CN112313727A

CN112313727A - 用于药物溶解度体外试验的缓冲溶液的制备方法、用于制备缓冲溶液的包装以及用于临床状态试验的试剂盒

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Publication number: CN112313727A
Application number: CN201980039926.2A
Authority: CN
Inventors: 马修·路易斯·斯蒂文·利; 瓦斯科·拉斐尔·费尔南德斯·多斯·桑托斯; 达利·路易斯·范·利; 埃弗莱斯·苔丝·麦卡洛; 斯蒂文·利
Original assignee: Ruile Wente Biology Co ltd
Current assignee: Ruile Wente Biology Co ltd
Priority date: 2018-06-12
Filing date: 2019-06-12
Publication date: 2021-02-02
Anticipated expiration: 2039-06-12
Also published as: CN112313727B; JP7541927B2; BR112020025262A2; GB201809627D0; US20210255073A1; EP3807863A1; WO2019239133A1; JP2021527216A

Abstract

一种缓冲溶液的制备方法，所述缓冲溶液适用于生理相关的体外药物溶出度试验、药物溶解度试验和或药物特征分析，该制备方法包括(a)将预定量的缓冲液浓缩液从可变形容器分配到第二容器中，所述可变形容器具有节流口或孔，构造为以逐滴方式和/或受控流的方式分配浓缩液，并且(b)用预定量的溶剂稀释预定量的浓缩液以生成缓冲液。本发明还提供了一种包括容器和容器内缓冲液浓缩液的包装以及所述包装的制备方法。

Description

用于药物溶解度体外试验的缓冲溶液的制备方法、用于制备缓冲溶液的包装以及用于临床状态试验的试剂盒

技术领域

本发明属于缓冲液领域，适用于生理相关的体外药物溶出度试验、药物溶解度试验和/或药物特征分析。更具体地，本发明涉及一种用于制备适于生理相关的体外药物溶出试验、药物溶解度试验和/或药物特征分析的缓冲溶液的方法；一种包装，包括容器和容器内所述缓冲溶液的浓缩液；以及一种试剂盒，包括所述包装以及在这种试验和分析中有用的其他组件。

背景技术

标准缓冲液，例如美国药典(USP)中所述的缓冲液，广泛应用于剂型的制备和分析程序，如体外药物溶出度试验、药物溶解度试验和/或药物特征分析。缓冲液为化学定义的，涵盖广泛的pH范围(通常在pH 1.2～10)，并具有已知的离子强度和缓冲容量。本发明特别涉及提供侧重于生理相关溶出介质和溶解度研究的缓冲液，其反映了在禁食和进食条件下胃肠(GI)区域的pH水平。因此，本文中使用的术语“生理相关”是指pH 1.2～8.5，跨越禁食和进食状态下pH的两个极端；在GI域内同一区域内不同位置的主体间和主体内的变化。

依据所需的目标pH和要试验的活性药物化合物(API)的理化性质以及试验目的选择合适的缓冲液组合物，包括例如评估生理相关溶出介质在不同pH下的溶解度和溶出度，在恒定pH下由于缓冲液的组成和浓度影响的生理相关的溶出介质的结垢(相对)溶出率、重量渗透克分子浓度和离子浓度(强度)。缓冲容量与缓冲液的组成和浓度有关。浓度越大，药物在介质中的溶出对pH值变化的抵抗力就越大。即使溶出介质的pH值恒定，溶出率通常也取决于缓冲液浓度。当介质中还存在生物表面活性剂时，选择合适的缓冲液组合物用于(制备)在生理相关pH范围内的溶出介质非常重要。

标准缓冲液广泛应用于体外药物溶出度试验、药物溶解度试验和/或药物特征分析。它们要么是从头开始制成，要么更常见的是作为浓缩液(例如×10)或干粉购买，然后在给定的pH 1.2～10(USP)下稀释至精确的固定体积(例如1.0L、200mL和100mL)。

pH为1.2～8.5的药物溶出度和溶出速率的试验需要在溶出容器(USP 2方法)中，在不同的pH和相同的pH下大量等分试样(部分)新制备的溶出介质。所需和准备的介质总量取决于每次试验的重复次数(n)、取样间隔和所进行的试验。例如，为了检查禁食状态下的药物溶出度(释放度)和/或食物效应，在例如6小时的一段时间内，可从含有900mL例如禁食状态模拟肠液(FaSSIF)和进食状态模拟肠液(FeSSIF)溶出介质的溶解容器中提取达10个样品。如果在每个溶出介质中的试验需要至少n＝3次，则所需重复(replicates)的量为18，介质的量为16.2L(18×900mL)。对于两种介质(FaSSIF和FeSSIF)，量加倍至32.4L(36×900mL)。在禁食和进食状态的胃介质(例如，FaSSGIF和FeSSGIF)中进行其他试验要求在每个溶解容器中加入500mL的溶出介质，这意味着在给定的pH下，需要18L(36x 500mL)的缓冲溶液。因此，根据需要从浓缩液中新鲜配制相同和/或不同pH的缓冲溶液，以节省时间和精力是有意义的。

缓冲溶液的浓缩液是已知的且商业上可获得的，然后被稀释以提供所需的缓冲溶液。通常，在具有用于倾倒的颈口或口的容器中提供这些浓缩液。然而，在倾倒浓缩液的过程中会发生湍流，这使得很难以准确、精确和快速且无溢出的方式重复测量出多个更小的浓缩液部分。因此，在试图开发这些浓缩液时，现有技术中的大部分重点在于促进倾倒，尤其是使倾倒过程中发生的湍流最小化。已采用的另一种策略是将浓缩液放入安瓿、囊和袋中。虽然这解决了与倾倒相关的再现性、准确性和精确性的问题，但它不能灵活地分配不同量的浓缩液。

