CN112205430A - 一种中药提取物组合物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种中药提取物组合物，包含以下重量份的组分：连翘油5‑40份、广藿香油3‑30份、檀香油0‑30份、羌活油0‑40份、艾叶油0‑40份、白芷油0‑20份、辛夷油0‑20份、金银花油0‑20份、桉油0‑60份、丁香油0‑45份和荆芥油0‑20份。本发明还提供了所述中药提取物组合物在抗普通冠状病毒和2019新型冠状病毒中的应用及在空气消毒剂、洗手液、表面消毒以及人体外用内服制剂等方面的应用。

Description

一种中药提取物组合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种医学技术领域，尤其是一种中药提取物组合物及其制备方法与应用。
背景技术
2019新型冠状病毒肺炎的传播途径有直接传播、气溶胶传播和接触传播。所以，除了戴口罩等方式防止病毒侵害外，如何消除空气中滞留的病毒成了抗新冠肺炎的重要对策。
现有的方式主要是采用消毒液喷洒结合紫外灯照射等途径：(1)现主要的消毒液之一为医用酒精，在使用时需要采用75％的比例才有良好的杀灭效果，所以主要是用在物品的消毒上。在空气传播消毒中，医用酒精的浓度会迅速减低，无法达到良好的消毒效果，且高浓度的酒精对人体的刺激性较大；(2)另一种主要的消毒液为84消毒液，该类消毒剂主要问题是刺激性强，无法在人流密集地区使用，且在空气中停留时间短等问题；(3)紫外灯照射杀毒对人体有害，只能是在密闭的无人区域使用。
发明内容
基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种具有抗普通冠状病毒和2019新型冠状病毒活性的中药提取物组合物及其制备方法，用于杀灭空气、物体表面等环境中的病毒，也可用于杀灭进入人体的病毒，可以用于有人区域安全消毒。
为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为：一种中药提取物组合物，包含以下重量份的组分：连翘油5-40份、广藿香油3-30份、檀香油0-30份、羌活油0-40份、艾叶油0-40份、白芷油0-20份、辛夷油0-20份、金银花油0-20 份、桉油0-60份、丁香油0-45份和荆芥油0-20份。
其中，中药提取物组合物中各组分的组成如下：
连翘油：一般连翘油皆可使用，一个具体的例子是从木犀科植物连翘 Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实经提取得到的挥发油。(本文记载的实施例中使用的市售商品购自吉水县金海天然香料油科技有限公司，批号为 20200408。)
广藿香油：一般广藿香油皆可使用，一个具体的例子是从唇形科植物广藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth.的干燥茎和叶经提取得到的挥发油。(本文记载的实施例中使用的市售商品购自吉水县金海天然香料油科技有限公司，批号为20200408。)
檀香油：一般檀香油皆可使用，一个具体的例子是从檀香科植物檀香 Santalumalbum L.的心材经蒸馏所得的挥发油。(本文记载的实施例中使用的市售商品购自吉水县金海天然香料油科技有限公司，批号为20200408。)
羌活油：一般羌活油皆可使用，一个具体的例子是从伞形科羌活属植物羌活Notopterygium incisum Ting ex H.T.Chang或宽叶羌活Notopterygium franchetiiH.de Boiss.的根茎和根经提取得到的挥发油。(本文记载的实施例中使用的市售商品购自江西省吉水县赣旭香料油厂，批号为20200317。)
艾叶油：一般艾叶油皆可使用，一个具体的例子是从菊科植物艾Artemisia argyiLevl.Et Vant.的干叶或鲜叶经提取得到的挥发油。(本文记载的实施例中使用的市售商品购自吉水县金海天然香料油科技有限公司，批号为20200408。)
白芷油：一般白芷油皆可使用，一个具体的例子是从伞形科当归属植物白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss.)Shan et Yuan 的根经提取得到的挥发油。(本文记载的实施例中使用的市售商品购自吉水县金海天然香料油科技有限公司，批号为20200408。)
