CN112220716A - 一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法。所述制备方法包括以下步骤：A、将活化好的醋酸杆菌菌株接种到富集培养液中，得到种子液；B、将种子液均匀接入含有绿茶浸出液的发酵培养基中静置发酵培养，待上层细菌纤维素膜厚度达到1.5‑1.75mm时停止发酵；D、取出发酵产物，裁剪成形，将所得细菌纤维素膜浸泡在弱碱溶液中调节PH至中性，然后用水洗净；E、将纤维素膜121℃灭菌，烘干后得到均匀负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜。本发明采用独特的静态复合发酵制备方法，所得细菌纤维素面膜结构致密、稳定性强，能够充分将细菌纤维素的良好的生物相容性、高持水性与绿茶浸出液的抑菌、抗氧化能力结合起来，适用于工业化生产，可降解。

Description

一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法
技术领域
本发明属于化妆品领域,涉及一种膜材料，具体说是一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法。
技术背景
细菌纤维素是一种直链多糖,其纤维直径仅为10-100nm,不足发丝的十分之一，是一种新型的纳米生物材料。与植物和动物所产的纤维素相比，细菌纤维素中不掺杂其他如木质素、半纤维素等多糖,因此拥有结晶度高、抗张力强、持水量大等特点。目前细菌纤维素已广泛应用于医药、食品、护肤品等多领域，并由于其是一种可生物降解的纳米纤维，对环境非常友好。此外，细菌纤维素作为面膜基础材料使用时，由于其能够自身成形并且内部微孔多可容纳量大，在保持皮肤湿润的同时更可以保证有效物质的供应量。
绿茶作为中国的主要茶类历史悠久，内含的丰富的茶多酚、类黄酮等生物活性物质，具有抗氧化、清除人体自由基、抑菌去火、抗癌、美容美白等功效。将绿茶中活性物质浸出引用到细菌纤维素面膜的制备中，可以制备出滋味清爽、茶香淡雅的细菌纤维素面膜，同时赋予了面膜抑菌、抗氧化等功效。
发明内容
本发明的目的是提供一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的生产方法，用该方法制备的产品，功能性强、质量稳定、可大规模工业化生产。
本发明通过以下技术方案实现。
一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法,包括如下步骤:
(1)菌种富集：首先将冻存的细菌纤维素产生菌活化，从-80℃冰箱中取出冻存管，37℃水浴加热快速融化，在无菌条件下将好的接种到液体培养基中，培养温度26-32℃，160-200rpm摇床培养36-48h，进行活化处理；基础培养基按重量百分比计由5-7％的酵母粉,10-15％的胰蛋白胨,0.1-0.5％的Na2HPO4,0.1-0.4％柠檬酸,0.75％的琼脂和余量的去离子水组成。
其次进行菌种的传代，经过活化的菌液取5％-10％到第二代液体培养基中，培养温度26-32℃，160-200rpm摇床培养24-36h，液体培养基除基础培养基外添加3-5％蔗糖、1-1.5％海藻悬浮液或羧甲基纤维素；
最后进行菌液富集，取二代菌液3-5％到富集培养液中，该培养液除基础培养基外包含1-3％蔗糖、0.1-0.4％醋酸钠、1％海藻悬浮液，调节培养基在4.0-4.5之间，并且所有培养基经过121℃，15-20min灭菌处理。经过培养温度26-32℃，160-200rpm摇床培养36-72h，得到种子液；
(2)浸提将特级绿茶茶叶(普洱茶)超微粉碎，经过140-160目过筛处理，按重量份1：6-10的比例加入蒸馏水加热并混合均匀，以10℃/min速度加热至90℃，在90℃下进行浸提50-60min，然后挤压过滤，滤渣用4～8倍重量的蒸馏水混合再次90℃下浸提50-60min，合并两次滤液，得到绿茶浸出液；
(3)制备培养基称取细菌纤维素发酵培养基组分28-30g后加入绿茶浸出液1L,混合均匀后118-121℃，15-20min灭菌；
(4)将5-8％种子液接入含有绿茶浸出液的发酵培养基中,摇匀后倒入模具中,26-32℃，静置培养3-7d，在厚度达到1.5-1.75mm后停止发酵，取出发酵产物；
(5)取出发酵产物，裁剪成形，将所得细菌纤维素膜浸泡在弱碱性NaOH溶液中70～90℃的温度下加热1～4h调节PH至6.8-7.0，然后用0.4-0.5％碳酸钠溶液清洗掉醋酸味，再用双蒸水洗净(冲洗2-3次，每次2min)；
(6)将制备的绿茶纤维素膜121℃，15-20min灭菌，得到均匀负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜。
与现有技术相比,本发明具有以下优点:
本发明采用静态发酵的方法,绿茶提取物均匀分布在细菌纤维素的生长环境中，在纤维素生成过程中填充间隙,结合牢固不易流失,具有良好的稳定性。所用原材料和最终产物均为生物可降解材料，具有安全环保的特点,并且有效地将细菌纤维素的良好的容纳性能,极高的生物相容性等优点和绿茶提取物的消除人体自由基、抑菌消炎、抗氧化等特点充分结合起来,制备出的产品是具有抗氧化、抗辐射、清热消炎等多位一体功能的营养面膜。