具有测量或计量分配装置的瓶子和其他容器是已知的。例如，US 2016/0017405A1涉及的是用于快速核酸杂交的组合物，其可包装在包含测量瓶盖的瓶子中。WO 2015/124844 A1公开了一种具有定量喷嘴的用于包装和分配产品的装置。WO 2008/068775 A2描述了一种计量滴瓶，用于分配微升量液滴形式的液体；WO 2004/013009 A1涉及一种滴管瓶及其配件，用于滴加眼药水。WO 2018/218341 A1描述了移液管在制备工作浓度的红血球裂解缓冲液中的用途。然而，这些都没有教导或建议分配多种以及精确量的浓缩液用于体外药物溶出度、药物溶解度和/或药物特征分析研究的好处。

因此，仍然需要新的方法来制备适用于体外药物溶出度试验、药物溶解度试验和/或从浓缩液中提取药物特征的缓冲液，尤其是实用、灵活、使用者友好的方法，具有准确度和精确度，且无泄漏。

本发明涉及具有特定稀释因子的浓缩液，其集中在制备pH1.2～8.5的缓冲溶液以及相关的缓冲容量，以便进行生理相关的体外药物溶出试验、药物溶解度试验和/或药物特征分析，其中生物表面活性剂也被添加到溶出介质中。应理解，“生理相关”涉及1.2～8.5的pH值，其中(生物相关)溶出介质进一步包含生物相关表面活性剂，例如胆盐、磷脂和消化的脂肪成分。在溶出介质中表面活性剂对缓冲容量、重量渗透克分子浓度和离子浓度的影响是进一步考虑的因素。

因此，本发明旨在提供一种改进的方法，通过稀释获得pH 1.2～8.5的新鲜缓冲液；以及靶向重量渗透克分子浓度、缓冲容量和离子浓度，用于体外生理相关的溶出度试验、溶解度试验和药物特征分析。该方法提供了节省人力和时间的溶出介质，并允许重复、准确和精确地分配可变量或恒定量的未稀释浓缩液，且不会溢出。

发明内容

本发明提供了一种通过稀释浓缩液制备缓冲剂的实用方法，所述方法针对哺乳动物物种中生理相关的pH范围(广义为pH 1.2～8.5)，适用于生理相关的体外药物溶出度试验、药物溶解度试验和/或药物pH分析，符合本申请P13/14中通常描述的理化参数。本发明可以准确地和精确地称重或以其他方式可重复地测量出所需量的浓缩液组合物(也称为可稀释的等分试样)，且无溢出。具体而言，从具有节流口或孔的可变形容器逐滴或在受控流中分配浓缩液，所述可变形容器被构造成以逐滴或在受控流的方式分配浓缩液。通过从这样的容器中分配浓缩液，可以准确地和精确地重复提供多份(或小份)浓缩液，且不会溢出。

因此，本发明提供了一种缓冲溶液的制备方法，所述缓冲溶液适用于生理相关的体外药物溶出度的试验、药物溶解度的试验和/或药物特征分析，所述方法包括：

(a)将预定量的缓冲溶液浓缩液从可变形容器分配到第二容器中，所述可变形容器具有节流口或孔，构造为以逐滴方式和/或受控流的方式分配浓缩液，并且

(b)用预定量的溶剂稀释预定量的浓缩液以产生缓冲溶液。

本发明还提供了一种适用于生理相关的体外药物溶出度的试验、药物溶解度的试验和/或药物特征分析的缓冲溶液制备的包装，所述包装包括：

(a)一种可变形容器，包括节流口或孔，构造为以滴状方式和/或受控流的方式分配容器中的内容物；和

(b)一种可变形容器内缓冲溶液的浓缩液。

本发明还提供一种制备所述包装的方法，所述方法包括提供所述可变形容器并将所述浓缩液放置于所述可变形容器中。

本发明还提供了一种适用于体外试验生理相关、生理和/或临床结果的试剂盒，包括：

(a)一种上述的包装；以及

(b)一种生物表面活性剂。

据申请人所知，所定义的浓缩液，例如浓缩3～40倍，还含有渗透剂，以及适合制备pH 1.2至pH 8.5范围内生理相关溶出介质的包装、目标缓冲容量、重量渗透克分子浓度、离子浓度的准确度和精密度在以前还没有被描述过。

附图说明

现在将仅通过参考附图的示例来描述本发明，其中：

图1显示了可变形容器可以包括的有棱纹的旋转开闭式盖的喷嘴的示例。

图2显示了可变形容器可以包括的蟹爪密封垫的聚丙烯圆盘顶盖的示例。

图3显示了可变形容器可以包括的带有孔密封喷嘴的天然有棱纹的推拉盖的示例。

图4显示了可变形容器可以包括的光滑的聚丙烯翻盖式开闭式盖，可变形容器可能包括带膨胀聚乙烯衬里。

图5显示了可变形容器可以包括的光滑的聚丙烯翻转顶盖和蟹爪密封垫喷嘴的示例。

具体实施方式

本发明涉及制备适用于pH 1.2～8.5、优选pH 1.2～7.5、更优选pH 1.6～6.8的生理相关的体外药物溶出度的试验、药物溶解度的试验和/或药物特征分析的缓冲溶液的制备方法。药物溶出度试验和药物溶解度试验通常指试验药物化合物的溶出性和/或溶解度。药物特征分析通常是指评价药物的物理化学性质，如溶解度和pH敏感性，药物在Caco-2细胞系中的渗透性，以及药物的生物药学特性。

