CN112485420B - 检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法,包括荧光标记组分和免疫层析试纸条。本发明的荧光免疫层析试剂盒利用荧光免疫层析技术以猫胰脂肪酶单克隆抗体定量检测猫胰腺炎,不仅填补了目前市场上没有荧光免疫层析定量检测猫胰腺炎的空白,同时也提高了检测灵敏度和准确度,并且将定量检测时间大大缩短,具有快速、简单、干扰小等优点。而且本发明针对猫胰腺炎的检测将试剂盒进行了改进,取消了试纸条上的结合垫,增加荧光标记组分的提供,可以将待测样本与荧光标记组分混合后加至样品垫进行测试,可以提高反应的均一性,从而达到更高的精密度和准确度。
Description
技术领域
本发明涉及免疫层析技术领域,特别是涉及一种检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法。
背景技术
胰腺炎分为急性胰腺炎和慢性胰腺炎。急性胰腺炎是指腺体细胞被激活的胰腺急性疾病。目前,国内外的兽医临床上对急性胰腺炎的诊断主要是依靠体检和实验室诊断相结合。但是大量临床数据显示对于猫胰腺炎的诊断特异性和敏感性都不强,无法单纯通过这些方法对急性胰腺炎进行确诊。目前在中国兽医临床上用于诊断猫胰腺炎的实验方法主要是测量血浆淀粉酶,但是淀粉酶波动范围较大,猫的品种之间也具有较大的差异性。
目前检测猫胰腺炎的免疫学方法主要有金标免疫渗滤法(金标法)、化学发光法、分子诊断法(PCR)等。但是金标免疫渗滤法(金标法)灵敏度不高,重复性和准确性均有欠缺,抗干扰能力不足,检测时间长,致使临床价值受到很大的限制。化学发光法、分子诊断法需要大型仪器,而且对实验人员的要求较高,在宠物医院难以普及。
发明内容
基于此,有必要提供一种准确度较高的检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒。
一种检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒,包括荧光标记组分和免疫层析试纸条;
所述荧光标记组分中含有海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾以及荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体和荧光微球标记的第一质控抗体;
所述免疫层析试纸条包括底板和设于所述底板上的样品垫、反应膜和吸水垫,所述样品垫、反应膜和吸水垫依次搭接,所述反应膜上设有相互间隔的检测线及质控线,所述检测线较所述质控线更靠近所述样品垫,所述检测线上包被有猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体,所述质控线包被有能够与所述第一质控抗体特异性结合的第二质控抗体。
在其中一个实施例中,所述荧光标记组分中各物质的浓度为:海藻糖0.5wt%~3wt%、BSA 2wt%~7wt%,蔗糖5wt%~20wt%、月桂醇醚磷酸酯钾0.1wt%~2wt%、荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体5wt%~15wt%、荧光微球标记的第一质控抗体5wt%~15wt%。
在其中一个实施例中,所述第一质控抗体为羊抗兔IgG抗体,所述第二质控抗体为兔IgG抗体。
在其中一个实施例中,所述荧光微球为荧光胶乳微球。
在其中一个实施例中,所述荧光微球的直径为300mm~500nm,所述荧光微球在300nm~500nm的激发光光源作用下,发射出500nm~600nm的荧光。
本发明还提供了一种所述荧光免疫层析试剂盒的制备方法,包括以下步骤:
将所述海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾、荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体、荧光微球标记的第一质控抗体与缓冲液混合得到所述荧光标记组分;
将猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体包被在反应膜上形成所述检测线;
将第二质控抗体包被在所述反应膜上形成与所述检测线相间隔的所述质控线;
将所述样品垫、所述反应膜和所述吸水垫设于所述底板上,得到所述免疫层析试纸条。
