CN112391468A - 脑癌检测 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及脑癌检测。提供了用于检测受试者中的脑癌的方法，预测脑癌患者的临床结果的方法，监测患者的脑癌进展的方法，以及将患者的脑癌分级的方法。方法利用了发明人已经发现在这些方面有用的各种各样的微RNA。

Description

脑癌检测
本申请是申请日为2014年7月9日，申请号为“201480046390.4”，发明名称为“脑癌检测”的申请的分案申请。
本发明涉及用于检测受试者中的脑癌的方法。本发明还涉及预测脑癌患者的临床结果的方法；监测患者的脑癌进展的方法；以及将患者的脑癌分级的方法。
引言
在2010年，仅在英国就有9,156例脑癌的新病例(英国癌症研究院(CancerResearchUK))。在世界上，据估计每年有445,000例脑癌的新病例(英国癌症研究院)。由于人口每年在增长，所以脑癌的发病率将跟着增长，这突出了对改进的诊断、预后和对治疗的响应的预测的需求。本发明具有在英国和世界上满足该需求的潜力。
目前神经胶质瘤的诊断涉及用MRI成像以及通过神经病理学的组织学分析。在一些病例中，MRI扫描不足够准确以确定地诊断个体，其后需要组织学分析。可以仅在手术期间移除肿瘤组织之后执行组织学分析并且其取决于个人病理学家的解释是非常主观的。对患者风险性及侵入性的程序，特别是在进行手术时呈现较高风险的老年个体中具有神经胶质瘤的高发生率。
微小RNA(miRNA)是在基因的转录后调节和蛋白质表达中起作用的小的非编码RNA。miRNA显示疾病特异性的表达，其可被用于提供关于特定的生物学状态诸如神经胶质瘤的信息。可在被释放入循环系统的神经胶质瘤特异性外泌体(exosomes)的分离后测量神经胶质瘤中miRNA表达的变化。本研究的目的是鉴别具有在神经胶质瘤中改变的表达且可用于诊断、预后以及对治疗的响应的预测的一组miRNA。
在第一方面，本发明提供了检测受试者中脑癌的方法，该方法包括：
测定来自受试者的样品以确定存在于样品中的选自由由以下组成的组的至少一种miRNA的量：Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-34a-5p；Hsa-miR-92a-3p；hsa-miR-15b；hsa-miR-181b；hsa-miR-19a；hsa-miR-210；hsa-miR-23a；hsa-miR-15a；hsa-miR-181a；hsa-miR-21；hsa-miR-222；hsa-miR-26a；hsa-miR-29c；hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p；Hsa-miR-96-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p和Hsa-miR-451a；
将存在于样品中的所述至少一种miRNA的量与参考值比较；
其中样品中的所述至少一种miRNA的量与参考值比较的不同指示受试者患有脑癌。
本发明的该第一方面基于发明人的如下发现，在代表脑癌的样品中(或取自患有脑癌的受试者，或取自脑癌的细胞培养模型)上面提到的miRNA与未患脑癌的受试者(或使用非癌性脑细胞的模型)比较具有丰度的变化。实际上，如在本公开内容中的其他地方更详细的讨论，发明人发现了所提及的miRNA以高于或低于在非癌性参照样品中发现的数量多倍(“倍”增)的数量存在。
在本发明的第二方面，提供了预测脑癌患者中的临床结果的方法，该方法包括：
测定来自患者的样品中选自由以下组成的组的至少一种miRNA的存在：Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-34a-5p；Hsa-miR-92a-3p；hsa-miR-15b；hsa-miR-181b；hsa-miR-19a；hsa-miR-210；hsa-miR-23a；hsa-miR-15a；hsa-miR-181a；hsa-miR-21；hsa-miR-222；hsa-miR-26a；hsa-miR-29c；hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p；Hsa-miR-96-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p和Hsa-miR-451a；
将存在于样品中的所述至少一种miRNA的量与参考值比较；
其中样品中至少一种miRNA的量与参考值比较的不同指示关于患者的脑癌的消极结果。
本发明的该第二方面基于发明人对所提到的miRNA与脑癌的存在之间关联的发现。该发现允许对上述miRNA的研究提供对患者的脑癌的可能进展以及相应的可以预期的临床结果的指示。特别地，发明人发现了这些miRNA标志物的丰度以如下所述的方式的变化通常与关于者的脑癌的消极结果相关。
用于脑癌的诊断、预后和监测的技术目前典型地使用成像方法，诸如MRI技术，随后证实性的组织学分析。
发明人相信在本文被鉴别的一组miRNA生物标志物可能在脑癌诸如神经胶质瘤的分级中是有益的。
本发明的第三方面提供了监测患者中脑癌的进展的方法，该方法包括：
测定来自患者的指示在第一时间点的患者中的miRNA的第一样品中，选自由以下组成的组的至少一种miNRA的存在，以确定存在于样品中的至少一种miRNA的丰度的第一值：hsa-Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-34a-5p；Hsa-miR-92a-3p；hsa-miR-15b；hsa-miR-181b；hsa-miR-19a；hsa-miR-210；hsa-miR-23a；hsa-miR-15a；hsa-miR-181a；hsa-miR-21；hsa-miR-222；hsa-miR-26a；hsa-miR-29c；miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p；Hsa-miR-96-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p和Hsa-miR-451a；
以及测定来自患者的指示在第二时间点的患者中的miRNA的第二样品中，相同的至少一种miRNA的存在，以确定存在于第二样品的所述至少一种miRNA的丰度的第二值；以及
比较用于所述至少一种miRNA的丰度的第一值和第二值；
其中第一值和第二值之间的不同指示关于患者的脑癌有进展。
当研究的miRNA在癌症中与参考值比较是上调的值时，那么第二值与第一值比较的增加指示脑癌的进展在第一时间点和第二时间点之间恶化。
当研究的miRNA在癌症中与参考值比较是下调的值时，那么第二值与第一值比较的减少也指示脑癌的进展在第一时间点和第二时间点之间恶化。
相比之下，当研究的miRNA在癌症中与参考值比较是上调的值时，那么第二值与第一值比较的减少指示脑癌的进展在第一时间点和第二时间点之间改善。
相似地，当研究的miRNA在癌症中与参考值比较是下调的值时，那么第二值与第一值比较的增加指示脑癌的进展在第一时间点和第二时间点之间改善。
本发明的监测方法可利用指示在进一步的时间点的患者中的miRNA的另外的样品(例如，除第一样品和第二样品外，指示在第三时间点的患者中的miRNA的第三样品)。
第一时间点、第二时间点(以及任何后续的时间点)可被间隔打算在其间监测患者的脑癌的进展的任何感兴趣的时期。
患者可能会经受治疗，该治疗意图改变第一时间点和第二时间点之间的癌症的状态。例如，患者可能经受临床治疗或用推定的治疗剂的治疗。在这种情况中，监测患者的癌症的进展可提供临床治疗或推定的治疗剂是否证明是成功的指示。
