CN112220734A - 一种含干细胞活性因子的护肤喷雾及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种含干细胞活性因子的护肤喷雾，使用干细胞条件培养基、透明质酸钠、甘油、芦荟提取物等成分制备而成，能够深入渗透肌肤底层，润泽肌肤，滋养肌肤细胞，化解肌肤干渴状态，实现深层补水的目的；同时还能有效吸收水分，迅速渗入肌肤底层，唤醒肌肤活力，达到清爽滋润的效果，且能促进皮肤新陈代谢，更新老化角质，恢复自然白皙，光滑水嫩，使皮肤丰富弹性。本发明含干细胞活性因子的护肤喷雾能够直击肌肤多种问题，多重功集于一身，通过高保湿配方，舒缓痘痘及防晒修复受损肌肤，促进肌肤活力，为疲劳、干燥肌肤带来丰沛水分，肌肤日益水嫩匀润，效果显著，换发健康光彩。本发明制备方法简便，适合大规模生产。

Description

一种含干细胞活性因子的护肤喷雾及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种含干细胞活性因子的护肤喷雾及其制备方法，属于化妆品技术领域。
背景技术
皮肤位于人体表面，是人体的第一道防线，尤其是皮肤角质层具有十分重要的功能。角质层中的水是重要的塑形物，其相对含量约为10％～15％。随着年龄增加，皮肤角质层中的自然保湿因子含量逐渐减少，使皮肤水合能力下降，仅能达到正常皮肤的75％。同时，皮肤受内源性因素的影响，会表现出松弛、出现细小皱纹、干燥、脱屑、脆性增加、修复功能减退等现象。此外，长期处于密封及空调房间中，长期接触电磁辐射会使皮肤产生早衰、出现斑点等负面影响；而空调的抽湿过程中，使得人体水分不断蒸发，即使通过补充饮水，也很难即使弥补皮肤水分的损失。因此，皮肤干燥及过长时间暴露于辐射环境，成为人们在日常生活中面临的主要肌肤健康威胁。
干细胞是一种尚未分化发育的种子细胞，具有无限自我更新复制能力，且能分化成特定组织。干细胞不但可以产生或分泌大量的生物活性因子，而且干细胞内也含有丰富的生物活性物质，这些干细胞生物活性因子或物质可有效调控机体细胞信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞等。因此，将干细胞加入到化妆品中，可以赋予化妆品加快细胞新陈代谢，增强皮肤细胞活力，进而明显改善肤质，提高皮肤弹性和增生能力，因而在保健美容领域具有广阔的应用前景。
由于日用化妆品营养丰富，容易滋生微生物，除了使化妆品中的色、香、味发生变化，还会导致人体健康受到危害。而实际生产过程中，通常会添加抗菌药物，添加的抗菌药物绝大多数是有机抗菌剂，有机抗菌剂应用所导致的耐药性问题已经成为新世纪人类面临的巨大挑战。纳米氧化锌具有成本低，安全无毒，化学性质稳定，易加工成型，具有良好的生物相容性，无毒，无味，对皮肤无刺激性且具有广谱抗菌作用和选择细胞毒性等特点，是一种较理想的抗菌材料。虽然现有技术已经有较为成熟的方法制备纳米氧化锌，然而其制备的纳米氧化锌多为醇溶型纳米氧化锌，水溶不完全，作为抗菌材料制备护肤喷雾会产生沉淀，从而影响抗菌效果。
发明内容
为了解决现有技术中的问题，根据本发明的第一方面，本发明的目的在于提供一种含干细胞活性因子的护肤喷雾。
本发明的目的是这样实现的：
一种含干细胞活性因子的护肤喷雾，由以下原料及配比制得：干细胞条件培养基5-10％，甘油0.3-0.5％，以体积体积百分比计；亲水性纳米氧化锌0.4-0.8％，透明质酸钠0.02％-0.1％，芦荟提取物0.5-1％，丙二醇0.2-0.5％，以质量体积百分比计；余量为纯化水。
根据本发明的一个实施方案，所述透明质酸钠分子量20-40万；所述干细胞条件培养基的干细胞为脐带间充质干细胞。
根据本发明的一个实施方案，所述亲水性纳米氧化锌量子点，在3425cm-1、2936cm-1、1574cm-1、1405cm-1、1018cm-1、525cm-1处显示出红外光谱吸收峰。
