CN112194514A - 一种生物有机肥发酵剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生物有机肥发酵剂,包括嗜低温白地霉1‑3份,枯草芽孢杆菌1‑3份,地衣芽孢杆菌1‑3份,褐球固氮菌1‑3.5,份植物乳杆菌0.5‑1份。本发明在使用时,其中嗜低温白地霉、枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌主要用于前期快速发酵提升堆肥体系温度,联合水体中纤维素分解菌群消化秸秆,为自身及其它菌群提供能量,嗜低温白地霉可在5℃低温环境中正常生长,褐球固氮菌用于固定空气中氮,为整个堆肥体系补充氮源,植物乳杆菌用于除去堆肥体系中的异味,本发明为高碳氮比原料的好氧发酵、高寒地区低温发酵提供了一种解决方案。
Description
技术领域
本发明涉及有机肥发酵剂技术领域,具体为一种生物有机肥发酵剂及其制备方法。
背景技术
东北地区为我国重要商品粮基地及畜牧业基地,近年来随着种植结构的调整,玉米种植处于绝对优势,玉米秸秆产量巨大,多数被焚烧处理,少数深翻入地,但因东北冬季漫长,温度低,很多秸秆在第二年春耕时还未腐烂,影响农民种植。而秸秆焚烧会造成雾霾天气,产生大量有毒有害物质,严重危害居民健康,并容易引发火灾,威胁人民群众安全。同时本地区是我国重要的乳品原料基地,奶牛养殖量大,牛粪造成的污染日益严重,很多村屯乡镇甚至县城,被牛粪围城。一到夏天,空气中到处是牛粪味。如何处理牛粪和秸秆,是本地区迫切需要解决的问题。
秸秆中含有大量的纤维素、半纤维素,属于典型高含碳物料,碳氮比45:1左右,而现有微生物发酵剂多数需要调节碳氮比25:1才能正常发酵。
东北地区年平均温度零下5℃到5℃之间,冬季漫长,室外温度常达到零下20℃以下,大大制约了好氧发酵方法的应用和推广,因为多数微生物发酵剂的最佳发酵温度为25℃以上。
发明内容
本发明的目的在于解决以上所面临的技术不足,提供一种可在低温环境下顺利起温发酵的复合微生物发酵剂,此发酵剂可用于高含碳有机物料的好氧发酵并生产高活性生物有机肥。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:一种生物有机肥发酵剂,包括复合微生物菌群,复合微生物菌群包含嗜低温白地霉、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、褐球固氮菌、植物乳杆菌。
优选的是,嗜低温白地霉1-3份,枯草芽孢杆菌1-3份,地衣芽孢杆菌1-3份,褐球固氮菌1-3.5,份植物乳杆菌0.5-1份。
更进一步地,本案还提供一种生物有机肥发酵剂的制备方法,其包括以下步骤:
步骤一、嗜低温白地霉培养方法如下:种子培养基为20g麦芽浸膏,(4000转/分离心10分钟),PH自然,121℃蒸汽灭菌20分钟,冷却后得白地霉种子培养基,在无菌操作台中取一接种耙菌种接种于前述制得种子培养基中,空气浴摇床200转/分,28℃培养24小时,得到液体种子;
取120目鱼粉5kg,120目豆粕粉5kg,120目玉米粉2.5kg,过磷酸钙0.3kg,维生素B族0.5kg,于机械搅拌通风发酵罐中28℃培养18h,150转/分钟,通气量为每分钟每立方发酵体积0.5立方除菌空气,得发酵液;
步骤二、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌培养方法如下:为5g牛肉膏,10蛋白胨,3g氯化钠,4000转/分离心10分钟),PH7.5,121℃蒸汽灭菌20分钟,冷却后得细菌培养基,在无菌操作台中取一接种环细菌接种于前述制得种子培养基中,空气浴摇床200转/分,37℃培养18小时,得到液体种子;
