2细胞24h后ATP的产生；图5中，A为不同浓度左旋/右旋甲卡西酮干预后的氧气消耗速率图，B为 ATP产生速率图；
图6为不同浓度左旋甲卡西酮对LO2细胞处理12h后细胞线粒体ATP 产生的影响；图6中，A为氧气消耗速率图，B为基础呼吸能力图，C为 ATP产生速率图；
图7为不同浓度右旋甲卡西酮对LO2细胞处理12h后细胞线粒体ATP 产生的影响；图7中，A为氧气消耗速率图，B为基础呼吸能力图，C为 ATP产生速率图；
图8为不同浓度左旋/右旋甲卡西酮对LO2细胞处理24h后细胞线粒体ATP产生的影响。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本发明提供了甲卡西酮在制备用于调节细胞能量代谢的试剂中的应用。
发明人经一系列创造性劳动发现，能够通过甲卡西酮对细胞能量代谢进行调节，为细胞能量代谢的调节提供一种调节途径，同时也有利于研究细胞能量代谢相关的疾病。
甲卡西酮为现有可获得的药物，不再赘述其结构，可通过现有途径获取。具体地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮。
优选地，所述细胞包括人正常肝细胞LO2。
优选地，所述调节细胞能量代谢为负向调节。
优选地，甲卡西酮通过调节细胞ATP产生速率以调节细胞能量代谢。
优选地，甲卡西酮通过调节线粒体氧化磷酸化相关ATP速率，以调节细胞ATP产生速率，从而调节细胞能量代谢。
本发明实施例还提供甲卡西酮在调节细胞能量代谢中的应用；所述应用不以疾病的诊断或治疗为直接目的。
甲卡西酮在调节细胞能量代谢时，当其作用于正常细胞时，不会涉及疾病的诊断与治疗。
优选地，所述细胞包括人正常肝细胞。
优选地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮。
优选地，所述甲卡西酮的工作浓度大于0.05mg/mL。在一些实施方式中，甲卡西酮的工作浓度为0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、 0.4mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL、0.9mg/mL、 1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL、2.5mg/mL、3.0mg/mL、3.5mg/mL、4.0mg/mL、4.5mg/mL和5.0mg/mL中的任意浓度。
优选地，所述甲卡西酮的工作浓度大于1mg/mL。在该浓度范围内，其能够对LO2细胞的能量代谢进行有效调节。优选地，工作浓度可以为1～5 mg/mL。
优选地，应用包括将甲卡西酮作用于待调节样本或主体，甲卡西酮的作用时间为1h以上，优选为12h以上，更优选为24h以上。在一些实施方式中，甲卡西酮的作用时间可以为1h、5h、10h、15h、20h、25h、30 h、35h、40h、45h、50h、55h、60h、65h、70h、75h和80h中的任意时间。
本发明实施例提供了甲卡西酮在制备用于治疗细胞能量代谢相关疾病的药物中的应用。
优选地，所述细胞能量代谢相关疾病为由细胞ATP产生速率升高引发的疾病；
优选地，所述细胞能量代谢相关疾病为由线粒体氧化磷酸化升高引发的疾病；
优选地，所述细胞能量代谢相关疾病选自：心脏疾病、肿瘤及免疫细胞过度活跃引发的相关疾病中的至少一种。
本发明实施例提供了甲卡西酮在制备用于调节细胞ATP产生速率的试剂中的应用。
在生理条件下，细胞依靠周密的调控系统来维持恒定的ATP水平，通过改变ATP生产速率以使细胞响应ATP需求的变化，从而维持细胞ATP 水平的稳定。本发明提供了一种应用，通过甲卡西酮来调节调节细胞ATP 产生速率，以实现调节或研究细胞的稳态的目的。
优选地，所述细胞包括人正常肝细胞。
优选地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮。
优选地，所述调节为负向调节。
本发明实施例提供了甲卡西酮在调节细胞ATP产生速率中的应用，所述应用不以疾病的诊断或治疗为直接目的。
优选地，所述细胞包括人正常肝细胞。