具体实施方式:
以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍。
实施例1一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法,包括如下步骤:
(1)菌种富集：首先将冻存的细菌纤维素产生菌活化，从-80℃冰箱中取出冻存管，37℃水浴加热快速融化，在无菌条件下将好的接种到液体培养基中，培养温度28℃，200rpm摇床培养48h，进行活化处理；基础培养基按重量百分比计由5-7％的酵母粉,10-15％的胰蛋白胨,0.1-0.5％的Na2HPO4,0.1-0.4％柠檬酸,0.75％的琼脂和余量的去离子水组成。
其次进行菌种的传代，经过活化的菌液取5％到第二代液体培养基中，培养温度28℃，200rpm摇床培养36h，液体培养基除基础培养基外添加3％蔗糖、1％海藻悬浮液；
最后进行菌液富集，取二代菌液5％到富集培养液中，该培养液除基础培养基外包含3％蔗糖、0.1％醋酸钠、1％海藻悬浮液，调节培养基在4.5，并且所有培养基经过121℃，15min灭菌处理。经过培养温度28℃，200rpm摇床培养72h，得到种子液；
(2)浸提将特级绿茶茶叶(普洱茶)超微粉碎，经过160目过筛处理，按重量份1：10的比例加入蒸馏水加热并混合均匀，以10℃/min速度加热至90℃，在90℃下进行浸提60min，然后挤压过滤，滤渣用8倍重量的蒸馏水混合再次90℃下浸提60min，合并两次滤液，得到绿茶浸出液；
(3)制备培养基称取细菌纤维素发酵培养基组分30g后加入绿茶浸出液1L,混合均匀后121℃，15min灭菌；
(4)将5％种子液接入含有绿茶浸出液的发酵培养基中,摇匀后倒入模具中,28℃，静置培养7d，在厚度达到1.75mm后停止发酵，取出发酵产物；
(5)取出发酵产物，裁剪成形，将所得细菌纤维素膜浸泡在弱碱性NaOH溶液中70～90℃的温度下加热1～4h调节PH至7.0，然后用0.5％碳酸钠溶液清洗掉醋酸味，再用双蒸水洗净(冲洗3次，每次2min)；
(6)将制备的绿茶纤维素膜121℃，15min灭菌，得到均匀负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜。
实施例2一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法,包括如下步骤:
(1)菌种富集：首先将冻存的细菌纤维素产生菌活化，从-80℃冰箱中取出冻存管，37℃水浴加热快速融化，在无菌条件下将好的接种到液体培养基中，培养温度28℃，200rpm摇床培养48h，进行活化处理；基础培养基按重量百分比计由5-7％的酵母粉,10-15％的胰蛋白胨,0.1-0.5％的Na2HPO4,0.1-0.4％柠檬酸,0.75％的琼脂和余量的去离子水组成。
其次进行菌种的传代，经过活化的菌液取5％到第二代液体培养基中，培养温度28℃，200rpm摇床培养36h，液体培养基除基础培养基外添加3％蔗糖、2％或羧甲基纤维素；
最后进行菌液富集，取二代菌液5％到富集培养液中，该培养液除基础培养基外包含3％蔗糖、0.1％醋酸钠、2％海藻悬浮液，调节培养基在4.4，并且所有培养基经过121℃，15min灭菌处理。经过培养温度28℃，200rpm摇床培养72h，得到种子液；
(2)浸提将特级绿茶茶叶(普洱茶)超微粉碎，经过160目过筛处理，按重量份1：8的比例加入蒸馏水加热并混合均匀，以10℃/min速度加热至90℃，在90℃下进行浸提60min，然后挤压过滤，滤渣用8倍重量的蒸馏水混合再次90℃下浸提50min，合并两次滤液，得到绿茶浸出液；
(3)制备培养基称取细菌纤维素发酵培养基组分28g后加入绿茶浸出液1L,混合均匀后121℃，15min灭菌；
(4)将5％种子液接入含有绿茶浸出液的发酵培养基中,摇匀后倒入模具中,28℃，静置培养7d，在厚度达到1.5mm后停止发酵，取出发酵产物；
(5)取出发酵产物，裁剪成形，将所得细菌纤维素膜浸泡在弱碱性NaOH溶液中70～90℃的温度下加热1～4h调节PH至7.0，然后用0.5％碳酸钠溶液清洗掉醋酸味，再用双蒸水洗净(冲洗3次，每次2min)；
(6)将制备的绿茶纤维素膜121℃，15min灭菌，得到均匀负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜。
实施例3一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法,包括如下步骤:
(1)菌种富集：首先将冻存的细菌纤维素产生菌活化，从-80℃冰箱中取出冻存管，37℃水浴加热快速融化，在无菌条件下将好的接种到液体培养基中，培养温度32℃，200rpm摇床培养36h，进行活化处理；
其次进行菌种的传代，经过活化的菌液取5％到第二代液体培养基中，培养温度32℃，200rpm摇床培养36h，液体培养基除基础培养基外添加3％蔗糖、2％海藻悬浮液；
最后进行菌液富集，取二代菌液4％到富集培养液中，该培养液除基础培养基外包含3％蔗糖、0.1％醋酸钠、2％海藻悬浮液，调节培养基在4.5，并且所有培养基经过121℃，15min灭菌处理。经过培养温度32℃，200rpm摇床培养54h，得到种子液；
