CN112272671A - 多肽 - Google Patents

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CN112272671A CN201980028865.XA CN201980028865A CN112272671A CN 112272671 A CN112272671 A CN 112272671A CN 201980028865 A CN201980028865 A CN 201980028865A CN 112272671 A CN112272671 A CN 112272671A
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李明
J.萨洛蒙
D.R.塞古拉
M.A.斯特林格
R.M.维吉伯格
D.M.K.克利特加德
D.尼森
W.彭
孙天齐
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Novozymes AS
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Abstract

本发明涉及具有水解活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及产生和使用这些多肽的方法。

Description

多肽
序列表的引用
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背景技术
技术领域
本发明涉及包含具有水解活性的GH114结构域的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及产生和使用这些多肽的方法。
相关技术说明
几十年来，酶一直被用于洗涤剂中。通常将多种酶的混合物添加至洗涤剂组合物中。该酶混合物通常包含多种酶，其中每种酶各自靶向其特异性底物，例如淀粉酶对淀粉污渍有活性、蛋白酶对蛋白质污渍有活性等。纺织品和表面(如衣物和餐具)会被许多不同类型的污垢弄脏。污垢可能由蛋白质、油脂、淀粉等组成。生物膜是污垢的一个实例，而且生物膜的存在产生了若干缺点。生物膜包含细胞外聚合物基质，其由例如多糖、细胞外DNA(eDNA)和蛋白质组成。细胞外聚合物基质可以是粘性的或粘合的，当其存在于纺织品上时，引起污垢的再沉积或反染色，从而导致织物变灰。另一个缺点是恶臭可能被滞留在有机结构中。因此，生物膜在纺织品和与清洁(如洗衣机等)相关的表面中是不可取的。由于生物膜是多糖、蛋白质、DNA等的复杂混合物，因此需要有效地防止、去除或减少在物品(如织物)上的此类污垢组分(如多糖组分)的酶。需要有效去除或减少有机污垢(例如在清洁过程(如衣物和硬表面清洁)中的例如EPS中的多糖)组分的酶。本发明的目的是提供如下酶：其与清洁组合物(例如洗涤剂)相容并且有效地减少例如与EPS相关的多糖。
发明内容
本发明提供了具有水解酶活性的多肽，其中这些多肽具有GH114结构域(CAZy数据库，www.cazy.org，Lombard V等人2014,Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)。GH114结构域是为多肽提供水解活性的功能结构域。本发明还提供包含含有GH114结构域的多肽的洗涤剂组合物，以及这类多肽在清洁过程中用于清洁(例如深度清洁)的用途。包含GH114结构域的本发明多肽在清洁过程中具有有益的性质，例如清洁(例如深度清洁)。清洁过程包括衣物洗涤和餐具洗涤。
在第一方面，本发明涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)或CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO61)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中该阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)。
在第二方面，本发明涉及用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：
(a)将物品暴露于包含根据本发明的组合物的洗涤液中；
(b)完成至少一个洗涤循环；以及
(c)任选地冲洗该物品，其中该物品是纺织品。
在第三方面，本发明涉及GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的GH114糖基水解酶在清洁过程例如衣物和/或餐具洗涤中的用途，其中该GH114糖基水解酶包含选自下组的一个或多个基序，该组由以下组成：[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ IDNO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)和DFAVL(SEQ ID NO 71)。
在第三方面，本发明涉及GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的GH114糖基水解酶的用途，其中该GH114糖基水解酶包含选自下组的一个或多个基序，该组由以下组成：[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)和DFAVL(SEQ ID NO 71)，该用途是，
i.用于防止、减少或去除物品的粘性；
ii.用于防止、减少或去除生物膜或生物膜组分；
iii.用于减少或去除物品上的pel污渍；
iv.用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
v.用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
vi.用于维持或改进物品的白度；
vii.用于防止、减少或去除物品的恶臭，
其中该物品是纺织品。
在一个方面中，本发明涉及GH114糖基水解酶，其包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQID NO 60)和/或CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)，其中GH114糖基水解酶具有水解活性，并且其中GH114糖基水解酶包含以下多肽或由以下多肽组成，该多肽选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明还涉及GH114糖基水解酶。特别地，本发明涉及选自由以下组成的组的多肽：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 15中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 18中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(r)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(s)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(t)选自由SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30and SEQ IDNO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ IDNO 51、SEQ ID NO 54和SEQ ID NO 57组成的组的多肽的变体，其中该变体具有水解活性，并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任意组合；
(u)多肽，其包含(a)至(t)中所示的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(v)多肽，其包含(a)至(t)中所示的多肽以及1至10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(w)(a)至(t)中所示的多肽的片段，该片段具有水解活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
本发明还涉及清洁组合物(例如洗涤剂组合物、ADW组合物、洗衣组合物)，其包含根据本发明的多肽。
一个方面涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
a)至少0.001ppm的至少一种根据本发明的GH114糖基水解酶；以及
b)一种或多种清洁组合物组分，优选地选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和另外的酶。
本发明进一步涉及用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：
a.将物品暴露于包含根据本发明的GH114糖基水解酶的洗涤液或根据本发明的组合物；
b.完成至少一个洗涤循环；以及
c.任选地冲洗该物品，
其中该物品是纺织品。
本发明进一步涉及根据本发明的多肽用于清洁(例如深度清洁)物品(例如纺织品(例如织物))的用途。本发明进一步涉及根据本发明的多肽的以下用途：
(i)用于防止、减少或去除物品的粘性；
(ii)用于预处理该物品上的污渍；
(iii)用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
(iv)用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
(v)用于维持或改进物品的白度；
(vi)用于防止、减少或去除物品的恶臭，
其中该物品是纺织品。
本发明进一步涉及GH114糖基水解酶在清洁过程(例如衣物洗涤和/或餐具洗涤)中的用途。本发明还涉及GH114糖基水解酶的以下用途：
i.用于防止、减少或去除物品的粘性；
ii.用于防止、减少或去除生物膜或生物膜组分；
iii.用于减少或去除物品上的pel污渍；
iv.用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
v.用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
vi.用于维持或改进物品的白度；
vii.用于防止、减少或去除物品的恶臭，
其中该物品是纺织品。
在一个方面中，本发明涉及颗粒，其包含：
(a)核心，该核心包含根据本发明的GH114糖基水解酶，以及
(b)任选地由包围核心的一个或多个层组成的包衣。
本发明进一步涉及编码本发明多肽的多核苷酸。核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包含编码本发明多肽的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽在表达宿主中的产生的一个或多个控制序列。本发明进一步涉及重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含编码本发明多肽的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列，其中该方法可以进一步包括在有益于产生该多肽的条件下培养细胞，该细胞以其野生型形式产生该多肽，以及任选地回收该多肽。
附图说明
图1显示了系统发生树以及GH114糖基水解酶多肽中的一些的进化枝。
图2显示了GH114糖基水解酶多肽中的一些的系统发生。
图3显示了GH114糖基水解酶多肽中的一些的多重比对。
图4显示了进化枝层级。
序列综述
SEQ ID NO 1，其编码来自瑟西拟无枝酸菌(Amycolatopsis circi)的全长多肽的DNA
SEQ ID NO 2多肽，其衍生自SEQ ID NO 1
SEQ ID NO 3成熟多肽，其获得自瑟西拟无枝酸菌
SEQ ID NO 4DNA，其编码来自拟无枝酸菌属物种(Amycolatopsis sp.)的全长多肽
SEQ ID NO 5多肽，其衍生自SEQ ID NO 4
SEQ ID NO 6成熟多肽，其获得自无枝酸菌属物种
SEQ ID NO 7DNA，其编码来自拟无枝酸菌属物种的全长多肽
SEQ ID NO 8多肽，其衍生自SEQ ID NO 7
SEQ ID NO 9成熟多肽，其获得自无枝酸菌属物种
SEQ ID NO 10DNA，其编码来自微小链霉菌(Streptomyces parvulus)的全长多肽
SEQ ID NO 11多肽，其衍生自SEQ ID NO 10
SEQ ID NO 12成熟多肽，其获得自微小链霉菌
SEQ ID NO 13DNA，其编码来自腐皮镰孢(Fusarium solani)的全长多肽
SEQ ID NO 14多肽，其衍生自SEQ ID NO 13
SEQ ID NO 15成熟多肽，其获得自腐皮镰孢
SEQ ID NO 16DNA，其编码来自腐皮镰孢的全长多肽
SEQ ID NO 17多肽，其衍生自SEQ ID NO 16
SEQ ID NO 18成熟多肽，其获得自腐皮镰孢
SEQ ID NO 19DNA，其编码来自广州野野村菌(Nonomuraea guangzhouensis)的全长多肽
SEQ ID NO 20多肽，其衍生自SEQ ID NO 19
SEQ ID NO 21成熟多肽，其获得自广州野野村菌
SEQ ID NO 22DNA，其编码来自链霉菌属物种(Streptomyces sp)的全长多肽
SEQ ID NO 23多肽，其衍生自SEQ ID NO 22
SEQ ID NO 24成熟多肽，其获得自链霉菌属物种
SEQ ID NO 25DNA，其编码来自弧菌属物种(Vibrio sp)的全长多肽
SEQ ID NO 26多肽，其衍生自SEQ ID NO 25
SEQ ID NO 27成熟多肽，其获得自弧菌属物种
SEQ ID NO 28DNA，其编码来自合成的基因的全长多肽
SEQ ID NO 29多肽，其衍生自SEQ ID NO 28
SEQ ID NO 30成熟多肽，其获得自合成的基因
SEQ ID NO 31DNA，其编码来自蔗糖微杆菌(Microbacterium saccharophilum)的全长多肽
SEQ ID NO 32多肽，其衍生自SEQ ID NO 31
SEQ ID NO 33成熟多肽，其获得自蔗糖微杆菌
SEQ ID NO 34DNA，其编码来自氧化微杆菌(Microbacterium oxydans)的全长多肽
SEQ ID NO 35多肽，其衍生自SEQ ID NO 34
SEQ ID NO 36成熟多肽，其获得自氧化微杆菌
SEQ ID NO 37DNA，其编码来自费恩冰冻小杆菌(Frigoribacterium faeni)的全长多肽
SEQ ID NO 38多肽，其衍生自SEQ ID NO 37
SEQ ID NO 39成熟多肽，其获得自费恩冰冻小杆菌
SEQ ID NO 40DNA，其编码来自Serinibacter sp.的全长多肽
SEQ ID NO 41多肽，其衍生自SEQ ID NO 40
SEQ ID NO 42成熟多肽，其获得自Serinibacter sp.
SEQ ID NO 43DNA，其编码来自渐变厄氏菌(Oerskovia paurometabola)的全长多肽
SEQ ID NO 44多肽，其衍生自SEQ ID NO 43
SEQ ID NO 45成熟多肽，其获得自渐变厄氏菌
SEQ ID NO 46DNA，其编码来自Agreia pratensis的全长多肽
SEQ ID NO 47多肽，其衍生自SEQ ID NO 46
SEQ ID NO 48成熟多肽，其获得自Agreia pratensis
SEQ ID NO 49DNA，其编码来自黄植物杆菌(Plantibacter flavus)的全长多肽
SEQ ID NO 50多肽，其衍生自SEQ ID NO 49
SEQ ID NO 51成熟多肽，其获得自黄植物杆菌
SEQ ID NO 52DNA，其编码来自米哈希斯链霉菌(Streptomyces miharaensis)的全长多肽
SEQ ID NO 53多肽，其衍生自SEQ ID NO 52
SEQ ID NO 54成熟多肽，其获得自米哈希斯链霉菌
SEQ ID NO 55DNA，其编码来自浅脚瓶盘菌(Urnula craterium)的全长多肽
SEQ ID NO 56多肽，其衍生自SEQ ID NO 55
SEQ ID NO 57成熟多肽，其获得自浅脚瓶盘菌
SEQ ID NO 58信号肽MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA
SEQ ID NO 59HHHHHHPR His-标签
SEQ ID NO 60[VLI]XE[EDSQ]C
SEQ ID NO 61CY[FLIV][SDN][ATVG]
SEQ ID NO 62DYQ[LI]G
SEQ ID NO 63FQ[TAV]Q[PSD]
SEQ ID NO 64AEECG
SEQ ID NO 65NAFQ[AT]Q
SEQ ID NO 66WQWQL
SEQ ID NO 67[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP]
SEQ ID NO 68GXXVX[NHQTS]IEY[PG]
SEQ ID NO 69VICYF
SEQ ID NO 70ICYFSA
SEQ ID NO 71DFAVL
根据如图4所示的进化枝的同源序列。
VAE进化枝:SEQ ID NO 72-SEQ ID NO 146
DYQ进化枝:SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ IDNO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ IDNO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQID NO 134、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144和SEQ ID NO 145
AEE进化枝:SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ IDNO 85、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 138和SEQ ID NO 142。
IEY进化枝:SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ IDNO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ IDNO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ IDNO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ IDNO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO:133和SEQ ID NO 135
ICY进化枝:SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 107、SEQID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO127、SEQ ID NO 129和SEQ ID NO:133
DFAVL进化枝:SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 108、SEQ IDNO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 126、SEQ IDNO 128、SEQ ID NO 130和SEQ ID NO 135
WQW进化枝:SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 95和SEQ IDNO 146
定义
活性：本发明涉及糖基水解酶(EC 3.2.1.-)，其是一组广泛的酶，这组酶水解两种或更多种糖类之间或糖类与非糖类部分之间的糖苷键。已经提出了基于氨基酸序列相似性对家族中糖苷水解酶进行分类。本发明的多肽包含至少一个糖基水解酶结构域，并且在本文中定义为糖基水解酶。因此，本发明的多肽水解糖苷键，而且本发明的多肽具有水解活性。包含在本发明的多肽中的糖基水解酶结构域可以被分类为GH114(GH114，糖苷水解酶家族114，CAZy数据库，www.cazy.org，Lombard V等人，2014,Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)。GH114的单一酶已被表征；来自假单胞菌属物种(Pseudomonas sp)的内切-α-1,4-聚半乳糖胺酶(EC 3.2.1.109)(Tamura,J.等人Molecular Cloning and SequenceAnalysis of the Gene Encoding an Endo-α-1,4polygalactosaminidase ofPseudomonas sp.881[编码假单胞菌物种881的内切-α-1,4聚半乳糖胺酶的基因的分子克隆和序列分析].J.Fermentation Bioengineer.[发酵生物工程杂志],1995,80,305)。该酶以内切作用方式将α-1,4-聚半乳糖胺酶水解为寡糖。α-1,4-聚半乳糖胺，也称为半乳糖氨基聚糖，是由α-1,4-连接的半乳糖胺残基组成的聚合物，其仅被部分N-乙酰化，并且还可以包含N-甲酰基残基。在本发明的上下文中，GH114糖基水解酶是包含糖基水解酶结构域(DUF297)的糖基水解酶，其在本文中被称为GH114(GH114，糖苷水解酶家族114，CAZy数据库，www.cazy.org，Lombard V等人，2014,Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)。GH114糖基水解酶结构域位于SEQ ID NO 3中的位置13至246。本发明的多肽是糖基水解酶，优选地是GH114糖基水解酶。在一个实施例中，本发明的多肽是聚半乳糖胺酶，本发明的一些GH114可以包含α-1,4聚半乳糖胺酶活性。本发明的多肽具有对糖苷键的水解活性。在本发明的一种或上下文中，GH114糖基水解酶是PelA酶，其对存在于许多生物膜中存在的多糖PEL具有活性。菌膜(pellicle，PEL)多糖例如由铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)合成，并且是对细菌毒力和持久性起关键作用的重要生物膜组分。本发明的GH114将Pel水解成带正电的胞外多糖，该胞外多糖由N-乙酰基半乳糖胺和N-乙酰基-葡萄糖胺的部分乙酰化的1,4糖苷键构成(Jennings等人PNAS 2015年9月,第112卷,第36期,11353-11358；Marmont等人J Biol Chem.[生物化学]2017年11月24日；292(47):19411-19422.2017。
等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种替代形式中的任一种。等位基因变异通过突变而自然产生，并且可以导致群体内部的多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的多肽无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
生物膜：生物膜是由其中细胞彼此黏附在一起或黏附至表面(如纺织品、餐具或硬表面)或另一种表面的任何群组的微生物产生的有机物。这些粘附细胞经常包埋在胞外高聚物(EPS)的自身产生的基质内。生物膜EPS是一般由细胞外DNA、蛋白质和多糖组成的聚合物团块。生物膜可以形成在活的或非活的表面上。在生物膜中生长的微生物细胞与同一有机体的浮游细胞(相比之下，浮游细胞是可以在液体介质中漂浮或浮游的单个细胞)在生理上是不同的。生活在生物膜中的细菌通常与同一物种的浮游细菌具有显著不同的特性，因为膜的密集并且受保护的环境允许它们以不同方式协作和相互作用。微生物的这一环境的一个益处是增加对洗涤剂和抗生素的抗性，因为，密集的细胞外基质和细胞的外层保护群落的内部。关于产生衣物洗涤生物膜或EPS的细菌，可以在以下物种中找到：不动杆菌属物种(Acinetobacter sp.)、气微菌属物种(Aeromicrobium sp.)、短波单胞菌属物种(Brevundimonas sp.)、微杆菌属物种(Microbacterium sp.)、滕黄微球菌(Micrococcusluteus)、假单胞菌属物种(Pseudomonas sp.)、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)以及寡养单胞菌属物种(Stenotrophomonas sp.)。在一个方面中，产生生物膜的菌株是假单胞菌属。在一个方面中，产生EPS的菌株是铜绿假单胞菌、嗜碱性假单胞菌(Pseudomonas alcaliphila)或荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、堆肥假单胞菌(Pseudomonas composti)、隆德假单胞菌(Pseudomonas lundensis)、和皱褶假单胞菌(Pseudomonas corrugate)。在一个实施例中，生物膜由产生菌膜的微生物或微生物群引起。在另一个实施例中，生物膜产生可通过本发明的GH114糖基水解酶降解的多糖。可以在表面(例如纺织品)上形成的生物膜，可以由形成PelA依赖性生物膜的任何微生物或微生物群引起，微生物包括但不限于：不动杆菌属物种、气微菌属物种、短波单胞菌属物种、微杆菌属物种、滕黄微球菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、假单胞菌属物种、铜绿假单胞菌、嗜碱性假单胞菌、荧光假单胞菌、寡养单胞菌属物种、副伯克霍尔德菌、伯克霍尔德菌属物种、假丝酵母属物种、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、鼠疫耶尔森氏菌、大肠杆菌和曲霉属物种。
催化结构域：术语“催化结构域”意指含有该酶的催化机构的酶的区域。
进化枝：进化枝是基于追溯至共同祖先的同源性特征聚集在一起的一组多肽。多肽进化枝可以被看作是系统发生树，并且进化枝是由共同祖先及其所有直系后裔组成的一组多肽。实例10描述了系统发生树的生成。
cDNA：术语“cDNA”意指可以通过从获得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。初始的初级RNA转录物是mRNA的前体，其要通过一系列的步骤(包括剪接)进行加工，之后呈现为成熟的剪接的mRNA。
编码序列：术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界通常由可读框确定，该可读框以起始密码子(例如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(例如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以为基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。
控制序列：术语“控制序列”意指表达编码本发明的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导序列、多腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。最少，控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将控制序列与编码多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制位点的目的，这些控制序列可以提供有多个接头。
深度清洁：术语“深度清洁”意指破坏、减少或去除有机组分，例如多糖(如pel)、蛋白质、DNA、污垢或存在于有机物(如生物膜)中的其他组分。该术语包括清洁，即去除有机污渍，例如死细胞材料、皮肤碎屑、皮脂、汗液、油脂和其他来自例如人(体垢)或微生物的污渍。
清洁组分：清洁组分(例如洗涤剂佐剂成分)与本发明的多肽不同。这些另外的清洁或佐剂组分的精确性质、其掺入水平将取决于组合物的物理形式和将在其中使用组合物的操作的性质。适合的清洁组分包括，但不限于：以下描述的组分，如表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合试剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合剂、粘土去污剂/抗再沉积剂、增亮剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物软化剂、载体、水溶助剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或颜料。
清洁组合物：术语清洁组合物包括“洗涤剂组合物”并且是指用于从有待清洁的物品(例如纺织品)去除不希望的化合物的组合物。该洗涤剂组合物可以用于例如清洁纺织品，用于家用清洁和工业清洁二者。这些术语涵盖选择用于希望的特定类型的清洁组合物和产品的形式(例如，液体、凝胶、粉末、颗粒、糊状、或喷雾组合物)的任何材料/化合物，并且包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂；织物清新剂；织物柔软剂；以及纺织品和衣物预去污剂/预处理)。除了含有本发明的酶之外，该洗涤剂配制品还可以含有一种或多种另外的酶(如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶、甘露聚糖酶、DNA酶或其任何混合物)，和/或洗涤剂辅助剂成分，例如表面活性剂、助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物柔顺剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂以及增溶剂。
酶洗涤益处：本文中将术语“酶洗涤益处”定义为将酶添加到洗涤剂中与不具有该酶的相同洗涤剂相比的有利效果。可以由酶提供的重要洗涤益处是污渍去除伴随在洗涤和/或清洁之后无可见污垢或可见污垢非常少、防止或减少在洗涤过程中所释放的污垢再沉积(又称作抗再沉积的效果)、完全或部分地恢复纺织品的白度(又称作白化的效果)，该纺织品最初是白色的，但是在反复使用和洗涤后获得淡灰或淡黄色外观。不直接与催化污渍去除或防止污垢再沉积相关的纺织品护理益处对于酶洗涤益处而言也是重要的。酶洗涤益处的实例包括深度清洁。酶洗涤益处的实例包括生物膜减少活性，例如如实例8中测量。此类纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一织物转移至另一织物或同一织物的另一部分(也被称作染料转移抑制或抗返染的效果)，从织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球或绒毛(也被称作抗起球的效果)，改善织物柔软性，织物的颜色澄清以及去除陷在织物或服装的纤维中的微粒状污垢。酶漂白是另一种酶洗涤益处，其中通常将催化活性用于催化漂白组分(如过氧化氢或其他过氧化物)的形成。
表达：术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤，包括但不限于：转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
表达载体：术语“表达载体”意指直链或环状DNA分子，其包含编码多肽的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。
片段：术语“片段”意指具有从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基末端缺失的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的多肽或催化结构域；其中该片段具有活性。
宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不完全相同的任何亲本细胞子代。
分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除；(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分，增加物质的量而修饰的任何物质(例如，宿主细胞中的重组产生；编码该物质的基因的多个拷贝；以及使用比与编码该物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)。分离的物质可以存在于发酵液样品中；例如宿主细胞可以经遗传修饰以表达本发明的多肽。来自该宿主细胞的发酵液将包含分离的多肽。
改进的洗涤性能：本文将术语“改进的洗涤性能”定义为相对于没有酶的相同洗涤剂组合物的洗涤性能，展示出洗涤剂组合物中增加的洗涤性能的酶，例如，通过增加污渍去除或较少的再沉积。术语“改进的洗涤性能”包括在衣物中的洗涤性能。洗涤性能可以与“酶洗涤益处”相同。术语“洗涤性能”被用作酶在例如洗涤或硬表面清洁过程中去除存在于有待清洁的物体上的污渍的能力。可以通过计算本文实例18中定义的所谓强度值(Int)或本文实例5和7中所述的(ΔL)来量化洗涤性能的改善。还参见本文实例5、6、18和19中的洗涤性能测试。术语“洗涤性能”和“餐具洗涤性能”可互换使用。
衣物洗涤：术语“衣物洗涤”涉及家用衣物洗涤和工业衣物洗涤两者并且意指用含有本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织品的过程。衣物洗涤过程可以例如使用例如家用或工业洗衣机进行或可以手动进行。
恶臭：术语“恶臭”是指令人不愉快的气味，这在清洁物品上是不希望的。清洁的物品应气味清新并且干净，而没有附着在该物品上的恶臭。恶臭的一个实例是具有令人不愉快的气味的化合物，这些化合物可以是微生物产生的。另一个实例是令人不愉快的气味可以是黏附于已经与人类或动物接触的物品的汗味或体味。恶臭的另一个实例可以是来自香料的气味，其粘附于物品，例如气味强烈的咖喱或其他异国香料。
成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 2的氨基酸1至246，并且SEQ ID NO 2的氨基酸-34至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 3中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 5的氨基酸1至243，并且SEQ ID NO 5的氨基酸-34至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ IDNO 6中。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 6中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ IDNO 8的氨基酸1至237，并且SEQ ID NO 8的氨基酸-37至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 9中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 11的氨基酸1至237，并且SEQ ID NO 11的氨基酸-39至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 12中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 14的氨基酸1至274，并且SEQ ID NO 14的氨基酸-22至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 15中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 17的氨基酸1至296，并且SEQ ID NO 17的氨基酸-21至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 18中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 20的氨基酸1至237，并且SEQ ID NO 20的氨基酸-27至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 21中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 23的氨基酸1至239，并且SEQ IDNO 23的氨基酸-33至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 24中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 26的氨基酸1至264，并且SEQ ID NO 26的氨基酸-23至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 27中。在一些方面中，成熟多肽是SEQID NO 29的氨基酸1至242，并且SEQ ID NO 29的氨基酸-19至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 30中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 32的氨基酸1至238，并且SEQ ID NO 32的氨基酸-38至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ IDNO 33中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 35的氨基酸1至261，并且SEQ ID NO 35的氨基酸-26至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 36中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 38的氨基酸1至265，并且SEQ ID NO 38的氨基酸-25至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 39中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 41的氨基酸1至254，并且SEQ ID NO 41的氨基酸-30至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 42中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 44的氨基酸1至268，并且SEQ ID NO 44的氨基酸-31至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 45中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 47的氨基酸1至267，并且SEQ ID NO 47的氨基酸-24至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 48中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 50的氨基酸1至251，并且SEQ ID NO 50的氨基酸-36至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 51中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 53的氨基酸1至239，并且SEQ ID NO 53的氨基酸-44至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 54中。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO 56的氨基酸1至279，并且SEQ IDNO 56的氨基酸-18至-1是信号肽。在一个方面中，成熟多肽显示在SEQ ID NO 57中。
在本领域中已知的是，宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同的成熟多肽(即，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。在本领域中还已知的是，不同的宿主细胞不同地加工多肽，并且因此一个表达多核苷酸的宿主细胞当与另一个表达相同多核苷酸的宿主细胞相比时可以产生不同的成熟多肽(例如，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)。
成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有活性的成熟多肽的多核苷酸。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 1的核苷酸103至840，并且SEQ IDNO 1的核苷酸1至102编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 4的核苷酸103至831，并且SEQ ID NO 4的核苷酸1至102编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 7的核苷酸112至822，并且SEQ ID NO 7的核苷酸1至111编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 10的核苷酸118至828，并且SEQ ID NO 10的核苷酸1至117编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 13的核苷酸67至939，并且SEQ ID NO13的核苷酸1至66编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 16的核苷酸112至1061，并且SEQ ID NO 16的核苷酸1至111编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 19的核苷酸82至792，并且SEQ ID NO 19的核苷酸1至81编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 22的核苷酸100至816，并且SEQ ID NO 22的核苷酸1至99编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ IDNO 25的核苷酸70至861，并且SEQ ID NO 25的核苷酸1至69编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 28的核苷酸58至783，并且SEQ ID NO 28的核苷酸1至57编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 31的核苷酸115至828，并且SEQ IDNO 31的核苷酸1至114编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 34的核苷酸79至861，并且SEQ ID NO 34的核苷酸1至78编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 37的核苷酸76至870，并且SEQ ID NO 37的核苷酸1至75编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 40的核苷酸91至852，并且SEQ ID NO 40的核苷酸1至90编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 43的核苷酸94至897，并且SEQ ID NO 43的核苷酸1至93编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 46的核苷酸73至873，并且SEQ ID NO 46的核苷酸1至72编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 49的核苷酸109至861，并且SEQ ID NO 49的核苷酸1至108编码信号肽。在一个方面中，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 52的核苷酸133至849，并且SEQ ID NO 52的核苷酸1至132编码信号肽。在一个方面中，该成熟多肽编码序列是SEQID NO 55的核苷酸55至1053，并且SEQ ID NO 55的核苷酸1至54编码信号肽。
核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以本来不存在于自然界中的方式被修饰成含有核酸的区段，或是合成的，该核酸分子包含一个或多个控制序列。
命名法：出于本发明的目的，命名法[EQ]是指在该位置的氨基酸可以是谷氨酸(Glu，E)或谷氨酰胺(Gln，Q)。同样，命名法[VGAI]意指在此位置的氨基酸可以是缬氨酸(Val，V)、甘氨酸(Gly，G)、丙氨酸(Ala，A)或异亮氨酸(Ile，I)，对于如本文所述的其他组合，依次类推。除非进一步另有限制，否则氨基酸X被这样定义，使得它可以是20种天然氨基酸中的任一种。
可操作地连接：术语“可操作地连接”意指如下构型，在该构型中，控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列适当的位置处，使得该控制序列指导该编码序列的表达。
序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。出于本发明的目的，使用如在EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩阵。使用Needle标记为“最高同一性(longest identity)”的输出结果(使用-nobrief选项获得)作为同一性百分比，并计算如下：
(相同的残基x100)/(比对长度-比对中的空位总数)
出于本发明的目的，使用如在EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人,2000,同上)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版)取代矩阵。使用Needle标记为“最高同一性(longest identity)”的输出结果(使用-no brief选项获得)作为同一性百分比，并计算如下：
(相同的脱氧核糖核苷酸x100)/(比对长度-比对中的空位总数)
变体：术语“变体”意指具有水解酶活性的、在一个或多个(例如，若干个)位置处包含改变(即，取代、插入和/或缺失)的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占据某一位置的氨基酸；缺失意指去除占据某一位置的氨基酸；而插入意指在邻接并且紧随占据某一位置的氨基酸之后添加氨基酸。
同源物(即GH糖基水解酶的变体)的命名惯例。
出于本发明的目的，使用在SEQ ID NO 18中披露的多肽来确定另一种GH114糖基水解酶中的相应氨基酸残基。将另一种GH114糖基水解酶的氨基酸序列与SEQ ID NO 18中所披露的多肽进行比对，并且基于该比对，使用例如如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件(The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人,2000，Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch)，1970，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定与SEQ ID NO 18中所披露多肽中的任何氨基酸残基对应的氨基酸位置编号。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩阵。
可以通过使用若干种计算机程序，使用其相应的默认参数比对多个多肽序列来确定在另一种GH114糖基水解酶中的对应氨基酸残基的鉴定，这些计算机程序包括但不限于MUSCLE(通过对数期望值的多种序列比较；版本3.5或更新版本；Edgar,2004,NucleicAcids Research[核酸研究]32:1792-1797)、MAFFT(版本6.857或更新版本；Katoh和Kuma,2002,Nucleic Acids Research[核酸研究]30:3059-3066；Katoh等人,2005,NucleicAcids Research[核酸研究]33:511-518；Katoh和Toh,2007,Bioinformatics[生物信息学]23:372-374；Katoh等人,2009,Methods in Molecular Biology[分子生物学方法]537:39- 64；Katoh和Toh,2010，Bioinformatics[生物信息学]26:1899-1900)以及采用ClustalW的EMBOSS EMMA(1.83或更新版本；Thompson等人,1994,Nucleic Acids Research[核酸研究]22:4673-4680)。
当另一种酶与SEQ ID NO:18的多肽相背离使得传统的基于序列的比较方法不能检测其相互关系时(Lindahl和Elofsson,2000,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]295：613-615)，可以使用其他成对序列比较算法。在基于序列的搜索中较高的敏感度可使用搜索程序来获得，这些搜索程序利用多肽家族的概率表现(谱)来搜索数据库。例如，PSI-BLAST程序通过迭代数据库搜索过程来产生多个谱，并且能够检测远距离同源物(Atschul等人,1997,Nucleic Acids Res.[核酸研究]25:3389-3402)。如果多肽的家族或超家族具有在蛋白结构数据库中的一个或多个代表，可以实现甚至更高的敏感度。程序例如GenTHREADER(Jones,1999,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]287:797-815；McGuffin和Jones,2003,Bioinformatics[生物信息学]19:874-881)利用来自多种来源(PSI-BLAST、二级结构预测、结构比对谱、以及溶剂化势)的信息作为预测查询序列的结构折叠的神经网络的输入。类似地，Gough等人,2000,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]313:903-919的方法可用于将未知结构的序列与存在于SCOP数据库中的超家族模型进行比对。这些比对进而可以用于产生多肽的同源性模型，并且使用出于该目的而开发的多种工具可以评估此类模型的准确度。
对于已知结构的蛋白质，若干工具和资源可用于检索并产生结构比对。例如，蛋白的SCOP超家族已在结构上进行比对，并且那些比对是可访问的并且可下载的。可以使用多种算法如距离比对矩阵(Holm和Sander,1998,Proteins[蛋白质]33:88-96)或组合延伸(Shindyalov和Bourne,1998,Protein Engineering[蛋白质工程]11:739-747)比对两种或更多种蛋白质结构，并且这些算法的实施可以另外用于查询具有感兴趣结构的结构数据库，以便发现可能的结构同源物(例如，Holm和Park,2000,Bioinformatics[生物信息学]16:566-567)。
由于取决于所选择的变体亲本，不同的氨基酸可以存在于给定位置，因此在以下定义中用#1、#2等表示氨基酸位置。在描述本发明的变体中，为了便于参考，对以下所述的命名法进行了改编。采用公认的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。
取代：对于氨基酸取代，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、被取代的氨基酸。因此，在位置#1处的缬氨酸被丙氨酸取代被表示为“Val#1Ala”或“V#1A”。多个突变由加号(“+”)或逗号(，)分开，例如，“Val#1Ala+“Pro#2Gly”或V#1A,P#2G分别代表在位置#1和#2处的缬氨酸(V)和脯氨酸(P)被丙氨酸(A)和甘氨酸(G)取代。如果在给定位置中可以取代多于一种氨基酸，那么这些氨基酸被列于括号内，如[X]或{X}。因此，如果Trp和Lys两者都可以被取代，代替占据位置#1的氨基酸，这被表示为X#1{W,K}、X#1[W,K]或X#1[W/K]，其中X表示亲本GH114糖基水解酶(例如如SEQ ID NO:18所示的GH114糖基水解酶)位置处存在的氨基酸残基。在一些情况下，这些变体可以表示为#1{W,K}或X#2P，表示待取代的氨基酸取决于亲本而变化。为了方便，SEQ ID NO:18被用于对取代进行编号，并且指示SEQ ID NO:18中对应位置中的氨基酸(例如A64S)。然而，本领域技术人员将清楚的是，包含A64S的GH114糖基水解酶变体不限于在对应于SEQ ID NO:18的位置64的位置处具有丙氨酸的亲本GH114糖基水解酶。在位置64具有例如天冬酰胺的亲本GH114糖基水解酶中，本领域技术人员会将指定为A64S的突变翻译为N64S。如果亲本GH114糖基水解酶在位置64具有丝氨酸，本领域技术人员会认识到亲本GH114糖基水解酶在该位置不变。这同样适用于以下描述的缺失和插入。
缺失：对于氨基酸缺失，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、*。因此，在位置#1处的缬氨酸的缺失被表示为“Val#1*”或“V#1*”。多个缺失由加号(“+”)或逗号分开，例如“Val#1*+Pro#2*”或“V#1*,P#2*”。
插入：另外的氨基酸残基的插入，例如像在Val#1后插入赖氨酸可以被表示为：Val#1ValLys或V#1VK。可替代地，另外的氨基酸残基的插入，如在V#1后插入赖氨酸可以被表示为：*#1aK。当插入多于一个的氨基酸残基，例如像在#1后插入Lys和Ala时，这种插入可以被表示为：Val#1ValLysGly或V#1VKG。在此类情况下，还可以通过将小写字母添加到在所插入的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基位置编号处来对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号，在该实例中：*#1aK*#1bG。
多种改变：包含多种改变的变体由加号(“+”)或由逗号(，)分开，例如“Val#1Trp+Pro#2Gly”或“V#1W,P#2G”代表在位置#1和#2处的缬氨酸和脯氨酸分别如上描述的被色氨酸和甘氨酸取代。
不同改变：当可以在一个位置处引入不同的改变时，这些不同的改变由逗号分开，例如“Val#1Trp,Lys”或V#1W,K代表在位置#1处的缬氨酸被色氨酸或赖氨酸取代。因此，“Val#1Trp,Lys+Pro#2Asp”表示以下变体：“Val#1Trp+Pro#2Asp”、“Val#1Lys+Pro#2Asp”或V#1W,K+P#2D。
具体实施方式
在清洁过程中应用多种酶，每种酶都针对特定类型的污垢(如蛋白质、淀粉和油脂污垢)。酶现在是用于衣物和餐具洗涤的洗涤剂中的标准成分。这些商业酶的有效性提供了去除大部分污垢的洗涤剂。然而，由于此类有机物质的复杂性质，包含在许多生物膜中的有机物质(如EPS(细胞外聚合物))构成了具有挑战性的污垢类型。尚无可商购的洗涤剂有效地去除或减少与EPS相关的污垢。生物膜由其中细胞彼此黏附在一起或黏附至表面(如纺织品、餐具或硬表面)或另一种表面的任何群组的微生物产生。这些粘附细胞通常嵌入细胞外聚合物(EPS)的自生基质中，其构成生物膜总有机物质的50％至90％。EPS主要由多糖(胞外多糖)和蛋白质组成，但包括其他大分子，如DNA、脂质和人体物质。EPS是细菌沉降的构建材料，并且保持附着于细胞的外表面，或分泌到其生长培养基中。EPS是多种多样细菌产生的生物膜的发展形成和完整性所必需的。发明人已经表明，包含GH114糖基水解酶结构域的GH114多肽具有对EPS组分例如PEL的水解活性，并且因此具有减少或去除EPS组分的潜力，并且因此减少或去除EPS和生物膜相关的污垢，例如纺织品的pel。众所周知，衍生自生物体的多肽可以共享共同的结构元件，这可以通过比较一级结构(例如氨基酸序列)和根据序列同源性对多肽分组来鉴别。然而，通过比较多种多肽的三维(3D)结构也可以鉴别共同的结构元件。这两种方法都已应用于本发明中。
本发明的多肽包含在CAZY中定义的称为GH114的结构域(GH114，糖苷水解酶家族114，CAZy数据库，www.cazy.org,Lombard V等人2014,Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)。本发明的多肽包含GH114结构域和几个基序。一个实例是[VLI]XE[EDSQ]C(SEQID NO 60)，其位于瑟西拟无枝酸菌(SEQ ID NO 3)的位置182至186。可以由本发明的多肽包含的另一个基序是位于对应于瑟西拟无枝酸菌(SEQ ID NO 3)中的位置55至59的位置处的CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)。GH114中的多肽可以分成不同的子簇，其中我们将一个包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)的子簇表示为进化枝或家族VAE。该进化枝的另一个基序特征是CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选GH114糖基水解酶多肽，其优选包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)和/或基序CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)，其中该多肽具有水解活性，并且其中该多肽选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 15中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 18中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(r)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(s)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
一个优选的实施例涉及GH114糖基水解酶，其包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ IDNO 60)和/或基序CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
