CN112470936B - 一种广西莪术组培苗瓶内结郁金的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种广西莪术组培苗瓶内结郁金的方法，包括以下步骤：在超净工作台上，将广西莪术增殖丛生芽切分成2～4个芽为一小丛，接入壮芽及诱导根茎培养基中培养至根茎上的芽长出叶片；将得到的带有根茎的丛芽切分成单芽，接入生根结郁金诱导培养基中培养。60 d时进行统计，苗的根数为4～10条，根茎1个，郁金数为1～5个。本发明方法能直接在广西莪术芽生根的同时诱导出根茎、并结郁金（块根），而根茎以及郁金（块根）是广西莪术两个药用器官，不仅提高了广西莪术的移栽成活率，还能通过增加根茎生长量以及郁金（块根）数量达到提高广西莪术产量的目的。该方法具有操作简单、重复性好、成本低、安全高效等优点。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体是一种广西莪术组培苗瓶内结郁金的方法。
背景技术
广西莪术（CurcumakwangsiensisS.G.LeeetC.F.Liang）为姜科姜黄属多年生宿根草本植物，为广西的道地药材。广西莪术是“一物两用”中药材，根茎作为桂莪术入药，主治气血凝滞、心腹胀痛、症瘕、积聚、宿食不消、妇女血瘀经闭、跌打损伤作痛等；块根作为桂郁金入药，有行气解郁、破瘀、止痛的功用。随着广西莪术药理作用研究不断深入，还发现有抗癌、抗早孕、抗凝血、抗氧化和保肝等活性，且对人体毒副作用小，在临床上应用广泛。现以莪术和郁金入药并已获得生产批号的中成药有几十种，如乌军利胆片、护肝片、加味左金丸、开胸顺气丸等。
由于广西莪术品质优，市场需求量非常大，桂郁金更是畅销国内外。目前，广西莪术长期以来以分株繁殖方式，存在用种量大、病毒积累严重、种性退化、抗逆性差等问题，使得单株产量越来越低。目前，对于莪术的研究主要集中在化学成分和药理方面的研究，而在优质种苗方面的研究不多。广西莪术组培快繁技术研究报道仅限于诱导芽生根，就将生根苗移栽，存在组培苗成活率低、生长缓慢等问题。
申请人在开展广西莪术组培快繁技术研究中发现，在瓶内诱导出根茎（莪术），并在根茎上结块根（郁金），不仅可有效提高组培苗移栽成活率，还能加快莪术生长及结郁金的速度和数量，提高莪术和郁金的产量。
发明内容
本发明以广西莪术增殖芽为材料，应用不同植物生长调节剂种类和浓度的配比进行壮芽、生根、根茎及郁金的诱导，总结出一种广西莪术组培苗瓶内结郁金的方法。
实现本发明目的的技术方案是：
一种广西莪术组培苗瓶内结郁金的方法，包括以下步骤：
（1）壮芽及诱导根茎培养：在超净工作台上，将广西莪术增殖丛生芽切分成2～4个芽为一小丛，接入壮芽及诱导根茎培养基中，10 d～15 d时，芽的基部逐渐膨大变粗，30 d时，芽基部膨大形成根茎，根茎上的芽长出叶片；
所述壮芽及诱导根茎培养基为：MS+ 6-BA 1.0～4.0 mg/L+ TDZ 0.01～0.5 mg/L+ NAA0.1～0.5 mg/L + S33070.01～1.0 mg/L +蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
（2）生根结郁金培养：在超净工作台上，将步骤（1）得到的带有根茎的丛芽切分成单芽，接入生根结郁金诱导培养基中，培养8 d～15 d时，芽的根茎上开始长出不定根，根茎不断长大；30 d～35 d时，根茎上长出1～5粗根；40d～45 d时，根茎上的粗根开始膨大形成块根，芽不断长高、长壮；60 d时进行统计，苗的根数为4～10条，根茎1个，郁金数为1～5个；
所述生根结郁金诱导培养基为：MS+ NAA 0.1～1.0 mg/L +IAA0.1～1.0 mg/L+PP333 1.0～5.0 mg/L + 6-BA 0.01～0.1 mg/L +蔗糖35 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0。
步骤（1）和（2）中，培养阶段的培养条件是：培养温度为30±1℃, 光照时间为12h/d, 光照强度为5000 lx。
所述壮芽及诱导根茎培养基优选为：MS+ 6-BA 2.5 mg/L+ TDZ 0.2 mg/L +NAA0.2 mg/L + S33070.1 mg/L +蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
所述生根结郁金诱导培养基优选为：MS+ NAA 0.5 mg/L +IAA0.5 mg/L+PP333 3.0mg/L + 6-BA 0.05 mg/L +蔗糖35 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0。