为清楚起见，本申请中与生理相关的溶出介质包括生物表面活性剂，例如在禁食状态介质(例如，FaSSIF)的情况下的胆汁盐和卵磷脂，以及在进食状态介质(例如FeSSIF)的情况下额外消化的脂肪组分，其中基于缓冲液的组成，以及适当的缓冲容量、重量渗透克分子浓度和离子浓度，介质在pH 1.2～8.5之间缓冲。相比之下，用于溶出度试验的标准USPSIF缓冲液不含渗透剂，通常添加盐。

因此，生理上相关的溶出介质是一种可用于在恒定pH下提供关于药物化合物和药物产品的溶出度和速率、溶解度和其他特性的有用信息的(缓冲)溶液。例如，缓冲溶液可用于获得生理相关(生物相关)介质，例如，模拟体内条件的FaSSIF和FeSSIF介质，例如在禁食和进食状态下的肠道，以及模拟胃和结肠中液体的溶出介质，这种溶出度试验有助于预测药物产品的体内溶出度和溶解度。

通常，缓冲溶液或生理相关溶出介质是模拟的禁食状态或进食状态的肠、胃或结肠液。此类溶液的优选实例包括禁食状态模拟肠液(FaSSIF)、进食状态模拟肠液(FeSSIF)、禁食状态模拟胃液(FaSSGF)、进食状态模拟胃液(FeSSGF)、禁食状态模拟结肠液(FaSSCOF)和进食状态模拟结肠液(FeSSCOF)。此外，这些溶液可以特定地模拟人或狗的体内环境。优选地，用缓冲溶液模拟人的体内环境。

缓冲溶液也可以是根据生物制药分类系统(BCS)对活性药物(API)进行分析和命名的溶液。

在本发明所述的方法、包装和试剂盒中，未稀释的组合物是缓冲溶液的一种浓缩液。因此，所述浓缩液是一种能够以一定重量(例如100mg)逐滴分配的组合物，基于所述缓冲液组分的组成，所述组合物适当地稀释形成目标pH值(1.2～8.5)的所需缓冲溶液。但是，浓缩液和组分的量(wt.％)决定了缓冲溶液(稀释后)的缓冲容量(例如，5～50)、重量渗透克分子浓度(例如，禁食状态下为25～300mOsm/kg，进食状态下为150～700mOsm/kg)及其溶出介质(添加生物表面活性剂后)，以及适当的目标缓冲容量、重量渗透克分子浓度和离子浓度。所提出的目标参数适用于目标pH下的生理相关的体外药物溶出度试验、药物溶解度试验和/或药物特征分析。

所述浓缩液可包含pH1.2～8.5的所需最终缓冲溶液所需的所有组分(即，只需添加溶剂，例如水，即可获得缓冲溶液)。用溶剂稀释后，可适应性地使用HCl或NaOH调整所得缓冲溶液的pH，以精确地获得所需的pH值。重量渗透克分子浓度也可以通过添加本文中公开的作为缓冲溶液和/或浓缩液的合适组分的任何盐或糖来调整。优选地，所有组分均包含在浓缩液中，但也可添加到所构成的缓冲溶液和/或溶出介质中，以便在目标pH下提供/调节溶出介质的缓冲容量、重量渗透克分子浓度和离子浓度。

所述可变形容器为当对容器的外表面施加压力时可能变形的容器。这种变形将减小可变形容器的内部体积，并增加可变形容器中的内部压力。这会导致容器中的内容物通过节流口或孔排出或流出。所述变形可以是塑性变形，也可以是弹性变形。优选地，所述变形为弹性变形，即可变形容器为弹性可变形容器，因为其允许可变形容器被重复使用。

所述可变形容器被构造成以逐滴方式分配浓缩液。因此，当向可变形容器的外表面施加小幅度的增加压力时(例如通过挤压容器)，浓缩液被逐滴分配。这种逐滴分配通常是通过节流口或孔(节流口或孔的最大尺寸为0.5mm～2mm)并结合用小幅度施加增压来实现的。所述节流口或孔的最长尺寸通常是指节流口或孔的开口的最长尺寸。

所述节流口或孔的纵横比通常为1～5。优选地，纵横比为1～2，更优选为1～1.5。在特别优选的实施例中，节流口或孔具有基本上圆形的开口，即纵横比为1或约为1。

如果向可变形容器的外表面施加更大的压力，则浓缩液可连续排出。这样做的优点是在不会因湍流而溢出或浪费的情况下，浓缩液可以快速分配。

对于技术人员来说，为了以逐滴或连续流方式分配浓缩液，需要施加多少外部压力是显而易见的。因此，通过使用不同大小的压力，可以控制浓缩液的分配速率。因此，可以在两阶段过程中从可变形容器分配浓缩液。首先，施加较大的压力以快速分配所需量的大部分浓缩液。接下来，施加较小的压力，以便以逐滴方式准确地分配最终量的浓缩液。以此方式，可以以高精度快速分配一定量的浓缩液。

所述可变形容器可包括喷嘴。使用喷嘴通常是有利的，因为如果所述浓缩液连续流出，则其允许浓缩液以牛顿流的方式而不是湍流的方式流出。如果存在喷嘴，所述喷嘴中存在节流口或孔。所述喷嘴可能有盖子和/或密封垫以便关闭喷嘴并防止浓缩液从可变形容器中溢出。使用喷嘴通常可以使浓缩液更精确地和可靠地分配。

所述喷嘴优选地构造成分配质量为0.02g～0.25g和/或体积为0.02mL～0.25mL的液滴，更优选为0.02g～0.15g和/或体积为0.02mL～0.15mL的液滴。技术人员将知晓，浓缩液的质量和体积之间的关系会取决于浓度、压力和温度。