取120目鱼粉5kg,120目豆粕粉5kg,玉米糖化醪10kg,氯化钠1kg,氢氧化钠0.4kg磷酸氢二钠1.5kg,消泡剂0.5kg,于机械搅拌通风发酵罐中37℃培养18h,220转/分钟,通气量为每分钟每立方发酵体积1立方除菌空气,得发酵液;
步骤三、褐球固氮菌培养方法如下:种子培养基为0.2g磷酸二氢钾,0.8g磷酸氢二钾,0.2g七水硫酸镁,0.1g两水硫酸钙,0.001g氯化铁,0.001g两水钼酸钠,0.5g酵母膏,20g甘露醇,牛肉膏,10蛋白胨,3g氯化钠,(4000转/分离心10分钟),PH自然,121℃蒸汽灭菌20分钟,冷却后得细菌培养基,在无菌操作台中取一接种环细菌接种于前述制得种子培养基中,空气浴摇床150转/分,30℃培养48小时,得到液体种子;
取玉米糖化醪40kg,玉米秸秆粉10kg,纤维素酶0.5kg,亚硫酸钠5kg,于机械搅拌通风发酵罐中28℃培养5天,150转/分钟,通气量为每分钟每立方发酵体积0.5立方除菌空气,得发酵液;
步骤五、植物乳杆菌培养方法如下:种子培养基为20g葡萄糖,10蛋白胨,10g牛肉膏,5g酵母粉,1g磷酸氢二钾,2g柠檬酸三胺,1ml吐温80,5g乙酸钠,0.5g七水硫酸镁,0.25g一水硫酸锰,(4000转/分离心10分钟),PH5.5,121℃蒸汽灭菌20分钟,冷却后得乳杆菌培养基,在无菌操作台中取一接种环乳杆菌接种于前述制得种子培养基中,空气浴摇床100转/分,37℃培养24小时,得到液体种子;
取120目鱼粉5kg,120目豆粕粉5kg,120目玉米粉5kg,葡萄糖10kg,乳糖2kg,氯化钠1kg,磷酸氢二钠1.5kg,消泡剂0.5kg,于机械搅拌通风发酵罐中37℃培养24h,100转/分钟,通气量为每小时通风10分钟,每立方发酵体积0.5立方除菌空气,得发酵液;
步骤六、按配比称取嗜低温白地霉1-3份,枯草芽孢杆菌1-3份,地衣芽孢杆菌1-3份,褐球固氮菌1-3.5,份植物乳杆菌0.5-1份混合在一起,即可制复合微生物发酵剂,其活性不小于1×1010cfu/ml。
步骤七、将步骤六中所得复合微生物发酵剂按照千分之五至千分之十比例添加至固体发酵原料中,固体发酵原料调整水分至55%-65%之间,固体发酵原料为秸秆、牛粪、或者秸秆和牛粪中的至少一种。
优选的是,步骤七中,其中秸秆需进行机械粉碎预处理,粉碎长度不长于5cm,固体发酵原料中的牛粪,应为脱水牛粪,脱水后含水率应不高于65%。
优选的是,步骤七中,固体发酵原料含水率不足55%时,应用水体调配含水率至55%-65%之间;用于调配固体发酵原料的水体,当环境温度处于零下10℃至10℃之间时,则调水体为刚出厌氧发酵罐的水体,温度为20℃以上;当环境温度处于10℃以上,则调配发酵原料的水体温度为10℃以上。
优选的是,步骤七中,添加复合微生物菌剂、调配水体后的固体发酵原料,发酵环境温度处于零下10℃至10℃之间时,发酵时间为20-30天之间,每两日翻抛一次;发酵环境温度处于10℃以上时,发酵时间为15-20天之间,每日翻抛一次。
