CN112020509A - 转基因的瘟病毒及其作为标记疫苗的应用 - Google Patents
转基因的瘟病毒及其作为标记疫苗的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112020509A CN112020509A CN201980027958.0A CN201980027958A CN112020509A CN 112020509 A CN112020509 A CN 112020509A CN 201980027958 A CN201980027958 A CN 201980027958A CN 112020509 A CN112020509 A CN 112020509A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pestivirus
- rns
- genetically modified
- gene fragment
- chimeric
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000710778 Pestivirus Species 0.000 title claims abstract description 217
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 102
- 239000003550 marker Substances 0.000 title description 21
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 title description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 89
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 73
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 63
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 28
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims abstract description 13
- 208000004571 Pestivirus Infections Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 241001493546 Suina Species 0.000 claims abstract description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 54
- 241000282815 Antilocapra americana Species 0.000 claims description 44
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims description 35
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 33
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 31
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 24
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 17
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 15
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 claims description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 13
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 12
- 241000710780 Bovine viral diarrhea virus 1 Species 0.000 claims description 11
- 241001118702 Border disease virus Species 0.000 claims description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 241001229027 Linda virus Species 0.000 claims description 8
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims description 4
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 claims description 4
- 241000489313 Bovine viral diarrhea virus 3 Species 0.000 claims description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 2
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 9
- 206010051511 Viral diarrhoea Diseases 0.000 abstract description 5
- 208000008921 border disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 abstract description 4
- 208000001726 Classical Swine Fever Diseases 0.000 abstract description 3
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 abstract description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 33
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 9
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 8
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 7
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 6
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 5
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 241000282817 Bovidae Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 3
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 3
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 3
- FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N Ala-Ala-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- KQESEZXHYOUIIM-CQDKDKBSSA-N Ala-Lys-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KQESEZXHYOUIIM-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 2
- MDNAVFBZPROEHO-UHFFFAOYSA-N Ala-Lys-Val Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(C)N)CCCCN MDNAVFBZPROEHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 2
- QPOARHANPULOTM-GMOBBJLQSA-N Arg-Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N QPOARHANPULOTM-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 2
- IIABBYGHLYWVOS-FXQIFTODSA-N Arg-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O IIABBYGHLYWVOS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- UAOSDDXCTBIPCA-QXEWZRGKSA-N Arg-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N UAOSDDXCTBIPCA-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- LLUGJARLJCGLAR-CYDGBPFRSA-N Arg-Ile-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N LLUGJARLJCGLAR-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 2
- CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- SUEIIIFUBHDCCS-PBCZWWQYSA-N Asn-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SUEIIIFUBHDCCS-PBCZWWQYSA-N 0.000 description 2