已将VAE进化枝鉴定为GH114糖基水解酶的特定组，其与其他GH114糖基水解酶相比具有特别高的底物活性，并且在例如深层清洁、恶臭、生物膜、EPS或pel减少或去除方面特别具有活性。与不包含在进化枝中的其他GH114糖基水解酶(即不具有SEQ ID NO 60和SEQ ID NO 61所示的两个基序)相比，优选地，VAE进化枝GH114糖基水解酶具有优异的洗涤性能。该进化枝包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)，其中SEQ ID NO 3中位置184的谷氨酸残基(E)在进化枝中完全保守并且是两个催化残基之一。该进化枝还包含基序CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)，其中SEQ ID NO 3中位置56的酪氨酸(Y)在进化枝中完全保守并且参与底物结合。VAE进化枝GH114糖基水解酶具有洗涤性能，即能够去除例如洗涤条件下的pel污渍，例如在衣物洗涤剂中。VAE进化枝GH114糖基水解酶具有洗涤性能，并且在清洁组合物中稳定，例如在衣物洗涤剂中。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选GH114糖基水解酶，其优选包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)和/或基序CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)，其中GH114糖基水解酶具有水解活性，并且其中GH114糖基水解酶包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下组成：与SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ IDNO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ IDNO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ IDNO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ IDNO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ IDNO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ IDNO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ IDNO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ EDNO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ IDNO 144、SEQ ID NO 145和SEQ ID NO 146中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选GH114糖基水解酶，其优选包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)和/或基序CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)，其中GH114糖基水解酶具有水解活性，并且其中GH114糖基水解酶包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下组成：与SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ IDNO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ IDNO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ IDNO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ IDNO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ IDNO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ IDNO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ IDNO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ IDNO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ IDNO 144、SEQ ID NO 145和SEQ ID NO 146中所示的多肽具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选GH114糖基水解酶，其优选包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)和/或基序CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)，其中GH114糖基水解酶具有水解活性，并且其中GH114糖基水解酶包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下组成：与SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ IDNO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ IDNO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ IDNO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ IDNO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO99、SEQ IDNO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ IDNO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ IDNO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ IDNO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ IDNO 144、SEQ ID NO 145和SEQ ID NO 146中所示的多肽具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选GH114糖基水解酶，其优选包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)和/或基序CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)，其中GH114糖基水解酶具有水解活性，并且其中GH114糖基水解酶包含选自下组的氨基酸序列，该组由以下组成：与SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ IDNO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ IDNO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ IDNO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ IDNO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO99、SEQ IDNO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ IDNO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ IDNO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ IDNO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ IDNO 144、SEQ ID NO 145和SEQ ID NO 146中所示的多肽具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
本发明的多肽优选属于簇VAE，其包含糖基水解结构域GH114并且具有水解活性。
VAE进化枝的多肽包括包含SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO79、SEQ ID NO80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ IDNO98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO131、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145或SEQ ID NO 146中所示的氨基酸序列的所有GH114糖基水解酶。可以将VAE进化枝(或VAE进化枝的多肽)分成另外的进化枝或亚进化枝(参见图1和图4)，也可以将其再次分成另外的进化枝，见下文。
这些亚进化枝被称为DYQ、AEE、WQW、IEY、ICY和DFAVL进化枝，并且包含具有水解酶活性的多肽，其中这些多肽包含GH114结构域并且可以属于VAE进化枝。
DYQ进化枝的多肽包含DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)基序，其对应于SEQ ID NO 3中位置23至27的氨基酸DYQIG，其中物种23处的D在该进化枝的多肽中完全保守。DYQ进化枝的另一个基序是FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)，其对应于参考多肽(SEQ ID NO 3)中的氨基酸60至64。DYQ进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO12、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO48、SEQ ID NO 51和SEQ ID NO 54，以及同源序列SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO131、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO144和SEQ ID NO 145。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)和/或FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
一个优选的实施例涉及糖基水解酶，优选是包含基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)和/或FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)和/或FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQID NO 85、SEQ ID NO86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ IDNO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144和SEQ ID NO 145的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。DYQ[LI]G基序(SEQ IDNO 62)中的甘氨酸G参与底物结合，并在进化枝中完全保守。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)和/或FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ IDNO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ IDNO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ IDNO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ IDNO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQID NO 134、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144和SEQ ID NO 145的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
可以将DYQ亚进化枝进一步分为另一个亚组，这里称为AEE进化枝(见图1或图4)。AEE进化枝包含具有水解酶活性的细菌来源的多肽，其中这些多肽包含GH114结构域并且属于VAE部分2进化枝(和DYQ进化枝)。进化枝的多肽包含基序实例AEECG(SEQ ID NO:64)，其对应于SEQ ID NO 3的位置183至187的氨基酸AEECG，其中所有氨基酸在AEE进化枝中完全保守。AEE进化枝的另一个基序是NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)，其对应于参考多肽(SEQ IDNO 3)中的氨基酸58至63。AEE进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ IDNO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24和SEQ ID NO 54以及同源序列SEQ IDNO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO132、SEQ IDNO 136、SEQ ID NO 138和SEQ ID NO 142。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含一个、两个、三个或全部四个基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)和/或NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个优选实施例涉及GH114糖基水解酶，优其包含一个、两个、三个或全部四个基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO64)和/或NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含一个、至、三个或全部四个基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)和/或NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO85、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 138和SEQ ID NO 142的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含一个、至、三个或全部四个基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)和/或NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 138和SEQ ID NO 142的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
VAE进化枝的另一个亚进化枝是IEY进化枝。IEY进化枝包含真菌来源的多肽，其包含GH114结构域并且属于VAE进化枝。进化枝的多肽包含基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ IDNO 68)，其对应于SEQ ID NO 18的位置230至239的氨基酸“GKPVLQIEYP”，其中E(对应于SEQID NO:3的位置237)在IEY进化枝中完全保守，是底物结合袋的一部分以及两个推定的催化位点残基之一。IEY进化枝的另一个基序是VICYF(SEQ ID NO:69)，其对应于(SEQ ID NO18)的氨基酸VICYF位置68至72，27其中CYF(对应于SEQ ID NO 18的位置70和72)在IEY进化枝中完全保守。
IEY进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18和SEQ ID NO 57以及同源序列SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ IDNO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ IDNO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ IDNO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO:133和SEQ ID NO 135。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)和/或基序VICYF(SEQ ID NO69)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个优选实施例涉及包含基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)和/或基序VICYF(SEQ ID NO 69)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶是与SEQ ID NO57中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)和/或基序VICYF(SEQ ID NO 69)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ IDNO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO98、SEQ IDNO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ IDNO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ IDNO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO:133和SEQ IDNO 135的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)和/或基序VICYF(SEQ ID NO 69)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 57、SEQ IDNO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ IDNO 78、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO:133和SEQ ID NO 135的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
可以将IEY亚进化枝进一步分为另一个亚组，这里称为ICY进化枝(见图1和图4)。ICY进化枝包含具有水解酶活性的真菌来源的多肽，其中这些多肽包含GH114结构域并且属于IEY进化枝(和VAE进化枝)。进化枝的多肽包含基序实例ICYFSA(SEQ ID NO 70)，其对应于SEQ ID NO 15中的氨基酸81至86。ICY进化枝的多肽的实例是SEQ ID NO 15和SEQ ID NO57以及同源序列SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 107、SEQ IDNO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 129和SEQ ID NO:133。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含一个、两个或所有三个基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)和/或ICYFSA(SEQ ID NO70)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个优选实施例涉及GH114糖基水解酶，其包含一个、两个或所有三个基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)和/或ICYFSA(SEQ ID NO70)，其中该糖基水解酶是与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含一个、两个或所有三个基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)和/或ICYFSA(SEQ ID NO70)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ IDNO 98、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 129和SEQ IDNO 133的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含一个、两个或所有三个基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)和/或ICYFSA(SEQ ID NO70)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ IDNO 15、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 107、SEQID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO127、SEQ ID NO 129和SEQ ID NO 133的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
可以将IEY亚进化枝进一步分为另一个亚组，这里称为DFAVL进化枝(见图1)。DFAVL进化枝包含具有水解酶活性的真菌来源的多肽，其中这些多肽包含GH114结构域并且属于IEY进化枝(和VAE进化枝)。基序中的亮氨酸L在进化枝中完全保守，并且相邻的谷氨酸E是两个催化活性位点残基之一。进化枝的多肽包含基序DFAVL(SEQ ID NO 71)，其对应于SEQ ID NO 18的位置199至203处的氨基酸DFAVL。
DFAVL进化枝的多肽的实例是SEQ ID NO 18以及同源序列SEQ ID NO 72、SEQ IDNO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ IDNO 97、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ IDNO 113、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 130和SEQ ID NO 135。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含一个、两个或所有三个基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)和/或DFAVL(SEQ ID NO 71)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶是与SEQ ID NO 18的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含一个、两个或所有三个基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)和/或DFAVL(SEQ ID NO 71)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO78、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ IDNO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ IDNO 121、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 130和SEQ ID NO 135的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含一个、两个或所有三个基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)和/或DFAVL(SEQ ID NO 71)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO18、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 102、SEQ IDNO 103、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ IDNO 119、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 130和SEQ ID NO 135的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
VAE进化枝的另一个亚进化枝是WQW进化枝。WQW进化枝包含细菌和真菌来源的多肽，其含有GH114结构域并且属于VAE进化枝，具有水解酶活性。进化枝的多肽包含基序实例WQWQL(SEQ ID NO 66)，其对应于弧菌属物种SEQ ID NO 27的氨基酸WQWQL位置30至34，其中WQW(对应于SEQ ID NO 27的位置30和32)在WQW进化枝中完全保守。WQW进化枝的另一个基序是[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)，其对应于弧菌属物种SEQ ID NO 27的氨基酸IGLKNDL位置171至177，其中LKN(对应于SEQ ID NO 27的位置173和175)在WQW进化枝中完全保守。WQW进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO 27所示的多肽。WQW进化枝的多肽的另一个实例包括SEQ ID NO 33和SEQ ID NO 36所示的多肽以及同源序列SEQ ID NO80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 95和SEQ ID NO 146。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含基序WQWQL(SEQ ID NO 66)和/或基序[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶是与SEQ ID NO 27的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含基序WQWQL(SEQ ID NO 66)和/或基序[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶是与SEQ ID NO 33的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含基序WQWQL(SEQ ID NO 66)和/或基序[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶是与SEQ ID NO 36的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含基序WQWQL(SEQ ID NO 66)和/或基序[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 89、SEQID NO 95和SEQ ID NO 146的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选是包含基序WQWQL(SEQ ID NO 66)和/或基序[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)的GH114糖基水解酶，其中该糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 95和SEQ ID NO 146的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的GH114糖基水解酶，其中多肽包含选自下组的基序中的一个或多个，该组由以下组成：[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ IDNO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)和DFAVL(SEQ ID NO 71)。
本发明的多肽对胞外多糖α-1,4-聚半乳糖胺具有活性，并且优选对pel具有活性，pel是例如一些生物膜基质的多糖组分。本发明的一个实施例涉及根据本发明的GH114糖基水解酶在减少或去除pel或α-1,4-聚半乳糖胺污渍的用途，例如其中包含在生物膜或生物膜EPS(细胞外聚合物质)中的pel或α-1,4-聚半乳糖胺。本发明的一个实施例涉及根据本发明的GH114糖基水解酶用于减少或去除生物膜的用途。特别地，本发明的GH114糖基水解酶多肽在清洁组合物如衣物或餐具洗涤洗涤剂中具有活性，并且可用于清洁过程如衣物和/或餐具洗涤，例如用于清洁有机污渍，例如死细胞材料、皮肤碎片、皮脂、汗液、油脂和其他源自例如人(体垢)或微生物但也源自环境(例如纺织品表面和硬表面)的污渍。特别地，本发明的GH114糖基水解酶多肽在清洁组合物如衣物或餐具洗涤剂中具有活性，并且可用于清洁过程如衣物和/或餐具洗涤，例如用于深层清洁例如纺织品和硬表面的表面。本发明还提供了一种预防、减少或去除物品中含有pel或α-1,4-多半乳糖胺的污渍的方法，该方法包括施加至少一种本发明的GH114糖基水解酶多肽(优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性)至该物品并且任选地冲洗该物品。该物品优选是纺织品或硬表面，例如非医疗硬表面，例如餐具。本披露还提供了一种用于从物品上减少或去除死细胞材料、皮肤碎片、皮脂、汗液和油脂污渍的方法，该方法包括将至少一种本发明的GH114糖基水解酶多肽施加到物品上并且任选地冲洗该物品。该物品优选是纺织品或硬表面，例如非医疗硬表面，例如餐具。
有机物(诸如生物膜EPS、细胞碎片和体垢)或其组分可具有类似胶的性质，并且存在于例如纺织品上的生物膜可导致物品或物品上的区域有“粘性”。污垢通常会粘附在粘性区域上，并且此类污垢已经显示出难以通过可商购的洗涤剂组合物去除。此外，当脏的衣物物品与不太脏的衣物物品一起洗涤时，洗涤液中存在的污物倾向于粘附于有机物(如EPS)上。结果是，衣物洗涤物品在洗涤后比洗涤前更“脏”。这种效果也可称为再沉积。本发明的一个实施例涉及GH114糖基水解酶多肽用于减少或去除再沉积的用途，该GH114糖基水解酶多肽包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO70)、DFAVL(SEQ ID NO 71)中的一个或多个。
本发明的一个实施例涉及GH114糖基水解酶多肽用于减少或去除物品例如被洗的物品的恶臭的用途，该GH114糖基水解酶多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ IDNO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO 71)。发明人出人意料地发现包含如上定义的一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ IDNO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO 71)的多肽可用于减少或去除衣物相关的α-1,4-聚半乳糖胺。本发明的一个实施例涉及具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的GH114糖基水解酶用于减少或去除物品例如纺织品的恶臭的用途，其中这些多肽包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO71)中的一个或多个。
本发明的多肽可以用于清洁组合物，并且可有效深度清洁表面(如织物)。本发明的多肽可有效减少或去除来自例如有机物的多糖污垢，例如聚乳糖胺。有机物的一个实例是生物膜，其由多种微生物产生。生物膜的细胞外聚合物基质EPS由多糖(如聚乳糖胺例如pel)、细胞外DNA和蛋白质组成。生物膜EPS可以是粘性的或粘合的，当其存在于纺织品上时，可引起污垢的再沉积或反染色，从而导致织物变灰。有机物质(如生物膜)的另一个缺点是恶臭，这是由于多种恶臭相关分子通常与有机物质(如生物膜)相关。本发明的一个方面涉及用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：
a.将物品暴露于包含多肽的洗涤液或包含多肽的清洁组合物中，该多肽选自由以下组成的组：包含SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145和SEQ ID NO 146中所示的序列的多肽或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，其中该多肽具有水解活性；
b.完成至少一个洗涤循环；以及
c.任选地冲洗该物品，
其中该物品是纺织品。
因此，本发明的多肽可用于防止、减少或去除恶臭以及用于防止、减少再沉积和改进白度。
本发明的一个实施例涉及多肽用于物品的深度清洁的用途，该多肽选自由以下组成的组：包含SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQID NO 144、SEQ ID NO 145和SEQ ID NO 146中所示的序列的多肽或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽，其中该物品是纺织品。
本发明的一个实施例涉及多肽用于减少或去除来自物品的死细胞材料、皮肤碎片、皮脂、汗液或油脂污渍的用途，该多肽选自由以下组成的组：包含SEQ ID NO 3、SEQ IDNO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ IDNO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ IDNO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ IDNO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO76、SEQ ID NO 77、SEQ IDNO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ IDNO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ IDNO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ IDNO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ IDNO140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145和SEQ ID NO 146中所示的序列的多肽或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，其中该物品是纺织品。
本发明的一个实施例涉及多肽的用途，该多肽选自由以下组成的组：包含SEQ IDNO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54SEQ ID NO57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ IDNO95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ IDNO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ IDNO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ IDNO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ IDNO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ IDNO 145和SEQ ID NO 146中所示的序列的多肽或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(i)用于防止、减少或去除物品的粘性；
(ii)用于预处理该物品上的污渍；
(iii)用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
(iv)用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
(v)用于维持或改进物品的白度；
(vi)用于防止、减少或去除该物品的恶臭，
其中该物品是纺织品。纺织品可以是例如棉或聚酯或其混合物。
其他方法和用途在下面的“用途”部分中描述。
本发明的一个实施例涉及多肽，该多肽与以下中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性：SEQ IDNO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54SEQ ID NO57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ IDNO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ IDNO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ IDNO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ IDNO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ IDNO 145或SEQ ID NO146。
本发明的一个实施例涉及GH114糖基水解酶多肽，其中该多肽具有水解活性，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，并且其中该多肽选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 15中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 18中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 55中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(r)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(s)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(t)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(u)多肽，该多肽与SEQ ID NO 72中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(v)多肽，该多肽与SEQ ID NO 73中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(w)多肽，该多肽与SEQ ID NO 74中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(x)多肽，该多肽与SEQ ID NO 75中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(y)多肽，该多肽与SEQ ID NO 76中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(z)多肽，该多肽与SEQ ID NO 77中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(aa)多肽，该多肽与SEQ ID NO 78中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(bb)多肽，该多肽与SEQ ID NO 79中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(cc)多肽，该多肽与SEQ ID NO 80中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(dd)多肽，该多肽与SEQ ID NO 81中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(ee)多肽，该多肽与SEQ ID NO 82中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(ff)多肽，该多肽与SEQ ID NO 83中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(gg)多肽，该多肽与SEQ ID NO 84中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(hh)多肽，该多肽与SEQ ID NO 85中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(ii)多肽，该多肽与SEQ ID NO 86中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(jj)多肽，该多肽与SEQ ID NO 87中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(kk)多肽，该多肽与SEQ ID NO 88中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(ll)多肽，该多肽与SEQ ID NO 89中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，多肽，该多肽与SEQ ID NO 90中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(mm)多肽，该多肽与SEQ ID NO 91中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，多肽，该多肽与SEQ ID NO 92中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(nn)多肽，该多肽与SEQ ID NO 93中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(oo)多肽，该多肽与SEQ ID NO 94中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(pp)多肽，该多肽与SEQ ID NO 95中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(qq)多肽，该多肽与SEQ ID NO 96中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(rr)多肽，该多肽与SEQ ID NO 97中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(ss)多肽，该多肽与SEQ ID NO 98中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(tt)多肽，该多肽与SEQ ID NO 99中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(uu)多肽，该多肽与SEQ ID NO 100中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(vv)多肽，该多肽与SEQ ID NO 101中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(ww)多肽，该多肽与SEQ ID NO 102中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(xx)多肽，该多肽与SEQ ID NO 103中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(yy)多肽，该多肽与SEQ ID NO 104中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(zz)多肽，该多肽与SEQ ID NO 105中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(aaa)多肽，该多肽与SEQ ID NO 106中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(bbb)多肽，该多肽与SEQ ID NO 107中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(ccc)多肽，该多肽与SEQ ID NO 108中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(ddd)多肽，该多肽与SEQ ID NO 109中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(eee)多肽，该多肽与SEQ ID NO 110中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(fff)多肽，该多肽与SEQ ID NO 111中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(ggg)多肽，该多肽与SEQ ID NO 112中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(hhh)多肽，该多肽与SEQ ID NO 113中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(iii)多肽，该多肽与SEQ ID NO 114中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(jjj)多肽，该多肽与SEQ ID NO 115中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(kkk)多肽，该多肽与SEQ ID NO 116中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(lll)多肽，该多肽与SEQ ID NO 117中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(mmm)多肽，该多肽与SEQ ID NO 118中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(nnn)多肽，该多肽与SEQ ID NO 119中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(ooo)多肽，该多肽与SEQ ID NO 120中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(ppp)多肽，该多肽与SEQ ID NO 121中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(qqq)多肽，该多肽与SEQ ID NO 122中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(rrr)多肽，该多肽与SEQ ID NO 123中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(sss)多肽，该多肽与SEQ ID NO 124中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(ttt)多肽，该多肽与SEQ ID NO 125中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(uuu)多肽，该多肽与SEQ ID NO 126中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(vvv)多肽，该多肽与SEQ ID NO 127中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(www)多肽，该多肽与SEQ ID NO 128中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(xxx)多肽，该多肽与SEQ ID NO 129中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(yyy)多肽，该多肽与SEQ ID NO 130中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(zzz)多肽，该多肽与SEQ ID NO 131中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(aaaa)多肽，该多肽与SEQ ID NO 132中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(bbbb)多肽，该多肽与SEQ ID NO 133中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(cccc)多肽，该多肽与SEQ ID NO 134中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(dddd)多肽，该多肽与SEQ ID NO 135中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(eeee)多肽，该多肽与SEQ ID NO 136中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(ffff)多肽，该多肽与SEQ ID NO 137中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(gggg)多肽，该多肽与SEQ ID NO 138中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(hhhh)多肽，该多肽与SEQ ID NO 139中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(iiii)多肽，该多肽与SEQ ID NO 140中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(jjjj)多肽，该多肽与SEQ ID NO 141中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(kkkk)多肽，该多肽与SEQ ID NO 142中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(llll)多肽，该多肽与SEQ ID NO 143中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
(mmmm)多肽，该多肽与SEQ ID NO 144中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，多肽，该多肽与SEQ ID NO 145中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，和
(nnnn)多肽，该多肽与SEQ ID NO 146中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
其中该多肽具有糖基水解酶活性，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性。
本发明的一个实施例涉及GH114糖基水解酶多肽，其中该多肽具有水解活性，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，并且其中该多肽选自由以下组成的组：SEQ ID NO 72、SEQID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ IDNO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ IDNO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ IDNO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ IDNO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145和SEQ ID NO 146中所示的多肽或与其具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
一个优选的实施例涉及GH114糖基水解酶多肽，其中该多肽具有水解活性，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，并且其中该多肽选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的另一个优选实施例涉及GH114糖基水解酶多肽，其包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO71)中的一个、两个、三个、四个或五个，其中该多肽具有水解活性，(优选？)α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，并且其中该多肽选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的另一个优选实施例涉及GH114糖基水解酶多肽，其包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO71)中的一个、两个、三个、四个或五个，其中该多肽具有水解活性，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，并且其中该多肽选自由以下组成的组：SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ IDNO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ IDNO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ IDNO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ IDNO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ IDNO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ IDNO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ IDNO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ IDNO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ IDNO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145和SEQ ID NO 146中所示的多肽或与其具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽。
在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 5的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 5的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 8的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 8的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 11的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 11的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 14的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 14的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一些实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:17的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO:7的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 20的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 20的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 23的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 23的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 26的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 26的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 29的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 29的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 32的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 32的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 35的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 35的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 38的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 38的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 41的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 41的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 44的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 44的成熟多肽的至少70％的水解活性。