根据本发明的一个实施方案，所述亲水性氧化锌量子点采用如下步骤制备：将乙酸锌,二水用无水乙醇溶解，然后置于冰浴中，滴加溶解有氢氧化钾的乙醇溶液，并不断搅拌以充分反应20～30min，然后将反应液从冰浴中取出置于室温环境，滴加3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)水溶液，并不断搅拌3～5h，然后在5800～6200rmp离心乳白色浑浊溶液8～12min，弃去上层清液，加入无水乙醇分散并清洗沉淀物，再按照上述离心步骤操作两次，沉淀物置于鼓风干燥箱中于50～70℃下干燥1.5～2.5h，即得本发明所述亲水性氧化锌量子点。
上述将乙酸锌,二水用无水乙醇溶解为将乙酸锌,二水加入盛有无水乙醇的单口烧瓶中，80℃下搅拌回流直至乙酸锌完全溶解。
根据本发明的一个实施方案，所述亲水性氧化锌量子点采用如下步骤制备：取35mM氢氧化钾至于50mL烧杯中，加入20mL无水乙醇搅拌15min直至氢氧化钾完全溶解，放置于4℃下的冰箱中冷藏；将25mM乙酸锌,二水加入盛有150mL无水乙醇的单口烧瓶中，80℃下搅拌回流直至乙酸锌完全溶解，随后将混合液置于冰浴中；将溶解有氢氧化钾的乙醇溶液滴加到盛有乙酸锌乙醇溶液的单口烧瓶，并不断搅拌以充分反应30min；将反应混合液取出冰浴待其温度回温至室温时，滴加1.5mL去离子水和500uL 3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)混合溶液，并不断搅拌5h；在6000rmp下离心乳白色浑浊溶液10min，移去上层清液，加入35mL无水乙醇分散并清洗沉淀物，再反复上述离心操作两次，然后将沉淀物置于鼓风干燥箱中60℃下干燥2h，即得本发明所述亲水性氧化锌量子点。
根据本发明的第二方面，本发明的目的在于提供上述含干细胞活性因子的护肤喷雾的制备方法。
一种含干细胞活性因子的护肤喷雾的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)设定配料缸温度为80-90℃，开启搅拌40-60r/min，在搅拌状态下依次加入透明质酸钠、甘油、芦荟提取物、丙二醇和纯化水，搅拌均匀，备用；
(2)配料缸开启降温，当温度到达45-50℃时候，加入干细胞条件培养基和亲水性纳米氧化锌，搅拌均匀；
(3)降温到30-35℃，继续搅拌15-20分钟后，出料，测定各项指标，各项指标合格后即可灌装入瓶。
有益效果：
本发明提供一种含干细胞活性因子的护肤喷雾，使用特定比例的干细胞条件培养基、透明质酸钠、甘油、芦荟提取物等成分制备而成，能够深入渗透肌肤底层，润泽肌肤，滋养肌肤细胞，化解肌肤干渴状态，实现深层补水的目的；同时还能有效吸收水分，迅速渗入肌肤底层，唤醒肌肤活力，达到清爽滋润的效果，且能促进皮肤新陈代谢，更新老化角质，恢复自然白皙，光滑水嫩，使皮肤丰富弹性。本发明含干细胞活性因子的护肤喷雾能够直击肌肤多种问题，多重功集于一身，通过高保湿配方，舒缓痘痘及防晒修复受损肌肤，促进肌肤活力，为疲劳、干燥肌肤带来丰沛水分，肌肤日益水嫩匀润，效果显著，换发健康光彩，且护肤喷雾小巧便捷不占地方，随时随地，不用担心路途中遭遇皮肤缺水问题。本发明含干细胞活性因子的护肤喷雾在GMP层流洁净室生产，无添加任何外源激素成分，不损害皮肤完整结构。本发明含干细胞活性因子的护肤喷雾使用特定的亲水性纳米氧化锌量子点作为抗菌成分，对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有明显的破坏性，处理后的细菌细胞壁皱缩，受损严重；同时对一些食源性病菌体如屎肠球菌、蜡样芽孢杆菌，巨大芽孢杆菌及藤黄微球菌也有明显的抑制作用，抗菌范围较广，有效保证本发明面膜液的保质期。相比商业化纳米氧化锌本发明使用的亲水性氧化锌量子点的抑菌能力远远强于商业化纳米氧化锌，用0.5g/L的本发明亲水性氧化锌量子点可以抑制细菌生长1.5个滴度，而商业纳米氧化锌抑制细菌生长远不到0.5个滴度。本发明制备方法简便，适合大规模生产。
