CN112294833B - 化合物f-a在制备预防和/或治疗心脏损伤的产品中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了化合物F‑A在制备预防和/或治疗心脏损伤的产品中的用途，对化合物F‑A进行了活性研究，验证了化合物F‑A能够降低心脏与体重之比，并通过降低羟脯氨酸含量抑制心肌细胞纤维化，从而抑制心肌细胞外基质的增生，还可以明显抑制心肌毒性作用诱导的细胞凋亡，通过下调p‑JNK和/或Cleaved‑Caspase‑3的表达水平缓解H9c2心肌细胞毒性作用，实现预防和/或治疗心肌细胞毒性的效果，可用于制备预防或治疗心肌损伤相关疾病的药物。

Description

化合物F-A在制备预防和/或治疗心脏损伤的产品中的用途

技术领域

本发明涉及黄酮类化合物的医药用途领域，具体涉及一种黄酮类化合物F-A的用途。

背景技术

目前，许多药物在治疗过程中会带来心肌毒性的副作用，尤其是在恶性肿瘤的化学疗法中，所使用的细胞抑制剂会引起严重的心脏毒性，对患者的预后和康复产生了不良影响。

据报道，蒽环类药物普遍具有心脏毒性，而此类药物由于具有较好的抗肿瘤活性，在临床中被广泛用途。以应用最多、最成功的蒽环类抗肿瘤药物多柔比星(DOX)为例，它的蓄积和剂量依赖性的心肌细胞毒性是从药物研发到临床用途以来一直困扰肿瘤治疗实践的主要问题，表现在其治疗剂量大于550mg/m²时诱发充血性心力衰竭发病率高达11％～30％，而致死率高达50％～60％。

因此，开发能够减少心脏毒性物质对心脏的损伤、抗心脏毒性的物质具有重要的意义。

发明内容

本发明提供了一种从沙棘籽粕中提取得到的黄酮类化合物F-A在制备预防和/或治疗心脏损伤产品中的用途，所述化合物F-A具有抑制心肌细胞外基质增生、预防和/或治疗心肌纤维化、延缓心肌细胞凋亡、预防和/或治疗心脏毒性物质所引起的心脏损伤或降低损伤的效果。

本发明提供一种化合物F-A在制备预防和/或治疗心脏损伤的产品中的用途，所述化合物F-A结构式如下：

在本发明具体实施方式中，所述产品为抗心脏毒性的产品。

所述抗心脏毒性，是指可以预防或改善具有心脏毒性的物质对心脏的损伤。

在本发明具体实施方式中，所述心脏损伤选自心脏组织纤维化和/或心肌细胞凋亡。

进一步地，根据上述的用途，所述产品为可降低心脏与体重的比值的产品。

进一步地，根据上述的用途，所述产品为降低心脏组织中羟脯氨酸含量的产品。

进一步地，根据上述的用途，所述产品为延缓或抑制心肌细胞凋亡的产品。

在本发明具体实施方式中，所述产品为下调p-JNK和/或Cleaved-Caspase-3表达水平的产品；

进一步地，所述产品为p-JNK抑制剂和/或Cleaved-Caspase-3抑制剂。

所述p-JNK抑制剂是指可以使体内p-JNK含量降低的产品；所述Cleaved-Caspase-3抑制剂是指可以使体内Cleaved-Caspase-3含量降低的产品。·

在本发明具体实施方式中，所述产品的剂型选自片剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、丸剂、溶液、混悬剂，优选片剂、溶液；进一步地，所述溶液选自注射液。

在本发明具体实施方式中，所述片剂的原料包括如下重量份组分：F-A10～50份、乳糖100～200份、淀粉10～20份、微晶纤维素50～80份、硬脂酸镁1～10份、滑石粉1～10份；进一步为F-A 20份、乳糖150份、淀粉15份、微晶纤维素65份、硬脂酸镁5、滑石粉5份；

进一步地，所述片剂的规格为每片总质量为250mg；

所述溶液的原料包括如下重量份组分：F-A 1～10份、葡萄糖30～70份、氯化钠6～12份、水900～1000份；进一步为F-A 5份、葡萄糖50份、氯化钠9份、水940.5份；

进一步地，所述溶液的规格为每剂1～5mL，优选1mL。

蒽环类药物，是指含有蒽环结构的药物，是一类来源于波赛链霉菌青灰变种(Streptomycespeucetiusvar.caesius)的化疗药物，主要有多柔比星、表柔比星、吡柔比星、表阿霉素、柔红霉素和阿克拉霉素等，广泛地用于治疗血液系统恶性肿瘤和实体肿瘤，如急性白血病、淋巴瘤、乳腺癌、胃癌、软组织肉瘤和卵巢癌等。蒽环类药物还可以与其他化疗药物及分子靶向药物联合应用，以蒽环类药物为基础的联合治疗通常是一线治疗的标准方案。