优选的是,步骤七中,添加复合微生物菌剂、调配水体后的固体发酵原料,达到发酵时间腐熟后,生物活性不低于1×108cfu/g。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:该有机肥发酵剂中含有嗜低温白地霉、枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、褐球固氮菌、植物乳杆菌,按比例投入嗜低温白地霉、枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、褐球固氮菌、植物乳杆菌,好氧发酵十五至三十天,其中嗜低温白地霉、枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌主要用于前期快速发酵提升堆肥体系温度,联合水体中纤维素分解菌群消化秸秆,为自身及其它菌群提供能量,嗜低温白地霉可在5℃低温环境中正常生长,褐球固氮菌用于固定空气中氮,为整个堆肥体系补充氮源,植物乳杆菌用于除去堆肥体系中的异味,本发明为高碳氮比原料的好氧发酵、高寒地区低温发酵提供了一种解决方案。
具体实施方式
下面对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
一种生物有机肥发酵剂,包括复合微生物菌群,复合微生物菌群包含嗜低温白地霉、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、褐球固氮菌、植物乳杆菌。
进一步的说,嗜低温白地霉1-3份,枯草芽孢杆菌1-3份,地衣芽孢杆菌1-3份,褐球固氮菌1-3.5,份植物乳杆菌0.5-1份。
具体采用以下方法制得生物有机肥发酵剂,其包括以下步骤:
步骤一、嗜低温白地霉培养方法如下:种子培养基为20g麦芽浸膏,(4000转/分离心10分钟),PH自然,121℃蒸汽灭菌20分钟,冷却后得白地霉种子培养基,在无菌操作台中取一接种耙菌种接种于前述制得种子培养基中,空气浴摇床200转/分,28℃培养24小时,得到液体种子;
取120目鱼粉5kg,120目豆粕粉5kg,120目玉米粉2.5kg,过磷酸钙0.3kg,维生素B族0.5kg,于机械搅拌通风发酵罐中28℃培养18h,150转/分钟,通气量为每分钟每立方发酵体积0.5立方除菌空气,得发酵液;
上述麦芽浸膏可用麦芽汁代替,若用麦芽汁,则浓度不低于12波美度,上述液体种子接种于发酵培养基的比例为千分之一到千分之五之间,具体接种比例根据镜检孢子数量确定,孢子数量高,接种比例少,反之接种比例高。上述发酵培养基中鱼粉可用发酵玉米浆代替,若采用发酵玉米浆,可不必添加维生素B。
上述种子培养液接种于发酵培养基时,应镜检观察细胞状态,孢子形成比例应不小于90%。
上述发酵液接种于固体发酵原料时,应镜检观察细胞状态,孢子形成比例应不小于90%,活孢子数应达到4×107cfu/ml。
步骤二、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌培养方法如下:为5g牛肉膏,10蛋白胨,3g氯化钠,4000转/分离心10分钟),PH7.5,121℃蒸汽灭菌20分钟,冷却后得细菌培养基,在无菌操作台中取一接种环细菌接种于前述制得种子培养基中,空气浴摇床200转/分,37℃培养18小时,得到液体种子;
取120目鱼粉5kg,120目豆粕粉5kg,玉米糖化醪10kg,氯化钠1kg,氢氧化钠0.4kg磷酸氢二钠1.5kg,消泡剂0.5kg,于机械搅拌通风发酵罐中37℃培养18h,220转/分钟,通气量为每分钟每立方发酵体积1立方除菌空气,得发酵液;
上述种子培养液接种于发酵培养基时,活菌数应达到1×108cfu/ml。
上述发酵液接种于固体发酵原料时,活菌数应达到1×1010cfu/ml,成芽孢率不低于90%。