以该方式监测癌症进展还可在确定癌症治疗应该何时启动中是有益的。仅仅举例来说，当癌症恶化时(例如，低等级肿瘤进展为高等级肿瘤)，可指示启动治疗。相似地，考虑被监测的肿瘤的发展和/或退化可作出关于是否要开始或结束治疗方案诸如化疗方案的决定。
应该理解的是，可就两个样品测定来自列举的清单中的多种miRNA，且只要测定的miRNA的至少一种在两个样品之间是共同的，就可测定不同的miRNA(因此允许就样品中miRNA的丰度进行比较)。
在第四方面，提供了将患者的脑癌分级的方法，该方法包括：
测定来自患者的样品以确定存在于样品中的选自由以下组成的组的至少一种miRNA的量：Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-34a-5p；Hsa-miR-92a-3p；hsa-miR-15b；hsa-miR-181b；hsa-miR-19a；hsa-miR-210；hsa-miR-23a；hsa-miR-15a；hsa-miR-181a；hsa-miR-21；hsa-miR-222；hsa-miR-26a；hsa-miR-29c；hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p；Hsa-miR-96-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p和Hsa-miR-451a；
将存在于样品中的所述至少一种miRNA的量与从已知临床等级的癌症获得的miRNA表达的参考值比较；以及
将患者的脑癌分配给与存在于样品中的所述至少一种miRNA的量最接近的临床等级。
为了简要起见，第一方面、第二方面、第三方面和第四方面的每一种的方法可在本文称作“本发明的方法”。以下各页将提供本发明的这些方面和其他方面的合适的实施方案的更多细节。除了上下文要求之处，否则参考本发明的一个方面描述的实施方案还可应用于本发明的其他方面。
本发明的方法能够提供超越来自现有技术的那些已知的技术的许多优点。本发明第一方面的方法能够用作脑肿瘤特别是神经胶质瘤的诊断测试。通过采血样的非侵入性的方法，可从患者分离并测试血清以鉴别选择的一组微RNA的变化以确定脑肿瘤的存在而不需要手术。当患者最初表现出神经症状时简单的测试能够允许快速治疗的较早的诊断并给患者积极结果的最佳时机。
本发明的第四方面的方法还可用于区分脑肿瘤的不同等级。如果在诊断中执行此方法；这可在为患者选择正确的治疗中是有用的，再次给他们积极结果的最佳时机而不需要侵入性程序。
本发明的方法的主要益处是能够被执行而不需要如组织学技术所需的手术。相比于MRI，它们还能够提高诊断的精确性。当肿瘤可能存在但通过成像不可识别时也有较早诊断的潜力，允许快速治疗以及潜在的改善的预后。
测量在血清和/或CSF中的微RNA表达能够克服目前诊断技术的局限性。通过分析微RNA提高准确性，但是同时就取血液样品而不是手术来说是非侵入性的。
当再次需要手术时，分析肿瘤组织中的微RNA与现有技术相比改善了准确性。
发明人进行的分析提供了对各种各样的在本文被鉴定的生物标志物miRNA可用于实践本发明的方法的方式的洞察。
对上面所提及的miRNA的选择显示了它们与参考值比较被上调时的诊断效用。相应地，发现在可能是未知脑癌状态的受试者的样品中这些诊断性的上调的miRNA的一种或多种的增加的丰度指示所研究的受试者患有脑癌。适合于用于此实施方案的miRNA可选自由以下组成的组：Has-miR-20a-5p；Hsa-miR-34a-5p；Hsa-miR-92a-3p；hsa-miR-101-3p；hsa-miR-148a；hsa-miR-29b-3p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-15b；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-181b；Hsa-miR-19a；Hsa-miR-210和Hsa-miR-23a。合适的实施方案可利用此类miRNA的一种、多种或全部。在癌症的发病中上调的这些miRNA的特别有用的选择可包括选自由以下组成的组的一种或多种：Has-miR-20a-5p；Hsa-miR-34a-5p；Hsa-miR-92a-3p；hsa-miR-101-3p；hsa-miR-148a；hsa-miR-29b-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-15b；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-181b；Hsa-miR-19a；Hsa-miR-210和Hsa-miR-23a。
与上面所提及的上调的miRNA生物标志物相比，发明人还鉴定了与参考值比较在癌细胞中是下调的一组标志物。相应地，发现来自可能另外是未知的脑癌状态的受试者的样品中的这些诊断性的下调的miRNA的一种或多种的下降的丰度指示所研究的受试者患有脑癌。因此，在可选的实施方案中，本发明的方法可涉及测定来自受试者的样品以确定选自由由以下组成的组的至少一种miRNA的量：Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-451a；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p；Hsa-miR-15a；Hsa-miR-181a；Hsa-miR-21；Hsa-miR-222；Hsa-miR-26a；Hsa-miR-Hsa-miR-29c和Hsa-miR-96-5p；以及比较在样品中发现的量与参考值，其中存在于样品中的量与参考值比较的减少指示存在癌症。合适的实施方案可利用此类miRNA中的一种、多种或全部。癌症的发病中下调的这些miRNAs的特别地有用的选择可包括选自由由以下组成的组的一种或多种：Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-451a；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-15a；Hsa-miR-181a；Hsa-miR-21；Hsa-miR-222；Hsa-miR-26a；Hsa-miR-29c和Hsa-miR-93。
如上面所提到的，本发明的第二方面的方法在脑癌患者中临床结果的预测中是有用的。这些方法能够提供关于患者患脑癌的预期存活长度的指示。
在本发明的第二方面的此种方法的合适的实施方案中，至少一种miRNA选自由以下组成的组：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p，并且其中存在于样品中的至少一种miRNA的量与参考值比较的增加指示关于患者的脑癌的消极结果。
在本发明的第二方面的方法的另一个合适的实施方案中，至少一种miRNA选自由以下组成的组：Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p和Hsa-miR-96-5p；并且存在于样品中的至少一种miRNA的量与参考值比较的减少指示关于患者的脑癌的消极结果。
如下面进一步讨论的，在评估存在的Hsa-miR-20a-5p的量的前面段落的方法的情况中，合适的参考值可以与合适的对照(诸如性别和年龄匹配的对照)比较为两倍增加。
在癌症患者的血清中发现上调的那些微RNA的实例中，可能通常预期被调节的升高越大，患者的预后越差。相似地，可以预期，在癌症患者的血清中的微RNA被下调的情况中，微RNA越下调，患者临床结果的可能性就越差。然而，发明人已经发现了构成临床结果的有用的指示物的一群微RNA，但该群微RNA不遵循上面列出的模式。