优选地，所述喷嘴被构造成分配具有高度一致的质量和/或体积的液滴。下面的实施例1证实了这一点。因此，可以从喷嘴分配数滴(例如10滴)。可以测量每滴液滴的质量或体积。因此，可以计算液滴的平均质量或体积。优选地，液滴质量与平均液滴质量的偏差通常小于0.015g(其中精确度是在室温(18～25℃)下10滴液滴样品质量与平均液滴质量的偏差)。更优选地，所述液滴质量与平均液滴质量的偏差小于0.010g。

所述喷嘴可以是适用于可靠和准确地分配液滴的任何类型的喷嘴。此类喷嘴类型为本领域技术人员熟知。适用于本发明的喷嘴类型的示例包括以下(i)～(v)：

(i)一种带孔密封的有棱纹的旋开式封闭盖的喷嘴，即所述喷嘴具有棱纹，孔中有密封垫，所述密封垫可通过旋转喷嘴盖来打开和关闭。

(ii)带有蟹爪密封垫的圆盘顶盖，优选带有蟹爪密封垫的聚丙烯圆盘顶盖，即具有盘状顶盖(优选由聚丙烯制成)的喷嘴和蟹爪密封垫。

(iii)带孔密封的有棱纹的推拉盖，即所述喷嘴具有棱纹，孔内有密封垫，所述密封垫可通过推拉喷嘴盖来打开和关闭。

(iv)光滑的、优选聚丙烯的、带膨胀的翻盖式开关盖，优选带聚乙烯衬里，即具有光滑的和通过翻转装置打开和关闭盖子的喷嘴，并且优选由聚丙烯制成，其具有优选由聚乙烯制成的膨胀衬里。

(v)光滑的聚丙烯翻转顶盖和蟹爪密封垫，优选为光滑的聚丙烯翻转顶盖和蟹爪密封垫，即具有光滑的和通过翻转机构打开和关闭盖子的喷嘴，并且具有蟹爪密封垫。

非常优选地，所述喷嘴是带孔密封垫的有棱纹的旋转开闭式盖的喷嘴或带孔密封垫的有棱纹的推拉盖，如实施例1所示减小分配的液滴之间的差异性。虽然上述喷嘴被描述为具有平滑或有棱纹的部分，但是技术人员应意识到这些部分不会影响喷嘴的功能，并且任何光滑或有棱纹的部分可以被具有不同纹理的部分代替。

所述可变形容器通常包括塑料材料。例如，可变形容器可由塑料材料制成，即基本上由塑料材料组成或由塑料材料组成。可变形容器上的喷嘴还可以包括基本上由塑料材料组成或由塑料材料组成。当存在喷嘴时，其可包括与可变形容器不同的塑料材料。

所述塑料材料通常选自高密度聚乙烯(HDPE)、低密度聚乙烯(LDPE)、聚丙烯(PP)、聚丙烯共聚物(PPCO)、聚甲基戊烯(PMP)、氟化高密度聚乙烯(FLPE)、氟化乙烯丙烯(FEP)、全氟烷氧基(PFA)、乙烯-四氟乙烯(ETFE)及其组合。

所述可变形容器可包括刻度，其有助于确定容器中剩余的浓缩液量和确定分配了的浓缩液量。刻度可以在可变形容器本身上，例如容器上的刻度或标记。或者，刻度可以在另一种材料上并贴在容器上(例如，在标签上)。

所述可变形容器的大小没有特别的限制。可变形容器的内部体积(即，可容纳在可变形容器内的最大浓缩液体积)通常小于2.0L。优选地，内部体积为5mL～1.5L，更优选为10mL～1.2L，进一步优选为50mL～1.0L。1.0L以下的尺寸更适合于包装或在套件中。

优选地，所述容器可以用一只手握住或使用，优选地，用于逐滴或在受控流中分配。

所述缓冲溶液通常是水溶液。所述缓冲溶液通常是通过将浓缩液稀释于水中制成的，优选为蒸馏水、去离子水、纯净水或其组合。优选为除氧水。

对于技术人员来说，所分配的浓缩液量显然取决于所需的缓冲溶液体积和浓缩系数(即浓缩液与所需缓冲液的浓度相比高出多少倍)。技术人员将能够很容易地计算所需的浓缩液量(质量或体积)和任何所需缓冲溶液的稀释倍数。因此，技术人员将能够容易地计算出分配到所述第二容器中的所需浓缩液的预定量。类似地，本领域技术人员将能够容易地计算所需的以用于稀释浓缩液以产生缓冲溶液的溶剂的预定量。

所述容器内的组分用于针对生理相关溶出介质的特定pH值，在禁食和进食状态胃肠液中发现的生物相关pH范围为1.2～8.5。药物的溶出曲线，例如，带电的1类和3类化合物(BCS分类)必须在所述pH范围内进行试验，以了解在相同的恒定pH值下对缓冲液浓度(缓冲容量)、电解质含量(离子浓度)和重量克分子渗透浓度的相关影响，选择最合适的pH和pH组分，进而检查相同和不同pH条件下的溶出和溶解速率。

缓冲液总浓度和缓冲容量是影响相对溶出速率的参数。

所述分配的浓缩液的量或体积通常小于1.0kg和/或小于1.0L。优选地，所述分配浓缩液的量或体积为5g～250g，和/或5mL～250mL。

所述浓缩液最好尽可能浓缩，以便制备所需缓冲液时所需的浓缩液的质量或体积最小。最大浓度将由浓缩液中各组分的溶解度确定。所述浓缩液的浓度通常是缓冲液的2～100倍。优选地，浓缩液的浓度为3～50倍，更优选为10～50倍，进一步优选为20～40倍，仍进一步优选为25～35倍。所述浓缩液中使用的溶剂通常为水，优选为蒸馏水、去离子水、纯净水或其组合。最好为除氧水。

