CN112219756B - 一种基于脊柱骨数目的大黄鱼新品系的选育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于脊柱骨数目的大黄鱼新品系的选育方法，特点是以水产新品种大黄鱼“东海1号”为基础群体，通过麻醉后X光拍照的方法确定脊椎骨数，无伤害的筛选出27或28枚脊椎骨的个体作为亲鱼繁育下一代，以相同方法连续筛选和繁育2‑3代，获得27椎或28椎大黄鱼新品系，优点是新品系大黄鱼体形更为细长、尾长/体长比值更大。
Description
技术领域
本发明涉及一种大黄鱼新品系的选育方法，尤其是涉及一种基于脊柱骨数目的大黄鱼新品系的选育方法。
背景技术
大黄鱼（Larimichthys crocea）属鲈形目（Perciformes）、石首鱼科（Sciaenida）、黄鱼属（Larimichthys），因体色金黄、肉质鲜美，历来为我国人民所喜爱，有海水“国鱼”之称。自上世纪70年代大黄鱼野生资源严重衰退后至今未能恢复，在80年代中后期科技人员突破了大黄鱼人工育苗和养殖等技术后，大黄鱼养殖规模不断扩大，目前已成为我国年育苗量和养殖产量最大的海水鱼类。随着国民经济的发展和人民生活水平的提高，消费者对高品质大黄鱼的需求日益增加，其中体形是影响大黄鱼市场销售价格的重要因素之一。因此，选育体形好的大黄鱼新品种具有巨大的市场价值。
已有的大黄鱼培育方法中，挑选亲鱼的依据主要有称重、形态测量以及结合分子标记。李明云等的发明专利“一种人工培育的大黄鱼的培育方法”（专利号ZL200510060346.1）对鱼体测量后计算尾柄长/尾柄高、体长/体高，并提取血液DNA模板进行RAPD分析，挑选出尾柄长/尾柄高为3.6、体长/体高为3.9且具有871bp的RAPD特异性标记的大黄鱼亲本。韩坤煌等的发明专利“一种培育大黄鱼苗种的方法及其所使用的筛选分子标记”（专利号ZL201610686101.8），首先根据称量的鱼体体重筛选出大黄鱼生长轴相关基因连锁SSR分子标记组合，然后用引物对候选亲鱼进行PCR扩增，根据电泳条带筛选出携带有目的基因型或基因型组合的大黄鱼亲鱼用以培育子代。由于鱼的体重、体形易受养殖环境及喂养条件等因素的影响，因此仅根据测量数据筛选出的体形好亲鱼其特征无法稳定遗传给子代，而目前尚未发现与大黄鱼体形性状紧密相关的分子标记。
骨骼作为支撑鱼躯体的基本结构，与鱼体的生长发育、体形均密切相关。1957年，邱书院研究了购自福建厦门鱼市场的大黄鱼骨骼，共有26枚脊椎骨（邱书院. 大黄鱼骨骼的研究[J]. 厦门大学学报(自然科学版).1957,(2):99-109.）。1962年田明诚等统计了野生海捕的7个不同地理群体大黄鱼的脊椎骨数量，发现各群体都是以脊椎骨数为26枚的个体为主（占99%以上），其中北部的吕泗洋、岱衢洋和猫头洋三个群体中均有少量脊椎骨数为25枚和27枚的个体（岱衢洋群体中27枚脊椎骨个体比例最高，为0.8%），而南部的官井洋、南澳、汕尾、硇洲四个群体中仅有少量脊椎骨数为25枚的个体、未见有27枚的个体，表明不同地理群体的大黄鱼骨骼系统存在差异（田明诚,徐恭昭,余日秀. 大黄鱼Pseudosciaena crocea (Richardson)形态特征的地理变异与地理种群问题[J]. 海洋科学集刊,1962(2):79～97.）。