(2)浸提将特级绿茶茶叶(普洱茶)超微粉碎，经过180目过筛处理，按重量份1：9的比例加入蒸馏水加热并混合均匀，以10℃/min速度加热至90℃，在90℃下进行浸提60min，然后挤压过滤，滤渣用8倍重量的蒸馏水混合再次90℃下浸提60min，合并两次滤液，得到绿茶浸出液；
(3)制备培养基称取细菌纤维素发酵培养基组分30g后加入绿茶浸出液1L,混合均匀后121℃，15min灭菌；
(4)将5％种子液接入含有绿茶浸出液的发酵培养基中,摇匀后倒入模具中,32℃，静置培养7d，在厚度达到1.7mm后停止发酵，取出发酵产物；
(5)取出发酵产物，裁剪成形，将所得细菌纤维素膜浸泡在弱碱性NaOH溶液中70～90℃的温度下加热1～4h调节PH至7.0，然后用0.5％碳酸钠溶液清洗掉醋酸味，再用双蒸水洗净(冲洗3次，每次2min)；
(6)将制备的绿茶纤维素膜121℃，15min灭菌，得到均匀负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜。

Claims (8)

1.一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)菌种富集：首先将冻存的细菌纤维素产生菌活化，从-80℃冰箱中取出冻存管，37℃水浴加热快速融化，在无菌条件下将好的接种到液体培养基中，摇床培养36-48h，进行活化处理；基础培养基按重量百分比计由5-7％的酵母粉,10-15％的胰蛋白胨,0.1-0.5％的Na2HPO4,0.1-0.4％柠檬酸,0.75％的琼脂和余量的去离子水组成。
其次进行菌种的传代，经过活化的菌液取5％-10％到第二代液体培养基中，摇床培养24-36h，液体培养基除基础培养基外添加3-5％蔗糖、1-1.5％海藻悬浮液或羧甲基纤维素；
最后进行菌液富集，取二代菌液3-5％到富集培养液中，该培养液除基础培养基外包含1-3％蔗糖、0.1-0.4％醋酸钠、1％海藻悬浮液，调节培养基在4.0-4.5之间，并且所有培养基经过121℃，15-20min灭菌处理。经过摇床培养36-72h，得到种子液；
(2)浸提将特级绿茶茶叶(普洱茶)超微粉碎，经过140-160目过筛处理，按重量份1：6-10的比例加入蒸馏水加热并混合均匀，以10℃/min速度加热至90℃，在90℃下进行浸提50-60min，然后挤压过滤，滤渣用4～8倍重量的蒸馏水混合再次90℃下浸提50-60min，合并两次滤液，得到绿茶浸出液；
(3)制备培养基称取细菌纤维素发酵培养基组分28-30g后加入绿茶浸出液1L,混合均匀后118-121℃，15-20min灭菌；
(4)将5-8％种子液接入含有绿茶浸出液的发酵培养基中,摇匀后倒入模具中，静置培养3-7d，在厚度达到1.5-1.75mm后停止发酵，取出发酵产物；
(5)取出发酵产物，裁剪成形，将所得细菌纤维素膜浸泡在弱碱性NaOH溶液中调节PH至6.8-7.0，然后用0.4-0.5％碳酸钠溶液清洗掉醋酸味，再用双蒸水洗净(冲洗2-3次，每次2min)；
(6)将制备的绿茶纤维素膜121℃，15-20min灭菌，得到均匀负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜。
2.如权利要求1所述的一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法，其特征在于：步骤1和步骤4中,所述的培养温度为26～32℃，160-200rpm摇床培养,种子液接入量为5％～8％。
3.如权利要求1所述的一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法，其特征在于：步骤1中,所述的细菌纤维素产生菌选择醋酸菌属如葡糖醋杆菌、热带醋酸菌、无色杆菌属、产碱菌属、气杆菌属和固氮菌属中的一种或几种。
4.如权利要求1所述的一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法，其特征在于：步骤1中培养基的蔗糖的添加量在3％-5％，1％-1.5％海藻悬浮液或羧甲基纤维素。
5.如权利要求1所述的一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法，其特征在于：步骤2中,所述的普洱茶与发酵培养基的水的质量比为1:9～24。
6.如权利要求1所述的一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法，其特征在于：步骤2中,所述浸提液提取之前的温度控制由以10℃/min速度加热至90℃。
7.如权利要求1所述的一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法，其特征在于：步骤4中,静态培养时间可以是3～7天,根据所需复合材料厚度不同从而决定反应时间。
8.如权利要求1所述的一种负载绿茶活性物质的细菌纤维素面膜的制备方法，其特征在于：步骤4中,纯化方法为将发酵产物在质量百分含量为2％的NaOH水溶液中,70～90℃的温度下加热1～4h,反复水洗至中性。
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