- SPCONPVIDFMDJI-QSFUFRPTSA-N Asn-Ile-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SPCONPVIDFMDJI-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 2
- PNHQRQTVBRDIEF-CIUDSAMLSA-N Asn-Leu-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N PNHQRQTVBRDIEF-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- RZNAMKZJPBQWDJ-SRVKXCTJSA-N Asn-Lys-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N RZNAMKZJPBQWDJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- JWKDQOORUCYUIW-ZPFDUUQYSA-N Asn-Lys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JWKDQOORUCYUIW-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 2
- XEGZSHSPQNDNRH-JRQIVUDYSA-N Asn-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XEGZSHSPQNDNRH-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 2
- RRKCPMGSRIDLNC-AVGNSLFASA-N Asp-Glu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O RRKCPMGSRIDLNC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- VWWAFGHMPWBKEP-GMOBBJLQSA-N Asp-Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N VWWAFGHMPWBKEP-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 2
- RRIJEABIXPKSGP-FXQIFTODSA-N Cys-Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CS RRIJEABIXPKSGP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- XXDLUZLKHOVPNW-IHRRRGAJSA-N Cys-Arg-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CS)N)O XXDLUZLKHOVPNW-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- UFOBYROTHHYVGW-CIUDSAMLSA-N Cys-Cys-His Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(O)=O UFOBYROTHHYVGW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- GCDLPNRHPWBKJJ-WDSKDSINSA-N Cys-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GCDLPNRHPWBKJJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- IDFVDSBJNMPBSX-SRVKXCTJSA-N Cys-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IDFVDSBJNMPBSX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 101150082674 E2 gene Proteins 0.000 description 2
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 2
- FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N Gln-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- MLZRSFQRBDNJON-GUBZILKMSA-N Gln-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N MLZRSFQRBDNJON-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- JSYULGSPLTZDHM-NRPADANISA-N Gln-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JSYULGSPLTZDHM-NRPADANISA-N 0.000 description 2
- TWHDOEYLXXQYOZ-FXQIFTODSA-N Gln-Asn-Gln Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N TWHDOEYLXXQYOZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- LPYPANUXJGFMGV-FXQIFTODSA-N Gln-Gln-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N LPYPANUXJGFMGV-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- QIQABBIDHGQXGA-ZPFDUUQYSA-N Glu-Ile-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O QIQABBIDHGQXGA-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 2
- HQTDNEZTGZUWSY-XVKPBYJWSA-N Glu-Val-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O HQTDNEZTGZUWSY-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 2
- KTSZUNRRYXPZTK-BQBZGAKWSA-N Gly-Gln-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KTSZUNRRYXPZTK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- TTZAWSKKNCEINZ-AVGNSLFASA-N His-Arg-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O TTZAWSKKNCEINZ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- DGYNAJNQMBFYIF-SZMVWBNQSA-N His-Glu-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 DGYNAJNQMBFYIF-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 2
- UASTVUQJMLZWGG-PEXQALLHSA-N Ile-His-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)NCC(=O)O)N UASTVUQJMLZWGG-PEXQALLHSA-N 0.000 description 2
- CMNMPCTVCWWYHY-MXAVVETBSA-N Ile-His-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N CMNMPCTVCWWYHY-MXAVVETBSA-N 0.000 description 2
- SHVFUCSSACPBTF-VGDYDELISA-N Ile-Ser-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N SHVFUCSSACPBTF-VGDYDELISA-N 0.000 description 2
- VQPPIMUZCZCOIL-GUBZILKMSA-N Leu-Gln-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VQPPIMUZCZCOIL-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- VPKIQULSKFVCSM-SRVKXCTJSA-N Leu-Gln-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O VPKIQULSKFVCSM-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- WXJKFRMKJORORD-DCAQKATOSA-N Lys-Arg-Ala Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN WXJKFRMKJORORD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- YVMQJGWLHRWMDF-MNXVOIDGSA-N Lys-Gln-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N YVMQJGWLHRWMDF-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 2
