CN112089502B - 一种快速摘取东方鲀属幼鱼耳石的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种快速摘取东方鲀属幼鱼耳石的方法,所述方法首先将东方鲀属幼鱼的头部与身体分离,得到头部,然后剪掉整个下颌,得到上颌及脑部,再然后自咽部后方向头部吻段剪开至眼部后缘,掰开切口处,即可在显微镜下清晰观察到东方鲀属幼鱼的矢耳石、微耳石和星耳石,按照先摘取星耳石,再摘取矢耳石和微耳石的顺序完整的摘取三对耳石。本发明提供的方法操作简单,易于掌握,耗时短,能够准确、完好无损地将三对耳石全部取出,节省东方鲀属幼鱼耳石摘取的时间,缩短摘取周期,具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物样品制备技术领域,具体涉及一种快速摘取东方鲀属幼鱼耳石的方法。
背景技术
耳石是硬骨鱼类在成长过程中沉积在内耳膜迷路内的结石,对鱼类的平衡和听觉起着重要作用。耳石中的轮纹由于在形成过程中形态结构与化学组成相当稳定地记录了鱼类个体生活过程中丰富的生物-物理-化学环境信息,因此耳石为鱼类种间识别、群体划分、生态型识别、年龄估算等方面提供了参考。硬骨鱼类内耳的椭圆囊、球囊和听壶中分别具有微耳石(Lapilli)、矢耳石(Sagittae)和星耳石(Asteriscus)各1对。
近年来,利用耳石显微结构形态参数分析鱼类种群的异同,具有较好的效果。耳石还记录了鱼类早期生长发育阶段的生活史事件。利用激光剥蚀电感耦合等离子体质谱分析(LA-ICPMS)、电子微探针(EPMA)、同步辐射X射线荧光分析法(SYXRF)等技术测定分析耳石全区或某一区域中的微量元素,分析沉积于耳石中的微量元素,可以推断鱼类洄游、繁殖、产卵等生长发育过程中的环境特点,了解鱼类在整个生活史上历经的环境变化,能够有效反应鱼类生活水域的环境特点,为研究鱼类生长发育、生存环境(海水环境因子、食物营养等)及资源分布等研究提供基础数据,同时为研究鱼类的年龄与生长、洄游等提供重要基础信息,在鱼类生物学、资源评估研究中有重要参考价值。
在耳石的相关研究中,涉及到从鱼体头部摘取耳石。完整无损的耳石是耳石显微结构和元素分析的实验基础,因此快速完整的摘取耳石是制约实验成功和实验完成时间至关重要的因素之一。
目前耳石的摘取多采用解剖剪刀沿着鱼体脊椎骨方向,将鱼体头部脑盖骨剪开,取出脑组织,然后取出脑后下方的有机质和胶质,寻找耳石。CN105028281A的专利申请“一种纺锤形和侧扁形鱼类快速摘取矢耳石的方法”公开纺锤形和侧扁形鱼类耳石的摘取方法,具体公开步骤包括:将纺锤形鱼类鳃部翻开,用镊子将鱼内耳球状囊戳穿,取得矢耳石;侧扁形鱼类则将鱼眼斜上方的背部切开,从鱼内耳球状囊摘取矢耳石。
然而,目前所使用的方法,均不适合东方鲀属幼鱼耳石的摘取。首先,由于常规方法摘取耳石,脑部的有机质和胶质较多,易造成混淆,耳石摘取的过程复杂、费时。在星耳石和微耳石的摘取的过程中,耳石可能随着胶质移动,而丢失。其次,纺锤形鱼类耳石的摘取方法,能快速的摘取出矢耳石,但是寻找微耳石和星耳石比较困难。再次,东方鲀属鱼类鳃孔侧中位,短横月形,不易打开。最后,东方鲀属鱼类头部后半部似长方形,与侧扁形鱼类不同,若在眼斜上方背部开口,易造成东方鲀属幼鱼耳石的破裂,很难保证耳石的完整性。
发明内容
为了解决以上的技术问题,本发明提供一种操作简单,易于掌握,耗时短,能够快速完整的摘取出东方鲀属幼鱼三对耳石的方法。
本发明提供的快速摘取东方鲀属幼鱼耳石的方法,包括以下步骤:
(1)将东方鲀属幼鱼头部与身体分离,得到东方鲀属幼鱼头部;
(2)将东方鲀属幼鱼头部的上下颌剪开,弃下颌,得到东方鲀属幼鱼的上颌及脑部;
(3)将东方鲀属幼鱼上颌的鱼鳃去除,鱼头背部朝下,咽部朝上,沿脊椎骨自咽部后方向头部吻段剪开,得到处理好的东方鲀属幼鱼头部;
(4)将处理好的东方鲀属幼鱼头部放置于显微镜下,露出幼鱼脑部结构;
(5)将其中一侧的头骨向上翘起,夹持脑组织侧方包裹星耳石的胶质,首先取出星耳石;然后夹持矢耳石,再取出矢耳石和微耳石。
