CN112118846A

CN112118846A - 治疗急性心力衰竭(ahf)用的含伊司他肟的静脉内制剂

Info

Publication number: CN112118846A
Application number: CN201980003356.1A
Authority: CN
Inventors: 朱塞佩·比安基; 帕特里齐亚·费拉里; 玛拉·佛兰迪; 保罗·巴拉西
Original assignee: Windtree Therapeutics Inc
Current assignee: Windtree Therapeutics Inc
Priority date: 2019-03-05
Filing date: 2019-11-12
Publication date: 2020-12-22
Anticipated expiration: 2039-11-12
Also published as: US20230293548A1; WO2020180356A1; US20210252017A1; US11583540B2; MX2021010483A; AU2019432709A1; KR20210136048A; SG11202108488SA; US11197869B2; IL285921A; JP2022523821A; WO2020180356A9; BR112021017009A2; JP7560134B2; CA3130261A1; EP3934654A1; US20220054502A1; CN112118846B

Abstract

本发明公开了用于在患有心力衰竭的人类患者中静脉内输注伊司他肟或伊司他肟代谢物的组合物。同样地，本发明公开了用于在患有心力衰竭的个体中延长输注伊司他肟或其代谢物的方法。具体来说，本文公开的某些方法包括输注伊司他肟或其代谢物大于6小时的时间段，以便在患有心力衰竭的个体中改善心脏松弛而不引发致心律失常事件。其他方法包括施用伊司他肟直至达到一定的伊司他肟代谢物血浆浓度阈值。还公开了具有选择性SERCA2a激活能力的伊司他肟代谢物。

Description

治疗急性心力衰竭(AHF)用的含伊司他肟的静脉内制剂

与相关申请的交叉引用

本申请要求2019年3月5日提交的美国临时申请号62/814,149的利益，所述临时申请的全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及制药学领域，具体来说涉及用于治疗急性心力衰竭的含有伊司他肟(istaroxime)的静脉内剂型。

背景技术

心力衰竭(HF)的发病率是年龄依赖性的，从60岁以下人群的低于2％到75岁以上人群的超过10％(Metra M,Teerlink JR,Lancet 2017；390:1981-1995)。大多数HF患者具有高血压、冠状动脉疾病、心肌病或瓣膜病或这些障碍的组合的病史(Metra M,TeerlinkJR,Lancet 2017；390:1981-1995)。发生HF的计算终生风险预期将会增加，并且患有高血压的人处于较高风险中(Lloyd-Jones DM等，Circulation 2002；106:3068–3072)。HF患者具有不良预后，并且住院率和死亡率较高。

HF的临床症状由心脏的双重病理特点引起，所述特点包括导致收缩期排空减少(收缩功能障碍)的变力性异常以及其中心室从静脉系统吸取血液的能力受损(舒张功能障碍)的顺应性异常，从而减少可用于收缩期收缩的血液的量，这是对左心室(LV)充盈的受损。无论HF的最初触发机制是什么，由作为主要的细胞内Ca²⁺储备的肌浆网(SR)的Ca²⁺摄取的减少引起的细胞内Ca²⁺的异常分布(Schwinger RH等，J Mol Cell Cardiol.1999；31(3):479-91；Bers D等，Ann N.Y.Acad Sci 2006；1080:165-177)，是收缩性和松弛受损的基础。这种异常的Ca²⁺分布涉及SR膜的Ca²⁺-ATP酶(SERCA2a)，这是一种ATP依赖的Ca²⁺转运泵。SERCA2a活性在生理上受其与受磷蛋白(PLN)相互作用的限制(Asahi M等，J Biol Chem1999；274:32855–32862；Toyoshima C等，Proc Natl Acad Sci U S A 2003；100:467–47；Bers DM.,Annu Rev Physiol 2008；70:23-49；MacLennan DH,Kranias EG.,Nat Rev MolCell Biol 2003；4(7):566-577)，SERCA2a的抑制通常通过PLN被蛋白激酶A(PKA)的磷酸化缓解，这是一种作为HF重塑的结果而被严重抑制的信号传导途径(Karim CB等，J Mol Biol2006；358:1032–1040；Lohse M等，Circ Res 2003；93:896-906；Bers DM,Physiology2006；21:380–387；Mann DL,Bristow MR,Circulation 2005；111:2837–2849)。心脏SERCA2a活性的缺乏被广泛认为是衰竭心肌的SR中Ca²⁺摄取减少的主要原因(Bers D等，AnnN.Y.Acad Sci 2006；1080:165-177；Bers DM,Physiology 2006；21:380–387；MinamisawaS等，Cell 1999；99:313–322)。

除了对肌细胞收缩性和松弛的影响之外，异常的Ca²⁺分布还促进心律失常(ZazaA&Rocchetti M,Curr Pharm Des 2015；21:1053-1061)，并且从长远来看，它通过凋亡加速肌细胞丧失(Nakayama H等，J Clin Invest 2007；117:2431-44)。SERCA2a功能的降低还增加收缩的能量成本，因为它需要通过Na-Ca交换器(NCX)补偿性地增加Ca²⁺的挤出，这降低了能量效率(Lipskaya L等，Expert OpinBiolTher 2010；10:29-41)。大量证据表明，SERCA2a功能的正常化恢复细胞内Ca²⁺稳态，并原位改善心肌细胞和心脏的收缩性和舒张(Byrne MJ等，Gene Therapy 2008；15:1550-1557；Sato等，J Biol Chem 2001；276:9392-99)。概括来说，HF中SERCA2a功能的恢复可以改善心脏松弛和收缩性，同时最小化心律不齐、心肌耗氧量和肌细胞死亡(Lipskaia L等，Expert OpinBiolTher.2010；10:29-41)。与SERCA2a激活的同时，Na,K-泵的抑制可以进一步增加细胞内Ca²⁺的含量，而不引起过度的胞质Ca²⁺积累(Shattock MJ等，J Physiol.2015；15；593(6):1361-82)。因此，Na,K-ATP酶抑制和SERCA2a刺激的组合可以在致心律失常的Ca²⁺触发事件的低风险下提供进一步的正性肌力。

当前的HF长期疗法的重点是防止“心肌重塑”和神经-激素风暴(β-阻断剂、ACE抑制剂、醛固酮拮抗剂)，这是对收缩性降低的长期适应不良性反应，放大了初始损伤并奠定了疾病演化的基础(Heineke J&Molkentin D,Nat Rev 2006；7:589-600)。尽管这种方法具有无可争议的优点，但它并没有针对受损的心脏“收缩性”和“松弛”，这是定义了HF并对其症状负责的功能性紊乱。实际上，特别是在疾病晚期阶段中，例如在患有急性心力衰竭(AHF)的患者中，提高心肌收缩性/松弛的药物(“变力性/松弛性药剂”)仍被广泛使用，并且对于AHF患者的管理是至关重要的(Metra M,Teerlink JR,Lancet 2017；390:1981-1995)。这些药物包括拟交感神经胺类(多巴酚丁胺)和具有强烈血管舒张效应的Ca²⁺敏化剂左西孟旦。不幸的是，这些药剂通过具有潜在有害成分的机制起作用，例如促进危及生命的心律失常，增加心肌耗氧量，并且在某些患者中，由于血管舒张引起的血压下降而造成已经不充分的冠状动脉血流受损(AshkarH&Makaryus AN,Dobutamine[更新于2018年10月27日]，InStatPearls[Internet],Treasure Island(FL):StatPearls Publishing,2018-Jan-2017(可在https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK470431/获得)；Gong B.等，JCardiothoracVascAnesth 2015；29:1415-25；EDITORIAL Patel PA等，Circ HeartFailure 2014；7:918-925)。这限制了这些药剂用于缓解AHF症状的用途，正如在指派给它们的美国和欧盟指南两者以及C级证据中明确指出的那样，所述C级证据是基于可用临床试验结果的最低水平的证据(Rigopoulus AG等，Herz 2017 Sep 22；Butler J等，Eur JHeart Fail.2018；20(5):839-841；Georghiade M等，J Am Coll Cardiol.2008；51:2276-85)。此外，这些药剂不改善患者的预后和存活率，并且它们的治疗用途必须被仔细监测(AshkarH&Makaryus AN,Dobutamine[更新于2018年10月27日]，InStatPearls[Internet],Treasure Island(FL):StatPearls Publishing,2018-Jan-2017(可在https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK470431/获得)；Gong B.等，J CardiothoracVascAnesth2015 29:1415-25)。

在正性肌力药物中，作为Na,K-ATP酶活性的抑制剂的强心苷地高辛在过去是最常用的处方药物之一。然而，它的使用过去几十年中一直在减少，这是由于难以将地高辛的血清浓度维持在地高辛显示出有益效应(0.5-0.7ng/ml)而不达到0.9ng/ml的阈值水平的范围内，在高于所述阈值水平的情况下观察到主要由心律失常造成的死亡风险的提高(Packer M,Journal of Cardiac Failure 2016；22:726-730；Packer M,Eur J HeartFailure 2018；20:851-852)。奥美坎替(OMECAMTIV MECARBIL)这种增加心脏收缩而不改善受损的松弛的心肌肌球蛋白激活剂，目前正在临床开发中，但其心脏效应还伴有高敏感性肌钙蛋白的血浆水平的升高，表明了一定程度的心肌细胞损伤/损坏(Teerlink JR等，J AmColl Cardiol.2016；67(12):1444-1455)。

对于具有除了正性肌力以外的其他作用机制的HF药物的开发，也正在进行着深入研究。接受最多研究并且正在临床开发的药剂是：塞拉新(serelaxin)——重组松弛素2介导物；乌拉立肽——重组利尿钠肽；BMS986231——NO供体；ADRECIZUMAB——肾上腺髓质抑制剂；ANX-042——NP的剪接变体；TD1439——Neprylisin(NEP)抑制剂。然而，当在2-3期临床试验中评估时，这些新药剂均尚未满足主要终点。

患有慢性心力衰竭(CHF)的患者的临床病程和预后在AHF发作后要差得多(Solomon SD等，Circulation 2007；116:1482-87；Teneggi V等，Hear Failure Rev 2018；23:667-691)。AHF可以被定义为心力衰竭的症状和征兆的新发作或复发，需要紧急评估和治疗并导致计划外护理或住院(Teneggi V等，Heart Failure Rev 2018；23:667-691；Packer M,Eur J Heart Failure 2018；20:851-852)。一半的AHF患者具有降低的收缩期功能(HFrEF)，代表了潜在疗法的靶点(Braunwald E.,Lancet 2015；385:812-24)。在射血分数降低(HFrEF)的患者中AHF的疗法聚焦于使用血管舒张药、利尿剂或超滤缓解充血或使用正性肌力药物提高心输出量。尽管这种治疗策略降低了心脏性猝死的风险，但在因AHF住院的患者中，出院后事件发生率仍然高得令人无法接受。所述可用的疗法可能会引起许多不想要的心血管副作用，例如由变力性药物疗法引起的心肌缺血、心脏损伤和心律失常，特别是在患有冠状动脉疾病(CAD)的患者中(Abraham WT等，J Am Coll Cardiol 2005；46:57–64；Flaherty JD等，J Am Coll Cardiol.2009；53(3):254-63)，由血管舒张药引起的低血压和外周器官(肾脏)的低灌注，特别是在具有低血压的HF患者中。因此，住院期间的主要目标是在不引起心脏和/或肾脏损伤的情况下改善心输出量。

此外，很少聚焦于检查或治疗受损的左心室(LV)舒张期松弛，所述受损的左心室(LV)舒张期松弛在其余50％的患有HF但保留(50)射血分数(HFpEF)或具有中程(40-49)降低的射血分数(HFmrEF或HFmEF)的患者中是导致HF症状的原因(Butler J等，Eur J HeartFail.2018；20,839–841；Bonsu KO等，Heart Failure Reviews 2018；23:147–156)。此外，EF降低的AHF患者也表现出心室松弛的受损，其造成心功能的整体衰竭。已开发了各种不同的超声心动图指标在动物模型和HF患者两者中测定心脏松弛能力(例如，早期二尖瓣环形组织速度[e']的降低和早期二尖瓣流入[E]减速时间[DT]的降低)，以及LV充盈压提高的超声心动图参数(例如E/e′比率)。尽管在某些动物模型和患者中单一指数变化的对应关系不能完美重叠，但它们在心室松弛受损的动物模型中的总体变化肯定可以转化为人类条件，并用于在AHF中研究药物效果(Shah SA等，Am Heart J 2009；157:1035-41)。

以前已研究了提高SERCA2a功能的各种不同的治疗方法。这些方法包括通过基因转移来过表达SERCA2a(Byrne等，Gene Therapy 2008；15:1550-1557)，或通过具有负面优势的突变体的表达(Hoshijima M等，Nat.Med.2002；8:864–871；Iwanaga Y等，J ClinInvest 2004；113,727–736)、AdV-shRNA(Suckau L等，Circulation 2009；119:1241–1252)、microRNA(

T等，PLoS One 2014；9:e92188)或抗体(Kaye DM等，J.Am.Coll.Cardiol.2007；50:253–260)来失活PLN。正如在HF中使用SERCA2a基因递送的最大的2b期临床试验(CUPID 2)中的阴性结果所强调的那样，这些方法在构建物递送(病毒载体等)和剂量调整方面存在重大问题，这些问题远未解决(Hulot JS,Eur Heart J 2016；19:1534-1541)。最近描述了一种在结构上不同于伊司他肟的减弱受磷蛋白对SERCA2a活性的抑制作用的小分子(吡啶酮衍生物)(Kaneko M等，Eur J Pharmacol 2017；814:1-7)，但没有关于患者的数据可用。

从现有技术的整体状况来看，并且尽管有30多年的试验和相关出版物，但因AHF症状而住院的患者的治疗仍主要是“基于经验”而非“基于证据”的(Rigopoulus AG等，Herz2017 Sep 22；Butler J等，Eur J Heart Fail.2018；20(5):839-841；Georghiade M等，JAm Coll Cardiol.2008；51:2276-85)。许多可用的药物在设计时都考虑到了抢救和症状缓解，而不必定针对和校正可能造成AHF症状的任何特定的潜在病理生理学/生化机制。

作为一般性范例，药物是通过与患者的分子/蛋白质相互作用而产生其想要或不想要的效应的分子。这些药物的治疗益处取决于它们选择性地校正构成所述疾病症状的基础的蛋白质的异常，而不是对具有不适合或甚至抗衡的活性的蛋白质的其他可能的影响。

