CN112268849A - 一种健康人免疫功能评估分析方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种健康人免疫功能评估分析方法,属于生物医学和免疫检验技术领域,包括如下步骤:步骤一,取健康人群的血液样本进行预处理,待测细胞染色并制成单细胞悬液,将单细胞悬液与抗体混合,得到单细胞‑抗体混合液,采用流式细胞术检测单细胞‑抗体混合液中的免疫细胞水平,得出流式图;步骤二,将步骤一的流式图进行若干层圈门统计分析,得出所需细胞比例;步骤三,将步骤二中的细胞比例按照不同年龄、不同性别进行对比分析。用本发明去检测健康人免疫功能,可全面的评估血液里面的各免疫细胞的数量及比例、活性和衰竭程度,有助于了解并界定未患病人群的免疫功能,为人群健康监测提供指导和依据。

Description

一种健康人免疫功能评估分析方法
技术领域
本发明属于生物医学和免疫检验技术领域,尤其是涉及一种健康人免疫功能评估分析方法。
背景技术
免疫功能是指机体对疾病的抵抗力,机体的免疫功能是在淋巴细胞、单核细胞和其他有关细胞及其产物的相互作用下完成的,其中包括以自然杀伤细胞(NK)为主的天然免疫和以T细胞和B细胞为主的适应性免疫。
人体免疫细胞的免疫功能与各类疾病的发生、进展均有直接相关性,在人体健康维护、抗衰老、抗肿瘤中起着关键作用,但是目前的科研研究和临床诊断均是面对已患有疾病的病人,而亚健康和健康人群在还没有到达疾病的时候,这个阶段的免疫功能怎么去界定和评估是未知的,因此急需一项健康人免疫功能评估的手段,以便更好的评价分析未患病人群的免疫功能。
发明内容
本发明要解决的问题是提供一种健康人免疫功能评估分析方法,全面的评估血液里面的各免疫细胞的数量、比例、活性和衰竭程度,有助于了解并界定未患病人群的免疫功能,为人群健康监测提供指导和依据。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:一种健康人免疫功能评估分析方法,包括如下步骤:
步骤一,取健康人群的血液样本进行预处理,待测细胞染色并制成单细胞悬液,将单细胞悬液与抗体混合,得到单细胞-抗体混合液,采用流式细胞术检测单细胞-抗体混合液中的免疫细胞水平,得出流式图;
步骤二,将步骤一的流式图进行若干层圈门统计分析,得出所需细胞比例;
步骤三,将步骤二中的细胞比例按照不同年龄、不同性别进行对比分析。
在步骤一中,健康人群包括20岁至80岁的男性和20岁至80岁的女性。
在步骤二中,将流式图中的活细胞和淋巴细胞进行圈门,得出第一层流式图。
在第一层流式图中用CD3+T细胞进行圈门,得到第二层流式图,在第二层流式图中用CD4+T细胞进行圈门,得出第三层流式图,在第三层流式图中分别用CD28-CD4+T细胞、CD28+CD4+T细胞进行圈门,得出第四流式图。
在第一层流式图中用CD3+T细胞进行圈门,得到第二层流式图,在第二层流式图中用CD8+T细胞进行圈门,得出第三层流式图,在第三层流式图中用CD28-CD8+T细胞进行圈门,得出第四流式图。
在第一层流式图中用CD3+T细胞进行圈门,得到第二层流式图,在第二层流式图中分别用γδT细胞、调节性T细胞或TNK细胞进行圈门得出第三层流式图。
在第一层流式图中用NK细胞进行圈门,得到第二层流式图,在第二层流式图中分别用CD56high NK细胞、CD56dim NK细胞圈门得出第三层流式图。
在第一层流式图中用B细胞进行圈门,得出第二层流式图。
与现有技术相比,本发明的有益效果在于:亚健康和健康人群还没有到达疾病的时候,用本发明去检测免疫功能,可全面的评估血液里面的各免疫细胞的数量及比例、活性和衰竭程度,有助于了解并界定未患病人群的免疫功能,为人群健康监测提供指导和依据。
附图说明
下面通过参考附图并结合实例具体地描述本发明,本发明的优点和实现方式将会更加明显,其中附图所示内容仅用于对本发明的解释说明,而不构成对本发明的任何意义上的限制,在附图中:
图1是本发明CD3+T细胞比例随年龄变化图
图2是本发明男性和女性T细胞比例随年龄变化图
图3是本发明CD4+T细胞比例随年龄变化图