与对照比较，Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-92a-3p和Hsa-miR-34a-5p在患有神经胶质瘤脑癌的患者血清中均是上调的。出人意料地，发明人已经发现，当这些微RNA的水平与合适的对照比较时，较高水平的上调与较好的临床结果相关。
因此，在本发明的第二方面的方法的合适的实施方案中，方法涉及测定来自患者的样品中的选自由以下组成的组的至少一种miRNA：Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-92a-3p和Hsa-miR-34a-5p，将存在于样品中的所述至少一种miRNA的量与反映存在于未患癌的对照受试者的相同的至少一种miRNA的水平的参考值比较。
其中样品中的所述至少一种miRNA的量与参考值比较的减少指示关于患者的脑癌的消极结果。
在利用Hsa-miR-20a-5p的此种方法的情况中，反映未患癌的对照受试者中该miRNA水平的合适的参考值可为在未患癌的对照受试者中的该miRNA水平的两倍的值。将预期Hsa-miR-20a-5p的水平高于在对照受试者中水平的两倍值的患者具有关于他们癌症的积极结果。将预期Hsa-miR-20a-5p的水平与对照受试者中的水平相比升高，但是不高于在对照受试者中的值的两倍的患者具有关于他们癌症的消极结果。
在利用Hsa-miR-34a-5p和/或Hsa-miR-92a-3p的此类方法的情况中，反映未患癌的对照受试者中的该miRNA的水平的合适的参考值可为在未患癌的对照受试者中的所研究的miRNA的水平的两倍、三倍或多倍。将预期Hsa-miR-34a-5p和/或Hsa-miR-92a-3p的水平大于对照受试者中选定的值的患者将具有关于他们癌症的积极结果。将预期Hsa-miR-34a-5p和/或Hsa-miR-92a-3p的水平与对于对照受试者中的水平相比升高，但不大于对照受试者中选定的值的患者具有关于他们癌症的消极结果。
来自患者的合适的样品是体液样品，诸如血清样品。
在合适的实施方案中，本发明的方法还可包括涉及合适的治疗方案的选择以及任选地实施的步骤。因此，例如，依据本发明第一方面的检测脑癌的方法还可包括为被鉴定为患有脑癌的受试者选择合适的治疗方案，并且任选地提供所述治疗方案。
在本发明的第二方面的方法的情况中，为了预测脑癌患者中的临床结果，该方法还可包括为被鉴定为处于关于他们的脑癌的消极结果的风险中的受试者选择合适的治疗方案，且任选地可以还涉及提供所述治疗方案。本文中的合适的治疗可包括与那些将被视为关于被认为可能具有积极临床结果的临床上可能合适的治疗比较更彻底的治疗。
在本发明的第三方面的方法的情况中，为了监测患者中的脑癌的进展，该方法还可包括如果该方法指示关于患者的脑癌正在恶化做出启动脑癌治疗的决定。该方法可以任选地包括启动选定的治疗。如果患者正在接受治疗，但是该方法指示患者的脑癌还在恶化，那么进一步的步骤可涉及选择更彻底的治疗方案的决定，且任选地提供选定的更彻底的治疗方案。如果依据本发明的第三方面的方法指示了关于患者的脑癌的改善，该方法的合适的下一步可涉及减少或停止任何进行中的治疗。
在依据本发明的第四方面的将患者的脑癌分类的方法的情况中，该方法还可包括选择及任选地提供适合于已经分配给患者的脑癌的临床等级的治疗方案。
具体地，本申请提供了以下内容：
1.一种预测脑癌患者的临床结果的方法，所述方法包括：
测定来自所述患者的样品中选自由以下组成的组的至少一种miRNA的存在：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p；Hsa-miR-96-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p，
将存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的量与参考值比较；
其中所述样品中至少一种miRNA的量与所述参考值比较的不同指示关于所述患者的脑癌的消极结果。
2.如项目1所述的方法，所述方法包括测定来自所述患者的样品中选自由以下组成的组的至少一种miRNA：Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-92a-3p和Hsa-miR-34a-5p,
将存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的量与反映存在于未患癌的对照受试者的相同的至少一种miRNA的水平的参考值比较；
其中所述样品中所述至少一种miRNA的量与所述参考值比较的减少指示关于所述患者的脑癌的消极结果。
3.如项目2所述的方法，其中所述至少一种miRNA包括Hsa-miR-20a-5p，反映未患癌的对照受试者中该miRNA水平的合适的参考值为在未患癌的对照受试者中的该miRNA水平的两倍的值。
4.如项目1所述的方法，其中所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p，并且其中存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的量与所述参考值比较的增加指示关于所述患者的脑癌的消极结果。
5.如项目4所述的方法，其中所述样品是组织样品，并且所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328和hsa-miR-9-5p。
6.如项目4所述的方法，其中所述样品是血清样品，以及所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p。
7.如项目1所述的方法，其中所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p和Hsa-miR-96-5p，并且其中存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的量与所述参考值比较的减少指示关于所述患者的脑癌的消极结果。
8.如项目1所述的方法，其中所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326和Hsa-miR-425-5p。
9.一种检测受试者中脑癌的方法，所述方法包括：
测定来自所述受试者的样品以确定存在于所述样品中的选自由以下组成的组的至少一种miRNA的量：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p；Hsa-miR-96-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p，
将存在于所述样品的所述至少一种miRNA的量与参考值比较；
其中所述样品中的至少一种miRNA的量与所述参考值比较的不同指示所述受试者患有脑癌。
10.如项目9所述的方法，其中所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p，并且其中存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的量与所述参考值比较的增加指示癌症的存在。
11.如项目10所述的方法，其中所述样品是组织样品，并且所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328和hsa-miR-9-5p。
12.如项目11所述的方法，其中所述样品是血清样品，并且所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p。