辛夷油：一般辛夷油皆可使用，一个具体的例子是从木兰科木兰属植物望春花Magnolia biondii Pamp.、玉兰Magnolia denudata Desv.或武当玉兰Magnoliasprengeri Pamp.的干燥花蕾经提取得到的挥发油。(本文记载的实施例中使用的市售商品购自江西省吉水县赣旭香料油厂，批号为20200328。)
金银花油：一般金银花油皆可使用，一个具体的例子是从忍冬科忍冬属植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的花蕾经提取得到的挥发油。(本文记载的实施例中使用的市售商品购自吉安华新天然植物有限公司，批号为20200429。)
桉油：一般桉油皆可使用，一个具体的例子是从桃金娘科植物蓝桉 Eucalyptusglobulus Labill.、樟科植物樟Cinnamomum camphora(L.)Presl或上述两科同属其他植物经提取得到的挥发油。(本文记载的实施例中使用的市售商品购自吉水县金海天然香料油科技有限公司，批号为20200408。)
丁香油：一般丁香油皆可使用，一个具体的例子是从桃金娘科植物丁香 Eugeniacaryophyllata Thunb.的干燥花蕾经提取得到的挥发油。(本文记载的实施例中使用的市售商品购自吉水县金海天然香料油科技有限公司，批号为 20200408。)
荆芥油：一般荆芥油皆可使用，一个具体的例子是从唇形科植物荆芥Schizonepeta tenuifolia Briq.的全草经提取得到的挥发油。(本文记载的实施例中使用的市售商品购自吉水县金海天然香料油科技有限公司，批号为20200408。)
除购买市售产品外，也可采用水蒸气蒸馏法或超临界流体萃取法从中药材按常规方法提取上述挥发油，或者也可以采用其它现有己知的提取方法来提取。
优选地，连翘油10-35份、广藿香油10-25份、檀香油5-25份、羌活油5-30 份、艾叶油5-30份、白芷油0-15份、辛夷油0-15份和金银花油0-15份。
发明人经过大量探索发现，上述优选配方，具有较好的杀灭普通冠状病毒和2019新型冠状病毒的效果。
优选地，所述中药提取物组合物，包含以下重量份的组分：连翘油10-30 份、广藿香油15-25份、檀香油10-20份、羌活油5-25份、艾叶油5-25份、白芷油0-10份、辛夷油0-10份和金银花油0-10份。
发明人经过大量探索发现，上述优选配方，具有更好的杀灭普通冠状病毒和2019新型冠状病毒的效果。
更优选地，所述中药提取物组合物，包含以下重量份的组分：连翘油25-30 份、广藿香油15-20份、檀香油10-15份、羌活油15-25份、艾叶油15-25份、白芷油5-10份和辛夷油5-10份。
或，包含以下重量份的组分：连翘油25-30份、广藿香油15-20份、檀香油 10-15份、羌活油15-25份、艾叶油15-25份、白芷油5-10份和金银花油5-10 份。
发明人经过大量探索发现，上述优选配方，具有最好的杀灭普通冠状病毒和2019新型冠状病毒的效果。
优选地，所述中药提取物组合物，包含以下重量份的组分：连翘油28份、广藿香油18份、檀香油14份、羌活油20份和艾叶油20份。
优选地，所述中药提取物组合物，包含以下重量份的组分：连翘油28份、广藿香油18份、檀香油14份、羌活油10份、艾叶油10份、白芷油10份和辛夷油10份。
或，包含以下重量份的组分：连翘油28份、广藿香油18份、檀香油14份、羌活油10份、艾叶油10份、白芷油10份和金银花油10份。
优选地，所述中药提取物组合物，包含以下重量份的组分：连翘油14份、广藿香油9份、桉油45份、丁香油23份和荆芥油9份。
进一步地，根据中药一般的使用场景，本发明还提供了所述中药提取物组合物在人体、空气或环境中的应用。
更进一步地，本发明还提供了所述中药提取物组合物在抗普通冠状病毒和 2019新型冠状病毒中的应用。
同时，根据中药一般的使用场景，本发明还提供了所述中药提取物组合物在空气消毒剂、洗手液、表面消毒剂和人体外用内服制剂中的应用。
此外，本发明还提供了上述中药提取物组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)采用水蒸气蒸馏法从各组分的原料中提取各组分，或采用超临界流体萃取法从各组分的原料中提取各组分，或使用商品中药挥发油作为各组分；
(2)将其混合、充分搅匀，以得到所述中药提取物组合物。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：本发明提供的所述中药提取物组合物，能显著杀灭普通冠状病毒和2019新型冠状病毒。