优选地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮。
优选地，所述调节为负向调节。
优选地，甲卡西酮的工作浓度大于0.05mg/mL；优选为1.0～5.0mg/mL。在一些实施方式中，甲卡西酮的工作浓度为0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2 mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8 mg/mL、0.9mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL、2.5mg/mL、3.0 mg/mL、3.5mg/mL、4.0mg/mL、4.5mg/mL和5.0mg/mL中的任意浓度。
优选地，所述应用包括将甲卡西酮施用于待调节主体或样本，所述甲卡西酮作用于待调节主体或样本的作用时间≥1h，优选为12h以上。
本发明实施例提供了甲卡西酮在制备用于调节线粒体氧化磷酸化相关 ATP速率的产生的试剂中的应用。
优选地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮。
优选地，所述调节为负向调节。
本发明实施例提供了甲卡西酮在调节线粒体氧化磷酸化相关ATP速率的产生中的应用。
所述应用不以疾病的诊断或治疗为直接目的；
优选地，甲卡西酮的工作浓度大于0.05mg/mL。在一些实施方式中，甲卡西酮的工作浓度为0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、 0.4mg/mL、0.5mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL、0.9mg/mL、 1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL、2.5mg/mL、3.0mg/mL、3.5mg/mL、 4.0mg/mL、4.5mg/mL和5.0mg/mL中的任意浓度。
优选地，所述应用包括将甲卡西酮施用于待调节主体或样本，所述甲卡西酮作用于待调节主体或样本的作用时间≥12h，优选为≥24h。
本发明实施例提供了甲卡西酮在制备用于调节线粒体氧化磷酸化相关 ATP速率的产生的试剂中的应用。
优选地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮。
优选地，所述调节为负向调节。
本发明实施例提供了甲卡西酮在调节线粒体氧化磷酸化相关ATP速率的产生中的应用，所述应用不以疾病的诊断或治疗为直接目的。
优选地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮。
优选地，所述调节为负向调节。
优选地，甲卡西酮的工作浓度大于0.05mg/mL。工作浓度的选择同上述实施例，不再赘述。
优选地，所述应用包括将甲卡西酮施用于待调节主体或样本，所述甲卡西酮作用于待调节主体或样本的作用时间≥12h，优选为≥24h。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
1、实验材料
细胞：人正常肝细胞LO2；
药物：左旋甲卡西酮和右旋甲卡西酮。
2、实验方法
2.1人正常肝细胞LO2的培养及处理
(1)细胞复苏
液氮罐中取出人正常肝细胞LO2，浸于37℃水浴锅中快速溶解，然后转移到加入5mL含10％FBS的DMEM培养基的15mL离心管中，800rpm 离心5min，弃上清，加入新鲜培养基吹打均匀后转移到培养皿中，于饱和湿度、37℃、5％CO2的培养箱中培养，第二天换液培养。
(2)细胞换液及传代
取生长对数期且生长状态良好的人正常肝细胞LO2，1×PBS清洗两遍后加入0.25％胰酶溶液消化直至细胞显微镜下成圆球状，加入胰酶体积2 倍以上的DMEM完全培养基终止消化，收集细胞至15mL离心管中，800rpm 离心5min，弃上清，加入适量新鲜培养基重悬细胞，吹打均匀根据细胞生长速度传代，37℃、5％CO2的培养箱中培养。
(3)细胞冻存