附图说明
图1亲水性氧化锌量子点透射电镜图；
图2亲水性氧化锌量子点与商业纳米氧化锌的傅里叶红外图谱对比图，其中1号样品为本发明所制备的亲水性氧化锌量子点，2号样品为对比所使用的一种商业纳米氧化锌(棒状)，3号样为对比所使用的另一种商业纳米氧化锌(花状)；
图3亲水性氧化锌量子点与商业纳米氧化锌的透过率对比图，其中1号样品为本发明所制备的亲水性氧化锌量子点，2号样品为对比所使用的一种商业纳米氧化锌(棒状)，3号样为对比所使用的另一种商业纳米氧化锌(花状)；
图4亲水性氧化锌量子点与商业纳米氧化锌的水溶液图像对比图，1号样品为本发明所制备的亲水性氧化锌量子点，2号样品为对比所使用的一种商业纳米氧化锌(棒状)，3号样为对比所使用的另一种商业纳米氧化锌(花状)；
图5亲水性氧化锌量子点对金黄色葡萄球菌的杀菌统计结果图；
图6亲水性氧化锌量子点对大肠杆菌的杀菌统计结果图；
图7亲水性氧化锌量子点对屎肠球菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和藤黄球菌的抑菌效果评价结果图；
图8亲水性氧化锌量子点与另外两种商业纳米氧化锌的抗菌性能对比结果图，其中1号样品为本发明所制备的亲水性氧化锌量子点，2号样品为对比所使用的一种商业纳米氧化锌(棒状)，3号样为对比所使用的另一种商业纳米氧化锌(花状)；
图9亲水性氧化锌量子点与另外两种商业纳米氧化锌的抗菌性能对比结果图；其中1号样品为本发明所制备的亲水性氧化锌量子点，2号样品为对比所使用的一种商业纳米氧化锌(棒状)，3号样为对比所使用的另一种商业纳米氧化锌(花状)；
图10屎肠球菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、藤黄球菌和亲水性氧化锌量子点的表面电位图；
图11亲水性氧化锌量子点水溶液的活性物质以及处理细菌后内源性活性物质的含量测试结果图，其中a为不同浓度氧化锌量子点水溶液中H2O2和O2 -的含量；b为不同浓度氧化锌量子点水溶液中OH含量；c为不同浓度氧化锌量子点水溶液的氧化还原电位；d为氧化锌处理蜡状芽孢杆菌后内源性活性物质产生量；e为氧化锌处理巨大芽孢杆菌后内源性活性物质产生量；f为氧化锌处理屎肠球菌后内源性活性物质的含量。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行具体描述，在此指出以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术熟练人员可以根据上述发明内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。本发明所用原料及试剂均为市售产品，其中乙酸锌,二水(Zinc aetate dehydrate,Zn(OAc)2·2H2O)，3-氨丙基三乙氧基硅烷((3-aminopropyl)triethoxysilane,APTES)，氢氧化钾(Europium oxide andpotassium hydroxide,KOH)购自阿拉丁；对比所使用的商业氧化锌(纳米氧化锌90±10nm,99.8％metals basis)购买自上海麦克林生化科技有限公司；活/死细胞活力试剂盒(L13152)购自美国Invitrogen公司；活性物质检测试剂盒：过氧化氢检测试剂盒(S0038)、二氢乙锭(S0063)、超氧化物检测试剂盒(S0060)购自碧云天生物技术(上海)有限公司。干细胞条件培养基参照王帅帅等的人2013年发表在《中国医药指南》的文章“人脐带血间充质干细胞条件培养基的制备及其生物学特性”进行培养。实验过程中所用到的常规培养基，试剂缓冲液等参照《分子克隆实验指南第三版译》以及《TaKaRa商品目录》中实验室常规试剂配制方法章节进行配置。