v在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 47的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 47的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 50的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 50的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 53的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 53的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一个特定实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO 56的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，并且其中该多肽具有SEQ ID NO 56的成熟多肽的至少70％的水解活性。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 2的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 2的氨基酸1至246或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 3的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:3长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 6中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 5的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 5的氨基酸1至243或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 6中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 6中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 6的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:6长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 9中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 8的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 8的氨基酸1至237或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 9中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 9中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 9的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:9长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 12中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 11的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 11的氨基酸1至237或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 12中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 12中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 12的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:12长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 15中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 14的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 14的氨基酸1至274或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 15中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 15中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 15的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:15长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 18中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 17的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 17的氨基酸1至296或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 18中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 18中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 18的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:18长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 21中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 20的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 20的氨基酸1至237或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 21中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 21中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 21的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:21长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 24中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 23的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 23的氨基酸1至239或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 24中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 24中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 24的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:24长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 27中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 26的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 26的氨基酸1至234或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 27中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 27中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 27的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:27长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 30中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 29的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 29的氨基酸1至242或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 30中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 30中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 30的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:30长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 33中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 32的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 32的氨基酸1至238或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 33中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 33中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 33的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:33长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 36中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 35的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 35的氨基酸1至261或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 36中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 36中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 36的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:36长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 39中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 38的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 38的氨基酸1至265或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 39中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 39中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 39的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:39长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 42中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 41的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 41的氨基酸1至254或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 42中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 42中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 42的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:42长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 45中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 44的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 44的氨基酸1至268或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 45中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 45中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 45的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:45长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 48中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 47的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 47的氨基酸1至267或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 48中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 48中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 48的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:48长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 51中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 50的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 50的氨基酸1至251或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 51中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 51中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 51的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:51长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 54中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 53的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 53的氨基酸1至239或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 54中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 54中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 54的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:54长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含以下或由以下组成：SEQ ID NO 57中所示的氨基酸序列或其等位基因变体；或是其具有水解活性的片段。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 56的成熟多肽或由其组成。在另一方面中，该多肽包含SEQ ID NO 56的氨基酸1至279或由其组成。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO 57中所示的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO 57中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ ID NO 57的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有水解活性并且具有SEQ ID NO:57长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一个实施例中，该多肽优选地包含以下中所示的氨基酸序列或由其组成；
a)SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO144、SEQ ID NO 145或SEQ ID NO 146；
b)包含a)中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
c)包含a)的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或
d)是其片段，该片段具有水解活性(优选α-1,4-聚半乳糖胺酶活性)并且具有a)的多肽中的任何一个的长度的至少50％，如至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。
在一些方面中，本发明涉及包含SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 6中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 9中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 12中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 15中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 18中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 21中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 24中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 27中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 30中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 33中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 36中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 39中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 42中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 45中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 48中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 51中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 54中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在某些方面，本发明涉及包含SEQ ID NO 57中所示氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面，本发明涉及多肽，该多肽包含以下中所示的氨基酸序列或由以下中所示的氨基酸序列组成：SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQID NO 144、SEQ ID NO 145或SEQ ID NO 146。
在一些实施例中，本发明涉及在一个或多个(例如，若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 3中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中，引入SEQ ID NO3中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 6中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO 6中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 9中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO 9中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 12中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO12中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 15中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO15中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 18中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO18中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 21中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO21中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 24中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO24中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 27中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO27中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 30中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO30中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 33中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO33中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 36中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO36中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 39中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO39中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 42中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO42中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 45中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO45中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 48中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO48中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 51中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO51中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 54中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO54中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 57中所示的成熟多肽的变体，其在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入。在一些实施例中，引入到SEQ ID NO57中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145或SEQ ID NO 146中所示的成熟多肽的在一个或多个(例如，几个)位置上包含取代、缺失和/或插入的变体。在一些实施例中，引入以上所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数量多达10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
一个特定的实施例涉及GH114糖基水解酶变体，其与具有SEQ ID NO:18的GH114糖基水解酶相比包含一个或多个选自下组的改变，该组由以下组成：K1A、L11I、C23V、T39A、A64S、N73Q、N73R、N73K、G75V、A76M、A76R、A76V、L77V、L77A、L77T、L77K、Q78E、Q78M、Q78K、Q78N、Q78R、D79K、D79N、D79P、D79Q、D79V、D79W、D79T、W80M、W80Y、W80E、W80I、W80R、D81V、S85A、S85G、S85W、S85C、K86D、K86E、K89F、K86W、K89D、K89A、K89E、K89P、K89S、K89V、K89W、E90A、E90D、E90N、E90S、V91M、V91I、V91S、V91T、I92E、S97G、Y98W、D101*、S102*、E104*、E116D、E116K、T119K、I124L、I124V、D136E、D144*、D145E、D145G、E146*、K152D、K152G、K154E、K154T、K167D、K167T、K173T、Q178N、N209T、N209S、P212*、D222E、D222W、L234F、V242S、E243A、E243S、E243L、E243P、E243V、K244P、K244L、K244Q、K244R、T245C、T245D、G246Q、K247A、K247C、K247E、K247R、K247S、K247V、K247M、V248M、V248L、A250D、A250E、A250P、S251A、S251C、S251E、S251W、S251G、S251K、S251L、S251Q、S251T、N253C、N253E、N253L、N253M、N253A、N253P、N253W、K254M、K254R、K254A、K254C、K254D、K254E、K254H、K254V、K254T、Y256E、Y256G、Y256M、Y256R、Y256S、Y256W、Y256T、T258A、T258G、T258Q、T258D、T258E、T258S、A259E、A259P、E260G、E260K、E260Q、E260R、E260T、E260W、D261A、D261L、D261R、E262A、E262F、E262G、E262I、E262K、E262L、E262M、E262Q、E262R、E262S、E262T、E262V、E262W、E262C、E262D、K264R、I270L、G279E、G279K、G279R、G279S、K295N和Y296*，其中这些位置对应于SEQ ID NO:18的位置(根据SEQ ID NO:18编号)，其中该变体具有水解酶活性，优选α-1,4-聚半乳糖胺酶活性。
一个特定的实施例涉及GH114糖基水解酶变体，其与具有SEQ ID NO:18的GH114糖基水解酶相比包含一个或多个选自下组的改变，该组由以下组成：K1A、L11I、C23V、T39A、A64S、N73Q、N73R、N73K、G75V、A76M、A76R、A76V、L77V、L77A、L77T、L77K、Q78E、Q78M、Q78K、Q78N、Q78R、D79K、D79N、D79P、D79Q、D79V、D79W、D79T、W80M、W80Y、W80E、W80I、W80R、D81V、S85A、S85G、S85W、S85C、K86D、K86E、K89F、K86W、K89D、K89A、K89E、K89P、K89S、K89V、K89W、E90A、E90D、E90N、E90S、V91M、V91I、V91S、V91T、I92E、S97G、Y98W、D101*、S102*、E104*、E116D、E116K、T119K、I124L、I124V、D136E、D144*、D145E、D145G、E146*、K152D、K152G、K154E、K154T、K167D、K167T、K173T、Q178N、N209T、N209S、P212*、D222E、D222W、L234F、V242S、E243A、E243S、E243L、E243P、E243V、K244P、K244L、K244Q、K244R、T245C、T245D、G246Q、K247A、K247C、K247E、K247R、K247S、K247V、K247M、V248M、V248L、A250D、A250E、A250P、S251A、S251C、S251E、S251W、S251G、S251K、S251L、S251Q、S251T、N253C、N253E、N253L、N253M、N253A、N253P、N253W、K254M、K254R、K254A、K254C、K254D、K254E、K254H、K254V、K254T、Y256E、Y256G、Y256M、Y256R、Y256S、Y256W、Y256T、T258A、T258G、T258Q、T258D、T258E、T258S、A259E、A259P、E260G、E260K、E260Q、E260R、E260T、E260W、D261A、D261L、D261R、E262A、E262F、E262G、E262I、E262K、E262L、E262M、E262Q、E262R、E262S、E262T、E262V、E262W、E262C、E262D、K264R、I270L、G279E、G279K、G279R、G279S、K295N和Y296*，其中这些位置对应于SEQ ID NO:18的位置(根据SEQ ID NO:18编号)，其中该变体与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO54SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO144、SEQ ID NO 145或SEQ ID NO 146中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％但小于100％序列同一性，并且其中该变体具有水解酶活性，优选α-1,4-聚半乳糖胺酶活性。
一个特定的实施例涉及GH114糖基水解酶变体，其与具有SEQ ID NO:18的GH114糖基水解酶相比包含一个或多个选自下组的改变，该组由以下组成：K1A、L11I、C23V、T39A、A64S、N73Q、N73R、N73K、G75V、A76M、A76R、A76V、L77V、L77A、L77T、L77K、Q78E、Q78M、Q78K、Q78N、Q78R、D79K、D79N、D79P、D79Q、D79V、D79W、D79T、W80M、W80Y、W80E、W80I、W80R、D81V、S85A、S85G、S85W、S85C、K86D、K86E、K89F、K86W、K89D、K89A、K89E、K89P、K89S、K89V、K89W、E90A、E90D、E90N、E90S、V91M、V91I、V91S、V91T、I92E、S97G、Y98W、D101*、S102*、E104*、E116D、E116K、T119K、I124L、I124V、D136E、D144*、D145E、D145G、E146*、K152D、K152G、K154E、K154T、K167D、K167T、K173T、Q178N、N209T、N209S、P212*、D222E、D222W、L234F、V242S、E243A、E243S、E243L、E243P、E243V、K244P、K244L、K244Q、K244R、T245C、T245D、G246Q、K247A、K247C、K247E、K247R、K247S、K247V、K247M、V248M、V248L、A250D、A250E、A250P、S251A、S251C、S251E、S251W、S251G、S251K、S251L、S251Q、S251T、N253C、N253E、N253L、N253M、N253A、N253P、N253W、K254M、K254R、K254A、K254C、K254D、K254E、K254H、K254V、K254T、Y256E、Y256G、Y256M、Y256R、Y256S、Y256W、Y256T、T258A、T258G、T258Q、T258D、T258E、T258S、A259E、A259P、E260G、E260K、E260Q、E260R、E260T、E260W、D261A、D261L、D261R、E262A、E262F、E262G、E262I、E262K、E262L、E262M、E262Q、E262R、E262S、E262T、E262V、E262W、E262C、E262D、K264R、I270L、G279E、G279K、G279R、G279S、K295N和Y296*，其中这些位置对应于SEQ ID NO:18的位置(根据SEQ ID NO:18编号)，其中该变体与SEQ ID NO:18中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％但少于100％的序列同一性，并且其中该变体具有水解酶活性，优选α-1,4-聚半乳糖胺酶活性。
一个实施例涉及GH114糖基水解酶变体，其与具有SEQ ID NO:18的GH114糖基水解酶相比包含一个或多个选自下组的取代，该组由以下组成：K1A、L11I、C23V、T39A、A64S、N73Q、N73R、N73K、G75V、A76M、A76R、A76V、L77V、L77A、L77T、L77K、Q78E、Q78M、Q78K、Q78N、Q78R、D79K、D79N、D79P、D79Q、D79V、D79W、D79T、W80M、W80Y、W80E、W80I、W80R、D81V、S85A、S85G、S85W、S85C、K86D、K86E、K89F、K86W、K89D、K89A、K89E、K89P、K89S、K89V、K89W、E90A、E90D、E90N、E90S、V91M、V91I、V91S、V91T、I92E、S97G、Y98W、E116D、E116K、T119K、I124L、I124V、D136E、D145E、D145G、K152D、K152G、K154E、K154T、K167D、K167T、K173T、Q178N、N209T、N209S、D222E、D222W、L234F、V242S、E243A、E243S、E243L、E243P、E243V、K244P、K244L、K244Q、K244R、T245C、T245D、G246Q、K247A、K247C、K247E、K247R、K247S、K247V、K247M、V248M、V248L、A250D、A250E、A250P、S251A、S251C、S251E、S251W、S251G、S251K、S251L、S251Q、S251T、N253C、N253E、N253L、N253M、N253A、N253P、N253W、K254M、K254R、K254A、K254C、K254D、K254E、K254H、K254V、K254T、Y256E、Y256G、Y256M、Y256R、Y256S、Y256W、Y256T、T258A、T258G、T258Q、T258D、T258E、T258S、A259E、A259P、E260G、E260K、E260Q、E260R、E260T、E260W、D261A、D261L、D261R、E262A、E262F、E262G、E262I、E262K、E262L、E262M、E262Q、E262R、E262S、E262T、E262V、E262W、E262C、E262D、K264R、I270L、G279E、G279K、G279R、G279S和K295N，其中这些位置对应于SEQ ID NO:18的位置(根据SEQID NO:18编号)，其中该变体与SEQ ID NO:18中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％但少于100％的序列同一性，并且其中该变体具有水解酶活性，优选α-1,4-聚半乳糖胺酶活性。
一个特定的实施例涉及GH114糖基水解酶变体，其与具有SEQ ID NO:18的GH114糖基水解酶相比包含一个或多个选自下组的缺失，该组由以下组成：D101*、S102*、E104*、D144*、E146*、P212*和Y296*，其中这些位置对应于SEQ ID NO:18的位置(根据SEQ ID NO:18编号)，其中该变体与SEQ ID NO:18中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％但少于100％的序列同一性，并且其中该变体具有水解酶活性，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性。
GH114糖基水解酶可包含两个或更多个选自下组的改变，该组由以下组成：K1A、L11I、C23V、T39A、A64S、N73Q、N73R、N73K、G75V、A76M、A76R、A76V、L77V、L77A、L77T、L77K、Q78E、Q78M、Q78K、Q78N、Q78R、D79K、D79N、D79P、D79Q、D79V、D79W、D79T、W80M、W80Y、W80E、W80I、W80R、D81V、S85A、S85G、S85W、S85C、K86D、K86E、K89F、K86W、K89D、K89A、K89E、K89P、K89S、K89V、K89W、E90A、E90D、E90N、E90S、V91M、V91I、V91S、V91T、I92E、S97G、Y98W、D101*、S102*、E104*、E116D、E116K、T119K、I124L、I124V、D136E、D144*、D145E、D145G、E146*、K152D、K152G、K154E、K154T、K167D、K167T、K173T、Q178N、N209T、N209S、P212*、D222E、D222W、L234F、V242S、E243A、E243S、E243L、E243P、E243V、K244P、K244L、K244Q、K244R、T245C、T245D、G246Q、K247A、K247C、K247E、K247R、K247S、K247V、K247M、V248M、V248L、A250D、A250E、A250P、S251A、S251C、S251E、S251W、S251G、S251K、S251L、S251Q、S251T、N253C、N253E、N253L、N253M、N253A、N253P、N253W、K254M、K254R、K254A、K254C、K254D、K254E、K254H、K254V、K254T、Y256E、Y256G、Y256M、Y256R、Y256S、Y256W、Y256T、T258A、T258G、T258Q、T258D、T258E、T258S、A259E、A259P、E260G、E260K、E260Q、E260R、E260T、E260W、D261A、D261L、D261R、E262A、E262F、E262G、E262I、E262K、E262L、E262M、E262Q、E262R、E262S、E262T、E262V、E262W、E262C、E262D、K264R、I270L、G279E、G279K、G279R、G279S、K295N和Y296*。
一个实施例涉及GH114糖基水解酶变体，其与具有SEQ ID NO:18的GH114糖基水解酶相比包含一个或多个选自下组的改变，该组由以下组成：G230D+A259P、I172V+A250D、D101*+A166V、E103*+E104*、N160D+K254S、T119M+P212*、W80R+D145G、W80R+K154T和Y100*+D101*，其中变体与SEQ ID NO 18具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％但小于100％的序列同一性。
一个实施例涉及用于获得GH114糖基水解酶变体的方法，该方法包括：
a)向亲本GH114糖基水解酶，例如SEQ ID NO 18中引入下列突变中的一个或多个：K1A、L11I、C23V、T39A、A64S、N73Q、N73R、N73K、G75V、A76M、A76R、A76V、L77V、L77A、L77T、L77K、Q78E、Q78M、Q78K、Q78N、Q78R、D79K、D79N、D79P、D79Q、D79V、D79W、D79T、W80M、W80Y、W80E、W80I、W80R、D81V、S85A、S85G、S85W、S85C、K86D、K86E、K89F、K86W、K89D、K89A、K89E、K89P、K89S、K89V、K89W、E90A、E90D、E90N、E90S、V91M、V91I、V91S、V91T、I92E、S97G、Y98W、D101*、S102*、E104*、E116D、E116K、T119K、I124L、I124V、D136E、D144*、D145E、D145G、E146*、K152D、K152G、K154E、K154T、K167D、K167T、K173T、Q178N、N209T、N209S、P212*、D222E、D222W、L234F、V242S、E243A、E243S、E243L、E243P、E243V、K244P、K244L、K244Q、K244R、T245C、T245D、G246Q、K247A、K247C、K247E、K247R、K247S、K247V、K247M、V248M、V248L、A250D、A250E、A250P、S251A、S251C、S251E、S251W、S251G、S251K、S251L、S251Q、S251T、N253C、N253E、N253L、N253M、N253A、N253P、N253W、K254M、K254R、K254A、K254C、K254D、K254E、K254H、K254V、K254T、Y256E、Y256G、Y256M、Y256R、Y256S、Y256W、Y256T、T258A、T258G、T258Q、T258D、T258E、T258S、A259E、A259P、E260G、E260K、E260Q、E260R、E260T、E260W、D261A、D261L、D261R、E262A、E262F、E262G、E262I、E262K、E262L、E262M、E262Q、E262R、E262S、E262T、E262V、E262W、E262C、E262D、K264R、I270L、G279E、G279K、G279R、G279S、K295N和Y296*，其中这些位置对应于SEQ ID NO:18的位置(根据SEQ ID NO:18编号)并且其中所述变体具有水解酶活性，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，并且
b)回收所述变体。
该氨基酸改变可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或小的延伸，其通过改变净电荷或另一官能(例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
保守取代的实例是在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。
可以根据本领域中已知的程序，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在所述分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且测试所得分子的水解活性以鉴别对于所述分子的活性关键的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性部位还可通过对结构的物理分析来确定，如由下述技术确定：核磁共振、晶体学(crystallography)、电子衍射、或光亲和标记，连同对推定的接触位点(contact site)氨基酸进行突变。参见例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法，随后进行相关的筛选程序可以做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，所述相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625披露的那些。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145；Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。
该多肽可以是杂合多肽，其中一种多肽的一个区域在另一种多肽的一个区域的N-末端或C-末端处融合。
该多肽可以是融合多肽或可切割的融合多肽，其中另一种多肽在本发明所示的多肽的N-末端或C-末端处融合。通过将编码另一种多肽的多核苷酸融合于本发明的多核苷酸来产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于一个或多个相同的启动子和终止子的控制之下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(Cooper等人,1993,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；Dawson等人,1994,Science[科学]266:776-779)。
融合多肽还可包含两个多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，所述位点被切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：Martin等人,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576；Svetina等人,2000,J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；Ward等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:498-503；和Contreras等人,1991,Biotechnology[生物技术]9:378-381；Eaton等人,1986,Biochemistry[生物化学]25:505-512；Collins-Racie等人,1995，Biotechnology[生物技术]13:982-987；Carter等人,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics[蛋白质：结构、功能以及遗传学]6:240-248；以及Stevens,2003,Drug Discovery World[世界药物发现]4:35-48。
具有水解活性的多肽来源
本发明的具有水解活性的多肽可从任何属的微生物获得。出于本发明的目的，如本文结合给定来源使用的术语“获得自”应当意指由多核苷酸编码的多肽是由该来源或由已经插入了来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一个方面中，获得自给定来源的多肽是细胞外分泌的。在一个方面中，该多肽是拟无枝酸菌属多肽，例如获得自瑟西拟无枝酸菌或拟无枝酸菌属物种的多肽。在一个方面中，该多肽是链霉菌属多肽，例如获自链霉菌属物种、米哈希斯链霉菌或微小链霉菌的多肽。在一个方面中，该多肽是镰孢属多肽，例如获得自腐皮镰孢的多肽。在一个方面中，该多肽是野野村菌属多肽，例如从广州野野村菌中获得的多肽。在一个方面中，该多肽是弧菌属多肽，例如获得自弧菌属物种的多肽。在一个方面中，该多肽是微杆菌属多肽，例如获得自氧化微杆菌或蔗糖微杆菌的多肽。在一个方面中，该多肽是冰冻小杆菌属(Frigoribacterium)多肽，例如获得自费恩冰冻小杆菌的多肽。在一个方面中，该多肽是Serinibacter多肽，例如获得自Serinibacter sp.的多肽。在一个方面中，该多肽是厄氏菌属(Oerskovia)多肽，例如获得自渐变厄氏菌的多肽。在一个方面中，该多肽是Agreia多肽，例如获得自Agreia pratensis的多肽。在一个方面中，该多肽是植物杆菌属(Plantibacter)多肽，例如获得自黄植物杆菌的多肽。在一个方面中，该多肽是脚瓶盘菌属(Urnula)多肽，例如获得自浅脚瓶盘菌的多肽。
在一个方面中，该多肽是获自以下的多肽：球毛壳菌、Stilbella fimetaria、纤毛周刺座霉(Volutella ciliata)、表皮粘帚霉(Clonostachys epichloe)、漆斑菌属物种(Myrothecium sp.)、皮鲁枝葡萄孢(Botryotrichum piluliferum)、漆斑菌属物种(Myrothecium sp.)、拟无枝酸菌属物种(Amycolatopsis sp.)、甲基热菌科细菌(Methylothermaceae)B42、尼加特拟无枝酸菌(Amycolatopsis niigatensis)、链霉菌属物种(Streptomyces sp.)AA4、阿尔巴无枝酸菌(Amycolatopsis alba)DSM 44262、灰橙链霉菌(Streptomyces griseoaurantiacus)、阿比达库茨涅尔氏菌(Kutzneria albida)、微杆菌属物种、嗜油微细菌微杆菌(Microbacterium oleivorans)O827CG、阿尔巴拟诺卡氏菌(Nocardiopsis alba)、氧化微杆菌、Agreia pratensis、豆科植物微杆菌(Microbacteriumlemovicicum)、Xylanibacterium sp.、海洋沉积短小杆菌(Curtobacteriumoceanosedimentum)、迟缓白色杆菌(Leucobacter tardus)、阿姆西盐水杆菌(Salinibacterium amurskyense)、念珠菌新丛赤壳(Neonectria candida)、紧凑型镰孢(Fusarium compactum)、紧凑型镰孢(Fusariumcompactum)、燕麦镰孢(Fusariumavenaceum)、峨眉光黑壳(Preussia aemulans)、层生镰孢(Fusarium proliferatum)、砖红镰孢(Fusarium lateritium)、层生镰孢(Fusarium proliferatum)、棘皮毛壳菌(Chaetomium ancistrocladum)、串珠镰孢(Fusarium verticillioides)、砖红镰孢(Fusarium lateritium)、毛壳菌属物种ZY474、柱顶孢霉属物种(Scytalidium sp.)T045-6)、枝顶孢霉属物种(Acremonium sp.)、瘤突毛壳(Chaetomium strumarium)、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)、温度镰孢(Fusarium temperatum)、台东卡斯热子囊菌(Thermoascus taitungiacus)、Plectosphaerella alismatis、Thermothelomyceshinnuleus、Ovatospora brasiliensis、锐顶镰孢(Fusarium acuminatum)、杜鹃花镰孢(Fusarium euwallaceae)、新孢子镰孢(Fusarium neocosmosporiellum)、南极洲梭孢壳(Thielavia antarctica)、嗜热枝顶孢霉(Acremonium thermophilum)、Crassicarponhotsonii、Helicosporium sp、拟棘壳孢菌属物种(Pyrenochaetopsis sp.)、融合枝顶孢(Acremonium cf.fusifioides)、Rasamsonia byssochlamydoides、二色孢枝顶孢霉(Acremonium dichromosporum)、杜邦蒂嗜热丝孢菌(Thermomyces dupontii)、Ovatosporamedusarum、硬柄小皮伞(Marasmius oreades)、尼加特拟无枝酸菌(Amycolatopsisniigatensis)、壮观丝衣霉(Byssochlamys spectabilis)、鬼伞属物种(Coprinopsis sp)、接骨木镰孢(Fusarium sambucinum)、东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)DSM46075、黄原胶碱性群落D、哥伦比亚水生角质菌帕利达亚种(Pilimelia columelliferasubsp.pallida)、纤维单胞菌(Cellulomonas cellasea)、谷蛋白B富集型AX2、微杆菌属物种、活泼节杆菌(Arthrobacter agilis)、大泡拟无枝酸菌(Amycolatopsis bullii)、氧化微杆菌、叶球形微杆菌(Microbacterium phyllosphaerae)或独岛海藻球菌(Phycicoccusdokdonensis)。
在一个实施例中，GH114糖基水解酶获得自拟无枝酸菌属，优选瑟西拟无枝酸菌或拟无枝酸菌属物种，其中GH114糖基水解酶包含一个或多个或甚至全部基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)。在一个实施例中，GH114糖基水解酶获得自拟无枝酸菌属，优选瑟西拟无枝酸菌或拟无枝酸菌属物种，其中GH114糖基水解酶是具有以下的多肽：
a)与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性；
b)与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性；或
c)与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。
在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自链霉菌属，优选微小链霉菌或米哈希斯链霉菌，其中GH114糖基水解酶包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)中的一个或多个或甚至全部。在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自链霉菌属，优选微小链霉菌或米哈希斯链霉菌，其中GH114糖基水解酶是：
a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；或
c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自镰孢属，优选地腐皮镰孢，其中GH114糖基水解酶包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO 71)中的一个或多个或甚至全部。在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自镰孢属，优选地腐皮镰孢，其中GH114糖基水解酶是与SEQ ID NO 15中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或与SEQ ID NO 18中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自野野村菌属，优选广州野野村菌，其中GH114糖基水解酶包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO64)，NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)中的一个或多个或甚至全部。在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自野野村菌属，优选广州野野村菌，其中GH114糖基水解酶与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自弧菌属，优选弧菌属物种，其中GH114糖基水解酶包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)中的一个或多个或甚至全部。在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自弧菌属，优选弧菌属物种，其中GH114糖基水解酶与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自微杆菌属，优选蔗糖微杆菌或氧化微杆菌，其中GH114糖基水解酶包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)中的一个或多个或甚至两个。在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自微杆菌属，优选蔗糖微杆菌或或氧化微杆菌，其中GH114糖基水解酶是与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