- HAUUXTXKJNVIFY-ONGXEEELSA-N Lys-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HAUUXTXKJNVIFY-ONGXEEELSA-N 0.000 description 2
- XDPLZVNMYQOFQZ-BJDJZHNGSA-N Lys-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N XDPLZVNMYQOFQZ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N Lys-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- ZUGVARDEGWMMLK-SRVKXCTJSA-N Lys-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN ZUGVARDEGWMMLK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- SXWQMBGNFXAGAT-FJXKBIBVSA-N Met-Gly-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SXWQMBGNFXAGAT-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 2
- HWROAFGWPQUPTE-OSUNSFLBSA-N Met-Ile-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N HWROAFGWPQUPTE-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 2
- LLKWSEXLNFBKIF-CYDGBPFRSA-N Met-Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@@H](N)CCSC LLKWSEXLNFBKIF-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 2
- FBLBCGLSRXBANI-KKUMJFAQSA-N Met-Phe-Glu Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N FBLBCGLSRXBANI-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- FPTXMUIBLMGTQH-ONGXEEELSA-N Phe-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 FPTXMUIBLMGTQH-ONGXEEELSA-N 0.000 description 2
- TXPUNZXZDVJUJQ-LPEHRKFASA-N Pro-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O TXPUNZXZDVJUJQ-LPEHRKFASA-N 0.000 description 2
- AJCRQOHDLCBHFA-SRVKXCTJSA-N Pro-His-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AJCRQOHDLCBHFA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 2
- QVOGDCQNGLBNCR-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QVOGDCQNGLBNCR-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- TYYBJUYSTWJHGO-ZKWXMUAHSA-N Ser-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O TYYBJUYSTWJHGO-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- XERQKTRGJIKTRB-CIUDSAMLSA-N Ser-His-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)N)CC1=CN=CN1 XERQKTRGJIKTRB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- LRZLZIUXQBIWTB-KATARQTJSA-N Ser-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRZLZIUXQBIWTB-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- CUXJENOFJXOSOZ-BIIVOSGPSA-N Ser-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O CUXJENOFJXOSOZ-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 2
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 description 2
- TZKPNGDGUVREEB-FOHZUACHSA-N Thr-Asn-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O TZKPNGDGUVREEB-FOHZUACHSA-N 0.000 description 2
- DXNUZQGVOMCGNS-SWRJLBSHSA-N Thr-Gln-Trp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N)O DXNUZQGVOMCGNS-SWRJLBSHSA-N 0.000 description 2
- WYKJENSCCRJLRC-ZDLURKLDSA-N Thr-Gly-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O WYKJENSCCRJLRC-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 2
- RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N Thr-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 2
- HDQJVXVRGJUDML-UBHSHLNASA-N Trp-Cys-Asn Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N HDQJVXVRGJUDML-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- KIMOCKLJBXHFIN-YLVFBTJISA-N Trp-Ile-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 KIMOCKLJBXHFIN-YLVFBTJISA-N 0.000 description 2
- YDTKYBHPRULROG-LTHWPDAASA-N Trp-Ile-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N YDTKYBHPRULROG-LTHWPDAASA-N 0.000 description 2
- LFMLXCJYCFZBKE-IHPCNDPISA-N Trp-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N LFMLXCJYCFZBKE-IHPCNDPISA-N 0.000 description 2
- ACGIVBXINJFALS-HKUYNNGSSA-N Trp-Phe-Gly Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N ACGIVBXINJFALS-HKUYNNGSSA-N 0.000 description 2
- JEYRCNVVYHTZMY-SZMVWBNQSA-N Trp-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JEYRCNVVYHTZMY-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 2
- ZJPSMXCFEKMZFE-IHPCNDPISA-N Trp-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZJPSMXCFEKMZFE-IHPCNDPISA-N 0.000 description 2
- ISERLACIZUGCDX-ZKWXMUAHSA-N Val-Asp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N ISERLACIZUGCDX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- DDNIHOWRDOXXPF-NGZCFLSTSA-N Val-Asp-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N DDNIHOWRDOXXPF-NGZCFLSTSA-N 0.000 description 2
- FXVDGDZRYLFQKY-WPRPVWTQSA-N Val-Gly-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)C(C)C FXVDGDZRYLFQKY-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 2