用本发明方法制备的缓冲液(即“等分试样”)的量通常为10mL～30L，优选为500mL～10L，更优选为100mL～1L。用于溶出度试验的每个容器的体积/量为300mL～1L。通常为500～900mL，重复n＝3到n＝12。

所述缓冲液的pH值通常为1.2～8.5。pH值是溶出度试验中的一个重要参数，因为介质的pH值影响药物的溶解和溶出速率，特别是对于生物药剂分类系统(BCS)1类和3类的电离化合物。因此，需要缓冲液来控制介质的pH值。如果没有pH稳定性，结果的可靠性和再现性就会受到影响，尤其是对于带电、酸性和碱性化合物。缓冲容量提供了对影响药物相对溶出速率的pH值变化的抵抗力。

本发明中用于制备生理相关溶出介质以及目标重量克分子渗透浓度、缓冲容量和离子浓度的优选缓冲剂选自例如醋酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐缓冲液浓缩液及其组合。

所述缓冲液的pH为1.0～9.0，优选为1.2～8.5。

所得缓冲液的缓冲容量通常为0mM/L/pH～100mM/L/pH，优选为1mM/L/pH～50mM/L/pH，更优选为2mM/L/pH～20mM/L/pH。

所得缓冲液的重量克分子渗透浓度通常为25mOsm/kg～700mOsm/kg，优选为100mOsm/kg～400mOsm/kg。

所得缓冲液的表面张力通常为低于100mN/m，优选为30mN/m～90mN/m。

所述缓冲液的特性根据缓冲液的用途而定，例如，评估胃肠道内食物的效应和的位置，优选的稀释缓冲液包括：

(a)pH为1.2～6.0，缓冲容量高达10mM，重量克分子渗透浓度为25～140mOsm/kg；

(b)pH为2.2～7.0，缓冲容量为10～80mM，重量克分子渗透浓度为50～700mOsm/kg，通常pH为3.0～6.5，重量克分子渗透浓度为75～650mOsm/kg；

(c)pH为3.0～8.5，缓冲容量为5～25mM，重量克分子渗透浓度为50～400mOsm/kg，通常pH为4.5～8.0。

下面的示例中提供了可以使用本发明的方法制备的优选缓冲液的典型实施例。

除非另有规定，否则本申请中描述的体积是指在25℃下测量的体积。

所述浓缩液和相应的缓冲液通常包括一种或多种重量克分子渗透浓度调节剂。所述浓缩液和相应的缓冲液通常包括一种或多种无机缓冲剂。所述浓缩液和相应的缓冲液通常包括一种或多种有机缓冲剂。优选地，所述浓缩液和相应的缓冲液包括一种或多种重量克分子渗透浓度调节剂、一种或多种无机缓冲剂或一种或多种有机缓冲剂。

所述浓缩液和相应的缓冲液优选地包括一种或多种重量克分子渗透浓度调节剂，所述重量克分子渗透浓度调节剂选自氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、氯化铝、单糖(例如葡萄糖或果糖)、二糖(例如蔗糖或乳糖)、多元醇(例如甘油)和碳水化合物(例如麦芽糊精)。

