CN112210441A - 一种到手香纯露的制备方法及其体外抗氧化活性评价方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于天然药物技术领域，具体涉及一种到手香纯露的制备方法及其体外抗氧化活性评价方法，制备方法包括以下操作：取新鲜的到手香，粉碎成片段，清洗后沥去水分；将沥干水分的到手香放置于蒸馏器中，加入蒸馏水，加热，将所述蒸馏器的功率从低功率逐渐转为大功率，收集馏出液，得到到手香纯露。通过本发明方法制备的到手香纯露，操作简便，填补了国内对于到手香纯露的制备方法为空白的缺陷。到手香纯露具有一定的抗氧化活性，而抗氧化剂作为一种外源性抗氧化物，能够有效的清除氧自由基，使皮肤达到抗老化、美白、防晒和保湿等作用。本发明采用几种体外抗氧化活性实验方法来对到手香纯露作出抗氧化活性评价，该方法具有操作简单、准确的特点。

Description

一种到手香纯露的制备方法及其体外抗氧化活性评价方法
技术领域
本发明属于天然药物技术领域，具体涉及一种到手香纯露的制备方法及其体外抗氧化活性评价方法。
背景技术
到手香，别名左手香、洋薄荷，为唇形科植物，在国外最为一种香料兼药用植物，到手香全草清凉、消炎、祛风、解毒等功效。目前国内关于到手香的化学结构研究主要在到手香挥发油成分的研究，从到手香挥发油中分离出了香芹酚(57.82％)、百里酚(15.24％)、氧化石竹烯(1.13％)、萜品烯(10.01％),ρ-间伞花烯(5.65％),和α-石竹烯(2.32％)等34种化学成分。在到手香挥发油的急性毒性实验中，表明到手香挥发油对小鼠有一定的急性毒性。
纯露，又称水精油，是指精油在蒸馏萃取过程中，在提炼精油是分离出来的一种100％饱和的蒸馏源叶，是精油的一种附属产品，成份天然纯净，香气怡人。它与植物精油本身有着相似的作用及功效，而且急性毒性低于到手香挥发油。
天然抗氧化剂广泛存在于油料、香辛料和中草药中，药用芳香植物在芳香治疗中的独特的功效同抗氧化剂高效清除体内自由基作用有着密切的关系。在其他研究中，很多植物精油中具有明显的抑菌剂抗氧化作用，而到手香挥发油已被证实对绿脓杆菌中度敏感，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、产气杆菌、沙门杆菌、枯草杆菌、肠炎球菌强度敏感。
目前，国内对到手香纯露的制备及其体外抗氧化的评价并没有研究。
发明内容
本发明的目的之一在于：针对现有技术的不足，提供一种到手香纯露的制备方法，填补了国内对于到手香纯露的制备方法为空白的缺陷。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种到手香纯露的制备方法，包括以下操作：
1)取新鲜的到手香，粉碎成片段，清洗后沥去水分；
2)将沥干水分的到手香放置于蒸馏器中，加入蒸馏水，加热，将所述蒸馏器的功率从低功率逐渐转为大功率，收集馏出液，得到到手香纯露。
进一步的，在步骤2)中，当收集的馏出液为投料到手香重量的0.8～1.5倍时停止收集。
进一步的，在得到到手香纯露后，将所述到手香纯露放置在4℃的环境中保存。
本发明的目的之二在于：提供一种说明书前文一项所述的方法制备的到手香纯露的体外抗氧化活性评价方法，包括以下操作：
1)制备到手香纯露，为实验组；
2)根据相应的体外抗氧化活性实验设置对照组；
3)分别对所述实验组和所述对照组进行体外抗氧化活性实验，通过测定比较实验组和对照组的抗氧化指标来评价到手香纯露的抗氧化活性。
进一步的，所述体外抗氧化活性实验包括DPPH自由基清除活性实验、还原力实验、清除羟基自由基实验和总抗氧化活性实验中的至少一种。当然，本发明可分别采用每种体外化学法或者其结合的方式来对到手香纯露的抗氧化活性评价，每种方法都具有操作简单、准确的特点。
进一步的，所述实验组的DPPH自由基清除活性实验包括以下步骤：
称取DPPH后用溶剂溶解得到DPPH溶液，取不同浓度的到手香纯露溶液和所述DPPH溶液于同一容器中，摇匀，静置，在517nm处测试吸光度值，记为A1；
测试所述溶剂和所述DPPH溶液混合液的吸光度值，记为A0；
测试所述到手香纯露溶液和所述溶剂混合物的吸光度值，记为A2；
