CN112245437A - 奥贝胆酸在防治脓毒症诱发的心肌损伤中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医疗领域，具体而言，涉及一种奥贝胆酸在防治脓毒症诱发的心肌损伤中的用途。本发明通过血清学检测、RT‑PCR、Western‑Blot和HE染色等首次证明OCA可以有效减轻脓毒症小鼠炎症反应，心肌损伤程度，提高小鼠存活率，发挥治疗脓毒症的作用，因此本发明提供了OCA在治疗脓毒症和脓毒症心肌损伤药物中的用途。

Description

奥贝胆酸在防治脓毒症诱发的心肌损伤中的用途

技术领域

本发明涉及生物医疗领域，具体而言，涉及一种奥贝胆酸在防治脓毒症诱发的心肌损伤中的用途。

背景技术

脓毒症是危重症患者死亡的主要病因，脓毒症的发病率呈上升趋势，死亡率高达34.6％，是急危重症医学目前面临的重要挑战。脓毒症3.0将脓毒症定义为：机体对感染的失控性炎症反应而导致危及生命的器官功能障碍。严重脓毒症往往伴随心血管功能障碍，随着病情进展可导致脓毒性休克和多器官功能障碍综合征(MODS)，而且在脓毒症早期即存在心肌损伤，包括心肌收缩和舒张功能障碍、射血分数降低、心肌细胞超微结构的改变。

脓毒症心肌损伤的发病机制极其复杂，涉及循环心肌抑制因素(如细菌毒素、细胞因子及补体系统等)、心肌自身因素(如线粒体损伤、氧化应激、细胞凋亡、一氧化氮产生及钙稳态失衡)及自主神经失调等方面。目前，在脓毒症研究中，心肌线粒体损伤、细胞凋亡是脓毒症心肌损伤最重要的研究进展之一。虽然针对脓毒症心肌损伤的治疗手段在近些年不断取得突破，但目前的治疗方法仍然有较高的病死率，因此急需研发用于治疗脓毒症及脓毒症心肌损伤的临床药物。

奥贝胆酸(Obeticholic acid，OCA)结构式如下：

奥贝胆酸也叫做6α-乙基-鹅去氧胆酸，是一种口服制剂，2002年由美国Intercept制药公司研发成功，用于治疗原发性胆汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病(NASH)，2020年美国食品和药物管理局(FDA)受理批准奥贝胆酸用于治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)引起的纤维化。奥贝胆酸属法尼酯X受体(FXR)激动剂，可活化法尼酯X受体，FXR是胆汁酸、炎症、纤维化、代谢通路、血管功能中的关键调节因子。

发明内容

本发明涉及奥贝胆酸及其衍生物在制备用于治疗和/或预防脓毒症诱发的心肌损伤的药物中的用途。

可选的，所述衍生物为奥贝胆酸的奥贝胆酸药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或氨基酸缀合物。

可选的，所述心肌损伤伴随肌酸激酶、门冬氨酸氨基转移酶、肌酸激酶同工酶和血乳酸脱氢酶表达水平的升高。

可选的，所述脓毒症由微生物感染导致。

可选的，所述脓毒症由革兰氏阴性菌感染导致。

可选的，所述脓毒症包括早期脓毒症、严重脓毒症和脓毒症休克。

可选的，所述药物包括药学上可接受的载体。

可选的，所述药物为冻干粉剂。

可选的，所述药物为注射剂。

可选的，所述注射剂为静脉注射剂或腹腔注射剂。

本发明的有益效果为：

本发明通过血清学检测、RT-PCR、Western-Blot和HE染色等首次证明OCA可以有效减轻脓毒症小鼠炎症反应，心肌损伤程度，提高小鼠存活率，发挥治疗脓毒症的作用，因此本发明提供了OCA在治疗脓毒症和脓毒症心肌损伤药物中的用途。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明一个实施例中小鼠心率测量结果；