在心力衰竭患者中，心脏SERCA2a活性的缺乏被广泛认为是心肌细胞松弛降低和对心律失常的敏感性增加的最重要原因之一(Bers D等，Ann N.Y.Acad Sci 2006；1080:165-177；Bers DM,Physiology 2006；21:380–387；Minamisawa S等，Cell 1999；99:313–322；Fernandez-Tenorio M&Niggli E.,J Mol Cell Cardiol.2018 Jun；119:87-95)。为此，潜在的能量匮乏的心脏衰竭状态可能会进一步加剧SERCA2a缺乏的后果(Ventura-Clapier R,Garnier A,Veksler V,Joubert F.,BiochimBiophysActa.2011Jul；1813(7):1360-72；Pinz I等，J Biol Chem 2011；286(12):10163–10168)。反过来，这两个原因，如果得到确认，可以得到适当解决。此外，200多年以来(第一份文献证据：没有列出作者，“洋地黄在水肿中的作用的解释”(An Account of the Effects of the Digitalis Purpureain Dropsy)，Lond Med J.1785；6:55-60)，随后被认识到通过整个Na-K泵的抑制而发挥作用的洋地黄，已被用于提高心脏的泵送活性，尽管存在一些不想要的副作用(例如心律失常或长期心肌细胞损害)(Hougen TJ,Friedman WF.,Am J Physiol.1982 Oct；243(4):H517-22；Whitbeck MG等，Eur Heart J.2013 May；34(20):1481-8)。后一种作用很可能是由心肌细胞胞质中Ca²⁺的增加造成的，其一方面可用于刺激收缩，但另一方面可能有利于上面提到的副作用，而SERCA2a活性的缺乏进一步增强所述副作用(Zaza A&Rocchetti M,CurrParmDes 2015:21:1053-1061)。因此，对这两个分子靶标具有组合的“选择性”效应的药物可能对患者有益，或者至少可以证明或反驳这两种分子机制的临床影响。

尽管在松弛或收缩方面具有不同缺乏程度的患者亚组的治疗反应和结果存在差异(Butler J,Eur J Heart Fail.2018；20,839–841；Bonsu KO等，Heart Failure Reviews2018；23:147–156)(考虑参数HFrEF HF、HFmEF或HFpEF，即射血分数减少的心力衰竭(＝<40)、射血分数中度减少(40至50)(m或mr)的心力衰竭和射血分数保留(>50)的心力衰竭)，但必须开发旨在为所述三个患者亚组评估对SERCA2a激活和Na-K泵抑制的两种活性的适合组合的治疗策略。

具体来说，对改进HFpEF患者中急性心力衰竭的疗法存在着强烈且到目前为止尚未满足的需求(Bonsu KO等，Heart Failure Reviews 2018；23:147–156)，对所述患者而言，尚未实现通过校正潜在的分子机制来改善舒张功能。

伊司他肟(PST 2744)被公开在EP0825197和De Munari S.等，J.Med.Chem.2003,64,3644-3654中，并且是化合物(3Z,5α)-3-[(2-氨基乙氧基)亚氨基]雄甾烷-6,17-二酮。伊司他肟是一种正在临床开发以用于治疗AHFS的新的小分子药物，其具有抑制Na⁺/K⁺泵(Micheletti R等，J Pharmacol Exp Ther 2002；303:592-600)并在同时激活SERCA2a(Rocchetti M等，J Pharmacol Exp Ther 2005；313:207-15)的双重作用机制。

在相同的变力性水平下，伊司他肟的促心律失常作用明显低于地高辛这种纯粹的Na-K泵抑制剂(Rocchetti M等，J Pharmacol Exp Ther.2005；313:207-15)。这表明，通过改善从细胞溶质中清除Ca²⁺(Alemanni,J Mol Cell Cardiol 2011；50:910-8)，SERCA2a刺激也可以最小化Na-K泵阻滞的促心律失常作用(Rocchetti M等，J Pharmacol Exp Ther2005；313:207-15；Zaza A&Rocchetti,M Curr Pharm Des 2015；21:1053-1061)，同时保留其变力性效应。在临床研究中，伊司他肟的促心律失常作用的降低已被证实(Georghiade M等，J Am Coll Cardiol 2008；51:2276-85)，其中伊司他肟作为连续的6小时输注进行施用。

在HF患者中，伊司他肟输注改善了收缩期和舒张期功能两者。收缩期功能的改善被检测为收缩组织速度(s')和收缩末期弹量的斜率(ESPVR斜率)的增加；舒张期顺应性的提高通过早期松弛组织速度(e')的增加和舒张末期弹量(EDPVR斜率)的降低来揭示(ShahSA等，Am Heart J 2009；157:1035-41)。

根据Gheorghiade在Horizon研究中描述的结果(Gheorghiade M等，J Am CollCardiol 2008；51:2276-85)，在该研究中伊司他肟被输注6小时，作为PCWP(肺毛细血管楔压)的降低连续测量的对舒张期松弛的改善的平台效应在输注3小时后发生，此后PCWP的水平保持恒定长达6小时。正如可以从平行的双重靶SERCA2a和Na-K泵预期到的，当提高伊司他肟的输注剂量时，对松弛和收缩的超声心动图指标的效应之间没有明显的分离。因此，当伊司他肟被输注长达6小时时，由SERCA2a激活造成的潜在有益效应不能与由Na-K泵抑制造成的潜在有害效应区分开。尽管在狗中的临床(Gheorghiade M等，J Am CollCardiol.2008；51:2276-85；Shah SA等，Am Heart J 2009；157:1035-41)和实验研究(Mattera GG等，Am J Cardiol 2007；99[suppl]:33A–40A)两者中已证实伊司他肟的SERCA2a刺激活性的存在大大降低了与Na-K泵抑制有关的促心律失常活性，但研究在临床结果方面仍不令人满意，特别是为了确保舒张期功能的适当改善和患者出院更安全。实际上，Gheorghiade和Shah的临床试验(Gheorghiade M等，J Am Coll Cardiol 2008；51:2276-85；Shah SA等，Am Heart J 2009；157:1035-41)发现，在6小时的输注结束时，与安慰剂相比，使用伊司他肟时LV收缩期性能的传统参数例如每搏量指数(SVI)和射血分数(EF))没有急剧变化，并且对舒张期松弛的作用的持续时间没有适当讨论。

其中伊司他肟被输注6小时的整个HORIZON研究(参见Gheorghiade M等，J AmColl Cardiol.2008；51:2276-85；Shah SA等，Am Heart J 2009；157:1035-41)显示，在0.5μg/Kg/min至1.5μg/Kg/min的剂量范围内收缩期收缩比舒张期松弛的改善更大。

预期通过“纯”SERCA2a激活剂将获得舒张期功能的改善。然而，尽管对发现旨在选择性激活SERCA2a的小分子或基因疗法进行了深入研究，但迄今尚未获得有希望的临床结果。

因此，对改进急性心力衰竭的治疗，特别是对改善舒张期功能，存在着长期以来的需求。本发明满足了上述需求并克服了现有技术的问题。

发明内容

令人吃惊地发现，长于6小时直至48小时或更长时间的伊司他肟的静脉内输注相对于6小时或更少时间的相同输注来说，提供了心舒张期松弛超声心动图指标的出人意料的改善，而从6小时到24小时的输注时间，收缩期收缩的超声心动图指标几乎不变。

本文描述了含有伊司他肟的药物组合物，其被配制成用于在人类对象中静脉内输注，以用于急性心力衰竭的治疗方法中。具体来说，所述通过输注的施用持续时间长于6小时，由此与通过持续时间为6小时或更短(例如3至6小时)的静脉内输注进行的伊司他肟施用相比，舒张期松弛得到改善。在某些实施方式中，所述舒张期松弛改善通过超声心动图参数E/A、E/e’或通过肺毛细血管楔压来测定。在某些实施方式中，所述输注持续时间长达约24小时。在其他实施方式中，它长达约36或48小时。在这些实施方式中，所述含有伊司他肟的药物组合物以0.2μg/kg/min至1.5μg/kg/min的剂量剂量施用，优选地，它以0.25μg/kg/min至1.0μg/kg/min的剂量剂量施用。

在某些实施方式中，所述含有伊司他肟的药物组合物被施用的持续时间足以产生至少约6小时的大于约5ng/ml的伊司他肟代谢物的血浆水平。具体来说，所述伊司他肟代谢物可以包含式(II)或式(III)的化合物，例如：

在某些实施方式中，所述人类对象患有射血分数保留(HFpEF)或射血分数中程降低(HFmEF)的心力衰竭和/或正经历使用一种或多种另外的治疗活性成分用于心力衰竭的治疗性疗法。

本发明的另一方面描述了一种具有式(II)或式(III)的化合物：

在某些实施方式中，所述具有式(II)或(III)的化合物被用于治疗需要激活SERCA2a的疾病例如心血管疾病。具体来说，所述化合物可用于治疗急性心力衰竭。在某些情况下，这些化合物被包含在与至少一种可药用介质和/或赋形剂的混合物中。

本文还公开了治疗患有心力衰竭的个体的方法，所述方法包括下述步骤：(1)提供患有心力衰竭的个体；(2)向所述个体施用治疗有效量的含有伊司他肟的药物组合物历时长于6小时的输注持续时间；以及(3)测量一种或多种心功能参数例如舒张期松弛。在这些方法中，与通过静脉内输注6小时或更少时间施用伊司他肟相比，施用所述药物组合物导致改善舒张期松弛，由此治疗所述患有急性心力衰竭的个体。在优选实施方式中，所述个体是人类。在特定实施方式中，所述输注持续时间长达约24小时。在其他实施方式中，所述输注持续时间长达约36小时。在其他实施方式中，所述输注持续时间长达约48小时。在这些方法中，所述伊司他肟可以以约0.2μg/kg/min至约1.5μg/kg/min的剂量施用。优选地，它以约0.25μg/kg/min至约1.0μg/kg/min的剂量施用。

在某些实施方式中，所述个体被诊断患有射血分数保留(HFpEF)或射血分数中程降低(HFmEF)的心力衰竭。在其他实施方式中，所述个体正经历使用一种或多种另外的治疗活性成分用于心力衰竭的治疗性疗法。

本文还描述了含有伊司他肟的药物组合物，其用于在个体中静脉内输注以治疗急性心力衰竭。在这些方面，所述施用历时足以在所述个体中产生伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约5ng/ml历时至少约6小时的累积期的输注持续时间，由此与在所述累积期之前施用伊司他肟相比，改善舒张期松弛。优选地，所述伊司他肟代谢物包括式(II)或(III)。

在某些实施方式中，所述输注持续时间足以产生伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约10ng/ml历时至少约6小时的累积期。在其他实施方式中，所述伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约15ng/ml历时至少约6小时的累积期。在其他实施方式中，所述伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约20ng/ml。在某些实施方式中，所述组合物以约0.2μg/kg/min至约1.5μg/kg/min、优选地约0.25μg/kg/min至约1.0μg/kg/min的剂量施用。

本发明的其他方面描述了治疗患有心力衰竭的个体的方法，所述方法包括下述步骤：(1)提供患有心力衰竭的个体；(2)向所述个体施用治疗有效量的含有伊司他肟的药物组合物历时足以产生伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约5ng/ml历时至少约6小时的累积期的输注持续时间；以及(3)测量一种或多种心功能参数，其中所述一种或多种心功能参数包括舒张期松弛。

在某些实施方式中，所述伊司他肟代谢物的血浆浓度水平大于约10ng/ml历时至少约6小时的累积期。在其他实施方式中，所述伊司他肟代谢物的血浆浓度水平大于约15ng/ml历时至少约6小时的累积期。在其他实施方式中，所述伊司他肟代谢物的血浆浓度水平大于约20ng/ml历时至少约6小时的累积期。所述组合物的治疗有效剂量在约0.2μg/kg/min至约1.5μg/kg/min之间，优选地0.25μg/kg/min至1.0μg/kg/min之间。

在本发明的另一方面，描述了一种治疗患有急性心力衰竭的个体的方法，所述方法包括下述步骤：(1)提供患有急性心力衰竭的个体；(2)测量一种或多种心功能参数，其中所述一种或多种心功能参数包括通过超声心动图参数E/A、E/e’或通过肺毛细血管楔压测定的舒张期松弛；以及(3)以至少约1.0μg/kg/min的剂量和足以在所述个体中改善舒张期松弛的持续时间向所述个体施用治疗有效量的含有伊司他肟的药物组合物。然后，在所述个体中改善舒张期松弛之后，以约0.25μg/kg/min至约1.0μg/kg/min的剂量和一定的输注持续时间向所述个体施用治疗有效量的含有伊司他肟的第二药物组合物，所述输注持续时间足以在所述个体中产生伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约5ng/ml历时至少约6小时的累积期。在这些方面，所述伊司他肟代谢物包含式(II)或(III)。

本发明的其他方面描述了治疗患有心力衰竭的个体的方法，所述方法包括：(1)提供患有心力衰竭的个体；(2)向所述个体施用治疗有效量的含有伊司他肟代谢物的药物组合物历时长于6小时的输注持续时间；以及(3)测量一种或多种心功能参数例如舒张期松弛。在某些方面，所述输注持续时间在6小时至48小时之间，剂量在约0.2μg/kg/min至约1.5μg/kg/min之间，优选地在约0.25μg/kg/min至约1.0μg/kg/min之间。在特定实施方式中，所述个体被诊断患有射血分数保留(HFpEF)或射血分数中程降低(HFmEF)的心力衰竭。

附图说明

参考下面的描述、权利要求书和附图，本公开的这些和其他特点和优点将被更好地理解，在所述附图中：

图1示出了在用安慰剂(白色菱形)输注的患者中，与以0.5μg/kg/min(深色菱形)、1.0μg/kg/min(正方形)和1.5μg/kg/min(三角形)的剂量进行6小时的伊司他肟输注相比，肺毛细血管楔压(PCWP)的变化的时间过程。X-轴表示平均PCWP(mmHg)，Y-轴表示时间(小时)。

图2A示出了在用0.5μg/kg/min伊司他肟静脉内输注24小时的高加索人患者中，伊司他肟(正方形)及其代谢物的血浆水平。所述代谢物是PST 2915(菱形)、PST 2922(圆形)和PST 3093(三角形)。X-轴表示血浆浓度(ng/ml)，Y-轴表示时间(小时)。

图2B示出了在用0.5μg/kg/min伊司他肟静脉内输注24小时的高加索人患者(左图)和中国人患者(右图)中，伊司他肟(正方形)及其代谢物的血浆水平。所述代谢物是PST2915(菱形)、PST 2922(圆形)和PST 3093(三角形)。X-轴表示血浆浓度(ng/ml)，Y-轴表示时间(小时)。

图2C示出了在用1.0μg/kg/min伊司他肟静脉内输注24小时的中国人患者中，伊司他肟(正方形)及其代谢物的血浆水平。所述代谢物是PST 2915(菱形)、PST 2922(圆形)和PST 3093(三角形)。X-轴表示血浆浓度(ng/ml)，Y-轴表示时间(小时)。

发明详述

本文公开的组合物和方法为患有心力衰竭的个体提供了出人意料的益处。本文中提供了包含伊司他肟或其代谢物的组合物。此外，正如本文中公开的，使用伊司他肟或其代谢物输注超过6小时选择性地改善心脏松弛超过心脏收缩。此外，伊司他肟输注时间可以被延长以允许其一种或多种代谢物的积累，所述代谢物中的至少一者表现出单功能SERCA2a激活(即作为“纯”SERCA2a激活剂起作用)。本文公开的组合物和方法将在下文更详细描述。