DPPH自由基的清除率(％)＝[1-(A1-A2)/A0]*100。
该方法利用DPPH溶液的特征紫色团在517nm处有最大光吸收，通过加入抗氧化剂后吸光度值的变化评价其清除自由基的活性。
进一步的，所述实验组的还原力实验包括以下步骤：
取不同浓度的到手香纯露溶液分别置于容器中，加入磷酸缓冲液和铁氰化钾溶液，混合后水浴加热，再冰水浴，放冷至室温；
加入三氯乙酸溶液后混合均匀；
向混合液中加入超纯水和氯化铁，混合后静置，在700nm处测定吸光度。
该方法利用了抗氧化活性物质能使铁氰化钾的三价铁还原为二价铁，二价铁离子进一步和氯化铁反应生成在700nm处有最大吸收的蓝色沉淀普鲁士蓝。因此通过测定700nm处的吸光度值可间接评价到手香纯露的还原能力。为了消除黄色铁氰化钾对吸光度的影响，待反应完全后，向体系中加入三氯乙酸，使之与剩余的铁氰化钾反应生成沉淀。到手香纯露的吸光度越高，表明其抗氧化性越好，还原能力越强。
进一步的，所述实验组的清除羟基自由基实验包括以下步骤：
向容器中加入FeSO4水溶液、H2O2水溶液和水杨酸-乙醇溶液，混合后水浴加热，在510nm测定吸光度A0；
加入到手香纯露溶液，混合后水浴加热，在510nm测其吸光度Ax；
羟自由基清除率(％)＝(A0-Ax)/A0*100。
该方法利用Fenton反应引发产生羟基自由基，利用H202与Fe2+混合产生·0H，在体系内加入水杨酸捕捉·0H并产生紫色物质，该物质在510nm下有最大吸收。但当体系中加入到手香纯露后，则会与水杨酸共同竞争·0H而使紫色物质的生成量减少，最终导致溶液吸光度值减少，因此可以通过测得反应液的吸光度值来检测体系羟基自由基被清除的情况，即吸光值越小，清除羟基自由基的能力越强。
进一步的，所述实验组的总抗氧化活性实验包括以下步骤：
1)配制FRAP工作液；
2)称取FeSO4·7H2O，用乙醇溶液溶解并定容；取FeSO4溶液稀释至若干设定浓度；
3)在孔板的每个检测孔中加入步骤1)中的FRAP工作液；
在空白对照孔中加入蒸馏水；
在标准曲线检测孔内加入步骤2)中若干浓度的FeSO4标准溶液；
在样品检测孔内加入所述到手香纯露，在593nm处测定其吸光度值。
其中，总抗氧化能力检测法也成FRAP法，是一种采用Ferric Reducing Abilityof Plasma(FRAP)方法，对抗氧化物溶液的总抗氧化性能力进行检测的试剂盒。FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tri-pyridyl-tria-zine(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ，随后在593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。
本发明的有益效果在于：本发明提出了一种到手香纯露的制备方法，通过本方法制备的到手香纯露，操作简便，填补了国内对于到手香纯露的制备方法为空白的缺陷。而且到手香纯露具有一定的抗氧化活性，而抗氧化剂作为一种外源性抗氧化物，能够有效的清除氧自由基，使皮肤达到抗老化、美白、防晒和保湿等作用。到手香纯露带有特殊的香味，可以改善环境气味，到手香纯露可以在膏霜乳剂、空气清新剂、香水等方面具有广泛应用。本发明采用几种体外抗氧化活性实验方法来对到手香纯露作出抗氧化活性评价，该方法具有操作简单、准确的特点。
具体实施方式
为使本发明的技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种到手香纯露的制备方法，包括以下操作：
1)取新鲜的到手香，进行粉碎成一定体积的片段，清洗，沥去水分；
2)将沥干水分的到手香放置于蒸馏器中，加入一定体积的蒸馏水，开启循环水，加热，从低功率逐渐转为大功率，收集馏出液，当收集的馏出液为投料到手香重量的0.8～1.5倍时停止收集，得到到手香纯露，放置在4℃冰箱中保存。
实施例2
一种到手香纯露的体外抗氧化活性评价方法，包括以下操作：
1)根据实施例1的方法制备到手香纯露，设置为实验组；
2)设置DPPH自由基清除活性实验为体外抗氧化活性实验，设置维生素C溶液为对照组；
3)分别对实验组和对照组进行体外抗氧化活性实验，具体实验方法为：