所述浓缩液和相应的缓冲液优选包含选自以下的无水和/或水合物形式的一种或多种缓冲剂：

磷酸二氢钠；

磷酸氢二钠；

磷酸二氢钾；

磷酸氢二钾；

咪唑；

碳酸钠；

碳酸氢钠；

二甲胂酸钠；

巴比妥钠；

盐酸；

氢氧化钠；

氢氧化钾；

醋酸；

柠檬酸三钠；

三水合醋酸钠；

苹果酸；

琥珀酸；

柠檬酸三钾；

马来酸；

柠檬酸；

甲酸；

乳酸；

丙酸；

2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)；

Bis-tris甲烷(Bis-Tris)；

2-[(2-氨基-2-氧代乙基)-(羧甲基)氨基]醋酸(ADA)；

N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸(ACES)；

Bis-tris丙烷1,3-双(三羟甲基)甲氨基)丙烷；

哌嗪-N，N'-双(2-乙磺酸)(PIPES)；

2-(氨基甲酰甲基氨基)乙磺酸(ACES)；

2-羟基-3-吗啉丙磺酸(MOPSO)；

氯化胆氨氯化胆氨盐酸盐；

3-吗啉丙烷-1-磺酸(MOPS)；

N N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)；

2-[[1,3-二羟基-2-(羟甲基)丙-2-基]氨基]乙磺酸(TES)；

2-[4-(2-羟乙基)1-哌嗪基]乙磺酸(HEPES)；

[3-双(2-羟乙基)氨基-2-羟丙烷-1-磺酸](DIPSO)；

[3-双(2-羟乙基)氨基-2-羟基丙烷-1-磺酸]MOBS；

甘氨酰胺；

3-[[1,3-二羟基-2-(羟甲基)丙烷-2-基]氨基]-2-羟基丙烷-1-磺酸(TAPSO)；

2,2',2″-三硝基(乙-1-醇)(TEA)；

哌嗪-N,N'-双(2-羟基丙磺酸)(POPSO)；

4-(2-羟乙基)哌嗪-1-(2-羟丙磺酸)(HEPPSO)；

4-(2-羟乙基)-1-哌嗪丙磺酸(HEPPS)；

N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)；

三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)；

甘氨酰胺；

甘氨酸；

甘氨酰甘氨酸；

组氨酸；

N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-(4-丁磺酸)(HEPBS)；

2-(双(2-羟乙基)氨基)醋酸(Bicine)；

[三(羟甲基)甲基氨基]丙磺酸(TAPS)；

2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMPB)；

2-(环己基氨基)乙磺酸(CHES)；

β-氨基异丁醇(AMP)；

N-(1,1-二甲基-2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸(AMPSO)；

3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸，CAPSO游离酸(CAPSO)；

3-(环己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)；和

4-(环己基氨基)-1-丁磺酸(CABS)。

可以在稀释后通过添加一种或多种重量克分子渗透浓度调节剂，优选如上所述的重量克分子渗透浓度调节剂，来调节缓冲液的重量克分子渗透浓度。

FaSSIF缓冲液的浓缩液通常包括：

含量不超过6M的盐，通常为共轭酸或碱，优选为3M；和

含量不超过4M的酸或碱，优选为0.8M。

所述浓缩液相应稀释制备的FaSSIF缓冲液通常包括：

25～200mM盐，包含80～120mM NaCl和25～30mM NaH₂PO₄，优选为约106mM NaCl和约28.4mM NaH₂PO₄；和

1～50mM的酸。

稀释的FeSSIF缓冲液浓缩液通常包括：

50～300mM盐，包含180～220mM NaCl，优选约203mM NaCl；和

10～200mM酸，优选包含约144mM醋酸。

本发明还提供了一种适用于制备本文所定义的缓冲液的包装，所述缓冲液适用于生理相关的体外药物溶出度试验、药物溶解度试验和/或药物特征分析。包装包括(a)一种可变形容器，包括节流口或孔，构造为以逐滴方式和/或本文定义的受控流的方式分配容器中的内容物；和(b)如本文所定义的一种可变形容器内缓冲液的浓缩液。所述包装可构成适合在体外测试生物相关、生理和/或临床结果的试剂盒的一部分。所述试剂盒可包括所述测试中其他有用的组分，例如生物表面活性剂，优选为胆盐和/或磷脂和/或脂肪酸及其盐和/或脂分解产物。

下面列出的示例说明本发明，然而，本发明不限于此。

实施例

实施例1-喷嘴试验

测试了液滴大小的一致性。喷嘴如图1至图5所示。对于每个喷嘴，在室温下分配10滴浓缩液(例如，实施例3的FaSSIF浓缩液)，并计算每滴的质量。由此确定每种喷嘴类型的平均值和标准偏差。期望标准偏差尽可能低，因为这表明液滴大小是高度一致的。结果见下表1和表3～6。表2提供了使用有棱纹的旋转开闭式盖的喷嘴称量所需的浓缩液的目标量，使得浓缩液稀释后获得目标体积缓冲液的结果，并显示了该方法的再现性。

下面的数据表明，加劲旋转开/闭盖的喷嘴和带孔密封的天然棱纹的推拉盖分配质量高度一致的液滴。

表1有棱纹的旋转开闭式盖的喷嘴

液滴	质量(g)(室温)
		1	0.067
2	0.065
		3	0.068
4	0.059
		5	0.060
6	0.067
		7	0.065
8	0.073
		9	0.066
10	0.070
		范围	0.059～0.073
平均值	0.066
		标准差	0.0040

表2使用有棱纹的旋转开闭式盖的喷嘴称量浓缩液的比重并稀释

表3具有蟹爪密封垫的天然光滑聚丙烯(PP)圆盘顶盖

液滴	平均值(g)(室温)
		1	0.066
2	0.030
		3	0.221
4	0.068
		5	0.074
6	0.076
		7	0.090
8	0.077
		9	0.055
10	0.086
		范围	0.030～0.221
平均值	0.0843
		标准差	0.0483

表4带孔密封的有棱纹的推拉盖

表5带可发性聚乙烯(EPE)衬里的光滑PP翻盖开/关盖

表6具有蟹爪密封垫的光滑聚丙烯(PP)翻转顶盖

液滴	平均值(g)(室温)
		1	0.093
2	0.168
		3	0.086
4	0.089
		5	0.112
6	0.086
		7	0.098
8	0.100
		9	0.100
10	0.095
		范围	0.086～0.168
平均值	0.1027
		标准差	0.023

实施例2和3显示出可根据本发明方法制备的示例性缓冲液。

实施例2缓冲液的制备方法

在不锈钢容器中制备体积5.0L以上(例如100L)的缓冲液浓缩液。精确称量所选组分，并在纯净水或类似物(例如脱盐水、去离子水或蒸馏水)中使用搅拌器溶解。

对各组分进行了定量和定性分析，包括pH值和比重。

将100份1.0L浓缩液装入到1L内部容积可变形容器中并堵塞，优选用孔密封喷嘴。

缓冲液浓缩液可通过受控流中的喷嘴更快地挤出，并由容器外部(如有)的刻度进行引导。将溶液滴加到目标量的末尾。在0.02g～0.25g之间的量以极其高精确度地逐滴控制(例如使用实施例1中的喷嘴)。可变形容器的内容物以多个等分试样或单个量分配，并且使用可变形容器称量和精确分配浓缩液。考虑到容器中缓冲液浓缩液的比重(SG)，在25℃下分配的浓缩液的优选范围为5mL～250mL或与之相当的质量。