定义

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。除非另有说明，否则使用标准技术。尽管与本文描述的类似或等同的方法和材料可用于本公开的实践或测试，但是在下面描述了适合的方法和材料。材料，方法和实施例仅是说明性的，并不意图是限制性的。本文提到的所有出版物、专利和其他文献整体通过引用并入本文。

当在本文中使用时，没有具体数目的指称包括复数指称物，除非上下文另有明确指示。

术语“约”是指由用于获得测量的设备的典型错误率而造成的测量例如体积、时间、压力、浓度等的数值的变化。在一个实施方式中，术语“约”意味着在所报告的数值的5％以内，优选地，术语“约”意味着在所报告的数值的3％以内。

术语“心力衰竭”是指以典型症状(例如呼吸困难、踝关节肿胀和疲劳)为特征的临床综合征，并可能伴有由结构性和功能性心脏异常引起的征兆(例如颈静脉压升高、肺裂音和外周性水肿)，导致心输出量降低和/或休息时或应激期间心脏内压力升高。

术语“急性心力衰竭”或“AHF”在本文可互换使用，并且通常是指需要立即治疗和住院的HF的症状和/或征兆的快速发作或恶化。当前对“急性心力衰竭”的定义相当不特异，并可能包括以不同的临床表现、病因、诱发因素、治疗方法和预后为特征的具有几种表型的广范围的病症。另外，很大一部分患者具有亚急性疾病过程，并可能在入院前几天发生HF的征兆和症状的逐渐恶化。

术语“慢性心力衰竭”或“CHF”在本文中可互换使用，并且是指当前基于HF征兆和症状的存在以及左心室射血分数(LVEF)的慢性HF的临床分类，可分为三类：“射血分数降低的心力衰竭”或“HFrEF”，其特征是LVEF小于约40％；“具有中程射血分数的心力衰竭”或“HFmEF”或“HFmrEF”，其特征是LVEF为约40％至约49％；和“射血分数保留的心力衰竭”或“HFpEF”，其特征是LVEF等于或大于约50％。术语“HFmrEF”和“HFpEF”包括两个附加标准，即利尿钠肽水平升高(BNP>35pg/ml和/或NT-proBNP>125pg/mL)并伴有结构和/或功能性心脏病的证据(左心室肥大和/或左心房增大和/或舒张功能障碍的证据)。仅在“HFrEF”患者中证实了基于HF证据的药物的疗效，而在“HfpEF”患者中没有治疗表现出结果的显著改善。

术语“治疗”是指在疾病或病症的治疗或改善中成功的任何标志。治疗可以包括例如降低或减轻疾病或病症的一种或多种症状的严重性，或者可以包括降低个体例如人类患者所经历的疾病、缺陷、障碍或不利病症等的症状出现的频率。

术语“预防”是指在个体例如人类患者中预防疾病或病症例如急性心力衰竭。例如，如果具有发生心力衰竭的风险的个体用本发明的方法治疗并且以后不发生心力衰竭，则在该个体中所述疾病已得到预防。

术语“治疗或预防”有时在本文中用于指称导致疾病或病症的某种程度的治疗或改善的方法，并且设想了指向该目的的各种结果，包括但不限于所述病症的完全阻止。

当在本文中使用时，术语“可药用载体”意味着可以与伊司他肟化合物或伊司他肟的代谢物组合并且在组合后可用于将所述化合物施用到哺乳动物的化学组合物。

当在本文中使用时，术语“可药用”盐、溶剂化物、水合物或酯意味着活性成分的盐、溶剂化物、水合物或酯形式，其与所述药物组合物的任何其他成分相容，并且对所述组合物将要施用到的对象无害。

术语“静脉内输注”是指液体物质直接施用或递送到哺乳动物的静脉内。典型的“输注”仅仅利用由重力提供的压力。

当在本文中用于指称测量心功能时，术语“参数”意味着可以使用本领域中可用的适合测量技术观察或测量的任何心功能。心功能的示例性“参数”的非限制性名单包括心率、血压、舒张期松弛、收缩期收缩、LVEF、舒张压、收缩压、心输出量、每搏量、减速斜率、心指数、二尖瓣流入速度等。正如本领域普通技术人员将会认识到的，测量心功能的一种或多种“参数”可用于与平均正常参数相比检测心脏功能障碍，并且也可用于确定在治疗之后或期间心功能是否已被改善。

术语“治疗活性”或“活性”成分或化合物是指为物质被施用到的个体提供有益效果的物质。“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是组合物或活性成分的足以为所述组合物或活性成分被施用到的个体提供有益效果的量。

描述

本发明是基于下述出人意料的发现，即超过6小时的伊司他肟输注提供了主要松弛性的效果或心脏松弛降低的改善，正如由心脏松弛的超声心动图指标(E/A DTs、e’、E/e’和左心房面积或体积)的明显改变而收缩的指标(Sa和s)保持不变所示。在某些实施方式中，所述伊司他肟输注在约6小时直至48小时之间或更长时间，例如6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h、24h、25h、26h、27h、28h、29h、30h、31h、32h、33h、34h、35h、36h、37h、38h、39h、40h、41h、42h、43h、44h、45h、46h、47h、48h或更长时间。例如，所述输注可以长达24小时或长达36小时或长达48小时或更长时间。在其他实施方式中，所述输注的持续时间大于6小时并等于或小于约48小时，或大于6小时并等于或小于约36小时，或大于6小时并等于或小于约24小时，或大于6小时并等于或小于约12小时。应该理解，所述伊司他肟或其代谢物的输注与用伊司他肟或其代谢物进行为期6小时或更短时间例如0、1、2、3、5或6小时的输注相比，提供了主要松弛性的效果或心脏松弛降低的改善。

重要的是，四个独立数据组的分析确认了超过6小时的伊司他肟输注提供了主要松弛性的效果和心脏松弛的改善。首先，图1示出了用伊司他肟静脉内输注最长6小时的患者的PCWP时间过程。正如以前在用伊司他肟静脉内输注6小时的患者的HORIZON研究中所描述的，被专业技术人员认可为舒张期松弛的有效标志物的PCWP的时间过程变化，在最初3小时期间显示出舒张期松弛的改善，但随后平均PCWP达到平台并在随后的3小时中保持不变(参见图1)。换句话说，用伊司他肟输注6小时的患者在所述输注的3至6小时之间没有显示出舒张期松弛的改善。相反，静脉内输注施用伊司他肟24小时的患者从6至24小时表现出舒张期松弛的超声心动图指标的明显提高，而收缩期收缩的指标保持不变(参见表1A-1C)。此外，正如图2A-2C中所示，在6小时和24小时时间点时存在伊司他肟代谢物PST 3093的血浆浓度的逐渐和显著提高，而在整个该时间间期中伊司他肟的血浆浓度保持恒定。最后，PST3093的合成和随后的生物化学和药理学研究证实了这种化合物在远低于图2中所示的静脉内输注研究的浓度下具有选择性SERCA2a刺激活性(参见例如实施例2和表3)。此外，它在糖尿病性心肌病的大鼠模型中的输注伴有舒张期松弛的改善(参见表5)。根据Munafò等(Nature 2018,553(7689):399-401)，简单地重复单一实验是不够的，而是需要许多证据。因此，正是这四个独立发现之间的一致性本身，为超过6小时的伊司他肟输注与较短的输注时间相比提供主要松弛性的效果和心脏松弛的改善这一断言赋予了科学鲁棒性。

这些发现是完全出乎意料的，因为在整个输注持续时间的随后时间点期间，伊司他肟的血浆水平保持恒定(即在3小时时间点的约10ng/ml至约8ng/ml以内)。本发明人已发现，在人类中伊司他肟的这种延长输注产生浓度升高的伊司他肟代谢物PST 3093和PST2915，它们起到选择性或“纯”SERCA2a激活剂的作用。此外，PST 3093的这种选择性甚至更大，从而解释了改善舒张期功能超过收缩期功能的出人意料的效果。

因此，具有HFpEF或HFmEF的患者可以通过提高所述代谢物而不是伊司他肟的血浆水平，从受损的舒张期松弛的更加选择性的校正中获益。因此，尽管伊司他肟的血浆水平恒定，但最小化Na⁺/K⁺泵的抑制仍在心律失常或心肌细胞损害方面具有相关的不想要的效应。有利的是，临床结果是在治疗急性心力衰竭后患者出院更安全。

伊司他肟是一种变力性化合物，其具有下述结构式(I)：

在施用到哺乳动物例如人类后，伊司他肟被代谢成几种能够激活SERCA2a的代谢物。

伊司他肟的代谢途径如下所示：

因此，本文公开了具有SERCA2a活性的伊司他肟的代谢物，它们具有下述结构式(II)和(III)：

在优选实施方式中，具有选择性或“纯”SERCA2a活性的伊司他肟的代谢物(在这里被命名为PST 3093)是式(III)的化合物。

本发明人已经分离和表征了PST 2915和PST 3093。在具有糖尿病性心肌病的大鼠中，PST 3093的施用显示出改善的舒张期松弛和总体心功能，正如作为每搏量SV的增加所测定的。

因此，本发明的另一个目的在于利用式(II)的化合物或式(III)的化合物或它们相应的可药用盐或酯以及它们的不同水合物、溶剂化物、多晶型物形式的SERCA2a激活性质。本发明的另一个目的是式(II)或式(III)的化合物，其用作药物，特别是用于治疗需要SERCA2a的激活的疾病，更优选用于治疗心力衰竭或急性心力衰竭。

本文还公开了一种药物组合物，其包含与至少一种可药用介质和/或赋形剂混合的式(II)或式(III)的化合物。在优选实施方式中，所述药物组合物被配制成通过输注施用到个体，优选地，它通过静脉内输注施用。

本发明对心脏舒张期松弛的改善的令人吃惊的效果，可以从以前研究(HORIZON临床试验)的6小时输注与根据本发明的24小时输注之间心脏参数的比较，更好地认识到。所述研究的概述在下文描述，并且6小时输注、24小时输注和48小时输注时的数据分别概述在表1A、1B和1C中。

本文中描述了所述临床试验的概要：

根据国际标准对患者进行超声心动图检查(参见例如Lang RM等，J Am SocEchocardiogr 2005；18(12):1440-63；Nagueh SF等，Eur J Echocardiogr 2009；10(2):165-93；Evangelista A等，Eur J Echocardiogr 2008；9(4):438-48)。超声心动图检查由专业医师或超声检查师在现场完成。超声心动图检查在筛选、基线、输注开始后6小时、输注开始后24小时(输注即将结束之前)和输注开始后48小时进行。

在每个时间点为每位患者记录以下参数，并由CoreLab进行集中测量：

1.心脏维度测量：

a.左心室舒张末期直径(EDD)：使用M-模式超声心动图在二尖瓣(MV)小叶的高度处从胸骨旁长轴切面(PLAX)测量(正常范围[NR]：男性42-59mm，女性39-53mm)；

b.左心室收缩末期直径(ESD)：使用M-模式超声心动图在二尖瓣(MV)小叶的高度处从PLAX测量(NR：25-35mm)；

c.左心室舒张末期容积(EDV)：使用M-模式超声心动图在二尖瓣(MV)小叶的高度处从PLAX测量(NR：男性67-155mL，女性56-104mL)；

d.左心室收缩末期容积(ESV)：使用M-模式超声心动图在二尖瓣(MV)小叶的高度处从PLAX测量(NR：男性22-58mL，女性19-49mL)；

e.左心房直径(LAD)：在心室收缩末期使用M-模式超声心动图从PLAX测量(NR：男性30-40mm，女性27-38mm)；

f.左心房面积(LAA)：从心尖四腔切面测量(NR：≤20cm²)；和

g.左心房容积(LAV)：从心尖四腔切面测量的面积-长度推演(NR：男性18-58mL，女性22-52mL)。

2.左心室舒张期功能参数：

a.E波：从二尖瓣脉冲波多普勒测量，是早期充盈的峰值速度。所有舒张期参数的正常范围随年龄显著变化；

b.A波：从二尖瓣脉冲波多普勒测量，是心房晚期充盈的峰值速度。在AF患者中无法评估；

c.E波减速时间(EDT)：从二尖瓣脉冲波多普勒测量，代表了E波下降部分的斜率；

d.E/A比率：确定了舒张期充盈模式的类型(正常E/A＝1-2并且EDT＝150-200ms，异常松弛E/A<1并且EDT≥240ms，假正常E/A＝0.8-1.5；限制性E/A≥2并且EDT<160ms)。在AF患者中无法评估；

e.Ea：使用组织多普勒法在二尖瓣环的外侧和中隔侧从心尖四腔切面测量，是舒张早期速度。所述值被计算为Ea外侧和Ea中隔侧之间的平均值。(NR≥10cm/s)(参见NaguehSF等，Eur J Echocardiogr.2009；10(2):165-93)；

f.Aa：使用组织多普勒法在二尖瓣环的外侧和中隔侧从心尖四腔切面测量，是心房舒张晚期速度。所述值被计算为Aa外侧和Aa中隔侧之间的平均值。在AF患者中无法评估；和

g.E/Ea比率：这是从E和Ea值推演的测定值。它与左心室充盈压和HF患者的预后高度相关。(NR：<13)(参见Nagueh SF等，同上)。

3.左心室收缩期功能参数：

a.左心室射血分数(LVEF)：根据国际推荐方案，使用辛普森双平面法从心尖四腔切面和心尖二腔切面测量。(NR≥55％)(参见Lang RM等，J Am Soc Echocardiogr.2005；18(12):1440-63)；和

b.Sa：使用组织多普勒法在二尖瓣环的外侧和中隔侧从心尖四腔切面测量。所述值被计算为Sa外侧和Sa中隔侧之间的平均值。验证研究证实Sa与LVEF相关(NR≥6cm/s)(参见Gulati VK等，Am J Cardiol.1996；77(11):979-84)。

4.总体心脏收缩参数：

a.每搏量(SV)：是使用左心室流出道(LVOT)的维度作为直径并使用LVOT时间速度积分作为速度，应用伯努利公式获得的推演量度。(NR>60mL/搏)；

b.心输出量(CO)：通过SV x心率(HR)的乘积来推演(NR：>4L/min)；

c.每搏量指数(SVI)：是通过用身体表面积(BSA)调整SV而获得的推演参数(NR：33-47mL/搏/m²)；和

c.心指数(CI)：是通过用身体表面积(BSA)调整CO而获得的推演参数(NR：2.5-4L/min/m²)。

5.右心室功能参数：

a.肺动脉收缩压(PASP)：通过三尖瓣连续波多普勒的峰值速度和从下腔静脉直径和呼吸变化推演的固定值之和来估算。(NR<35mmHg)；

b：三尖瓣环平面收缩期偏移(TAPSE)：使用M-模式超声心动图从心尖四腔切面测量。TAPSE与右心室射血分数相关，并且它的降低与HF中的更糟预后相关。(NR>16mm)(参见Ghio S等，J Am Coll Cardiol 2001；37(1):183-8)；和

c.右心室Sa：使用组织多普勒法在右心室游离壁处从心尖四腔切面测量。Sa是收缩期功能的推演参数，并且与右心室射血分数相关。(NR>10cm/s)(参见Voelkel NF等，Circulation 2006；114(17):1883-91；Haddad F等，Circulation 2008；117(13):1717-31)。