步骤三、褐球固氮菌培养方法如下:种子培养基为0.2g磷酸二氢钾,0.8g磷酸氢二钾,0.2g七水硫酸镁,0.1g两水硫酸钙,0.001g氯化铁,0.001g两水钼酸钠,0.5g酵母膏,20g甘露醇,牛肉膏,10蛋白胨,3g氯化钠,(4000转/分离心10分钟),PH自然,121℃蒸汽灭菌20分钟,冷却后得细菌培养基,在无菌操作台中取一接种环细菌接种于前述制得种子培养基中,空气浴摇床150转/分,30℃培养48小时,得到液体种子;
取玉米糖化醪40kg,玉米秸秆粉10kg,纤维素酶0.5kg,亚硫酸钠5kg,于机械搅拌通风发酵罐中28℃培养5天,150转/分钟,通气量为每分钟每立方发酵体积0.5立方除菌空气,得发酵液;
上述种子培养液接种于发酵培养基时,活菌数应达到1×108cfu/ml。
上述发酵液接种于固体发酵原料时,活菌数应达到1×1010cfu/ml。
步骤五、植物乳杆菌培养方法如下:种子培养基为20g葡萄糖,10蛋白胨,10g牛肉膏,5g酵母粉,1g磷酸氢二钾,2g柠檬酸三胺,1ml吐温80,5g乙酸钠,0.5g七水硫酸镁,0.25g一水硫酸锰,(4000转/分离心10分钟),PH5.5,121℃蒸汽灭菌20分钟,冷却后得乳杆菌培养基,在无菌操作台中取一接种环乳杆菌接种于前述制得种子培养基中,空气浴摇床100转/分,37℃培养24小时,得到液体种子;
取120目鱼粉5kg,120目豆粕粉5kg,120目玉米粉5kg,葡萄糖10kg,乳糖2kg,氯化钠1kg,磷酸氢二钠1.5kg,消泡剂0.5kg,于机械搅拌通风发酵罐中37℃培养24h,100转/分钟,通气量为每小时通风10分钟,每立方发酵体积0.5立方除菌空气,得发酵液;
上述种子培养液接种于发酵培养基中时,活菌数应不小于1×107cfu/ml。
上述发酵液接种于固体培养基中时,活菌数应不小于1×108cfu/ml。
步骤六、按配比称取嗜低温白地霉1-3份,枯草芽孢杆菌1-3份,地衣芽孢杆菌1-3份,褐球固氮菌1-3.5,份植物乳杆菌0.5-1份混合在一起,即可制复合微生物发酵剂,其活性不小于1×1010cfu/ml。
步骤七、将步骤六中所得复合微生物发酵剂按照千分之五至千分之十比例添加至固体发酵原料中,固体发酵原料调整水分至55%-65%之间,固体发酵原料为秸秆、牛粪、或者秸秆和牛粪中的至少一种。
进一步的说,步骤七中,其中秸秆需进行机械粉碎预处理,粉碎长度不长于5cm,固体发酵原料中的牛粪,应为脱水牛粪,脱水后含水率应不高于65%。
进一步的说,步骤七中,固体发酵原料含水率不足55%时,应用水体调配含水率至55%-65%之间;用于调配固体发酵原料的水体,当环境温度处于零下10℃至10℃之间时,则调水体为刚出厌氧发酵罐的水体,温度为20℃以上;当环境温度处于10℃以上,则调配发酵原料的水体温度为10℃以上。
进一步的说,添加复合微生物菌剂、调配水体后的固体发酵原料,发酵环境温度处于零下10℃至10℃之间时,发酵时间为20-30天之间,每两日翻抛一次;发酵环境温度处于10℃以上时,发酵时间为15-20天之间,每日翻抛一次。
进一步的说,步骤七中,添加复合微生物菌剂、调配水体后的固体发酵原料,达到发酵时间腐熟后,生物活性不低于1×108cfu/g。
下面针对不同配方进行说明:
实施例一
外界环境温度处于10℃以上时,取制备好的嗜低温白地霉2份、枯草芽孢杆菌2份、地衣芽胞杆菌2份、褐球固氮菌3.5份、植物乳杆菌0.5份复配,取复配后的微生物菌剂50kg,添加到1000kg的玉米秸秆发酵堆中,玉米秸秆长度≤5cm,并用水体调配至含水量为55%-65%,此水体温度为10℃以上,1000kg秸秆包括其所含水分。