在一实施例中，GH114糖基水解酶获自冰冻小杆菌属，优选费恩冰冻小杆菌，其中GH114糖基水解酶包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)中的一个或多个或甚至全部。在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自冰冻小杆菌属，优选费恩冰冻小杆菌，其中GH114糖基水解酶与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自Serinibacter，优选Serinibacter sp，其中GH114糖基水解酶包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)中的一个或多个或甚至全部。在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自Serinibacter，优选Serinibacter sp.，其中GH114糖基水解酶与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自厄氏菌属，优选地渐变厄氏菌，其中GH114糖基水解酶包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)中的一个或多个或甚至全部。在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自厄氏菌属，优选地渐变厄氏菌，其中GH114糖基水解酶与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自Agreia，优选Agreia pratensis，其中GH114糖基水解酶包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)中的一个或多个或甚至全部。在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自Agreia，优选Agreia pratensis，其中GH114糖基水解酶与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自植物杆菌属，优选黄植物杆菌，其中GH114糖基水解酶包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)中的一个或多个或甚至全部。在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自植物杆菌属，优选黄植物杆菌，其中GH114糖基水解酶与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自脚瓶盘菌属，优选地浅脚瓶盘菌，其中GH114糖基水解酶包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQID NO 61)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ IDNO 70)中的一个或多个或甚至全部。在一个实施例中，GH114糖基水解酶获自脚瓶盘菌属，优选地浅脚瓶盘菌，其中GH114糖基水解酶与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
应理解的是，对于前述物种，本发明涵盖完全和不完全阶段(perfect andimperfect states)，和其他分类学等同物(equivalent)，例如无性型，而与它们已知的种名无关。本领域的技术人员会容易地识别适当等同物的身份。
这些物种的菌株可容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，例如美国典型培养物保藏中心(ATCC)、德国微生物菌种保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(CentraalbureauVoor Schimmelcultures，CBS)和美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(Agricultural Research Service Patent Culture Collection,Northern RegionalResearch Center，NRRL)。
可以使用以上提到的探针从其他来源，包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从天然材料(例如，土壤、堆肥、水等)获得的DNA样品鉴定和获得该多肽。用于从天然生境中直接分离微生物和DNA的技术是本领域熟知的。然后可以通过类似地筛选另一微生物的基因组DNA或cDNA文库或混合的DNA样品来获得编码该多肽的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测到编码多肽的多核苷酸，则可以通过利用本领域普通技术人员已知的技术(参见例如，Sambrook等人,1989,同上)分离或克隆多核苷酸。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明的多肽的多核苷酸，如本文中所述。在一些实施例中，编码本发明中所示的多肽的多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 1的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 4的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 7的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 10的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 13的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 16的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 19的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 22的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 25的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 28的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 31的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 34的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 37的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 40的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 43的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 46的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 49的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 52的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中，本发明涉及编码具有水解活性的多肽的多核苷酸，其中该多核苷酸与SEQ ID NO 55的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在另外的实施例中，该多核苷酸已经被分离。
一个实施例涉及分离的核酸序列，该分离的核酸序列选自由以下组成的组：
a)编码酶的核酸序列，该酶包含选自以下氨基酸序列的氨基酸序列：SEQ ID NO72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ IDNO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ IDNO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ IDNO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ IDNO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145和SEQ IDNO 146；
b)编码选自(a)的GH114糖基水解酶的片段的核酸序列，其中该片段具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性；以及
c)编码多肽的核酸序列，该多肽具有与选自(a)的GH114糖基水解酶具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的氨基酸序列，并具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性。
一个实施例涉及分离的核酸序列，该分离的核酸序列选自由以下组成的组：
a)编码酶的核酸序列，该酶包含选自以下氨基酸序列的氨基酸序列：SEQ ID NO72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ IDNO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ IDNO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ IDNO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ IDNO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145和SEQ IDNO 146；
b)编码选自(a)的GH114糖基水解酶的片段的核酸序列，其中该片段具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性；以及
c)编码多肽的核酸序列，该多肽具有与选自(a)的GH114糖基水解酶具有至少70％序列同一性的氨基酸序列，并具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性。
一个实施例涉及分离的核酸序列，该分离的核酸序列选自由以下组成的组：
a)编码酶的核酸序列，该酶包含选自以下氨基酸序列的氨基酸序列：SEQ ID NO72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ IDNO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ IDNO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ IDNO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ IDNO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145和SEQ IDNO 146；
b)编码选自(a)的GH114糖基水解酶的片段的核酸序列，其中该片段具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性；以及
c)编码多肽的核酸序列，该多肽具有与选自(a)的GH114糖基水解酶具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性。
一个实施例涉及分离的核酸序列，该分离的核酸序列选自由以下组成的组：
a)编码酶的核酸序列，该酶包含选自以下氨基酸序列的氨基酸序列：SEQ ID NO72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ IDNO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ IDNO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ IDNO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ IDNO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145和SEQ IDNO 146；
b)编码选自(a)的GH114糖基水解酶的片段的核酸序列，其中该片段具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性；以及
c)编码多肽的核酸序列，该多肽具有与选自(a)的GH114糖基水解酶具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性。
用于分离或克隆多核苷酸的技术是本领域已知的且包括从基因组DNA或cDNA或其组合进行分离。来自基因组DNA的多核苷酸的克隆可以例如通过使用众所周知的聚合酶链式反应(PCR)或用以对具有共有的结构特征的克隆的DNA片段进行检测的表达库抗体筛选来实现。参见例如，Innis等人,1990,PCR:A Guide to Methods and Application[PCR：方法和应用指南],Academic Press[学术出版社],纽约。可以使用其他核酸扩增程序例如连接酶链式反应(LCR)、连接激活转录(LAT)和基于多核苷酸的扩增(NASBA)。编码本发明的多肽的多核苷酸的修饰对于合成基本上类似于该多肽的多肽可以是必需的。术语“基本上类似”于该多肽是指多肽的非天然存在的形式。
核酸构建体
本发明还涉及核酸构建体，这些核酸构建体包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，在与控制序列相容的条件下，所述一个或多个控制序列指导所述编码序列在适合的宿主细胞中的表达。
可用许多方式操作该多核苷酸以提供多肽的表达。取决于表达载体，在多核苷酸插入载体之前对其进行操作可能是理想的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
所述控制序列可为启动子，即，被宿主细胞识别用于表达编码本发明的多肽的多核苷酸的多核苷酸。该启动子包含介导多肽的表达的转录控制序列。该启动子可以是在宿主细胞中显示出转录活性的任何多核苷酸，包括变体、截短型及杂合型启动子，并且可以从编码与该宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获得。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明核酸构建体的转录的适合启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus,1994,Molecular Microbiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人,1988,Gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:21-25)。其他启动子描述于Gilbert等人,1980,Scientific American[科学美国人]242:74-94的“Usefulproteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]”；和在Sambrook等人,1989,同上。串联启动子的实例披露于WO 99/43835中。
用于在丝状真菌宿主细胞中指导本发明核酸构建体的转录的适合启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：构巢曲霉乙酰胺酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡糖淀粉酶(glaA)、米曲霉TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢Daria(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶，以及里氏木霉翻译延伸因子，以及NA2-tpi启动子(来自编码中性α-淀粉酶的曲霉属基因的修饰的启动子，其中已经用来自编码丙糖磷酸异构酶的曲霉属基因的未翻译的前导序列替换未翻译的前导序列；非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子，其中已经用来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替代未翻译的前导序列)；及其变体、截短型、以及杂合型启动子。其他启动子在美国专利号6,011,147中描述。
在酵母宿主中，有用的启动子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3磷酸脱氢酶(ADH1、ADH2/GAP)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、以及酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。酵母宿主细胞的其他有用的启动子由Romanos等人,1992,Yeast[酵母]8:423-488描述。
控制序列也可以是由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。该终止子可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的3’-末端。在宿主细胞中有功能的任何终止子可用于本发明中。
细菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。
用于丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延伸因子。
酵母宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)以及酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。酵母宿主细胞的其他有用的终止子由Romanos等人(1992,同上)描述。
控制序列还可以是启动子下游和基因的编码序列上游的mRNA稳定子区域，其增加所述基因的表达。
适合的mRNA稳定子区域的实例从以下获得：苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO 94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue等人,1995,Journal of Bacteriology[细菌学杂志]177:3465-3471)。
控制序列也可以是前导序列，即对宿主细胞翻译很重要的mRNA的非翻译区域。该前导序列可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的5’-末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得。
酵母宿主细胞的适合的前导序列从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α-因子和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
控制序列还可以是多腺苷酸化序列，一种可操作地连接至所述多核苷酸的3’-末端并且当转录时由宿主细胞识别为将多腺苷酸残基添加至所转录的mRNA的信号的序列。可以使用在宿主细胞中有功能的任何多腺苷酸化序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选多腺苷酸化序列从以下的基因获得：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
酵母宿主细胞的有用的多腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,Mol.CellularBiol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。
控制序列还可以是编码与多肽的N末端连接的信号肽并指导多肽进入细胞的分泌途径的信号肽编码区。多核苷酸的编码序列的5’端本身可以含有在翻译阅读框中天然与编码多肽的编码序列区段相连接的信号肽编码序列。可替代地，编码序列的5’-端可以包含对编码序列是外源的信号肽编码序列。在编码序列天然地不含有信号肽编码序列的情况下，可能需要外源信号肽编码序列。可替代地，外源信号肽编码序列可以单纯地替换天然信号肽编码序列以便增强多肽的分泌。然而，可以使用指导已表达多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从芽孢杆菌NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草芽孢杆菌prsA的基因获得的信号肽编码序列。另外的信号肽由Simonen和Palva,1993,Microbiological Reviews[微生物评论]57:109-137描述。
用于丝状真菌宿主细胞的有效的信号肽编码序列是从以下的基因获得的信号肽编码序列：黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、柔毛腐质霉脂肪酶、以及米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的有用的信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因获得。其他的有用的信号肽编码序列由Romanos等人(1992,同上)描述。
控制序列还可以是编码位于多肽的N末端的前肽的前肽编码序列。所得的多肽被称为前体酶或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下的基因获得：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列二者都存在的情况下，该前肽序列位于紧邻多肽的N-末端且该信号肽序列位于紧邻前肽序列的N-末端。
还可希望的是添加调节序列，该调节序列调节宿主细胞生长相关的多肽的表达。调节序列的实例是引起基因表达以响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些。原核系统中的调节序列包括lac、tac、和trp操纵子系统。在酵母中，可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKAα-淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶I启动子以及里氏木霉纤维二糖水解酶II启动子。调节序列的其他实例是允许基因扩增的那些序列。在真核系统中，这些调节序列包括在氨甲蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况中，编码多肽的多核苷酸将与调节序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包含本发明的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。不同的核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体，该重组表达载体可以包括一个或多个便利的限制酶切位点以允许在这些位点处插入或取代编码该多肽的多核苷酸。可替代地，可以通过将多核苷酸或包含所述多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中而表达所述多核苷酸。在产生表达载体时，编码序列如此位于载体中，使得编码序列与用于表达的适当控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是可以方便地经受重组DNA程序并且可以引起多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是直链或闭合环状质粒。
载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以含有用于确保自我复制的任何手段。可替代地，载体可以是这样的载体，当它引入宿主细胞中时整合入基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同含有待引入宿主细胞基因组的总DNA，或可以使用转座子。
载体优选地含有允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标记。选择性标记是一种基因，其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养型等。
细菌选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或赋予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、或四环素抗性)的标记。酵母宿主细胞的适合的标记包括但不限于：ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于在丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标记包括但不限于adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀羧胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5’-磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷基转移酶)以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)连同其等效物。优选的用于曲霉细胞中的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)bar基因。优选的用于木霉属细胞的是adeA、adeB、amdS、hph以及pyrG基因。
选择性标记可以是如WO 2010/039889中所述的双选择性标记系统。在一个方面中，双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。
载体优选地含有允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到宿主细胞基因组中，该载体可以依靠编码该多肽的多核苷酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地，该载体可以含有用于指导通过同源重组而整合入宿主细胞基因组中的染色体中的精确位置处的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置处整合的可能性，整合元件应当含有足够数目的核酸，例如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对和800至10,000个碱基对，这些核酸与相应的靶序列具有高度序列同一性以增强同源重组的概率。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外，整合元件可以是非编码或编码的多核苷酸。另一方面，载体可以通过非同源重组整合入宿主细胞的基因组中。
为了自主复制，载体可以进一步包含复制起点，该复制起点使得载体在讨论中的宿主细胞中自主复制成为可能。复制起点可以是在细胞中发挥作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177、和pACYC184的复制起点，以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060、和pAMβ1的复制起点。
用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合、及ARS4与CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人,1991,Gene[基因]98:61-67；Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res.[核酸研究]15:9163-9175；WO00/24883)。可以根据WO 00/24883中披露的方法完成AMA1基因的分离和包含所述基因的质粒或载体的构建。
可将本发明多核苷酸的多于一个拷贝插入宿主细胞以增加多肽的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或通过包括一个与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标记基因可以获得该多核苷酸的增加的拷贝数目，其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择含有选择性标记基因的经扩增的拷贝的细胞、以及由此该多核苷酸的另外的拷贝。
用于连接以上所述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域的普通技术人员熟知的(参见例如，Sambrook等人,1989,同上)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞，这些宿主细胞包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，该一个或多个控制序列指导本发明的多肽的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入到宿主细胞中，这样使得所述构建体或载体被维持作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体，如早前所描述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不完全相同的任何亲本细胞子代。宿主细胞的选择将在很大程度上取决于编码该多肽的基因及其来源。
宿主细胞可以是在本发明的多肽的重组产生中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于：芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属、乳球菌属、大洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属和链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属、以及脲原体属。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于：嗜碱芽孢杆菌、高地芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、植物解淀粉芽孢杆菌亚种、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、沙福芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、和苏云金芽孢杆菌细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞，包括但不限于类马链球菌、酿脓链球菌、乳房链球菌以及马链球菌兽疫亚种细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞，包括但不限于：不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌以及浅青紫链霉菌细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见，例如，Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子与普通遗传学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如，Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829；或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如，Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques[生物技术]6:742-751)或轭合(参见例如，Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可以通过以下方式来实现：原生质体转化(参见例如，Hanahan,1983,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如，Dower等人,1988,Nucleic AcidsRes.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可以通过以下方式来实现：原生质体转化、电穿孔(参见例如，Gong等人,2004,Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、接合(参见例如，Mazodier等人,1989,J.Bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585)、或转导(参见例如，Burke等人,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]98:6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可以通过以下方式来实现：电穿孔(参见例如，Choi等人,2006,J.Microbiol.Methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如，Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。将DNA引入链球菌属细胞中可以通过以下来实现：天然感受态(naturalcompetence)(参见例如，Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见例如，Catt和Jollick,1991,Microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见例如，Buckley等人,1999,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见例如，Clewell,1981,Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而，可以使用本领域已知的将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
宿主细胞还可以是真核生物，如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
宿主细胞可以是真菌细胞。如本文使用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有有丝分裂孢子真菌(如由Hawksworth等人在以下文献中所定义：Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi[安斯沃思和拜斯比真菌字典],第8版,1995,CAB International[国际应用生物科学中心],University Press[大学出版社],Cambridge,UK[英国剑桥])。
真菌宿主细胞可以为酵母细胞。如本文使用的“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌纲(Fungi Imperfecti)(芽孢纲(Blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类可在将来变化，出于本发明的目的，酵母应当如Biology and Activities of Yeast[酵母的生物学与活性](Skinner,Passmore和Davenport编辑，Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9[应用细菌学学会专题论文集系列9],1980)中所描述的那样定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属(Candida)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁弗酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)或耶氏酵母属(Yarrowia)细胞，如乳酸克鲁弗酵母(Kluyveromyces lactis)、卡尔酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)、道格拉氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁弗酵母(Saccharomyces kluyveri)、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)、卵形酵母(Saccharomyces oviformis)或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可为丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门(Oomycota)的亚门的所有丝状形式(如由Hawksworth等人,1995(同上)所定义的)。丝状真菌通常的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、甘露聚糖和其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延伸来进行的，而碳分解代谢是专性需氧的。相反，酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)来进行的，而碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属(Bjerkandera)、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属、线黑粉菌科(Filibasidium)、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属(Trametes)或木霉属细胞。
例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢子菌、女王杜香金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖孢镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、柔毛腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙链孢菌、产紫青霉、黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、射脉菌(Phlebiaradiata)、刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、土生梭孢壳霉、长域毛栓菌(Trametesvillosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉、或绿色木霉细胞。
可以将真菌细胞通过涉及原生质体形成、原生质体转化、以及细胞壁再生的方法以本身已知的方式转化。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的适合程序描述于以下文献中：EP 238023,Yelton等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474以及Christensen等人,1988,Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422。用于转化镰孢属物种的适合方法由Malardier等人,1989,Gene[基因]78:147-156和WO 96/00787描述。可以使用由以下文献描述的程序转化酵母：Becker和Guarente,在Abelson,J.N.和Simon,M.I.编辑,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,AcademicPress,Inc.[学术出版社有限公司],纽约)；Ito等人,1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163；以及Hinnen等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:1920。
生产方法
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法，这些方法包括(a)培养细胞，该细胞以其野生型形式在有利于该多肽的产生的条件下产生该多肽；和任选地(b)回收该多肽。
本发明还涉及产生多肽的方法，其中该多肽选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 15中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 18中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(r)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，包括(a)培养细胞，该细胞以其野生型形式在有利于该多肽的产生的条件下产生该多肽；和任选地(b)回收该多肽。
本发明还涉及产生多肽的方法，
其中该多肽选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 15中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 18中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(r)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，包括(a)在有利于该多肽的产生的条件下培养本发明的重组宿主细胞；和任选地(b)回收该多肽。
宿主细胞是在适合使用本领域已知的方法产生多肽的营养培养基中培养的。例如，可通过摇瓶培养、或在实验室或工业发酵器中小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)培养细胞，该培养在合适的介质中并且在允许表达和/或分离多肽的条件下进行。使用本领域中已知的程序，培养发生在包含碳和氮来源及无机盐的适合的营养培养基中。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)的目录中)制备。如果多肽被分泌到该营养培养基中，那么可以直接从该培养基中回收该多肽。如果多肽不进行分泌，那么其可以从细胞裂解液中进行回收。
可以使用特异性针对具有水解活性的多肽的本领域已知的方法来检测该多肽。这些检测方法包括但不限于：特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定多肽的活性。
可以使用本领域已知的方法来回收多肽。例如，可通过常规方法，包括但不限于收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀，从营养培养基回收多肽。在一个方面中，回收包含多肽的发酵液。
可以通过本领域已知的多种程序纯化该多肽，包括但不限于色谱法(例如，离子交换色谱法、亲和色谱法、疏水色谱法、聚焦色谱法和尺寸排阻色谱法)、电泳程序(例如，制备型等电聚焦电泳)、差异性溶解(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE或提取(参见例如，ProteinPurification[蛋白质纯化],Janson和Ryden编辑,VCH Publishers[VCH出版公司],纽约,1989)，以便获得基本上纯的多肽。
在一替代性方面，不回收多肽，而是将表达该多肽的本发明的宿主细胞用作多肽的来源。
发酵液配制品或细胞组合物
本发明还涉及包含本发明的多肽的发酵液配制品或细胞组合物。所述发酵液产物进一步包含在发酵过程中使用的另外的成分，例如像细胞(包括含有编码本发明中所示的多肽的基因的宿主细胞，这些宿主细胞用于产生目的多肽)、细胞碎片、生物质、发酵培养基和/或发酵产物。在一些实施例中，组合物是含有一种或多种有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。
如本文使用的术语“发酵液”是指由细胞发酵产生的、不经历或经历最少的回收和/或纯化的制剂。例如，当微生物培养物在允许蛋白质合成(例如，由宿主细胞表达酶)并且将蛋白质分泌到细胞培养基中的碳限制条件下孵育生长到饱和时，产生发酵液。所述发酵液可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的或分级的内容物。典型地，所述发酵液是未分级的并且包含用过的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，发酵液含有用过的细胞培养基、胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。
在一些实施例中，该发酵液配制品和细胞组合物包括第一有机酸组分(包括至少一种1-5碳的有机酸和/或其盐)以及第二有机酸组分(包括至少一种6碳或更多碳的有机酸和/或其盐)。在一个特定的实施例中，第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物；并且该第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物。
在一个方面中，组合物含有一种或多种有机酸，并且任选地进一步含有杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一个实施例中，从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片，以提供不含这些组分的组合物。
这些发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包含防腐剂和/或抗微生物(例如，抑菌)剂，包括但不限于山梨醇、氯化钠、山梨酸钾、以及本领域已知的其他试剂。
所述细胞杀灭的全培养液或组合物可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的内容物。典型地，所述细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的培养基以及在微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)生长至饱和、在碳限制条件下孵育以允许蛋白合成之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，所述细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的细胞培养基、胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。
如本文所述的全培养液或细胞组合物典型地是液体，但是可以含有不溶性组分，例如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中，可以去除不溶性组分以提供澄清的液体组合物。
本发明的全培养液配制品和细胞组合物可以通过WO 90/15861或WO 2010/096673中所述的方法来产生。
酶组合物
本发明涉及包含与一种或多种另外的组分组合的本发明的GH114糖基水解酶多肽的组合物。另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分，包括下文所述的示例性非限制性组分。
本发明的一些实施例涉及组合物，该组合物包含：
a)至少0.001ppm的至少一种具有水解活性，优选α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的多肽，其中该多肽选自由以下组成的组：包含SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145、SEQ ID NO 146中所示的氨基酸序列的多肽和与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽；
b)一种或多种佐剂成分。
本发明的一些实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
a)至少0.001ppm的至少一种具有水解活性，优选α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的多肽，其中该多肽选自由以下组成的组：包含SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145、SEQ ID NO 146中所示的氨基酸序列的多肽和与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽；
b)一种或多种清洁组合物组分，优选地选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和另外的酶。
本发明的一些实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
a)至少0.001ppm的至少一种具有水解活性，优选α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的多肽，其中该多肽包含一个或多个选自由以下组成的组的基序：[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO 71)；以及
b)一种或多种清洁组合物组分，优选地选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和另外的酶。
一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
a)至少0.001ppm的至少一种具有水解活性，优选α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的多肽，例如GH114糖基水解酶，其中该多肽选自由以下组成的组：
i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
ii)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
iii)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
iv)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
v)多肽，该多肽与SEQ ID NO 15中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
vi)多肽，该多肽与SEQ ID NO 18中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
vii)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
viii)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
ix)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
x)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xi)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xii)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xiii)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xiv)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xv)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xvi)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xvii)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xviii)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xix)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
b)一种或多种清洁组合物组分，优选地选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和另外的酶。
如图1所示，有待配制在本发明的清洁组合物中的多肽优选属于VAE进化枝。该进化枝的多肽包含一个或两个独特的保守基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)和/或CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)。包含这些基序的多肽将共享这些共同的保守区域，并将具有相似的特性，例如在稳定性和底物结合方面。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)或CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO61)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)。
根据权利要求1所述的清洁组合物，其进一步包含至少一种非离子表面活性剂，优选醇乙氧基化物(AE或AEO)，优选阴离子与非离子表面活性剂的重量比为10:1至1:10。在下面的表面活性剂章节中描述了更多适用于本发明组合物的表面活性剂。
本发明和本文披露的多肽均属于VAE进化枝，如也可以在图1中看到。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)或CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO61)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的列表：
i.多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
ii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
iii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
iv.多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
v.多肽，该多肽与SEQ ID NO 15中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
vi.多肽，该多肽与SEQ ID NO 18中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
vii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
viii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
ix.多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
x.多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xi.多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xiii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xiv.多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xv.多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xvi.多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xvii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xviii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
xix.多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)或CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO61)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，
其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的列表：多肽，该多肽与SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ IDNO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ IDNO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ IDNO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ IDNO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145或SEQ IDNO 146中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
衍生自VAE进化枝的另一个有趣的进化枝是DYQ进化枝，其包含VAE进化枝的许多多肽。该进化枝的多肽包含一个或两个独特的保守基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)或FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)，其在进化枝中保守。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)或FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)。