6.其他参数：

a.二尖瓣返流(MR)：使用视觉定性评估进行评估，并分为四类：无，轻度，中度和重度(参见Lancellotti P等，Eur J Echocardiogr 2010；11(4):307-32)；和

b.下腔静脉直径(IVC)：使用M-模式超声心动图，在距右心房交界处1-2cm处从肋下切面测量。该参数已被用于估算收缩期肺动脉压。它与右心房压力相关，指示了充血程度。IVC直径增加与HF患者中的预后有关(NR：≤1.5cm)(参见Pellicori P等，JACCCardiovasc Imaging 2013；6(1):16-28；Voelkel NF等，Circulation 2006；114(17):1883-91)。

表1A.输注6小时时的心脏变化

表1B.输注24小时时的心脏变化

表1C.输注48小时时的心脏变化

人类血浆中PST 2744及其代谢物PST 2915的定量测定通过HPLC-MS/MS方法来确定，所述方法包括70:30的乙腈/水，1mL/L 1M甲酸和1mL/L 5M乙酸铵的流动相。流速为1mL/min，并且色谱分离通过反相HPLC来进行(柱：SYNERGI 4μPOLAR-RP80A 150x 4.6mm，装备有Phenomenex Polar-RP 4x3mm保护柱)。检测通过MS/MS来进行，采集模式为多反应监测(MRM)。

人类血浆中伊司他肟代谢物PST 2922和PST 3093的定量测定也通过HPLC-MS/MS方法来测量。在这种情况下，流动相是50:50的H₂O/CH₃CN(v/v)和500μL/L 98-100％HCOOH。流速为1mL/min，并且层析分离通过反相HPLC在等度条件下进行(柱：Phenomenex Phenylhexyl，150x4.6mm，装备有Phenomenex phenyl propyl保护柱)。检测通过MS/MS进行(对于PST2922来说376.0→282.0amu，对于PST 3093来说378.0→284.0amu，对于PST 3418来说362.0→268.0amu，IS)。

表1A中报告的数据清楚地表明，以0.5μg/kg/min或1μg/kg/min输注伊司他肟不显著改善大多数被改变的超声心动图舒张期功能参数(E、A波、E/A比率)，只有在0.5μg/kg/min下E/e’发生显著降低。在1μg/kg/min下收缩期功能(Sa和S波)得到改善。

令人吃惊的是，当伊司他肟被输注24小时时，对大多数舒张期功能参数(E和A波、E/A和E/e’比率)观察到明显且统计学显著的改善，而对收缩期功能(Sa和S波)的正效应得以维持但不继续提高(参见表1B)。在48小时时，CO和CI变化两者相对于安慰剂仍显著提高(参见表1C)。从6和24小时时SV和SVI变化的增加转变到48小时时CO和CI的变化，也得益于6和24小时时降低的HR的正常化，这一点在以前的Horizon研究中证实并在本研究中得到确认。心脏松弛和收缩的其他指数的变化仍然存在，但没有达到统计显著。

图2A-2C示出了在用0.5或1μg/kg/min的伊司他肟输注24小时期间和之后，高加索人和中国人患者中伊司他肟及其代谢物的血浆浓度。在输注期间，伊司他肟(2744)和伊司他肟代谢物PST 2922两者保持相对恒定，并在输注停止后被快速清除。另一方面，在整个输注期间伊司他肟代谢物PST 2915和PST 3093继续在血浆中积累，到输注期结束时PST 3093的平均浓度超过60ng/mL，并且甚至在输注后70小时或46小时，平均浓度水平超过10ng/mL。

值得注意的是，在输注48小时时，在20小时后伊司他肟的血浆水平不可检测，而代谢物PST 3093的平均血浆水平，在高加索人患者中在0.5μg/kg/ml伊司他肟输注后为约25.02ng/ml，在中国人患者中在0.5μcgμg/kg/ml伊司他肟输注后为约12.5ng/ml，在1μg/kg/ml伊司他肟输注后为约21.2ng/ml(参见图2A-2C)。这些浓度远高于在来自于正常犬心的SR囊泡中表现出SERCA2a刺激活性的3093的浓度，正如表3中所示。此外，根据Ferrandi M等(BJP 2013；169:1849-1861)，伊司他肟在来自于衰竭犬心的SR囊泡中发挥其最大SERCA2a激活作用的浓度远低于(约10倍)能够在来自于健康犬心的SR囊泡中刺激这种活性的浓度。因此，有可能对于PST 3093来说也会出现这种正常和衰竭心脏SR囊泡之间的显著差异，其甚至在72小时时检测到的较低浓度下也可继续维持它的SERCA2a刺激活性(参见图2A-2C)，此时没有超声心动图数据可用。

尽管不希望受到理论限制，但上文讨论的观察结果与纯SERCA2a激活剂可以改善心脏泵功能的假设相一致。最后，这种心脏泵功能的功效变化与HsTnT的血浆水平的任何显著变化无关，所述Hs TnT的血浆水平被心脏病学家认为是心肌损伤的最可靠的生物标志物。Hs TnT变化的这种缺乏可能是由SERCA2a的激活造成的，其通过降低心肌细胞的胞浆Ca²⁺浓度，也使心肌细胞的损害最小化。目前，正在开发的唯一可用变力性药剂(奥美坎替)对心脏泵血能力的刺激伴有Hs TnT血浆水平的提高，并且正在研究不同的开发策略以检测将这些胞浆HsTnT的变化降至最低的剂量(Teerlink J R等，2016 Lancet 388,2895-903)。

本发明可以为计划适当的试验提供基础，所述试验旨在评估可以通过改变伊司他肟输注的剂量和持续时间而实现的PST 3093与伊司他肟的血浆水平之间的不同比例，是否可以为HFpEF或HFmEF患者带来比HFrEF患者更大的治疗益处，或者在具有或不具有揭示出舒张受损状态的超声心动图指标的患者中带来更大的治疗益处，由此提高了AHF治疗方法的精确性。

药物组合物

用于静脉内输注的包含与至少一种常规可药用载体和/或介质和/或赋形剂混合的伊司他肟或其代谢物的药物组合物和制剂，在本领域中是公知的。

所述用于静脉内输注的药物组合物和制剂可以以任何方式配制并且可以以各种不同的单位剂型施用，这取决于所述病症或疾病和患病程度、每位患者的总体医学状况、产生的优选施用方法等。关于制剂和施用的技术的详情已在科学和专利文献中充分描述，参见例如最新版的《Remington制药学》(Remington's Pharmaceutical Sciences)，MackPublishing Co,Easton PA。

所述制剂可以方便地存在于单位剂型中，并且可以通过药学领域中已知的任何方法来制备。可以与载体或介质材料合并以生产单一剂型的活性成分的量，将随着待治疗的对象和具体施用方式而变。可以与载体材料合并以生产单一剂型的活性成分的量通常是所述化合物的产生治疗效果的量。

本文中提供的药物制剂可以按照本领域中已知的用于制造药物的任何方法来制备。这些制剂可以含有另外的试剂，例如防腐剂或稳定剂。可以将制剂与适合于制造的无毒性可药用载体或赋形剂混合。制剂可以包含一种或多种稀释剂、乳化剂、防腐剂、缓冲剂、赋形剂等，并且可以以诸如液体、粉末、乳液、冻干粉等的形式提供。

水性悬液可以含有与适于制造水性悬液的赋形剂混合的活性药剂(例如用于实践本文提供的用途和方法的组合物)。此类赋形剂包括悬浮剂例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基-甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄芪胶和阿拉伯胶，以及分散剂或润湿剂例如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如十七氧化乙烯十六醇)、环氧乙烷与源自于脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)或环氧乙烷与源自于脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯)。所述水性悬液还可以含有一种或多种防腐剂例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯。可以调节制剂的渗透压。

根据本发明，伊司他肟通过静脉内(IV)施用来提供。这些制剂可以包含活性药剂溶解在可药用载体中的溶液。可以使用的可接受的介质和溶剂是水、右旋糖水溶液和林格溶液、等渗氯化钠。这些溶液是无菌的，并且通常不含不想要的物质。这些制剂可以通过常规的公知除菌技术除菌。所述制剂可以含有近似生理条件所需的可药用辅助物质例如pH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂，例如乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。这些制剂中活性药剂的浓度可以广泛变化，并且将主要根据流体体积、粘度、体重等，根据所选的具体施用方式和患者的需要来选择。所述施用通过快速浓注或连续输注(例如基本上不间断地引入到血管中规定的时间长度)来进行。

本文中提供的伊司他肟可以被冻干。本文提供了包含本文中所提供的组合物的稳定的冻干制剂，其可以通过将包含本文中所提供的药物和增量剂例如甘露糖醇、海藻糖、棉子糖和蔗糖或其混合物的溶液冷冻干燥来制造。存在许多其他的常规冻干试剂。在糖中，乳糖是最常用的。还使用柠檬酸、碳酸钠、EDTA、苯甲醇、甘氨酸、氯化钠等(参见例如Journalof Excipients and Food Chemistry Vol.1,Issue 1(2010)pp 41-54；美国专利申请号20040028670)。在优选实施方式中，可以按照CN103315968的教授将伊司他肟制备成注射用粉剂。

根据本发明，可以施用本文中所提供的伊司他肟用于预防性和/或治疗。在治疗性应用中，将组合物施用到已患有病症或疾病的对象，其量足以治疗、预防、治愈、缓解或部分停止所述病症或疾病及其并发症的临床表现(即“治疗有效量”)。例如，在可选实施方式中，本文中所提供的药物组合物以足以在需要的个体中治疗、预防或改善的量施用。足以实现这一目的的药物组合物的量被定义为“治疗有效剂量”。对这种用途有效的施用时间表和量即“施用方案”取决于各种不同的因素，包括所述疾病或病症的阶段、所述疾病或病症的严重性、患者健康的总体状态、患者的身体状况、年龄等。在为患者计算施用方案时，也应将施用方式考虑在内。

所述施用方案也将本领域中公知的药代动力学参数考虑在内，即活性药剂的生物可利用性、代谢、清除等(参见例如Hidalgo-Aragones J.,SteroidBiochem.Mol.Biol.1996；58:611-617；Groning,Pharmazie 1996；51:337-341；FotherbyContraception 1996；54:59-69；Johnson,J.Pharm.Sci.1995；84:1144-1146；Rohatagi,Pharmazie 1995；50:610-613；Brophy,Eur.J.Clin.Pharmacol.1983；24:103-108；最新的《Remington制药学》，同上)。当前技术水平允许临床医生为每个个体患者、活性药剂和待治疗的疾病或病症确定施用方案。为用作药物的类似组合物提供的指南可以用作指南，来确定实践本文中所提供的方法施用的施用方案、即施用时间表和剂量水平是正确和适合的。

取决于患者的AHF临床症状所需的剂量和频率，可以提供制剂的单次或多次施用。所述制剂应该提供足够量的活性药剂，以有效地治疗或预防或改善本文中所描述的病症、疾病或症状。通过选择性地使构成患者亚群(HFpEF或HFmEF)症状的基础的降低的生物化学活性正常化，AHF的正确治疗可能有望选择性地改善所述症状，并在住院期间或出院后降低可用药物产生的不良副作用的发生率。当可以使用提供和估算PCWP的适合的长期可植入设备对肺压进行连续监测时，术语“预防”是适用的。在这种情况下，PCWP的显著增加可能在AHF的症状出现之前，从而为以正确的剂量输注伊司他肟以防止症状和随后的住院治疗提供了理论基础。

在一个实施方式中，施用到需要的个体的伊司他肟的有效量或其可药用盐、溶剂化物或水合物的等同量包括使用各种不同的施用计划，例如约0.1μg/kg/min至约3.0μg/kg/min，例如0.1μg/kg/min、0.15μg/kg/min、0.2μg/kg/min、0.25μg/kg/min、0.3μg/kg/min、0.35μg/kg/min、0.4μg/kg/min、0.5μg/kg/min、0.6μg/kg/min、0.7μg/kg/min、0.8μg/kg/min、0.9μg/kg/min、1.0μg/kg/min、1.1μg/kg/min、1.2μg/kg/min、1.3μg/kg/min、1.4μg/kg/min、1.5μg/kg/min、1.6μg/kg/min、1.7μg/kg/min、1.8μg/kg/min、1.9μg/kg/min、2.0μg/kg/min、2.1μg/kg/min、2.2μg/kg/min、2.3μg/kg/min、2.4μg/kg/min、2.5μg/kg/min、2.6μg/kg/min、2.7μg/kg/min、2.8μg/kg/min、2.9μg/kg/min或3.0μg/kg/min。例如，在某些实施方式中，伊司他肟或其代谢物(例如PST 3093)以约0.2μg/kg/min至约2.0μg/kg/min或约0.2μg/kg/min至约1.5μg/kg/min或约0.25μg/kg/min至约1.0μg/kg/min或约0.5μg/kg/min至约1.0μg/kg/min的有效剂量通过输注施用。

在可选实施方式中，施用到需要的个体的伊司他肟的有效量或其可药用盐、溶剂化物或水合物的等同量，根据基础水平以及随后某些心功能参数的变化进行个性化设置，所述参数例如超声心动图指数或肺毛细血管楔压(PCWP)、呼吸困难、外周和肺静脉充血、尿量、血清生物标志物例如NT-proBNP和高敏感性心肌钙蛋白(hs-cTnT)。

在可选实施方式中，通过PCWP、端坐呼吸、阵发性夜间呼吸困难的减少，周围和肺静脉充血例如肺爆裂音或罗音的减少，踝关节肿胀的减少，尿排出量和生物标志物例如NT-proBNP和高敏感性心肌钙蛋白(hs-cTnT)的减少，来证实有效量。

治疗方法

本文中还提供了治疗患有心力衰竭的个体的方法。在优选实施方式中，所述个体表现出急性心力衰竭的症状或已被诊断患有急性心力衰竭。尽管所述个体可以是非人类动物，但在优选实施方式中，所述个体是人类患者，例如患有心力衰竭的人类患者。

通常，本文中描述的组合物可用于治疗患有心力衰竭或急性心力衰竭的个体。在实施方式中，所述治疗方法包括提供或呈现患有心力衰竭或急性心力衰竭的个体。在某些情况下，首先进行测量步骤以确定所述个体的基线心功能。例如，患有心力衰竭的个体可能表现出舒张期松弛功能受损或降低。所述测量步骤可以包括测量心力衰竭的一种或多种参数，例如但不限于心率降低、心脏压力降低、收缩和/或舒张压降低、左心室舒张/收缩末期容积和功能(LVEF)下降或E/Ea或E/A比率提高、Ea比率降低、每搏量降低。正如本领域普通技术人员将会认识到的，本领域中可以在测量步骤时使用的任何适合的测量技术均适合用于本发明，并且选择与感兴趣的参数相对应的适合的测量技术，完全在这些本领域技术人员的能力范围之内。适合的测量设备/技术的非限制性名单包括超声心动图、心脏导管插入术、核压力测试、CAT扫描、放射性核素心室描记扫描、听诊器、血压计等。例如，可以通过超声心动图或PCWP测量舒张期松弛。