13.如项目9所述的方法，其中所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p和Hsa-miR-96-5p；并且其中存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的量与所述参考值比较的减少指示癌症的存在。
14.如项目13所述的方法，其中所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326和Hsa-miR-425-5p。
15.一种监测患者中脑癌的进展的方法，所述方法包括：
测定来自所述患者的指示在第一时间点的患者中的miRNA的第一样品中，选自由以下组成的组的至少一种miNRA的存在，以确定存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的丰度的第一值：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p；Hsa-miR-96-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p；
以及测定来自所述患者的指示在第二时间点的患者中的miRNA的第二样品中，相同的至少一种miRNA的存在，以确定存在于所述第二样品中的所述至少一种miRNA的丰度的第二值；以及
比较用于所述至少一种miRNA的丰度的所述第一值和所述第二值；
其中所述第一值和所述第二值之间的不同指示关于所述患者的脑癌有进展。
16.如项目15所述的方法，其中所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p，并且其中存在于所述第二样品中的所述至少一种miRNA的量与所述第一样品比较的增加指示关于所述患者的脑癌的恶化。
17.如项目16所述的方法，其中所述样品是组织样品，并且所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328和hsa-miR-9-5p。
18.如项目16所述的方法，其中所述样品是血清样品，并且所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p。
19.如项目15所述的方法，其中所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p和Hsa-miR-96-5p，并且其中存在于所述第二样品中的所述至少一种miRNA的量与所述第一样品比较的减少指示关于所述患者的脑癌的恶化。
20.如项目19所述的方法，其中所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326和Hsa-miR-425-5p。
21.一种将患者的脑癌分级的方法，所述方法包括：
测定来自所述患者的样品以确定存在于所述样品中的选自由以下组成的组的至少一种miRNA的量：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p；Hsa-miR-96-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p；
将存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的量与从已知临床等级的癌症获得的miRNA表达的参考值比较；以及
将所述患者的脑癌分配给与存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的量最接近的临床等级。
22.如任一项前述项目所述的方法，其中，用于确定所述至少一种miRNA的存在或量的测定包括扩增步骤，其中将所述患者样品中的miRNA用作用于生成人工核酸分子的模板。
包括或多或少的彻底的脑癌治疗的可被提供为本发明的方法的下一步的脑癌的合适治疗对本领域的技术人员将是已知的。
为了避免疑问，且为了澄清解释本公开内容的方式，现进一步定义依据本发明使用的某些术语。
适合于在本发明的方法中使用的样品
本发明的方法利用提供关于进行研究中的受试者中的miRNA生物标志物的存在有用的生物学信息的样品。
i)组织样品
在合适的实施方案中，样品可为组织样品。仅仅举例来说，样品可为活检样品诸如脑活检样品。
尽管收集组织样品诸如活检样品一般比收集体液样品(在下面讨论)是更侵入性的，其可能仍然代表许多临床方面中常用的步骤。在这种情况下，可适合地测定来自受试者的组织样品以确定在样品中的感兴趣的至少一种miRNA的量。
可将以上讨论的任何下调的miRNA用于在组织样品上实践的本发明的方法。
尽管发明人相信在前段所提及的所有生物标志物miRNA在样品中被下调(与参考值相比较)具有诊断效用，这些标记物中的某些显示了在它们的丰度中特别地显著的变化。因此，在一个优选的实施方案中，本发明的方法可涉及比较选自由以下组成的组的至少一种miRNA的水平与参考值：Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326和Hsa-miR-425-5p，其中在样品中所述至少一种miRNA的量与参考值比较的减少指示癌症。
发明人还发现了某些上面描述的上调的miRNA在脑癌细胞中是特别增加的，且如此可在样品为组织样品的实施方案中具有显著的诊断效用。相应地，在此类实施方案中，该方法可涉及测定组织样品中选自由以下组成的组的至少一种miRNA的水平：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328和hsa-miR-9-5p，其中在所述样品中至少一种选定的miRNA与参考值比较的增加的丰度指示癌症的存在。
ii)体液样品
在可选的实施方案中，样品是体液样品。在合适的实施方案中，体液样品选自由以下组成的组：脑脊液(CSF)样品；血液样品和血清样品。
本领域的技术人员将意识到，在正常的情况下，很难获得关于生物学过程诸如发生在脑内的癌症的存在或进展的详细的信息。脑通过血脑屏障与机体的大部分分离，且在颅骨内被生理包围和保护。已经在本说明书的其他地方讨论了这些考虑，以及这些施加于脑癌的诊断或监测的困难。
鉴于这些已知的困难，应该理解的是，体液样品可代表能够用于本发明的方法的样品的特别有用的实例，由于它们可能通常通过比趋向于为获得脑组织样品诸如活检样品所必要的侵入性程序更少的侵入性程序而获得。特别地，特别容易和安全地获取样品诸如血清样品，因为它们仅仅取自血液样品。高度有利的和出人意料的是本发明的方法能够使用通常通过血脑屏障与脑分离的血清(作为血液的成分)提供信息，诸如脑中的癌症的存在或进展。
使用生物流体作为监测疾病状态的诊断和预后的手段是相对非侵入性的程序。它规避了有风险的手术的需要并提供了明确的诊断因此消除了组织病理学切片的主观的解释。
对于手术是必要的个体，肿瘤组织的微RNA表达又为诊断、预后信息和对治疗的响应的预测提供了改进的准确性。
在其中样品是体液诸如血清样品的实施方案中，可通过选自由以下组成的组的至少一种miRNA的丰度与参考值比较的增加来指示癌症的存在：Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p。
在样品是血清样品且受试者是男性的实施方案中，可通过选自由以下组成的组的至少一种miRNA的丰度与参考值比较的增加来指示癌症的存在：Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a和Hsa-miR-486-5p。