本发明的许多多肽也包含在DYQ进化枝中，这些多肽将包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)和/或CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)中的至少一者或两者或基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)和/或FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)中的一者或两者。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)或FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，
其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的列表：
i.多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
ii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
iii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
iv.多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
v.多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
vi.多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
vii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
viii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
ix.多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
x.多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
xi.多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
xii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)或FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，
其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的列表：
多肽，该多肽与SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ IDNO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144和SEQ ID NO 145中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
从VAE进化枝(和DYQ进化枝)衍生的另一个有趣的进化枝是AEE进化枝，其包含VAE进化枝的一些多肽。该进化枝的多肽包含一个或两个独特的保守基序AEECG(SEQ ID NO64)或NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)，其在进化枝中保守。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序AEECG(SEQ ID NO 64)或NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)。
AEE进化枝的多肽也包含在VAE和DYQ进化枝中，这些多肽将包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)和/或CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)中的至少一者或两者，基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)和/或FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)中的一者或两者以及基序AEECG(SEQ ID NO 64)和/或NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)中的一者或两者。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序AEECG(SEQ ID NO 64)或NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的列表：
i.多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
ii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
iii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
iv.多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
v.多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
vi.多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
vii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序AEECG(SEQ ID NO 64)或NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的列表：
多肽，该多肽与SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQID NO 85、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 138和SEQ ID NO 142的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
衍生自VAE进化枝的另一个有趣的进化枝是IEY进化枝，其包含VAE进化枝的一些多肽。该进化枝的多肽包含一个或两个独特的保守基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO68)、VICYF(SEQ ID NO 69)，其在进化枝中保守。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)或VICYF(SEQ ID NO 69)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)。
IEY进化枝的多肽也包含在VAE中，这些多肽将包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ IDNO 60)和/或CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)中的至少一者或两者，以及基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)和/或VICYF(SEQ ID NO 69)中的一者或两者。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)或VICYF(SEQ ID NO 69)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的列表：
i.多肽，该多肽与SEQ ID NO 15中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
ii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 18中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
iii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)或VICYF(SEQ ID NO 69)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，
其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的列表：多肽，该多肽与SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO78、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ IDNO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ IDNO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ IDNO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO:133和SEQ ID NO 135中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
从VAE和IEY进化枝衍生的另一个有趣的进化枝是ICY进化枝，其包含VAE进化枝和IEY进化枝的一些多肽。该进化枝的多肽包含独特的保守基序ICYFSA(SEQ ID NO 70)，其在进化枝中保守。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序ICYFSA(SEQ ID NO 70)；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)。
ICY进化枝的多肽也包含在VAE和IEY进化枝中，这些多肽将包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)和/或CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)中的至少一者或两者，基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)和/或VICYF(SEQ ID NO 69)中的一者或两者，以及基序ICYFSA(SEQ ID NO 70)。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序ICYFSA(SEQ ID NO 70)；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的列表：
i.多肽，该多肽与SEQ ID NO 15中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
ii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序ICYFSA(SEQ ID NO 70)；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，
其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的列表：多肽，该多肽与SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ IDNO 120、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 129和SEQ ID NO 133的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
从VAE和IEY进化枝衍生的另一个有趣的进化枝是DFAVL进化枝，其包含VAE进化枝和IEY进化枝的一些多肽。该进化枝的多肽包含独特的保守基序DFAVL(SEQ ID NO 71)，其在进化枝中保守。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序DFAVL(SEQ ID NO 71)；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)。
DFAVL进化枝的多肽也包含在VAE和IEY进化枝中，这些多肽将包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)和/或CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)中的至少一者或两者，基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)和/或VICYF(SEQ ID NO 69)中的一者或两者，以及基序DFAVL(SEQ ID NO 71)。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序DFAVL(SEQ ID NO 71)；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，其中GH114糖基水解酶是与SEQID NO 18中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序DFAVL(SEQ ID NO 71)；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，
其中GH114糖基水解酶是与SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ IDNO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 99、SEQ IDNO 100、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 116、SEQ IDNO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 130和SEQ ID NO 135中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
衍生自VAE进化枝的另一个有趣的进化枝是WQW进化枝，其包含VAE进化枝的一些多肽。该进化枝的多肽包含一个或两个独特的保守基序WQWQL(SEQ ID NO 66)或[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)，其在进化枝中保守。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基基序WQWQL(SEQ ID NO 66)或[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)。
WQW进化枝的多肽也包含在VAE中，这些多肽将包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ IDNO 60)和/或CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)中的至少一者或两者和/或基序WQWQL(SEQ ID NO 66)或[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)中的一者或两者。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序WQWQL(SEQ ID NO 66)或[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的列表：
i.多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
ii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
iii.多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序WQWQL(SEQ ID NO 66)或[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中所述阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的列表：
多肽，该多肽与SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 95和SEQID NO 146中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
根据本发明的组合物优选包含GH114糖基水解酶，其中该酶能够“深度清洁”物品。
此外，有待配制进入本发明的组合物的GH114优选具有改善的洗涤性能或清洁性能，并且有待配制进入本发明的组合物的GH114酶优选具有“酶洗涤益处”，其在本文中定义为与没有酶的相同洗涤剂相比，酶可能会添加到洗涤剂中的有利效果。在实例中进一步解释了术语洗涤性能和去污力。
在一个实施例中，根据本发明的组合物包含GH114糖基水解酶，其中所述GH114糖基水解酶在液体标准洗涤剂A中具有洗涤性能(WP)，当如实例5和7所述计算delta L(ΔL)(L(有酶情况下洗涤的小块布样)-L(无酶情况下洗涤的小块布样))时，测量为delta L(ΔL)>1，优选delta L(ΔL)大于5，优选delta L(ΔL)大于10，优选delta L(ΔL)大于15，优选delta L(ΔL)大于20。
本发明的GH114优选具有酶洗涤益处特性，并且本发明的一个实施例涉及包含GH114糖基水解酶的组合物，其中GH114糖基水解酶具有生物膜去除活性，其中优选当如实例8所述进行测量时，剩余生物膜％小于80％，例如小于70％，例如小于60％，例如小于50％，例如小于40％，例如小于30％，例如小于20％，例如小于10％，例如小于1％或甚至没有生物膜剩余在物品上，例如纺织品。
清洁组分的选择可以包括(用于纺织品护理)有待清洁的纺织品的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度以及洗涤剂产品的配制的考虑。尽管根据特定的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，组分可以包含另外的功能性。
表面活性剂
清洁组合物可以包含一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子的和/或阳离子的和/或非离子的和/或半极性的和/或兼性离子的，或其混合物。在一个特定的实施例中，洗涤剂组合物包括表面活性剂体系(包含多于一种的表面活性剂)，例如一种或多种非离子表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。在一个实施例中，洗涤剂包括至少一种阴离子表面活性剂比至少一种非离子表面活性剂，阴离子与非离子表面活性剂的重量比可以为10:1至1:10。在一个实施例中，阴离子表面活性剂的量高于非离子表面活性剂的量，例如阴离子与非离子表面活性剂的重量比可以为10:1至1.1:1或5:1至1.5:1。阴离子与非离子表面活性剂的量也可以相等并且重量比为1:1。在一个实施例中，非离子表面活性剂的量高于阴离子表面活性剂的量，并且重量比可以为1:10至1:1.1。阴离子与非离子表面活性剂的重量比优选为10:1至1:10，例如5:1至1:5，或5:1至1:1.2。优选地，非离子表面活性剂与阴离子表面活性剂的重量分数为0至0.5或0至0.2，因此如果重量分数为0，则可以存在或不存在非离子表面活性剂，但是如果存在非离子表面活性剂，则非离子表面活性剂的重量分数优选为阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂总重量的至多50％或至多20％。轻垢洗涤剂通常包含比阴离子表面活性剂更多的非离子表面活性剂，并且其中非离子表面活性剂与阴离子表面活性剂的分数优选为0.5至0.9。一种或多种表面活性剂的总重量通常以按重量计约0.1％至约60％，例如约1％至约40％，或约3％至约20％，或约3％至约10％的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择该一种或多种表面活性剂，并且该一种或多种表面活性剂可以包括本领域中已知的任何常规表面活性剂。当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约1％至约40％的阴离子型表面活性剂，如从约5％至约30％，包括从约5％至约15％，或从约15％至约20％，或从约20％至约25％的阴离子型表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，通常以钠盐或钾盐可用，或单乙醇胺(MEA，2-氨基乙-1-醇)或三乙醇胺(TEA，2,2',2”-次氮基三乙-1-醇)；特别是直链烷基苯磺酸盐(LAS)，LAS的异构体，例如支链烷基苯磺酸盐(BABS)和苯基链烷磺酸盐；烯烃磺酸盐，特别是α-烯烃磺酸盐(AOS)；烷基硫酸盐(AS)，特别是脂肪醇硫酸盐(FAS)，即伯醇硫酸盐(PAS)，例如十二烷基硫酸盐；醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)；石蜡磺酸盐(PS)，包括链烷-1-磺酸盐和仲链烷磺酸盐(SAS)；酯磺酸盐，包括磺化脂肪酸甘油酯和α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES或MES)；烷基琥珀酸或烯基琥珀酸，例如十二碳烯基/十四碳烯基琥珀酸(DTSA)；磺基琥珀酸的二酯和单酯；氨基酸的脂肪酸衍生物。此外，可以包括脂肪酸盐(皂)。
当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约1％至约40％的阳离子型表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。阳离子型表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、酯季铵、及其组合。
当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.2％至约40％的非离子型表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物(特别是丙氧基化脂肪醇(PFA)、乙氧基化醇和丙氧基化醇)、烷氧基化脂肪酸烷基酯(例如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯(尤其是乙氧基甲酯，MEE))、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))，以及可以商品名SPAN和TWEEN获得的产品、及其组合。
当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.01％至约10％的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)，例如烷基二甲基氧化胺，特别是N-(椰油酰烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛脂烷基)-N,N-双(2-羟乙基)氧化胺及其组合。
当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.01％至约10％的兼性离子型表面活性剂。兼性离子型表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱，如烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱、及其组合。
可以使用另外的生物基表面活性剂，例如其中表面活性剂是基于糖的非离子表面活性剂，其可以是己基-β-D-麦芽吡喃糖苷、硫代麦芽吡喃糖苷或环状麦芽吡喃糖苷，例如EP 2516606B1中所述。
助洗剂和共助洗剂
该洗涤剂组合物可以含有按重量计约0-65％(如约5％至约50％)的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在餐具洗涤洗涤剂中，助洗剂的水平典型地是40％-65％、特别是50％-65％。助洗剂和/或共助洗剂可以特别是与Ca和Mg形成水溶性络合物的螯合试剂。可以利用本领域已知的用于在清洁洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐例如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐例如碳酸钠、可溶性硅酸盐例如硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺例如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA，也称为2,2’-亚氨基二乙-1-醇)、三乙醇胺(TEA，也称为2,2’,2”-次氮基三乙-1-醇)以及羧甲基菊粉(CMI)、及其组合。
该洗涤剂组合物还可以含有按重量计0-50％，如约5％至约30％的洗涤剂共助洗剂。洗涤剂组合物可以包括单独的共助洗剂，或与助洗剂(例如沸石助洗剂)组合。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，例如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐、螯合剂(例如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和磷酸盐)、以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二丁二酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N”-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)、及其组合和盐。另外的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US 5977053中。
漂白系统
洗涤剂可以含有按重量计0-30％，如约1％至约20％的漂白系统。可以利用包含本领域已知的用于在清洁洗涤剂中使用的组分的任何漂白系统。合适的漂白系统组分包括过氧化氢源；过酸源；和漂白催化剂或增效剂。
过氧化氢源：
合适的过氧化氢源是无机过酸盐，包括碱金属盐(如过碳酸钠和过硼酸钠(通常是一水合物或四水合物))，以及过氧化氢―尿素(1/1)。
过酸源：
过酸可以是(a)直接作为预形成过酸掺入，或(b)从过氧化氢和漂白活化剂(过水解)在洗涤液中原位形成，或(c)从过氧化氢和过氧化氢酶和后者合适的底物(例如酯)在洗涤液中原位形成。
a)适合的预形成过酸包括但不限于过氧羧酸(如过氧苯甲酸)及其环取代的衍生物、过氧-α-萘甲酸、过氧邻苯二甲酸、过氧月桂酸、过氧硬脂酸、ε-邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸[邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸(PAP)]、和邻-羧基苯甲酰氨基过氧己酸；脂族和芳族二过氧二羧酸，如二过氧十二烷二酸、二过氧壬二酸、二过氧癸二酸、二过氧巴西基酸、2-癸基二过氧丁二酸、以及二过氧邻苯二甲酸、-间苯二甲酸和-对苯二甲酸；过亚氨酸；过氧单硫酸；过氧二硫酸；过氧磷酸；过氧硅酸；以及所述化合物的混合物。应理解的是，在一些情况下，所提到的过酸可能最好是作为合适的盐的添加，如碱金属盐(例如
Figure BDA0002746970670001441
)或碱土金属盐。
b)合适的漂白活化剂包括属于酯、酰胺、酰亚胺、腈类或酸酐类别的那些，以及适用时，其盐。合适的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸钠(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸钠、4-(癸酰基氧基)苯甲酸(DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸钠(NOBS)和/或披露于WO 98/17767中的那些。感兴趣的漂白活化剂的特定家族披露于EP 624154中并且在该家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像三醋精)具有它们是环境友好的优点。此外，乙酰柠檬酸三乙酯和三醋汀在储存时在产品中具有良好的水解稳定性，并且是有效的漂白活化剂。最后，ATC是多功能的，因为在过水解反应中释放的柠檬酸盐可以作为助洗剂起作用。
漂白催化剂和增效剂
该漂白系统还可以包括漂白催化剂或增效剂。可以用于本发明组合物中的漂白催化剂的一些非限制性实例包括草酸锰、乙酸锰、锰胶原、钴-胺催化剂和锰三氮杂环壬烷(MnTACN)催化剂；特别优选锰与1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me3-TACN)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me4-TACN)的络合物，特定地是Me3-TACN，如双核锰络合物[(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3-TACN)](PF6)2、和[2,2',2”-次氮基三(乙烷-1,2-二基氮烷基亚基-κN-甲基亚基)三酚并-κ3O]锰(III)。这些漂白催化剂还可以是其他金属化合物，如铁或钴络合物。
在其中过酸的来源包括在内的一些实施例中，可以使用具有下式之一的有机漂白催化剂或漂白增效剂：
Figure BDA0002746970670001451
(iii)及其混合物；其中每个R1独立地是含有从9至24个碳的支链烷基或含有从11至24个碳的直链烷基，优选地每个R1独立地是含有从9至18个碳的支链烷基或含有从11至18个碳的直链烷基，更优选地每个R1独立地选自下组，该组由以下组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。
其他示例性漂白系统描述于例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259、EP 1867708(维生素K)以及WO 2007/087242中。合适的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌或酞菁铝。
金属护理剂
金属护理剂可以防止或减少金属的锈蚀、腐蚀或氧化，这些金属包括铝、不锈钢和非铁金属，如银和铜。合适的实例包括以下的一个或多个：
(a)苯并三唑类，包括苯并三唑或双-苯并三唑及其取代衍生物。苯并三唑衍生物是其中芳环上可获得的取代位点被部分或完全取代的那些化合物。合适的取代基包括直链或支链Ci-C20-烷基基团(例如C1-C20-烷基基团)和羟基、硫代、苯基或卤素(例如氟、氯、溴和碘)。
(b)选自下组的金属盐和络合物，该组由以下组成：锌、锰、钛、锆、铪、钒、钴，镓和铯盐和/或络合物，这些金属处于氧化态II、III、IV、V或VI之一。在一个方面中，合适的金属盐和/或金属络合物可以选自下组，该组由以下组成：Mn(II)硫酸盐、Mn(II)柠檬酸盐、Mn(II)硬脂酸盐、Mn(II)乙酰丙酮酸盐、K^TiF6(例如，K2TiF6)、K^ZrF6(例如，K2ZrF6)、CoSO4、Co(NOs)2和Ce(NOs)3、锌盐，例如，硫酸锌、水锌矿、或乙酸锌；
(c)硅酸盐，包括硅酸钠或硅酸钾、二硅酸钠、硅酸钠、结晶层状硅酸盐及其混合物。
WO 94/26860和WO 94/26859中披露了用作银/铜腐蚀抑制剂的另外合适的有机和无机氧化还原活性物质。优选地，本发明的组合物按重量计包含从0.1％至5％的金属护理剂的组合物，优选地该金属护理剂是锌盐。
水溶助剂
洗涤剂可以含有按重量计0-10％，例如按重量计0-5％，例如约0.5％至约5％、或约3％至约5％的水溶助剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何水溶助剂。水溶助剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠、及其组合。
聚合物
洗涤剂可以含有按重量计0％-10％(例如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％)的聚合物。可以利用本领域中已知的在洗涤剂中使用的任何聚合物。聚合物可以作为如以上提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或防沫特性。一些聚合物可以具有多于一种的上文提到的特性和/或多于一种的下文提到的基序。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧化物，如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水修饰的CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。合适的实例包括PVP-K15、PVP-K30、来自Ashl和Aqualon的ChromaBond S-400、ChromaBondS-403E和Chromabond S-100，以及来自BASF的
Figure BDA0002746970670001471
HP 165、
Figure BDA0002746970670001472
HP 50(分散剂)、
Figure BDA0002746970670001473
HP 53(分散剂)、
Figure BDA0002746970670001474
HP 59(分散剂)、
Figure BDA0002746970670001475
HP 56(染料转移抑制剂)、
Figure BDA0002746970670001476
HP 66K(染料转移抑制剂)。特别优选的聚合物是来自BASF的乙氧基化的均聚物
Figure BDA0002746970670001477
HP 20，其有助于防止洗涤液中的污垢再沉积。
另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575中。还考虑了以上提到的聚合物的盐。
织物调色剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，例如染料或色素，当配制在洗涤剂组合物中时，当所述织物与洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上，该洗涤液包含所述洗涤剂组合物，并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时，它们改变表面的色彩。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物，并且还可以包括色素。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自下组的小分子染料，该组由落入颜色索引(Colour Index，C.I.)分类的以下染料组成：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物，例如于WO 2005/03274、WO 2005/03275、WO 2005/03276和EP 1876226中所描述的(将其通过引用并入本文)。洗涤剂组合物优选地包含从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包含从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。合适的调色剂还披露于例如WO 2007/087257和WO 2007/087243中。
酶
洗涤剂添加剂连同洗涤剂组合物可以包括一种或多种另外的酶，例如一种或多种脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶，例如漆酶、和/或过氧化物酶。
一般而言，所选的一种或多种酶的特性应与所选的洗涤剂相容(即，最适pH、与其他酶和非酶成分的相容性等)，并且该一种或多种酶应以有效量存在。
纤维素酶
合适的纤维素酶包括细菌或真菌来源的酶的单组分和混合物。也可以考虑化学修饰的或蛋白质工程改造的突变体。纤维素酶可以例如是单组分或单组分内切-1,4-β-葡聚糖酶(也称为内切葡聚糖酶)的混合物。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、毁丝霉属、镰孢属、梭孢壳属、木霉属和枝顶孢属的那些。示例性纤维素酶包括真菌纤维素酶，该真菌纤维素酶来自特异腐质霉(US 4,435,307)或来自木霉属，例如里氏木霉或绿色木霉。其他合适的纤维素酶来自梭孢壳属，例如在WO 96/29397中描述的土生梭孢壳霉(Thielavia terrestris)或在US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757、WO 89/09259和WO 91/17244中披露的由嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。如WO 02/099091和JP 2000210081中所述，来自芽孢杆菌属的纤维素酶也是相关的。合适的纤维素酶是具有护理益处的碱性或中性纤维素酶。纤维素酶的实例在EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中描述。其他实例是例如描述于WO 94/07998、EP0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307中的那些纤维素酶变体。
其他纤维素酶是具有与WO 2002/099091的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97％同一性的序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶或一种家族44木葡聚糖酶，该木葡聚糖酶是一种具有与WO 2001/062903的SEQ ID NO:2的位置40-559具有至少60％同一性的序列的木葡聚糖酶。
可商购的纤维素酶包括
Figure BDA0002746970670001481
Premium、
Figure BDA0002746970670001482
Figure BDA0002746970670001483
Classic、
Figure BDA0002746970670001484
(诺维信公司(Novozymes A/S))、
Figure BDA0002746970670001485
Puradax HA和PuradaxEG(可从杰尼卡国际公司(Genencor International Inc.)获得)和KAC-500(B)TM(花王公司(Kao Corporation))。
甘露聚糖酶
合适的甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或遗传修饰的突变体。甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型，特别是粘琼脂芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌或特异腐质霉。合适的甘露聚糖酶描述于WO 1999/064619中。可商购的甘露聚糖酶是Mannaway(诺维信公司)。
过氧化物酶/氧化酶
合适的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属(例如来自灰盖鬼伞)的过氧化物酶及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602以及WO 98/15257中描述的那些。可商购的过氧化物酶包括GuardzymeTM(诺维信公司)。
脂肪酶和角质酶
合适的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体酶或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热真菌属的脂肪酶，例如如描述于EP 258068和EP 305216中的来自疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉)；来自腐质霉属的角质酶，例如特异腐质霉(WO 96/13580)；来自假单胞菌属的菌株的脂肪酶(这些中的一些现在改名为伯克霍尔德菌属)，例如产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP 218272)、洋葱假单胞菌(EP331376)、假单胞菌属菌株SD705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)；GDSL-型链霉菌属脂肪酶(WO 10/065455)；来自稻瘟病菌的角质酶(WO 10/107560)；来自门多萨假单胞菌的角质酶(US 5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 11/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO 11/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 11/084599)；以及来自灰色链霉菌(WO11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)的脂肪酶(WO 12/137147)。
其他实例是脂肪酶变体，例如在EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508以及WO 09/109500中所述的那些。
优选的商业化脂肪酶产品包括LipolaseTM、LipexTM；LipolexTM和LipocleanTM(诺维信公司)，Lumafast(来自杰能科公司)以及Lipomax(来自吉斯特布罗卡德斯公司)。
再其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。
淀粉酶
合适的淀粉酶包括α-淀粉酶和/或葡糖淀粉酶并且可以是细菌或真菌来源的。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属、例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于GB 1,296,839中)获得的α-淀粉酶。
适合的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO 2的淀粉酶或其与SEQ ID NO3具有90％序列同一性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424中以及WO 99/019467的SEQ ID NO 4中，如在一个或多个以下位置中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。
不同的适合的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO 6的淀粉酶或其与SEQ ID NO 6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO 6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。
其他适合的淀粉酶是包括WO 2006/066594的SEQ ID NO 6中所示的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO 4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列同一性的变体。此杂合α-淀粉酶的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209和Q264。包含WO 2006/066594的SEQ ID NO 6中所示的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO 4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的变体是具有以下取代的那些：
M197T；
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO 6的淀粉酶或其与SEQID NO 6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO 6的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182、或位置H183和G184中具有缺失的那些。
可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 3、SEQID NO 2或SEQ ID NO 7的那些或其与SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3或SEQ IDNO 7具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 7的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476，使用WO 96/023873的SEQ ID 2用于编号。更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位置(例如181和182、182和183、或位置183和184)中具有缺失的那些。SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2或SEQ ID NO 7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和476中的一个或多个中具有取代的那些。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO 2、WO 01/66712中的SEQ ID NO 10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO 2具有90％序列同一性或与WO01/66712中的SEQ ID NO 10具有90％序列同一性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO 10的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和264。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO 2的淀粉酶或其与SEQ IDNO 2具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO 2的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有C-末端截短和/或取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO 2的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代的那些：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K，和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183处具有缺失的那些。SEQ ID NO 2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C-末端截短的，并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 13184577的SEQ ID NO 1的淀粉酶或其与SEQ IDNO 1具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO 1的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：K176、R178、G179、T180、G181、E187、N192、M199、I203、S241、R458、T459、D460、G476和G477。SEQ ID NO 1的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代的那些：K176L、E187P、N192FYH、M199L、I203YF、S241QADN、R458N、T459S、D460T、G476K、以及G477K，和/或在位置R178和/或S179或T180和/或G181中具有缺失的那些。SEQ ID NO 1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
E187P+I203Y+G476K
E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K
其中变体任选地进一步包含在位置241处的取代和/或在位置178和/或位置179处的缺失。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 10104675的SEQ ID NO 1的淀粉酶或其与SEQ IDNO 1具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO 1的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：N21、D97、V128、K177、R179、S180、I181、G182、M200、L204、E242、G477和G478。SEQ ID NO 1的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代的那些：N21D、D97N、V128I、K177L、M200L、L204YF、E242QA、G477K、以及G478K，和/或在位置R179和/或S180或I181和/或G182中具有缺失的那些。SEQ ID NO 1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
N21D+D97N+V128I
其中变体任选地进一步包含在位置200处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
其他合适的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO 12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO 12具有至少90％序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO 12中的以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K和R458K的变体，以及另外在一个或多个选自下组的位置中具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339，最优选的是另外在所有这些位置中具有取代的变体。
其他实例是淀粉酶变体，如在WO 2011/098531、WO 2013/001078和WO 2013/001087中描述的那些。
可商购的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、StainzymeTM、StainzymePlusTM、NatalaseTM、Liquozyme X和BANTM(来自诺维信公司)，和RapidaseTM、PurastarTM/EffectenzTM、Powerase、Preferenz S1000、Preferenz S100和Preferenz S110(来自杰能科国际有限公司(Genencor International Inc.)/杜邦公司(DuPont))。
蛋白酶
合适的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源。优选微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。它可以是碱性蛋白酶，例如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族的(如胰蛋白酶)或S8家族的(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以例如是来自例如M4家族的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，如来自M5、M7或M8家族的那些。
术语“枯草杆菌酶”是指根据Siezen等人,Protein Engng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和Siezen等人,Protein Science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的亚组。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。枯草杆菌酶的实例是来源于芽孢杆菌属的那些，例如，US 7262042和WO 09/021867中所述的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌；和枯草杆菌蛋白酶lentus、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 01/016285和WO 02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属(Fusarium)蛋白酶(描述于WO 94/25583和WO 05/040372中)，以及来源于纤维单胞菌(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。进一步优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如描述于例如WO 95/23221中)、及其变体(描述于WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP 1921148中)。金属蛋白酶的实例是如描述于WO07/044993(宝洁公司(Procter&Gamble)/杰能科国际有限公司(Genencor Int.))中的中性金属蛋白酶，如来源于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的那些。有用的蛋白酶的实例是描述于以下中的变体：WO 89/06279、WO 92/19729、WO 96/034946、WO 98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 04/03186、WO 04/041979、WO 07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264，尤其是在以下位置中的一个或多个处具有取代的变体：3、4、9、15、24、27、42、55、59、60、66、74、85、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、126、127、128、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、189、193、198、199、200、203、206、211、212、216、218、226、229、230、239、246、255、256、268和269，其中这些位置对应于WO 2016/001449的SEQ ID NO 1中示出的迟缓芽孢杆菌蛋白酶的位置。更优选的蛋白酶变体可以包含选自下组的一种或多种突变，该组由以下组成：S3T、V4I、S9R、S9E、A15T、S24G、S24R、K27R、N42R、S55P、G59E、G59D、N60D、N60E、V66A、N74D、S85R、A96S、S97G、S97D、S97A、S97SD、S99E、S99D、S99G、S99M、S99N、S99R、S99H、S101A、V102I、V102Y、V102N、S104A、G116V、G116R、H118D、H118N、A120S、S126L、P127Q、S128A、S154D、A156E、G157D、G157P、S158E、Y161A、R164S、Q176E、N179E、S182E、Q185N、A188P、G189E、V193M、N198D、V199I、Y203W、S206G、L211Q、L211D、N212D、N212S、M216S、A226V、K229L、Q230H、Q239R、N246K、N255W、N255D、N255E、L256E、L256D、T268A以及R269H。这些蛋白酶变体优选地是在WO 2016/001449的SEQ ID NO 1中示出的迟缓芽孢杆菌蛋白酶
Figure BDA00027469706700015519
的变体、在WO 2016/001449的SEQ ID NO 2中示出的解淀粉芽孢杆菌蛋白酶(BPN’)的变体。这些蛋白酶变体与WO 2016/001449的SEQ ID NO 1或SEQ ID NO 2优选地具有至少80％序列同一性。
在以下一个或多个位置包含取代的蛋白酶变体，该位置对应于WO 2004/067737的SEQ ID NO 1的位置171、173、175、179或180，其中所述蛋白酶变体与WO 2004/067737的SEQID NO 1具有至少75％但少于100％的序列同一性。
合适的可商购蛋白酶包括以下列商品名出售的那些：
Figure BDA0002746970670001551
DuralaseTm、DurazymTm、
Figure BDA0002746970670001552
Ultra、
Figure BDA0002746970670001553
Ultra、
Figure BDA0002746970670001554
Ultra、
Figure BDA0002746970670001555
Ultra、
Figure BDA0002746970670001556
Blaze
Figure BDA0002746970670001557
100T、Blaze
Figure BDA0002746970670001558
125T、Blaze
Figure BDA0002746970670001559
150T、
Figure BDA00027469706700015510
和
Figure BDA00027469706700015511
(诺维信公司(Novozymes A/S))，以下列商品名出售的那些：
Figure BDA00027469706700015512
Figure BDA00027469706700015513
Figure BDA00027469706700015514
Excellenz P1000TM、Excellenz P1250TM、
Figure BDA00027469706700015515
Preferenz P100TM、Purafect
Figure BDA00027469706700015516
Preferenz P110TM、Effectenz P1000TM、
Figure BDA00027469706700015517
M、Effectenz P1050TM、Purafect
Figure BDA00027469706700015518
TM、Effectenz P2000TM、
Figure BDA0002746970670001561
和
Figure BDA0002746970670001562