本文公开的方法还包括向所述个体施用治疗有效量的伊司他肟或其代谢物例如PST 3093。在优选实施方式中，所述伊司他肟或伊司他肟代谢物在药物组合物中，例如上文讨论的组合中的任一者。所述伊司他肟或伊司他肟代谢物以本文中别处所公开的治疗有效剂量施用，例如约0.25μg/kg/min至约1.0μg/kg/min之间。在更优选实施方式中，施用途径是输注例如静脉内输注。所述测量步骤可以在所述施用步骤之前、期间或之后进行。例如，可能希望在治疗期间或其后一段时间继续监测一种或多种心功能参数。

正如上文讨论的，已令人吃惊地发现，通过输注持续时间长于6小时例如6.1h、6.2h、6.3h、6.4h、6.5h、6.6h、6.7h、6.8h、6.9h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h、24h、25h、26h、27h、28h、29h、30h、31h、32h、33h、34h、35h、36h、37h、38h、39h、40h、41h、42h、43h、44h、45h、46h、47h或48h或更长时间的输注来施用伊司他肟(或其代谢物)，引起SERCA2a活性的提高和舒张期松弛的改善，而不引起由例如Na⁺/K⁺泵抑制造成的致心律失常效应。通过这种方式，长于6小时的伊司他肟输注表现出在变力性活性上占优势的松弛性-SERCA2a活性，并且与短于6小时的伊司他肟输注相比引起舒张期松弛的改善。

尽管不希望受到理论限制，但据信这种较晚时候升高的“纯”SERCA2a激活是由所述个体的血浆中伊司他肟代谢物的积累造成的。因此，在某些实施方式中，将伊司他肟通过静脉内输注施用一段足以使伊司他肟代谢物能够在所述个体的血浆中积累的时间。在优选实施方式中，所述输注持续时间足以允许一种或多种伊司他肟代谢物的积累，优选地，所述代谢物是具有结构式(II)的PST 2915或具有结构式(III)的PST 3093，更优选地，所述代谢物是PST 3093。在某些实施方式中，伊司他肟代谢物在血浆中的积累是处于至少约3ng/mL例如3ng/mL、4ng/mL、5ng/mL、6ng/mL、7ng/mL、8ng/mL、9ng/mL、10ng/mL、11ng/mL、12ng/mL、13ng/mL、14ng/mL、15ng/mL、16ng/mL、17ng/mL、18ng/mL、19ng/mL、20ng/mL、21ng/mL、22ng/mL、23ng/mL、24ng/mL、25ng/mL、26ng/mL、27ng/mL、28ng/mL、29ng/mL、30ng/mL、35ng/mL、40ng/mL、45ng/mL、50ng/mL或更高的浓度至少约3小时例如3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h、24h或更长的一段时间。在一个实施方式中，所述伊司他肟代谢物在伊司他肟输注开始的6小时内、优选地3小时内或2小时内或1小时内在血浆中积累到所需浓度，并且维持在等于或高于该浓度至少另外约3小时，例如另外3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24小时或更长时间，优选地至少另外6小时，更优选地至少另外约12小时。在某些实施方式中，所述代谢物的所需血浆浓度是至少约5ng/mL。在另一个实施方式中，所述伊司他肟代谢物在血浆中积累到至少约10ng/mL的浓度，并维持在等于或高于该浓度至少另外约6小时，优选地至少另外约12小时。在又一个实施方式中，所述伊司他肟代谢物在血浆中积累到至少约15ng/mL的浓度，并维持在等于或高于该浓度至少另外约6小时，优选地至少约另外12小时。在某些实施方式中，在伊司他肟施用完成后，所述代谢物的血浆浓度保持高于5ng/mL至少约6小时。在某些实施方式中，在伊司他肟施用完成后，所述代谢物的血浆浓度保持高于10ng/mL至少约6小时。在其他实施方式中，在伊司他肟施用完成后，所述代谢物的血浆浓度保持高于20ng/mL至少约6小时。在其他实施方式中，在伊司他肟输注后，所述浓度保持至少约30ng/mL、40ng/mL或50ng/mL另外6小时或更长时间，例如6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19、20h、21h、22h、23h、24h或更长时间。例如，在伊司他肟输注后，所述代谢物积累可以在至少约10ng/mL的浓度水平下保持另外12小时或更长时间，例如12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19、20h、21h、22h、23h、24h、25h、26h、27h、28h、29h、30h、31h、32h、33h、34h、35h、36h、37h、38h、39h、40h或更长时间。

正如本领域普通技术人员将会认识到的，伊司他肟或伊司他肟代谢物的血浆浓度可以通过常规手段例如通过HPLC-MS/MS来测量。

在某些实施方式中，所述伊司他肟代谢物具有结构式(II)或(III)：

在优选实施方式中，所述伊司他肟的代谢物是化合物PST 3093。

在另一个实例中，个体被诊断患有心力衰竭或急性心力衰竭，并施用约0.25μg/kg/min至约1.0μg/kg/min的伊司他肟长于6小时的一段时间。随着伊司他肟被所述个体代谢，伊司他肟代谢物例如PST 3093开始在所述个体的血浆中积累。例如，伊司他肟代谢物PST 3093可以在伊司他肟输注的3小时内积累到至少约5ng/mL的血浆浓度，并在伊司他肟输注期间和随后6至约36小时维持在至少约5ng/mL的血浆水平。充当“纯”SERCA2a激活剂的PST 3093的存在使所述个体的舒张期松弛改善。

在某些实施方式中，所述治疗方法可以包括与伊司他肟相组合或代替伊司他肟通过输注施用伊司他肟代谢物。例如，公开了一种治疗患有心力衰竭的个体的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的包含可药用载体和具有式(II)或(III)的伊司他肟代谢物的药物组合物。在优选实施方式中，PST 3093或PST 2915是所述代谢物，更优选地，它是PST 3093。这些方法可以包括测量步骤，其中使用本领域中可用的测量技术来测量一种或多种心功能参数。所述测量个步骤可以在所述药物组合物的施用之前、期间或之后进行。在这些方法中，PST3093的治疗有效剂量在约0.2μg/kg/min至约2.0μg/kg/min之间，优选地在约0.3μg/kg/min至约1.5μg/kg/min之间，更优选地在约0.5μg/kg/min至约1.0μg/kg/min之间。在这些方法中，输注持续时间将长于6小时，例如6.1h、6.2h、6.3h、6.4h、6.5h、6.6h、6.7h、6.8h、6.9h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h、24h、36h、48h或更长时间。

在某些实施方式中，希望使用两种或更多种伊司他肟施用方案治疗患有急性心力衰竭的个体，以在开始时治疗急性心力衰竭症状，并随后使与更慢性的心力衰竭病症相关的心功能缺陷正常化。在这些实施方式中，通过在开始时通过输注施用较高剂量的伊司他肟以治疗急性心力衰竭症状，随后通过输注施用较低剂量的伊司他肟较长的持续时间以允许伊司他肟代谢物的积累，对所述施用方案进行操控以控制伊司他肟与代谢物的比率。通过这种方式，初始的输注允许快速的SERCA2a刺激和Na,K-ATP酶抑制，产生快速的正性肌力以治疗急性心力衰竭症状，而所述第二轮输注允许选择性激活SERCA2a的伊司他肟代谢物PST 3093的积累和正性肌力的延长，并且致心律失常的Ca²⁺触发事件的风险降低。

因此，本文提供了一种治疗患有急性心力衰竭的个体的方法，其中通过输注向所述个体施用包含可药用载体和至少约1.5μg/kg/min的治疗剂量的伊司他肟的第一药物组合物。在开始所述第一药物组合物的输注之前、期间和/或之后，可以使用本文中讨论的任何技术来测量和监测所述个体的心功能。例如，在某些实施方式中，在施用伊司他肟之前测量一种或多种心功能参数，以便确定例如所述个体是否存在HFpEF或HFmEF。在其他实施方式中，初始测量可以包括超声心动图或PCWP值，以测定舒张期松弛功能障碍。这些测量也可以与伊司他肟的输注施用同时开始，和/或可以在整个输注期间持续进行。在某些实施方式中，所述测量一种或多种心功能参数的步骤可以在施用所述第一药物组合物之后进行。

在所述施用操控方法中，一旦测量到心功能参数的改善后，通过输注施用包含可药用载体和较低治疗剂量的伊司他肟的药物组合物。例如，通过超声心动图或PCWP所测定的与在初始输注之前和/或开始时获取的测量值相比所述个体中舒张期松弛的改善，将指示急性心力衰竭症状的治疗。此外，急性心力衰竭症状例如呼吸困难、踝关节肿胀、颈静脉压升高、肺裂音和外周水肿的减少，可以证明改变输注速率是合理的。在某些实施方式中，所述伊司他肟的第二治疗剂量低于约1.5μg/kg/min，优选地在约0.3μg/kg/min至约1.5μg/kg/min之间，更优选地在约0.5μg/kg/min至约1.0μg/kg/min之间。例如，在一个特定实施方式中，所述伊司他肟的第二治疗剂量为约0.5μg/kg/mim。然后，所述伊司他肟的第二治疗剂量的通过输注的施用可以继续长于6小时例如6.1h、6.2h、6.3h、6.4h、6.5h、6.6h、6.7h、6.8h、6.9h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h、24h、36h、48h或更长的持续时间。

在某些实施方式中，所述第二轮较低剂量的伊司他肟可以被输注足够的持续时间，以产生伊司他肟代谢物例如PST 3093的积累的血浆浓度。在这些实施方式中，所述较低剂量的伊司他肟的输注持续到PST 3093的血浆浓度为至少约20ng/mL。在其他实施方式中，所述较低剂量的伊司他肟的输注持续到PST 3093的血浆浓度为至少约30ng/mL。在其他实施方式中，输注持续到PST 3093的血浆浓度为至少约40ng/mL或至少约50ng/mL或至少约60ng/mL。在所述较低剂量的伊司他肟的输注停止后，所述伊司他肟化合物从所述个体清除，而表现出选择性或“纯”SERCA2a激活的伊司他肟代谢物(即3093)长时间保留在所述个体的血流中，为所述个体提供改善的心功能和低得多的致心律失常的触发事件的风险。

在可选实施方式中，在评估治疗、治疗方案或特定剂量的功效中，或者为了确定是应该提供治疗还是维持剂量，对个体例如患有急性或慢性心力衰竭的患者进行定期筛查，以检查器官和组织牵连或损害例如心脏(心室扩张、第三心音心脏肥大)、疲劳、疲倦、运动耐力下降、运动后恢复时间增加、肾脏(肾功能不全、少尿)、肺(端坐呼吸、阵发性夜间呼吸困难、呼吸急促)、踝关节肿胀、颈静脉压力升高的存在和程度。在心血管疾病、特别是急性或慢性心力衰竭的治疗中，应当以那些专家选择的时间间隔进行彻底的身体检查，其应该集中在心、肺和外周循环功能上。因此，在可选实施方式中，使用本文中公开的伊司他肟或其等同的可药用盐、溶剂化物或水合物的疗法被尽可能早地实行以防止症状的快速演变，并在患者出院后持续数年，优选在患者的整个生命期间，或至少与其他药物在心力衰竭中使用的方式一致的一段时间。作为医生对患者的状况进行监测的结果，可以向所述患者提供多达每月一次/两次的长于6小时的伊司他肟延长输注，以便防止发生心力衰竭的急性发作，从而避免患者的紧急救援并降低致命发作的可能性。

根据本发明，本文中所提供的用途和方法还可以包含与其他药物或药品的共同施用。事实上，本发明选择性地校正被抑制的心脏生物化学功能(即SERCA2a活性)。这肯定有助于缓解已有的HF临床症状，与可用的疗法相比具有较少的不想要的副作用(就因为上面提到的选择性)。然而，由于CHF和AHF是复杂的临床综合征，因此本发明可能与现有和将来的药物类别和/或特定药物联合，例如：a)药物类别如ACE抑制剂、AIRBs、利尿剂、Ca通道阻断剂、β阻断剂、洋地黄、NO供体、血管舒张药、SERCA2a刺激剂、脑啡肽酶(NEP)抑制剂、肌球蛋白丝激活剂、重组松弛素-2介导物、重组NP蛋白、可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)的激活剂、血管紧张素II受体的β-抑制蛋白(arrestin)配体；b)特定药物：氢氯噻嗪，呋塞米，维拉帕米，地尔硫卓，卡维地洛，美托洛尔，肼苯哒嗪，依普利酮，螺内酯，利诺普利，雷米普利，硝酸甘油，硝酸酯，地高辛，缬沙坦，奥美沙坦，替米沙坦，坎地沙坦，氯沙坦，诺欣妥，奥美坎替，沙库必曲，塞拉新，乌拉立肽，左西孟旦，cinaciguat。使用上述药物治疗并经历定期临床监测，例如使用植入的探头连续监测肺部血压的患有心力衰竭的对象可以受到保护，以便预测可以按照本发明通过伊司他肟的输注来预防的AHF的发作。

本发明中公开的作为用于治疗急性心力衰竭的治疗剂的伊司他肟，可以与用于治疗同一疾病的其他治疗剂组合。示例性的其他治疗剂是利尿剂例如呋塞米、布美他尼和托拉塞米，美托拉宗，醛固酮拮抗剂例如螺内酯或依普利酮，噻嗪类利尿剂例如氢氯噻嗪、美托拉宗和氯噻酮。其他药剂是ACE抑制剂例如利诺普利和雷米普利。血管紧张素II受体阻断剂(ARB)例如缬沙坦、坎地沙坦和氯沙坦，也可以考虑在内。还包含血管紧张素受体/脑啡肽酶抑制剂(ARNI)例如沙库必曲。其他药剂可以选自β-阻断剂例如卡维地洛和例如美托洛尔，或血管舒张药例如任选地与二硝酸异山梨酯、硝酸酯例如硝酸甘油、氨氯地平和非洛地平组合的肼苯哒嗪，非二氢吡啶类例如地尔硫卓或维拉帕米。如果需要，本发明的化合物也可以与地高辛组合。其他药物例如伊伐布雷定和其他抗凝剂，也可以考虑。