实施例1
(一)亲水性氧化锌量子点制备
亲水性氧化锌量子点的合成：取35mM氢氧化钾至于50mL烧杯中，加入20mL无水乙醇搅拌15min直至氢氧化钾完全溶解，放置于4℃下的冰箱中冷藏。将25mM乙酸锌,二水加入盛有150mL无水乙醇的单口烧瓶中，80℃下搅拌回流直至乙酸锌完全溶解(2h左右)，随后将混合液置于冰浴中。将氢氧化钾的乙醇溶液逐滴滴加到盛有乙酸锌乙醇溶液的单口烧瓶，并不断搅拌以充分反应30min。此时可观察反应液由澄清变浑浊又逐渐澄清的现象。将反应混合液取出冰浴待其温度回温至室温时，逐滴滴加1.5mL去离子水和500uL3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)混合溶液，并不断搅拌5h，此时观察溶液由澄清变为乳白色。在6000rmp下离心乳白色浑浊溶液10min，移去上层清液，加入35mL无水乙醇分散并清洗沉淀物，反复上操作两次。将沉淀物置于鼓风干燥箱中60℃下干燥2h，最终得到本发明亲水性氧化锌量子点(ZnO QDs)颗粒(粉末)。
将上述实施例制备的亲水性氧化锌量子点进行性质表征
透射电子显微镜用来观察亲水性ZnO QDs的形貌大小，将亲水性氧化锌的水溶液，滴在超薄碳膜上，然后烘干，置仪器中观察(仪器型号为JEM-21100，加速电压：200kV，放大倍数：X1000-X100万)，结果如图1所示。在透射电镜下观察到本发明亲水性氧化锌量子点呈球状，大小均匀，分散良好，无团聚现象，平均颗粒粒径小于5nm。图1的插图处为单个ZnOQDs的高倍透射电子显微镜图谱，可观察到ZnO QDs清晰地晶格衍射条纹，晶格间距为0.281nm。通过动态光散射发现本发明亲水性氧化锌量子点10nm粒径处出现一个峰，进一步验证了ZnO QDs在水中分散良好未发生团聚现象。
傅里叶红外光谱用来分析实施例1制备的亲水性氧化锌和商业购买的氧化锌的表面基团(仪器型号为：Nicolet iSl0型(美国赛默飞世尔科技公司)，测试范围为4000-400cm-1)，将氧化锌粉末与溴化钾混合后进行压片，然后放入红外光谱仪进行测量，结果如图2所示。由图2可知在3425cm-1处出现宽吸收带，其可归因于N-H的伸缩振动，在2936cm-1的峰可归因于C-H的特征伸缩振动，N-H和C-H弯曲振动峰分别出现在1574cm-1和1405cm-1处，位于1018cm-1的峰是由于Si-O的伸缩振动引起。另外，525cm-1处的峰属于Zn-O的伸缩振动。以上结果表明ZnO QDs被APTES良好修饰。而在2936cm-1，1574cm-1，1405cm-1和1018cm-1处都无任何弯曲振动峰，说明没有任何基团修饰。525cm-1处的峰同属于Zn-O的伸缩振动。由此可见，特殊化学基团的修饰可以使纳米颗粒具备特定部位的振动吸收峰。
吸收光谱用来分析两种氧化锌水溶液的透过率以及相应的吸收特性。以去离子水作为背景基线，测透过时，纯水透过率为100％；测吸收时，纯水吸收系数为0。将两种氧化锌配置成等同浓度的水溶液，每次取2ml置于1cm厚的石英槽中测试即可(仪器型号为：UH-450，透过率范围400-800nm，吸收范围设置为340nm-800nm)。本发明亲水性氧化锌量子点与商业纳米氧化锌的透过率对比如图3所示，本发明亲水性氧化锌量子点与商业纳米氧化锌的水溶液图像对比如图4所示。从图3和图4来看，本发明ZnO QDs的水溶液分别在日光(左)和365nm的紫外灯(右)辐照下的数码照片，日光下ZnO QDs的水分散体是澄清透明的，此结果表明制备的ZnO QDs具有良好的水溶性，并且在UV光照射下，ZnO QDs表现出强的黄色荧光；同时ZnO QDs的水溶液放置一个月之后其荧光强度并没有发生明显下降(实线)，表明ZnO QDs在水溶液中具有良好的胶体性和光学稳定性，未有光漂白和光闪烁现象。从图3透过率实验和图4三种溶液肉眼观察可得，亲水性氧化锌量子点比商业纳米氧化锌颗粒水溶性更好，既便于清洗，也更容易后续与其他材料复合。在最佳激发波长365nm下，亲水性氧化锌量子点溶液呈现强的宽范围的黄色荧光发射，而商业化纳米氧化锌溶液呈现蓝紫色荧光发射。