- BTWMICVCQLKKNR-DCAQKATOSA-N Val-Leu-Ser Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O BTWMICVCQLKKNR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 2
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- LXWYCLOUQZZDBD-LIYNQYRNSA-N csfv Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXWYCLOUQZZDBD-LIYNQYRNSA-N 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229910001651 emery Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 2
- 108010040856 glutamyl-cysteinyl-alanine Proteins 0.000 description 2
- 108010008237 glutamyl-valyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 2
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- 102000008482 12E7 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010020567 12E7 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 101100273797 Caenorhabditis elegans pct-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282988 Capreolus Species 0.000 description 1
- 241001118619 Classical swine fever virus isolates Species 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 101150013191 E gene Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 1
- 101710125507 Integrase/recombinase Proteins 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101800000515 Non-structural protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 206010048685 Oral infection Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000973060 Porcine pestivirus isolate Bungowannah Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 241001416177 Vicugna pacos Species 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 244000037640 animal pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 101150010487 are gene Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012165 high-throughput sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000002698 mandibular nerve Anatomy 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 208000030247 mild fever Diseases 0.000 description 1
- 231100001228 moderately toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000008957 viral persistence Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
- C12N2770/24322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
- C12N2770/24334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
- C12N2770/24371—Demonstrated in vivo effect
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
在第一方面中，本发明涉及一种经基因修饰的瘟病毒，其特征在于，所述瘟病毒被修饰为，使得至少对于Erns肽编码的基因片段源自一种远缘的瘟病毒或者源自多种与经基因修饰的瘟病毒远缘的瘟病毒。在另一方面中，描述了一种受感染的宿主细胞或其细胞培养上清液，所述细胞培养上清液包含根据本发明进行基因修饰的瘟病毒。此外，本发明涉及一种疫苗及其应用以及经基因修饰的瘟病毒作为疫苗的应用，尤其作为用于动物的疫苗以及作为抗典型猪瘟(KSP)、牛病毒性腹泻(BVD)、边界病(BD)以及其它通过瘟病毒引起的疾病的疫苗。此外，描述了一种重组嵌合的Erns肽以及一种用于检测瘟病毒或由其诱导产生的抗体的检测系统，尤其用于区分接种的动物和自然感染瘟病毒之后的动物。最后描述了一种方法，所述方法用于确定动物已用根据本发明的疫苗进行接种疫苗的程度，以及对此的诊断试剂盒，和一种用于控制在偶蹄目的动物种群中的瘟病毒感染的方法。
Description
技术领域
在第一方面中，本发明涉及一种基因修饰的瘟病毒，其特征在于，所述瘟病毒被修饰为，使得至少对于Erns肽编码的基因片段源自一种或多种与经基因修饰的瘟病毒远缘的瘟病毒。在另一方面中，描述了一种受感染的宿主细胞或其细胞培养上清液，所述细胞培养上清液包含根据本发明进行基因修饰的瘟病毒。此外，本发明涉及一种疫苗及其应用以及经基因修饰的瘟病毒作为疫苗的应用，尤其作为用于动物的疫苗以及作为抗典型猪瘟(KSP)、牛病毒性腹泻(BVD)、边界病(BD)以及其它通过瘟病毒引起的疾病的疫苗。此外，描述了一种重组嵌合Erns肽以及一种用于检测瘟病毒或由其诱导产生的抗体的检测系统，尤其用于区分接种的动物和自然感染瘟病毒之后的动物。最后描述了一种方法，所述方法用于确定动物已用根据本发明的疫苗进行接种疫苗的程度，以及对此的诊断试剂盒，和一种用于控制在偶蹄目的动物种群中的瘟病毒感染的方法。
背景技术
典型猪瘟(KSP)由RNA病毒(典型猪瘟病毒；KSPV)引起，该RNA病毒属于黄病毒科家族中的瘟病毒属。其是世界范围内最重要的动物病原体之一。用减毒的KSPV分离株进行接种引起快速而持久的免疫力。在世界范围内最广泛使用的金标准疫苗基于所谓的“C株”疫苗病毒的变体。然而在接种后或在野外感染幸存之后无法对免疫响应进行血清学区分。该事实一方面使克服KSP变难，因为不能在已接种的种群中使用血清学方法，另一方面，这也具有严重的经济后果，因为被接种的动物不再能够或者难以投向市场，并且迫使采取广泛的贸易限制。能够实现在接种的动物和被自然感染(野外感染)/在自然感染(野外感染)之后的动物之间进行区分的疫苗能够解决该问题。这种疫苗也称为标记疫苗或DIVA疫苗(DIVA：differentiation infected from vaccinates animals)。对于在牛中的另一经济上重要的动物疾病，即牛病毒性腹泻(BVD)，该情况是类似的。牛病毒性腹泻同样通过瘟病毒，即牛病毒性腹泻病毒(BVDV)触发，并且标记疫苗在此也能够提供下述可行性：借助于血清学方法区分接种的牛和感染的牛。
通常，在瘟病毒感染的情况下，例如用KSPV或BVDV诱导产生针对糖基化的包膜蛋白质E2和Erns的以及针对非结构蛋白质NS3的免疫响应。尤其，中和所述病毒的E2特异性抗体在保护性免疫响应中起关键作用，进而形成研发抵抗KSP、BVD和其它因瘟病毒引起的疾病的相应的标记疫苗的基础。DIVA原理主要基于检测有抵抗瘟病毒Erns的抗体。用基于E2的标记疫苗进行免疫的动物构成保护性的E2特异性免疫响应，并且Erns抗体是阴性的。该原理同样适用于不同的瘟病毒，如BVDV和KSPV。因此，该策略包括借助于基因技术制造嵌合瘟病毒来制造标记疫苗。为此，将对于上述三种蛋白质之一进行编码的基因组区域通过近缘的瘟病毒的同源序列来替换。在过去已产生大量不同的嵌合瘟病毒，并且部分地已经检查其作为标记疫苗的适用性。示例性地，在此参考WO 2016/176624 A2和WO 2016/097245 A1。
尤其地，不存在Erns编码序列或其被其它瘟病毒的同源序列替换是用于研发血清学阴性标记的有前途的策略。但是，对于制造活疫苗，删除Erns编码序列是不可行的，因为其是瘟病毒的必不可少的蛋白质。在不久前，欧洲药品管理局(EMA)在全球范围内首次批准了嵌合瘟病毒作为KSP标记疫苗，对此涉及德国Zoetis的
CSF标记。在这种情况下同样是血清学阴性标记的策略，该策略基于缺乏针对KSPV的Erns蛋白质的免疫响应。在此，如下改变牛病毒性腹泻病毒(BVDV)分离株：BVDV的E2基因被猪瘟病毒分离株的E2基因取代，使得嵌合瘟病毒诱导产生针对KSPV的E2蛋白质的保护性抗体，也参见Reimann等，2004，Virology，322，143-157页。在多项研究中表明：虽然能够实现非常好的保护作用，然而在不同的血清学测试中能够观察到相对高的假阳性结果，使得仅能够受限地识别在接种种群中的野外感染，例如参见Meyer等，2017，Transbound Emerg Dis，64(6)：2013-2022和Meyer等，2018，Transbound Emerg Dis，65(2)：e505-e508。所观察到的假阳性反应可能通过血清学交叉反应性引起，因为BVDV和KSPV在基因学和抗原学上彼此非常近缘。除了假阳性结果之外，在动物传染病法上重要的相对于猪感染反刍动物的瘟病毒(Pestivieren der
)，如BVDV或边界病病毒(BDV)来区分猪感染KSPV在使用