上述固体发酵原料采用槽式发酵,并采用链板式翻堆机每日翻抛一次,若环境温度处于20℃以上时,则每日翻抛两次,发酵15-20天后,物料发酵腐熟,腐熟物料生物活性不低于1×108cfu/ml。
实施例二
外界环境温度处于10℃以上时,取制备好的嗜低温白地霉2份、枯草芽孢杆菌2份、地衣芽胞杆菌2份、褐球固氮菌3.5份、植物乳杆菌0.5份复配,取复配后的微生物菌剂50kg,添加到1000kg的玉米秸秆发酵堆中,玉米秸秆长度≤5cm,并用水体调配至含水量为55%-65%,此水体温度为10℃以上,1000kg秸秆包括其所含水分。
上述固体发酵原料采用条垛式发酵,并采用自行式有机肥翻堆机每日翻抛一次,若环境温度处于20℃以上时,则每日翻抛两次,阴雨天应设置遮雨棚或者覆膜防雨。发酵15-20天后,物料发酵腐熟,腐熟物料生物活性不低于1×108cfu/ml。
实施例三
外界环境温度处于零下10℃至10℃之间时,取制备好的嗜低温白地霉3份、枯草芽孢杆菌1.5份、地衣芽胞杆菌1.5份、褐球固氮菌3.5份、植物乳杆菌0.5份复配,取复配后的微生物菌剂100kg,添加到1000kg的玉米秸秆发酵堆中,玉米秸秆长度≤5cm,并用水体调配至含水量为55%-65%,此水体温度为20℃以上,1000kg秸秆包括其所含水分。
上述固体发酵原料采用槽式发酵,并采用链板式翻堆机每两日翻抛一次,若环境温度低于0℃时,则翻抛完毕后,堆体应覆膜保温,发酵20-30天后,物料发酵腐熟,腐熟物料生物活性不低于1×108cfu/ml。
实施例四
外界环境温度处于10℃以上时,取制备好的嗜低温白地霉2份、枯草芽孢杆菌3份、地衣芽胞杆菌2份、褐球固氮菌2份、植物乳杆菌1份复配,取复配后的微生物菌剂50kg,添加到1000kg的脱水牛粪发酵堆中,若含水量不足55%,则用水体调配至含水量为55%-65%,此水体温度为10℃以上,1000kg脱水牛粪包括其所含水分。
上述固体发酵原料采用槽式发酵,并采用链板式翻堆机每日翻抛一次,若环境温度处于20℃以上时,则每日翻抛两次,发酵15-20天后,物料发酵腐熟,腐熟物料生物活性不低于1×108cfu/ml。
实施例五
外界环境温度处于10℃以上时,取制备好的嗜低温白地霉2份、枯草芽孢杆菌3份、地衣芽胞杆菌2份、褐球固氮菌2份、植物乳杆菌1份复配,取复配后的微生物菌剂50kg,添加到1000kg的脱水牛粪发酵堆中,若含水量不足55%,则用水体调配至含水量为55%-65%,此水体温度为10℃以上,1000kg脱水牛粪包括其所含水分。
上述固体发酵原料采用条垛式发酵,并采用自行式有机肥翻堆机每日翻抛一次,若环境温度处于20℃以上时,则每日翻抛两次,阴雨天应设置遮雨棚或者覆膜防雨。发酵15-20天后,物料发酵腐熟,腐熟物料生物活性不低于1×108cfu/ml。
实施例六
外界环境温度处于零下10℃至10℃之间时,取制备好的嗜低温白地霉4份、枯草芽孢杆菌2份、地衣芽胞杆菌2份、褐球固氮菌1份、植物乳杆菌1份复配,取复配后的微生物菌剂100kg,添加到1000kg的脱水牛粪发酵堆中,若脱水牛粪含水量不足55%,则用水体调配至含水量为55%-65%,此水体温度为20℃以上,1000kg脱水牛粪包括其所含水分。
上述固体发酵原料采用槽式发酵,并采用链板式翻堆机每两日翻抛一次,若环境温度低于0℃时,则翻抛完毕后,堆体应覆膜保温,发酵20-30天后,物料发酵腐熟,腐熟物料生物活性不低于1×108cfu/ml。
实施例七
外界环境温度处于10℃以上时,取制备好的嗜低温白地霉2份、枯草芽孢杆菌2份、地衣芽胞杆菌2份、褐球固氮菌3份、植物乳杆菌1份复配,取复配后的微生物菌剂50kg,添加到1000kg的玉米秸秆和脱水牛粪混合物料中,两者比例为1:1,发酵堆中,玉米秸秆长度≤5cm,并用水体调配至含水量为55%-65%,此水体温度为10℃以上,1000kg混合物料包括其所含水分。