“东海1号”大黄鱼是由宁波大学和象山港湾水产苗种有限公司共同选育的国家水产新品种（证书编号：(2014)新品种证字第1号；品种登记号：GS-01-001-2013），其原始亲本为2000年捕捞自浙江岱衢洋的野生大黄鱼，经连续5代群体选育而成。“东海1号”大黄鱼不仅生长速度快、耐低温能力强，而且体形较好，脊椎骨数为26-28枚（苗亮,李明云,陈炯,等.快长、耐低温大黄鱼新品种东海1号的选育[J].农业生物技术学报,2014,22(10):1314-1320.）。2018年11月，我们从海水养殖网箱中随机捞取了100尾1龄的“东海1号”大黄鱼，检测显示脊椎骨数为26枚、27枚和28枚的鱼分别有27尾、71尾和2尾，且脊椎骨数目越多鱼的体形越好。
在脊椎动物的胚发育过程中个，由前体节中胚层分化形成体节，体节的形成是一个细胞增殖与分化周期性进行的过程，受“分节钟”的调控，每一体节形成的时间与位置都受到严格的调控。在体节形成后，每一体节又分化为3个区域，即生皮节、生肌节和生骨节，三者分别发育成为真皮、骨骼肌和中轴骨骼。体节以出芽的形式从前到后依次形成，目前已经明确分节过程受多个基因、多种信号通路的调控，如Wnt、hariy、Lfng、Hox、Notch、FGF等。虽然目前尚不清楚大黄鱼体节分化和脊椎骨形成的调控机制，但我们对“东海1号”大黄鱼新品种的选育证明27枚或者28枚脊椎骨这一性状是可遗传的。在“东海1号”大黄鱼的继代选育过程中，我们通过观察和测量选取体形好的个体作为亲鱼繁育子代，这种方法无法将不同脊椎骨数的鱼完全区分开，因此选出的亲鱼中难免混有部分26枚脊椎骨的个体，导致繁育的苗种中高于26椎个体比例在达到70%左右后无法继续提高。
为选育特定脊椎骨数目的大黄鱼新品系，首先需要在无伤害状态下确定亲鱼的脊椎骨数。王秋荣等用软骨-硬骨二重染色法对大黄鱼仔稚鱼的骨骼系统进行了观察（王秋荣,倪月莹,林利民,等. 大黄鱼仔稚鱼脊柱、胸鳍及尾鳍骨骼系统的发育观察[J]. 水生生物学报,2010,34(3):467-472），但该方法需先将鱼用福尔马林固定然后用酶液消化，因此不适用于活鱼骨骼观察。王映等用micro CT技术对大黄鱼全鱼骨骼系统进行了扫描和三维重建（王映, 赵金良, 柯巧珍,等. 大黄鱼养殖群体和野生群体骨骼micro CT扫描显微结构比较[J].海洋科学,2016,40(12):36-40.），该方法虽然可以用于活鱼骨骼观察，但CT仪价格昂贵、配套设备要求高且体积大、搬运困难，不适用于水产育苗现场操作。目前，国内外还没有公开一种可以精确确定活体大黄鱼亲鱼脊椎骨数目并选育特定脊椎骨数目大黄鱼的方法，以获得优良性状的大黄鱼新品系的相关研究报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种精确的基于脊柱骨数目的大黄鱼新品系的选育方法，选育出的新品系具有体形好、生长快的特点，适用于大黄鱼亲鱼挑选和苗种培育。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种基于脊柱骨数目的大黄鱼新品系的选育方法，包括以下步骤：
1）以群体中有较高比例27或28枚脊椎骨个体的大黄鱼苗种作为基础群体，按照常规大黄鱼养殖方法进行养殖；
2）养殖1年后直至鱼体重达到200-250g规格时进行第一次筛选，通过肉眼观察，选出生长快、体形细长的大规格鱼种，放入单独网箱进行培育；
3）将步骤2）中选出的大规格鱼种养成至体重>500g的成鱼并达到性成熟后，进行第二次筛选，通过肉眼观察和挤压腹部检测性腺的方法选出体形好且性腺发育良好的鱼，雌、雄个数比例控制在1.5～2:1；
4）在育苗至少1个月前进行第三次筛选，选出腹部膨大明显的雌鱼和轻压腹部有乳白色精液流出的雄鱼，运至育苗基地室内水泥池中；
5）将鱼麻醉后用X光机进行骨骼拍照并立即对脊椎骨数目进行计数，对脊椎骨数目为27或28枚的个体进行荧光染料标记或PIT标记；
6）在室内水泥池中对选出的脊椎骨数符合要求的亲鱼进行强化培育，注射催产后按照雌、雄个数1.5～2:1的比例放入产卵池中；