图2为本发明一个实施例中小鼠血清CK、AST、CK-MB、LDH检测结果；

图3为本发明一个实施例中小鼠心脏组织HE染色图；

图4为本发明一个实施例中RT-PCR法检测小鼠心脏组织内IL-1β和IL-6mRNA水平；

图5为本发明一个实施例中Western blot实验检测小鼠心脏组织内Caspase-3、Bax蛋白表达情况。

具体实施方式

现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。

因此，旨在本发明覆盖落入所附权利要求的范围及其等同范围中的此类修改和变化。本发明的其它对象、特征和方面公开于以下详细描述中或从中是显而易见的。本领域普通技术人员应理解本讨论仅是示例性实施方式的描述，而非意在限制本发明更广阔的方面。

本发明涉及奥贝胆酸及其衍生物在制备用于治疗和/或预防脓毒症诱发的心肌损伤的药物中的用途。

奥贝胆酸(Obeticholic acid,OCA)又名6-乙基鹅去氧胆酸，是人初级胆汁酸中鹅去氧胆酸的一种新型衍生物，为法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)的天然配体。OCA被美国食品药品监督管理局批准用于治疗原发性胆汁性胆管炎(PBC)的二线药物，在2002年首次被研发合成，主要用于对熊去氧胆酸无充分应答或不能耐受的患者。OCA可调节胆汁酸稳态、脂质代谢、糖异生及炎症纤维化途径。本发明中奥贝胆酸的衍生物优选自其药学上可接受的盐、溶剂合物或氨基酸缀合物，其效能(potency)大于约98％、大于约98.5％、大于约99.0％或大于约99.5％。

本文所用术语"效能"是基于已知标准(例如约95％～约102％的接收标准)的量的奥贝胆酸的量的度量。效能考虑所有可能的杂质包括水、溶剂、有机和无机杂质。一方面，已知标准是奥贝胆酸。一方面，奥贝胆酸具有大于约96％的效能。一方面，奥贝胆酸具有大于约98％的效能。一方面，已知标准是奥贝胆酸。另一方面，效能是100％减水、硫酸灰分、残余溶剂和其它杂质内容物的量，其它杂质内容物例如6-乙基乌索脱氧胆酸、3α-羟基-6α-乙基-7-cheto-5β-胆烷-24-酸、6β-乙基鹅脱氧胆酸、3α，7α-二羟基-6-亚乙基-5β-胆烷-24-酸、鹅脱氧胆酸和3α(3α，7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酰基氧基)-7α-羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸。在另一个实施方案中，效能说明了因水、溶剂、金属、无机盐和其它无机或有机杂质所引起的杂质。例如，奥贝胆酸的效能为96.0％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97.0％、97.50％、98.50％、99.00％、99.10％、99.20％、99.30％、99.40％、99.50％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％。。在一个实施方案中，奥贝胆酸是奥贝胆酸1型。

在一些实施方式中，溶剂合物是水合物。在一个实施方案中，纯度大于约92％。在一个实施方案中，纯度大于约94％。在一个实施方案中，纯度大于约96％。在一个实施方案中，纯度大于约98％。在一个实施方案中，纯度大于约99％。

在一些实施方式中，所述心肌损伤伴随肌酸激酶、门冬氨酸氨基转移酶、肌酸激酶同工酶和血乳酸脱氢酶表达水平的升高。

在一些实施方式中，所述脓毒症由微生物感染导致。

已知引起脓毒症的感染微生物包括，但不限于：革兰氏阴性细菌如大肠杆菌(E.coli)、克雷白式杆菌属、绿脓杆菌和肠杆菌；及革兰氏阳性菌如表皮葡萄球菌和粪链球菌。

在一些实施方式中，所述脓毒症由革兰氏阴性菌感染导致。

由革兰氏阴性细菌产生的细菌产生的细菌内毒素为细菌膜脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)。脂多糖内毒素触发一系列导致脓毒症，并最终可能导致脓毒性休克和死亡链锁现象，具体地说，在应答这些脂多糖的存在中，释放出炎症反应介质包括但不限于肿瘤坏死因子、白细胞介素、血小板激活因子、白细胞三烯、前列腺素、干扰素、血小板、舒缓肽。释放炎症反应介质会引起细胞损伤，这种损伤最后导致细胞破坏，并最终导致器官的死亡。

