CN112121072B - 一种凤尾蓍乙酸乙酯提取物的用途 - Google Patents

一种凤尾蓍乙酸乙酯提取物的用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种凤尾蓍乙酸乙酯提取物的用途,该凤尾蓍乙酸乙酯提取物是从凤尾蓍中经过70%乙醇热提取得到,通过体外细胞实验表明:该凤尾蓍乙酸乙酯提取物具有改善高糖损伤引起的肾病能力,它能显著地增加高糖诱导的高糖损伤小鼠肾足细胞(MPC‑5)模型的Na+‑K+‑ATP酶活性,显示出其具有调节多元醇通路,从而改善高糖损伤引起的肾脏病变。

Description

一种凤尾蓍乙酸乙酯提取物的用途
技术领域
本发明属于中药植物的生物活性领域,涉及一种凤尾蓍乙酸乙酯提取物的用途,具体涉及凤尾蓍乙酸乙酯提取物在制备治疗高糖损伤引起糖尿病肾脏病变的药物或辅助降血糖保健品中的用途。通过细胞实验证实它具有改善高糖损伤引起糖尿病肾脏病变的作用。
背景技术
凤尾蓍(Achillea filipendulina),双子叶植物纲菊科蓍属植物,又名蕨叶蓍、凤尾蓍草、黄花蓍草、欧蓍草、合叶蓍;产于高加索及中亚地区,该植物长约40-120厘米,夏季开花。
《本草纲木》记载:"蓍,长也。色黄为百药之长,故名。""味甘,微温,未毒,陇西者微补,白水者冷补,赤色者做膏,消肿。"蓍属由约130种植物组成。许多蓍属植物传统上被用作食物、草药茶及民间配方,用于治疗肝胆疾病、腹泻、腹胀、腹痛、肺炎、常肠胃不适、风湿性疼痛等。蓍属植物的抗病毒、抗疟疾、抗肿瘤、抗肝炎、抗凝血剂、抗炎、抗过敏和抗氧化活性被大量报道。凤尾蓍传统上被用作通经、祛痰、镇咳的治疗,该植物煎剂已用于治疗痛风、疟疾、关节炎、充血和心血管疾病。近来,有研究证实凤尾蓍精油及乙醇提取物具有较强的抗氧化、细胞毒性及酶抑制活性(α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、胆碱酯酶和酪氨酸酶)。
根据国际糖尿病联盟,全球约有4.25亿20至79岁的成年人患有糖尿病,预计2045年,全球将有6.28亿人,即每10个成年人中就有1人患有糖尿病。越来越多的糖尿病患者受到由糖尿病引起的并发症的影响,有些并发症影响日常活动和生活质量,而另一些并发症严重到危及生命的程度。
糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是由糖尿病引起的肾脏病变,其主要表现是从早期肾小球高滤过开始,随后是微量白蛋白到大量白蛋白尿的发展,随后肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)下降。糖尿病肾病约占糖尿病患者的40%,是全世界慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)的主要原因,也是终末期肾病(end stagerenal disease,ESRD)的主要原因。糖尿病患者全身脏器出现糖代谢障碍,而约50%的糖在肾脏代谢,加重肾脏的糖负荷导致肾脏损伤。
多元醇通路,又称山梨醇通路,是组织细胞葡萄糖代谢的重要途径,其通路异常是糖尿病肾脏病变重要发病机制之一。由醛糖还原酶(aldose reductase,AR)及山梨醇脱氢酶(sorbitol dehydrogenase,SDH)共同构成。醛糖还原酶主要存在于肾脏、晶状体、视网膜、及神经等组织中,多元醇通路的异常会导致醛糖还原酶活性增强,胞内Na+-K+-ATP酶活性下降。现有上市醛糖还原酶抑制剂依帕司他,但有时会伴随红斑、水疱、呕吐等过敏症状及胃部不适等副作用,且患者不能长期服用。
近年来,对肾小球滤过屏障结构和功能的研究主要集中于足细胞在DN发生发展中的作用。足细胞是附着在肾小球基底膜上的终末分化上皮细胞,相邻足细胞之间交替的足突构成间裂孔隔膜,在维持肾小球滤过屏障结构和功能的完整性方面起着重要作用。高糖诱导足细胞凋亡王,导致足细胞减少,引起蛋白尿,加速足突消失。
现目前对凤尾蓍的生物活性研究有抗氧化、抗肿瘤及酶抑制活性(α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、胆碱酯酶和酪氨酸酶),凤尾蓍关于糖尿病肾病的活性还未见报导。