在其中一个实施例中,在反应膜上形成所述检测线的方法包括以下步骤:用含2wt%~10wt%海藻糖的缓冲液将猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体稀释到0.3mg/mL~1mg/mL,作为检测线工作液;用所述检测线工作液在反应膜上划线后烘干,形成所述检测线。
在其中一个实施例中,在反应膜上形成所述质控线的方法包括以下步骤:用含2wt%~10wt%蔗糖的缓冲液将第二质控抗体稀释到0.3mg/mL~1mg/mL,作为质控线工作液;用所述质控线工作液在反应膜上划线后烘干,形成所述质控线。
在其中一个实施例中,所述划线的出液量为0.5μL/cm~2μL/cm,所述烘干的条件为40℃~60℃烘48~72小时。
在其中一个实施例中,所述荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体的制备方法包括以下步骤:将荧光微球活化得到活化荧光微球溶液,然后加入猫胰脂肪酶单克隆检测抗体室温孵育1.5~3小时。
本发明的荧光免疫层析试剂盒利用荧光免疫层析技术以猫胰脂肪酶单克隆抗体定量检测猫胰腺炎,不仅填补了目前市场上没有荧光免疫层析定量检测猫胰腺炎的空白,同时也提高了检测灵敏度和准确度,并且将定量检测时间大大缩短,具有快速、简单、干扰小等优点。脂肪酶主要来源于胰腺,是胰腺分泌的消化酶之一。在急性胰腺炎时,脂肪酶与淀粉酶呈平行性改变,但脂肪酶的升高在血清中出现较晚,持续时间长,所以采用猫胰脂肪酶单克隆抗体诊断胰腺炎的特异性更高。而且本发明针对猫胰腺炎的检测将试剂盒进行了改进,取消了试纸条上的结合垫,增加荧光标记组分的提供,可以将待测样本与荧光标记组分混合后加至样品垫进行测试,可以提高反应的均一性,从而达到更高的精密度和准确度。而且,在荧光标记组分中加入月桂醇醚磷酸酯钾与其他组分配合,能够进一步提高检测的准确度。本发明的荧光免疫层析试剂盒的基本原理为双抗体夹心法,即样本中的待测物与荧光标记组分中的荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体结合形成复合物。加至样品垫后在层析作用下,复合物沿着反应膜向前扩散,复合物被固定在反应膜检测线上对应的猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体所捕获。样本中待测物越多,反应形成的复合物也越多,检测线上积聚的复合物则越多,显色就更加明显,荧光信号的强度反应了被捕获的待测物的数量。荧光微球标记的第一质控抗体则层析至质控线,与第二质控抗体结合显色。
附图说明
图1为本发明试剂盒的线性拟合方程图;
图2为本发明试剂盒在常温保存6个月、12个月、18个月、24个月后的检测数据图;
图3为本发明试剂盒与荧光标记组分喷于结合垫的试剂盒的检测对比图;
图4为不同荧光标记组分的检测结果差异图;
图5为本发明试剂盒与韩国安捷Vcheck试剂的相关性图;
图6为荧光标记组分中加入MAEPK与不加MAEPK的检测时间差异。
具体实施方式
为了便于理解本发明,下面将对本发明进行更全面的描述,并给出了本发明的较佳实施例。但是,本发明可以以许多不同的形式来实现,并不限于本文所描述的实施例。相反地,提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明一实施例的检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒,包括荧光标记组分和免疫层析试纸条。
荧光标记组分中含有海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾以及荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体和荧光微球标记的第一质控抗体。
免疫层析试纸条包括底板和设于底板上的样品垫、反应膜和吸水垫,样品垫、反应膜和吸水垫依次搭接,反应膜上设有相互间隔的检测线及质控线,检测线较质控线更靠近样品垫,检测线上包被有猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体,质控线包被有能够与第一质控抗体特异性结合的第二质控抗体。