精密称取0.00491gDPPH，用乙醇溶解，定容到100ml容量瓶中，吸取不同浓度的样品溶液2ml置于5ml的离心管中，加入2ml的DPPH溶液，摇匀，静置30min，在517nm处测定其吸光度值，记为A1；
在无水乙醇中加入DPPH溶液混合液的吸光度值，记为A0；
样品溶液和DPPH溶液溶剂(无水乙醇)的混合物的吸光度值，记为A2；
则清除率(％)＝[1-(A1-A2)/A0]*100。
4)通过测定比较实验组和对照组的DPPH自由基清除率来评价到手香纯露的抗氧化活性。
检测结果：到手香纯露的DPPH自由基清除率为40％，维生素C的DPPH自由基清除率为96％，说明到手香纯露的抗氧化性不如维生素C的抗氧化性。
实施例3
一种到手香纯露的体外抗氧化活性评价方法，包括以下操作：
1)根据实施例1的方法制备到手香纯露，设置为实验组；
2)设置还原力实验为体外抗氧化活性实验，设置维生素C溶液为对照组，设置乙醇为空白组，同步操作；
3)分别对实验组、对照组和空白组进行体外抗氧化活性实验，具体实验方法为：
取1ml试样置于10ml离心管中，加0.2mol/LPH6.6的磷酸缓冲液2.0ml和质量分数为1％铁氰化钾溶液2.0ml，涡旋混合后，50℃水浴下加热20min后，冰水浴5min，放冷至室温，加入质量分数10％三氯乙酸溶液2.0ml，涡旋混合，取混合液2.5ml置于5ml离心管中，加入1.0ml超纯水和质量分数0.1％氯化铁0.4ml，涡旋混合，静置10min，在700nm处测定吸光度。试剂空白为参比溶液，同步操作。需要说明的是，检测需要在10min内测完，否则会有沉淀产生。
5)通过测定比较实验组和对照组的还原力来评价到手香纯露的抗氧化活性。吸光度越高，表示抗氧化性越好，还原能力越强。
检测结果：到手香纯露的还原力为0.104abs，维生素C的还原力为0.328abs，说明到手香纯露的抗氧化性和维生素C的抗氧化性相似。
实施例4
一种到手香纯露的体外抗氧化活性评价方法，包括以下操作：
1)根据实施例1的方法制备到手香纯露，设置为实验组；
2)设置清除羟基自由基实验为体外抗氧化活性实验，设置辅酶Q10溶液为对照组；
3)分别对实验组、对照组进行体外抗氧化活性实验，具体实验方法为：
在5ml离心管中依次加入7.5mmol/LFeSO4水溶液1ml，1％H2O2水溶液1ml，摇匀，加入6mmol/L水杨酸-乙醇溶液1ml，摇匀，在37℃水浴加热15min，510nm测定吸光度A0；
加入一定浓度的到待测液1.00ml，摇匀，37℃水浴加热15min，510nm测其吸光度Ax，以超纯水为参比，以辅酶Q10为阳性对比。
则羟自由基清除率为：清除率(％)＝(A0-Ax)/A0*100。
4)通过测定比较实验组和对照组的羟自由基清除率来评价到手香纯露的抗氧化活性。
检测结果：到手香纯露对清除羟基自由基的清除率为30％，辅酶Q10对清除羟基自由基的清除率为45％，说明到手香纯露的抗氧化性和辅酶Q10的抗氧化性相似，到手香纯露也具有一定的抗氧化性。
实施例5
一种到手香纯露的体外抗氧化活性评价方法，包括以下操作：
1)根据实施例1的方法制备到手香纯露，设置为实验组；
2)设置总抗氧化活性实验为体外抗氧化活性实验，设置维生素C为对照组；
3)分别对实验组、对照组进行体外抗氧化活性实验，具体实验方法为：
①配制FRAP工作液
需要检测15个样品，则取TPTZ稀释液2.250ml，取TPTZ溶液0.225ml，两者充分混匀后加入检测缓冲液0.225ml，得到FRAP工作液2.700ml。
②标准曲线测定的准备
称取27.8mg试剂盒中提供的FeSO4·7H2O，用60％的乙醇溶液溶解并定容到1ml，此时的浓度即为100mM，取适量100mM的FeSO4溶液稀释至0.15、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5mM。
③总抗氧化能力的测定
a：96孔板的每个检测孔中加入180微升的FRAP工作液。
b：空白对照孔中加入5微升的蒸馏水；标准曲线检测孔内加入5微升各种浓度的FeSO4标准溶液；样品检测孔内加入5微升各种样品，轻摇混匀后，在593nm处测定其吸光度值。总抗氧化能力用FeSO4标准溶液的浓度(mM)来表示。