本发明的化合物可以与其他治疗剂组合，特别是可用于治疗心血管疾病的药剂，更特别是在心力衰竭的组合疗法中。所述组合活性成分可以按照由医生决定的不同方案进行施用。根据本发明的实施方式，组合疗法可以通过与一种或多种另外的治疗活性成分在同时或不同时间施用伊司他肟来进行。在同时施用的情况下，本发明的化合物和一种或多种其他活性成分可以各自配制在相应的药物组合物中或配制在同一单一剂型中。在前一种情况下，本发明提供了一种特别是用于治疗心力衰竭的套装药剂盒，其包含分开的药物组合物，分别含有本发明的化合物和所述一种或多种其他活性成分。在另一个实施方式中，本发明提供了一种特别是用于治疗急性心力衰竭的药物单位剂型套装药剂盒，其在同一单位剂型中包含本发明的化合物和所述一种或多种其他活性成分。由于除了本文公开的所述另外活性药剂的公知治疗效果之外或与所述治疗效果协同组合的本文公开的伊司他肟的变力性-松弛性效果，本发明的组合疗法提供了心力衰竭的有利治疗。

还提供了包含用于实践本文中提供的用途和方法的化合物的纳米粒子、纳米脂质粒子、囊泡和脂质体膜，以例如将本文中提供的药物活性化合物和组合物：伊司他肟或式(II)或式(III)的化合物或其等同的可药用盐、溶剂化物或水合物，任选地与其他治疗活性药剂组合，递送到需要的对象。在可选实施方式中，这些组合物被设计成靶向特定分子，包括生物分子例如多肽包括细胞表面多肽，用于例如靶向所需的细胞类型如肌细胞或心脏细胞、内皮细胞等。伊司他肟的缓慢释放可以提供足够的化合物，以选择性提高代谢物的血浆水平，同时将伊司他肟的血浆水平保持在非常低的范围内。

提供了包含用于实践本文中提供的方法的化合物的多层脂质体，例如在Park等人的美国申请号20070082042中所描述的。所述多层脂质体可以使用包含角鲨烷、甾醇、神经酰胺、中性脂质或油、脂肪酸和卵磷脂的油相组分的混合物制备到粒子尺寸为约200至5000nm，以捕获用于实践本文中提供的用途和方法的组合物。

脂质体可以使用任何方法来制造，例如在美国专利号4,534,899或Park等人的美国申请号20070042031中所描述的方法，包括通过包封本发明的活性药剂(或活性药剂的组合)来生产脂质体的方法，所述方法包括在第一储液池中提供水性溶液，在第二储液池中提供有机脂质溶液，然后将所述水性溶液与有机脂质溶液在第一混合区中混合以产生脂质体溶液，其中所述有机脂质溶液与水性溶液混合以基本上即时产生包封所述活性药剂的脂质体，然后立即将所述脂质体溶液与缓冲溶液混合，以产生稀释的脂质体溶液。

在一个实施方式中，用于实践本文中提供的用途和方法的脂质体组合物包含取代的铵和/或聚阴离子，以例如将用于实践本文中提供的方法的伊司他肟或其等同的可药用盐、溶剂化物或水合物靶向递送到所需的细胞类型，正如在例如美国申请号20070110798中所描述的。

提供了包含用于实践本文中提供的用途和方法的本发明的化合物的纳米粒子，其采取含有活性药剂的纳米粒子(例如次级纳米粒子)的形式，正如在例如美国申请号20070077286中所描述的。在一个实施方式中，提供了包含用于实践本文中提供的用途和方法的脂溶性活性药剂或脂助溶的水溶性活性药剂以与二价或三价金属盐一起作用的纳米粒子。

在一个实施方式中，固体脂质悬液可用来配制用于实践本文中提供的用途和方法的组合物，并将所述组合物在体内、体外或离体递送到哺乳动物细胞，正如在例如美国申请号20050136121中所描述的。

用于实践本文中提供的用途和方法的组合物和制剂可以利用脂质体或纳米脂质体来递送。通过使用脂质体，特别是在所述脂质体表面带有特异性针对靶细胞的配体或通过其他方式偏好性指向特定器官的情况下，人们可以集中将活性药剂在体内递送到靶细胞中。参见例如美国专利号6,063,400、6,007,839；Al-Muhammed,J.Microencapsul.1996；13:293-306；Chonn Curr.Opin.Biotechnol.1995；6:698-708；Ostro,Am.J.Hosp.Pharm.1989；46:1576-1587。在Eur J Pharm Biopharm.2011；79(2):285-93中公开的伊司他肟的脂质体制剂也被提供在本发明中。

递送介质

在可选实施方式中，任何递送介质均可用于实践本文中提供的用途和方法，以例如将本文中提供的化合物递送到需要的对象。例如，可以使用包含聚阳离子、阳离子聚合物和/或阳离子肽例如聚乙烯亚胺衍生物的递送介质，例如在美国申请号20060083737中所描述的。

在一个实施方式中，使用干燥多肽-表面活性剂复合物来配制用于实践本文中提供的用途和方法的组合物，例如在美国申请号20040151766中所描述的。

在一个实施方式中，用于实践本文中提供的用途和方法的组合物可以使用带有细胞膜渗透肽偶联物的介质施加到细胞，例如在美国专利号7,306,783、6,589,503中所描述的。在一种情况下，将所述待递送的组合物偶联到细胞膜渗透肽。在一个实施方式中，将所述待递送的组合物和/或递送介质偶联到介导转运的肽，例如在美国专利号5,846,743中所描述的，其描述了高碱性并结合到聚磷酸肌醇的介导转运的肽。

在一个实施方式中，使用电通透化作为主要或辅助手段将所述组合物递送到细胞，例如使用在例如美国专利号7,109,034、6,261,815、5,874,268中所描述的任何电穿孔系统。

下面的实施例进一步说明本发明。

具体实施方式

实施例1.式(II)和(III)的化合物的制备

PST 2915的合成

步骤1：硼氢化反应

向维持在氮气气氛和-10℃温度下的脱氢表雄酮I(30.0g)在450mL THF中的溶液，添加络合物BH.THF在THF中的1M溶液(260mL)。在所述添加完成后，允许温度再次升高至环境温度；3h后，添加500mL H₂O，然后添加NaBO₃.4H₂O(31.4g)。将所述反应留置搅拌一夜。过滤出形成的沉淀物，用THF洗涤并舍弃。将水性和有机相分离，向水性相添加NaCl，并将其用THF重复萃取(3x200 mL)。将合并的有机相用NaCl和Na₂SO₄脱水并在减压下蒸发以获得粗产物，将其通过AcOEt/MeOH结晶，然后过滤并用AcOEt洗涤。获得大约21g雄甾烷3β,6α,17β-三醇II(已知产物：Nicholson,S.H.,Turner,A.B.J.Chem.Soc.,Perkin Trans.1,1976,1357和US 6,384,250B2)。

分析结果与文献中报道的一致。

步骤2：选择性氧化

向雄甾烷3β,6α,17β-三醇II(30克)在由二噁烷(825mL)、水(150mL)和吡啶(16.5mL)构成的混合物中的溶液，在10分钟内分部添加N-溴琥珀酰亚胺(52克)，保持容器避光。将所述混合物在室温搅拌16小时，用900ml水稀释，然后在15分钟内分部添加Na₂S₂O₃(15.5克)。将所述溶液浓缩(除去1500mL左右)并将悬液过滤，将固体在真空下干燥，给出28.1克6α-羟基雄甾烷-3,17-二酮III(95％得率)。

步骤3：酮的保护

将6α-羟基雄甾烷-3,17-二酮III(18.85克)在360mL乙二醇和对甲苯磺酸(554mg)中的悬液加热至100℃，并在真空下蒸馏以除去共沸混合物乙二醇/水(5mL左右)。将所述混合物冷却，并用溶解在25ml甲醇中的250mg KOH处理。添加15mL水，并在搅拌2小时后将所述悬液过滤，给出作为白色固体的中间体IV(20.2克，83％得率)。所述产物不需进一步纯化直接使用。

步骤4：氧化

将由3mL次氯酸钠(6％)和28mL乙酸乙酯构成的溶液在室温下搅拌，并添加27mgRuO₂水合物。当所有催化剂钌溶解后，分部添加产物IV(1克)，等待黑色悬浮物消失。1小时后，添加另外3ml次氯酸钠(6％)，并将透明溶液在室温搅拌3小时。当反应完成时，将混合物在硅藻土垫上过滤，并将水性相用AcOEt萃取。将合并的有机相用NaHCO₃溶液(5％水溶液)和NaCl溶液(10％水溶液)洗涤。将有机层在Na₂SO₄上干燥并蒸发至干，给出中间体V(950mg，94％得率)。

步骤5：还原

将产物V(5.76克)在甲醇(72mL)中的悬液在0℃下搅拌并添加NaBH₄(730mg)。2小时后所述反应完成，并在减压下除去溶剂。将粗产物悬浮在30mL水中并用CH₂Cl₂萃取。将有机层在Na₂SO₄上干燥并蒸发至干。将粗品固体通过快速层析进行纯化(SiO₂，环己烷/AcOEt7/3作为洗脱剂)，给出产物VI(5.16克，89％得率)。

步骤6：酮的去保护

向产物VI(2.85克)在350mL蒸馏过的丙酮中的搅拌的溶液添加对甲苯磺酸(7.14克)。在室温3小时后，添加5％NaHCO₃溶液，并在减压下除去溶剂。将产物用CH₂Cl₂萃取。将有机层在Na₂SO₄上干燥并蒸发至干，给出中间体VII(2.13克，95％得率)。

步骤7：PST 2915的合成

向6β-羟基雄甾烷-3,17-二酮VII(3.5克)在THF(100mL)中的搅拌的溶液逐滴快速添加2-氨基乙氧基胺二酸盐酸(1.728克)在H₂O(34mL)中的溶液。在室温和剧烈搅拌下1.5h后，添加NaCl(4克)并将混合物搅拌15min。进行相分离，并将水性相用THF萃取两次(2x50mL)。将合并的有机萃取物在Na₂SO₄上干燥，过滤并蒸发，给出白色固体(4.52克)。

将所述粗产物在45mL AcOEt/EtOH 97/3中悬浮成浆液1.5小时，然后过滤，在35℃和减压下干燥48小时，给出(E,Z)-3-(2-氨基乙氧基亚氨基)-6β-羟基雄甾烷-17-酮盐酸盐PST 2915(4.069克，89％得率)。

PST 3093的合成

步骤1：硼氢化反应.

向维持在氮气气氛和-10℃温度下的脱氢表雄酮I(30.0g)在450mL无水THF中的溶液，添加络合物BH.THF在THF中的1M溶液(260mL)。在所述添加完成后，允许温度再次升高至室温；3h后，添加500mL H₂O，然后添加NaBO₃.4H₂O(31.4g)。将所述反应留置搅拌一夜。过滤出形成的沉淀物，用THF洗涤并舍弃。将水性和有机相分离，向水性相添加NaCl，并将其用THF重复萃取(3x200 mL)。将合并的有机相用NaCl和Na₂SO₄脱水并在减压下蒸发以获得粗产物，将其通过AcOEt/MeOH结晶，然后过滤并用AcOEt洗涤。获得大约21g雄甾烷3β,6α,17β-三醇II(已知产物：Nicholson,S.H.,Turner,A.B.J.Chem.Soc.,Perkin Trans.1,1976,1357和US 6,384,250B2)。

分析结果与文献中报道的一致。

步骤2：选择性氧化

步骤3：酮的保护

步骤4：氧化

步骤5：还原

步骤6：酮的去保护

步骤7：PST 3093的合成

向6β-羟基雄甾烷-3,17-二酮VII(4.5克)在THF(113mL)中的搅拌的溶液逐滴快速添加O-(羧甲基)羟基胺盐酸盐(1.56克)在H₂O(5mL)中的溶液。在室温和剧烈搅拌下1.5h后，添加NaCl(6.4克)并将混合物搅拌15min。进行相分离，并将水性相用THF萃取三次(50mL)。将合并的有机萃取物在Na₂SO₄上干燥，过滤并蒸发至干，给出5.95克粗产物。

将所述粗产物通过快速层析进行纯化(SiO₂，CH₂Cl₂/MeOH/乙酸，92.5/7/0.5)，给出(E,Z)-[(6-β-羟基-17-氧基雄甾烷-3-基亚基)氨基]氧基乙酸PST 3093(3.7克，69％得率)。

实施例2.伊司他肟代谢物的生物学活性

程序

动物护理

本研究遵循美国国立卫生研究院出版的《实验室动物护理和使用指南》(Guide ofthe Care and Use of Laboratory Animals)(NIH出版物第85-23号，1996年修订)和参与机构认可的动物护理指南。

狗肾Na,K-ATP酶的纯化和Na,K-ATP酶活性测定法

肾Na,K-ATP酶的纯化按照

的方法来进行(Methods Enzymol.1988；156:29-43)。在戊巴比妥麻醉下从1-3岁雄性比格犬(WuXi AppTec,Suzhou Co.,Ltd.1318Wuzhong Ave.,Wuzhong District Suzhou,215104P.R.China)切下肾脏(意大利卫生部进口许可证0009171-09/04/2015-DGSAF-COD_UO-P，2015)。将肾脏切片，将外髓质剖开，合并，悬浮(1g/10ml)在含有250mM蔗糖、30mM组氨酸和5mM EDTA的pH 7.2的蔗糖-组氨酸溶液中并匀浆。将匀浆液以6.000g离心15min，倾倒出上清液并以48.000g离心30min。将沉积物悬浮在蔗糖-组氨酸缓冲液中，并与溶解在含有25mM咪唑和1mM EDTA的pH 7.5的梯度缓冲液中的十二烷基硫酸钠(SDS)溶液温育20min。将所述样品铺层在蔗糖不连续梯度(10、15和29.4％)顶部，并以60.000g离心115min。将沉积物悬浮在梯度缓冲液中。

Na,K-ATP酶活性通过如以前所述测量³²P-ATP的释放，在体外测定(参见FerrandiM.等，Hypertension 1996；28(6):1018-25)。将浓度逐渐提高的标准品哇巴因或测试化合物与0.3μg纯化的狗肾酶在终体积为120μl的介质中在37℃温育10min，所述介质含有140mMNaCl、3mM MgCl₂、50mM Hepes-Tris、3mM ATP，pH 7.5。然后，添加10μl含有10mM KCl和20nCi ³²P-ATP(3-10Ci/mmol，Perkin Elmer)的温育溶液，并将反应在37℃下继续15min。然后通过用20％v/v冰冷的高氯酸进行酸化来终止反应。使用活性炭(Norit A,Serva)通过离心来分离³²P，并测量放射活性。抑制活性被表示为在不存在哇巴因或测试化合物的情况下进行的对照样品的百分数。使用多参数非线性回归最佳拟合程序(KaleidagraphTM,Sinergy Software)来计算引起Na,K-ATP酶活性的50％抑制的化合物浓度(IC₅₀)。

心脏肌浆网(SR)微粒体中SERCA2a活性的测量

使用雄性比格犬来获得用于富含SERCA2a的肌浆网制备的心脏组织。为了获得表3中的数据，使用了健康的狗。如以前所述，通过用聚苯乙烯乳胶微球(Polysciences,Warrington,PA,USA)进行多次冠状动脉内微栓塞，在狗中诱发慢性心力衰竭(参见SabbahHN等，Am J Physiol.1991；260:H1379-84)。所述实验在Sigma-Tau,Rome,Italy的普通药理学部门(General Pharmacology Department)进行。