在一些实施方式中，所述脓毒症包括早期脓毒症、严重脓毒症和脓毒症休克。

在一些实施方式中，所述药物包括药学上可接受的载体。

药学上可接受的载体成分的实例包括结合剂(糖浆、阿拉伯树胶、明胶、山梨醇、黄芪胶(tragacanth)、聚乙烯吡咯烷酮等)、填充剂(乳糖、蔗糖、淀粉、磷酸钙、山梨糖醇、甘氨酸等)、润滑剂(硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇等)、崩解剂(淀粉、微晶纤维素(microcrystalline cellulose)等)、湿润剂(十二烷基硫酸钠(sodium lauryl sulphate)等)、悬浮剂(山梨糖醇、糖浆、甲基纤维素、葡萄糖浆(glucose syrup)、明胶、氢化食用脂肪等)、乳化剂(卵磷脂、山梨醇单油酸酯、阿拉伯树胶等)、非水性载体(杏仁油、分馏椰子油或甘油、丙二醇、乙醇等疏水酯等)、防腐剂(对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、山梨酸等)、芳香剂(合成香料、天然香料等)、甜味剂(蔗糖、甜叶菊、木糖醇等)、pH调节剂(碳酸氢钠、碳酸钾等)、粉剂(色素、染料、树脂等)、增稠剂(阿拉伯树胶、甲基纤维素等)、抗氧化剂(维生素C、维生素E等)等等。

只要所述试剂可以被给药，本发明的药物可以制成片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、液体和溶液、悬浮液、乳液、注射剂和滴剂等。

在一些实施方式中，所述药物为冻干粉剂。

在一些实施方式中，所述药物为注射剂。

在一些实施方式中，所述注射剂为静脉注射剂或腹腔注射剂。

本发明优选的给药方式是静脉注射或腹腔注射；也可以通过任何已知的给药方法施用FGF19，例如，从口服、皮粘膜给药(如表面、舌下、鼻腔内和直肠)，非肠道给药(如，经皮下注射、肌内注射、关节内注射、静脉注射、动脉注射)及吸入法给药等中进行适当地选择。因此，具体的给药方式包括，但不限于例如口服、经皮、粘膜、舌下、肌内、静脉、腹膜内、皮下给药及局部用药。

也可以同抗生素或其他细胞因子等能够治疗脓毒症的药物共同施用FGF19。术语“共同施用”，如本文所用，意指用所有类型的助剂(即，复合)给主体下药：同步地(同时)和继后地[一种药紧随另一种药后(服用)或一种药在另一种药服用片刻后(施用)]。例如可以将FGF19与某些抗生素药剂包括但不限于青霉素类、头孢菌素类、Ciprofloxacin、喹诺酮内酰胺抗生素、红霉素和氨基糖或类抗生素共同施用。

经静脉注射给药的药物，一般是固体的灭菌组合物形式。这些组合物还可以含有添加剂，特别是甘露醇、右旋糖苷、水解明胶、柠檬酸钠、甘氨酸等。在使用时溶解于灭菌注射用水或其它注射用灭菌介质中。

经静脉注射给药的人尿激肽原酶组合物也可以是水溶液形式。组合物还可以含有添加剂，特别是甘露醇、氯化钠、葡萄糖等。

药物制剂优选为单位剂量形式。在这种形式中，制剂被细分为含有合适量的活性组分的单位剂量。单位剂量形式可以是包装的制剂，该包装含有分立的制剂量，诸如小瓶或安瓿中的包装片剂、胶囊和粉剂。而且，单位剂量形式可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者其可以是合适数量的这些剂量形式中任意一种的包装形式。用于口服给药的片剂或胶囊和用于静脉内给药和持续输注的液体是优选的组合物。