本发明的荧光免疫层析试剂盒利用荧光免疫层析技术以猫胰脂肪酶单克隆抗体定量检测猫胰腺炎,不仅填补了目前市场上没有荧光免疫层析定量检测猫胰腺炎的空白,同时也提高了检测灵敏度和准确度,并且将定量检测时间大大缩短,具有快速、简单、干扰小等优点。脂肪酶主要来源于胰腺,是胰腺分泌的消化酶之一。在急性胰腺炎时,脂肪酶与淀粉酶呈平行性改变,但脂肪酶的升高在血清中出现较晚,持续时间长,所以采用猫胰脂肪酶单克隆抗体诊断胰腺炎的特异性更高。而且本发明针对猫胰腺炎的检测将试剂盒进行了改进,取消了试纸条上的结合垫,增加荧光标记组分的提供,可以将待测样本与荧光标记组分混合后加至样品垫进行测试,可以提高反应的均一性,从而达到更高的精密度和准确度。而且,在荧光标记组分中加入月桂醇醚磷酸酯钾与其他组分配合,能够进一步提高检测的准确度。本发明的荧光免疫层析试剂盒的基本原理为双抗体夹心法,即样本中的待测物与荧光标记组分中的荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体结合形成复合物。加至样品垫后在层析作用下,复合物沿着反应膜向前扩散,复合物被固定在反应膜检测线上对应的猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体所捕获。样本中待测物越多,反应形成的复合物也越多,检测线上积聚的复合物则越多,显色就更加明显,荧光信号的强度反应了被捕获的待测物的数量。荧光微球标记的第一质控抗体则层析至质控线,与第二质控抗体结合显色。
在一个具体示例中,荧光标记组分中各组分的浓度为:海藻糖0.5wt%~3wt%、BSA 2wt%~7wt%,蔗糖5wt%~20wt%、月桂醇醚磷酸酯钾0.1wt%~2wt%、防腐剂Proclin300 0.2wt%~0.5wt%、荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体5wt%~15wt%、荧光微球标记的第一质控抗体5wt%~15wt%,可以提高检测准确性。优选地,荧光标记组分以0.2μL~5μL的分装量分装在0.6mL~1.5mL的离心管中。
在一个具体示例中,第一质控抗体为羊抗兔IgG抗体,第二质控抗体为兔IgG抗体。可以理解,第一质控抗体和第二质控抗体的选择不限于此,根据需要选择能够特异性结合的抗体即可。
可选地,荧光微球为荧光胶乳微球、胶体金颗粒或磁珠微粒,底板为PVC板,样品垫均为玻璃纤维垫,反应膜为硝酸纤维素膜。
在一个具体示例中,荧光微球的直径为300mm~500nm,荧光微球在300nm~500nm的激发光光源作用下,发射出500nm~600nm的荧光。
在一个具体示例中,荧光免疫层析试剂盒还包括卡壳,免疫层析试纸条设于该卡壳内,卡壳上设有加样孔,以便较好地保护试纸条免受污染,也便于测试。
可以理解,猫胰脂肪酶单克隆检测抗体和猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体为纯化后的单克隆抗体,来源于针对猫胰脂肪酶抗原决定簇的单克隆抗体细胞株。
本发明一实施方式的荧光免疫层析试剂盒的制备方法,包括以下步骤S1~S4:
S1、将海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾、荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体、荧光微球标记的第一质控抗体与缓冲液混合得到荧光标记组分。优选地,将各组分与缓冲液混合后进行分装,然后于30℃~40℃烘干24~48小时,有助于更好地保藏。
S2、将猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体包被在反应膜上形成检测线。
S3、将第二质控抗体包被在反应膜上形成与检测线相间隔的质控线。
S4、将样品垫、反应膜和吸水垫设于底板上,得到免疫层析试纸条。
在一个具体示例中,将猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体包被在反应膜上形成检测线(T线)的方法包括以下步骤:用含2wt%~10wt%海藻糖的缓冲液将猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体稀释到0.3mg/mL~1mg/mL,作为检测线工作液;用检测线工作液在反应膜上划线后烘干,形成检测线。优选地,划线的出液量为0.5μL/cm~2μL/cm,烘干温度为40℃~60℃,烘干时间为48~72小时。