时引起问题，因为疫苗基于BVDV分离株“CP7”。
对于BVD至今为止没有批准标记疫苗。描述了携带叉角羚瘟病毒的Erns序列的嵌合BVD病毒(Luo等，2012)。至今为止尚未描述在CSFV疫苗的情况下使用叉角羚Erns的应用以及关于在动物物种即猪中产生KSPV嵌合体和关于针对这种疫苗病毒的免疫响应的实验数据。
除E2以外，Erns蛋白质(氨基酸数量：227)属于KSPV免疫原性结构蛋白质，并且还具有以下特性：
·Erns具有核糖核酸酶活性；
·Erns的分子质量的一半归因于糖基化；
·膜结合经由C末端两性分子螺旋式进行；
·糖基化包膜蛋白质Erns的分子结构初次由Langedijk J.P.，J Virol，2002，76，10383-10392描述；
·Erns的抗原结构借助于表位作图研究更详细地描述。Erns的表位在此越来越不连续地存在。
至今的嵌合瘟病毒的关于鲁棒的DIVA设计理念的基本问题是在针对典型的反刍动物瘟病毒如BVDV和BDV的抗体与KSPV特异性抗体之间的血清学交叉反应性。在基因学上近缘的瘟病毒存在高度的血清学交叉反应性。
在过去几年中已发现多种新的“非典型”瘟病毒，所述“非典型”瘟病毒在基因学上与上述典型的瘟病毒(例如KSPV、BVDV、BDV和HoBi样瘟病毒)极度不同。在WO 2017/114778A1中描述的瘟病毒标记疫苗的特征在于，Erns蛋白质是嵌合Erns蛋白质，其中其编码基因在5’区域中源自下述瘟病毒，所述瘟病毒在基因学上与改变的瘟病毒近缘关系很少，并且在3’末端处具有Erns基因的相应的基因片段，该基因片段源自与改变的瘟病毒非常近缘的瘟病毒。为此，在该文献中进一步解释，通过在基因学上远缘的瘟病毒的异源Erns完全替换瘟病毒中的原始Erns会要么强烈减少要么甚至停止所获得的嵌合瘟病毒的复制。该文献教导：通过远缘的瘟病毒中的Erns基因完全替换待修饰的瘟病毒的Erns基因在病毒复制方面进而在活疫苗的制造和繁殖方面是非常不利的。尤其地，远缘的瘟病毒的Erns序列将会使上文提及的血清学交叉反应性问题最小化，进而显着改进在动物疾病防控中作为血清学阴性标记的用途。
发明内容
目的是提供一种瘟病毒，所述瘟病毒适合作为标记疫苗的并且具有关于Erns蛋白质与典型的瘟病毒(例如KSPV、BVDV、BDV)的较低的血清学交叉反应性。
在第一方面中，下述发明涉及基因修饰的瘟病毒，其中将瘟病毒的Erns编码基因修饰为，使得至少Erns蛋白质编码基因组片段源自仅与该经基因修饰的瘟病毒远缘的瘟病毒。
当前应将表述“基因”或“基因片段”或“基因组片段”理解为是指编码特定的蛋白质或蛋白质的一部分(在下文中通常也称为肽或多肽)的核酸序列或基因组区域。
当前应将表述“经基因修饰的瘟病毒”理解为通过基因方法具有Erns编码基因的瘟病毒，其至少部分地源自与经基因修饰的瘟病毒不同的瘟病毒。也就是说，原始的Erns编码基因组片段至少部分地通过与经基因修饰的瘟病毒远缘的异源瘟病毒的相应的Erns基因片段取代。
现在，令人惊奇地发现，一方面，如此经基因修饰的瘟病毒能够在保留复制能力的情况下适合作为疫苗，例如标记疫苗，并且此外具有明显降低的交叉反应性。这能够在经基因修饰的瘟病毒的情况下表现出来，其中两个不同的分别远缘的瘟病毒的Erns编码序列的子区域相互组合。附加地，通过根据所使用的序列交换Erns序列实现了不同程度的减毒。
根据本发明，通过原始瘟病毒的Erns基因的核苷酸序列的和另一瘟病毒的所引入的Erns基因的序列的同一性水平来确定：瘟病毒与另一瘟病毒是非常近缘还是远缘的。在KSPV作为经基因修饰的瘟病毒的情况下，将KSPV的Erns作为原始的Erns基因与远缘的瘟病毒的所引入的基因片段进行比较，例如与来自大鼠的瘟病毒的Erns编码基因片段进行比较。
在制造呈嵌合瘟病毒形式的活疫苗时重要的是，所交换的序列足够不同，以便允许作为血清学阴性标记使用，另一方面，重新组合的序列必须是生物学相容的，并且可能的话允许接种疫苗病毒的有效复制。
在这种情况下，基于在相应的Erns编码序列之间的同一性区分“非常近缘”和“远缘”。当基于相同或不同的核酸构件的数量确定的同一性与经基因修饰的瘟病毒(例如KSPV、BVDV)相比小于65％时，称为“远缘”。如果同一性大于或等于65％，那么称为“紧密或者非常近缘”。
在一个实施形式中，根据本发明经基因修饰的瘟病毒的特征在于，在基因上远缘的瘟病毒中的Erns基因片段是选自如下瘟病毒的Erns基因片段：叉角羚瘟病毒、Bungowannah病毒、LINDA病毒、大鼠瘟病毒、非典型猪瘟病毒(APPV)和蝙蝠瘟病毒。
在本发明的另一实施形式中，经基因修饰的瘟病毒是下述瘟病毒，其中Erns蛋白质编码基因片段是嵌合Erns基因片段，其具有由第一远缘的瘟病毒的Erns基因片段的相应的部分和第二部分构成的5’部分，所述第二部分设置为3’，同样源自第二远缘的瘟病毒的Erns基因片段，其中所述第一和第二基因片段源自不同的瘟病毒。
在该实施形式中，因此，在经基因修饰的瘟病毒中关于Erns基因被交换的基因片段是如下片段，所述片段由两个片段，其中这些片段源自两种不同的瘟病毒种。例如在此应提到的是，一个基因片段源自大鼠的瘟病毒，而另一基因片段源自叉角羚(Gabelbock)的瘟病毒。另外的实例包括：一个基因片段源自大鼠瘟病毒，而另一基因片段源自APPV，或者一个基因片段源自APPV，而另一基因片段源自叉角羚瘟病毒，以及其它组合，只要这两个基因片段都与靶标瘟病毒的Erns基因片段远缘。
在一个实施形式中，在此，经基因修饰的瘟病毒，即初始瘟病毒(或靶标瘟病毒)是下述瘟病毒，所述瘟病毒选自牛病毒性腹泻病毒(BVDV)；典型猪瘟病毒(KSPV)，“Hobi样”瘟病毒和边界病病毒(BDV)。
在一个实施形式中，在此，经基因修饰的瘟病毒是具有嵌合Erns基因片段的瘟病毒，其中所述嵌合Erns基因片段是下述基因片段，其具有来自大鼠瘟病毒的Erns基因片段的一部分和来自叉角羚瘟病毒的Erns基因片段的另一部分。这两种瘟病毒的Erns基因是根据SEQ ID NO.3和4的基因片段。
在一个实施形式中，在此，被引入到待进行基因修饰的瘟病毒中的Erns基因片段是下述基因片段，其具有与来自大鼠瘟病毒的Erns基因的5’片段相对应的5’部分和与来自叉角羚瘟病毒的Erns基因的3’片段相对应的3’片段。在一个实施形式中，在此，Erns基因片段是具有根据SEQ ID NO.1的序列的基因片段。由大鼠瘟病毒的Erns基因的5’片段和叉角羚瘟病毒的Erns基因的3’片段组成的嵌合Erns基因在此与根据SEQ ID NO.1的序列相比至少能够具有90％的、如95％的，尤其99％的序列同一性。在此，这两个Erns基因片段如下满足要求：它们与待进行修饰的瘟病毒的相应的Erns基因片段具有小于65％的同一性。
来自大鼠瘟病毒的Erns编码序列在Firth等，2014，MBio，5(5)：e01933-14中描述，对应于基因库登录号NC025677的位置1618-2298。叉角羚瘟病毒的Erns编码序列是具有681个核苷酸的序列，对应于根据基因库编号NC024018的位置1165-1845，并且在Neill等，2014，Genome Announc.2014年6月12日；2(3)中描述。
在本发明的一个方面中，经基因修饰的瘟病毒是减毒的瘟病毒。当前应将术语“减毒”理解为：病毒具有减小的致病力。
在一个实施形式中，经基因修饰的瘟病毒是经基因修饰的KSPV。这种经基因修饰的KSPV在此包含下述Erns基因片段，该Erns基因片段由大鼠瘟病毒中的Erns编码基因片段的5’片段和对应于来自叉角羚瘟病毒的Erns编码3’基因片段的3’基因片段组成。
诸如5’基因片段和3’基因片段的所述基因片段在此分别包括瘟病毒的相应的Erns基因片段的至少20个核苷酸，如分别25个核苷酸，如分别30个核苷酸。
在另一实施形式中，本发明涉及包含根据本发明经基因修饰的瘟病毒的宿主细胞。
适合于复制瘟病毒的宿主细胞通常是已知的，并且相应地可从文献中获悉并且能够免费获得。适合的宿主细胞的实例包括细胞系，诸如在经基因修饰的KSPV病毒的情况下包括PK15、SK6或STE的猪细胞系，在经基因修饰的BVDV的情况下如MDBK的牛细胞系，但是还有所描述的其它适合的包括牛细胞例如SFT-R的宿主细胞。
此外，本发明涉及一种组合物，所述组合物包含根据本发明的宿主细胞或根据本发明的经基因修饰的瘟病毒或其组分，其至少包括如在本申请中所定义的Erns基因片段或通过这些Erns基因片段之一编码的多肽。所述组分包括Erns基因片段或通过所述Erns基因片段编码的多肽，并且在此能够以相应的细胞培养基或其它形式存在。
所述组合物同样能够以细胞裂解物的形式使用。当然，所述组合物也能够具有这些单个组分的组合。
在另一方面中，本发明针对用于动物，尤其是猪的疫苗，但是也涉及用于反刍动物如牛的并且通常用于偶蹄目的动物的疫苗。所述疫苗包括根据本发明的经基因修饰的瘟病毒或根据本发明的宿主细胞或其组合以及在药理学上可接受的载体材料。
适合于疫苗的材料对于本领域技术人员是已知的，尤其地，疫苗的其它组分使得所述疫苗允许经由相应适宜的给药途径进行给药。适合于疫苗的给药途径包括：口服、经鼻、粘膜、皮肤、皮下、肌内或静脉内施用。
应适合于根据本发明的疫苗的表述“动物”理解为下述动物，所述动物易于被至少一种瘟病毒感染。所述动物主要是哺乳动物，并且大多是偶蹄目的成员。根据本发明的接种疫苗的可能的动物是猪，包括野猪和反刍动物，例如牛、绵羊、山羊或其它反刍动物，包括野生反刍动物(例如狍、鹿、羚羊)或骆驼科动物(例如单峰骆驼、两头驼和新世界骆驼科动物，例如羊驼和骆马)。
根据本发明的疫苗在此能够具有多于一种的经基因修饰的瘟病毒的组合，例如两种不同的经基因修饰的瘟病毒。
所包含的瘟病毒在此能够是活性的、减毒的或灭活的瘟病毒。在此，能够通过嵌合所述Erns序列来确定减毒，或者将所描述的发明与另外的转基因组合以将病毒减毒，或者与以自然的方式在靶标物种中减毒的瘟病毒进行组合。适合的变型形式对于本领域技术人员而言是已知的。
在一个实施形式中，在此涉及一种活疫苗，例如具有减毒的标记疫苗的活疫苗，如根据本发明所描述的。
所述活疫苗通常以冻干的形式存在。相应地能够构成根据本发明的疫苗。对于本领域技术人员已知的是用于冻干和随后重构的相应的方法。
在一个实施形式中，所述疫苗能够是试剂盒的一部分，即具有多个容器的试剂盒或系统，其中所述容器之一包括冻干的疫苗，而另一容器包括用于重构所述冻干的疫苗的相应的试剂。
表述“在药理学上可接受的载体”包括相应适合的溶剂和液体，如水、生理盐水溶液或磷酸盐缓冲盐溶液，以及可能的另外的稳定剂和防腐剂。
此外，所述疫苗能够包含佐剂；对于本领域技术人员而言适宜的佐剂是已知的。
可选地，根据本发明的疫苗能够与另外的抗原或相应的瘟病毒作为所谓的组合疫苗一起给药，所述相应的瘟病毒表达另外的抗原。