蒽环类药物的抗瘤谱广，抗瘤作用强，疗效确切，不可或缺，但是可以引起脱发、骨髓抑制和心脏毒性等毒副反应，其中，心脏毒性是蒽环类药物最严重的毒副作用。

本发明用途中所述的心脏损伤由蒽环类药物所致。

本发明具有如下有益效果：

本发明通过试验验证了化合物F-A可降低多柔比星(DOX)引起心脏受损的小鼠的心脏与体重之比、降低其心脏组织中羟脯氨酸含量，说明化合物F-A可抑制蒽环类药物作用导致的心肌纤维化进程，抑制心肌细胞外基质增生；同时，本发明化合物F-A能够下调DOX诱导的心肌细胞凋亡模型中p-JNK、Cleaved-Caspase-3的表达水平，抑制心肌毒性作用诱导的细胞凋亡。说明化合物F-A具有好的抗心脏毒性，能够用于制备预防和/或治疗心脏毒性物质所引起的心脏损伤的产品。

附图说明

图1为黄酮类化合物对H9c2心肌细胞的毒性影响。

图2为黄酮类化合物对DOX诱导H9c2心肌细胞毒性的影响。

图3为黄酮类化合物对DOX诱导的H9c2心肌细胞Caspase-3活化的影响。

图4为黄酮类化合物对DOX诱导的H9c2心肌细胞p-JNK/JNK的影响。

其中，图3、图4中，与Con组相比，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001；与DOX模型组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；Mean±SD,n＝3。

具体实施方式

下面对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所做出的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。

本发明实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂公司购买得到，实施例中所涉及的数据均为平均值。

本发明所述F-A的化学结构式为：

F-B的化学结构式为：

F-C的化学结构式为：

实施例1化合物F-A对多柔比星诱导的心肌毒性的治疗作用

多柔比星诱导的心肌病的家兔测试方法(本实验符合相关伦理规定)：

(1)用起始体重为2.3±0.2kg的两种性别的家兔进行测试，按a组为未治疗的动物(为对照动物，n＝8)、b组为多柔比星治疗的动物(+用安慰剂替代测试物质，n＝8)、c组为多柔比星和测试物质治疗的动物(n＝8)，测试物质为黄酮类化合物F-A、F-B、F-C，分别为c1、c2、c3组。

(2)b、c组每周静脉给药2次多柔比星，每次1mg/kg，共4周，c组每天口服测试物质20mg/kg体重，从多柔比星处理的第一天开始，同时喂食饲料。

(3)4周后，分离心脏并称重，并检测心脏组织中羟脯氨酸的含量(根据SN/T 3929-2014出口食品中L-羟脯氨酸的测定液相色谱-质谱/质谱法进行测定)，检测结果如表1。

表1黄酮类化合物对家兔心脏衰退与改变的影响

注：^***：p＜0.001，与a组相比；⁺：p＜0.05，与b组相比。

心脏组织与体重之比以及心脏组织中羟脯氨酸含量与正常值相比的上升表明心脏的衰退和改变。

测试结果如表1所示，就心脏与体重之比而言，与b组多柔比星治疗的动物比较，c组测试物质动物组(c1、c2、c3组)的心脏与体重之比的统计值明显减小，且达到了与a组未治疗对照动物无显著差异的水平；与a组相比，b组显著提高心脏与体重之比，且达到极显著水平。以羟脯氨酸含量而言，c组羟脯氨酸的浓度明显低于b组，达到了极显著水平，这表明其纤维化程度得以一定程度的抑制；b组羟脯氨酸的浓度明显高于a组，表明多柔比星可诱导心脏组织的纤维化。

因此，通过给药测试物质，本发明黄酮类化合物可明显降低胞外心肌基质的改变过程，抑制心肌细胞外基质增生，对心肌毒性作用具有预防和/或治疗作用。

实施例2化合物F-A对多柔比星致诱导的心肌毒性的治疗作用

H9c2心肌毒性模型中心肌细胞凋亡的抑制作用测试：

(1)用不同浓度的黄酮类化合物F-A、F-B、F-C孵育H9c2细胞24h后，采用MTT比色法评价黄酮类化合物对心肌细胞的毒性影响，预先用黄酮类化合物孵育H9c2细胞1h，再加入2.5μM DOX培养24h后，采用MTT比色法筛选黄酮类化合物对多柔比星(DOX)诱导心肌细胞凋亡活性，并确定最佳作用浓度范围。

(2)将不同受试沙棘黄酮类作用H9c2心肌细胞1h后，用2.5μM的DOX处理24h后提取蛋白质，裂解、刮取、收集细胞裂解液，12000g离心15min，收集上清液弃沉淀，-80℃保存，并采用BCA法对蛋白定量，备用；SDS-PAGE电泳(Step1，80V，30min；Step2,120V,180min)，5％浓缩胶；转膜，PVDF膜，30min，80mA；封闭及杂交，5％脱脂奶粉封闭1h，一抗孵育过夜，二抗室温轻摇孵育1～2h；显影，ECL试剂显影，凝胶成像系统观察细胞内Caspase-3和p-JNK/JNK蛋白表达情况。