在一个具体示例中,将第二质控抗体包被在反应膜上形成质控线(C线)的方法包括以下步骤:用含2wt%~10wt%蔗糖的缓冲液将第二质控抗体稀释到0.3mg/mL~1mg/mL,作为质控线工作液;用质控线工作液在反应膜上划线后烘干,形成所述质控线。优选地,划线的出液量为0.5μL/cm~2μL/cm,烘干温度为40℃~60℃,烘干时间为48~72小时。
在一个具体示例中,荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体的制备方法包括以下步骤:将荧光微球活化得到活化荧光微球溶液,然后加入猫胰脂肪酶单克隆检测抗体室温孵育1.5~3小时。优选地,活化荧光微球溶液的浓度为(800~1200)μg/100μL,猫胰脂肪酶单克隆检测抗体的加入量为:每200μL活化荧光微球溶液中加入1μg~10μg猫胰脂肪酶单克隆检测抗体。优选地,在孵育后进行离心取沉淀,然后用缓冲液再次溶解。
在一个具体示例中,荧光微球标记的第一质控抗体的制备方法包括以下步骤:将荧光微球活化得到活化荧光微球溶液,然后加入第一质控抗体室温孵育1.5~3小时。优选地,活化荧光微球溶液的浓度为(800~1200)μg/100μL,第一质控抗体的加入量为:每200μL活化荧光微球溶液中加入0.01μg~0.5μg第一质控抗体。优选地,在孵育后进行离心取沉淀,然后用缓冲液再次溶解。可选地,制备荧光标记组分时将荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体溶液、荧光微球标记的第一质控抗体溶液和微球稀释液以0.5:0.01:0.5的比例混匀。可选地,微球稀释液为含有海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾(MAEPK)和防腐剂Proclin300的Tris缓冲液(pH7.5~8.5)。
本发明的荧光免疫层析试剂盒操作简单,检测时间短,只需要采集75μl的猫血清(全血、血浆均可测试),加入样本稀释液混匀后,滴入加样孔,只需5min即可出定量检测结果,大大减少检测时间,能快速判断病情,缩短治愈时间,真正实现即时检测。定量检测猫胰腺炎的浓度只需要使用小型仪器(干式免疫荧光检测仪),灵敏度高,线性范围广,准确度高,与韩国安捷试剂的临床样本相关性R2在0.99,适合在中小型宠物医院普及。本发明的检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒,采用猫胰脂肪酶单克隆抗体,并对荧光标记组分进行了优化,取消了结合垫,可提高反应均一性,减少非特异性干扰,样本类型可支持全血、血浆、血清,为用户提供多种选择,试剂盒保存温度是4℃~30℃,可常温保存,大大降低了运输成本,使用方便。
以下为具体实施例。
实施例1试剂盒的制备
制备荧光标记组分:活化荧光胶乳微粒,制备得到活化荧光胶乳微粒溶液。分别向活化荧光胶乳微粒溶液中加入猫胰脂肪酶单克隆检测抗体和羊抗兔IgG抗体,室温混合孵育2小时。离心并溶解所得沉淀,获得荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体和荧光微球标记的羊抗兔IgG抗体。然后与微球稀释液混合得到荧光标记组分,各组分浓度为:海藻糖2wt%、BSA 5wt%,蔗糖10wt%、月桂醇醚磷酸酯钾1wt%、防腐剂Proclin300 0.3wt%、荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体10wt%、荧光微球标记的羊抗兔IgG抗体10wt%。将荧光标记组分以2μL的分装量分装在0.6mL的离心管中,放入烘箱35℃烘干36小时。所用单克隆抗体为小鼠抗猫胰脂肪酶单抗隆抗体,购自珠海博美生物科技有限公司。
制备具有检测线和质控线的硝酸纤维素膜:用含5wt%海藻糖的0.01M PBS缓冲液(pH=7.4)将猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体稀释到0.8mg/mL作为检测线(T线)工作液,用含5wt%蔗糖的0.01M PBS缓冲液(pH=7.4)将兔IgG抗体稀释到0.8mg/mL作为质控线(C线)工作液。将硝酸纤维素膜贴在PVC板上,分别以检测线工作液和质控线工作液在硝酸纤维素膜上划线,划线的出液量为1μL/cm,然后置于50℃烘干48小时。