图4是本发明男性和女性CD4+T细胞比例随年龄变化图
图5是本发明CD8+T细胞比例随年龄变化图
图6是本发明男性和女性CD8+T细胞比例随年龄变化图
图7是本发明CD28-CD4+T细胞比例随年龄变化图
图8是本发明男性和女性CD28-CD4+T细胞比例随年龄变化图
图9是本发明CD28+CD4+T细胞比例随年龄变化图
图10是本发明男性和女性CD28+CD4+T细胞比例随年龄变化图
图11是本发明CD28-CD8+T细胞比例随年龄变化图
图12是本发明男性和女性CD28-CD8+T细胞比例随年龄变化图
图13是本发明调节T细胞比例随年龄变化图
图14是本发明男性和女性调节T细胞比例随年龄变化图
图15是本发明TNK细胞比例随年龄变化图
图16是本发明男性和女性TNK细胞比例随年龄变化图
图17是本发明NK细胞比例随年龄变化图
图18是本发明男性和女性NK细胞比例随年龄变化图
图19是本发明CD56high NK细胞比例随年龄变化图
图20是本发明男性和女性CD56high NK细胞比例随年龄变化图
图21是本发明CD56dim NK细胞比例随年龄变化图
图22是本发明男性和女性CD56dim NK细胞比例随年龄变化图
图23是本发明γδT细胞比例随年龄变化图
图24是本发明男性和女性γδT细胞比例随年龄变化图
图25是本发明B细胞比例随年龄变化图
图26是本发明男性和女性B细胞比例随年龄变化图
具体实施方式
下面结合实施例进一步叙述本发明:
本发明一种健康人免疫功能评估分析方法,包括如下步骤:
步骤一,取20岁至80岁的健康男性和20岁至80岁的健康女性的血液样本进行预处理,向流式管中加入100μL全血,再加入表面染色抗体,避光染色20min;染色完毕后,在流式管中加入1mL溶血素,等待至澄清后,使用离心机1500rpm的转速离心5min;弃掉上清,加入PBS洗涤一次,1500rpm转速离心5min;弃掉上清,用1%的多聚甲醛固定。上机使用CELLQuest软件进行分析,得出流式图;步骤二,将步骤一的流式图进行若干层圈门统计分析,得出所需细胞比例;步骤三,将步骤二中的细胞比例按照不同年龄、不同性别进行对比分析。
实施例1:如图1至图4、图7至图10所示,在步骤二中,将流式图中的活细胞和淋巴细胞进行圈门,得出第一层流式图,在第一层流式图中用CD3+T细胞进行圈门,得到第二层流式图,在第二层流式图中用CD4+T细胞进行圈门,得出第三层流式图,在第三层流式图中分别用CD28-CD4+T细胞、CD28+CD4+T细胞进行圈门,得出第四流式图,得出结论:(1)CD3+T细胞比例40岁以后逐年下降,其中女性高于男性,但60岁以后无显著差异,男性50岁以后逐年下降,女性30岁以后逐年下降;(2)CD4+T细胞比例不随年龄变化,其中女性60岁之前高于男性;40岁之前男性CD4+T细胞随年龄上升,40岁之后趋于稳定;50岁之前女性CD4+T细胞随年龄下降,50岁之后,女性CD4+T细胞随年龄上升;(3)CD28-CD4+T细胞比例随年龄上升;其中中年男性CD28-CD4+T细胞高于女性;男性50岁开始CD28-CD4+T细胞随年龄上升,60岁后趋于稳定;女性40岁以后CD28-CD4+T细胞随年龄上升;(4)CD28+CD4+T细胞比例随年龄下降;中年女性CD28+CD4+T细胞高于男性,男性50岁以后随年龄下降,60岁以后趋于稳定,女性40岁以后随年龄下降。
实施例2:如图5、图6、图11和图12所示,在第一层流式图中用CD3+T细胞进行圈门,得到第二层流式图,在第二层流式图中用CD8+T细胞进行圈门,得出第三层流式图,在第三层流式图中用CD28-CD8+T细胞进行圈门,得出第四流式图,得出结论:(1)CD8+T细胞比例不随年龄变化;男性CD8+T细胞高于女性;男性30岁以后CD8+T细胞随年龄略微下降;女性30岁以后CD8+T细胞随年龄上升,40岁以后女性CD8+T细胞趋于稳定。