7）按照常规大黄鱼育苗方法繁育子代；
8）重复步骤2）-7），经过连续2-3代的选育，即可获得27或28椎大黄鱼新品系。
步骤（1）中所述的大黄鱼苗种为“东海1号”大黄鱼苗种。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
1、本发明首次提出了培育以具有27或28枚脊椎骨为标志性特征的大黄鱼新品种；
2、本发明以脊柱骨数目为目标性状进行大黄鱼选育，并通过麻醉后X光拍照的方法无伤害的挑选出符合目标性状的亲鱼，在选育方法上有所创新，在国内鱼类遗传育种中处于领先地位；
3、本发明的目的是培育出体形好的大黄鱼新品系，该新品系具有27或28枚脊椎骨的代表性可数性状特征，克服了以往靠可量性状评价大黄鱼体形中易受养殖环境及测量误差影响的缺点。
附图说明
图1为大黄鱼骨骼X光照片，其中上：27椎；中：27椎；下：26：椎；
图2为对27椎大黄鱼亲鱼进行荧光染料标记。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
具体实施例一
一种大黄鱼27椎新品系的选育方法，包括以下步骤：
（1）2018年5月，在浙江省宁波市象山县外高泥村海区网箱中放养当年繁育的“东海1号”大黄鱼苗种（全长约5cm）共100万尾，按照常规方法（NY/T 5061-2002 无公害食品大黄鱼养殖技术规范）进行海水网箱养殖；
（2）2018年10月，从养殖网箱中随机取大黄鱼50尾，解剖后检测脊椎骨数目，26椎个体共24尾（48%）、27椎个体共26尾（52%）；
（3）2019年6月进行第一次筛选，从养殖的大黄鱼中挑选出5万尾生长快、体形好的个体；
（4）选出的鱼放入单独的网箱中养殖，随机取20尾测量体重，平均体重274g；
（5）2019年11月进行第二次筛选，从第一次筛选出的鱼中选出1000尾生长快、体形好且性腺发育良好的鱼，放入单独网箱中培育，平均体重943g，雌雄比例2:1；
（6）2019年12月，将亲鱼运至育苗基地室内水泥池中，用质量浓度为5%的MS-222进行麻醉，然后用YSX040-A型高频X光机（广州越神医疗器械有限公司）拍照，立即对脊椎骨数进行计数（图1）；
（7）对脊椎骨数为27枚的个体用红色荧光染料进行标记（图2），然后放入单独的水泥池中，脊椎骨数为26枚的鱼放入其他水泥池中；
（8）所检测的鱼中共有27椎个体600尾（65.43%）、26椎个体317尾（34.57%）；
（9）2020年2月，从经过强化培养的27枚脊椎骨大黄鱼中选出性腺已充分发育的雌鱼100尾、雄鱼50尾作为繁育用亲鱼，雌鱼腹部膨大、用手触摸有柔软与弹性感，雄鱼轻压腹部有乳白色浓稠精液流出，对繁育用亲鱼注射宁波三生药业有限公司生产的促黄体素释放激素A3（LRH-A3）进行催产后放入产卵池中，产卵后按照常规大黄鱼育苗方法（SC/T 2089-2018 大黄鱼繁育技术规范）收集受精卵并进行孵化和苗种培育；
（10）2020年4月，将鱼苗（全长3cm）运至海区渔排网箱内继续培育，数量约100万尾；
（11）2020年6月，网箱中养殖的苗种平均全长约10cm，从网箱中随机取样150尾，解剖检测脊椎骨数，其中27椎的130尾（86.67%）、26椎的20尾（13.33%）。
（12）继续按照步骤（1）-（9）原则进行选育，连续选育2-3代后使群体中27椎大黄鱼比例稳定在90%以上，即获得大黄鱼27椎新品系。
具体实施例二
一种大黄鱼28椎新品系的选育方法，包括以下步骤：
（1）在浙江省海水网箱中养殖当年繁育的“东海1号”大黄鱼苗种（全长约5cm）100万尾，养殖方法按常规操作（NY/T 5061-2002 无公害食品 大黄鱼养殖技术规范）进行；