将样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接设于PVC底板上,得到免疫层析试纸条。
实施例2拟合线性方程
采用上述实施例1的试剂盒对不同浓度的猫胰腺炎校准品进行测定,猫胰腺炎校准品的浓度以及对应的检测限信号值和质控线信号值如表1所示,其中,检测限信号值和质控线信号值分别用T和C表示,线性拟合方程图如图1所示。
表1猫胰腺炎校准品不同浓度对应的检测限信号值和质控线信号值
结论:线性拟合方程与重复性测试结果显示,试剂在检测范围0~3.5μg/L内cPL线性拟合相关系数R大于0.99。
实施例3精密度
取2.3μg/L、3.6μg/L两个水平的的校准品,每个浓度测试10张试剂卡。猫胰腺炎校准品的浓度以及对应的检测限信号值和质控线信号值如表2所示,其中,检测限信号值和质控线信号值分别用T和C表示。
表2
结果显示:本试剂盒的批内精密度较好,检测两个浓度的参考品的批内精密度变异系数(CV)小于10%。
实施例4准确度
对浓度为2.4μg/L、3.6μg/L、5.6μg/L的猫胰腺炎校准品进行测定,每个浓度各检测3次,计算样本测定结果均值和相对偏差,结果如表3所示。
表3
结果显示:本试剂盒的准确度较好,检测3个浓度的参考品的相对偏差Bias%在±15%内。
实施例5试剂盒常温保存时间测试
将试剂盒常温保存6个月、12个月、18个月、24个月,分别检测校准品2.5μg/L、3.6μg/L、5.6μg/L,稳定性检测结果如下表4和图2所示。
表4
结论:试剂盒常温保存24个月后,相对偏差Bias%在±15%内,试剂盒可以常温保存2年。
实施例6
用实施例1试剂盒与配套仪器(干式荧光免疫试剂盒)对浓度为2.4μg/L、3.6μg/L、5.6μg/L、12.5μg/L的猫胰腺炎校准品进行测定,并对比测试将样品与荧光标记组分直接混合与标记喷垫(荧光标记组分喷于结合垫)的差异,每个浓度各检测3次,结果如表5和图3所示。其中,检测值用T/C表示。
表5
结论:荧光标记组分与样品直接混合的灵敏度比喷在结合垫上的灵敏度更好,故本发明试剂盒选择把荧光标记组分装在离心管中单独提供,并取消试纸条的结合垫。
实施例7
用实施例1试剂盒与配套仪器(干式荧光免疫试剂盒)对浓度为2.4μg/L、3.6μg/L、5.7μg/L、10.5μg/L的猫胰腺炎校准品进行测定,并对比测试荧光标记组分加MAEPK(月桂醇醚磷酸酯钾)与不加MAEPK的差异,每个浓度各检测3次,结果如表6和图4所示。其中,检测值用T/C表示。
表6
结论:在荧光标记组分中加入MAEPK比不加MAEPK的试剂盒准度更高。
实施例8
用实施例1试剂盒与配套仪器(干式荧光免疫试剂盒)进行样本测试,并与韩国安捷Vcheck试剂进行相关性比较,结果如表7和图5所示。
表7
结论:本发明试剂盒的测定结果与韩国安捷Vcheck仪器及配套试剂盒测定的结果,相关系数R2=0.99,相关性较好,可用于临床诊断。
实施例9检测试剂盒反应时间的选择
采用实施例1的试剂盒测定fPL参考品2.6μg/L、3.6μg/L、5.7μg/L、10.5μg/L四个浓度,分别在3、5、10、15分钟时,对同一浓度进行测试,比较T/C与浓度的灵敏度以及线性,结果如表8所示。其中,检测值用比值T/C表示。
表8
浓度μg/L | 2.6 | 3.6 | 5.7 | 10.5 |
测试时间 | T/C | T/C | T/C | T/C |
3min | 0.0438 | 0.5345 | 1.441 | 2.8655 |
5min | 0.0441 | 0.9264 | 2.3413 | 4.5079 |
10min | 0.0431 | 0.9121 | 2.4611 | 4.7139 |
15min | 0.0401 | 0.9289 | 2.9643 | 4.049 |
结论:根据灵敏度以及线性范围0.5~100μg/L,可选择测试时间为3min、5min、10min,最优选择为5min。
实施例10
用本试剂盒与配套仪器(干式荧光免疫试剂盒)对浓度为2.6μg/L、3.6μg/L、5.7μg/L、10.5μg/L的猫胰腺炎校准品进行测定,测试加入MAEPK与不加MAEPK的差异,并比较T/C与浓度的灵敏度以及线性,其中,检测值用比值T/C表示,如下表9和图6所示。
表9