取生长对数期且生长状态良好的人正常肝细胞LO2，1×PBS清洗两遍后加入0.25％胰酶溶液消化直至细胞显微镜下成圆球状，加入胰酶体积2 倍以上的DMEM完全培养基终止消化，收集细胞，800rpm离心5min，弃上清，加入适量冻存液，1mL分装到冻存管中，置于-80℃冰箱保存，液氮中长期保存。
2.2 CCK8检测甲卡西酮对细胞活性(Cell viability)的影响
取正常培养的处于对数期的LO2细胞，0.25％胰酶消化，800rpm离心 5min，计数板下计数，调整至合适的细胞密度在96孔板中加入100μL的细胞悬液；将96孔板放在37℃、5％CO2培养箱孵育适当时间至细胞贴壁完全；加入不同浓度左旋甲卡西酮和右旋甲卡西酮(0、0.05、0.1、0.2、0.5、 1以及2mg/mL)作用于人正常肝细胞LO2分别处理24h、48h、72h；药物处理结束后向每孔加入CCK8溶液，按100μL中加入10μL比例加入，混匀后将96孔板在培养箱内孵育1小时。用酶标仪测定在450nm处的吸光度，根据吸光度计数细胞存活率。
不同浓度的左旋/右旋甲卡西酮处理LO2细胞24h后，细胞活力如图1 以及表1所示，处理48h后细胞活力如图2和表2所示，处理72h后细胞活力如图3和表3所示。
表1 CCK8检测不同浓度左旋/右旋处理LO2细胞24h后细胞存活率
分组 左旋 右旋
Control 100.00％ 100.00％
0.05mg/ml 100.58％ 97.65％
0.1mg/ml 92.29％ 97.29％
0.2mg/ml 88.55％ 97.52％
0.5mg/ml 86.61％ 95.51％
1mg/ml 85.23％ 95.27％
2mg/ml 47.70％ 46.03％
表2 CCK8检测不同浓度左旋/右旋处理LO2细胞48h后细胞存活率
分组 左旋 右旋
Control 100.00％ 100.00％
0.1mg/ml 96.35％ 97.60％
0.2mg/ml 92.85％ 93.97％
0.5mg/ml 85.17％ 83.71％
1mg/ml 34.87％ 35.30％
表3 CCK8检测不同浓度左旋/右旋处理LO2细胞72h后细胞存活率
Figure BDA0002830904810000091
Figure BDA0002830904810000101
从结果可以看出，左旋甲卡西酮和右旋甲卡西酮抑制细胞活性，能够剂量依赖性的杀死LO2细胞。LO2细胞分别经不同浓度的左旋/右旋甲卡西酮干预24h后，与空白对照组相比，浓度小于1mg/mL时对细胞活力影响较小，当浓度为2mg/mL时细胞活力显著降低。延长左旋/右旋甲卡西酮对 LO2细胞的干预时间48h、72h，随着药物处理时间的延长LO2细胞存活率呈降低趋势。药物不同浓度左旋/右旋甲卡西酮干预细胞能够显著降低 LO2细胞存活率，且呈现剂量依赖。结果表明左旋/右旋甲卡西酮能抑制LO2 细胞活力且呈时间、浓度依赖性。
2.3 ATP速率测定细胞代谢影响
为了探究左旋/右旋甲卡西酮对LO2细胞能量代谢的影响，采用浓度为 0、0.2、0.5、1以及2mg/ml的左旋/右旋甲卡西酮处理LO2细胞，24h后通过细胞能量代谢仪测定LO2细胞ATP产生速率。
(1)实验前一天打开Seahorse XFe24分析仪及仪器主机，打开Wave 软件，等待控制器与仪器主机连接成功，并升温至37℃。
取XFe24探针板，加1ml XF校准液在37℃无CO2培养箱中过夜水化。
取XF24细胞培养板，在XF24细胞培养板的背景校正孔中加入100μL 细胞培养基(勿加入细胞)。收集正常培养的处于对数期的LO2细胞消化计数，配制细胞悬液2×105/mL，每孔接种100μL细胞悬液于XF24细胞培养板中(除背景校正孔外)。将细胞培养板于超净工作台中静置半小时待细胞沉降后放入37℃CO2细胞培养箱，当细胞成功贴壁后，在细胞培养板的所有孔中沿孔壁缓慢补加150μL生长培养基使总体积达到250μL。将细胞培养板继续放入37℃CO2细胞培养箱中过夜培养。
(2)实验当天，无菌条件下准备检测液(pH＝7.4Seahorse XF DMEM 培养基+10mmol/L XF葡萄糖+1mmol/L XF丙酮酸钠+2mmol/L XF谷氨酰胺)，预热检测液到37℃备用。从37℃CO2培养箱中取出细胞培养微孔板，在显微镜下确认细胞状态良好。弃去细胞培养微孔板中的细胞生长培养基。用预热的检测液洗细胞，吸弃细胞生长培养基剩余50μL，向所有孔中加入 1mL检测液清洗，然后吸弃再加1mL检测液，置于37℃无CO2培养箱中用检测液孵育45-60分钟。待上机检测前，再次弃去检测液并在每孔补加 450μL新鲜预热的检测液，使终体积为500μL，上机检测。