上述固体发酵原料采用槽式发酵,并采用链板式翻堆机每日翻抛一次,若环境温度处于20℃以上时,则每日翻抛两次,发酵15-20天后,物料发酵腐熟,腐熟物料生物活性不低于1×108cfu/ml。
实施例八
外界环境温度处于10℃以上时,取制备好的嗜低温白地霉2份、枯草芽孢杆菌2份、地衣芽胞杆菌2份、褐球固氮菌3份、植物乳杆菌1份复配,取复配后的微生物菌剂50kg,添加到1000kg的玉米秸秆和脱水牛粪混合物料中,两者比例为1:1,发酵堆中,玉米秸秆长度≤5cm,并用水体调配至含水量为55%-65%,此水体温度为10℃以上,1000kg混合物料包括其所含水分。
上述固体发酵原料采用条垛式发酵,并采用自行式有机肥翻堆机每日翻抛一次,若环境温度处于20℃以上时,则每日翻抛两次,阴雨天应设置遮雨棚或者覆膜防雨。发酵15-20天后,物料发酵腐熟,腐熟物料生物活性不低于1×108cfu/ml。
实施例九
外界环境温度处于零下10℃至10℃之间时,取制备好的嗜低温白地霉3份、枯草芽孢杆菌2份、地衣芽胞杆菌2份、褐球固氮菌2份、植物乳杆菌1份复配,取复配后的微生物菌剂100kg,添加到1000kg的玉米秸秆和脱水牛粪混合物料中,两者比例为1:1,发酵堆中,玉米秸秆长度≤5cm,并用水体调配至含水量为55%-65%,此水体温度为20℃以上,1000kg混合物料包括其所含水分。
上述固体发酵原料采用槽式发酵,并采用链板式翻堆机每两日翻抛一次,若环境温度低于0℃时,则翻抛完毕后,堆体应覆膜保温,发酵20-30天后,物料发酵腐熟,腐熟物料生物活性不低于1×108cfu/ml。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (7)
1.一种生物有机肥发酵剂,其特征在于,包括复合微生物菌群,复合微生物菌群包含嗜低温白地霉、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、褐球固氮菌、植物乳杆菌。
2.根据权利要求1所述的一种生物有机肥发酵剂,其特征在于,嗜低温白地霉1-3份,枯草芽孢杆菌1-3份,地衣芽孢杆菌1-3份,褐球固氮菌1-3.5,份植物乳杆菌0.5-1份。
3.根据权利要求1所述的一种生物有机肥发酵剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一、嗜低温白地霉培养方法如下:种子培养基为20g麦芽浸膏,(4000转/分离心10分钟),PH自然,121℃蒸汽灭菌20分钟,冷却后得白地霉种子培养基,在无菌操作台中取一接种耙菌种接种于前述制得种子培养基中,空气浴摇床200转/分,28℃培养24小时,得到液体种子;
取120目鱼粉5kg,120目豆粕粉5kg,120目玉米粉2.5kg,过磷酸钙0.3kg,维生素B族0.5kg,于机械搅拌通风发酵罐中28℃培养18h,150转/分钟,通气量为每分钟每立方发酵体积0.5立方除菌空气,得发酵液;
步骤二、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌培养方法如下:为5g牛肉膏,10蛋白胨,3g氯化钠,4000转/分离心10分钟),PH7.5,121℃蒸汽灭菌20分钟,冷却后得细菌培养基,在无菌操作台中取一接种环细菌接种于前述制得种子培养基中,空气浴摇床200转/分,37℃培养18小时,得到液体种子;