结论:结果显示,加入MAEPK比不加MAEPK的灵敏度更好,还大大缩短了检测时间,由原先的15min检测时间缩短到了5min。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (9)
1.一种检测猫胰腺炎的荧光免疫层析试剂盒,其特征在于,包括荧光标记组分和免疫层析试纸条;
所述荧光标记组分中含有海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾以及荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体和荧光微球标记的第一质控抗体;所述荧光标记组分中各物质的浓度为:海藻糖0.5wt%~3wt%、BSA 2wt%~7wt%,蔗糖5wt%~20wt%、月桂醇醚磷酸酯钾0.1wt%~2wt%、荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体5wt%~15wt%、荧光微球标记的第一质控抗体5wt%~15wt%;
所述免疫层析试纸条包括底板和设于所述底板上的样品垫、反应膜和吸水垫,所述样品垫、反应膜和吸水垫依次搭接,所述反应膜上设有相互间隔的检测线及质控线,所述检测线较所述质控线更靠近所述样品垫,所述检测线上包被有猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体,所述质控线包被有能够与所述第一质控抗体特异性结合的第二质控抗体。
2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试剂盒,其特征在于,所述第一质控抗体为羊抗兔IgG抗体,所述第二质控抗体为兔IgG抗体。
3.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试剂盒,其特征在于,所述荧光微球为荧光胶乳微球。
4.根据权利要求3所述的荧光免疫层析试剂盒,其特征在于,所述荧光微球的直径为300mm~500nm,所述荧光微球在300nm~500nm的激发光光源作用下,发射出500nm~600nm的荧光。
5.一种权利要求1~4任一项所述的荧光免疫层析试剂盒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
将所述海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾、荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体、荧光微球标记的第一质控抗体与缓冲液混合得到所述荧光标记组分;
将猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体包被在反应膜上形成所述检测线;
将第二质控抗体包被在所述反应膜上形成与所述检测线相间隔的所述质控线;
将所述样品垫、所述反应膜和所述吸水垫设于所述底板上,得到所述免疫层析试纸条。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,在反应膜上形成所述检测线的方法包括以下步骤:用含2wt%~10wt%海藻糖的缓冲液将猫胰脂肪酶单克隆捕获抗体稀释到0.3mg/mL~1mg/mL,作为检测线工作液;用所述检测线工作液在反应膜上划线后烘干,形成所述检测线。
7.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,在反应膜上形成所述质控线的方法包括以下步骤:用含2wt%~10wt%蔗糖的缓冲液将第二质控抗体稀释到0.3mg/mL~1mg/mL,作为质控线工作液;用所述质控线工作液在反应膜上划线后烘干,形成所述质控线。
8.根据权利要求6或7所述的制备方法,其特征在于,所述划线的出液量为0.5μL/cm~2μL/cm,所述烘干的条件为40℃~60℃烘48~72小时。
9.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述荧光微球标记的猫胰脂肪酶单克隆检测抗体的制备方法包括以下步骤:将荧光微球活化得到活化荧光微球溶液,然后加入猫胰脂肪酶单克隆检测抗体室温孵育1.5~3小时。
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