所述培养基中，MS为基本培养基，6-BA为6-苄氨基嘌呤，TDZ为噻重氮苯基脲，PP333为多效唑，S3307为烯效唑，NAA为a-萘乙酸， IAA为吲哚-3-乙酸，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
所述培养基中，植物生长调节剂6-BA、S3307、NAA、TDZ、PP333和IAA共同作用，完成壮苗、诱导出根茎、不定根及郁金，形成完整广西莪术植株。6-BA具有促进细胞分裂、非分化组织分化、生物体内物质的积累及侧芽发生等生理作用；TDZ能刺激离体体细胞胚胎发生，刺激体内生长素类物质合成，诱导不定芽发生和根部组织的再生作用；S3307具有控制营养生长，抑制细胞伸长、缩短节间、矮化植株，增进抗逆性的作用； NAA具有促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根；PP333主要是控制作物茎干的伸长，缩短作物节间，但不影响细胞分化，能促进植株分蘖或分枝，增加植株抗逆性能，调节光合产物流向，促进结实器官形成，从而提高产量等效果； IAA刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长，促进形成层细胞分裂，促进木质部、韧皮部细胞分化，促进发根、调节愈伤组织的形态建成。
本发明方法能直接在广西莪术芽生根的同时诱导出根茎、并结郁金（块根），而根茎以及郁金（块根）是广西莪术两个药用器官，不仅提高了广西莪术的移栽成活率，还能通过增加根茎生长量以及郁金（块根）数量达到提高广西莪术产量的目的。该方法具有操作简单、重复性好、成本低、安全高效等优点。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明内容作进一步的说明，但不是对本发明的限定。
实施例1
一种广西莪术组培苗瓶内结郁金的方法，包括以下步骤：
（1）壮芽及诱导根茎培养：在超净工作台上，将广西莪术增殖丛生芽切分成3个芽为一小丛，接入壮芽及诱导根茎培养基中，15 d时，芽的基部逐渐变粗，30 d时，芽基部膨大形成根茎，根茎较小，芽一般壮，根茎上的芽长出叶片；
所述壮芽及诱导根茎培养基为：MS+ 6-BA 1.0 mg/L+ TDZ 0.01 mg/L + NAA0.1mg/L + S33070.01 mg/L +蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
（2）生根结郁金培养：在超净工作台上，将步骤（1）得到的带有根茎的丛芽切分成单芽，接入生根结郁金诱导培养基中，培养8 d～15 d时，芽的根茎上开始有细长的不定根，根茎不断长大；35 d时，根茎上长出1～3很粗长的根；45 d时，根茎上粗长的根开始膨大形成块根，芽不断长高，一般壮；60 d时进行统计，以10株为计，重复3次，苗的平均根数为6.42条，根茎1个，郁金平均个数为1.75个；
所述生根结郁金诱导培养基为：MS+ NAA 0.1 mg/L +IAA0.1 mg/L+PP333 1.0 mg/L + 6-BA 0.01 mg/L +蔗糖35 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
步骤（1）和（2）中，培养阶段的培养条件是：培养温度为30±1℃, 光照时间为12h/d, 光照强度为5000 lx。
实施例2
一种广西莪术组培苗瓶内结郁金的方法，包括以下步骤：
（1）壮芽及诱导根茎培养：在超净工作台上，将广西莪术增殖丛生芽切分成3个芽为一小丛，接入壮芽及诱导根茎培养基中，10 d时，芽的基部逐渐膨大变粗，30 d时，芽基部膨大部分形成根茎，芽矮壮，根状茎个头大小不均，根茎上的芽长出叶片卷曲；
所述壮芽及诱导根茎培养基为：MS+ 6-BA 4.0 mg/L+ TDZ 0.5 mg/L + NAA0.5mg/L + S33071.0 mg/L +蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
（2）生根结郁金培养：在超净工作台上，将步骤（1）得到的矮壮且带有根茎的丛芽切分成单芽，接入生根结郁金诱导培养基中，培养15 d时，芽的根茎上开始长出不定根，根茎不断长大；35 d时，根茎上长出1～4粗根；45 d时，根茎上的粗根开始膨大形成块根，芽矮壮；60 d时进行统计，以10株为计，重复3次，苗的平均根数为5.09条，根茎1个，郁金平均个数为2.35个；