在另一方面中，本发明针对经基因修饰的瘟病毒或根据本发明的宿主细胞或根据本发明的嵌合重组Erns多肽的单独或组合的应用，用于预防或减少被瘟病毒感染或在这些动物中由瘟病毒引起的疾病的相应的病征。
在另一方面中，提供一种用于动物接种疫苗的方法，所述方法包括施用根据本发明的疫苗的步骤。尤其地，所述疫苗例如适合在相应的治疗方法的范围中预防性或治疗性使用，以便防止瘟病毒感染或感染的扩散。
在另一方面中，提供具有N末端片段和C末端片段的重组的嵌合Erns多肽，其中N末端片段和C末端片段源自与KSPV和BVDV远缘的瘟病毒，其中所述远缘的瘟病毒是不同的瘟病毒，尤其选自叉角羚瘟病毒、Bungowannah病毒、LINDA病毒、大鼠瘟病毒、非典型猪瘟病毒(APPV)和蝙蝠瘟病毒。
在一个实施形式中，根据本发明的重组的嵌合Erns多肽的特征在于，所述重组的嵌合Erns多肽包括由大鼠瘟病毒编码的N末端Erns部分和由叉角羚病毒编码的C末端Erns部分，尤其使得所述多肽包括根据SEQ ID NO.2的序列。在一个实施形式中，在此，多肽编码序列也包括根据SEQ ID NO.2的序列的同源序列，其中其在氨基酸层面上具有至少90％、93％、95％、96％、97％、98％的同一性。
在另一方面中，提供一种用于检测瘟病毒或瘟病毒特异性抗体的检测系统。所述检测系统的特征在于，其具有根据本发明的重组的Erns多肽作为抗原。在一个实施形式中，所述检测系统包含重组的非嵌合Erns多肽作为抗原。在一个实施形式中，所述检测系统一方面能够具有根据本发明的重组的多肽作为抗原，并且在另一个实施形式中，所述检测系统具有上述根据本发明的多肽，并且此外具有第二多肽，所述第二多肽用于特异性检测瘟病毒，尤其是KSPV或BVDV的野外感染。在一个实施形式中，根据本发明的检测系统是下述系统，其允许以差异性血清学方式相对于动物感染了未经基因修饰的瘟病毒检测动物接种了根据本发明经基因修饰的瘟病毒。接种疫苗的动物不具有针对未经基因修饰的、已触发野外感染的瘟病毒的Erns的抗体，而能够产生针对由疫苗编码的Erns的相应的抗体。在一个实施形式中，所述检测系统是用于差异化检测动物接种了本发明的疫苗，尤其是KSPV或BVDV疫苗的系统，其中所述检测系统的特征在于，所述检测系统具有重组的Erns多肽作为抗原，如当前所描述的那样，即非嵌合Erns多肽，源自与KSPV和BVDV相比远缘的瘟病毒，其中所述远缘的瘟病毒尤其选自：叉角羚瘟病毒、Bungowannah病毒、LINDA病毒、大鼠瘟病毒、非典型猪瘟病毒(APPV)和蝙蝠瘟病毒。
相应地，根据本发明的检测系统尤其适合于允许相应地区分接种疫苗的动物和自然感染的动物。因此，在一个相应的实施形式中，本发明涉及重组的嵌合Erns肽的用于检测针对根据本发明的经基因修饰的瘟病毒的抗体的应用，所述瘟病毒尤其是典型猪瘟病毒(KSPV)或牛腹泻病毒(BVDV)的经基因修饰的病毒。在此，一个实施形式是，用于区分自然感染KSPV、BVDV或其它瘟病毒和接种根据本发明的经基因修饰的瘟病毒的应用。这种应用在此例如以DIVA ELISA的形式进行。
在一个实施形式中，根据本发明的应用是根据本发明的重组的嵌合Erns多肽的应用或者是来自与KSPV和BVDV远缘的瘟病毒的非嵌合Erns多肽的应用，其中所述远缘的瘟病毒尤其来自叉角羚瘟病毒、Bungowannah病毒、LINDA病毒、大鼠瘟病毒、非典型猪瘟病毒(APPV)和蝙蝠瘟病毒。
此外，本发明涉及一种诊断试剂盒，其包含根据本发明的经基因修饰的瘟病毒和/或如在本文中定义的根据本发明的重组的嵌合Erns多肽或其一部分。
最后，提出一种利用根据本发明的疫苗或根据本发明的诊断检测试剂盒或根据本发明的经基因修饰的瘟病毒或重组的嵌合Erns多肽或根据本发明的细胞，或根据本发明的组合物，或来自与KSPV和BVDV远缘的瘟病毒的非嵌合的Erns肽的Erns多肽来控制在偶蹄目的动物种群中瘟病毒感染的方法，其中所述远缘的瘟病毒是尤其来自叉角羚瘟病毒、Bungowannah病毒、LINDA病毒、大鼠瘟病毒、非典型猪瘟病毒(APPV)和蝙蝠瘟病毒的瘟病毒。
根据本发明的检测系统和根据本发明的方法在此能够包含对于本领域技术人员已知的常用的检测系统或方法，尤其是免疫学方法和免疫学检测系统。
对于本领域技术人员而言，适合的方法和检测系统，尤其是免疫学方法和免疫学检测系统是已知的。所述检测系统和方法尤其基于检测宿主的针对病毒或疫苗的抗体。
根据本发明的方法和根据本发明的检测系统尤其能够是ELISA系统。在一个实施形式中，所述系统能够用作为DIVA(differentiation of infected from vaccinatedanimals，区分被感染的动物与接种疫苗的动物)ELISA。
根据本发明的检测系统或根据本发明的诊断测试试剂盒在此能够包含其它常用的组分，如洗涤缓冲液、阻断缓冲液以及用于检测由抗原/抗体形成的络合物的底物。可选地，能够将另外的次级抗体用于检测结合的抗体。对于本领域技术人员而言，适宜的组分，尤其还有具有相应的标记的适宜的次级抗体是已知的。所述标记特别是允许酶促反应的标记或其它标记，如染料。
附图说明
附图示出：
图1示出所选择的瘟病毒的完整的Erns编码核苷酸序列的基因同一性。为了确定所述基因同一性，使用典型瘟病毒(例如KSPV和BVDV)或与所述典型瘟病毒远缘的瘟病毒(例如“大鼠”和“叉角羚”瘟病毒)的Erns编码序列，以及嵌合Erns序列“Ra-Pro”。借助于MUSCLE、Clustal W(Clustal 2.1版本，默认设置)分别在两个相互比较的序列之间确定同一性。
图2示出所使用的猪瘟病毒和疫苗原型的特征。
图3示出在接种之后头28天中在血液、唾液和粪便中的病毒基因组负荷。
图4示出对中和抗体的诱导的确定。
图5示出标记疫苗原型的DIVA特性。
具体实施方式
下面根据实例详细阐述本发明。而不限于所述实例。
实例
经由核酸片段的定向诱变和克隆，产生基于KSPV分离株“Alfort-Tübingen”(基因型2.3)的cDNA克隆的重组的瘟病毒(Meyers等，1996，J Virol.70(3)：1588-95)。在此，KSPVAlfort-Tübingen的完整的Erns编码序列通过叉角羚瘟病毒、大鼠瘟病毒以及由大鼠瘟病毒和叉角羚瘟病毒构成的组合的相应区域取代。从叉角羚瘟病毒分离株的RNA起或从在大鼠瘟病毒中基于公开的序列合成的核酸起，为了该目的，借助于PCR扩增相应的Erns基因片段。经由引物在扩增子的两个端部处融合约20个核苷酸，所述核苷酸与待取代的基因组区域的正上游和正下游的序列片段互补。经由“靶序列引发质粒扩增”方法，将叉角羚或大鼠瘟病毒序列引入靶质粒中，所述靶质粒仅包含瘟病毒cDNA的一部分。在通过DpnI消化来破坏原始质粒，新产生的质粒在大肠杆菌中繁殖，并且经由核酸测序确认成功的基因操作之后，经由Xho I-Bg/II限制性消化从质粒中切出经修饰的Erns序列，并且经由相同的切割位点将其转化为真正的感染性cDNA克隆。除了人工引入的、定义瘟病毒基因组3’的末端的限制性切割位点以外，借助于定向诱变，移除所有Sma I限制性切割位点。这样制造的质粒借助于SmaI限制性而线性化，并且然后借助于Sp6 DNA相关的RNA聚合酶转录成RNA。以这种方式制造的嵌合瘟病毒RNA经由电穿孔转染到似猪的猪肾细胞中并且紧接着传入不同的细胞系。通过借助瘟病毒特异性单克隆抗体C16进行的免疫荧光染色来检测成功的病毒复制。最后，在感染的细胞培养物的冻融循环之后获得重组的嵌合瘟病毒，进行滴定并且借助于高通量测序确定完整的基因组序列。
三种嵌合瘟病毒根据其病毒滴定度被稀释，以便将它们随后以约105TCID50/猪的统一的剂量施用。在施用于猪之后，根据留存样品经由回滴法来确认所述剂量。
然后，将三种在细胞培养中具有不同的生长行为的疫苗原型用于10周龄仔猪的疫苗接种研究。为此，将疫苗病毒调节到相同的滴定度，并且将其分别以肌肉注射的方式对一组5只仔猪进行给药。另一组5只仔猪获得相同剂量的亲本KSP野生型病毒“Alfort-Tübingen”(“AlfT”，基因型2.3)，基因产生的接种疫苗病毒由该亲本KSP野生型病毒引起，以便确定病毒性特性的可能的削弱(减毒对照组)。在28天之后，以非常高剂量(2x106.0TCID50)的高毒性的、基因异源的KSPV(分离株“Koslov”，基因型1.1)进行口服的攻击性感染。为了复查攻击性感染，此外用相同的剂量感染由3只仔猪构成的未接种的组(攻击性感染对照组)。
为了在疫苗接种试验期间对动物进行评估，连续地执行临床检查。为了评估KSPV特异性症状的临床严重性，应用根据由Mittelholzer等，2000,Vet Micro-biol.,74(4):293-308改型的点格式。此外记录直肠体温。此外，以三至七天的间隔执行取样(EDTA血液、血清、口腔拭子、粪便拭子)，以进一步进行实验室分析。在攻击性感染和随后的另外12或13天的观察和采样时间段之后，将接种的猪处死，进行病理检查并且取出器官样本。
在借助于
Viral RNA迷你试剂盒(Qiagen)从体液中制备核酸之后，进行分子生物学检查。为此，唾液拭子和粪便拭子事先在毫升细胞培养基中表达，并且使拭子中的材料悬浮。为了进行关于病毒血症的PCR研究，将在冻融循环之后裂解的EDTA血液用作为材料。借助于
RNA试剂盒(Macherey和Nagel)，从豌豆大小的器官块开始，由器官材料制备核酸。为了定量分析基因组负荷，执行基于Taqman的实时定量RT-PCR。为此，根据Hoffmann等，2005，J Virol Methods，130(1-2)：36-44，在利用引物和探针的情况下使用QuantiTect样本RT-PCR试剂盒(Qiagen)。通过比较在5’非转录区中的150个核苷酸大小的序列片段，并且然后将它们与KSPV基因型1.1(攻击病毒)或2.3(接种疫苗病毒)相关联，来区分在器官样本中的疫苗病毒和攻击病毒。
对EDTA血液或血清样本进行血液学和血清学检查。从新鲜的EDTA血液起，根据制造商建议，借助于血液分析仪(Abacus Junior Vet)确定白细胞。为了确定中和抗体，对每个血清样本执行三次病毒中和测试(VNTs)。在此，在测试和评估每种血清稀释级的一式四份之后，确定滴定度，一方面借助未转基因的野生型病毒“AlfT”(基因型2.3)进行测试，另一方面借助基因异源的KSPV(“Koslov”基因型1.1)进行测试。此外，为了研究DIVA原理，根据制造商说明，在基于E2的市售的ELISA(IDEXX CSFV Ab测试)中并且在Erns抗体ELISA(
CSFVAb,Qiagen)中测试所有猪的变化中的血清(Verlaufsseren)。
主要结果如下总结。
在图1中示出：如何进行在瘟病毒序列之间的同一性比较。对于完整Erns编码区域示出如下Erns编码序列之间的同一性，其来自KSPV分离株“Alfort-Tübingen”(“AUT”)、BVDV分离株CP7、大鼠中的远缘的瘟病毒和叉角羚羊以及来自嵌合瘟病毒“RaPro”中的远缘的瘟病毒。