将纯净水或类似物添加到精确称重或测量的等分试样中，并根据稀释系数，获得目标pH和缓冲容量下的所需缓冲液。

缓冲容量可根据所需体积称量的等分试样总量增加或减少。重量克分子渗透浓度可以通过包括从组分列表中选择的盐或糖来调整。优选地，包括一种或多种盐。

根据实施例3和4的进一步实施例，为了制备用于制备禁食和进食的胃介质和针对胃肠中不同区域(例如结肠液)的介质的专用缓冲液，可通过从上述披露中选择合适的组分获得。

实施例3-快速状态模拟肠液(FaSSIF)缓冲液

表7 FaSSIF缓冲液浓缩液的组分

浓缩液的比重为1.202。

将FaSSIF缓冲液浓缩液稀释31倍。3.23mL(相当于3.88g)的FaSSIF缓冲液含有1.108g非水组分。

表8 FaSSIF缓冲液的组分

实施例4-进食状态模拟肠液(FeSSIF)缓冲液

表9 FeSSIF缓冲液浓缩液的组分

浓缩液的比重为1.158。

将FaSSIF缓冲液浓缩液稀释15倍。6.67mL(相当于7.72g)的FeSSIF缓冲液含有2.454g非水组分。

表10 FeSSIF缓冲液的组分

实施例5-禁食状态模拟胃液(FaSSGF)

根据本发明的方法，可以将FaSSGF浓缩液稀释30倍，以获得pH为1.6±0.1；缓冲容量：未缓冲；重量克分子渗透浓度120mOsm/kg的FaSSGF缓冲液。

实施例6-禁食状态模拟肠液V2(FaSSIF-V2)

根据本发明的方法，可将FaSSIF-V2浓缩液稀释3倍，以获得pH为6.5±0.1；缓冲容量为10mM/L/ΔpH；重量克分子渗透浓度为180mOsm/kg的FaSSIF V2缓冲液。

实施例7-进食状态模拟肠液V2(FeSSIF-V2)

根据本发明的方法，可将FeSSIF-V2(马来酸盐)浓缩液稀释3倍，以获得pH为5.8±0.1；缓冲容量为25mM/L/ΔpH；重量克分子渗透浓度为390mOsm/kg的FeSSIF V2缓冲液。

实施例8-禁食状态模拟结肠液(FaSSCOF)

根据本发明的方法，可将FaSSCOF浓缩液稀释20倍，以获得pH值为7.8±0.1；缓冲容量为16mM/L/ΔpH；重量克分子渗透浓度196mOsm/kg的FaSSCOF缓冲液。

实施例9-进食状态模拟结肠液(FeSSCOF)

根据本发明的方法，可将FeSSCOF浓缩液稀释20倍，以获得pH值为6.0±0.1；缓冲容量为15mM/L/ΔpH；重量克分子渗透浓度207mOsm/kg的FeSSCOF溶液。

实施例10-狗禁食状态模拟肠液(FaSSIF)

根据本发明的方法，可将狗FaSSIF浓缩液稀释30倍，以获得pH值为7.5±0.1；缓冲容量为13.8mM/L/ΔpH；重量克分子渗透浓度为181.6mOsm/kg的狗FaSSIF缓冲液。

实施例11-FaSSIF溶出介质的制备

在表8(实施例3)的组分中，加入0.224g的FaSSIF/FeSSIF/FaSSGF粉末以获得溶出介质。

实施例12-FeSSIF溶出介质的制备

在表9(实施例4)的组分中，加入1.120g的FaSSIF/FeSSIF/FaSSGF粉末以获得溶出介质。

实施例13–两步稀释

可使用两步稀释法进行31倍稀释，其中进一步稀释中间稀释液(例如×2稀释液)以在第二步中获得所需的缓冲液。

当进行“禁食胃到小肠”溶出度试验时，缓冲液浓缩液非常方便和有用。这个试验可以用来检查药物从胃到小肠的作用。本实验特别适用于难溶性的碱性药物和制剂在药物过饱和时，以及胃内容物到达小肠上部的沉淀试验。

该程序使用与方法A(Method A)非常相似的USP II溶出装置，用于延迟释放剂型(Delayed Release Forms)-酸步骤USP(Acid Step USP)<711>中所述的缓释产品。

为了进行“禁食胃到小肠试验”，首先在FaSSGF pH 1.8(例如300mL)中进行剂型(例如片剂)的溶出，然后在第二步中将300mL FaSSIF的×2.0浓缩液(×2.0)添加到300mLFaSSGF中，以产生600mL的总体积。将29.03ml×31浓缩液稀释于300ml纯净水中制备该×2.0FaSSIF浓缩液，溶解2.016g的FaSSIF/FeSSIF/FaSSGF粉末，并用上述300mLFaSSGF介质和药品配制至600mL，从而得到所需的FaSSIF介质。

Claims

1.一种缓冲溶液的制备方法，所述缓冲溶液适用于生理相关的体外药物溶出度的试验、药物溶解度的试验和/或药物特征分析，所述制备方法包括：

(b)用预定量的溶剂稀释预定量的浓缩液以生成缓冲溶液。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述可变形容器还包括喷嘴，所述喷嘴构造为分配质量为0.02g～0.25g的液滴。

3.根据权利要求2或3所述的制备方法，其中所述喷嘴为：

(i)带孔密封的有棱纹的旋转开闭式盖的喷嘴；

(ii)带有蟹爪密封垫的聚丙烯圆盘顶盖；

(iii)带孔密封的有棱纹的推拉盖；

(iv)光滑的聚丙烯翻盖式开关盖，带膨胀聚乙烯衬里；或

(v)光滑的聚丙烯翻转顶盖和蟹爪密封垫。

4.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述节流口或孔的最长尺寸为0.5mm～2.0mm。

5.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述孔的纵横比为1～5，优选为1～2，更优选为1～1.5。

6.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述步骤(a)包括分配1g～250g浓缩液。

7.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述溶剂包括水、除氧水、蒸馏水、去离子水、纯净水或它们的组合。

8.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述步骤(b)包括将所述浓缩液稀释2～100倍，优选为3～50倍，更优选为10～50倍，且进一步优选为20～40倍。