测试结果如图1所示，黄酮类化合物在一定浓度范围内与Con组相比无统计学差异(0.1～40μM)，但当其达到80μM时，与Con组相比具有显著性差异性，说明超过在此浓度可能会对H9c2细胞活力产生一定毒性作用。

图2结果表明，不同浓度范围的黄酮类化合物组与DOX模型组相比较均表现出抑制DOX诱导心肌细胞毒性，且呈现一定的浓度依赖性，浓度在5～80μM范围内与模型组相比具有显著差异性或极显著差异性。

图3结果表明，DOX模型组与Con组相比能够极显著增加Cleaved-Caspase-3表达水平，黄酮类化合物低、中、高剂量组(10μM、20μM和40μM)与DOX模型组相比均能不同程度地降低由DOX引起的Cleaved-Caspase-3水平升高，且存在明显的浓度依赖性关系；如图4所示，DOX模型组与Con组相比能够极显著增加p-JNK表达水平。黄酮类化合物低剂量组(10μM)与DOX模型组的p-JNK表达水平不存在统计学差异，但是中剂量组(20μM)和高剂量组(40μM)具有极显著差异性，且存在明显的浓度依赖性关系。由此说明，黄酮类化合物可以下调DOX诱导的心肌细胞凋亡模型中p-JNK表达水平，结合其对Cleaved-Caspase-3表达水平的影响分析可知，本发明提供的黄酮类化合物可以下调p-JNK/Cleaved-Caspase-3表达水平实现抑制DOX诱导心肌细胞凋亡而缓解心肌细胞毒性作用。

因此，通过给药测试物质，本发明黄酮类化合物可通过下调p-JNK/Cleaved-Caspase-3表达水平抑制心肌毒性作用诱导的细胞凋亡，从而实现预防和/或治疗效果。

综上，本发明的黄酮类化合物具有抑制心肌纤维化、心肌细胞外基质增生、心肌毒性作用诱导的细胞凋亡、缓解心肌细胞毒性的作用，可用于制备预防和/或治疗心脏损伤的药物。

本发明黄酮类化合物适于用作哺乳动物，特别是人体的药物，用于预防和/或治疗心脏中毒剂量的药物所产生的损伤影响和其他化学物质引起的心脏损伤状况，特别是心脏的衰退和改变，如蒽环类药物的心肌毒性、心肌纤维化等。本发明黄酮类化合物可作为药物，特别是在对心脏具有毒性副作用的药物的治疗过程中，用作辅助治疗。可视治疗状态的类型、所使用的物质和给药形式，采用静脉注射、口服等形式进行使用，使用量可各不相同且可加以变化。

实施例3含有黄酮类化合物的片剂

以下组分生产每一片剂：

将上述组分按照所述用量混合、制粒、总混和压片制成250mg片剂。

实施例4含有黄酮类化合物的注射液

生产每1ml具有如下组分的注射液：

将上述固体物质溶解于纯净水中，并将溶液无菌灌装于1ml的安瓿瓶中。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的保护范围，凡是利用本发明的说明书所作的等效流程或等效结构的变换，或直接、或间接运用在其他相关的技术领域，均应同理包括在本发明的保护范围之内。

Claims (15)

1.化合物F-A在制备预防和/或治疗心脏损伤的产品中的用途，所述化合物F-A结构式如下：

所述心脏损伤是蒽环类药物多柔比星所致。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述产品为抗心脏毒性的产品。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述心脏损伤选自心脏组织纤维化和/或心肌细胞凋亡。

4.根据权利要求1～3任一项所述的用途，其特征在于，所述产品为可降低心脏与体重的比值的产品。

5.根据权利要求1～3任一项所述的用途，其特征在于，所述产品为降低心脏组织中羟脯氨酸含量的产品。

6.根据权利要求1～3任一项所述的用途，其特征在于，所述产品为延缓或抑制心肌细胞凋亡的产品。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述产品为下调p-JNK和/或Cleaved-Caspase-3表达水平的产品；

所述产品为p-JNK抑制剂和/或Cleaved-Caspase-3抑制剂。

8.根据权利要求1所述用途，其特征在于，所述产品的剂型选自片剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、丸剂、溶液、混悬剂。

9.根据权利要求8所述用途，其特征在于，所述溶液为自注射液。

10.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述片剂的原料包括如下重量份组分：F-A 10～50份、乳糖100～200份、淀粉10～20份、微晶纤维素50～80份、硬脂酸镁1～10份、滑石粉1～10份。

11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述片剂的原料包括如下重量份组分：F-A 20份、乳糖150份、淀粉15份、微晶纤维素65份、硬脂酸镁5、滑石粉5份。

12.根据权利要求10或11所述的用途，其特征在于，片剂的规格为每片总质量为250mg。

13.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述溶液的原料包括如下重量份组分：F-A 1～10份、葡萄糖30～70份、氯化钠6～12份、水900～1000份。

14.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述溶液的原料包括如下重量份组分：F-A 5份、葡萄糖50份、氯化钠9份、水940.5份。

15.根据权利要求13或14所述的用途，其特征在于，溶液的规格为每剂1～5mL。

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