所述生根结郁金诱导培养基为：MS+ NAA 1.0 mg/L +IAA1.0 mg/L+PP333 5.0 mg/L + 6-BA 0.1 mg/L +蔗糖35 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
步骤（1）和（2）中，培养阶段的培养条件是：培养温度为30±1℃, 光照时间为12h/d, 光照强度为5000 lx。
实施例3
一种广西莪术组培苗瓶内结郁金的方法，包括以下步骤：
（1）壮芽及诱导根茎培养：在超净工作台上，将广西莪术增殖丛生芽切分成3个芽为一小丛，接入壮芽及诱导根茎培养基中，10 d时，芽的基部逐渐膨大变粗，30 d时，芽基部膨大形成根茎，芽壮，根茎个头大均匀，芽的叶色青绿；
所述壮芽及诱导根茎培养基为：MS+ 6-BA 2.5 mg/L+ TDZ 0.2 mg/L + NAA0.2mg/L + S33070.1 mg/L +蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
（2）生根结郁金培养：在超净工作台上，将步骤（1）得到的带有根茎的丛芽切分成单芽，接入生根结郁金诱导培养基中，培养8 d时，芽的根茎上开始长出不定根，根茎不断长大；30 d时，根茎上长出2～5粗根；40d时，根茎上的粗根开始膨大形成块根，芽一般高、壮；60 d时进行统计，苗的平均根数为8.26条，根茎1个，郁金平均个数为3.80个；
所述生根结郁金诱导培养基为：MS+ NAA 0.5 mg/L +IAA0.5 mg/L+PP333 3.0 mg/L + 6-BA 0.05 mg/L +蔗糖35 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
步骤（1）和（2）中，培养阶段的培养条件是：培养温度为30±1℃, 光照时间为12h/d, 光照强度为5000 lx。
Claims (3)
1.一种广西莪术组培苗瓶内结郁金的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）壮芽及诱导根茎培养：在超净工作台上，将广西莪术增殖丛生芽切分成2～4个芽为一小丛，接入壮芽及诱导根茎培养基中，10 d～15 d时，芽的基部逐渐膨大变粗，30 d时，芽基部膨大形成根茎，根茎上的芽长出叶片；
所述壮芽及诱导根茎培养基为：MS+ 6-BA 1.0～4.0 mg/L+ TDZ 0.01～0.5 mg/L +NAA0.1～0.5 mg/L + S33070.01～1.0 mg/L +蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
（2）生根结郁金培养：在超净工作台上，将步骤（1）得到的带有根茎的丛芽切分成单芽，接入生根结郁金诱导培养基中，培养8 d～15 d时，芽的根茎上开始长出不定根，根茎不断长大；30 d～35 d时，根茎上长出1～5粗根；40d～45 d时，根茎上的粗根开始膨大形成块根，芽不断长高、长壮；60 d时进行统计，苗的根数为4～10条，根茎1个，郁金数为1～5个；
所述生根结郁金诱导培养基为：MS+ NAA 0.1～1.0 mg/L +IAA0.1～1.0 mg/L+PP333 1.0～5.0 mg/L + 6-BA 0.01～0.1 mg/L +蔗糖35 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；
步骤（1）和（2）中，培养阶段的培养条件是：培养温度为30±1℃, 光照时间为12 h/d,光照强度为5000lx。
2.根据权利要求1所述的广西莪术组培苗瓶内结郁金的方法，其特征在于：
所述壮芽及诱导根茎培养基为：MS+ 6-BA 2.5 mg/L+ TDZ 0.2 mg/L + NAA0.2 mg/L+ S33070.1 mg/L +蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0。
3.根据权利要求1所述的广西莪术组培苗瓶内结郁金的方法，其特征在于：
所述生根结郁金诱导培养基为：MS+ NAA 0.5 mg/L +IAA0.5 mg/L+PP333 3.0 mg/L +6-BA 0.05 mg/L +蔗糖35 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0。
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