在样品是血清样品且受试者是男性的优选的实施方案中，发明人已经发现上面提及的miRNA标志物的子集经历特别显著的丰度的增加。相应地，在如此的实施方案中，可通过选自由以下组成的组的至少一种miRNA的丰度与参考值比较的增加来指示癌症的存在：Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-486；Hsa-let-7b-5p和Hsa-miR-25-3p。发明人认为在本发明的此类实施方案中这些标志物具有特定的诊断价值。
在样品是血清样品且受试者是女性的本发明的方法的实施方案中，可通过选自由以下组成的组的至少一种miRNA的丰度与参考值比较的增加来指示癌症的存在：Hsa-miR-451a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-92a-3p和Hsa-miR-25-3p。
在使用来自女性受试者的血清样品的本发明的方法的优选的实施方案中，可通过与参考值比较选自由以下组成的组的至少一种miRNA的丰度的增加来指示癌症的存在：Hsa-miR-486-5p和Hsa-miR-25-3p。这些miRNA代表患有脑癌的女性受试者的血清中被特别地强烈地上调，且因此被认为有显著的诊断效用的生物标志物。
在样品是血清样品且受试者为年龄60岁或更大的本发明的方法的合适的实施方案中，可通过Hsa-miR-34a-5p丰度与对照值的比较的增加来指示癌症的存在。合适的对照将是合适地年龄匹配的。发明人已经发现了Hsa-miR-34a是在患有脑癌的60岁或更大的受试者的血清中上调的生物标志物，且因此认为Hsa-miR-34a-5p在来自该年龄的个体的血清样品中具有特别的诊断效用。
“比较”
比较在样品中的miRNA的量与在参考值的那些的步骤将一般地仅需要可用于确定存在于样品中的miRNA的丰度与参考值比较是增加或降低的足够的信息。在优选的实施方案中，可获得的信息可以足以允许鉴定miRNA的丰度与参考值比较的倍数-变化。
样品中miRNA的量与参考值之间的“不同”
存在于样品中的miRNA的量与参考值之间的不同可能为样品中的miRNA的丰度与参考值比较的相对增加，或样品中的miRNA丰度与参考值比较的相对减少。与不同的miRNA标志物使用相关的“不同”的性质(例如，如果与参考值比较增加或降低，特定标志物是否具有诊断效用)在本公开内容中其他地方讨论。
“参考值”
本发明的方法利用存在于样品中的感兴趣的miRNA的量与合适的参考值之间的比较。与参考值的该比较允许对所研究的miRNA的丰度与合适的对照比较是增加了或降低了做出评价。
应该理解的是，在简单的实施方式中，参考值通过以与感兴趣的样品相同的方式平行处理合适的对照样品来确定。然而，并不必需是这种情况，可以利用关于在合适的对照样品中感兴趣的miRNA的水平的标准化的信息实践本发明的方法。
这些感兴趣的miRNA中的一些是分泌的，而其他不是分泌的。该区别允许参照可获得的样品的类型对待检测miRNA亚-选择。
某些可在本发明的方法中利用的miRNA是分泌的的认识还对选择合适的参考值具有显著的影响。如果指示脑癌的miRNA被分泌到体液，那么必须从已知未患癌症的受试者确定合适的参考值，因为，否则，即使从远离脑癌的位点采集的样品中，也有来自未知癌症的至少一些污染可能会发生的风险。
相似地，在本发明的方法中有用的某些miRNA不是分泌的的认识也对选择合适的样品和参考值用于评价这些miRNA的实施方案具有显著的影响。与分泌的miRNA相比，这些非-分泌的miRNA不适合于在体液样品中的评价。可从来自非癌性组织样品确定合适的参考值。可选地，可从来自已知为非癌性的培养的细胞确定合适的参考值。
在其中样品是组织样品的实施方案中，可通过其中所研究的miRNA从样品提取的技术测定样品中miRNA的存在与量。这样的方法可利用适用于其中样品是体液样品的方法的许多分析技术。
可选地，其中样品是组织样品的发明的方法可使用其中当miRNA保持在原位时确定miRNA的存在与含量的测定。可在此类实施方案中使用本领域技术人员已知的一系列组织学技术。仅仅举例来说，可通过使用原位杂交的技术确定在组织样品中miRNA的存在与位置。不希望被任何假说束缚，发明人相信至少一些上面所提及的miRNA可涉及肿瘤发生，并且因此确定它们的原位位置的能力可以有利地监测脑癌的进展。
“测定”
本发明的方法涉及测定来自受试者的样品以便确定在样品中发现的选定的miRNA的量。通常，用于检测miRNA的测定可为本领域的技术人员知道的适合于检测核酸的任何种类(此类测定允许简单的评价“有些量”或“没有量”的所研究的miRNA存在)，且优选地可允许定量选定的miRNA。
本发明的测定方法可涉及在患者样品中天然存在的miRNA分子与非天然剂之间形成复合物。非天然剂可包括部分或当与来自患者样品的miRNA络合时允许它们的检测的其他合适的工具。在本发明的方法中测定miRNA可涉及检测在miRNA和非天然存在的剂诸如合成的寡核苷酸、标记的抗体等之间形成的这些复合物。
在本发明的方法中使用的测定可直接地确定存在于样品中的miRNA的量。例如，合适的测定可涉及仅仅标记存在于样品中的天然miRNA。
可选地，本发明的方法中所使用的测定可间接地确定存在于样品中的miRNA的量。这意味着可使用如下测定：其中产生miRNA的代替物(proxy)，且确定该产生的代替物的量，由此允许间接地定量miRNA。
举例来说，在合适的实施方案中，用于确定miRNA的存在的测定可包括扩增步骤，其中患者样品中的miRNA被用作模板用于生成人工核酸分子，且评价存在的人工核酸分子的存在与量，因此允许确定存在于样品中的至少一种miRNA的量。
本领域的那些技术人员将知道使用此类扩增步骤的测定的合适的实例。在合适的实施方案中，扩增步骤利用了定量逆转录酶聚合酶链式反应(qRT-PCR)。应该理解的是包括上面所提及的qRT-PCR的实例的许多此类技术将引起产生互补DNA(cDNA)分子——在自然中没有发现的人工核酸分子。作为测定的一部分可将此类人工核酸序列与天然存在的序列分离。
“脑癌”
发明人相信本发明的方法适用于多种多样脑癌。仅仅举例来说，与本发明的方法结合所提及的脑癌选自由由以下组成的组：神经胶质瘤；脑膜瘤；垂体腺瘤和神经鞘瘤。如可从本文描述的实验结果的考虑所理解的，在特别地合适的实施方案中，本发明的方法可为所提及的脑癌是神经胶质瘤的方法。
附图说明
现在将参照下面的试验结果和附图进一步描述本发明，其中：
图1是用于提取用于生成试验结果的miRNA的离心柱(spincolumn)方法的示意图。
图2示出了在U87MG和SVGp12细胞中的miRNA表达的比较所实现的结果。图2幅A示出了U87MG细胞的MiRNA表达，其中与SVGp12细胞比较，26种miRNA是下调的。图2幅B示出了10种下调最多的miRNA(蓝色的较重轮廓的圈)。图2幅C示出了Hsa-miR-101-3p、hsa-miR-29b-3p、hsa-miR-328和hsa-miR-9-5p的倍数变化，与SVGp12(用来提供参考值的非癌性细胞，用于本发明的方法的目的)比较其全部是上调的。
图3示出了通过来自男性和女性受试者的血清样品中的miRNA表达的比较所实现的结果。图3幅A图解了四种微RNA显示了在男性血清中表达与对照血清比较的4-倍增加(上部对角线上方的红圈)。展示出最高表达水平的两种miRNA在男性和女性之间是共同的：miR-486-5p和25-3p。图3幅B示出了七种miRNA在男性血清中与对照比较是上调的。女性血清展示了11种miRNA的增加。幅C比较了来自女性受试者的血清样品(癌症和对照)中的miRNA表达。在女性血清中MiR-451、486-5p、92a-3p和25-3p显示了最高的表达。
图4示出了来自通过年龄(年龄20至40岁，或年龄60岁或更大)分组的受试者的血清样品中Hsa-miR-34a-5p表达的比较所实现的结果。与对照比较，患有脑癌胶质母细胞瘤的患者中miR-34a的表达是上调的。当年龄60岁或更大的患者与年龄匹配的对照比较时，该升高是统计学上显著的。