(丹斯尼克公司(Danisco)/杜邦公司(DuPont))、AxapemTM(吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocases N.V.))、BLAP(在US5352604的图29中所示的序列)及其变体(汉高股份(Henkel AG))和来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
过氧化物酶/氧化酶
合适的过氧化物酶是包括由国际生物化学与分子生物学联合会(IUBMB)命名委员会陈述的酶分类EC 1.11.1.7，或源自其中的展示出过氧化物酶活性的任何片段的过氧化物酶。
合适的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属，例如来自灰盖拟鬼伞(C.cinerea)的过氧化物酶(EP 179,486)，及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602以及WO 98/15257中所描述的那些。
合适的过氧化物酶包括卤代过氧化物酶，如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及表现出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶进行分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯离子形成次氯酸盐。优选地，所述卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶，即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。已从许多不同真菌，特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶，如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如，煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属、弯孢属(例如，疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属、细基格孢属以及葡萄孢属。
还已从细菌，如假单胞菌属(如吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如，金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。
合适的氧化酶特别地包括由酶分类EC 1.10.3.2所包含的任何漆酶或源自其的展现出漆酶活性的任何片段、或展现出类似活性的化合物，如儿茶酚氧化酶(EC 1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。优选的漆酶是微生物来源的酶。这些酶可以来源于植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。来自真菌的合适的实例包括可来源于以下的菌株的漆酶：曲霉属，脉孢菌属(例如，粗糙脉孢菌)，柄孢壳菌属，葡萄孢属，金钱菌属(Collybia)，层孔菌属(Fomes)，香菇属，侧耳属，栓菌属(例如，长绒毛栓菌和变色栓菌)，丝核菌属(例如，立枯丝核菌(R.solani))，拟鬼伞属(例如，灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)及C.plicatilis)，小脆柄菇属(Psathyrella)(例如，白黄小脆柄菇(P.condelleana))，斑褶菇属(例如，蝶形斑褶菇(P.papilionaceus))，毁丝霉属(例如，嗜热毁丝霉)，Schytalidium(例如，S.thermophilum)，多孔菌属(例如，P.pinsitus)，射脉菌属(例如，射脉侧菌(P.radiata))(WO 92/01046)或革盖菌属(例如，毛革盖菌(C.hirsutus))(JP 2238885)。来自细菌的适合实例包括可来源于芽孢杆菌属的菌株的漆酶。优选的是源自拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶；特别是来源于灰盖拟鬼伞的漆酶，如披露于WO 97/08325中；或来源于嗜热毁丝霉，如披露于WO 95/33836中。
核酸酶
合适的核酸酶包括脱氧核糖核酸酶(DNA酶)和核糖核酸酶(RNA酶)，它们是分别催化DNA或RNA主链中磷酸二酯键的水解切割从而降解DNA和RNA的任何酶。根据活性的位点有两种主要的分类。外切核酸酶从末端消化核酸。内切核酸酶作用于靶分子中间的区域。核酸酶优选为DNA酶，其优选可得自微生物，优选细菌；特别地，可得自芽孢杆菌属的物种的DNA酶是优选的；特别地，可获自食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)、枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌的DNA酶是优选的。合适的DNA酶的实例在WO 2011/098579、WO 2014/087011和WO 2017/060475中描述。
分散剂
清洁例如本发明的洗涤剂组合物也可以包含分散剂。特别地，粉状洗涤剂可以包含分散剂。合适的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。合适的分散剂例如描述于PowderedDetergents[粉末洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列],第71卷,马塞尔德克尔公司(Marcel Dekker,Inc.)中。
染料转移抑制剂
清洁例例如本发明的洗涤剂组合物还可包含一种或多种染料转移抑制剂。适合的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。当在主题组合物中存在时，染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％的水平存在。
荧光增白剂
本发明的清洁组合物例如洗涤剂组合物还将优选地含有另外的组分，这些组分可以给正在清洁的物品着色，例如荧光增白剂或光学增亮剂。当存在时，该增亮剂优选地以约0.01％至约0.5％的水平存在。在本发明的组合物中可以使用合适用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨基芪-磺酸衍生物型的实例包括以下的钠盐：4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴-嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选的是荧光增白剂是可商购的Parawhite KX，由印度孟买的派拉蒙矿物与化学品公司(Paramount Minerals andChemicals)供应。合适用于本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-氨烷基香豆素。合适的荧光增亮剂水平包括从约0.01wt％、从0.05wt％、从约0.1wt％或甚至从约0.2wt％的较低水平至0.5wt％或甚至0.75wt％的较高水平。
污垢释放聚合物
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些聚合物帮助从织物(如棉和基于聚酯的织物)去除污垢，特别是从基于聚酯的织物去除疏水性污垢。污垢释放聚合物可以例如是基于非离子型或阴离子型对苯二甲酸的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如Powdered Detergents[粉末洗涤剂]，Surfactant science series[表面活性剂科学系列]第71卷，第7章，马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker，Inc.)。另一种类型的污垢释放聚合物是包含核心结构和附接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。核心结构可以包含聚烷基烯亚胺结构或聚链烷醇胺结构，如在WO 2009/087523中详细描述的(通过引用并入本文)。此外，随机接枝共聚物是合适的污垢释放聚合物。合适的接枝共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856以及WO 2006/113314中(通过引用并入本文)。合适的聚乙二醇聚合物包括包含以下的无规接枝共聚物：(i)包含聚乙二醇的亲水性主链；以及(ii)选自下组的一条或多条侧链，该组由以下组成：C4-C25烷基基团、聚丙烯、聚丁烯、饱和C1-C6单羧酸的乙烯基酯、丙烯酸或甲基丙烯酸的Cl-C6烷基酯及其混合物。合适的聚乙二醇聚合物具有聚乙二醇主链(具有无规接枝的聚乙酸乙烯酯侧链)。聚乙二醇主链的平均分子量范围可以为从2,000Da至20,000Da、或从4,000Da至8,000Da。聚乙二醇主链与聚乙酸乙烯酯侧链的分子量比率可以在从1:1至1:5、或从1:1.2至1:2的范围内。每个环氧乙烷单元的接枝位点的平均数量可以小于1、或小于0.8，每个环氧乙烷单元的接枝位点的平均数量可在0.5至0.9的范围内，或每个环氧乙烷单元的接枝位点的平均数量可以在0.1至0.5、或0.2至0.4的范围内。合适的聚乙二醇聚合物是Sokalan HP22。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，如修饰的纤维素衍生物，如EP 1867808或WO 2003/040279中所描述的那些(将二者都通过引用并入本文)。合适的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺以及其混合物。合适的纤维素聚合物包括阴离子修饰的纤维素、非离子修饰的纤维素、阳离子修饰的纤维素、兼性离子修饰的纤维素及其混合物。合适的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。
抗再沉积剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、和乙氧基化的聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下描述的基于纤维素的聚合物还可以用作抗再沉积剂。
流变改性剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种流变改性剂、结构剂或增稠剂，不同于降粘剂。流变改性剂选自下组，该组由以下组成：非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂，它们为液体洗涤剂组合物的水性液相基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度，例如，如在EP 2169040中所示。其他合适的清洁组合物组分包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物软化剂、填充剂、泡沫调节剂、水溶助剂、香料、颜料、抑泡剂、溶剂以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹性剂。
洗涤剂产品的配制品
本发明的清洁组合物例如洗涤剂组合物可以处于任何常规形式，例如条，均匀的片剂，具有两层或更多层的片剂，具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，膏，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。
袋可以被配置为单一室或多室。它可以具有适合用于容持该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。袋由水溶性膜制成，它包含了一个内部体积。可以将所述内部体积分成袋的室。优选的膜是聚合物材料，优选地形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物，这些共混组合物包含可水解降解并且可水溶的聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考号M8630下，如由美国印第安纳州的MonoSol有限责任公司(MonoSol LLC)销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。袋可以包含固体洗衣清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。可用于液体组分的室在组成上可以与含有固体的室不同：US2009/0011970A1。
可以由水溶性袋中的或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分彼此物理分开。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。
非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且最高达95％的水，例如高达约70％的水、高达约65％的水、高达约55％的水、高达约45％的水、高达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有从0-30％的有机溶剂。液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
颗粒洗涤剂配制品
无尘颗粒可以例如如在US 4,106,991和4,661,452中所披露而产生，并且可以任选地通过本领域已知的方法进行包衣。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中醇含有12至20个碳原子，并且其中存在15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP 238,216中披露的方法来制备。
可以将糖基水解酶(例如GH114糖基水解酶)配制为颗粒，例如，配制为结合一种或多种酶的共颗粒。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度，不同酶的物理隔离。用于产生针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于IP.com公开内容IPCOM 000200739D中。
通过使用共颗粒的酶的配制品的另一个实例披露于WO 2013/188331中，其涉及包含以下的洗涤剂组合物：(a)多酶共颗粒；(b)少于10wt沸石(无水的基础上)；和(c)少于10wt磷酸盐(无水的基础上)，其中所述酶共颗粒包含从10wt％至98wt％的水分汇组分(sink component)，并且该组合物另外还包含从20wt％至80wt％的洗涤剂水分汇组分。该多酶共颗粒可以包含本发明的酶和一种或多种选自下组的酶，该组由以下组成：蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、木葡聚糖酶、过水解酶、过氧化物酶、脂氧合酶、漆酶、半纤维素酶、蛋白酶、纤维素酶、纤维二糖脱氢酶、木聚糖酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、木质素酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、地衣多糖酶、葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、淀粉酶及其混合物。WO 2013/188331还涉及处理和/或清洁表面(优选织物表面)的方法，该方法包括以下步骤：(i)将所述表面在水性洗涤液中与如本文要求保护的并且描述的洗涤剂组合物接触，(ii)冲洗和/或干燥该表面。
本发明的实施例涉及包含糖基水解酶(例如GH114糖基水解酶)的酶颗粒/粒子。所述颗粒由核心以及任选地包围所述核心的一种或多种包衣(外层)构成。典型地，该颗粒的粒度/粒尺寸(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20-2000μm，特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。该核心可以包括另外材料如填充剂、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、黏度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。该核心可以包括粘合剂，如合成聚合物、蜡、脂肪、或碳水化合物。该核心典型地作为均匀的共混物可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。该核心可以由惰性粒子组成，其中酶被吸附到该惰性粒子之内，或者被施用(例如通过流化床包衣)到该惰性粒子的表面上。核心的直径可以是20-2000μm，特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。该核心可以通过粒化成分的共混物来制备，例如通过包括造粒技术的方法，例如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床凝集、旋转雾化、挤压、颗粒化(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度减小法、转鼓造粒(drum granulation)和/或高剪切造粒。
用于制备核心的方法可见于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册]；C.E.Capes的Particle size enlargement[粒度增大]；第1卷；1980；Elsevier[爱思唯尔]。
该酶颗粒/粒子的核心可以被至少一个包衣包围，例如，以改进储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。该一个或多个任选的包衣可以包括盐包衣、或其他合适的包衣材料，如聚乙二醇(PEG)、甲基羟基-丙基纤维素(MHPC)以及聚乙烯醇(PVA)。具有多种包衣的酶颗粒的实例示于WO 93/07263和WO 97/23606中。可以将该包衣按核心的重量计以至少0.1％(例如，至少0.5％、1％或5％)的量施加。所述量至多可以是100％、70％、50％、40％或30％。所述包衣优选是至少0.1μm厚，特别是至少0.5μm、至少1μm或至少5μm厚。在一个实施例中，包衣的厚度是低于100μm。在另一个实施例中，包衣的厚度是低于60μm。在甚至更特定的实施例中，包衣的总厚度是低于40μm。所述包衣应当通过形成基本上连续的层来密封所述核心单元。基本上连续的层应当理解为具有极少或没有孔洞的包衣，使得密封/封闭的核心单元具有极少或没有未包衣的区域。该层或包衣在厚度上应是均匀的。该包衣可以进一步含有其他本领域已知的材料，例如填料、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘合剂，例如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。盐包衣按重量w/w计可以包括至少60％的盐，例如，按重量w/w计，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。该盐可以从盐溶液(其中该盐是完全溶解的)中添加，或者从盐悬浮液(其中该细粒子是少于50μm，如少于10μm或少于5μm)中添加。所述盐包衣可以包含单一盐或者两种或更多种盐的混合物。该盐可以是水溶性的，并且在20℃下具有在100g水中至少0.1克的溶解度，优选地至少0.5g/100g水，例如，至少1g/100g水，例如，至少5g/100g水。该盐可以是无机盐，例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯盐或碳酸盐或者简单有机酸(少于10个碳原子，例如6个或更少的碳原子)的盐例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中的阳离子的实例是碱或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系的金属离子，例如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯、溴、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。特别地，可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯或碳酸根的碱或碱土金属盐或者简单有机酸的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在包衣中的盐可以在20℃下具有超过60％的恒定湿度，特别地超过70％、超过80％或超过85％，或者它可以是此盐的另一种水合物形式(例如，无水物)。该盐包衣可以如在WO 00/01793或WO 2006/034710中所描述。适合的盐的具体实例是NaCl(CH20℃＝76％)、Na2CO3(CH20℃＝92％)、NaNO3(CH20℃＝73％)、Na2HPO4(CH20℃＝95％)、Na3PO4(CH25℃＝92％)、NH4Cl(CH20℃＝79.5％)、(NH4)2HPO4(CH20℃＝93,0％)、NH4H2PO4(CH20℃＝93.1％)、(NH4)2SO4(CH20℃＝81.1％)、KCl(CH20℃＝85％)、K2HPO4(CH20℃＝92％)、KH2PO4(CH20℃＝96.5％)、KNO3(CH20℃＝93.5％)、Na2SO4(CH20℃＝93％)、K2SO4(CH20℃＝98％)、KHSO4(CH20℃＝86％)、MgSO4(CH20℃＝90％)、ZnSO4(CH20℃＝90％)以及柠檬酸钠(CH25℃＝86％)。其他实例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2以及乙酸镁。所述盐可以处于无水形式，或者它可以是水合盐，即具有结晶化的一个或多个结合水的结晶盐水合物，例如描述于WO 99/32595中。具体实例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、七水硫酸镁(MgSO4·7H2O)、七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O)、七水磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)、六水硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、二水柠檬酸钠以及四水乙酸镁。优选地，作为盐溶液使用该盐，例如使用流化床。
本发明的一个实施例提供了颗粒，该颗粒包含：
(a)核心，该核心包含根据本发明的GH114糖基水解酶，以及
(b)任选地由包围该核心的一个或多个层组成的包衣。
本发明的一个实施例涉及颗粒，该颗粒包含：
(a)核心，其包含GH114糖基水解酶，该GH114糖基水解酶优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQID NO 144、SEQ ID NO 145、SEQ ID NO 146中所示的氨基酸序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性和
(b)任选地由包围核心的一个或多个层组成的包衣。
医用清洁
本发明还涉及清洁医疗装置的方法，并且涉及包含糖基水解酶(优选GH114糖基水解酶)和至少一种佐剂成分的组合物用于清洁医疗装置的用途。本发明还涉及防止在医疗装置(例如留置医疗装置或植入物)上形成生物膜的方法，该方法包括用至少一种GH114糖基水解酶涂覆该装置。
本发明的一个实施例涉及防止在医疗装置(例如留置医疗装置或植入物)上形成生物膜的方法，该方法包括用至少一种GH114糖基水解酶涂覆该装置。
适用于医疗清洁和用于医疗清洁的组合物的多肽在上文描述并且包括：包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO 71)的多肽，和/或选自由具有氨基酸序列SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ IDNO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ IDNO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ IDNO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ IDNO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145、SEQ IDNO 146的多肽组成的组的多肽和与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
本发明的一个方面涉及清洁医疗装置的方法，其中该方法包括
a)使该医疗装置与包含糖基水解酶(优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，优选GH114糖基水解酶)的组合物接触持续有效清洁该医疗装置的一段时间；
b)清洁该医疗装置；以及
c)任选地对该医疗装置进行消毒。
本发明的一个方面涉及清洁医疗装置的方法，其中该方法包括
a)使该医疗装置与包含GH114糖基水解酶(优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性)的组合物接触，该糖基水解酶包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ IDNO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO 71)
b)和/或选自由以下组成的组：具有SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145、SEQ ID NO 146中所示的氨基酸序列的GH114糖基水解酶和与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，持续有效清洁医疗装置的时间段；
c)清洁该医疗装置；以及
d)任选地对该医疗装置进行消毒。
一个实施例涉及包含糖基水解酶(优选GH114糖基水解酶)和优选的佐剂成分的组合物，该GH114糖基水解酶包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ IDNO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO 71)和/或选自由以下组成的组：具有氨基酸序列SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ IDNO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ IDNO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ IDNO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ IDNO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ IDNO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ IDNO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ IDNO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ IDNO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ IDNO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ IDNO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ EDNO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ IDNO 144、SEQ ID NO 145、SEQ ID NO 146的糖基水解酶和与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。该组合物可以是抗生物污损组合物，并且该组合物可以是清洁组合物或药物组合物。佐剂成分可以是适用于例如清洁组合物或药物组合物的任何赋形剂。佐剂/赋形剂在本领域技术人员的选择范围内。佐剂成分可以选自下组，该组由以下组成：表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物柔顺剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防腐蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂、以及增溶剂。这些组合物可以用于使例如医疗装置表面上的生物膜脱落或防止生物膜形成。
本发明的一个实施例涉及组合物用于清洁医疗装置或植入物的用途，该组合物包含糖基水解酶和优选的佐剂成分，该糖基水解酶优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，优选是GH114糖基水解酶，该GH114糖基水解酶包含一个或多个[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO 71)和/或选自由以下组成的组：具有SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO132、SEQ ED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145、SEQ ID NO 146的氨基酸序列的糖基水解酶和与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100序列同一性的多肽。
医疗装置是用于诊断、预防、缓解或治疗疾病、残疾、损伤等的产品。该术语包括轮椅、眼镜到起搏器、移动电话应用程序和最先进的手术设备。医疗装置分为四类，分别为I、IIa、IIb和III，其中I类是最低风险，并且III类是最高风险。医疗装置的特征可以在于将所述装置的患者可接触表面的至少一部分用包含本发明的GH114糖基水解酶的组合物进行涂覆。医疗装置或植入物可以是易于形成生物膜的任何装置或植入物。医疗装置可以选自下组，该组由以下组成：导管如中央静脉导管、血管内导管、导尿管、希克曼导管、腹膜透析管、气管导管、内窥镜，或其中该装置是机械心脏瓣膜、心脏起搏器、动静脉分流、巩膜扣、人工关节、鼓膜造孔插管、气管造口管、声音假体、阴茎假体、人工尿道括约肌、合成的耻骨阴道吊带、手术用缝线、骨锚、骨螺钉、人工晶状体、接触镜、宫内节育器、主动脉股动脉移植物、血管移植物、针、Luer-Lok连接器、无针连接器以及外科器械。
用途
具有水解活性的本发明的多肽可用于清洁(例如深度清洁)物品(例如纺织品)。本发明的一个实施例涉及糖基水解酶(优选GH114糖基水解酶)在清洁过程(例如衣物洗涤和/或餐具洗涤)中的用途。
在一个优选的实施例中，本发明的GH114糖基水解酶多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ IDNO 71)。在优选的实施例中，GH114糖基水解酶包含选自由以下组成的组的基序中的一个或多个：[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO 71)。
在本发明的一些实施例中涉及糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的糖基水解酶，优选根据本发明的GH114糖基水解酶用于预防减少或去除恶臭的用途。本发明的一些实施例涉及本发明的多肽用于对经过多次洗涤的纺织品进行抗再沉积的防止或减少和改进白度的用途。本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的糖基水解酶，优选根据本发明的GH114糖基水解酶在物品的深度清洁中的用途，其中物品是纺织品。本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的糖基水解酶，优选根据本发明的GH114糖基水解酶多肽的用途，该用途是
(i)用于防止、减少或去除物品的粘性；
(ii)用于预处理该物品上的污渍；
(iii)用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
(iv)用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
(v)用于维持或改进物品的白度；
(vi)用于防止、减少或去除该物品的恶臭，
其中该物品是纺织品。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的糖基水解酶，优选根据本发明的GH114糖基水解酶多肽在物品的深度清洁中的用途，其中物品是纺织品。本发明的一个实施例涉及糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的糖基水解酶，优选GH114糖基水解酶多肽的用途，该用途是
(i)用于防止、减少或去除物品的粘性；
(ii)用于预处理该物品上的污渍；
(iii)用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
(iv)用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
(v)用于维持或改进物品的白度；
(vi)用于防止、减少或去除该物品的恶臭，任选地其中该物品是纺织品，其中该糖基水解酶多肽选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 15中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 18中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(r)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(s)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
一个优选的实施例涉及GH114糖基水解酶的以下用途：
i.用于防止、减少或去除物品的粘性；
ii.用于防止、减少或去除生物膜或生物膜组分；
iii.用于减少或去除物品上的pel污渍；
iv.用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
v.用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
vi.用于维持或改进物品的白度；
vii.用于防止、减少或去除该物品的恶臭，
其中该物品是纺织品。
一个优选的实施例涉及GH114糖基水解酶的以下用途：
i.用于防止、减少或去除物品的粘性；
ii.用于防止、减少或去除生物膜或生物膜组分；
iii.用于减少或去除物品上的pel污渍；
iv.用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
v.用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
vi.用于维持或改进物品的白度；
vii.用于防止、减少或去除该物品的恶臭，
其中该物品是纺织品，并且其中该多肽选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 15中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 18中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(r)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(s)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
一个优选的实施例涉及GH114糖基水解酶的以下用途：
i.用于防止、减少或去除物品的粘性；
ii.用于防止、减少或去除生物膜或生物膜组分；
iii.用于减少或去除物品上的pel污渍；
iv.用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
v.用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
vi.用于维持或改进物品的白度；
vii.用于防止、减少或去除该物品的恶臭，
其中该物品是纺织品，并且其中该多肽选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
一个优选的实施例涉及GH114糖基水解酶的以下用途：
i.用于防止、减少或去除物品的粘性；
ii.用于防止、减少或去除生物膜或生物膜组分；
iii.用于减少或去除物品上的pel污渍；
iv.用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
v.用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
vi.用于维持或改进物品的白度；
vii.用于防止、减少或去除该物品的恶臭，
其中该物品是纺织品，并且其中该多肽选自由以下组成的组：
多肽，该多肽与SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQED NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQID NO 144、SEQ ID NO 145和SEQ ID NO 146中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
本发明的多肽特别适用于清洁过程(例如衣物洗涤)，其中多肽有效地减少生物膜组分，例如包含α-1,4-聚半乳糖胺的生物膜，如以下实例中所示。本发明的一个实施例涉及用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：
a.将物品暴露于洗涤液或组合物，该洗涤液包含GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的GH114糖基水解酶，该组合物包含GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的GH114糖基水解酶；
b.完成至少一个洗涤循环；以及
c.任选地冲洗该物品，
其中该物品是纺织品。
本发明的一个优选的实施例涉及用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：
a.将物品暴露于洗涤液或组合物，该洗涤液包含糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的糖基水解酶，优选GH114糖基水解酶，该组合物包含糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的糖基水解酶，其中糖基水解酶选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 15中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 18中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(r)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(s)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
b.完成至少一个洗涤循环；以及
c.任选地冲洗该物品，
其中该物品是纺织品。
一个优选的实施例涉及用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：
a.将物品暴露于洗涤液或组合物，该洗涤液包含GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的GH114糖基水解酶，该组合物包含GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的GH114糖基水解酶，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的组：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性
b.完成至少一个洗涤循环；以及
c.任选地冲洗该物品，
其中该物品是纺织品。
本发明的一个优选的实施例涉及用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：
a.将物品暴露于洗涤液或组合物，该洗涤液包含糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的糖基水解酶，优选GH114糖基水解酶，该组合物包含糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的糖基水解酶，其中糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ IDNO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ IDNO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ IDNO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ IDNO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ED NO:133、SEQID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQID NO 145和SEQ ID NO 146中所示的多肽具有至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，
b.完成至少一个洗涤循环；以及
c.任选地冲洗该物品，
其中该物品是纺织品。
在以下段落中进一步总结了本发明：
1.包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO 71)的多肽用于深度清洁物品的用途，其中该物品是纺织品。
2.根据段落1所述的用途，用于防止、减少或去除该物品的粘性。
3.根据段落1或2中任一项所述的用途，用于预处理该物品上的污渍。
4.根据段落1-3中任一项所述的用途，用于防止、减少或去除洗涤循环期间污垢的再沉积。
5.根据段落1-4中任一项所述的用途，用于防止、减少或去除污垢在该物品上的附着。
6.根据前述段落中任一项所述的用途，用于维持或改进所述物品的白度。
7.根据前述段落中任一项所述的用途，其中从该物品减少或去除恶臭。
8.根据前述组合物段落中任一项所述的用途，其中该表面是纺织品表面。
9.根据前述组合物段落中任一项所述的用途，其中该纺织品由棉、棉/聚酯、聚酯、聚酰胺、聚丙烯和/或丝绸制成。
10.根据前述段落中任一项所述的用途，其中该多肽是根据段落68-108所述的多肽。
11.一种组合物，该组合物包含多肽和清洁成分或佐剂成分，该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO 71)。
12.根据段落11所述的组合物，其中该多肽是段落55-79中所示的多肽。
13.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该洗涤剂佐剂成分选自由以下组成的组：表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合试剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、粘土去污剂/抗再沉积剂、增亮剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物软化剂、载体、水溶助剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或颜料。
14.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该组合物包含从约5wt％至约50wt％、从约5wt％至约40wt％、从约5wt％至约30wt％、从约5wt％至约20wt％、从约5wt％至约10wt％的阴离子表面活性剂，优选地选自直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(例如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸或脂肪酸盐(皂)的二酯和单酯及其组合。
15.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该组合物包含从约10wt％至约50wt％的至少一种助洗剂，优选地选自柠檬酸、甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)及其混合物。
16.根据前述段落中任一项所述的组合物，该组合物包含从约5wt％至约40wt％的非离子型表面活性剂、和从约0wt％至约5wt％的阴离子型表面活性剂。
17.根据段落16所述的组合物，其中该非离子型表面活性剂选自：醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(例如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))及其组合。
18.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该组合物进一步包括选自下组的一种或多种酶，该组由以下组成：蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶和氧化酶。
19.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该组合物是条，均匀的片剂，具有两个或更多个层的片剂，具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，膏，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。
20.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该组合物是选自液体洗涤剂、粉末洗涤剂和颗粒洗涤剂组合物的清洁组合物。
21.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ IDNO 71)并且其中该多肽选自由以下组成的组：具有氨基酸序列SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO131、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145、SEQ ID NO 146的多肽和与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
22.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO65)，并包含SEQ ID NO 3所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
23.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO65)，并包含SEQ ID NO 6所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
24.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO65)，并包含SEQ ID NO 9所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
25.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO65)，并包含SEQ ID NO 12所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
26.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)，并包含SEQ IDNO 15所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
27.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、DFAVL(SEQ ID NO 71)，并包含SEQ ID NO18所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
28.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO65)，并包含SEQ ID NO 21所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
29.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO65)，并包含SEQ ID NO 24所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
30.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、WQWQL(SEQ IDNO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)，并包含SEQ ID NO 27所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
31.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、WQWQL(SEQ IDNO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)，并包含SEQ ID NO 33所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
32.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、WQWQL(SEQ IDNO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)，并包含SEQ ID NO 36所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
33.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)，并包含SEQ IDNO 30所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
34.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)，并包含SEQ ID NO 39所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
35.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)，并包含SEQ ID NO 42所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
36.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)，并包含SEQ ID NO 45所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
37.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)，并包含SEQ ID NO 48所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
38.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)，并包含SEQ ID NO 51所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
39.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO65)，并包含SEQ ID NO 54所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
40.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物，其中该多肽包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)，并包含SEQ IDNO 57所示的氨基酸序列或与其具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
41.一种用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：
a)将物品暴露于洗涤液，该洗涤液包含根据段落55-79所述的多肽或根据段落11-40中任一项所述的组合物；
b)完成至少一个洗涤循环；以及
c)任选地冲洗该物品，
其中该物品是纺织品。
42.一种处理物品的方法，其中该物品优选为纺织品，所述方法包括以下步骤：
a.将物品暴露于选自由以下组成的组的多肽：与SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 5、SEQID NO 8、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 23、SEQID NO 26、SEQ ID NO 29、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 35、SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 41、SEQID NO 44、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 50、SEQ ID NO 53、SEQ ID NO 56的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或包含以下中所示的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO144、SEQ ID NO 145或SEQ ID NO 146；使该物品与包含根据任何前述段落所述的多肽或组合物的洗涤液接触。
43.根据任一前述段落所述的方法，其中该洗涤液的pH在1至11的范围内。
44.根据前述方法段落中任一项所述的方法，其中该洗涤液的pH在5.5至11的范围内，如在7至9的范围内，在7至8的范围内或在7至8.5的范围内。
45.根据前述方法段落中任一项所述的方法，其中该洗涤液的温度在5℃至95℃的范围内、或在10℃至80℃的范围内、在10℃至70℃的范围内、在10℃至60℃的范围内、在10℃至50℃的范围内、在15℃至40℃的范围内、在20℃至40℃的范围内、在15℃至30℃的范围内或在20℃至30℃的范围内。
46.根据前述方法段落中任一项所述的方法，其中该洗涤液的温度是从约20℃至约40℃。
47.根据前述方法段落中任一项所述的方法，其中该洗涤液的温度是约15℃至约30℃。
48.根据前述方法段落中任一项所述的方法，其中将该物品上存在的污渍用根据段落55-79所述的多肽或根据段落11-40中任一项所述的洗涤剂组合物进行预处理。
49.根据前述方法段落中任一项所述的方法，其中该物品的粘性被减少。
50.根据前述方法段落中任一项所述的方法，其中污垢再沉积被减少。
51.根据前述方法段落中任一项所述的方法，其中污垢在该物品上的附着被减少或去除。
52.根据前述方法段落中任一项所述的方法，其中该物品的白度被维持或改进。
53.根据前述方法段落中任一项所述的方法，其中从该物品减少或去除恶臭。
54.根据前述方法段落中任一项所述的方法，其中在该洗涤液中具有水解活性的多肽的浓度为每升洗涤液在0.002mg/L至2mg/L、如0.02mg/L至2mg/L、如0.2mg/L至2mg/L的范围内、或在0.0001mg/L至10mg/L的范围内、或在0.001mg/L至10mg/L的范围内、或在0.01mg/L至10mg/L的范围内、或在0.1mg/L至10mg/L的范围内；任选地本发明中所示的多肽的浓度为在总洗涤剂浓度中0.0001％至2wt％，如0.001至0.1wt％、如0.005至0.1wt％、如0.01至0.1wt％、如0.01至0.5wt％、或最优选的0.002至0.09wt％。
55.一种具有水解活性，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的多肽，该多肽选自由以下组成的组：
a)与SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 14、SEQID NO 17、SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 23、SEQ ID NO 26、SEQ ID NO 29、SEQ ID NO 32、SEQID NO 35、SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 44、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 50、SEQID NO 53、SEQ ID NO 56的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，或与SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ IDNO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ IDNO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ IDNO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ IDNO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ IDNO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ IDNO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ IDNO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ IDNO 132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ IDNO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145或SEQ ID NO 146中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