将左心室组织剖下，在4倍体积的10mM NaHCO₃(pH 7)、1mM PMSF、10μg/ml抑肽酶和亮抑酶肽中匀浆，并以12.000g离心15分钟，正如在Nediani C.等(J Biol Chem.1996；271:19066-73)中所述。将上清液过滤并以100.000g离心30min。通过将沉积物用pH 7的0.6M KCl、30mM组氨酸悬浮并以100.000g再离心30min，来提取收缩性蛋白质。将最终的沉积物用pH 7的0.3M蔗糖、30mM组氨酸重构。

如以前所述，在不存在和存在测试化合物的情况下，在不同Ca²⁺浓度(100至3000nM)下，SERCA2a活性作为³²P-ATP的水解在体外测量(参见Micheletti R.等，Am J Card2007；99:24A-32A)。将浓度逐渐提高的每种化合物(从0.05至300nM)与2μg微粒体在80μlpH 7.5的含有100mM KCl、5mM MgCl₂、1μM A23187、20mM Tris的溶液中，在4℃预温育5min。然后添加20μl含有50nCi ³²P-ATP(3-10Ci/mmol,Perkin Elmer)的5mM Tris-ATP。ATP水解在37℃下继续15min，并通过用100μl 20％v/v的冰冷的高氯酸进行酸化来终止。使用活性炭(Norit A,SERVA)通过离心分离³²P，并测量放射活性。SERCA2a依赖性活性被鉴定为总水解活性的被10μM环匹阿尼酸抑制的部分(参见Seidler NW.等，J Biol Chem.1989；264:17816-23)。

使用S形曲线拟合软件拟合剂量响应曲线，并计算最大速度(Vmax)活性和Kd Ca²⁺(协同性软件KaleidaGraph 3.6)。

小鼠中的药物毒性研究

急性毒性在小鼠(Albino Swiss CD-1，体重30g)中确定。将小鼠用剂量逐渐升高的测试物质的单次施用进行口服治疗或静脉内注射，以鉴定引起50％死亡率的剂量。死亡发生在施用后30min之内，存活则在施用24h后。然后评估急性毒性(LD₅₀)。

链脲佐菌素糖尿病大鼠中的血液动力学(超声心动图2M-Doppler-组织多普勒)

通过在尾静脉内单次注射在pH 4.5的0.1M柠檬酸钠缓冲液中新鲜制备的链脲佐菌素(STZ，50mg/kg，Sigma-Aldrich)溶液，使Sprague Dawley雄性大鼠(150-175g)成为糖尿病。对照大鼠接受柠檬酸盐缓冲液。在1周后测量空腹血糖，并且具有大于400mg/dl的值的大鼠被认为患有糖尿病。

在STZ注射后8至9周，大鼠接受在戊巴比妥麻醉下进行的经胸超声心动图和多普勒评估。按照美国超声心动图学会指南(Lang RM等，Eur J Echocardiography 2006；7:79-108)，使用二维引导M-模式记录来获得左心室舒张末期直径(LVEDD)、左心室收缩末期直径(LVESD)、舒张期后侧(PW)和中隔侧(SW)壁厚度的短轴测量值。缩短分数被计算为FS＝(LVEDD-LVESD)/LVEDD。相对壁厚度被计算为PWTd+IVSTd/LVEDD。

通过脉冲多普勒从心尖四腔切面在二尖瓣小叶尖端处测量二尖瓣流入，以获得早期和晚期充盈速度(E、A)以及早期充盈速度的减速时间(DT)。减速斜率被计算为E/DT比率。二尖瓣减速指数被计算为DT/E比率。

从心尖四腔切面评估组织多普勒成像(TDI)，以记录中隔二尖瓣环运动，即峰值心肌收缩(s’)和舒张早期和晚期速度(e’和a’)。

将化合物PST 3093以0.22mg/kg的剂量iv施用到STZ注射过的大鼠，并在从iv输注开始起15和30min后和输注中断后10min测量超声心动图参数。

统计分析

正如所指示的，数据被报告为平均值±SD。统计分析通过Student’s t-检验(对于STZ大鼠来说成对t检验)来进行。P<0.05被当作是统计学显著的。

生物学结果

体外筛选

狗肾Na,K-ATP酶活性的抑制

表2示出了测试化合物对纯化的狗肾Na,K-ATP酶的酶活性的抑制效应。相应的IC₅₀以μM浓度表示。伊司他肟以0.14μM的IC₅₀抑制Na,K-ATP酶活性，与地高辛相近，而PST 2915以2.1μM的IC₅₀抑制Na,K-ATP酶活性。此外，PST 3093完全不显著抑制Na,K-ATP酶活性(IC₅₀>100μM)。

表2狗肾Na,K-ATP酶的抑制

化合物

来自于正常狗的心脏来源的SR微粒体中的SERCA2a ATP酶活性

试验了本文公开的化合物在0.1至500nM的浓度范围内对从正常和衰竭狗制备的SERCA2a ATP酶活性的影响。所述影响被表示成在不存在化合物的情况下运行的对照样品的Vmax活性的提高的％。数据为平均值±SD，其中n指示实验数目。

在正常狗的SR囊泡中，伊司他肟、PST 3093和PST 2915在0.1nM和10nM浓度下显著刺激SERCA2a活性(参见表3)。也在衰竭狗制备物中试验了SERCA2a被伊司他肟、PST 3093和PST 2915的激活。这种效应在已知与正常心脏相比SERCA2a活性被抑制的衰竭制备物(BersDM,Physiology 2006；21:380–387)中特别明显(数据未示出)，并因此暗示了化合物伊司他肟和PST 3093可以校正衰竭心脏中的SERCA2a变化。

相反，以前的研究显示地高辛不能刺激SERCA2a活性(Rocchetti M等，JPharmacol Exp Ther 2005；313:207-215；Ferrandi M等，Br J Pharmacol 2013；169:1849-61)。

表3来自于正常狗的心脏来源的SR微粒体中的SERCA2a ATP酶活性

数据被表示为与对照相比提高的％，并且是平均值±SD

体内研究

在小鼠中的急性毒性

在小鼠(Albino Swiss CD-1，体重30g)中确定了测试化合物PST 3093的急性毒性。将化合物PST 3093以逐渐提高的剂量口服施用或静脉内注射，以鉴定引起50％死亡率的剂量。死亡发生在施用后30min内，存活发生在24h后。

PST 3093急性毒性的结果报告在表4中，并且表明在iv或口服施用后所述化合物分别具有LD₅₀>250和200mg/kg。为了比较，参比化合物伊司他肟的急性毒性也被包括在表4中。

表4伊司他肟和PS3093在小鼠中的急性毒性(LD₅₀)

化合物	mg/kg
		伊司他肟i.v.
伊司他肟os
		3093i.v.
3093os

i.v.，静脉内

os，口服

链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠中的血液动力学(超声心动图2M-Doppler-组织多普勒)

表5示出了在PST 3093以0.22mg/kg iv输注之前和之后15和30min以及输注中断后10min STZ糖尿病大鼠中的超声心动图参数。数据被呈现为平均值±SD，并且具有星号的值是统计学显著的，至少p<0.05。

数据表明，在以舒张期功能障碍为特征的动物模型例如STZ糖尿病大鼠中，PST3093施用改善舒张期功能。具体来说，在STZ大鼠中，在PST 3093输注后15和30min，E波(其代表在快速充盈期中跨二尖瓣流入的早期充盈速度，并构成LV松弛的能量依赖性阶段，主要由SERCA2a活性介导)显著提高(表5)。这种效应与正如在体外测定法中所显示的(表3)SERCA2a活性被所述化合物刺激相一致，表明了PST 3093恢复SERCA2a功能活性的能力，所述SERCA2a功能活性在STZ大鼠中被抑制，正如Choi等(AJP 2002；H1398-H1408)所显示的。

然而，应该考虑到，峰值E速度受前负荷的影响，并且与心率(HR)直接相关(MihmMJ等，Life Sci.2001；22；69(5):527-42；do Carmo JM等，AJP 2008；295:H1974-1981)。相反，E波的减速时间(DT)以及二尖瓣减速指数的相关变化(DT/E)和E波的减速斜率(E/DT)不受HR变化影响，并且被认为是舒张期功能的鲁棒指示物和舒张期功能障碍的早期征兆(Mihm MJ等，Life Sci.2001；22；69(5):527-42)。具体来说，根据舒张期功能障碍的各种不同等级，某些超声心动图舒张期参数例如E波的DT的行为可能甚至以相反的方向受到影响。正如在以前的出版物中清楚地指明的(参见Mitter SS等，JACC 2017；69(11):1451-1464)，当舒张期功能障碍为1级时E波的DT通常延长，并在具有3级舒张期功能障碍的患者中变得非常短，也受到患者肺充血状态的剧烈影响。

就此而言，与健康对照相比，在舒张期功能障碍的动物模型中E波的DT的变动可以以相反的方向变化。例如，在具有由STZ注射诱导的糖尿病性心肌病得大鼠中，DT结果等于(参见Thackeray JT等，Cardiovasc Diabetol.2011；10:75；Carillion A等，PloS One2017；e0180103)或甚至长于对照大鼠(Joffe II等，JACC Vol.34,No.7,1999；2111–2119；Guido MC等，Oxid Med Cell Longev.2017；5343972)；而在具有由冠状动脉的微栓塞诱导的心力衰竭的狗中，与对照健康狗相比DT结果减小(Sabbah H等，Am J Cardiol.2007；99(2A):41A-46A)。此外，不同于跨二尖瓣多普勒流动，组织多普勒(TDI)参数相对不受负载影响，并且早期松弛速度(e’)的降低将是舒张期功能障碍的明确指示。

所述数据证实了PST 3093对这些参数的显著影响。E波被PST 3093治疗显著延长，而DT减小。表5中示出了DT和DT/E的显著减小和E/DT和e’的增加。e’的增加似乎与CO和SV的显著增加相关，而没有观察到心率的显著变化。值得注意的是，PST 3093对DT和E/e’的影响的方向与这种STZ大鼠模型用伊司他肟治疗时获得的方向相同。

相反，在冠状动脉微栓塞的HF狗模型中，DT与对照狗相比减少(Sabbah H等，Am JCardiol.2007；99(2A):41A-46A)，伊司他肟的效应是延长所述DT。换句话说，不依赖于于HF动物模型与它们的相应对照相比E波的DT的变动，伊司他肟将这些参数朝向相应对照动物中存在的水平逆转并改善舒张期功能。

这些效应在PST 3093输注开始30min后更加明显，并在输注中断10min后趋于消失。PST 3093对STZ大鼠的受损心功能的影响与所述化合物的SERCA2a刺激活性相一致，所述活性通过校正受抑制的心脏松弛，提高可用于收缩的血液的量并导致从心室泵出的血液量(SV)的提高。

为了评估上述结果与人类情况的相关性，应该考虑到AHF患者与STZ大鼠之间明显的病理生理差异。在后者中，独立于细胞Ca²⁺操控的变化和SERCA2a活性的降低，体液、交感神经系统和心率的显著变化本身可能影响超声心动图参数(Mihm MJ等，Life Sci.2001；22；69(5):527-42；do Carmo JM等，AJP 2008；295:H1974-1981)。因此，人类与大鼠之间在DT/E、E/DT和e’变化上的相似性可以被当作具有相同的基础机制——SERCA2a活性被PST3093的刺激。

表5 STZ糖尿病大鼠中3093iv输注后的血液动力学参数

*与基础值相比P<0.05

E，E波，二尖瓣流入的早期充盈速度

DT(ms)，E波的减速时间

DT/E(s²/m)，二尖瓣减速指数

E/DT(m/s²)，减速斜率

E/e’，LV充盈压的指数

e'(cm/s)TDI，早期松弛速度

CO(ml/min)，心输出量

HR(搏/min)，心率

SV(ml/搏)，每搏量

Claims

1.一种用于在人类对象中静脉内输注的药物组合物，所述药物组合物包含伊司他肟或其可药用盐、溶剂化物或水合物并用于治疗急性心力衰竭的方法中，特征在于施用历时长于6小时的输注持续时间，由此与通过静脉内输注历时3至6小时的持续时间施用伊司他肟相比，改善舒张期松弛。

2.根据权利要求1所述的用途的药物组合物，其中所述舒张期松弛改善通过超声心动图参数E/A、E/e’或通过肺毛细血管楔压来测定。

3.根据权利要求1或2所述的用途的药物组合物，其中所述输注持续时间长达约24小时。

4.根据权利要求1、2或3中任一项所述的用途的药物组合物，其中所述输注持续时间长达约36小时。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的用途的药物组合物，其中所述输注持续时间长达约48小时。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的用途的药物组合物，其中周围血管阻力在输注后24小时之前不降低。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的用途的药物组合物，其中伊司他肟以0.2μg/kg/min至1.5μg/kg/min的剂量施用。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的用途的药物组合物，其中伊司他肟以0.25μg/kg/min至1.0μg/kg/min的剂量施用。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的用途的药物组合物，其中伊司他肟通过输注历时足以产生一定的伊司他肟代谢物血浆水平的持续时间来施用，其中所述血浆水平大于约5ng/ml历时至少约6小时的累积期，并且其中所述伊司他肟代谢物包含式(II)或式(III)的化合物：

或其可药用盐、酯、溶剂化物、水合物、多晶型物。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的用途的药物组合物，其中所述人类对象患有射血分数保留(HFpEF)或射血分数中程降低(HFmEF)的心力衰竭。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的用途的药物组合物，其中所述人类对象正经历使用一种或多种另外的治疗活性成分用于心力衰竭的治疗性疗法。

12.根据权利要求11所述的用途的药物组合物，其中所述另外的治疗活性成分选自：ACE抑制剂、AIRB、利尿剂、Ca通道阻断剂、β-阻断剂、洋地黄、NO供体、血管舒张药、SERCA2a刺激剂、脑啡肽酶(NEP)抑制剂、肌球蛋白丝激活剂、重组松弛素-2介导物、重组NP蛋白、可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)的激活剂、血管紧张素II受体的β-抑制蛋白配体。

13.根据权利要求12所述的用途的药物组合物，其中所述利尿剂选自：呋塞米；布美他尼；托拉塞米；美托拉宗；醛固酮拮抗剂，特别是螺内酯和依普利酮；噻嗪类利尿剂，特别是氢氯噻嗪，美托拉宗，氯噻酮。