附图说明
图1为不同实施例对Huh-7细胞的细胞毒性实验结果图；
图2为不同实施例对HCoV-229E感染Huh-7细胞致细胞病变的抑制作用图；
图3为不同实施例对SARS-CoV-2感染Vero E6细胞致细胞病变的抑制作用图；
其中，1号为实施例1的效果图；2号为实施例2的效果图；3号为实施例 3的效果图；4号为实施例4的效果图。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
本发明的一种实施例，本实施例所述中药提取物组合物的制备过程，包括如下步骤：
(1)采用水蒸气蒸馏法从各组分的原料中提取各组分，或采用超临界流体萃取法从各组分的原料中提取各组分，或使用商品中药挥发油作为各组分。
(2)将其混合、充分搅匀，以得到所述中药提取物组合物。
本申请设置实施例1-10，具体实施例1-10的重量份选择如表1所示，其中，具体实施例1-4的重量份选择如表中所示，其中，连翘油、广藿香油、檀香油、羌活油、艾叶油、白芷油、辛夷油、金银花油、桉油、丁香油、荆芥油的用量范围分别为：14～28份、9～18份、0～14份、0～20份、0～20份、0～10份、0～10 份、0～10份、0～45份、0～23份、0～9份。根据中医临床配伍药物原则，方中药物的用量均可在一定范围内变动，而其药效仍可维持。因此，本实施例在实际应用中各组分的用量范围可放宽为：5～40份、3～30份、0～30份、0～40份、0～40 份、0～20份、0～20份、0～20份、0～60份、0～45份、0～20份，在此基础上，提供了实施例5-10。
表1
Figure RE-GDA0002800456050000061
Figure RE-GDA0002800456050000071
效果分析
试验例1中药提取物组合物的细胞毒性实验
试验细胞：Huh-7细胞，由广州呼吸健康研究院呼吸疾病国家重点实验室病毒室提供。Huh-7细胞为一种人肝癌细胞系，用于病毒的培养，在抗病毒药物研究中发挥重要作用，常用于筛选针对各种病毒的候选药物。
试验方法：96孔板单层Huh-7细胞用PBS洗涤1次，弃上清，每孔加入 100μL 2倍梯度稀释的药物。正常细胞组每孔加入等体积培养液，37℃、5％CO2条件下培养3天。随后每孔加入浓度为5mg/mL的MTT溶液20μL，继续孵育4 小时。弃上清，每孔加入100μL DMSO，低速振荡5分钟，490nm测定OD值。计算抑制率。抑制率＝(正常组平均OD值—药物组平均OD值)/(正常组平均OD值)×100％。采用GraphPad Prism 8.0的Nonlinear regression方法计算药物半数细胞毒性浓度(CC50)和最高无毒浓度(CC0)，结果见图1。
试验结果：图1为实施例1-4对Huh-7细胞的细胞毒性实验结果图，由图1 可以看出，本发明的实施例1-4的最高无毒浓度均为0.025％，而根据中医临床配伍药物原则，方中药物的用量均可在一定范围内变动，而其药效仍可维持。因此，实施例5-10的研究过程及结果类似，于此不再赘述。由此可知，本发明提供的中药提取物组合物对Huh-7细胞的细胞毒性均为低，可用于正常的空气消毒或直接接触皮肤的洗涤类产品，且作为常用中药的提取物，亦可用于人体内服和外用。
试验例2中药提取物组合物的抗病毒药效实验
试验细胞：Huh-7细胞和Vero E6，由广州呼吸健康研究院呼吸疾病国家重点实验室病毒室提供。Vero E6是一种非洲绿猴肾细胞系，用于病毒的培养，在抗病毒药物研究中发挥重要作用，常用于筛选针对各种病毒的候选药物。
试验病毒：人类冠状病毒229E(HCoV-229E)，购自ATCC，由呼吸疾病国家重点实验室保存，是甲型冠状病毒属的一种病毒，于1966年被发现，是已知七种能感染人类的冠状病毒中第一个被发现者，常用于代表普通的冠状病毒，用于抗冠状病毒药物的筛选和药效研究。SARS-CoV-2(Genebank accession no. MT123290.1)为2019新型冠状病毒肺炎致病病毒。