(3)实验当天配药并加入探针板加药孔中，取出实时ATP生成速率测定试剂盒中药物寡霉素(Oligomycin)和鱼藤酮(Rotenone)/抗霉素A (Antimycin A)。用适当体积的检测液配制10×药物工作液，母液浓度分别为寡霉素15μmol/L、鱼藤酮/抗霉素A5μmol/L，旋涡震荡1分钟以确保化合物完全重悬，将配制好的药物加入探针板加药孔中，A孔加寡霉素56μL (终浓度1.5μmol/L)、B孔加鱼藤酮/抗霉素A 62μL(终浓度0.5μmol/L)，上机校准。
(4)探针板校准完成后，将细胞板放入仪器检测。
左旋/右旋甲卡西酮处理LO2细胞12h后，细胞耗氧量的变化如图4图 5所示。图中，mitoATP为线粒体氧化磷酸化相关ATP产生速率，glycoATP 为糖酵解途径中葡萄糖转变成乳酸相关ATP产生速率，细胞总ATP产生速率＝糖酵解ATP产生速率+线粒体ATP产生速率。
LO2细胞经左旋甲卡西酮及右旋甲卡西酮干预后细胞总ATP产生速率下降，且随着浓度增加细胞总ATP产生速率呈下降趋势。与对照组相比，给药组线粒体ATP产生速率下降且呈浓度依赖性，糖酵解ATP产生速率并无明显规律，结果表明与对照组比较左旋/右旋甲卡西酮能降低LO2细胞 ATP产生速率，通过降低线粒体氧化磷酸化相关ATP速率的产生，使总的 ATP产生速率减少呈浓度依赖性。
2.4线粒体ATP速率产生
使用线粒体压力试剂盒，进一步探究左旋/右旋甲卡西酮对LO2细胞线粒体ATP产生的影响。
(1)实验前一天打开Seahorse XFe24分析仪及仪器主机，打开Wave 软件，等待控制器与仪器主机连接成功，并升温至37℃。
取XFe24探针板，加1mL XF校准液在37℃无CO2培养箱中过夜水化。
取XF24细胞培养板，在XF24细胞培养板的背景校正孔中加入100μL 细胞培养基(勿加入细胞)。收集正常培养的处于对数期的LO2细胞消化计数，配制细胞悬液2×105/mL，每孔接种100μL细胞悬液于XF24细胞培养板中(除背景校正孔外)。将细胞培养板于超净工作台中静置半小时待细胞沉降后放入37℃CO2细胞培养箱，当细胞成功贴壁后，在细胞培养板的所有孔中沿孔壁缓慢补加150μL生长培养基使总体积达到250μL。将细胞培养板继续放入37℃CO2细胞培养箱中过夜培养。
(2)实验当天，无菌条件下准备检测液(pH＝7.4Seahorse XF DMEM 培养基+10mmol/L XF葡萄糖+1mmol/L XF丙酮酸钠+2mmol/L XF谷氨酰胺)，预热检测液到37℃备用。从37℃CO2培养箱中取出细胞培养微孔板，在显微镜下确认细胞状态良好。弃去细胞培养微孔板中的细胞生长培养基。用预热的检测液洗细胞，吸弃细胞生长培养基剩余50μL，向所有孔中加入 1mL检测液清洗两次，然后再吸弃余50μL检测液，再向所有孔中补加450μL检测液，使终体积为500μL。置于37℃无CO2培养箱中用检测液孵育45-60 分钟等待上机检测。
(3)配药并加入探针板加药孔中，取出细胞线粒体压力测试试剂盒中药物寡霉素、FCCP、鱼藤酮/抗霉素A。用适当体积的检测液配制10×药物工作液，母液浓度分别为寡霉素15μmol/L、FCCP 10μmol/L、鱼藤酮/抗霉素A 5μmol/L，旋涡震荡1分钟以确保化合物完全重悬，将配制好的药物加入探针板加药孔中，A孔加寡霉素56μL(终浓度1.5μmol/L)、B孔加FCCP 62μL(终浓度1μmol/L)、C孔加鱼藤酮/抗霉素A 69μL(终浓度0.5μmol/L)，上机校准。
(4)校准完成后，将细胞板放入仪器检测。