b)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在低严格条件下与以下杂交：
i.SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 13、SEQID NO 16、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO 22、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 31、SEQID NO 34、SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQID NO 52、SEQ ID NO 55中所示的成熟多肽编码序列；
ii.其cDNA序列，或
iii.(i)或(ii)的全长互补序列；
c)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 4、SEQ ID NO7、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 16、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO 22、SEQ ID NO25、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 34、SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60％序列同一性；
d)SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQID NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQID NO 144、SEQ ID NO 145或SEQ ID NO 146中所示的多肽的在一个或多个位置包含取代、缺失和/或插入的变体；以及
e)(a)、(b)、(c)或(d)中所示多肽的片段，该片段包含一个或多个基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO71)。
56.根据段落55所述的多肽，其与SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 8、SEQID NO 11、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 23、SEQ ID NO 26、SEQID NO 29、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 35、SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 44、SEQID NO 47、SEQ ID NO 50、SEQ ID NO 53、SEQ ID NO 56的成熟多肽或与SEQ ID NO 3、SEQID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQID NO 78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQID NO 90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQID NO 96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ IDNO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ IDNO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ IDNO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ IDNO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145或SEQ ID NO 146中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
57.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 2的成熟多肽或与SEQ IDNO 3中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
58.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 5的成熟多肽或与SEQ IDNO 6中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
59.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 8的成熟多肽或与SEQ IDNO 9中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
60.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 11的成熟多肽或与SEQ IDNO 12中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
61.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 14的成熟多肽或与SEQ IDNO 15中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
62.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 17的成熟多肽或与SEQ IDNO 18中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
63.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 20的成熟多肽或与SEQ IDNO 21中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
64.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 23的成熟多肽或与SEQ IDNO 24中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
65.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 26的成熟多肽或与SEQ IDNO 27中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
66.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 29的成熟多肽或与SEQ IDNO 30中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
67.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 32的成熟多肽或与SEQ IDNO 33中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
68.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 35的成熟多肽或与SEQ IDNO 36中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
69.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 38的成熟多肽或与SEQ IDNO 39中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
70.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 41的成熟多肽或与SEQ IDNO 42中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
71.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 44的成熟多肽或与SEQ IDNO 45中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
72.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 47的成熟多肽或与SEQ IDNO 48中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
73.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 50的成熟多肽或与SEQ IDNO 51中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
74.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 53的成熟多肽或与SEQ IDNO 54中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
75.根据段落55或56所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO 56的成熟多肽或与SEQ IDNO 57中所示的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
76.根据段落55至75中任一项所述的多肽，该多肽由以下多核苷酸编码，该多核苷酸在低严格条件、低-中严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与以下杂交：
i.SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 13、SEQID NO 16、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO 22、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 31、SEQID NO 34、SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQID NO 52、SEQ ID NO 55中所示的成熟多肽编码序列；
ii.其cDNA序列，或
iii.(i)或(ii)的全长互补序列。
77.根据段落55至76中任一项所述的多肽，该多肽由与SEQ ID NO 1、SEQ ID NO4、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 16、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO22、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 34、SEQ ID NO 37、SEQ ID NO40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多核苷酸编码。
78.根据段落55至77中任一项所述的多肽，其包含以下或由以下组成：SEQ ID NO3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO57，或SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO14、SEQ ID NO17、SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 23、SEQ ID NO 26、SEQ ID NO 29、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO35、SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 44、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 50、SEQ ID NO53、SEQ ID NO 56的成熟多肽。
79.根据段落55至78中任一项所述的多肽，其是具有SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO78、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO90、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO96、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ IDNO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ IDNO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ IDNO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO 134、SEQ IDNO 135、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144、SEQ ID NO 145或SEQ IDNO 146的多肽中的任一个的在一个或多个位置包含取代、缺失和/或插入的变体。
80.根据段落55至79中任一项所述的多肽，用作药物。
81.根据段落55至79中任一项所述的多肽，用于治疗或预防细菌感染，优选地所述细菌感染是由革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌引起的感染，进一步优选地，所述细菌感染选自由以下组成的组：葡萄球菌属物种(例如，表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌)、肠球菌属物种(例如，粪肠球菌)、埃希氏菌属物种(例如，大肠杆菌)、李斯特菌属物种(例如，单核细胞增生李斯特氏菌)、假单胞菌属物种(例如，铜绿假单胞菌)、芽孢杆菌属物种、沙门氏菌属物种、凝固酶阴性葡萄球菌，克雷伯氏菌属物种(例如，肺炎克雷伯氏菌)感染。
82.根据段落55至79中任一项所述的多肽，用于治疗或预防选自由以下组成的组的疾病：囊性纤维化肺炎(例如，由铜绿假单胞菌和/或洋葱伯克霍尔德菌引起)、类鼻疽(例如，由类鼻疽假单孢菌引起)、坏死性筋膜炎(例如，由A群链球菌引起)、肌肉骨骼感染(例如，由葡萄球菌和其他革兰氏阳性球菌引起)、中耳炎(例如，由流感嗜血杆菌引起)、胆道感染(例如，由大肠杆菌和其他肠道细菌引起)、尿管膀胱炎(例如，由大肠杆菌和其他革兰氏阴性杆菌引起)、细菌性前列腺炎(例如，大肠杆菌和其他革兰氏阴性细菌)、牙周炎(例如，由革兰氏阴性口腔厌氧细菌引起)、龋齿(例如，由链球菌属物种和其他产酸性革兰氏阳性球菌引起)。
83.一种多核苷酸，该多核苷酸编码根据段落55至79中任一项所述的多肽。
84.一种核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包含根据段落83所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽在表达宿主中的产生的一个或多个控制序列。
85.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含根据段落83所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列。
86.一种产生根据段落55-79中任一项所示的多肽的方法，该方法包括：在有益于产生该多肽的条件下培养细胞，所述细胞以其野生型形式产生该多肽。
87.根据段落86所述的方法，该方法进一步包括回收该多肽。
88.一种产生根据段落55至79中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：在有益于产生该多肽的条件下培养根据段落85所述的宿主细胞。
89.根据段落88所述的方法，该方法进一步包括回收该多肽。
90.一种核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包括编码蛋白质的可操作地连接至根据段落83所述的多核苷酸的基因，其中该基因对于编码该信号肽的多核苷酸而言是外源的。
91.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含编码蛋白质的可操作地连接至根据段落83所述的多核苷酸的基因，其中该基因对于编码该信号肽的多核苷酸而言是外源的。
92.一种产生蛋白质的方法，该方法包括：在有益于产生该蛋白质的条件下培养重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含编码蛋白质的可操作地连接至根据段落83所述的多核苷酸上的基因，其中该基因对于编码该信号肽的多核苷酸而言是外源的。
93.根据段落92所述的方法，该方法进一步包括回收该蛋白质。
94.根据段落41-54中任一项所述的方法洗涤的物品。
在以下段落中进一步描述本发明：
段落1.一种包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)和/或基序CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)的GH114糖基水解酶，其中该GH114糖基水解酶具有水解性活性，并且其中该GH114糖基水解酶包含以下或由以下组成：选自由以下组成的组的多肽：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 30中所示的多肽具有至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(o)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(p)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(q)多肽，该多肽与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
段落2.根据段落1所述的GH114糖基水解酶，该GH114糖基水解酶包含基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)和/或基序FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO63)，其中该GH114糖基水解酶包含以下或由以下组成：选自由以下组成的组的多肽：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(h)多肽，该多肽与SEQ ID NO 36中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(i)多肽，该多肽与SEQ ID NO 39中所示的多肽具有至少99％或100％序列同一性；
(j)多肽，该多肽与SEQ ID NO 42中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(k)多肽，该多肽与SEQ ID NO 45中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(l)多肽，该多肽与SEQ ID NO 48中所示的多肽具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(m)多肽，该多肽与SEQ ID NO 51中所示的多肽具有至少98％、至少99％或100％序列同一性；以及
(n)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
段落3.根据段落1或2所述的GH114糖基水解酶，该GH114糖基水解酶包含基序AEECG(SEQ ID NO 64)和/或基序NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)，其中该GH114糖基水解酶包含以下或由以下组成：选自由以下组成的组的多肽：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(d)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(e)多肽，该多肽与SEQ ID NO 21中所示的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(f)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
(g)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
段落4.根据段落1所述的GH114糖基水解酶，该GH114糖基水解酶包含一个、两个或所有三个基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)或ICYFSA(SEQID NO 70)，其中该GH114糖基水解酶是与SEQ ID NO 57中所示的多肽具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
段落5.根据段落1所述的GH114糖基水解酶，该GH114糖基水解酶包含基序WQWQL(SEQ ID NO 66)和/或基序[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)，其中该GH114糖基水解酶是与SEQ ID NO 27中所示的多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
段落6.根据段落1至3中任一项的GH114糖基水解酶，其中该GH114糖基水解酶获自拟无枝酸菌属，优选瑟西拟无枝酸菌或拟无枝酸菌属物种，并且其中该GH114糖基水解酶包含以下或由以下组成：选自由以下组成的组的多肽：
a)与SEQ ID NO 3中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
b)与SEQ ID NO 6中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；或
c)与SEQ ID NO 9中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
段落7.根据段落1-3中任一项的GH114糖基水解酶，其中该GH114糖基水解酶获自链霉菌属，优选微小链霉菌或米哈希斯链霉菌，并且其中该GH114糖基水解酶包含以下或由以下组成：选自由以下组成的组的多肽：
a)多肽，该多肽与SEQ ID NO 12中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；
b)多肽，该多肽与SEQ ID NO 24中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；或
c)多肽，该多肽与SEQ ID NO 54中所示的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
段落8.根据段落6或7所述的GH114糖基水解酶，其中GH114糖基包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)中的一个或多个或甚至全部。
段落9.一种颗粒，该颗粒包含：
(a)核心，该核心包含根据段落1至8中任一项所述的GH114糖基水解酶，和
(b)任选地由包围核心的一个或多个层组成的包衣。
段落10.一种清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.001ppm的至少一种根据段落1至8中任一项所述的GH114糖基水解酶；
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选地选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和另外的酶。
段落11.一种用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：
(a)将物品暴露于洗涤液，该洗涤液包含根据段落1至8中任一项所述的GH114糖基水解酶或根据段落10所述的组合物；
(b)完成至少一个洗涤循环；以及
(c)任选地冲洗该物品，
其中该物品是纺织品。
段落12.GH114糖基水解酶在清洁过程，例如衣物洗涤和/或餐具洗涤中的用途。
段落13.GH114糖基水解酶的以下用途：
i.用于防止、减少或去除物品的粘性；
ii.用于防止、减少或去除生物膜或生物膜组分；
iii.用于减少或去除物品上的pel污渍；
iv.用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
v.用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
vi.用于维持或改进物品的白度；
vii.用于防止、减少或去除物品的恶臭，
其中该物品是纺织品。
段落14.根据段落12或13中任一项所述的用途，其中该GH114糖基水解酶包含选自由以下组成的组的基序中的一个或多个：[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)、DFAVL(SEQ ID NO 71)。
段落15.根据段落12至14中任一项所述的用途，其中该多肽选自根据段落1至8所述的任何GH114糖基水解酶。
实例
标准洗涤剂
通过将含有12％LAS、11％AEO Biosoft N25-7(NI)、5％AEOS(SLES)、6％MPG(单丙二醇)、3％乙醇、3％TEA、2.75％可可皂、2.75％大豆皂、2％甘油、2％氢氧化钠、2％柠檬酸钠、1％甲酸钠、0.2％DTMPA和0.2％PCA(所有的百分数都是w/w)3.33g/l的标准洗涤剂A溶解在具有硬度15dH的水中制备标准洗涤剂A洗液(100％)。
通过将含有NaOH 0.87％、MPG(一丙醇)6％、甘油2％、皂-大豆2.75％、皂-可可2.75％、PCA(Sokalon CP-5)0.2％、AEO Biosoft N25-7(NI)16％、甲酸钠1％、柠檬酸钠2％、DTMPA 0.2％、乙醇(96％)3％(所有的百分数都是w/w)的3.33g/l非离子型洗涤剂溶解在具有硬度15dH的水中制备Triple-20非离子型标准洗涤剂(NI型)(60％表面活性剂)。
标准洗涤剂MC：制备含有5％MPG(丙二醇)、5％Pluronic PE 4300(PO/EO嵌段聚合物；70％/30％，约1750g/mol)、2％Plurafac LF 305(脂肪醇烷氧基化物；C6-10+EO/PO)、1％MGDA(甲基甘氨酸二乙酸、1％TEA(三乙醇胺)(所有的百分数都是w/w)的医用清洁标准洗涤剂(标准洗涤剂MC)。用磷酸将pH调节至8.7。
洗涤测定
迷你Launder-O-Meter(迷你LOM)标准洗涤系统
迷你LOM是Launder-O-Meter(LOM)的修饰的迷你洗涤系统，其是中等规模标准洗涤系统，它可以应用于同时测试多达20种不同洗涤条件。LOM基本上是大型的具有20个封闭金属烧杯在其中旋转的温度受控的水浴。每个烧杯构成一个小的洗衣机并且在一次实验过程中，每个试管将包含一种具有特定的有待测试的洗涤剂/酶系统连同在关于其进行测试的弄脏的和未弄脏的织物。机械压力由在水浴中旋转的烧杯并且由包括在烧杯中的金属球实现。
LOM标准洗涤系统主要用于洗涤剂和酶的中等规模测试，在例如欧洲洗涤条件下。在LOM实验中，因素如压载物与污垢的比率和织物与洗涤液的比率可以变化。因此，LOM提供了在小规模实验(如AMSA和微型洗涤)与在前装式洗衣机中的更费时的全规模实验之间的联系。在迷你LOM中，洗涤是在置于斯图尔特(Stuart)旋转器中的50ml试管中进行的。
对聚半乳糖胺底物的活性
酶活性已使用还原末端测定法确定。在20mM乙酸缓冲液pH 6中，将90μl聚半乳糖胺2mg/ml与10μl 50nM酶在PCR-MTP孔中于30℃孵育30min。通过与75μl p-羟基苯甲酸酰肼(西格玛公司(Sigma)，H-9882，15mg/ml)在95℃下反应10min，然后在405nm处进行吸光度测定，确定形成的还原末端数。
表1对聚半乳糖胺底物的活性
Figure BDA0002746970670002111
Figure BDA0002746970670002121
聚半乳糖胺的生产
如Takagi和K.Kadowaki,Agricultural and Biological Chemistry[农业与生物化学],49:11,3151-3157(1985)中所述，使用2018年9月从日本保藏处获得的相同的Simplicillum菌株(以前称为拟青霉属物种(Paecilomyces sp.))制备了粗的半乳糖胺底物。简而言之，将菌株在GPC培养基(3％葡萄糖，0.3％蛋白胨，0.5％CaCl2，pH 7)中于26℃在振荡条件(100rpm)下培养5天。培养后，如Hiroaki Takagi&Kiyoshi Kadowaki,Agricultural and Biological Chemistry[农业与生物化学],49:11,3159-3164(1985)中所述，分离上清液(Miracloth过滤)并直接用于洗涤实验或用乙醇沉淀。将得到的沉淀物溶于1M乙酸中过夜，用20mM乙酸缓冲液pH 6透析，并用于酶活性测量。
实例1：多肽的克隆和表达
从细菌菌株中以及由不同国家收集的土壤样品中分离的环境细菌群落中分离编码SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO 22、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 34、SEQ ID NO 37、SEQ ID NO40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52的基因的DNA(请参见表2)。将来自不同菌株和细菌群落的染色体DNA使用Illumina技术进行全基因组测序。分析基因组序列中包含糖基水解酶结构域的蛋白质序列，如CAZy数据库中所定义(www.cazy.org，Lombard V等人2014,Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)。包含糖苷水解酶家族114结构域的16个序列(GH114，CAZy数据库，www.cazy.org，Lombard V等人2014,NucleicAcids Res[核酸研究]42:D490-D495)在基因组中鉴定出”。
表2 DNA序列和成熟蛋白质
Figure BDA0002746970670002131
使用含有突出端克隆载体的特异性引物，通过标准PCR技术从相应细菌菌株的基因组DNA扩增编码GH114基因SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 10、SEQID NO 19、SEQ ID NO 22、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 34、SEQID NO 37、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52的成熟肽的DNA。如WO 12/025577中所述，将扩增的PCR片段插入到芽孢杆菌表达载体中。简言之，将编码基因的成熟肽的DNA框内克隆到克劳氏芽孢杆菌分泌信号(BcSP；具有以下氨基酸序列：MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA(SEQ ID NO 58))中。BcSP替代了该基因中的天然分泌信号。在BcSP序列的下游，引入亲和标签序列以便于纯化过程(His-标签；具有以下氨基酸序列：HHHHHHPR(SEQ ID NO 59)。因此，被表达的基因包括BcSP序列，其后是His-标签序列，随后是成熟的野生型GH114基因序列。将最终表达质粒(BcSP-His-标签-GH114)转化到枯草芽孢杆菌表达宿主中。在转化时将GH114 BcSP-融合基因通过同源重组整合至枯草芽孢杆菌宿主细胞基因组中。在三联启动子系统的控制下表达该基因构建体(如描述于WO99/43835中)。将编码氯霉素乙酰转移酶的基因用作标记物(如描述于Diderichsen等人，1993，Plasmid[质粒]30:312-315中)。在每ml补充有6毫克氯霉素的LB培养基琼脂上选择转化体。选择一个含有GH114表达构建体的重组枯草芽孢杆菌克隆，并且在旋转摇床上在500ml带挡板的锥形瓶中进行培养，每个锥形瓶含有100ml基于酵母提取物的培养基。在30℃至37℃的3-5天的培养时间后，通过离心收获含有酶的上清液并通过His-标签纯化对这些酶进行纯化。
密码子优化的合成DNA(其编码属于下表3中所列的GH114家族糖基水解酶的推定内切-α-1,4-聚半乳糖胺酶的成熟肽序列)购自推斯特生物科学公司(TWIST Bioscience)。如上所述，在枯草芽孢杆菌表达宿主中克隆和表达合成基因。
表3
Figure BDA0002746970670002141
Figure BDA0002746970670002151
Figure BDA0002746970670002161
实例2：His标签纯化方法
在5mL HisTrap Excel柱(通用电气医疗集团生命科学部(GE Healthcare LifeSciences))上，使用Ni2+作为金属离子，通过固定化金属层析(IMAC)纯化所有His-标记的GH114多肽。该纯化发生在pH 7下，并用咪唑对结合蛋白进行洗脱。通过SDS-PAGE检查纯化的酶的纯度，并且在50mM HEPES、100mM NaCl pH 7.0中缓冲液交换后通过280nm的吸光度确定酶的浓度
实例3：来自腐皮镰孢的两种GH114多肽和来自浅脚瓶盘菌的一种的克隆、表达和发酵
编码属于CAZy(www.cazy.org,Lombard V,et al.(2014)Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)定义的GH114家族的三个推定基因的基因(SEQ ID NO 13、SEQ IDNO 16、SEQ ID NO 55)从由丹麦收集的环境样品中分离出的腐皮镰孢株和由瑞典收集的环境样品中分离出的浅脚瓶盘菌菌株进行克隆。对于腐皮镰孢，从菌株中分离出染色体DNA，并且全基因组测序购自丹麦韦兹拜克(Vedbaek)的Exiqon A/S。用SPAdes GenomeAssembler，v3.5.0(Bankevich,A.等人J Comput Biol.[计算生物学杂志](2012)19(5):455-77)组装基因组序列，并用GeneMark v2.3c基因预测软件进行注释(Ter-HovhannisyanV.等人Genome Res.[基因组研究](2008)18(12):1979-90.)。对于浅脚瓶盘菌，从菌株中分离出染色体DNA，并使用Illumina技术确定了全基因组测序。用SPAdes Genome Assembler，v3.9.0组装基因组序列，并用Augustus v2.4基因预测软件进行注释(Stanke,M.等人Bioinformatics.[生物信息学](2008)24(5):637-644.)(在灰尾鬼伞的基因组上训练)。针对与GH114结构域的相似性，搜索从经注释的基因组预测的肽，并鉴定出具有SEQ ID NO:14、17和56的三个肽。用基因特异性引物(其也在起始密码子的5’附近附加Kozak翻译起始序列“TCACC”)从分离自腐皮镰孢的基因组DNA对相应的DNA序列(SEQ ID NO:13、16和55)进行PCR扩增，并克隆到已经用BamHI和XhoI消化的曲霉属表达载体pMStr57(WO 04/032648)中。
对克隆的GH114编码基因进行测序并确认其与基因组序列中发现的相应基因相同，并通过Christensen等人,1988,Biotechnology[生物技术]6,1419-1422和WO 04/032648中描述的方法转化到米曲霉菌株MT3568(WO 11/057140)中。基于由表达载体中的选择性标记赋予的能力，在从原生质体再生期间选择转化体，以利用乙酰胺作为氮源，并且随后在选择下将这些转化体再分离。
通过在96孔深孔微量滴定板中在30℃在0.25ml的YPG培养基(WO 05/066338)中和DAP-4C-1培养基(WO 12/103350)两者中将转化体培养4天并通过SDS-PAGE监测肽表达来评估重组GH114肽的产生。为了大规模产生重组的推定GH114基因，针对每个GH114肽选择单个曲霉属转化体，并将该转化体在包含150ml的DAP-4C-1培养基的500ml带挡板烧瓶中进行培养。将培养物在旋转台上以150RPM振荡4天。随后将培养液通过穿过0.22um过滤单元与细胞材料分离。
实例4：来自腐皮镰孢的两种GH114多肽和来自浅脚瓶盘菌的一种的色谱纯化
将经过滤的样品的pH调节至约pH 7.5，并添加1.8M硫酸铵。将该样品施加至
Figure BDA0002746970670002171
Explorer上的5ml HiTrapTMPhenyl(HS)柱上。在加载之前，该柱已在5个柱体积(CV)的50mMHEPES+1.8M AMS(pH 7)中平衡。为了去除未结合的材料，将该柱用5CV的50mM HEPES+1.8MAMS(pH 7)进行洗涤。使用50mM HEPES+20％异丙醇pH 7将靶蛋白从柱洗脱到10ml环中。从该环中，将样品加载到已经用3CV的50mM HEPES+100mM NaCl pH 7.0平衡的脱盐柱(HiPrepTM26/10脱盐)上。将靶蛋白用50mM HEPES+100mM NaCl pH 7.0洗脱，选择相关级分，并基于色谱图进行合并。流速为5ml/min。对于来自腐皮镰孢的两种GH114肽，将从HIC纯化(如上所述)中收集的样品应用于
Figure BDA0002746970670002172
PURE系统上的1mL HiTrapTMBlue HP柱。在加载之前，将柱在10CV的50mM HEPES+100mM NaCl pH 7.0中平衡。在将样品加载到柱的过程中，收集了流过物。为了除去任何未结合的物质，用7CV 50mM HEPES+100mM NaCl pH 7.0洗涤柱。用11.2CV的50mM Tris、1M NaCl(pH 8)洗脱目标蛋白质。根据色谱图，收集相关级分。蛋白质在流过物中或在洗脱液中。通过测量280nm处的吸收来估计最终样品中的蛋白质浓度。
实例5液体标准洗涤剂A对菌膜小块布样的清洁
从如下铜绿假单胞菌PA14(DSM 19882)制备生物膜EPS的粗提取物：将菌株在胰胨大豆琼脂(TSA)(pH 7.3)(CM0131；Oxoid有限公司，贝辛斯托克，英国)上再划线，并在30℃孵育3天。然后用单个菌落接种带有T-液体培养基(10g/L BactoTM胰蛋白胨(211705，BD)，5g/L氯化钠(31434，西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)))的烧瓶并在20℃下静态孵育6天。将生物膜菌膜小心地从烧瓶中移出，并通过离心(5min，16000g，25℃)沉淀。将沉淀重悬于3M NaCl中，剧烈涡旋并在环境温度下孵育15min以提取表面相关的聚合物。然后将细胞重新沉淀(5min，10000g，25℃)并回收并合并含有EPS的上清液。将提取物储存在-20℃直至进一步使用(称为EPS提取物)。
洗涤性能测定如下；将50ul等分试样的粗菌膜提取物点在无菌纺织品小块布样(WFK20A)上，并在环境温度下孵育15min。用3M NaCl点样对照小块布样。将小块布样(无菌或有提取物)置于50mL试管，并将10mL洗涤液(15°dH水，具有0.2g/L氧化铁(III)纳米粉末(544884；西格玛奥德里奇公司)与3.33g/L液体标准A洗涤剂)和2μg/ml酶添加到每个管中。没有酶的洗涤被包括作为对照。将试管置于斯图尔特(Stuart)旋转器中并在30℃以20rpm孵育1小时。然后去除洗涤液，并且将小块布样用15°dH水冲洗两次并且在滤纸上干燥过夜。使用Handheld Minolta CR-300测量色差(L)值，并展示在表4中。还指示了洗涤性能(WP)值(L(有酶情况下洗涤的小块布样)-L(无酶情况下洗涤的小块布样))。
表4.GH114同源物在标准A洗涤剂中的清洁效果
Figure BDA0002746970670002181
Figure BDA0002746970670002191
实例6液体标准洗涤剂NI对菌膜小块布样的清洁
从如下铜绿假单胞菌PA14(DSM 19882)制备生物膜EPS的粗提取物：将菌株在LB琼脂(pH 7.3)上重新划线并在30℃孵育3天。然后接种500mL的T-肉汤(10g/L BactoTM胰蛋白胨(211705，BD)，5g/L氯化钠(31434，西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)))并在20℃下静态孵育6天。小心地从烧瓶中取出生物膜菌膜，并通过离心进行沉淀(5min，10000g，25℃)。然后将沉淀重悬于3M NaCl中，剧烈涡旋并在环境温度下孵育15min以提取表面相关的聚合物。然后将细胞重新沉淀(5min，10000g，25℃)并回收含有EPS的上清液。将提取物储存在-20℃直至进一步使用(称为EPS提取物)。洗涤性能测定如下；将50ul等分试样的粗菌膜提取物点在无菌纺织品小块布样(WFK20A)上，并在环境温度下孵育15min。将没有EPS的对照小块布样用作对照。将小块布样(无菌或有提取物)置于50mL试管，并将10mL洗涤液(15°dH水，具有0.2g/L氧化铁(III)纳米粉末(544884；西格玛奥德里奇公司)与3.33g/L液体标准NI洗涤剂)和10μg/ml酶添加到每个管中。没有酶的洗涤被包括作为对照。将试管置于斯图尔特(Stuart)旋转器中并在30℃以20rpm孵育1小时。然后去除洗涤液，并且将小块布样用15°dH水冲洗两次并且在滤纸上干燥过夜。使用Handheld Minolta CR-300测量三色刺激光强度(Y)值，并展示在表5中。还指示了洗涤性能，WP(ΔY＝Y(有酶情况下洗涤的小块布样)-Y(无酶情况下洗涤的小块布样))。
表5.GH114糖基水解酶在NI型洗涤剂中的清洁效果
Figure BDA0002746970670002201
实例7液体标准洗涤剂A对菌膜小块布样的清洁
从如上所述的铜绿假单胞菌PA14(DSM 19882)制备的生物膜细胞外聚合物菌膜的粗提物。洗涤性能测定如下；将50ul等分试样的粗菌膜提取物点在无菌纺织品小块布样(WFK20A)上，并在环境温度下孵育15min。用3M NaCl点样对照小块布样。将小块布样(无菌或有提取物)置于50mL试管，并将10mL洗涤液(15°dH水，具有0.2g/L氧化铁(III)纳米粉末(544884；西格玛奥德里奇公司)与3.33g/L液体标准A洗涤剂)和酶添加到每个管中。没有酶的洗涤被包括作为对照。将试管置于斯图尔特(Stuart)旋转器中并在30℃以20rpm孵育1小时。然后去除洗涤液，并且将小块布样用15°dH水冲洗两次并且在滤纸上干燥过夜。使用Handheld Minolta CR-300测量色差(L)值，并展示在表6中。还指示了洗涤性能(WP)值(L(有酶情况下洗涤的小块布样)-L(无酶情况下洗涤的小块布样))。
表6.GH114糖基水解酶在标准A洗涤剂中的清洁效果
Figure BDA0002746970670002202
实例8生物膜去除活性
在本实例中将产生菌膜的铜绿假单胞菌菌株DSM19882用作标准微生物。将菌株在LB琼脂上重新划线并在30℃下孵育。将过夜培养物接种于10mL LB中，并将培养物在37℃和振荡条件下孵育16小时。随后将培养物在LBNS中稀释(1:100)，加入96孔微量滴定板(每孔150μL，赛默科技公司(Thermo Scientific)，目录号167008)中并插入Peg盖(NUNC-TSP，赛默科技公司，目录号445497)。将微量滴定板在26℃下、在静态条件下孵育24小时。孵育后，将peg盖在具有5°dH水硬度的MTP板中冲洗，并在26℃下用不含酶(对照)或含20μg/mL酶的LBNS转移至处理板持续1小时。随后将盖在水硬度中冲洗并用0.095％结晶紫(西格玛奥德里奇公司，目录号V5265)染色15min。染色后，将peg盖冲洗两次，移至干净的微量滴定板中，并且将剩余的染料用30％乙酸溶解。在595nm处读取吸光度。结果显示在表7和8中。
表7：生物膜去除特性
酶 浓度 剩余的生物膜％
没有酶 0 100,0
SEQ ID NO 3 20 30,0
SEQ ID NO 6 20 26,3
SEQ ID NO 9 20 27,1
SEQ ID NO 12 20 24,6
SEQ ID NO 21 20 19,9
SEQ ID NO 24 20 20,6
SEQ ID NO 27 20 34,8
SEQ ID NO 33 20 3,8
SEQ ID NO 36 20 10,5
SEQ ID NO 39 20 35,4
SEQ ID NO 45 20 73,0
SEQ ID NO 48 20 49,4
SEQ ID NO 51 20 14,9
SEQ ID NO 18 20 3,7
SEQ ID NO 15 20 3,7
SEQ ID NO 57 20 3,2
以40μg/mL的浓度测试以下批次的具有表8中所列的相应SEQ ID NO的GH114糖基水解酶的如上所述的生物膜去除活性。
表8.生物膜去除特性
Figure BDA0002746970670002221
Figure BDA0002746970670002231
表7和8显示了所测试的GH114糖基水解酶具有生物膜去除特性，并且剩余的生物膜小于100％，这意味着一些些生物膜已被减少。
实例9 GH114糖基水解酶对在标准洗涤剂中洗涤的铜绿假单胞菌生物膜的效果
在此实例中，将两种不同的铜绿假单胞菌临床分离株用于形成医用生物膜。一种生物膜由铜绿假单胞菌PA14(DSM19882)产生，而另一种由铜绿假单胞菌PA01(DSM22644)产生。将细菌在TSA板上重新划线，并在30℃孵育三天。孵育三天后，用一个铜绿假单胞菌PA14(DSM19882)菌落接种8mL的胰蛋白酶大豆肉汤(TSB)，并用铜绿假单胞菌PA01(DSM22644)接种8mL的TSB。将接种的TSB管全部在30℃，200rpm孵育过夜，并在TSB培养基中稀释至特定的光密度(OD)。在Thermo ScientificTMNuncTMMicroWellTM96孔微孔板(无菌，未处理)中向每个孔中加入150μl稀释的过夜培养物。制备两个具有铜绿假单胞菌PA14(DSM19882)的板。制备一个具有铜绿假单胞菌PA01(DSM22644)的板。将板在30℃下孵育24小时。孵育24小时后，从培养箱中取出含有生物膜的微量滴定板，并使用VacusafeTM真空吸引系统(INTEGRABiosciences)清空培养基。用200μl0.9％NaCl溶液冲洗每个孔两次。向每个孔中加入200μl的含有20g/ml酶的标准洗涤剂液体。包括不含酶的处理作为对照。每种处理一式四份进行测试。加入洗涤剂液+/-酶后，将微量滴定板在30℃静置孵育60分钟。孵育60分钟后，使用真空系统去除处理液。用200μl 0.9％NaCl溶液冲洗每个孔两次，并向每个孔中加入200μl的0.095％结晶紫溶液。将板在环境温度下孵育15分钟。使用真空系统去除结晶紫溶液，并用200μl 0.9％NaCl溶液冲洗每个孔两次。向每个孔中加入150μl的30％乙酸。将板在环境温度下孵育10分钟，之后使用分光光度计(SpectraMax M3，分子仪器公司(MolecularDevices))测量595nm处的吸光度。摇动板10秒钟，然后进行吸光度测量。
酶处理后的剩余的生物膜％计算为ABS595(用标准洗涤剂+酶处理的生物膜)/ABS595(用标准洗涤剂处理的生物膜)x100％。
对于铜绿假单胞菌PA14(DSM19882)，计算两个板的平均值。结果显示在表9中。
表9：在标准洗涤剂中用GH114糖基水解酶处理后剩余的生物膜％
Figure BDA0002746970670002241
实例9在液体标准洗涤剂中的内窥镜清洁
使用铜绿假单胞菌DSM19882建立内镜生物膜：将菌株接种到10mL LB中并在37℃下振荡(200rpm)孵育16小时。繁殖后，将培养物在LBNS中稀释(1:100)，并将细菌悬浮液加入96孔微量滴定板(赛默科技公司，目录号167008)中，其含有无菌片(1cm)的内窥镜管(直径4.7mm，Fluoroelastomer/
Figure BDA0002746970670002242
USP VI级，内窥镜开发有限责任公司(EndoscopyDevelopment Company,LLC))。将无菌培养基加入对照孔中。在26℃下24h(静态孵育)后，用不含酶(对照)或含20μg/mL酶的标准清洁溶液(5g/L标准洗涤剂MC，以5°dH水硬度)在26℃下处理内窥镜管持续1小时。随后用5°dH水冲洗内窥镜片并用0.095％结晶紫(SIGMAV5265)染色15min。在额外的冲洗之后，将内窥镜片在吸水纸上吸干，并使用30％乙酸溶解剩余的染料。将200μl等分试样的悬浮液转移至96孔微量滴定板中，并在595nm处测量吸光度。结果在表10中显示为与对照(没有经酶处理的内窥镜生物膜)相比，酶处理后剩余生物膜的百分比。
表10.医用清洁标准洗涤剂MC的内窥镜清洁性能
Figure BDA0002746970670002251
结果显示，当与不含酶的样品相比时，本发明的多肽具有内窥镜清洁特性，即破坏和/或去除生物膜或所测试的生物膜组分。
实例10：进化枝和系统发生树的构建
本发明的多肽具有水解酶活性，并且包含GH114结构域以及簇(如进化枝)。构建包含如CAZY中的定义的GH114结构域(GH114，糖苷水解酶家族114，CAZy数据库，www.cazy.org，Lombard V,等人2014,Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)的多肽序列的系统发生树。系统发生树是从包含至少一个GH114结构域的成熟多肽序列的多重比对构建。使用MUSCLE算法版本3.8.31(Edgar,2004.Nucleic Acids Research[核酸研究]32(5):1792-1797)对序列进行比对，并且使用FastTree版本2.1.8(Price等人,2010,PloSone[公共科学图书馆·综合]5(3))构建树并使用iTOL(Letunic和Bork,2007.Bioinformatics[生物信息学]23(1):127-128)对树进行可视化。包含GH114结构域的多肽包含几个基序。一个实例是[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)，其位于瑟西拟无枝酸菌(SEQ ID NO 3)的位置182至186，其中位置184位处的E是两个催化位点残基之一，并且在本发明的多肽中是完全保守的。可以由本发明的多肽包含的另一个基序是位于对应于瑟西拟无枝酸菌(SEQ ID NO 3)中的位置55至59的位置处的CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO61)。SEQ ID NO 3中位置56处的酪氨酸参与底物结合。可以将含有GH114结构域的多肽分成不同的子簇。子簇由一个或多个短序列基序定义，并包含如CAZY中定义的GH114结构域(GH114，CAZy数据库，www.cazy.org，Lombard V,等人2014,Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)。我们将包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)的一个子簇表示为VAE进化枝。含有GH114结构域以及基序的所有多肽序列将被表示为属于VAE进化枝。
可以将VAE进化枝中的多肽进一步分成多个不同的子簇或进化枝，其中我们表示了下面列出的进化枝。所描述的进化枝之间的关系如图4所示。
DYQ进化枝的生成
如上所定义的，构建了包含GH114结构域和VAE基序的多肽序列的系统发生树。使用MUSCLE算法版本3.8.31(Edgar,2004.Nucleic Acids Research[核酸研究]32(5):1792-1797)对序列进行比对，并且使用FastTree版本2.1.8(Price等人,2010,PloS one[公共科学图书馆·综合]5(3))构建树并使用iTOL(Letunic和Bork,2007.Bioinformatics[生物信息学]23(1):127-128)对树进行可视化。使用系统发生树，可以将包含GH114结构域和VAE进化枝基序的多肽分离进入另外的独特的子簇，我们将其称为DYQ。
该子簇的特征基序是基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)，其对应于SEQ ID NO 3中位置23至27的氨基酸DYQIG，其中多肽中位置27处的G完全保守并参与底物结合。DYQ进化枝的另一个基序是FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)，其对应于参考多肽(SEQ ID NO 3)中的氨基酸60至64。DYQ进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ IDNO 12、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ IDNO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ IDNO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 90、SEQ IDNO 91、SEQ ID NO 92、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 131、SEQID NO 132、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO139、SEQ ID NO 140、SEQ ID NO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144和SEQ ID NO 145。
AEE进化枝的生成
AEE进化枝包含细菌来源的多肽，其含有GH114结构域并且属于DYQ进化枝，具有水解酶活性。进化枝的多肽包含基序实例AEECG(SEQ ID NO:64)，其对应于SEQ ID NO 3的位置183至187的氨基酸AEECG，其中所有氨基酸在AEE进化枝中完全保守。AEE进化枝的另一个基序是NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)，其对应于参考多肽(SEQ ID NO 3)中的氨基酸58至63。AEE进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 138、和SEQ ID NO142。
WQW进化枝的生成
WQW进化枝包含细菌和真菌来源的多肽，其含有GH114结构域并且属于VAE进化枝，具有水解酶活性。进化枝的多肽包含基序实例WQWQL(SEQ ID NO 66)，其对应于弧菌属物种SEQ ID NO 27的氨基酸WQWQL位置30至34，其中L(对应于SEQ ID NO 27的位置34)在WQW进化枝中完全保守并且涉及底物结合。WQW进化枝的另一个基序是[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)，其对应于弧菌属物种SEQ ID NO 27的氨基酸IGLKNDL位置171至177，其中LKN(对应于SEQ ID NO 27的位置173和175)在WQW进化枝中完全保守。WQW进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO81、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 95和SEQ ID NO 146。
IEY进化枝的生成
IEY进化枝包含真菌来源的多肽，其含有GH114结构域并且属于VAE进化枝，具有水解酶活性。进化枝的多肽包含基序实例GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)，其对应于SEQ ID NO 18的位置230至239的氨基酸“GKPVLQIEYP”，其中E(对应于SEQ ID NO:3的位置237)在GVFLD进化枝中完全保守，是底物结合袋的一部分以及两个推定的催化位点残基之一。
IEY进化枝的另一个基序是VICYF(SEQ ID NO:69)，其对应于腐皮镰孢(SEQ ID NO18)的氨基酸VICYF位置68至72，27其中CYF(对应于SEQ ID NO 18的位置70和72)在IEY进化枝中完全保守。IEY进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ IDNO 101、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ IDNO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ IDNO 123、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO:133和SEQ ID NO 135。
ICY进化枝的生成
ICY进化枝包含真菌来源的多肽，其含有GH114结构域并且属于IEY进化枝，具有水解酶活性。进化枝的多肽包含基序实例ICYFSA(SEQ ID NO 70)，其对应于SEQ ID NO 15中的氨基酸ICYFSA。ICY进化枝的多肽的实例是SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ IDNO120、SEQ ID NO 124、SEQ ID NO 125、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 129和SEQ ID NO:133。
DFAVL进化枝的生成
DFAVL进化枝包含真菌来源的多肽，其含有GH114结构域并且属于IEY进化枝，具有水解酶活性。进化枝的多肽包含基序实例DFAVL(SEQ ID NO 71)，其对应于SEQ ID NO 18的位置199至203处的氨基酸DFAVL，其中SEQ ID NO 71中的位置203处的L在进化枝中完全保守，并位置紧挨在位置204处的催化残基之一E。DFAVL进化枝的多肽的实例是SEQ ID NO18、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 102、SEQ IDNO 103、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ IDNO 119、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 130和SEQ ID NO 135。
在进化枝中的多肽的系统发生树示于图1和图4中。
包含在进化枝中的本发明的多肽的比对示于图3中。
实例11：来自紧凑型镰孢(Fusarium compactum)、念珠菌新丛赤壳(Neonectriacandida)，燕麦镰孢(Fusarium avenaceum)和峨眉光黑壳(Preussia aemulans)的GH114糖基水解酶的克隆、表达和发酵
从下表11中列出的菌株中克隆了编码属于GH114家族糖基水解酶的八个推定内切-α-1,4-聚半乳糖胺酶的基因。从指定国家收集的环境样品中分离出这些菌株。对于所有菌株，分离出染色体DNA，并使用Illumina技术确定整个基因组序列。对于念珠菌新丛赤壳，全基因组测序购自丹麦韦兹拜克(Vedbaek)的Exiqon A/S。
表11
Figure BDA0002746970670002291
上面列出的分析程序的参考文献
Spades基因组组装软件：Bankevich,A.等人J Comput Biol.[计算生物学杂志](2012)19(5):455-77
ABySS基因组组装软件：Simpson,J.T.,等人Genome Res.[基因组研究](2009)19(6):1117-23.