发明内容
本发明的目的在于,提供一种凤尾蓍乙酸乙酯提取物的用途,该凤尾蓍乙酸乙酯提取物是从凤尾蓍中经过70%乙醇热提取得到,通过体外细胞实验表明:该凤尾蓍乙酸乙酯提取物具有改善高糖损伤引起的肾病能力,它能显著地增加高糖诱导的高糖损伤小鼠肾脏细胞(MPC-5)模型的Na+-K+-ATP酶活性,显示出其具有调节多元醇通路,从而改善高糖损伤引起的肾脏病变。
本发明所述的一种凤尾蓍乙酸乙酯提取物的用途,所述凤尾蓍乙酸乙酯提取物在制备治疗高糖损伤引起肾脏病变的药物中的用途。
一种凤尾蓍乙酸乙酯提取物的用途,所述凤尾蓍乙酸乙酯提取物在制备辅助降血糖保健品中的用途。
本发明所述的一种凤尾蓍乙酸乙酯提取物的用途,其中所述凤尾蓍乙酸乙酯提取物的提取方法:
a.取25g凤尾蓍,粉碎后,采用浓度为70%乙醇按质量体积比20倍量水浴加热回流,水浴温度60℃,提取2次,每次提取1.5小时,收集提取液;
b.将收集提取液进行减压蒸馏除去其中的乙醇,浓缩至糖浆状,温度45℃干燥,即得到凤尾蓍粗提物浸膏;
c.将凤尾蓍粗提物浸膏以1:15-1:20的料液比,用水分散后,依次用石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯萃取,将乙酸乙酯萃取液减压蒸至糖浆状,温度45℃干燥,得到凤尾蓍乙酸乙酯提取物。
本发明所述的一种凤尾蓍乙酸乙酯提取物的用途,通过体外酶学水平筛选,测定凤尾蓍乙酸乙酯提取物对醛糖还原酶(Aldose Reductase,AR)的抑制活性;并采用高糖诱导,构建小鼠肾足细胞(MPC-5)高糖损伤模型,检测细胞内Na+-K+-ATP酶活性,结合统计分析手段,根据对照组、高糖损伤组及给药组MPC-5细胞内Na+-K+-ATP酶活性变化,深入分析凤尾蓍乙酸乙酯提取物对糖尿病肾病的改善作用,结果表明:凤尾蓍乙酸乙酯提取物对小鼠肾足细胞(MPC-5)作用后,高糖损伤的小鼠肾足细胞(MPC-5),其多元醇通路中的Na+-K+-ATP酶活性显著升高,表明凤尾蓍乙酸乙酯提取物对于糖尿病肾脏病变具有明显的改善作用,可以在防治糖尿病肾病的药物中应用。
本发明所述的一种凤尾蓍乙酸乙酯提取物的用途,通过凤尾蓍乙酸乙酯提取物的干预治疗作用,揭示凤尾蓍乙酸乙酯提取物对高糖损伤诱导肾脏病变方面具有显著保护作用,为高糖损伤诱导肾脏病变提供了新途径,对于凤尾蓍进一步深入研究具有重要意义和价值,有很广阔的潜在市场价值和应用。
附图说明
图1为本发明不同浓度凤尾蓍乙酸乙酯提取物对小鼠肾足细胞(MPC-5)活力的影响;
图2为本发明不同浓度凤尾蓍乙酸乙酯提取物对小鼠肾足细胞(MPC-5)胞Na+-K+-ATP酶活力的影响图。
具体实施方式
实施例1
a.取25g凤尾蓍,粉碎后,采用浓度为70%乙醇按质量体积比20倍量水浴加热回流,水浴温度60℃,提取2次,每次提取1.5小时,收集提取液;
b.将收集提取液进行减压蒸馏除去其中的乙醇,浓缩至糖浆状,温度45℃干燥,即得到凤尾蓍粗提物浸膏;
c.将凤尾蓍粗提物浸膏以1:15-1:20的料液比,用水分散后,依次用石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯萃取,将乙酸乙酯萃取液减压蒸至糖浆状,温度45℃干燥,得到凤尾蓍乙酸乙酯提取物。
实施例2
将实施例1获得的凤尾蓍乙酸乙酯提取物用于生物活性筛选:
用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH),DL-甘油醛混合液作为底物,以在阳性药槲皮素为对照,利用酶标仪进醛糖还原酶的高通量筛选,根据定量且过量的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)存在时,以DL-甘油醛为底物,以检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)的减少来反映醛糖还原酶(Aldose Reductase,AR)的活性,酶反应体系组成如下,磷酸缓冲盐溶液(pH7.4),醛糖还原酶,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH),DL-甘油醛,醛糖还原酶特异抑制剂槲皮素(3.125μg/mL),反应体系混匀后闭光放置30min,置比色仪上测定340波长条件下的吸收值(A),测定结果减去本底值后计算酶活性;