图5复制了图4中图解的关于在年龄60岁或更大的癌症患者与对照受试者中Hsa-miR-34a-5p表达的比较的结果。
图6图解了个体男性60+GBM样品的血清中具有最大倍数变化的miRNA。七种miRNA在男性60+GBM样品中显示了大于2-倍的增加。Let-7b-5p在三个样品中的两个中显示了最大的增加的倍数变化，BTNW1000显示了所有七种miRNA的最高的增加的倍数变化。
图7图解了个体女性60+GBM样品的血清中具有最大倍数变化的miRNA。八种miRNA在至少一个女性GBM样品中显示了与对照比较大于2倍的增加。MiR-24-3p和miR-451a显示了最大的增加的倍数变化，miR-451a显示了两个样品的最大的增加的倍数变化。
图8图解了从年龄大于60岁的GBM患者的血清分离的miRNA的组合表达。
图9图解了年龄在20-40岁之间的GBM患者的血清中的miRNA表达。使用miScript脑癌板的qPCR分析鉴定了12种miRNA在年龄20-40岁之间的GBM患者的血清中有变化的表达。MiR-9-5p具有所有12种miRNA的最高表达以及29c-3p具有该组第二高的表达。
图10图解了从年龄在20-40岁之间的GBM患者的血清分离的miRNA的表达。
图11图解了在该研究中使用的GBM患者总体存活的Kaplain-Meier图。A)GBM患者与未患GBM的对照患者比较的总体存活。GBM患者的中位存活期(Mediansurvival)为8.51个月。使用卡方(Chi Square)确定存活p＝0.0015。B)通过年龄分组的GBM患者的总体存活。通过对数秩，Mantel-Cox检验确定中位存活期对于年龄20-40岁的患者为10.57个月，对于年龄为40-60岁的患者为16.09个月以及对于年龄大于60岁的患者为3.12个月p＝<0.0001。C)按性别的GBM患者的总体存活，中位存活期对于男性患者为6.3个月及对于女性患者为13.31个月，p＝0.0022。通过对数秩，Mantel-Cox检验确定显著性。
图12示出了从年龄大于60岁的患者获取的血清中miR-34a的相对表达。与年龄匹配的对照比较，年龄大于60岁的GBM患者显示了血清miR-34a的上调。相对表达显示为2^-ΔCt。p＝<0.05。
图13示出了具有高miR-34a表达和低miR-34a表达的大于60岁的GBM患者的Kaplain-Meier图。表达大于2倍变化的GBM患者具有10.6个月的中位存活期以及miR-34a表达小于2倍变化的GBM患者具有8.78个月的中位存活期。通过对数秩，Mantel-Cox检验确定中位存活期在组之间差异显著，p＝0.0051。
图14示出了按年龄的组织miR-34a表达的散点图。TCGA数据集的分析鉴定了miR-34a表达与患者年龄的之间的关系。
图15示出了组织中具有高表达及低表达miR-34a的患者的存活曲线。TCGA数据集的分析显示了较高的miR-34a表达与较差的预后相关。
图16示出了与性别相关的miR-34a的表达。TCGA数据集的分析显示了在患者的性别与miR-34a的表达之间没有差别。
图17图解了与对照比较，GBM患者的血清中miR-20a的相对表达。GBM患者亚群与年龄和性别匹配的对照比较显示了血清miR-20a表达的上调。某些患者显示了血清miR-20a表达没有上调。相对表达显示为2^-ΔCt。p＝<0.05。
图18图解了与对照比较，miR-20a表达<2倍变化和>2倍变化的GBM患者的总体存活。miR-20a表达低于2倍变化的GBM患者具有4.45个月的中位存活期，然而大于两倍变化的患者具有21.39个月的中位存活期。通过对数秩，Mantel-Cox检验确定总体存活差异显著，p＝0.0001。
图19示出了按年龄的血清中miR-20a表达的倍数变化。通过年龄分组的miR-20a表达分析显示了较年轻的患者具有增加的血清miR-20a表达。观察到了年龄在20-39岁之间的患者与年龄在40-59岁之间的患者之间显著的差异。年龄在20-39岁之间的患者与年龄大于60岁的患者之间也有显著的差异。观察到年龄在40-59岁之间的患者与年龄在60岁以上的患者之间没有显著的差异，p＝0.0002。
图20示出了按年龄的miR-20a的表达。TCGA数据集的分析显示了组织miR-20a表达与年龄成负相关。
图21图解了具有miR-20a的高表达和低表达的患者的总体存活。TCGA数据集分析鉴定了组织中具有较高的miR-20a表达的患者比具有低表达的那些患者具有较好的预后。
图22按性别的miR-20a表达。TCGA数据集分析显示了miR-20a的组织表达在性别之间没有显著差异。
图23图解了与性别匹配的对照比较，男性GBM患者的血清中miR-92a的相对表达。与性别匹配的对照比较男性GBM患者显示了血清miR-92a表达的下调。将相对表达显示为2^-ΔCt。p＝<0.05。
图24图解了与性别匹配的对照比较，具有miR-92a的高表达和低表达的男性GBM患者的Kaplan-Meier图。具有高miR-92a表达的男性GBM患者的中位存活期为8.78个月，具有低miR-92a表达的患者为5.375个月。通过对数秩，Mantel-Cox检验确定总体存活在组之间是显著差异的，p＝0.0025。
图25示出了按年龄的miR-92a的表达。TCGA数据集分析显示了组织miR-92a的表达与年龄呈负相关。
图26示出了高表达和低表达miR-92a的GBM患者的存活曲线。TCGA数据集的分析显示了具有组织miR-92a的较高表达的患者比具有较低表达的那些患者具有较好的预后。
图27图解了按性别的miR-92a的表达。TCGA数据集的分析显示了miR-92a的组织表达在性别之间没有显著差异。
图28示出了miR-20a和92a的表达的相关性。TCGA数据集的分析显示了组织中miR-92a和miR-20a表达之间的高度相关性。
图29图解了从年龄大于60岁的GBM和对照患者获得的血清样品中的miR-34a表达的验证。在验证集中的年龄大于60岁的GBM患者的血清miR-34a与年龄匹配的对照比较没有显示显著增加的表达。
图30图解了从GBM和对照患者获取的血清样品的miR-20a表达的验证。验证集中的miR-20a的表达再次显示了两个群体的GBM患者血清miR-20a表达中有和没有2倍增加。在两组GBM患者之间以及具有大于2倍增加的表达的患者与对照组之间，miR-20a有显著的上调，p＝<0.05。
图31至40图解了从使用来自癌症基因组图谱(TCGA)的样品的神经胶质瘤癌症细胞中的miRNA表达的研究获取的结果。
图31图解了miR-34a存活率，通过cox回归并且还通过中位数上和下的对数秩(见Kaplan meier)，在558位患者中表达与的存活相关。风险比＝1.19(95％CI＝1.09-1.29)，p＝7.9e-05。高表达具有较差的预后。
图32示出了miR-34a的年龄相关性：用皮尔森相关性，表达与年龄直接相关。
R2＝0.23，p＝2.26e-8。
图33示出了性别之间miR-34a的表达没有显著差异。来自肿瘤细胞与正常细胞的miR-34a的比较。在GBM中miR-34a是增加的。对数倍数变化＝1.30，p＝5.3e-4(调整用于多重检验)。
图34示出了关于存活的miR-20a数据。通过cox回归且还通过中位数上和下的对数秩，558位患者中表达与存活相关(参见Kaplan Maier)。风险比＝0.81(95％CI＝0.72-0.92)，p＝0.001。具有高表达的患者具有更好的预后。
图35示出了关于miR-20a表达的年龄相关性。用皮尔森相关性，表达与年龄呈负相关。R2＝-0.15，p＝2.8e-4。