结果如图6和图7所示，基础呼吸(Basal respiration)表示用来满足细胞ATP需求和线粒体质子渗漏的氧气消耗即细胞在基础条件下的能量需求。 ATP产生速率(ATPProduction)为加入寡霉素后减少的氧气消耗速率，代表基础呼吸中被用来满足细胞能量需求驱动线粒体ATP产生的部分。选用不同浓度左旋/右旋甲卡西酮预处理细胞，测定细胞线粒体ATP产生速率，与对照组比，加入左旋甲卡西酮和右旋甲卡西酮后，细胞耗氧率变化减小，线粒体最大耗氧减小，即线粒体有氧呼吸过程对氧气的消耗量和ATP的产生量降低。结果表明左旋甲卡西酮和右旋甲卡西酮能有效抑制LO2细胞线粒体有氧呼吸能力，降低线粒体ATP产生速率、且与浓度呈负相关，浓度越高ATP的产生速率越少。选用浓度为0、0.5以及1mg/ml的左旋/右旋甲卡西酮处理细胞24h，测定细胞ATP产生速率，实验结果如图8所示。
结果表明左旋/右旋甲卡西酮能够减少细胞线粒体氧化磷酸化相关ATP 速率的产生，使总的ATP产生速率减少，且与浓度呈负相关，浓度越高ATP 的产生速率越弱。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.甲卡西酮在制备用于调节细胞能量代谢的试剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的甲卡西酮在制备用于调节细胞能量代谢的试剂中的应用，其特征在于，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮；
优选地，所述细胞包括人正常肝细胞LO2；
优选地，所述调节细胞能量代谢为负向调节。
3.甲卡西酮在调节细胞能量代谢中的应用；所述应用不以疾病的诊断或治疗为直接目的；
优选地，所述细胞包括人正常肝细胞；
优选地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮；
优选地，所述调节细胞能量代谢为负向调节；
优选地，所述甲卡西酮的工作浓度大于0.05mg/mL；
优选地，所述甲卡西酮的工作浓度为1～5mg/mL；
优选地，所述应用包括将甲卡西酮施用于待调节主体或样本，所述甲卡西酮作用于待调节主体或样本的作用时间≥12h。
4.甲卡西酮在制备用于治疗细胞能量代谢相关疾病的药物中的应用；
优选地，所述细胞能量代谢相关疾病为由细胞ATP产生速率升高引发的疾病；
优选地，所述细胞能量代谢相关疾病为由线粒体氧化磷酸化升高引发的疾病；
优选地，所述细胞能量代谢相关疾病选自：心脏疾病、肿瘤及免疫细胞过度活跃引发的相关疾病中的至少一种。
5.甲卡西酮在制备用于调节细胞ATP产生速率的试剂中的应用；
优选地，所述细胞包括人正常肝细胞；
优选地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮；
优选地，所述调节为负向调节。
6.甲卡西酮在调节细胞ATP产生速率中的应用；
所述应用不以疾病的诊断或治疗为直接目的；
优选地，所述细胞包括人正常肝细胞；
优选地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮；
优选地，所述调节为负向调节；
优选地，甲卡西酮的工作浓度大于0.05mg/mL。
7.甲卡西酮在制备用于调节线粒体氧化磷酸化相关ATP速率的产生的试剂中的应用；
优选地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮；
优选地，所述调节为负向调节。
8.甲卡西酮在调节线粒体氧化磷酸化相关ATP速率的产生中的应用；
所述应用不以疾病的诊断或治疗为直接目的；
优选地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮；
优选地，所述调节为负向调节；
优选地，甲卡西酮的工作浓度大于0.05mg/mL。
9.甲卡西酮在制备用于调节线粒体氧化磷酸化相关ATP速率的产生的试剂中的应用；
优选地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮；
优选地，所述调节为负向调节。
10.甲卡西酮在调节线粒体氧化磷酸化相关ATP速率的产生中的应用；
所述应用不以疾病的诊断或治疗为直接目的；
优选地，所述甲卡西酮为左旋甲卡西酮和/或右旋甲卡西酮；
优选地，所述调节为负向调节；
优选地，甲卡西酮的工作浓度大于0.05mg/mL。
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