试验方法：96孔培养板每孔加入100μL浓度为2×105个/mL的Huh-7或 Vero E6细胞，37℃、5％CO2培养24小时；药物实验组和病毒对照组加入50 个半数细胞培养物感染量(TCID50)的HCoV-229E或SARS-CoV-2病毒液100μL/ 孔，37℃、5％CO2培养箱吸附1小时。弃去培养液，加入100μL/孔的两倍梯度稀释的受试药物，每个浓度4个复孔，同时设立细胞对照、病毒对照(阴性对照)。37℃、5％CO2孵箱孵育3天后，光学显微镜下记录细胞病变作用(CPE)，程度按以下6级标准记录出现CPE的细胞占总细胞的百分比：-：无；±：＜10％； +：25％；++：50％；+++：75％；++++：＞75％。记录CPE后，弃上清，MTT 染色(方法同实施例1下药物细胞毒性试验)。采用GraphPad Prism8.0的 Nonlinear regression方法计算CPE减少法和MTT染色法中药物对病毒感染致细胞死亡的半数抑制浓度(IC50)，计算选择指数SI(Selective index：CC50/IC50)，一般药理研究中认为：SI大于1，该品种有效，越大越好。SI大于10为显著有效。实验结果见图2、图3。
试验结果：图2为不同实施例对HCoV-229E感染Huh-7细胞致细胞病变的抑制作用图，图3为不同实施例对SARS-CoV-2感染Vero E6细胞致细胞病变的抑制作用图，由图2和图3可以看出本发明的实施例1-4对HCoV-229E和 SARS-CoV-2感染细胞引起的CPE均具有显著抑制作用。
根据图2的SI显示，实施例1-4的SI分别为10.39、23.29、6.68、5.56，药效强度为：实施例2＞实施例1＞实施例3＞实施例4；另外，实施例1-4对 SARS-CoV-2感染细胞引起的CPE同样具有显著抑制作用，根据图3的SI显示，实施例1-4的SI分别为4.61、2.87、3.56、1.40，药效强度为：实施例1＞实施例3＞实施例2＞实施例4。
而根据中医临床配伍药物原则，方中药物的用量均可在一定范围内变动，而其药效仍可维持，因此，实施例5-10的研究过程及结果类似，于此不再赘述。由此可知，本发明提供的中药提取物组合物对于普通冠状病毒和2019新型冠状病毒的杀灭作用均显著。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种中药提取物组合物，其特征在于，包含以下重量份的组分：连翘油5-40份、广藿香油3-30份、檀香油0-30份、羌活油0-40份、艾叶油0-40份、白芷油0-20份、辛夷油0-20份、金银花油0-20份、桉油0-60份、丁香油0-45份和荆芥油0-20份。
2.如权利要求1所述的中药提取物组合物，其特征在于，包含以下重量份的组分：连翘油10-35份、广藿香油10-25份、檀香油5-25份、羌活油5-30份、艾叶油5-30份、白芷油0-15份、辛夷油0-15份和金银花油0-15份。
3.如权利要求2所述的中药提取物组合物，其特征在于，包含以下重量份的组分：连翘油10-30份、广藿香油15-25份、檀香油10-20份、羌活油5-25份、艾叶油5-25份、白芷油0-10份、辛夷油0-10份和金银花油0-10份。
4.如权利要求3所述的中药提取物组合物，其特征在于，包含以下重量份的组分：连翘油25-30份、广藿香油15-20份、檀香油10-15份、羌活油15-25份、艾叶油15-25份、白芷油5-10份和辛夷油5-10份；
或，包含以下重量份的组分：连翘油25-30份、广藿香油15-20份、檀香油10-15份、羌活油15-25份、艾叶油15-25份、白芷油5-10份和金银花油5-10份。
5.如权利要求1-3任一项所述的中药提取物组合物，其特征在于，包含以下重量份的组分：连翘油28份、广藿香油18份、檀香油14份、羌活油20份和艾叶油20份。
6.如权利要求4所述的中药提取物组合物，其特征在于，包含以下重量份的组分：连翘油28份、广藿香油18份、檀香油14份、羌活油10份、艾叶油10份、白芷油10份和辛夷油10份。
或，包含以下重量份的组分：连翘油28份、广藿香油18份、檀香油14份、羌活油10份、艾叶油10份、白芷油10份和金银花油10份。
7.如权利要求1所述的中药提取物组合物，其特征在于，包含以下重量份的组分：连翘油14份、广藿香油9份、桉油45份、丁香油23份和荆芥油9份。
8.一种如权利要求1-7任一项所述中药提取物组合物在人体、空气或环境中的应用。
9.一种如权利要求1-7任一项所述中药提取物组合物在抗普通冠状病毒和2019新型冠状病毒中的应用。
10.一种如权利要求1-7任一项所述中药提取物组合物在空气消毒剂、洗手液、表面消毒剂和人体外用内服制剂中的应用。
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