图36示出了在性别之间miR-20a的表达是没有显著差异的。与正常的比较揭示了相对正常，GBM中的miR-20a是增加的。对数倍数变化1.37，p＝6.3e-7(调整用于多重检验)。
图37示出了关于miR-92a表达与存活的数据。用Cox回归(而不通过中位数上和下的对数秩-参见Kaplan Maier)，558位患者中表达与存活相关。风险比＝0.81(95％CI＝0.70-0.96)，p＝0.011。高表达与更好的预后相关。
图38图解了miR-92a的表达在性别之间差异是不显著的。
图39图解了使用皮尔森相关性miR-92a的表达与年龄呈负相关。R2＝-0.15；p＝2.8e-4。
与正常的比较揭示了miR-92a在GBM中与正常比较是增加的。对数倍数变化＝1.21，p＝5.6e-9(调整用于多重检验)。
图40图解了miR-92a和miR-20a之间的关系。这些microRNA标志物彼此是高度关联的(并且这有意义，因为mir-92和mir-20a是从13号染色体上的相同初级转录物表达的)。
图41图解了从关于在血清样品中miR-20a水平的数据获得的结果的分析，指示了在具有<2倍变化的癌症患者与具有>2倍变化的那些患者之间以及具有<2倍变化的癌症患者与对照之间的显著的差异，用bonferroni事后检验(post hoc test)的单因素分析方差(one way ANOVA)。P＝<0.05。
表1概括了与对照比较的来自癌症患者的血清样品中的miRNA水平的变化的结果
Figure BDA0002689749140000271
Figure BDA0002689749140000281
表2概括了关于功效分析的生物标志物验证
Figure BDA0002689749140000282
试验结果
研究1
介绍
微RNA(miRNA)是在基因的转录后调节和蛋白质表达中起作用的小的非编码RNA。miRNA显示疾病特异性的表达，其可被用于提供关于特定的生物学状态诸如神经胶质瘤的信息。可在被释放入循环系统的神经胶质瘤特异性外泌体的分离后测量神经胶质瘤中miRNA表达的变化。
目的：鉴别从循环系统分离用于神经胶质瘤的诊断、预后以及对治疗的响应的预测的一组miRNA。
样品
患者样品：手术后从年龄大于60岁的诊断有胶质母细胞瘤的男性和女性患者获取血清。手术后从经历选择性手术的年龄和性别匹配的患者获取非癌性血清。还获取这些患者使用的药物类型的信息以考虑这些药物可能具有的对miRNA表达的影响。
参照其为包含诸如患者组织中miRNA表达的数据的在线生物信息学资库的癌症基因组图谱(the cancer genome atlas，TCGA)评价来自患有肿瘤诸如胶质母细胞瘤的患者的组织样品中的miRNA水平。
细胞系：在标准条件中作为单层培养IV级神经胶质瘤U87MG和非癌性星形胶质细胞SVGp12细胞系(ECACC)直到80％融合。然后收获细胞并分离miRNA。
方法
使用离心柱方法提取miRNA(图1)。提取之后，用qRT-PCR确定与脑肿瘤相关的82种miRNA的表达。使用学生t检验对男性血清组执行统计分析并认为0.05或更低的p-值是显著的。
血清样品的微RNA提取
在加热块中将每份样品100μl的RNA酶DEPC处理的水加热到95℃。
Trizol LS方案
将750μl Trizol LS(invitrogen)添加到250μl血清并通过上下吹吸使其均质化。
在4℃，12,000xg下将样品离心10分钟以去除高分子量DNA和蛋白。
将样品转移到新管并添加3.5μl cel-miR-39加标(spike in)及在室温下孵育样品五分钟。
添加200μl氯仿并用手剧烈摇动15秒钟并在室温下孵育10分钟。
然后在4℃，12,000xg下离心样品15分钟以分离相，将水相移出并转移到新鲜管中，记录移出的体积。
继续使用miRVana方案
将1.25体积的乙醇添加到样品并将其吸取到mirVana离心柱，每次700μl且在10,000xg下旋转15秒钟。
将500μl洗涤液1添加到过滤器并在10,000xg下离心10秒钟。将500μl洗涤液2/3添加到过滤器并在10,000xg下离心10秒钟。将500μl洗涤液2/3添加到过滤器并在10,000xg下离心10秒钟。
然后在10,000xg下将离心柱离心一分钟以从过滤器除去残留的液体。将过滤器转移到新的管，并将100μl无RNA酶的DEPC处理的水添加到过滤器并在10,000xg下旋转30秒钟。
逆转录
使用qiagen miscript II RT试剂盒执行逆转录。在逆转录反应中使用12.5ng/μl的总RNA。
试剂盒组分在冰上解冻并如下准备并轻轻地混合。
组分 体积
5x miscript HiSpec缓冲液 4μl
10x miscript nucleics混合物 2μl
无RNA酶水 可变的
Miscript逆转录酶混合物 2μl
模板miRNA 可变的
总反应体积 20μl
在37℃下孵育反应60分钟接着是在95℃下5分钟。在逆转录后，在200μl无RNA酶的DEPC处理的水中稀释20μl cDNA。
qPCR反应
将miscript人脑癌miRNA PCR阵列(MIHZ-108Z)用作qPCR反应。用miScript SYBRgreen PCR试剂盒准备qPCR主混合物。
试剂盒组分如下解冻并准备。
2x QuantiTect SYBR Green PCR主混合物 1375μl
10X miScript通用引物 275μl
无RNA酶水 1000μl
模板cDNA 100μl
总体积 2750μl
将25μl主混合物吸取到miscript miRNA阵列。在1000xg下将板离心1分钟。使用ABI 7500qPCR仪使用下面的参数执行qPCR反应40个循环。在qPCR反应后执行解离分析。
时间 温度
15min 95℃
15sec 94℃
30sec 55℃
30sec 70℃
使用SABiosciences miScript miRNA PCR数据分析门户网站执行数据分析。将数据针对cel-miR-39加标标准化。
结果
细胞系：U87MG细胞系的谱分析鉴别了与SVGp12比较表达被下调的26种miRNA(图2A)，和被上调的4种miRNA(图2C)。
血清：与对照比较，七种miRNA表现出男性血清中表达的3-倍增加(图3B)，且四种表现出大于4-倍变化(图3A)。在这七种中，miR-486-5p在男癌性组中被显著地上调(p＝0.01)(图3A(箭头)和B)。在男性和女性血清中最高四种被上调的miRNA的比较显示miR-486-5p和25-3p在两组中均被上调(图3A和C)。
讨论
两种细胞系的miRNA表达显示与从血清分离的循环系统的miRNA没有相似性。在永生化细胞和神经胶质瘤体内表达之间的固有差异可解释miRNA表达的差异。对癌性和非癌性组织谱分析的研究发现了在肿瘤中miRNA表达的总体下调，与在该研究3中获得的U87MG谱中所见类似。
结论和将来的工作
鉴定了神经胶质瘤患者血清中表达变化的一组循环miRNA并将在更大的样品组上对它们检测。总之，使用循环的miRNA生物标志物可以极大地改善神经胶质瘤的诊断以及提供宝贵的诊断信息。除改善神经胶质瘤的临床方面外，这些结果将有助于我们理解miRNA在神经胶质瘤的病理学中的作用。
研究2
该第二研究的目的是鉴定循环系统用作神经胶质瘤的生物标志物的微RNA。
使用苯酚-氯仿提取从胶质母细胞瘤(n＝26)和对照患者(n＝23)的血清分离微RNA。使用qRT-PCR确定微RNA的相对表达。数据用合成加标标准化并用2-ΔΔCt方法分析。用Mann-Whitney t检验确定统计显著性且p-值<0.05被认为是显著的。