取120目鱼粉5kg,120目豆粕粉5kg,玉米糖化醪10kg,氯化钠1kg,氢氧化钠0.4kg磷酸氢二钠1.5kg,消泡剂0.5kg,于机械搅拌通风发酵罐中37℃培养18h,220转/分钟,通气量为每分钟每立方发酵体积1立方除菌空气,得发酵液;
步骤三、褐球固氮菌培养方法如下:种子培养基为0.2g磷酸二氢钾,0.8g磷酸氢二钾,0.2g七水硫酸镁,0.1g两水硫酸钙,0.001g氯化铁,0.001g两水钼酸钠,0.5g酵母膏,20g甘露醇,牛肉膏,10蛋白胨,3g氯化钠,(4000转/分离心10分钟),PH自然,121℃蒸汽灭菌20分钟,冷却后得细菌培养基,在无菌操作台中取一接种环细菌接种于前述制得种子培养基中,空气浴摇床150转/分,30℃培养48小时,得到液体种子;
取玉米糖化醪40kg,玉米秸秆粉10kg,纤维素酶0.5kg,亚硫酸钠5kg,于机械搅拌通风发酵罐中28℃培养5天,150转/分钟,通气量为每分钟每立方发酵体积0.5立方除菌空气,得发酵液;
步骤五、植物乳杆菌培养方法如下:种子培养基为20g葡萄糖,10蛋白胨,10g牛肉膏,5g酵母粉,1g磷酸氢二钾,2g柠檬酸三胺,1ml吐温80,5g乙酸钠,0.5g七水硫酸镁,0.25g一水硫酸锰,(4000转/分离心10分钟),PH5.5,121℃蒸汽灭菌20分钟,冷却后得乳杆菌培养基,在无菌操作台中取一接种环乳杆菌接种于前述制得种子培养基中,空气浴摇床100转/分,37℃培养24小时,得到液体种子;
取120目鱼粉5kg,120目豆粕粉5kg,120目玉米粉5kg,葡萄糖10kg,乳糖2kg,氯化钠1kg,磷酸氢二钠1.5kg,消泡剂0.5kg,于机械搅拌通风发酵罐中37℃培养24h,100转/分钟,通气量为每小时通风10分钟,每立方发酵体积0.5立方除菌空气,得发酵液;
步骤六、按配比称取嗜低温白地霉1-3份,枯草芽孢杆菌1-3份,地衣芽孢杆菌1-3份,褐球固氮菌1-3.5,份植物乳杆菌0.5-1份混合在一起,即可制复合微生物发酵剂,其活性不小于1×1010cfu/ml。
步骤七、将步骤六中所得复合微生物发酵剂按照千分之五至千分之十比例添加至固体发酵原料中,固体发酵原料调整水分至55%-65%之间,固体发酵原料为秸秆、牛粪、或者秸秆和牛粪中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的一种生物有机肥发酵剂的制备方法,其特征在于,步骤七中,其中秸秆需进行机械粉碎预处理,粉碎长度不长于5cm,固体发酵原料中的牛粪,应为脱水牛粪,脱水后含水率应不高于65%。
5.根据权利要求3所述的一种生物有机肥发酵剂的制备方法,其特征在于,步骤七中,固体发酵原料含水率不足55%时,应用水体调配含水率至55%-65%之间;用于调配固体发酵原料的水体,当环境温度处于零下10℃至10℃之间时,则调水体为刚出厌氧发酵罐的水体,温度为20℃以上;当环境温度处于10℃以上,则调配发酵原料的水体温度为10℃以上。
6.根据权利要求3所述的一种生物有机肥发酵剂的制备方法,其特征在于,步骤七中,添加复合微生物菌剂、调配水体后的固体发酵原料,发酵环境温度处于零下10℃至10℃之间时,发酵时间为20-30天之间,每两日翻抛一次;发酵环境温度处于10℃以上时,发酵时间为15-20天之间,每日翻抛一次。
7.根据权利要求3所述的一种生物有机肥发酵剂的制备方法,其特征在于,步骤七中,添加复合微生物菌剂、调配水体后的固体发酵原料,达到发酵时间腐熟后,生物活性不低于1×108cfu/g。
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