上述实施例制备的亲水性氧化锌量子点的抗菌实验
细菌培养
培养金黄色葡萄球菌S.aureus(CGMCC 1.2465)和大肠杆菌E.coil(CVCC216)时，分别取S.aureus和E.coil的单菌落于20ml的LB培养基中，金葡菌条件为37℃/12h，然后转接1次(1ml于20ml LB培养基之中)，继续培养3h，得到浓度为109cfu/ml；大肠杆菌条件为37℃/8h，浓度为109cfu/ml。同样涉及的食源性病菌体也是按照相应操作在培养基中生长至特定浓度供使用。
本发明亲水性氧化锌量子点和商业纳米氧化锌对细菌灭活的操作相同，具体细节如下：(1)分别配制不同浓度的氧化锌水溶液，体积为10ml，浓度依次为0.001、0.01、0.1、0.5和1mg/ml；(2)同时将两种浓度为109cfu/ml的细菌，依次取若干3ml的离心管，依次加入1ml的细菌悬浮液，然后5000r/min离心5min；(3)去除上清液，收集沉淀，依次与10ml的不同的浓度的氧化锌溶液互相混合，此时细菌浓度为108cfu/ml，共同室温下培养30min，然后立即5000r/min离心5min，去除上清液，并用去离子水清洗2遍，最后加入1ml水，使沉淀重新分散成悬浊液(实验组)。以10ml的去离子水与细菌混合培养30min作为空白对照组，每个氧化锌-细菌混合培养均设置3个平行对照；(4)将(3)中的最后的悬浮液，依次取100ul加入到900ul的去离子水中，梯度稀释，然后采用稀释平板法，均匀涂板，置于鼓风干燥箱，在条件37℃下培养12h后计数。
氧化锌量子点的活性氧检测
配置不同浓度的亲水性氧化锌量子点溶液(0.4mg/mL，0.8mg/mL，1.2mg/mL，1.6mg/mL，2.0mg/mL)，分别作用于蜡样芽孢杆菌、大地懒杆菌和屎肠球细杆菌，然后收集细菌悬液，设定空白对照孔，约按5-10万个细胞/毫升的比例加入96孔板之后用超氧化物检测工作液悬浮细胞，37℃孵育3分钟。接着依次加入过氧化氢检测试剂(S0038)、二氢乙锭(S0063)和超氧化物检测试剂(S0060)，在450nm测定吸光度得到检测数值。数据为平均标准差(n＝3、6或8)，统计分析采用GraphPad Prism 5.0软件，p＜0.05被认为具有统计学意义。
抗菌结果
将亲水性氧化锌量子点分别配制不同浓度的氧化锌水溶液，体积为10ml，浓度依次为0.001、0.01、0.1、0.5和1mg/ml。分别作用于细菌浓度为108cfu/ml的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌30min，以去离子水做对照，然后稀释后涂平板于37℃下培养12h后计数。本发明亲水性氧化锌量子点对金黄色葡萄球菌的杀菌统计结果如图5所示，对于金黄色葡萄球菌，从0.001g/L开始抑制50％以上细菌生长，随着浓度增加，抑菌效果增强。从图5可知，从0.1g/L开始几乎没有细菌生长，因此0.1g/L～1g/L对金葡杀菌效果明显。对大肠杆菌的杀菌统计结果如图6所示，对大肠杆菌0.5g/L以上可抑制50％以上细菌生长。从图6可知，随着浓度增加，抑菌效果逐渐增强，且抑菌效果持续时间长。
分别用0.1g/L、0.3g/L、0.5g/L、1.0.g/L及2.0g/L的亲水性氧化锌量子点作用于屎肠球菌、蜡样芽孢杆菌，巨大芽孢杆菌及藤黄微球菌，在48h后检测细菌相对数量，检测结果如图7所示，很明显，本发明亲水性氧化锌量子点对这些细菌也有明显的抑制作用，具有较广的抗菌范围和较长抗菌时间的特点。