鉴定出三种微RNA在胶质母细胞瘤患者的血清中与对照血清比较时被差异性的表达。在确认上面报道的结果中，微RNA-20a在胶质母细胞瘤患者中与对照比较是上调的。此外，通过Kaplan-Meier存活分析显示微RNA-20a具有两倍增加的个体比仅有一倍增加的那些个体具有更好的存活时间。参照癌症基因组图谱(TCGA)评价来自患有癌症诸如胶质母细胞瘤患者的组织样品中的miRNA的水平，且该分析指示，在558份患者组织中，微-RNA-20a的高水平表达还与更好的预后相关。
miRNA20a是特别有前景的预后的生物标志物。癌症患者中miRNA20a的水平与年龄呈负相关，但是使用年龄和性别匹配的多形性胶质母细胞瘤(GBM)患者与对照的分析显示了在GBM患者中表达的>2倍增加与更好的预后相关。在图17和18中图解了这些结果。功效分析显示这指示临床显著的结果(在80％功效)，且这在包括另外28位患者(14位GBM和14位对照)的扩展的患者组中得到确认图30和41。
miRNA92a也是有前景的预后生物标志物。从36位患者的最初研究发现了与男性对照(n＝9)比较来自男性GBM(n＝9)的血清样品中92a增加(图23)并且还发现了在男性中表达越高，预后越好(图24)。功效分析显示了我们需要扩展患者组，所以我们使用另72位患者。来源于胶质母细胞瘤组织样品的TCGA数据库的分析显示了来自558位患者在性别之间的表达水平没有任何差异，但是高表达再一次确实与更好的预后相关(P＝0.001)(图25和26)。
另外的发现是发现当与年龄匹配的对照比较时，在大于60岁的患者的血清中微RNA-34a-5p(Hsa-miR-34a-5p)是统计学上显著地上调的。该发现是出人意料的，因为先前已经报道了微RNA-34a-5p在胶质母细胞瘤组织中是下调的。本研究代表了第一次在胶质母细胞瘤患者的血清中测量到该标志物的丰度。在来自GBM患者的血清样品中miRNA 34a的水平与年龄增长相关。在此提供的结果显示了miRNA34在60+神经胶质瘤患者中是过表达的且表达越高预后越好(图12和13)。相比之下，来源于肿瘤组织样品的数据集显示了神经胶质瘤组织中的miRNA34a的高水平表达与差的预后相关(文件和图14和15)。这些数据指示该miRNA在不同的身体组织间隔中不具有相同的作用。
序列信息
本公开内容提及使用本领域技术人员识别的标准命名的各种miRNA。
为了避免疑问，将在下面罗列本文所提及的各种miRNA序列的细节。
Figure BDA0002689749140000341
Figure BDA0002689749140000351
Figure BDA0002689749140000361

Claims (10)

1.一种预测脑癌患者的临床结果的方法，所述方法包括：
测定来自所述患者的样品中选自由以下组成的组的至少一种miRNA的存在：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p；Hsa-miR-96-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p，
将存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的量与参考值比较；
其中所述样品中至少一种miRNA的量与所述参考值比较的不同指示关于所述患者的脑癌的消极结果。
2.如权利要求1所述的方法，所述方法包括测定来自所述患者的样品中选自由以下组成的组的至少一种miRNA：Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-92a-3p和Hsa-miR-34a-5p,
将存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的量与反映存在于未患癌的对照受试者的相同的至少一种miRNA的水平的参考值比较；
其中所述样品中所述至少一种miRNA的量与所述参考值比较的减少指示关于所述患者的脑癌的消极结果。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述至少一种miRNA包括Hsa-miR-20a-5p，反映未患癌的对照受试者中该miRNA水平的合适的参考值为在未患癌的对照受试者中的该miRNA水平的两倍的值。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p，并且其中存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的量与所述参考值比较的增加指示关于所述患者的脑癌的消极结果。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述样品是组织样品，并且所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328和hsa-miR-9-5p。
6.如权利要求4所述的方法，其中所述样品是血清样品，以及所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p和Hsa-miR-96-5p，并且其中存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的量与所述参考值比较的减少指示关于所述患者的脑癌的消极结果。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326和Hsa-miR-425-5p。
9.一种检测受试者中脑癌的方法，所述方法包括：
测定来自所述受试者的样品以确定存在于所述样品中的选自由以下组成的组的至少一种miRNA的量：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-107；Hsa-miR-125a-5p；Hsa-miR-128；Hsa-miR-130b-3p；Hsa-miR-132-3p；Hsa-miR-138-5p；Hsa-miR-141-3p；Hsa-miR-146a-5p；Hsa-miR-148a-3p；Hsa-miR-16-5p；Hsa-miR-17-5p；Hsa-miR-17-3p；Hsa-miR-182-5p；Hsa-miR-183-5p；Hsa-miR-187-3p；Hsa-miR-18a-5p；Hsa-miR-190a；Hsa-miR-19b-3p；Hsa-miR-200a-3p；Hsa-miR-203a；Hsa-miR-20a-5p；Hsa-miR-31-5p；Hsa-miR-326；Hsa-miR-425-5p；Hsa-miR-7-5p；Hsa-miR-93-5p；Hsa-miR-96-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p，
将存在于所述样品的所述至少一种miRNA的量与参考值比较；
其中所述样品中的至少一种miRNA的量与所述参考值比较的不同指示所述受试者患有脑癌。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述至少一种miRNA选自由以下组成的组：hsa-miR-101-3p；hsa-miR-29b-3p；hsa-miR-328；hsa-miR-9-5p；Hsa-let-7b-5p；Hsa-miR-106b-5p；Hsa-miR-191-5p；Hsa-miR-24-3p；Hsa-miR-25-3p；Hsa-miR-320a；Hsa-miR-486-5p；Hsa-miR-451a；Hsa-miR-34a-5p和Hsa-miR-92a-3p，并且其中存在于所述样品中的所述至少一种miRNA的量与所述参考值比较的增加指示癌症的存在。
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