本发明提供的快速摘取东方鲀属幼鱼耳石的方法根据东方鲀属幼鱼的特点,先将东方鲀属幼鱼的身体与头部分离,得到头部,然后将下颌去除,留上颌及脑部,然后将鲀科幼鱼头部背部朝下,咽部朝上,沿脊椎骨自咽部后方向头部吻段剪开,剪开过程中经过脑部后缘剪开至眼部后缘,得到一个切口,掰开切口,用尖头镊子轻轻向中央拨动脑组织,可在显微镜下清晰观察到三对耳石,然后先摘取星耳石,后摘取矢耳石和微耳石。星耳石的体积比较小,且距离矢耳石和微耳石有一段距离,被胶质包裹着,若先摘取矢耳石和微耳石,易造成脑部胶质的流动,从而失去星耳石的踪迹,故本发明人研究发现采用先摘取星耳石的方法能够完整的得到三对耳石。由于矢耳石较大,即使移动位置也易于寻找;而微耳石与矢耳石紧密相连,摘取矢耳石时微耳石会一并得到,因此本发明人采用后摘取微耳石和矢耳石的方法。
本发明提供的方法操作简单,容易掌握,耗时短,周期短,能够完好无损的得到三对耳石,具有广阔的应用前景。
优选地,所述东方鲀属幼鱼的体长为20-300mm。本发明提供的方法适用于东方鲀属幼鱼,应用范围广。
优选地,步骤(1)中,将东方鲀属幼鱼头部与身体分离的具体方法为:沿东方鲀属幼鱼头部后方边缘、胸鳍前方的位置剪开,将头部与身体分离,得到东方鲀属幼鱼头部。本发明根据东方鲀属幼鱼的特征,采用上述方法将东方鲀属幼鱼的头部整体分离,得到包含完整耳石的头部,为下一步做准备。
优选地,步骤(2)中,将东方鲀属幼鱼头部的上下颌剪开的具体方法为:沿东方鲀属幼鱼头部的上下颌连接处剪开,将下颌剪掉,得到东方鲀属幼鱼的上颌。本发明从东方鲀属幼鱼头部上下颌连接处剪开,得到完整的上颌,而三对耳石包含在上颌之中,通过上述的操作为下一步作准备,降低耳石取出的难度。
优选地,步骤(3)中,沿脊椎骨自咽部后方向头部吻段方向剪开,剪开路径经脑部后缘剪开至眼部后缘。
优选地,步骤(4)中,将处理好的东方鲀属幼鱼头部放置于显微镜下,夹持东方鲀属幼鱼头部剪开线的两侧,掰开剪切口,露出幼鱼脑部结构。
优选地,步骤(5)中,还包括对星耳石、矢耳石和微耳石的后处理。
优选地,所述后处理包括将三对耳石放置于表面皿中,滴入去离子水,夹持耳石,然后去除耳石的外包膜和黏液,干燥。
进一步优选地,采用尖头镊子夹持耳石,用另一只尖头镊子去除耳石的外包膜和黏液。
进一步优选地,所述干燥为自然晾干。
取出的三对耳石上有部分的外包膜或黏液,本发明采用滴入去离子水的方法,用尖头镊子去除耳石外包膜或黏液,然后自然晾干,得到干净、完整的三对耳石。
本发明的有益效果为:
本发明提供的快速摘取东方鲀属幼鱼耳石的方法,首先将东方鲀属鱼的头部与身体分离,得到头部,然后整个剪掉下颌,得到上颌及脑部,再然后沿脊椎骨自咽部向头部吻段剪开至眼部后缘,用镊子掰开切口处,即可在显微镜下清晰观察到东方鲀属幼鱼的矢耳石、微耳石和星耳石,最后摘取耳石,摘取耳石的顺序为先摘星耳石,后摘矢耳石和微耳石。本发明提供的方法操作简单,易于掌握,耗时短,能够准确、完好无损地将三对耳石全部取出,节省东方鲀属幼鱼耳石摘取的时间,缩短摘取周期,具有广阔的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明提供的快速摘取东方鲀属幼鱼耳石方法步骤(1)的示意图;
图2是本发明提供的快速摘取东方鲀属幼鱼耳石方法步骤(3)的示意图;
图3是本发明提供的方法得到的红旗东方鲀的3个耳石的体视显微镜图;
图4是本发明提供的方法得到的红旗东方鲀的矢耳石的体视显微镜图;
图5是本发明提供的方法得到的红旗东方鲀的微耳石的体视显微镜图;
图6是本发明提供的方法得到的红旗东方鲀的星耳石的体视显微镜图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式,都属于本发明所保护的范围。
本发明提供一种快速摘取东方鲀属幼鱼耳石的方法,具体包括以下步骤:
(1)将东方鲀属幼鱼头部与身体分离,得到东方鲀属幼鱼头部;如图1所示,以红旗东方鲀为例,在得到东方鲀属幼鱼头部的过程中,优选,用解剖剪刀沿东方鲀属幼鱼头部后方边缘、胸鳍前方的位置剪开,将头部与身体分离,身体弃用,得到东方鲀属幼鱼头部;
(2)将东方鲀属幼鱼头部的上下颌剪开,弃下颌,得到东方鲀属幼鱼的上颌及脑部;在将东方鲀属幼鱼头部上下颌分离的过程中,优选,采用解剖剪刀沿东方鲀属幼鱼上下颌连接处剪开,将整个下颌剪掉,得到含有完整的耳石的上颌;
(3)将东方鲀属幼鱼上颌的鱼鳃去除,鱼头背部朝下,咽部朝上,沿脊椎骨自咽部后方向头部吻段剪开,剪开过程中经过脑部后缘剪开至眼部后缘,得到处理好的东方鲀属幼鱼头部;如图2所示,仍然以红旗东方鲀为例,在本步骤中,优选的方法为采用解剖剪刀剪掉留在上颌部位的残余的鱼鳃,然后将东方鲀属幼鱼头部的背部朝下,咽部朝上,放置于培养皿中,沿脊椎骨自咽部后方向头部吻段剪开,剪开过程中经过脑部后缘剪开至眼部后缘,得到一个切口;
(4)将处理好的东方鲀属幼鱼头部放置于显微镜下,掰开切口,露出幼鱼脑部结构;优选的,将处理好的东方鲀属幼鱼头部放置与体视显微镜下,调节螺旋至能够在体视显微镜下看清楚幼鱼头部,然后拿两把尖头镊子夹持鱼的头部剪开线的两侧,向两侧轻轻掰开剪开口,露出幼鱼的脑部结构;
(5)将其中一侧的头骨向上翘起,先夹持脑组织侧方包裹星耳石的胶质,取出星耳石;后夹持矢耳石,取出矢耳石和微耳石。优选地,将其中任意一侧的头骨向上微微翘起,在脑组织的侧方,可清晰的观察到矢耳石、微耳石和星耳石;用尖头镊子先夹持住位于侧方的包裹星耳石的胶质,取出星耳石;然后用镊子夹持住矢耳石取出矢耳石和微耳石。
将取出的三对耳石进行后处理,将取出的三对耳石按顺序放置于干净的表面皿中,滴入去离子水,一只尖头镊子夹住耳石,另一只尖头镊子轻轻地去除外包膜和黏液,随后用镊子将矢耳石夹到干净的载玻片上,用粗竹签将微耳石和星耳石挑至干净的载玻片上,自然晾干,得到干净的三对耳石,如图3-6所示。
以上所述,仅为本发明的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到变化或替换,都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此,本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
Claims (3)
1.一种快速摘取东方鲀属幼鱼耳石的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)沿东方鲀属幼鱼头部后方边缘、胸鳍前方的位置剪开,将头部与身体分离,得到东方鲀属幼鱼头部;
(2)沿东方鲀属幼鱼头部的上下颌连接处剪开,将下颌剪掉,得到东方鲀属幼鱼的上颌及脑部;
(3)将东方鲀属幼鱼上颌的鱼鳃去除,鱼头背部朝下,咽部朝上,沿脊椎骨自咽部后方向头部吻段方向剪开,剪开路径经脑部后缘剪开至眼部后缘,得到处理好的东方鲀属幼鱼头部;
(4)将处理好的东方鲀属幼鱼头部放置于显微镜下,夹持东方鲀属幼鱼头部剪开线的两侧,掰开剪切口,露出幼鱼脑部结构;
(5)将其中一侧的头骨向上翘起,夹持脑组织侧方包裹星耳石的胶质,首先取出星耳石;然后夹持矢耳石,再取出矢耳石和微耳石;还包括对矢耳石、微耳石和星耳石的后处理,将三对耳石放置于表面皿中,滴入去离子水,采用尖头镊子夹持耳石,用另一只尖头镊子去除耳石的外包膜和黏液,干燥即可。
2.根据权利要求1所述的快速摘取东方鲀属幼鱼耳石的方法,其特征在于,所述东方鲀属幼鱼的体长为20-300mm。
3.根据权利要求1所述的快速摘取东方鲀属幼鱼耳石的方法,其特征在于,所述干燥为自然晾干。
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- 2020-09-23 CN CN202011009867.5A patent/CN112089502B/zh active Active
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