根据本发明的再一方面，还涉及一种治疗、预防脓毒症的方法，包括对受试者给予安全和有效量的如上所述药物的步骤。

短语“安全和有效量的”。如本文所用，意指在合理的医药调节范围内化合物或组合物的量大到足以明显有效地缓解所治疗的症状或病症，但小到足以避免严重的副作用(以合理的有益/危险比率)。本发明的方法所用的药物组合物中的活性成份的安全和有效量随所治疗的特定症状、年龄和所治疗患者的身体状况，疾病的严重性、治疗时间、同期治疗情况、使用的特定活性成份、使用的特定的药物学可接受的赋形剂及包括参与治疗医师的知识和技能在内的这类因素的不同而不同。

本发明中所述的术语“受试者”可以指患者或者其它接受本发明所述试剂或药物以治疗、预防、减轻和/或缓解本申请所述疾病、病症、症状的动物，受试者包括温血动物，诸如哺乳类，像是灵长类，且较佳地是人类。非人类的灵长类也是个体。用语个体包括驯养动物，诸如猫、狗等，家畜(举例来说，牛、马、猪、绵羊、山羊等)以及实验动物(举例来说，小鼠、兔、大鼠、沙鼠、豚鼠等)。

在本发明的一种实施方式中，局部地或全身地或通过两种途径组合地施用药物。

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。对于本领域技术人员来说，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

除非另有说明，本发明采用的免疫学、生物化学、化学、分子生物学、微生物学、细胞生物学、基因组学和重组DNA等是本领域的常规技能。参见萨姆布鲁克(Sambrook)、弗里奇(Fritsch)和马尼亚蒂斯(Maniatis)，《分子克隆：实验室手册》(MOLECULAR CLONING:ALABORATORY MANUAL)，第2次编辑(1989)；《当代分子生物学实验手册》(CURRENT PROTOCOLSIN MOLECULAR BIOLOGY)(F.M.奥苏贝尔(F.M.Ausubel)等人编辑，(1987))；《酶学方法》(METHODS IN ENZYMOLOGY)系列(学术出版公司)：《PCR2:实用方法》(PCR 2:A PRACTICALAPPROACH)(M.J.麦克弗森(M.J.MacPherson)、B.D.黑姆斯(B.D.Hames)和G.R.泰勒(G.R.Taylor)编辑(1995))、哈洛(Harlow)和拉内(Lane)编辑(1988)《抗体：实验室手册》(ANTIBODIES,A LABORATORY MANUAL)，以及《动物细胞培养》(ANIMAL CELL CULTURE)(R.I.弗雷谢尼(R.I.Freshney)编辑(1987))。

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。

实施例1奥贝胆酸缓解脂多糖导致的小鼠心率降低

1.实验材料：

本发明使用的C57BL/6小鼠购自上海南方模式动物中心，本发明使用的奥贝胆酸购自Intercept Pharmaceuticals公司，脂多糖购自Sigma-Aldrich公司。

2.实验方法：

清洁级雄性C57BL/6小鼠24只(8周龄，体重20-25g)饲养于动物房，适应性饲养1周后随机分为对照组(n＝6)、奥贝胆酸组(n＝6)、脂多糖组(n＝6)和奥贝胆酸+脂多糖组(n＝6)。

奥贝胆酸组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠采用奥贝胆酸连续灌胃6天(5mg/kg/day)，6天后脂多糖组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠腹腔注射脂多糖(5mg/kg)，奥贝胆酸组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠继续奥贝胆酸连续灌胃1天(5mg/kg/day)，实验结束时记录小鼠心率水平。

3.实验结果：

结果如图1所示，结果表明奥贝胆酸预处理可显著缓解脂多糖引起的小鼠心率降低。

应用SPSS25.0软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示。不同组间比较采用t检验，P<0.05表明差异有统计学意义。

实施例2奥贝胆酸可缓解由脂多糖引起的小鼠心肌损伤的生化指标异常

1.实验材料：

本发明使用的C57BL/6小鼠购自上海南方模式动物中心，本发明使用的奥贝胆酸购自Intercept Pharmaceuticals公司，脂多糖购自Sigma-Aldrich公司。