亲水性氧化锌量子点与商业纳米氧化锌的抗菌对比
将亲水性氧化锌量子点分别配制不同浓度的氧化锌水溶液，体积为10ml，浓度依次为0.001、0.01、0.1、0.5和1mg/ml。分别作用于细菌浓度为108cfu/ml的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌30min，以去离子水做对照，然后稀释后涂平板于37℃下培养12h后计数。发现0.1g/L～1g/L对金葡杀菌效果明显；0.5g/L以上对大肠杆菌杀灭效果明显，抑菌效果可持续长时间。用0.5g/L的亲水性氧化锌量子点与其他两种商业纳米氧化锌颗粒分别作用于金黄色葡萄球菌，抗菌结果的光学图像如图8所示，处理后的细菌计数结果如图9所示，发现亲水性氧化锌量子点可以抑制细菌生长1.5个滴度，而所有商业纳米氧化锌抑制细菌生长远不到0.5个滴度。很显然，本发明亲水性氧化锌的抑菌能力远远强于商业化纳米氧化锌。
亲水性氧化锌量子点的抗菌机理
屎肠球菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、藤黄球菌和亲水性氧化锌量子点的表面电位如图10所示，亲水性ZnO QDs带正电荷，而细菌带负电荷。将亲水性ZnO QDs作用于蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和屎肠球细杆菌后，通过活性氧检测试剂检测内源性活性氧的含量，结果如图11所示，发现三种细菌中超氧化物的量几乎全部有两倍甚至两倍以上的增长。因此ZnO QDs对各种细菌的抗菌机理可总结如下：一方面，亲水性ZnO QDs表面带有的基团(正电荷)，增加了与细菌的粘附能力，量子点长时间粘附在细菌表面，会对细胞膜造成一定程度的损坏；另一方面可诱导细菌产生过度的氧化应激反应，大量活性物质(包括内源性ROS和外源性ROS)产生造成细菌死亡。
实施例2
一种含干细胞活性因子的护肤喷雾的制备方法，按以下步骤制备：
(1)提供喷雾瓶、喷管及盖，并按配方称取各组分：干细胞条件培养基10％(体积/体积)，亲水性纳米氧化锌0.8％(质量/体积)，透明质酸钠0.02％(质量/体积)，甘油0.3％(体积/体积)，芦荟提取物0.5％(质量/体积)，丙二醇0.5％(质量/体积)，余量为纯化水；并进行细菌、真菌和内毒素检测；
(2)将容量瓶清洗干净，接纯水，121℃，高压蒸汽灭菌30min；将喷雾瓶、喷管及盖用75％酒精浸泡10min，清洗沥干备用；
(3)设定配料缸温度为80-90℃，开启搅拌40r/min，在搅拌状态下依次加入检测合格(细菌/真菌不得检出，内毒素低于0.5U/ml)的透明质酸钠、甘油、芦荟提取物、丙二醇和纯化水，搅拌均匀，备用；
(4)配料缸开启降温，当温度到达45℃时候，加入检测合格(细菌/真菌不得检出，内毒素低于0.5U/ml)的干细胞条件培养基和亲水性纳米氧化锌，搅拌均匀；
(5)降温到35℃，继续搅拌15分钟后，出料，测定各项指标(细菌/真菌不得检出、内毒素低于0.5U/ml)，各项指标合格后按照100mL/瓶分装，分装后清点入库，常温保存。
实施例3
一种含干细胞活性因子的护肤喷雾的制备方法，按以下步骤制备：
(1)提供喷雾瓶、喷管及盖，并按配方称取各组分：干细胞条件培养基5％(体积/体积)，亲水性纳米氧化锌0.4％(质量/体积)，透明质酸钠0.1％(质量/体积)，甘油0.5％(体积/体积)，芦荟提取物1％(质量/体积)，丙二醇0.2％(质量/体积)，余量为纯化水；并进行细菌、真菌和内毒素检测；
(2)将容量瓶清洗干净，接纯水，121℃，高压蒸汽灭菌30min；将喷雾瓶、喷管及盖用75％酒精浸泡10min，清洗沥干备用；