（2）越冬后（次年4-5月）进行第一次筛选，选出5万尾生长快、体形好的个体，放入单独的网箱中继续养殖；
（3）在鱼体规格达到500g以上时（次年9-10月）进行第二次筛选，选出10000尾生长快、体形好的鱼，雌雄比例控制在1.5-2:1；
（4）繁育前1个月（次年12月-第三年1月）进行第三次筛选，选出6000尾性腺发育良好的鱼，运至育苗基地室内水泥池中；
（5）将鱼用40mg/L的丁香酚进行麻醉，然后用HB-T200型便携式X光机（东莞市黑豹电子科技有限公司）对鱼进行骨骼拍照，立即对脊椎骨数进行计数；
（6）向脊椎骨数为28枚的鱼的背部肌肉中植入PIT电子标签（广州俊晖智能科技有限公司）并记录标签编号，然后放入单独的水泥池中；
（7）从经过强化培养的28枚脊椎骨大黄鱼亲鱼中选出性腺已充分发育的雌、雄鱼，要求雌鱼腹部膨大、用手触摸有柔软与弹性感，雄鱼轻压腹部有乳白色浓稠精液流出，对用亲鱼注射LRH-A3（宁波三生药业有限公司）催产后放入产卵池中，产卵后按照常规大黄鱼育苗方法（SC/T 2089-2018 大黄鱼繁育技术规范）收集受精卵并进行孵化和苗种培育；
（8）鱼苗规格达到全长3cm以上后运至海区网箱中继续培育；
（9）继续按照步骤1-8原则进行选育，连续选育2-3代后使群体中28椎大黄鱼比例稳定在90%以上，即获得大黄鱼28椎新品系。
上述说明并非对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例。本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内，做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。
Claims (2)
1.一种基于脊柱骨数目的大黄鱼新品系的选育方法，其特征在于包括以下步骤：
1）以群体中有较高比例27或28枚脊椎骨个体的大黄鱼苗种作为基础群体，按照常规大黄鱼养殖方法进行养殖；
2）养殖1年后直至鱼体重达到200-250g规格时进行第一次筛选，通过肉眼观察，选出生长快、体形细长的大规格鱼种，放入单独网箱进行培育；
3）将步骤2）中选出的大规格鱼种养成至体重>500g的成鱼并达到性成熟后，进行第二次筛选，通过肉眼观察和挤压腹部检测性腺的方法选出体形好且性腺发育良好的鱼，雌、雄个数比例控制在1.5～2:1；
4）在繁育前1个月进行第三次筛选，选出腹部膨大明显的雌鱼和轻压腹部有乳白色精液流出的雄鱼，运至育苗基地室内水泥池中；
5）将鱼麻醉后用X光机进行骨骼拍照并立即对脊椎骨数目进行计数，对脊椎骨数目为27或28枚的个体进行荧光染料标记或PIT标记，采用的麻醉剂为质量浓度为5%的MS-222或者40mg/L的丁香酚；
6）在室内水泥池中对选出的脊椎骨数符合要求的亲鱼进行强化培育，注射催产后按照雌、雄个数1.5～2:1的比例放入产卵池中；
7）按照常规大黄鱼育苗方法繁育子代；
8）重复步骤2）-7），经过连续2-3代的选育，即可获得27或28椎大黄鱼新品系。
2.根据权利要求1所述的一种基于脊柱骨数目的大黄鱼新品系的选育方法，其特征在于：步骤（1）中所述的大黄鱼苗种为东海1号大黄鱼苗种。
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| 快长、耐低温大黄鱼新品种东海1号的选育;苗亮 等;《农业生物技术学报》;20141031;第22卷(第10期);第1314-1320页 * |
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