实施例3:如图13至图16、图23和图24所示,在第一层流式图中用CD3+T细胞进行圈门,得到第二层流式图,在第二层流式图中分别用γδT细胞、调节性T细胞或TNK细胞进行圈门得出第三层流式图,得出结论:(1)调节性T细胞50岁为人生拐点50岁之前,Treg随年龄下降;50岁之后,Treg变化趋于稳定,随年龄略微上升;30岁以前,女性调节性T细胞高于男性;男性40岁以前调节性T细胞随年龄上升,40岁以后趋于稳定;女性50岁以前调节性T细胞随年龄下降;50岁以后女性调节性T细胞随年龄上升;(2)TNK细胞比例不随年龄变化;青年女性TNK高于男性;男性TNK不随年龄发生变化;女性50岁之前TNK随年龄上升,50岁以后TNK随年龄下降;(3)γδT细胞以40岁为拐点,40岁以后γδT细胞比例随年龄下降;各年龄层γδT细胞比例男女比例无统计学差异,男性和女性γδT细胞40岁以后随年龄降低。
实施例4:如图17至图22所示,在第一层流式图中用NK细胞进行圈门,得到第二层流式图,在第二层流式图中分别用CD56high NK细胞、CD56dimNK细胞圈门得出第三层流式图,得出结论:(1)NK细胞比例随年龄上升;男性NK细胞高于女性;男性50岁以后男性NK细胞随年龄上升,女性30岁以后女性NK细胞随年龄上升;(2)CD56highNK cells随年龄下降;女性CD56highNK细胞高于男性,30岁以后男性和女性CD56high NK细胞皆随年龄降低;(3)CD56dimNK细胞随年龄上升;女性CD56dim NK cells比例低于男性;30岁以后男性和女性CD56dimNK cells皆随年龄升高。
实施例5:如图25和图26所示,在第一层流式图中用B细胞进行圈门,得出第二层流式图,得出结论:B细胞比例不随年龄变化;中年女性B细胞高于男性。
以上对本发明的实施例进行了详细说明,但所述内容仅为本发明的较佳实施例,不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明范围所作的均等变化与改进等,均应仍归属于本专利涵盖范围之内。

Claims (8)

1.一种健康人免疫功能评估分析方法,其特征在于:包括如下步骤:步骤一,取健康人群的血液样本进行预处理,待测细胞染色并制成单细胞悬液,将单细胞悬液与抗体混合,得到单细胞-抗体混合液,采用流式细胞术检测单细胞-抗体混合液中的免疫细胞水平,得出流式图;步骤二,将步骤一的流式图进行若干层圈门统计分析,得出所需细胞比例;步骤三,将步骤二中的细胞比例按照不同年龄、不同性别进行对比分析。
2.根据权利要求1所述的健康人免疫功能评估分析方法,其特征在于:在步骤一中,健康人群包括20岁至80岁的男性和20岁至80岁的女性。
3.根据权利要求1和2所述的健康人免疫功能评估分析方法,其特征在于:在步骤二中,将流式图中的活细胞和淋巴细胞进行圈门,得出第一层流式图。
4.根据权利要求3所述的健康人免疫功能评估分析方法,其特征在于:根据权利要求1所述的健康人免疫功能评估分析方法,其特征在于:在第一层流式图中用CD3+T细胞进行圈门,得到第二层流式图,在第二层流式图中用CD4+T细胞进行圈门,得出第三层流式图,在第三层流式图中分别用CD28-CD4+T细胞、CD28+CD4+T细胞进行圈门,得出第四流式图。
5.根据权利要求3所述的健康人免疫功能评估分析方法,其特征在于:在第一层流式图中用CD3+T细胞进行圈门,得到第二层流式图,在第二层流式图中用CD8+T细胞进行圈门,得出第三层流式图,在第三层流式图中用CD28-CD8+T细胞进行圈门,得出第四流式图。
6.根据权利要求3所述的健康人免疫功能评估分析方法,其特征在于:在第一层流式图中用CD3+T细胞进行圈门,得到第二层流式图,在第二层流式图中分别用γδT细胞、调节性T细胞或TNK细胞进行圈门得出第三层流式图。
7.根据权利要求3所述的健康人免疫功能评估分析方法,其特征在于:在第一层流式图中用NK细胞进行圈门,得到第二层流式图,在第二层流式图中分别用CD56highNK细胞、CD56dimNK细胞圈门得出第三层流式图。
8.根据权利要求3所述的健康人免疫功能评估分析方法,其特征在于:在第一层流式图中用B细胞进行圈门,得出第二层流式图。
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