2.实验方法：

清洁级雄性C57BL/6小鼠24只(8周龄，体重20-25g)饲养于动物房，适应性饲养1周后随机分为对照组(n＝6)、奥贝胆酸组(n＝6)、脂多糖组(n＝6)和奥贝胆酸+脂多糖组(n＝6)。

奥贝胆酸组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠采用奥贝胆酸连续灌胃(5mg/kg/day)，6天后脂多糖组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠腹腔注射脂多糖(5mg/kg)，奥贝胆酸组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠继续奥贝胆酸连续灌胃1天(5mg/kg/day)，实验结束时采用10％水合氯醛麻醉小鼠，切开胸腔并通过直接穿刺右心室收集血液，4℃放置15分钟，4000rpm离心8min分离取上层清液获得血清，使用全生化分析仪检测肌酸激酶(CK)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平。

3.实验结果：

四组小鼠肌酸激酶(CK)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、血乳酸脱氢酶(LDH)水平结果如图2所示，结果表明奥贝胆酸预处理可显著缓解脂多糖引起肌酸激酶、门冬氨酸氨基转移酶等心肌损伤生化标志物水平的升高。

应用SPSS25.0软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示。不同组间比较采用t检验，P<0.05表明差异有统计学意义。

实施例3奥贝胆酸可改善由脂多糖引起的小鼠心肌组织病理损伤

1.实验材料：

本发明使用的C57BL/6小鼠购自上海南方模式动物中心，本发明使用的奥贝胆酸购自Intercept Pharmaceuticals公司，脂多糖购自Sigma-Aldrich公司。

2.实验方法：

清洁级雄性C57BL/6小鼠24只(8周龄，体重20-25g)饲养于动物房，适应性饲养1周后随机分为对照组(n＝6)、奥贝胆酸组(n＝6)、脂多糖组(n＝6)和奥贝胆酸+脂多糖组(n＝6)。

奥贝胆酸组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠采用奥贝胆酸连续灌胃(5mg/kg/day)，6天后脂多糖组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠腹腔注射脂多糖(5mg/kg)，奥贝胆酸组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠继续奥贝胆酸连续灌胃1天(5mg/kg/day)，实验结束时，采用10％水合氯醛麻醉小鼠后，切开胸腔收集小鼠心脏，将小鼠心脏组织经4％多聚甲醛固定，常规石蜡包埋、组织切片，酒精脱蜡、二甲苯透明等处理后，用苏木精和署红(hematoxylin and eosin，H&E)染色，在光学显微镜下观察心肌组织病理变化并拍照，每张片子采集5个高倍视野图像。

3.实验结果：

结果如图3所示，对比可知奥贝胆酸+LPS组小鼠比LPS组小鼠心肌组织中中性粒细胞浸润明显减少，心肌细胞肿胀明显改善，结果表明：奥贝胆酸可以显著减轻小鼠心肌损伤程度。

实施例4奥贝胆酸可减轻由脂多糖引起的小鼠炎症反应

1.实验材料

本发明使用的C57BL/6小鼠购自上海南方模式动物中心，本发明使用的奥贝胆酸购自Intercept Pharmaceuticals公司，脂多糖购自Sigma-Aldrich公司。

2.实验方法：

清洁级雄性C57BL/6小鼠24只(8周龄，体重20-25g)饲养于动物房，适应性饲养1周后随机分为对照组(n＝6)、奥贝胆酸组(n＝6)、脂多糖组(n＝6)和奥贝胆酸+脂多糖组(n＝6)。

奥贝胆酸组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠采用奥贝胆酸连续灌胃(5mg/kg/day)，6天后脂多糖组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠腹腔注射脂多糖(5mg/kg)，奥贝胆酸组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠继续奥贝胆酸连续灌胃1天(5mg/kg/day)，实验结束时，采用10％水合氯醛麻醉处死小鼠后，切开胸腔收集小鼠心脏，将心脏组织经液氮瞬时冷冻后转移至-80℃冰箱，备用。采用RT-PCR法检测心脏组织内IL-6、IL-1βmRNA水平，GAPDH作为内参。Trizol法提取总RNA，反转录获得cDNA，采用20μL体系进行实时荧光定量PCR，反应条件:95℃预变性15min，95℃变性反应10s，60℃退火15s，72℃延伸15s，共45个循环。通过值2^-△△ct计算目的基因相对表达量。引物序列由上海生物工程有限公司合成，碱基序列见表1。