GeneMark基因注释：Ter-Hovhannisyan,V.等人,Genome Res.[基因组研究](2008),18(12):1979-90。
组装完整的基因组序列，并使用表11中所示的软件包进行注释。在用GenWise基因预测软件(Li,W.等人,Nucleic Acids Res.[核酸研究](2015)43(W1):W580-W584.)分析后，调整编码SEQ ID NO 101中多肽的基因模型。
针对与如CAZy定义的GH114结构域(www.cazy.org，Lombard V,等人(2014)Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)的相似性，搜索从经注释的基因组预测的肽，并且坚定八种多肽。用基因特异性引物(其也在起始密码子的5’附近附加Kozak翻译起始序列“TCACC”)从基因组DNA对相应的DNA序列进行PCR扩增，并将扩增的DNA片段克隆到已经用BamHI和XhoI消化的曲霉属表达载体pMStr57(WO 04/032648)中。
将克隆的GH114编码基因通过Christensen等人,1988,Biotechnology[生物技术]6,1419-1422和WO 04/032648中描述的方法转化到米曲霉菌株MT3568(WO 11/057140)中。基于由表达载体中的选择性标记赋予的能力，在从原生质体再生期间选择转化体，以利用乙酰胺作为氮源，并且随后在选择下将这些转化体再分离。
通过在96孔深孔微量滴定板中在30℃在0.25ml的YPG培养基(WO 05/066338)中和DAP-4C-1培养基(WO 12/103350)两者中将转化体培养4天并通过SDS-PAGE监测肽表达来评估重组GH114糖基水解酶的产生。为了大规模产生重组的推定GH114糖基水解酶，针对每个GH114糖基水解酶选择单个曲霉属转化体，并将该转化体在包含150ml的DAP-4C-1培养基的500ml带挡板烧瓶中进行培养。将培养物在旋转台上以150RPM振荡4天。随后将培养液通过穿过0.22um过滤单元与细胞材料分离。
实例12：来自紧凑型镰孢、念珠菌新丛赤壳，燕麦镰孢和峨眉光黑壳的GH114肽的色谱分离
将经过滤的样品的pH调节至约pH 7.5，并添加1.8M硫酸铵。将该样品施加至
Figure BDA0002746970670002301
Explorer上的5ml HiTrapTMPhenyl(HS)柱上。在加载之前，该柱已在5个柱体积(CV)的50mMHEPES+1.8M AMS(pH 7)中平衡。为了去除未结合的材料，将该柱用5CV的50mM HEPES+1.8MAMS(pH 7)进行洗涤。使用50mM HEPES+20％异丙醇pH 7将靶蛋白从柱洗脱到10ml环中。从该环中，将样品加载到已经用3CV的50mM HEPES+100mM NaCl pH 7.0平衡的脱盐柱(HiPrepTM26/10脱盐)上。将靶蛋白用50mM HEPES+100mM NaCl pH 7.0洗脱，选择相关级分，并基于色谱图进行合并。流速为5ml/min。
对于SEQ ID NO 98和99中所示的多肽，将从上述纯化过程中收集的样品应用于
Figure BDA0002746970670002302
PURE系统上的1mL HiTrapTMBlue HP柱。在加载之前，将柱在10CV的50mM HEPES+100mMNaCl pH 7.0中平衡。在将样品加载到柱的过程中，收集了流过物。为了除去任何未结合的物质，用7CV 50mM HEPES+100mM NaCl pH 7.0洗涤柱。用11.2CV的50mM Tris、1M NaCl(pH8)洗脱目标蛋白质。根据色谱图，收集相关级分。蛋白质在流过物中或在洗脱液中。通过测量280nm处的吸收来估计最终样品中的蛋白质浓度。实例13来自层生镰孢和砖红镰孢的两种GH114糖基水解酶多肽的克隆和表达。
通过标准微生物分离技术从环境样品中分离出的真菌菌株中衍生出两种属于GH114家族的推定内切-α-1,4-聚半乳糖胺酶。鉴别菌株并基于ITS的DNA测序对分类进行指定(表12)。
表12
SEQ ID NO 生物_名称 来源国
102 层生镰孢 中国
103 砖红镰孢 中国
通过DNeasy植物微型试剂盒(DNeasy Plant Mini Kit)(凯杰公司(Qiagen)，希尔登(Hilden)，德国)分离来自各个菌株的染色体DNA(表12)。使用Illumina技术将5μg染色体DNA发送进行全基因组测序。基因组测序，随后的读取的装配和基因发现(即基因功能的注释)对于本领域技术人员是已知的并且该服务是可商购的。
针对与如CAZy定义的GH114结构域(www.cazy.org，Lombard V,等人(2014)Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)的相似性，搜索从经注释的基因组预测的肽，并且坚定三种肽。用基因特异性引物从基因组DNA中PCR扩增相应的DNA序列，并将扩增的DNA片段克隆到表达载体pCaHj505中(WO 2013029496)。
将最终的表达质粒转化到米曲霉MT3568表达宿主中。米曲霉MT3568是米曲霉JaL355(WO 02/40694)的衍生物，其中通过用pyrG基因破坏米曲霉乙酰胺酶(amdS)基因恢复pyrG营养缺陷型。在转化后GH114基因通过同源重组整合到米曲霉MT3568宿主细胞基因组中。
将编码amdS的基因用作标记。在补充有10mM乙酰胺的pyrG培养基琼脂上选择转化体。选择一个含有GH114表达构建体的重组米曲霉克隆，并在摇瓶中于2400ml Dap4C培养基中于30℃在80rpm搅拌下培养3天。使用0.22μm 1-升瓶顶部真空滤器(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific Inc.)，沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)通过过滤收获含酶的上清液。
实例14真菌GH114糖基水解酶的克隆、表达和发酵
菌株
使用购自天根(TIANGEN)(天根生物科技有限公司(TIANGEN Biotech Co.Ltd.)，北京，中国)的大肠杆菌Top-10菌株来繁殖本文的表达载体。
将米曲霉菌株DAU785(描述于WO 2018/113745，第293页)用于表1中描述的基因的异源表达。
培养基
Dap4C培养基由以下构成：11g MgSO4·7H2O、1g KH2PO4、2.2g柠檬酸·H2O、20g葡萄糖、10g麦芽糖、5.2g K3PO4·H2O、0.5g酵母提取物、1.25g CaCO3、0.5ml AMG痕量元素溶液和补足至1升的去离子水。高压灭菌后，向上述每400ml培养基中添加3.3ml的20％乳酸(经高压灭菌)和9.3ml的50％(NH4)2HPO4(经无菌过滤)。
AMG痕量元素溶液由以下构成：6.8g ZnCl2、2.5g CuSO4.5H2O、0.24g NiCl2·5H2O、13.9g FeSO4.7H2O、13.6g MnSO4.5H2O、3g柠檬酸·H2O，和补足至1000ml的去离子水。
LB板是由10g的细菌用胰蛋白胨、5g的酵母提取物、10g的氯化钠、15g的细菌用琼脂及补足至1000ml的去离子水构成。
LB培养基由1g的细菌用胰蛋白胨、5g的酵母提取物及10g的氯化钠，以及补足至1000ml的去离子水构成。
COVE蔗糖板由342g的蔗糖、20g的琼脂粉、20ml的COVE盐溶液及补足至1升的去离子水构成。将培养基在15psi下通过高压灭菌进行灭菌15分钟。将该培养基冷却至60℃并且添加10mM的乙酰胺、15mM的CsCl、曲通X-100(50μl/500ml)。
用于分离的COVE-2板/管：30g/L蔗糖、20ml/L COVE盐溶液、10mM乙酰胺、30g/L诺布尔(noble)琼脂(Difco，目录号214220)。
COVE盐溶液由以下构成：26g的MgSO4·7H2O、26g的KCL、26g的KH2PO4、50ml的COVE痕量金属溶液、以及补足至1000ml的去离子水。
COVE痕量金属溶液由以下构成：0.04g的Na2B4O7·10H2O、0.4g的CuSO4·5H2O、1.2g的FeSO4·7H2O、0.7g的MnSO4·H2O、0.8g的Na2MoO4·2H2O、10g的ZnSO4·7H2O、以及补足至1000ml的去离子水。
GH114糖基水解酶基因来源于通过标准微生物分离技术从环境样品分离的真菌菌株。鉴别菌株并基于ITS的DNA测序对分类进行指定(表13)。
表13
Figure BDA0002746970670002331
通过QIAamp Dneasy试剂盒(凯杰公司(Qiagen)，希尔登(Hilden)，德国)分离来自各个菌株的染色体DNA(表13)。使用Illumina技术将5μg染色体DNA发送进行全基因组测序。基因组测序，随后的读取的装配和基因发现(即基因功能的注释)对于本领域技术人员是已知的并且该服务是可商购的。
分析了来自PFAM数据库家族PF03537的推定GH114糖基水解酶的基因组序列。该分析鉴定了编码推定的GH114的基因，这些基因随后被克隆并在米曲霉中重组表达。使用SignalP程序v.3(Nielsen等人,1997,Protein Engineering[蛋白质工程]10:1-6)预测出信号肽和相应的成熟肽(SEQ ID NO:72-78、104-108)。
通过PCR分别从上述分离的基因组DNA中扩增GH114糖基水解酶基因。根据制造商的说明书，通过与IN-FUSIONTMCF脱水克隆试剂盒(克隆技术实验室有限公司(ClontechLaboratories,Inc.)，山景城(Mountain View)，加利福尼亚州，美国)连接，将这种纯化的PCR产物克隆到之前消化的表达载体pDAU724(描述于WO 2018/113745，第293页中)中。使用连接混合物转化大肠杆菌TOP10化学感受态细胞(描述于Strains[菌株]中)。选择含有相应的GH114基因的正确菌落并通过DNA测序验证(由中国北京的诺赛基因有限公司(SinoGenoMax Company Limited)，北京，中国)。将含有正确的GH114的菌落在3ml的、每ml补充有100μg的氨苄青霉素的LB培养基中培养过夜。根据制造商的说明，使用凯杰公司旋转迷你制备型(Spin Miniprep)试剂盒(目录27106)(凯杰股份有限公司(QIAGEN GmbH)，希尔登，德国)纯化质粒DNA。米曲霉DAU785的原生质体是根据WO95/002043制备的。将100μl原生质体与2.5-10μg包含GH114糖基水解酶基因的曲霉表达载体(上述提取的质粒)和250μl60％PEG 4000、10mM CaCl2和10mM Tris-HCl pH 7.5混合，并且轻轻地混合。将混合物在37℃孵育30分钟并且将这些原生质体涂布到COVE蔗糖板上用于选择。在37℃孵育4-7天后，将4个转化体的孢子接种到3ml的DAP4C培养基中。在30℃培养3天之后，使用
Figure BDA0002746970670002341
4％-20％Tris-甘氨酸凝胶(英杰公司(Invitrogen Corporation)，卡尔斯巴德(Carlsbad)，加利福尼亚州，美国)通过SDS-PAGE分析培养液，以鉴别产生具有各自估计的成熟肽大小的最大量的重组GH114的转化体。基于这两个选择标准，将最好表达的转化体的孢子涂布于用于再分离的COVE-2板上，以分离单个菌落。然后将单个菌落涂布于COVE-2管上直到孢子形成。在80rpm搅拌下在30℃温度下的3天期间，将来自最好表达的转化体的孢子在摇瓶的2400ml的Dap4C培养基中培养。通过使用0.22μm过滤装置过滤收获培养肉汤。过滤的发酵液用于酶表征。
实例15：具有SEQ ID NO 109至SEQ ID NO 135的GH114糖基水解酶的克隆和表达
序列修整和密码子优化
将选定的蛋白质序列提交给亚细胞定位预测器(DeepLoc-1.0:Bioinformatics[生物信息学],第33卷,第24期,2017年12月15日,第4049页；SignalP-5.0:NatureBiotechnology[自然生物技术],第37卷,2019,第420页)以评估细胞外分泌的可能性。SEQID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO129和SEQ ID NO 133具有溶酶体预测的靶向，并且Nt溶酶体靶向信号序列被截短。
使用优先利用常用米曲霉密码子的方法对所有蛋白质序列进行反翻译，并使用旨在鉴定和去除可能阻碍克隆或表达的序列特征的算法。如专利US 2015/0152452 A1中所述，在该过程中为每个GH114蛋白选择单一DNA序列。
克隆、转化和表达
密码子优化的DNA序列购自推斯特生物科学公司。对20μL混合物(由以下组成：4μLKAPA聚合酶缓冲液、0.4μL 10mM KAPA dNTP、0.4μL 10μM正向引物(SEQ ID NO 147)；0.4μL10μM反向引物(SEQ ID NO 148)、2ng合成基因(重悬于pH 8的10mM TE缓冲液)，0.4μL KAPA聚合酶(KK2502)和14μL PCR级水)进行PCR扩增步骤(由以下组成：在98℃下进行一个3min的变性步骤；然后进行20秒变性、在72℃下2min退火/扩增，30个循环；在72℃下进行10min的最后一步扩增)。
SEQ ID NO 147:gacagccgcatccgtggtctccgca
SEQID NO 148:ctaccgccagcagtgtctgcgattta
克隆策略是通过按照专利WO 2018050666A1中所述的程序，在米曲霉菌株ColS1300原生质体中体内组装三个重叠的DNA片段来进行。
为了确保异源GH114蛋白的细胞外分泌，将所有合成序列与对序列MKLSWLVAAALTAASVVSA(SEQ ID NO 149)的细胞外分泌信号进行编码的DNA序列融合。野生型分泌信号肽也被序列MKLSWLVAAALTAASVVSA的合成细胞外分泌信号替代。
按照WO 2018050666A1中所述的程序在NaNo3板上进行第一次选择后，针对蛋白质表达来筛选ColS1300菌株转化文库。蛋白质表达分析在珀金埃尔默(Perkin Elmer)(沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)LAbChip GXII上进行。
实例16 GH114糖基水解酶的纯化
纯化
通过疏水相互作用色谱法纯化了一些重组GH114糖基水解酶(SEQ ID NO 72-79和SEQ ID NO 106-116)，缓冲液的pH值和硫酸铵浓度对于不同分子几乎没有差异。首先通过终浓度为1.5M的硫酸铵添加重组体的培养上清液，然后将其加载到用添加了1.5M硫酸铵的pH 6.0 20mM PBS平衡的苯基琼脂糖6快流(Phenyl Sepharose 6Fast Flow)柱或苯基高性能(Phenyl High Performance)柱(通用健康医疗集团(GE Healthcare))中。设置硫酸铵浓度从1.5M到0的梯度下降作为洗脱条件。通过SDS-PAGE测定洗脱级分和流过级分。将具有目标蛋白的级分合并在一起，并且然后用pH 6.0的20mM PBS渗滤。通过
Figure BDA0002746970670002361
蛋白质测定试剂盒(英杰公司，目录Q33212)测定蛋白质浓度。如下所述进行酶活性测定。
底物制备
基于该文章(H.TAKADA,等人J.Biochem.[生物化学杂志]89,1265-1274(1981))，将真菌菌株寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)在文献建议的培养基中于30度下培养5天。然后将培养液过滤，并保留培养上清液。在培养上清液中添加等体积的乙醇，混合几分钟并离心。用乙醇将沉淀物洗涤三次。最后，将沉淀物用纯水洗涤并作为底物储存。
酶测定
将沉淀物溶于pH 6.0的20mM PBS中，最终浓度为0.2mg/mL，作为底物溶液。将0.1mg/mL的10ul酶溶液添加到90ul底物溶液中，在40度孵育30分钟。将50ul反应混合物添加到150ul PHBAH溶液(4-羟基苯并噻嗪(4-hydroxybenzhydtazide)(CAS：5351-23-5)，在0.5M NAOH中稀释至终浓度为1.5％)中，在100度下孵育5分钟。然后取70ul的孵育溶液并测试在410nm的吸光度。将添加到底物溶液中的10ul水设为空白对照。
实例17：测量GH114糖基水解酶的热稳定性
使用基于毛细管的纳米差示扫描荧光仪(nanoDSF)；Prometheus NT.Plex(纳米温度技术股份有限公司(NanoTemper Technologies GmbH)，慕尼黑，德国)进行热稳定性测量。使用来自纳米温度技术公司(NanoTemper Technologies)的标准nanoDSF级毛细作用片(目录号：PR-AC002)。将蛋白质样品在50mM乙酸钠、50mM MES、50mM甘氨酸pH 8或3.3g/L标准A中按1:10混合，并通过毛细管作用加载到毛细管中(每个样品一式三份)。通过改变仪器上的LED功率来优化330nm和350nm处的发射强度，以确保足够的信号。连续监测在330nm和350nm处的荧光信号作为温度的函数(用于热解折叠的加热速率为从20℃至95℃每分钟3.3℃)。使用制造商提供的PR.ThermControl_2.1.2.6031软件分析数据。所述分析与模型无关，且仅采用一阶导数的峰值最大值，所述峰值最大值对应于近似热解折叠转化中点，定义为Td。
表14
SEQ ID NO 生物名称 nDSF pH 8 nDSF标准A
6 拟无枝酸菌属物种A 63,43 58,50
18 腐皮镰孢 48,35 35,15
72 球毛壳菌 56,32 52,49
73 Stilbella fimetaria 51,95 41,94
74 纤毛周刺座霉 41,95 29,54
75 表皮粘帚霉 45,59 41,73
76 漆斑菌属物种-75362 57,79 48,90
77 皮鲁枝葡萄孢 43,92 36,05
78 漆斑菌属物种 51,14 40,04
79 拟无枝酸菌属物种-63067 57,00 40,65
81 尼加特拟无枝酸菌 56,63 51,34
82 链霉菌属物种AA4 63,77 52,16
83 阿尔巴无枝酸菌DSM 44262 58,30 50,74
87 嗜油微细菌微杆菌O827CG 48,43 40,54
89 氧化微杆菌 53,87 48,17
90 Agreia pratensis 56,60 53,64
91 豆科植物微杆菌 42,43 31,98
93 海洋沉积短小杆菌 43,10 30,51
96 环境样品 51,77 44,12
实例18液体标准洗涤剂A对真菌EPS小块布样的深度清洁
洗涤性能测定如下；将粗真菌EPS提取物的50ul等分试样(参见上面的实例“聚半乳糖胺的生产”)点在无菌纺织品小块布样(WFK20A)上，并在环境温度下孵育15min。用3MNaCl点样对照小块布样。将小块布样(无菌或有提取物)置于50mL试管，并将10mL洗涤液(15°dH水，具有0.2g/L氧化铁(III)纳米粉末(544884；西格玛奥德里奇公司)与3.33g/L液体标准A洗涤剂)和一种或多种酶添加到每个管中。没有酶的洗涤被包括作为对照。将试管置于斯图尔特(Stuart)旋转器中并在30℃以20rpm孵育1小时。然后去除洗涤液，并且将小块布样用15°dH水冲洗两次并且在滤纸上干燥过夜。发射值(Rem460 nm)使用Datacolor800V测量并显示在表9和表10中。还显示了洗涤性能(WP)值(Rem460 nm(有酶情况下洗涤的小块布样)-Rem460nm(无酶情况下洗涤的小块布样))。可替代地，使用Epson Expression 10000XL平板扫描仪扫描小块布样。使用Color Analyzer软件确定RGB颜色空间中的R(红色)、G(绿色)和B(蓝色)值，并对于每个小块布样将强度计算为
Figure BDA0002746970670002381
(数据在表12中显示)。还显示了洗涤性能(WP)值(Δ强度＝强度(有酶情况下洗涤的小块布样)-强度(无酶情况下洗涤的小块布样))。
表15.在标准A洗涤剂中的GH114糖基水解酶同源物的深层清洁效果
Figure BDA0002746970670002382
表16在标准A洗涤剂中的GH114糖基水解酶同源物的深层清洁效果
Figure BDA0002746970670002383
Figure BDA0002746970670002391
表17.GH114同源物在标准A洗涤剂中的深层清洁效果。
小块布样 SEQ 酶浓度(μg/ml) 强度 WP(Δ强度)
Wfk20A,EPS,无酶 0 345,0
Wfk20A,EPS 103 0,003 358,4 13,4
Wfk20A,EPS 104 0,003 385,0 40,0
Wfk20A,EPS 107 0,003 373,7 28,6
Wfk20A,EPS 136 0,003 373,6 28,6
Wfk20A,EPS 137 0,003 363,7 18,7
Wfk20A,EPS 138 0,003 378,5 33,5
Wfk20A,EPS 139 0,003 367,7 22,7
Wfk20A,EPS 142 0,003 390,9 45,9
Wfk20A,EPS 143 0,003 352,0 7,0
Wfk20A,EPS 146 0,003 367,1 22,1
实例19液体标准洗涤剂A对Pel小块布样的深度清洁
从如上所述的铜绿假单胞菌PA14(DSM 19882)制备的生物膜细胞外聚合物菌膜的粗提物。洗涤性能测定如下；将50ul等分试样的粗菌膜提取物点在无菌纺织品小块布样(WFK20A)上，并在环境温度下孵育15min。用3M NaCl点样对照小块布样。将小块布样(无菌或有提取物)置于50mL试管，并将10mL洗涤液(15°dH水，具有0.2g/L氧化铁(III)纳米粉末(544884；西格玛奥德里奇公司)与3.33g/L液体标准A洗涤剂)和酶添加到每个管中。没有酶的洗涤被包括作为对照。将试管置于斯图尔特(Stuart)旋转器中并在30℃以20rpm孵育1小时。然后去除洗涤液，并且将小块布样用15°dH水冲洗两次并且在滤纸上干燥过夜。使用Handheld Minolta CR-300测量三色刺激Y值，并展示在表18中。还显示了洗涤性能(WP)值(Y(有酶情况下洗涤的小块布样)-Y(无酶情况下洗涤的小块布样))。
表18.GH114同源物在标准A洗涤剂中的深层清洁效果
小块布样 SEQ 酶浓度(μg/ml) 平均Y WP(ΔY)
WFK20,铜绿假单胞菌Pel,无酶 0 66,0
WFK20,铜绿假单胞菌Pel 98 2 73,4 7,4
WFK20,铜绿假单胞菌Pel 98 0,2 72,4 6,4
WFK20,铜绿假单胞菌Pel 97 2 75,3 9,3
WFK20,铜绿假单胞菌Pel 97 0,2 67,5 1,5
WFK20,铜绿假单胞菌Pel 99 2 77,6 11,6
WFK20,铜绿假单胞菌Pel 99 0,2 71,0 5,0
WFK20,铜绿假单胞菌Pel 100 2 71,3 5,3
WFK20,铜绿假单胞菌Pel 100 0,2 66,5 0,5
实例20蛋白质热解折叠分析(TSA，热转变测定)
针对具有SEQ ID NO 18的GH114糖基水解酶的同源物或变体测试了蛋白质热稳定性。使用宝石橙(英杰公司，S-6650)监测热解折叠，并且使用实时PCR仪器(应用生物系统公司(Applied Biosystems)一步一加(Step-One-Plus)。在96孔白色PCR-板中，将15μl样品(用100mM EPPS pH 8.0稀释的上清液)与宝石橙(Sypro Orange)(浓度＝10X；来自供应商的储备溶液＝5000X)在水中混合(1:1)。
用光学PCR密封件密封该平板。PCR仪被设置扫描速率为76℃每小时，在25℃下开始，并且在96℃下完成。使用用于激发的内置(in-built)LED蓝光和ROX-滤波器(610nm，发射)每20秒监测荧光。Tm值计算为：引起一阶导数(dF/dK)的最大值的温度(Gregory等人2009,J.Biomol.Screen.[生物分子筛选杂志]14:700)。
SEQ ID NO 18变体的TSA数据使用两个标准，即Δ(Tm)>1度或0至1度。
表19-22显示了GH114糖基水解酶变体的热稳定性。大于0的值表示该变体比亲本或起始GH114糖基水解酶(此处为SEQ ID NO 18)更稳定。
表19
Figure BDA0002746970670002401
Figure BDA0002746970670002411
表20
Figure BDA0002746970670002412
Figure BDA0002746970670002421
表21
Figure BDA0002746970670002422
Figure BDA0002746970670002431
表22
Figure BDA0002746970670002441
Figure BDA0002746970670002451

Claims (20)

1.一种清洁组合物，该清洁组合物包含：
(a)至少0.01ppm GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性，其中GH114糖基包含基序[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)或CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)中的一者或两者；以及
(b)一种或多种清洁组合物组分，优选至少一种表面活性剂，例如阴离子表面活性剂，其中该阴离子表面活性剂优选包括硫酸盐和磺酸盐，例如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)和烷基醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)。
2.根据权利要求1所述的清洁组合物，其进一步包含至少一种非离子表面活性剂，优选醇乙氧基化物(AE或AEO)，优选地阴离子与非离子表面活性剂的重量比为10:1至1:10。
3.根据权利要求1或2所述的清洁组合物，其中该GH114糖基水解酶包含基序DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)或FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)中的一者或两者。
4.根据权利要求3所述的清洁组合物，其中该糖基水解酶包含基序AEECG(SEQ ID NO64)或NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)中的一者或两者。
5.根据权利要求1或2所述的清洁组合物，其中该GH114糖基水解酶包含基序GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO69)中的一者或两者。
6.根据权利要求5所述的清洁组合物，其中该GH114糖基水解酶包含基序ICYFSA(SEQID NO 70)。
7.根据权利要求5所述的清洁组合物，其中该GH114糖基水解酶包含基序DFAVL(SEQ IDNO 71)。
8.根据权利要求1或2所述的清洁组合物，其中该GH114糖基水解酶包含基序WQWQL(SEQID NO 66)或[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)中的一者或两者。
9.根据权利要求3所述的清洁组合物，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 21、SEQID NO 24、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQID NO 54、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 85、SEQID NO 86、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO91、SEQ ID NO 92、SEQID NO 93、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 96、SEQ ID NO 131、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO 134、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 137、SEQ ID NO 138、SEQ ID NO 139、SEQ ID NO 140、SEQ IDNO 141、SEQ ID NO 142、SEQ ID NO 143、SEQ ID NO 144和SEQ ID NO 145的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
10.根据权利要求4所述的清洁组合物，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 21、SEQID NO 24、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 84、SEQID NO 85、SEQ ID NO 132、SEQ ID NO 136、SEQ ID NO 138和SEQ ID NO 142的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
11.根据权利要求5所述的清洁组合物，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO97、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO 100、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO 102、SEQ IDNO 103、SEQ ID NO 104、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 108、SEQ ID NO 109、SEQ ID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ IDNO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO 117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 122、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 124、SEQ IDNO 125、SEQ ID NO 126、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 128、SEQ ID NO 129、SEQ ID NO 130、SEQ ID NO:133和SEQ ID NO 135的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
12.根据权利要求6所述的清洁组合物，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 98、SEQ ID NO 101、SEQ ID NO104、SEQ ID NO 107、SEQ ID NO 114、SEQ ID NO 115、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 124、SEQID NO 125、SEQ ID NO 127、SEQ ID NO 129和SEQ ID NO 133的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
13.根据权利要求7所述的清洁组合物，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO75、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 97、SEQ ID NO 99、SEQ ID NO100、SEQ ID NO 102、SEQ ID NO 103、SEQ ID NO 105、SEQ ID NO 106、SEQ ID NO 108、SEQID NO 110、SEQ ID NO 111、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 113、SEQ ID NO 116、SEQ ID NO117、SEQ ID NO 118、SEQ ID NO 119、SEQ ID NO 121、SEQ ID NO 123、SEQ ID NO 126、SEQID NO 128、SEQ ID NO 130和SEQ ID NO 135的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
14.根据权利要求8所述的清洁组合物，其中该GH114糖基水解酶选自由以下组成的组：多肽，该多肽与SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO81、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 95和SEQ ID NO 146的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
15.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中该GH114糖基水解酶能够“深度清洁”物品。
16.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中该GH114糖基水解酶在液体标准洗涤剂A中具有洗涤性能(WP)，当计算delta L(ΔL)(L(有酶情况下洗涤的小块布样)-L(无酶情况下洗涤的小块布样))时，该洗涤性能测量为delta L(ΔL)>1，优选delta L(ΔL)大于5，优选delta L(ΔL)大于10，优选delta L(ΔL)大于15，优选delta L(ΔL)大于20。
17.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中其中该GH114糖基水解酶具有生物膜去除活性，其中剩余生物膜％小于80％，例如小于70％，例如小于60％，例如小于50％，例如小于40％，例如小于30％，例如小于20％，例如小于10％，例如小于1％或甚至没有生物膜剩余在该物品上，例如纺织品上。
18.一种用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：
(a)将物品暴露于包含根据权利要求1至17所述的组合物的洗涤液中；
(b)完成至少一个洗涤循环；以及
(c)任选地冲洗该物品，其中该物品是纺织品。
19.GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的GH114糖基水解酶在清洁过程例如衣物和/或餐具洗涤中的用途，其中该GH114糖基水解酶包含选自下组的一个或多个基序，该组由以下组成：[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ IDNO61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO 62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ IDNO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO70)和DFAVL(SEQ ID NO 71)。
20.GH114糖基水解酶，优选具有α-1,4-聚半乳糖胺酶活性的GH114糖基水解酶的用途，其中该GH114糖基水解酶包含选自下组的一个或多个基序，该组由以下组成：[VLI]XE[EDSQ]C(SEQ ID NO 60)、CY[FLIV][SDN][ATVG](SEQ ID NO 61)、DYQ[LI]G(SEQ ID NO62)、FQ[TAV]Q[PSD](SEQ ID NO 63)、AEECG(SEQ ID NO 64)、NAFQ[AT]Q(SEQ ID NO 65)、WQWQL(SEQ ID NO 66)、[VLI][GASD]LKN[DGS][VLIP](SEQ ID NO 67)、GXXVX[NHQTS]IEY[PG](SEQ ID NO 68)、VICYF(SEQ ID NO 69)、ICYFSA(SEQ ID NO 70)和DFAVL(SEQ ID NO71)，该用途是
i.用于防止、减少或去除物品的粘性；
ii.用于防止、减少或去除生物膜或生物膜组分；
iii.用于减少或去除物品上的pel污渍；
iv.用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
v.用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
vi.用于维持或改进物品的白度；
vii.用于防止、减少或去除物品的恶臭，
其中该物品是纺织品。
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