图2示出关于所制造的三种标记疫苗原型“叉角羚”，“大鼠”和“RaPro”的特征的概览图，其中从KSPV“Alfort-Tübingen”(“AlfT”，基因型2.3)起，Erns序列通过远缘的瘟病毒的相应的同源的Erns序列来交换。原型“叉角羚”关于在细胞培养中的复制和扩散令人惊讶地与KSPV“AlfT”没有差异，并且能够繁殖至相似的病毒滴定度(滴定度106.0TCID50/ml)。此外示出，用远缘的大鼠瘟病毒的Erns交换KSPV Erns也引起具有复制能力的重组的病毒。在此，疫苗原型“大鼠”显示出相对减少的复制(滴定度104.4TCID50/ml)。应使用候选疫苗“叉角羚”的非常好的复制特性来制造具有嵌合Erns的疫苗病毒，其具有改进的复制特性。在此，嵌合的Erns包含大鼠瘟病毒的Erns蛋白质的抗原有效区域(定位于N末端)以及叉角羚瘟病毒的Erns的定位于C末端的部分。这两个Erns序列的组合在细胞培养中实际上引起原型“Ra-Pro”的中间表型。疫苗病毒“RaPro”并未像在感染疫苗病毒“叉角羚”之后那样显示出持续感染的细胞层，然而与疫苗病毒“大鼠”相比，显示出受感染的细胞的明显更大的病灶。与此相应地，对于“Ra-Pro”，与疫苗病毒“大鼠”相比，通过嵌合化Erns能够将滴定度提升到大约105.3TCID50/ml。(图2)。
在具有攻击性感染的疫苗接种试验中，只有对照组(减毒对照组：以肌肉注射的方式感染KSPV“AlfT”，未接种疫苗的对照组：被以口服的方式感染KSPV“Koslov”)显示出KSP的症状。在减毒对照组中，在实验的18天时，由于严重疾病，出于动物保护原因，必须对三只动物实施安乐死，同样地，未接种疫苗的动物在攻击性感染之后六天也必须被实施安乐死。接种疫苗的动物即使在攻击性感染之后12-13天也未显示出KSP症状或其它健康影响。在“叉角羚”组中，一些动物大约自疫苗接种之后3天到4天起出现轻微发烧(高于40℃持续超过两天)。“大鼠”疫苗接种组的两只动物在攻击性感染之后约3-4天体温轻微升高(没有发烧)。因此，与野生型KSPV“AlfT”相比，所有经基因修饰的瘟病毒都显示出明显的减毒，尽管程度不同。所述数据能够得出下述结论：在中等毒性的KSPV分离株如“AlfT”的情况下，在引入来自叉角羚瘟病毒的Erns序列时，需要附加的减毒或使用本身致病力较小或没有致病力的分离株。通过所有标记疫苗原型都能够实现针对在异源攻击性感染之后防止KSP临床症状的保护作用。
血细胞参数，如白细胞数量和血小板数量适合用于评估KSPV感染的严重程度。在KSPV感染之后，这两种细胞类型均明显减少(白细胞减少症、血小板减少症)。在感染之后几天，两个对照组均显示出明显的白细胞减少症。在接种疫苗组“叉角羚”中，五只猪中的三只猪出现了短暂的(暂时性的)白细胞减少症。在其它疫苗接种组“大鼠”和“RaPro”中，白细胞数量在预期的参考范围内移动，其中各一只动物在几天内处于下限范围内。所述白细胞数量证实所有接种疫苗原型相对于原始病毒“AlfT”的减毒。在血小板数量中也出现类似的情况。“叉角羚”疫苗病毒再次显示出最小程度地减毒，使得能够确定与在细胞培养中的复制和生长行为的相关性(图2)。与病毒“叉角羚”和“大鼠”相比，疫苗原型“RaPro”再次具有中间表型。
对全血、唾液和粪便样本执行检查，以便确定：在通过血液进行的攻击性感染(病毒血症)之后，疫苗病毒和KSPV能够在生物体内以何种程度扩散以及病毒以何种程度排出(图3)。在施用“叉角羚”疫苗病毒之后，五只猪中的二只猪在接种疫苗之后第28天时直至攻击性感染的时间点都有长期病毒血症。这些动物是唯一也将疫苗病毒随粪便一起排出的动物。此外，“叉角羚”疫苗接种组中的所有动物都在几天内将疫苗病毒随唾液一起排出。在疫苗接种组“RaPro”中，五只动物中的三只动物显示出具有低的基因组负荷的短暂的病毒血症，然而在任何时间点都未将疫苗病毒基因组经由粪便或唾液排出。在任何时间点都未在血液、粪便或唾液中检测到疫苗病毒“大鼠”的基因组(图3)。因此，所述分析确认类似于在细胞培养中所观察到的在猪中的致病力减弱，其中疫苗病毒“叉角羚”减毒最少，而疫苗病毒“大鼠”减毒很多，并且“RaPro”具有中间减毒。
在借助于高致病力的KSPV进行攻击性感染之后，除了“叉角羚”疫苗接种组的持续病毒性感染的两只猪以外，在任何接种疫苗的动物中均未在血液中检测到KSPV基因组。也没有检测到经由粪便的排出。由于在攻击性感染中的口鼻施用，首先可以在唾液中进行基因组检测，其中基因组负荷快速下降，并且在实验结束时无法再检测到KSPV基因组。所述数据能够得出下述结论：虽然在用高致病力的病毒分离株进行攻击性感染时存在高病毒量，但是在所有接种疫苗组中保护作用都是的好的，使得有效地阻止了KSPV在生物体中的扩散和随后的排出。
根据在病毒中和试验(VNT)中的血清样本确定病毒中和抗体的诱导(图4)。已证实，与强减毒的“大鼠”疫苗病毒和减毒较少的“叉角羚”疫苗病毒相比，疫苗原型“RaPro”的中间表型最能诱导中和抗体。该观察结果与以下知识吻合：需要最低程度的病毒复制来通过疫苗实现良好的保护作用，以及与如下事实相吻合：有致病力的瘟病毒能够抑制宿主的免疫响应进而抑制中和抗体的有效诱导。
除了有效地诱导中和抗体以外，本发明的关键方面是可靠地区分接种疫苗的动物和被感染的动物(DIVA原理)。未接种疫苗组的猪(攻击性感染对照组)在诱导体液的免疫响应之前死亡，并且野生型病毒“AlfT”(减毒对照组)部分抑制抗体的诱导，而所有接种疫苗的动物均形成针对E2抗原的高抗体滴定度，无论是否使用疫苗原型(图5，上部)。因此清楚地证明了对KSPV E2特异性抗体的诊断式检测。与在接种疫苗之后的时间点无关，在攻击性感染之前，接种疫苗的动物的相同的血清样本在Erns抗体ELISA(猪型ELISA，Qiagen)中不具有反应性，使得所引入的所有Erns抗原的血清学阴性标记的标记原理在不同的候选标记疫苗中均很好地发挥作用。仅在攻击性感染之后一周，在DIVA-ELISA中观察到在某些猪中Erns特异性抗体的首次升高(图5，下部)。尤其地，基因学上远缘的瘟病毒的Erns抗原对于鲁邦的DIVA设计理念是非常有吸引力的，因为在此能够预期降低的交叉反应性或者在理想情况下完全没有反应性。在这种背景下，候选疫苗“RaPro”和“Ratte”显得特别合适。
在由于严重的KSP症状必须对所有对照动物实施安乐死并且所有接种疫苗的动物保持无临床症状之后，在攻击性感染之后12或13天结束实验。所有动物均进行了病理检查，其中在没有接种疫苗的动物中发现符合KSP的变化。在头部区域获得淋巴组织(扁桃体、淋巴结节)样本，以便检查它们是否存在KSPV或疫苗病毒基因组。此外，检查腮腺(唾液腺)、脾脏和肾脏是否存在病毒基因组，以便复查在感染性扩散之后可能的病毒持久性。在接种疫苗原型“叉角羚”并且随后出现长期病毒血症的组中的两只动物中，在脾脏和肾脏中可检测到疫苗病毒基因组或KSPV基因组。此外，在实验结束时，仅在“叉角羚”组的动物中在扁桃体中检测到疫苗病毒。所有其它接种疫苗的动物均未检测到有疫苗病毒或KSPV的系统性扩散，并且即使局部地在头部的淋巴组织中也不再能够检测到疫苗病毒基因组。局部地，在多只动物中仍能检测到少量的KSPV基因组(扁桃体和下颌神经)，其中在“RaPro”组的三只猪中已经不再能够检测到病毒基因组。这确认了下述观察：疫苗原型“RaPro”的保护作用是最好的，并且能够有效地抑制攻击性感染。
序列表
<110> 汉诺威兽医学院基金会
<120> 转基因的瘟病毒及其作为标记疫苗的应用
<130> 3064-009 PCT-1
<150> DE102018110208
<151> 2018-04-27
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 678
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> 嵌合的核酸序列
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(678)
<400> 1
tcg aat gta aca caa tgg aac ttg gcg gat gaa tac tcc cat gac atg 48
Ser Asn Val Thr Gln Trp Asn Leu Ala Asp Glu Tyr Ser His Asp Met
1 5 10 15
cac aga gtc atg ttt gag agg aac atc tcc agg tcc ata cat ggt ata 96
His Arg Val Met Phe Glu Arg Asn Ile Ser Arg Ser Ile His Gly Ile
20 25 30
tgg cca gtg aaa atc tgt aag gga gtg ccc aac cca atg att acc gac 144
Trp Pro Val Lys Ile Cys Lys Gly Val Pro Asn Pro Met Ile Thr Asp
35 40 45
caa cag gca aaa cag ata gtg ggg atg gtg gac gca agc cca agc acc 192
Gln Gln Ala Lys Gln Ile Val Gly Met Val Asp Ala Ser Pro Ser Thr
50 55 60
aac tac aca tgc tgc cat tta caa aga cat gaa tgg aat aaa cat gga 240
Asn Tyr Thr Cys Cys His Leu Gln Arg His Glu Trp Asn Lys His Gly
65 70 75 80
tgg tgt aac tgg ttc aat gtg gac cca tgg atc aca atg atg ata tac 288
Trp Cys Asn Trp Phe Asn Val Asp Pro Trp Ile Thr Met Met Ile Tyr
85 90 95
cag aac caa agg ata gtc aat aaa att ggt cag gag tgt gca gta acc 336
Gln Asn Gln Arg Ile Val Asn Lys Ile Gly Gln Glu Cys Ala Val Thr
100 105 110
tgt aga tac aat cac aca atg ggc aca aac ata gtt cta caa gca agg 384
Cys Arg Tyr Asn His Thr Met Gly Thr Asn Ile Val Leu Gln Ala Arg
115 120 125