表1：IL-6、IL-1βmRNA的碱基序列

Gene	Forward primer(5’-3’)	Reverse primer(5’-3’)
			Gadph	AGGTCGGTGTGAACGGATTTG	GGGGTCGTTGATGGCAACA
Il-6	GATACCACTCCCAACAGAC	CTTTTCTCATTTCCACGAT
			Il-1β	TTCAGGCAGGCAGTATCACTC	GAAGGTCCACGGGAAAGACAC

应用SPSS25.0软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示。不同组间比较采用t检验，P<0.05表明差异有统计学意义。

3.实验结果：

结果如图4所示，结果表明奥贝胆酸预处理可显著缓解脂多糖引起的小鼠心肌炎性损伤。

实施例5奥贝胆酸可减轻由脂多糖引起的小鼠心肌细胞凋亡

1.实验材料

本发明使用的C57BL/6小鼠购自上海上海南方模式动物中心，本发明使用的奥贝胆酸购自Intercept Pharmaceuticals公司，脂多糖购自Sigma-Aldrich公司。

2.实验方法：

清洁级雄性C57BL/6小鼠24只(8周龄，体重20-25g)饲养于动物房，适应性饲养1周后随机分为对照组(n＝6)、奥贝胆酸组(n＝6)、脂多糖组(n＝6)和奥贝胆酸+脂多糖组(n＝6)。

奥贝胆酸组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠采用奥贝胆酸连续灌胃(5mg/kg/day)，6天后脂多糖组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠腹腔注射脂多糖(5mg/kg)，奥贝胆酸组和奥贝胆酸+脂多糖组小鼠继续奥贝胆酸连续灌胃1天(5mg/kg/day)，实验结束时，采用10％水合氯醛麻醉处死小鼠后，切开胸腔收集小鼠心脏，将心脏组织经液氮瞬时冷冻后转移至-80℃冰箱，备用。20μg心脏组织蛋白经蛋白电泳分离后湿转法转膜，5％脱脂牛奶封闭2h，而后加入一抗anti-GAPDH、anti-Caspase-3、anti-Bax置于4℃摇床过夜孵育；洗涤后加入二抗，室温摇床孵育1h；洗涤后显影液显色、曝光；实验结果用ImageJ图像处理软件分析.

应用SPSS25.0软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示。不同组间比较采用t检验，P<0.05表明差异有统计学意义。

3.实验结果：

结果如图5所示，结果表明奥贝胆酸预处理可显著缓解脂多糖引起的小鼠心肌凋亡。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.奥贝胆酸及其衍生物在制备用于治疗和/或预防脓毒症诱发的心肌损伤的药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，所述衍生物为奥贝胆酸的奥贝胆酸药学上可接受的盐、溶剂合物或氨基酸缀合物。

3.根据权利要求1所述的用途，所述心肌损伤伴随肌酸激酶、门冬氨酸氨基转移酶、肌酸激酶同工酶和血乳酸脱氢酶表达水平的升高。

4.根据权利要求1所述的用途，所述脓毒症由微生物感染导致。

5.根据权利要求4所述的用途，所述脓毒症由革兰氏阴性菌感染导致。

6.根据权利要求1所述的用途，所述脓毒症包括早期脓毒症、严重脓毒症和脓毒症休克。

7.根据权利要求1所述的用途，所述药物包括药学上可接受的载体。

8.根据权利要求1所述的用途，所述药物为冻干粉剂。

9.根据权利要求1所述的用途，所述药物为注射剂。

10.根据权利要求9所述的用途，所述注射剂为静脉注射剂或腹腔注射剂。

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