(3)设定配料缸温度为80-90℃，开启搅拌60r/min，在搅拌状态下依次加入检测合格(细菌/真菌不得检出，内毒素低于0.5U/ml)的透明质酸钠、甘油、芦荟提取物、丙二醇和纯化水，搅拌均匀，备用；
(4)配料缸开启降温，当温度到达50℃时候，加入检测合格(细菌/真菌不得检出，内毒素低于0.5U/ml)的干细胞条件培养基和亲水性纳米氧化锌，搅拌均匀；
(5)降温到30℃，继续搅拌20分钟后，出料，测定各项指标(细菌/真菌不得检出、内毒素低于0.5U/ml)，各项指标合格后按照100mL/瓶分装，分装后清点入库，常温保存。

Claims (8)

1.一种含干细胞活性因子的护肤喷雾，由以下原料及配比制得：干细胞条件培养基5-10％，甘油0.3-0.5％，以体积体积百分比计；亲水性纳米氧化锌0.4-0.8％，透明质酸钠0.02％-0.1％，芦荟提取物0.5-1％，丙二醇0.2-0.5％，以质量体积百分比计；余量为纯化水。
2.如权利要求1所述的护肤喷雾，其特征在于：所述透明质酸钠分子量20-40万。
3.如权利要求1或2所述的护肤喷雾，其特征在于：所述干细胞条件培养基的干细胞为脐带间充质干细胞。
4.如权利要求1所述的护肤喷雾，其特征在于：所述亲水性纳米氧化锌量子点，在3425cm-1、2936cm-1、1574cm-1、1405cm-1、1018cm-1、525cm-1处显示出红外光谱吸收峰。
5.如权利要求4所述的护肤喷雾，其特征在于：所述亲水性氧化锌量子点采用如下步骤制备：将乙酸锌,二水用无水乙醇溶解，然后置于冰浴中，滴加溶解有氢氧化钾的乙醇溶液，并不断搅拌以充分反应20～30min，然后将反应液从冰浴中取出置于室温环境，滴加3-氨丙基三乙氧基硅烷水溶液，并不断搅拌3～5h，然后在5800～6200rmp离心乳白色浑浊溶液8～12min，弃去上层清液，加入无水乙醇分散并清洗沉淀物，再按照上述离心步骤操作两次，沉淀物置于鼓风干燥箱中于50～70℃下干燥1.5～2.5h，即得本发明亲水性氧化锌量子点。
6.如权利要求5所述的护肤喷雾，其特征在于：所述将乙酸锌,二水用无水乙醇溶解为将乙酸锌,二水加入盛有无水乙醇的单口烧瓶中，80℃下搅拌回流直至乙酸锌完全溶解。
7.如权利要求4-6任一项所述的护肤喷雾，其特征在于：所述亲水性氧化锌量子点采用如下步骤制备：取35mM氢氧化钾至于50mL烧杯中，加入20mL无水乙醇搅拌15min直至氢氧化钾完全溶解，放置于4℃下的冰箱中冷藏；将25mM乙酸锌,二水加入盛有150mL无水乙醇的单口烧瓶中，80℃下搅拌回流直至乙酸锌完全溶解，随后将混合液置于冰浴中；将溶解有氢氧化钾的乙醇溶液滴加到盛有乙酸锌乙醇溶液的单口烧瓶，并不断搅拌以充分反应30min；将反应混合液取出冰浴待其温度回温至室温时，滴加1.5mL去离子水和500uL 3-氨丙基三乙氧基硅烷混合溶液，并不断搅拌5h；在6000rmp下离心乳白色浑浊溶液10min，移去上层清液，加入35mL无水乙醇分散并清洗沉淀物，再反复上述离心操作两次，然后将沉淀物置于鼓风干燥箱中60℃下干燥2h，即得本发明亲水性氧化锌量子点。
8.如权利要求1-7任一项所述含干细胞活性因子护肤喷雾的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)设定配料缸温度为80-90℃，开启搅拌40-60r/min，在搅拌状态下依次加入透明质酸钠、甘油、芦荟提取物、丙二醇和纯化水，搅拌均匀；
(2)配料缸开启降温，当温度到达45-50℃时候，加入干细胞条件培养基和亲水性纳米氧化锌，搅拌均匀；
(3)降温到30-35℃，继续搅拌15-20分钟后，出料，测定各项指标，各项指标合格后即可灌装入瓶。
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