9.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述浓缩液包含一种或多种重量渗透克分子浓度调节剂，所述渗透压调节剂选自氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、氯化铝、单糖、二糖、多元醇和碳水化合物。

10.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述浓缩液包含选自以下的无水和/或水合物形式的一种或多种缓冲剂：

磷酸二氢钠；

磷酸氢二钠；

磷酸二氢钾；

磷酸氢二钾；

咪唑；

碳酸钠；

碳酸氢钠；

二甲胂酸钠；

巴比妥钠；

盐酸；

氢氧化钠；

氢氧化钾；

醋酸；

柠檬酸三钠；

三水合醋酸钠；

苹果酸；

琥珀酸；

柠檬酸三钾；

马来酸；

柠檬酸；

甲酸；

乳酸；

丙酸；

2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)；

Bis-tris甲烷(Bis-Tris)；

2-[(2-氨基-2-氧代乙基)-(羧甲基)氨基]乙酸(ADA)；

N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸(ACES)；

Bis-tris丙烷1,3-双(三羟甲基)甲氨基)丙烷；

哌嗪-N，N'-双(2-乙磺酸)(PIPES)；

2-(氨基甲酰甲基氨基)乙磺酸(ACES)；

2-羟基-3-吗啉丙磺酸(MOPSO)；

氯化胆氨氯化胆氨盐酸盐；

3-吗啉丙烷-1-磺酸(MOPS)；

N N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)；

2-[[1,3-二羟基-2-(羟甲基)丙-2-基]氨基]乙磺酸(TES)；

2-[4-(2-羟乙基)1-哌嗪基]乙磺酸(HEPES)；

[3-双(2-羟乙基)氨基-2-羟丙烷-1-磺酸](DIPSO)；

[3-双(2-羟乙基)氨基-2-羟基丙烷-1-磺酸]MOBS；

甘氨酰胺；

2,2',2”-三硝基(乙-1-醇)(TEA)；

哌嗪-N,N'-双(2-羟基丙磺酸)(POPSO)；

4-(2-羟乙基)哌嗪-1-(2-羟丙磺酸)(HEPPSO)；

4-(2-羟乙基)-1-哌嗪丙磺酸(HEPPS)；

N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)；

三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)；

甘氨酰胺；

甘氨酸；

甘氨酰甘氨酸；

组氨酸；

N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-(4-丁磺酸)(HEPBS)；

2-(双(2-羟乙基)氨基)乙酸(Bicine)；

[三(羟甲基)甲基氨基]丙磺酸(TAPS)；

2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMPB)；

2-(环己基氨基)乙磺酸(CHES)；

β-氨基异丁醇(AMP)；

N-(1,1-二甲基-2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸(AMPSO)；

3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸，CAPSO游离酸(CAPSO)；

3-(环己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)；和

4-(环己基氨基)-1-丁磺酸(CABS)。

11.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，还包括以下步骤：在添加预定量的溶剂后添加一种或多种渗透剂以将所述缓冲液的渗透压调节至预定量。

12.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述可变形容器的内部容积小于2.0L，优选为5mL～1.5L，更优选为10mL～1.2L，且进一步优选为50mL～1.0L。

13.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述可变形容器包括刻印或标记在所述可变形容器上或附于所述可变形容器上的刻度。

14.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述可变形容器包括塑料材料。

15.根据权利要求14所述的制备方法，其中所述塑料材料选自高密度聚乙烯(HDPE)、低密度聚乙烯(LDPE)、聚丙烯(PP)、聚丙烯共聚物(PPCO)、聚甲基戊烯(PMP)、氟化高密度聚乙烯(FLPE)、氟化乙烯丙烯(FEP)、全氟烷氧基(PFA)、乙烯-四氟乙烯(ETFE)或它们的组合。

16.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述缓冲溶液的pH为1～9，优选为1.2～8.5。

17.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述缓冲溶液的缓冲容量为

(a)0mM/L/pH～10mM/L/pH，

(b)2mM/L/pH～100mM/L/pH，更优选为2m mM/L/pH M～80mM/L/pH。

18.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述缓冲溶液的渗透压为25mOsm/kg～700mOsm/kg。

19.根据上述任一项权利要求所述的制备方法，其中所述缓冲溶液具有：

(a)pH 1.2～6.0，缓冲容量达10mM，渗透压为25～140mOsm/kg；

(b)pH 2.2～7.0，缓冲容量为10～80mM，渗透压为50～700mOsm/kg，通常pH为3.0～6.5，渗透压为75～650mOsm/kg；

(c)pH为3.0～8.5，缓冲容量为5～25mM，渗透压为50～400mOsm/kg，通常pH为4.5～8.0。

20.一种包装，适用于生理相关的体外药物溶出度的试验、药物溶解度的试验和/或药物特征分析的缓冲溶液制备，所述包装包括：

(a)一种可变形容器，包括节流口或孔，构造为以逐滴方式和/或受控流的方式分配容器中的内容物；和

(b)一种可变形容器内缓冲溶液的浓缩液，

并且其中所述可变形容器如权利要求2～6和14～17中任一项权利要求所述，和/或所述浓缩液如权利要求10～12中任一项权利要求所述，和/或所述缓冲液如权利要求16～19中任一项权利要求所述。

21.一种试剂盒，适用于体外试验生理相关、生理和/或临床结果，包括：

(a)一种如权利要求20所述的包装；以及

(b)一种生物表面活性剂和/或脂肪酸的化学衍生盐。

22.根据权利要求21所述的试剂盒，其中所述生物表面活性剂包括胆盐和/或磷脂，所述脂肪酸的化学衍生盐为油酸钠。