抑制率(I%)=[(OD340空白-OD340样品)/OD340空白]×100%
筛选结果见表1:
Figure BDA0002769333720000031
结论:从实验结果表明,凤尾蓍乙酸乙酯提取物具有抑制醛糖还原酶活性的功效。
实施例3
将实施例1获得的凤尾蓍乙酸乙酯提取物对小鼠肾足细胞(MPC-5)活力影响检测:
小鼠肾足细胞接种于96孔板,8000个/孔,培养16小时使细胞贴壁后,更换培养基建立高糖损伤模型,对照组采用10%胎牛血清+100U/mL青霉素+100U/mL链霉素+11mmol/LD-葡萄糖1640培养基培养24小时,模型(高糖)组采用10%胎牛血清+100U/mL青霉素+100U/mL链霉素+30mmol/L D-葡萄糖1640培养基刺激24小时,给药组采用高糖刺激同时加入不同浓度凤尾蓍乙酸乙酯提取物培养24小时,24小时后,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐比色法(MTT)检测细胞活力;用Graphpad Prism统计分析,检验对照组与给药组统计学差异,研究表明:凤尾蓍乙酸乙酯提取物处理高糖损伤条件下MPC-5细胞24小时后,不同浓度与对照组相比,细胞活力均在100%附近,结果证明浓度为0-25μg/mL凤尾蓍乙酸乙酯提取物对MPC-5细胞没有毒性作用见表2:
Figure BDA0002769333720000041
结论:研究表明凤尾蓍乙酸乙酯提取物处理高糖损伤条件下小鼠肾足细胞(MPC-5)24小时后,不同浓度与对照组相比,细胞活力均在100%附近,结果证明浓度为0-25μg/mL凤尾蓍乙酸乙酯提取物对小鼠肾足细胞(MPC-5)没有毒性作用(图1)。
实施例4
细胞培养及构建小鼠肾足细胞(MPC-5)高糖损伤模型:
小鼠肾足细胞(MPC-5)细胞用含有10%胎牛血清、青霉素100U/mL、链霉素100U/mL的1640培养基(D-葡萄糖浓度:11mmol/L),在温度37℃、浓度5%CO2条件下培养,取小鼠肾足细胞(MPC-5)用于实验,其高糖损伤模型条件:正常组采用10%胎牛血清+100U/mL青霉素+100U/mL链霉素+11mmol/L D-葡萄糖1640培养基,高糖组采用10%胎牛血清+100U/mL青霉素+100U/mL链霉素+30mmol/L D-葡萄糖1640培养基放置培养箱培养48小时。
将实施例1获得的凤尾蓍乙酸乙酯提取物用于生物活性筛选:小鼠肾足细胞(MPC-5)接种于6孔板中培养16小时使其贴壁,更换培养基,条件:对照组采用10%胎牛血清+100U/mL青霉素+100U/mL链霉素+11mmol/L D-葡萄糖1640培养基培养48小时,模型(高糖)组采用10%胎牛血清+100U/mL青霉素+100U/mL链霉素+30mmol/L D-葡萄糖1640培养基刺激48小时,给药组采用高糖刺激24小时后加入不同浓度凤尾蓍乙酸乙酯提取物继续培养24小时,收集细胞,根据试剂盒方法检测细胞内Na+-K+-ATP酶活力见表3:
表3不同浓度凤尾蓍乙酸乙酯提取物对细胞Na+-K+-ATP酶活力结果:
Figure BDA0002769333720000051
结果显示,小鼠肾足细胞(MPC-5)高糖损伤后Na+-K+-ATP酶活力显著降低,Na+-K+-ATP酶活力正常组vs.造模组具有显著性差异(*P<0.05);在不同浓度凤尾蓍乙酸乙酯提取物给药24小时后,Na+-K+-ATP酶活力显著增强,6.25μg/mL剂量组vs.模型组具有极其显著性差异(***P<0.001),3.125μg/mL剂量组vs.模型组具有显著性差异(*P<0.05),结果表明:不同浓度凤尾蓍乙酸乙酯提取物在高糖损伤造成多元醇通路异常方面具有改善作用,并具有保护肾足细胞抗高糖损伤作用(图2)。

Claims (1)

1.一种凤尾蓍乙酸乙酯提取物的用途,其特征在于,所述凤尾蓍乙酸乙酯提取物在制备治疗高糖损伤引起肾脏病变的药物中的用途。
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