14.根据权利要求12所述的用途的药物组合物，其中所述ACE抑制剂选自：利诺普利和雷米普利。

15.根据权利要求12所述的用途的药物组合物，其中所述血管紧张素II受体阻断剂选自：缬沙坦、坎地沙坦、奥美沙坦、替米沙坦和氯沙坦。

16.根据权利要求12所述的用途的药物组合物，其中所述血管紧张素受体/脑啡肽酶抑制剂是沙库必曲。

17.根据权利要求12所述的用途的药物组合物，其中所述β-阻断剂选自：卡维地洛和美托洛尔。

18.根据权利要求12所述的用途的药物组合物，其中所述血管舒张药选自：肼苯哒嗪，任选地与二硝酸异山梨酯组合；硝酸酯，特别是硝酸甘油或硝酸异山梨酯；氨氯地平；非洛地平；非二氢吡啶类，特别是地尔硫卓或维拉帕米。

19.根据权利要求12所述的用途的药物组合物，其中所述用于治疗心力衰竭的活性剂选自：地高辛、诺欣妥、奥美坎替、塞拉新、乌拉立肽、左西孟旦。

20.根据权利要求11至19中任一项所述的用途的药物组合物，其中所述用于心力衰竭的治疗性疗法在伊司他肟施用之前或同时或之后。

21.一种化合物，其由式(II)或式(III)表示：

或其可药用盐、酯、溶剂化物、水合物、多晶型物。

22.根据权利要求21所述的化合物，其由式(III)、或其可药用盐、酯、溶剂化物、水合物、多晶型物表示。

23.根据权利要求21或22所述的化合物，其用于治疗需要激活SERCA2a的疾病。

24.根据权利要求23所述的化合物，其用于治疗心血管疾病。

25.根据权利要求24所述的用途的化合物，其中所述疾病是心力衰竭，特别是急性心力衰竭。

26.一种药物组合物，其包含与至少一种可药用介质和/或赋形剂混合的权利要求21或22所述的化合物或其可药用盐、溶剂化物、水合物、多晶型物。

27.根据权利要求26所述的药物组合物，所述药物组合物还包含在权利要求12至19任一项中公开的至少一种另外的治疗活性成分。

28.根据权利要求27所述的药物组合物，其中所述至少一种另外的治疗活性成分与权利要求21或22所述的化合物或其可药用盐、溶剂化物、水合物、多晶型物在相同或分开的单位剂型中。

29.一种治疗患有心力衰竭的个体的方法，所述方法包括下述步骤：

(1)提供患有心力衰竭的个体；

(2)向所述个体施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含：(i)可药用载体；和(ii)伊司他肟或其可药用盐、溶剂化物或水合物，其中所述施用包括静脉内输注历时长于6小时的输注持续时间；

(3)测量一种或多种心功能参数，其中所述一种或多种心功能参数包括舒张期松弛；

其中与通过静脉内输注少于6小时施用伊司他肟相比，施用所述药物组合物导致改善舒张期松弛，由此治疗所述患有急性心力衰竭的个体。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述个体是人类。

31.根据权利要求29或30所述的方法，其中所述舒张期松弛改善通过超声心动图参数E/A、E/e’或通过肺毛细血管楔压来测定。

32.根据权利要求29至31中任一项所述的方法，其中所述输注持续时间长达约24小时。

33.根据权利要求32所述的方法，其中所述输注持续时间长达约36小时。

34.根据权利要求33所述的方法，其中所述输注持续时间长达约48小时。

35.根据权利要求29至34中任一项所述的方法，其中伊司他肟或其可药用盐、溶剂化物或水合物以约0.2μg/kg/min至约1.5μg/kg/min的剂量施用。

36.根据权利要求35所述的方法，其中伊司他肟或其可药用盐、溶剂化物或水合物以约0.25μg/kg/min至约1.0μg/kg/min的剂量施用。

37.根据权利要求29至36中任一项所述的方法，其中所述个体被诊断患有射血分数保留(HFpEF)或射血分数中程降低(HFmEF)的心力衰竭。

38.根据权利要求29至37中任一项所述的方法，其中所述个体正经历使用一种或多种另外的治疗活性成分用于心力衰竭的治疗性疗法。

39.根据权利要求38所述的方法，其中所述另外的治疗活性成分选自：ACE抑制剂、AIRB、利尿剂、Ca通道阻断剂、β-阻断剂、洋地黄、NO供体、血管舒张药、SERCA2a刺激剂、脑啡肽酶(NEP)抑制剂、肌球蛋白丝激活剂、重组松弛素-2介导物、重组NP蛋白、可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)的激活剂、血管紧张素II受体的β-抑制蛋白配体。

40.根据权利要求39所述的方法，其中所述利尿剂选自：呋塞米，布美他尼；托拉塞米；美托拉宗；醛固酮拮抗剂，特别是螺内酯和依普利酮；噻嗪类利尿剂特别是氢氯噻嗪，美托拉宗，氯噻酮。

41.根据权利要求39所述的方法，其中所述ACE抑制剂选自：利诺普利和雷米普利。

42.根据权利要求39所述的方法，其中所述血管紧张素II受体阻断剂选自：缬沙坦、坎地沙坦、奥美沙坦、替米沙坦和氯沙坦。

43.根据权利要求39所述的方法，其中所述血管紧张素受体/脑啡肽酶抑制剂是沙库必曲。

44.根据权利要求39所述的方法，其中所述β-阻断剂选自：卡维地洛和美托洛尔。

45.根据权利要求39所述的方法，其中所述血管舒张药选自：肼苯哒嗪，其任选地与二硝酸异山梨酯组合；硝酸酯，特别是硝酸甘油或硝酸异山梨酯；氨氯地平；非洛地平；非二氢吡啶类，特别是地尔硫卓或维拉帕米。

46.根据权利要求39所述的方法，其中所述用于治疗心力衰竭的活性剂选自：地高辛、诺欣妥、奥美坎替、塞拉新、乌拉立肽、左西孟旦。

47.根据权利要求39至46中任一项所述的方法，其中所述用于心力衰竭的治疗性疗法在伊司他肟施用之前或同时或之后。

48.一种用于在个体中静脉内输注的药物组合物，其包含伊司他肟或其可药用盐、溶剂化物或水合物，所述药物组合物用于治疗急性心力衰竭的方法中，特征在于施用历时足以在所述个体中产生一定的伊司他肟代谢物血浆浓度水平的输注持续时间，其中：

(a)所述血浆浓度水平大于约5ng/ml历时至少约6小时的累积期，并且

(b)所述伊司他肟代谢物包括式(II)或(III)：

或其可药用盐、酯、溶剂化物、水合物、多晶型物；

由此与在所述累积期之前施用伊司他肟相比，改善舒张期松弛。

49.根据权利要求48所述的用途的药物组合物，其中所述舒张期松弛改善通过超声心动图参数E/A、E/e’或通过肺毛细血管楔压来测定。

50.根据权利要求48或49所述的用途的药物组合物，其中所述输注持续时间足以在所述个体中产生伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约10ng/ml历时至少约6小时的累积期。

51.根据权利要求50所述的用途的药物组合物，其中所述输注持续时间足以在所述个体中产生伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约15ng/ml历时至少约6小时的累积期。

52.根据权利要求51所述的用途的药物组合物，其中所述输注持续时间足以在所述个体中产生伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约20ng/ml历时至少约6小时的累积期。

53.根据权利要求48至52中任一项所述的用途的药物组合物，其中伊司他肟以0.2μg/kg/min至1.5μg/kg/min的剂量施用。

54.根据权利要求53所述的用途的药物组合物，其中伊司他肟以0.25μg/kg/min至1.0μg/kg/min的剂量施用。

55.一种治疗患有心力衰竭的个体的方法，所述方法包括下述步骤：

(1)提供患有心力衰竭的个体；

(2)向所述个体施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含：(i)可药用载体；和(ii)伊司他肟或其可药用盐、溶剂化物或水合物，其中所述施用包括静脉内输注历时足以在所述个体中产生一定的伊司他肟代谢物血浆浓度水平的输注持续时间，其中：

(i)所述血浆浓度水平大于约5ng/ml历时至少约6小时的累积期；并且

(ii)所述伊司他肟代谢物包括式(II)或式(III)：

或其可药用盐、酯、溶剂化物、水合物、多晶型物；

其中与通过在所述累积期之前静脉内输注施用伊司他肟相比，施用所述药物组合物导致改善舒张期松弛，由此治疗所述患有急性心力衰竭的个体。

56.根据权利要求55所述的方法，其中所述个体是人类。

57.根据权利要求55或56所述的方法，其中所述舒张期松弛改善通过超声心动图参数E/A、E/e’或通过肺毛细血管楔压来测定。

58.根据权利要求55至57中任一项所述的方法，其中所述输注持续时间足以在所述个体中产生伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约10ng/ml历时至少约6小时的累积期。

59.根据权利要求58所述的方法，其中所述输注持续时间足以在所述个体中产生伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约15ng/ml历时至少约6小时的累积期。

60.根据权利要求59所述的方法，其中所述输注持续时间足以在所述个体中产生伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约20ng/ml历时至少约6小时的累积期。

61.根据权利要求55至59中任一项所述的方法，其中伊司他肟以0.2μg/kg/min至1.5μg/kg/min的剂量施用。

62.根据权利要求61所述的方法，其中伊司他肟以0.25μg/kg/min至1.0μg/kg/min的剂量施用。

63.根据权利要求55至62中任一项所述的方法，其中所述个体被诊断患有射血分数保留(HFpEF)或射血分数中程降低(HFmEF)的心力衰竭。

64.根据权利要求55至63中任一项所述的方法，其中所述个体正经历使用一种或多种另外的治疗活性成分用于心力衰竭的治疗性疗法。

65.根据权利要求64所述的方法，其中所述另外的治疗活性成分选自：ACE抑制剂、AIRB、利尿剂、Ca通道阻断剂、β-阻断剂、洋地黄、NO供体、血管舒张药、SERCA2a刺激剂、脑啡肽酶(NEP)抑制剂、肌球蛋白丝激活剂、重组松弛素-2介导物、重组NP蛋白、可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)的激活剂、血管紧张素II受体的β-抑制蛋白配体。

66.根据权利要求65所述的方法，其中所述利尿剂选自：呋塞米，布美他尼；托拉塞米；美托拉宗；醛固酮拮抗剂，特别是螺内酯和依普利酮；噻嗪类利尿剂，特别是氢氯噻嗪，美托拉宗，氯噻酮。

67.根据权利要求65所述的方法，其中所述ACE抑制剂选自：利诺普利和雷米普利。

68.根据权利要求65所述的方法，其中所述血管紧张素II受体阻断剂选自：缬沙坦、坎地沙坦、奥美沙坦、替米沙坦和氯沙坦。

69.根据权利要求65所述的方法，其中所述血管紧张素受体/脑啡肽酶抑制剂是沙库必曲。

70.根据权利要求65所述的方法，其中所述β-阻断剂选自：卡维地洛和美托洛尔。

71.根据权利要求65所述的方法，其中所述血管舒张药选自：肼苯哒嗪，其任选地与二硝酸异山梨酯组合；硝酸酯，特别是硝酸甘油或硝酸异山梨酯；氨氯地平；非洛地平；非二氢吡啶类，特别是地尔硫卓或维拉帕米。

72.根据权利要求65所述的方法，其中所述用于治疗心力衰竭的活性剂选自：地高辛、诺欣妥、奥美坎替、塞拉新、乌拉立肽、左西孟旦。

73.根据权利要求65至72中任一项所述的方法，其中所述用于心力衰竭的治疗性疗法在伊司他肟施用之前或同时或之后。

74.一种治疗患有急性心力衰竭的个体的方法，所述方法包括下述步骤：

(1)提供患有急性心力衰竭的个体；

(2)测量一种或多种心功能参数，其中所述一种或多种心功能参数包括通过超声心动图参数E/A、E/e’或通过肺毛细血管楔压测定的舒张期松弛；

(3)向所述个体施用治疗有效量的第一药物组合物，所述第一药物组合物包含：(i)第一可药用载体，和(ii)伊司他肟或其可药用盐、溶剂化物或水合物，其以至少约1.0μg/kg/min的第一剂量施用历时足以在所述个体中改善舒张期松弛的第一输注持续时间；

(4)在所述个体中改善舒张期松弛之后，施用治疗有效量的第二药物组合物，所述第二药物组合物包含：(i)第二可药用载体；和(ii)伊司他肟或其可药用盐、溶剂化物或水合物，其以约0.25μg/kg/min至约1.0μg/kg/min的第二剂量施用历时足以在所述个体中产生一定的伊司他肟代谢物血浆浓度水平的第二输注持续时间，其中：

(a)所述血浆浓度水平大于约5ng/ml历时至少约6小时的累积期；并且

(b)所述伊司他肟代谢物包含式(II)或(III)：

或其可药用盐、酯、溶剂化物、水合物、多晶型物；

其中施用所述第一药物组合物、第二药物组合物或两者导致改善舒张期松弛，由此治疗所述患有急性心力衰竭的个体。

75.根据权利要求74所述的方法，其中所述个体是人类。

76.根据权利要求74至75中任一项所述的方法，其中所述输注持续时间足以在所述个体中产生伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约10ng/ml历时至少约6小时的累积期。

77.根据权利要求76所述的方法，其中所述输注持续时间足以在所述个体中产生伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约15ng/ml历时至少约6小时的累积期。

78.根据权利要求77所述的方法，其中所述输注持续时间足以在所述个体中产生伊司他肟代谢物血浆浓度水平大于约20ng/ml历时至少约6小时的累积期。

79.根据权利要求74至78中任一项所述的方法，其中伊司他肟以至少约1.5μg/kg/min的第一剂量施用。

80.根据权利要求74至79中任一项所述的方法，其中伊司他肟以约0.5μg/kg/min的第二剂量施用。

81.根据权利要求74至80中任一项所述的方法，其中所述个体被诊断患有射血分数保留(HFpEF)或射血分数中程降低(HFmEF)的心力衰竭。

82.一种治疗患有心力衰竭的个体的方法，所述方法包括下述步骤：

(1)提供患有心力衰竭的个体；

(2)向所述个体施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含：(i)可药用载体，和(ii)权利要求22所述的化合物；其中所述施用包括静脉内输注历时长于6小时的输注持续时间；

其中与通过静脉内输注少于6小时施用等同化合物相比，施用所述药物组合物导致改善舒张期松弛，由此治疗所述患有急性心力衰竭的个体。

83.根据权利要求82所述的方法，其中所述个体是人类。

84.根据权利要求82或83所述的方法，其中所述舒张期松弛改善通过超声心动图参数E/A、E/e’或通过肺毛细血管楔压来测定。

85.根据权利要求82至84中任一项所述的方法，其中所述输注持续时间长达约24小时。

86.根据权利要求85所述的方法，其中所述输注持续时间长达约36小时。

87.根据权利要求86所述的方法，其中所述输注持续时间长达约48小时。

88.根据权利要求82至87中任一项所述的方法，其中所述化合物以约0.2μg/kg/min至约1.5μg/kg/min的剂量施用。

89.根据权利要求88所述的方法，其中所述化合物以约0.25μg/kg/min至约1.0μg/kg/min的剂量施用。

90.根据权利要求82至89中任一项所述的方法，其中所述个体被诊断患有射血分数保留(HFpEF)或射血分数中程降低(HFmEF)的心力衰竭。