检测结果：到手香纯露的总氧化能力为0.233mM，维生素C的总氧化能力为0.294mM，说明到手香纯露的抗氧化性和维生素C的抗氧化性相似，到手香纯露也具有一定的抗氧化性。
综上所述，到手香纯露除了清除DPPH自由基的清除率小于维生素C，其余的抗氧化活性实验结果与维生素C/辅酶Q10相近，到手香纯露具有一定的抗氧化活性。通过本发明的方法评价到手香纯露的体外抗氧化活性，操作简单，准确，将几种评价方法相结合，更加能够综合上评价到手香纯露的体外抗氧化性，从而可以将到手香纯露的抗氧化性应用在护肤品技术领域。
根据上述说明书的揭示和教导，本发明所属领域的技术人员还能够对上述实施方式进行变更和修改。因此，本发明并不局限于上述的具体实施方式，凡是本领域技术人员在本发明的基础上所作出的任何显而易见的改进、替换或变型均属于本发明的保护范围。此外，尽管本说明书中使用了一些特定的术语，但这些术语只是为了方便说明，并不对本发明构成任何限制。

Claims (9)

1.一种到手香纯露的制备方法，其特征在于，包括以下操作：
1)取新鲜的到手香，粉碎成片段，清洗后沥去水分；
2)将沥干水分的到手香放置于蒸馏器中，加入蒸馏水，加热，将所述蒸馏器的功率从低功率逐渐转为大功率，收集馏出液，得到到手香纯露。
2.根据权利要求1所述的到手香纯露的制备方法，其特征在于，在步骤2)中，当收集的馏出液为投料到手香重量的0.8～1.5倍时停止收集。
3.根据权利要求1所述的到手香纯露的制备方法，其特征在于，在得到到手香纯露后，将所述到手香纯露放置在4℃的环境中保存。
4.一种由权利要求1～3任一项所述的方法制备的到手香纯露的体外抗氧化活性评价方法，其特征在于，包括以下操作：
1)制备到手香纯露，为实验组；
2)根据相应的体外抗氧化活性实验设置对照组；
3)分别对所述实验组和所述对照组进行体外抗氧化活性实验，通过测定比较实验组和对照组的抗氧化指标来评价到手香纯露的抗氧化活性。
5.根据权利要求4所述的到手香纯露的体外抗氧化活性评价方法，其特征在于，所述体外抗氧化活性实验包括DPPH自由基清除活性实验、还原力实验、清除羟基自由基实验和总抗氧化活性实验中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的到手香纯露的体外抗氧化活性评价方法，其特征在于，所述实验组的DPPH自由基清除活性实验包括以下步骤：
称取DPPH后用溶剂溶解得到DPPH溶液，取不同浓度的到手香纯露溶液和所述DPPH溶液于同一容器中，摇匀，静置，在517nm处测试吸光度值，记为A1；
测试所述溶剂和所述DPPH溶液混合液的吸光度值，记为A0；
测试所述到手香纯露溶液和所述溶剂混合物的吸光度值，记为A2；
DPPH自由基的清除率(％)＝[1-(A1-A2)/A0]*100。
7.根据权利要求5所述的到手香纯露的体外抗氧化活性评价方法，其特征在于，所述实验组的还原力实验包括以下步骤：
取不同浓度的到手香纯露溶液分别置于容器中，加入磷酸缓冲液和铁氰化钾溶液，混合后水浴加热，再冰水浴，放冷至室温；
加入三氯乙酸溶液后混合均匀；
向混合液中加入超纯水和氯化铁，混合后静置，在700nm处测定吸光度。
8.根据权利要求5所述的到手香纯露的体外抗氧化活性评价方法，其特征在于，所述实验组的清除羟基自由基实验包括以下步骤：
向容器中加入FeSO4水溶液、H2O2水溶液和水杨酸-乙醇溶液，混合后水浴加热，在510nm测定吸光度A0；
加入到手香纯露溶液，混合后水浴加热，在510nm测其吸光度Ax；
羟自由基清除率(％)＝(A0-Ax)/A0*100。
9.根据权利要求5所述的到手香纯露的体外抗氧化活性评价方法，其特征在于，所述实验组的总抗氧化活性实验包括以下步骤：
1)配制FRAP工作液；
2)称取FeSO4·7H2O，用乙醇溶液溶解并定容；取FeSO4溶液稀释至若干设定浓度；
3)在孔板的每个检测孔中加入步骤1)中的FRAP工作液；
在空白对照孔中加入蒸馏水；
在标准曲线检测孔内加入步骤2)中若干浓度的FeSO4标准溶液；
在样品检测孔内加入所述到手香纯露，在593nm处测定其吸光度值。
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