tca agt cca acc agt acc aca gga tgt aaa cca ggg gca aag tac agc 432
Ser Ser Pro Thr Ser Thr Thr Gly Cys Lys Pro Gly Ala Lys Tyr Ser
130 135 140
ttt gcc gga gaa atc aga aag tct aaa tgt aag tta gaa gta ggc atg 480
Phe Ala Gly Glu Ile Arg Lys Ser Lys Cys Lys Leu Glu Val Gly Met
145 150 155 160
gaa gag cta ata cat ttg cca cac gaa tgt ggg gag tgg tat agt gaa 528
Glu Glu Leu Ile His Leu Pro His Glu Cys Gly Glu Trp Tyr Ser Glu
165 170 175
ata agc cac cag gcg gtc gac atg atc act aat ggg ttg gag gcc tct 576
Ile Ser His Gln Ala Val Asp Met Ile Thr Asn Gly Leu Glu Ala Ser
180 185 190
aga aat tca gca gcc aaa gtc ttg agt tgg ata ggg cgc aaa ttg gaa 624
Arg Asn Ser Ala Ala Lys Val Leu Ser Trp Ile Gly Arg Lys Leu Glu
195 200 205
agg ata gga aag aga gca caa gca aaa tca aaa aca tgg ttt ggg gca 672
Arg Ile Gly Lys Arg Ala Gln Ala Lys Ser Lys Thr Trp Phe Gly Ala
210 215 220
cag gca 678
Gln Ala
225
<210> 2
<211> 226
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> 合成结构体
<400> 2
Ser Asn Val Thr Gln Trp Asn Leu Ala Asp Glu Tyr Ser His Asp Met
1 5 10 15
His Arg Val Met Phe Glu Arg Asn Ile Ser Arg Ser Ile His Gly Ile
20 25 30
Trp Pro Val Lys Ile Cys Lys Gly Val Pro Asn Pro Met Ile Thr Asp
35 40 45
Gln Gln Ala Lys Gln Ile Val Gly Met Val Asp Ala Ser Pro Ser Thr
50 55 60
Asn Tyr Thr Cys Cys His Leu Gln Arg His Glu Trp Asn Lys His Gly
65 70 75 80
Trp Cys Asn Trp Phe Asn Val Asp Pro Trp Ile Thr Met Met Ile Tyr
85 90 95
Gln Asn Gln Arg Ile Val Asn Lys Ile Gly Gln Glu Cys Ala Val Thr
100 105 110
Cys Arg Tyr Asn His Thr Met Gly Thr Asn Ile Val Leu Gln Ala Arg
115 120 125
Ser Ser Pro Thr Ser Thr Thr Gly Cys Lys Pro Gly Ala Lys Tyr Ser
130 135 140
Phe Ala Gly Glu Ile Arg Lys Ser Lys Cys Lys Leu Glu Val Gly Met
145 150 155 160
Glu Glu Leu Ile His Leu Pro His Glu Cys Gly Glu Trp Tyr Ser Glu
165 170 175
Ile Ser His Gln Ala Val Asp Met Ile Thr Asn Gly Leu Glu Ala Ser
180 185 190
Arg Asn Ser Ala Ala Lys Val Leu Ser Trp Ile Gly Arg Lys Leu Glu
195 200 205
Arg Ile Gly Lys Arg Ala Gln Ala Lys Ser Lys Thr Trp Phe Gly Ala
210 215 220
Gln Ala
225
<210> 3
<211> 681
<212> DNA
<213> 褐家鼠瘟病毒
<400> 3
tcgaatgtaa cacaatggaa cttggcggat gaatactccc atgacatgca cagagtcatg 60
tttgagagga acatctccag gtccatacat ggtatatggc cagtgaaaat ctgtaaggga 120
gtgcccaacc caatgattac cgaccaacag gcaaaacaga tagtggggat ggtggacgca 180
agcccaagca ccaactacac atgctgccat ttacaaagac atgaatggaa taaacatgga 240
tggtgtaact ggttcaatgt ggacccatgg atcacaatga tgatatacca gaaccaaagg 300
atagtcaata aaattggtca ggagtgtgca gtaacctgta gatacaatca cacaatgggc 360
acaaacatag ttctacaagc aaggtcaagt ccaaccagta ccacaggatg taaaccaggg 420
gcaaagtaca gctttgccgg agaaatcaga aagtctaaat gtaagttaga agtaggcatg 480
gaagagctaa tagaaagtct tgacacagat tggcaaagac acaccttttc atgggaagac 540
tacataatag atggggcaac ccacataatt gaaggcaaac gacaactaat aaccaaacta 600
atagacaagg ttgaaaatgg gttggacaaa gcaaagcaaa agttaaataa ggtaaagaaa 660
ttcttctcat cagcaactaa t 681
<210> 4
<211> 681
<212> DNA
<213> 叉角羚瘟病毒
<400> 4
gtgaatataa ctcagtggaa cctggctgac gaaggcaccg aaggcgtaca tagggtcatg 60
tttgagagag ggataaatag aagtttacat ggcatatggc cccaacagat atgccacgga 120
atcccaagct acaaccccac caacagagag ctctcgatga ttgtcggaat ggttgatgca 180
agcattagaa caaattatac ctgctgtaat ctacagagac acgaatggaa caaacatggc 240
tggtgcaatt ggtacaacat cataccatgg attaaggtga tgaactacag ccagaggaac 300
ctcactgaag gcacatatgg caaagagtgt gccgtaacgt gtaggcacga cagcatatta 360
gacatcaata tagtcactca ggcccgcaat caacccacaa tgttaaccgg gtgcaaaata 420
ggaaagaact tttcgttctc aggtgaaatt agagaaaaac catgtaatta tgatatccaa 480
ccagaggaaa tactacattt gccacacgaa tgtggggagt ggtatagtga aataagccac 540
caggcggtcg acatgatcac taatgggttg gaggcctcta gaaattcagc agccaaagtc 600
ttgagttgga tagggcgcaa attggaaagg ataggaaaga gagcacaagc aaaatcaaaa 660
acatggtttg gggcacaggc a 681
Claims (22)
1.一种经基因修饰的瘟病毒，其中将所述瘟病毒的Erns编码基因修饰为，使得至少Erns蛋白质编码基因片段源自与经基因修饰的瘟病毒远缘的至少一种瘟病毒。
2.根据权利要求1所述的经基因修饰的瘟病毒，其中所述Erns蛋白质编码基因片段是嵌合的Erns基因片段，所述嵌合的Erns基因片段由与经基因修饰的瘟病毒远缘的不同瘟病毒的两个或多个Erns基因片段构成。
3.根据上述权利要求中任一项所述的经基因修饰的瘟病毒，其特征在于，所述经基因修饰的瘟病毒选自：牛病毒性腹泻病毒(BVDV)；典型猪瘟病毒(KSPV)、HoBi样瘟病毒和边境病病毒(BDV)。
4.根据上述权利要求中任一项所述的基因修饰的瘟病毒，其特征在于，基因学上远缘的瘟病毒中的Erns基因片段是下述瘟病毒的Erns基因片段，所述瘟病毒选自：叉角羚瘟病毒、Bungowannah病毒、LINDA病毒、大鼠瘟病毒、非典型猪瘟病毒(APPV)和蝙蝠瘟病毒。
5.根据权利要求4所述的经基因修饰的瘟病毒，其中所述瘟病毒选自KSPV和BVDV。
6.根据上述权利要求中任一项所述的经基因修饰的瘟病毒，其特征在于，所述嵌合的Erns基因片段借助于所述大鼠瘟病毒的Erns基因片段中的一部分和所述叉角羚瘟病毒的Erns基因片段的一部分来制造，尤其其中所述叉角羚瘟病毒的Erns基因片段位于3’末端。
7.根据权利要求6所述的经基因修饰的瘟病毒，所述经基因修饰地瘟病毒包含下述嵌合的Erns基因片段，所述嵌合的Erns基因片段具有与所述大鼠瘟病毒中的Erns基因片段的5’基因片段相对应的5’基因片段和与所述叉角羚瘟病毒中的Erns基因片段的3’基因片段相对应的3’基因片段，尤其是具有根据SEQ ID NO.1的序列的Erns基因片段。
8.根据上述权利要求中任一项所述的经基因修饰的瘟病毒，其特征在于，所述经基因修饰的瘟病毒是减毒的瘟病毒。
9.一种宿主细胞，所述宿主细胞包括根据权利要求1至8中任一项所述的经基因修饰的瘟病毒。
10.一种组合物，所述组合物包括根据权利要求9所述的宿主细胞或根据1至8中任一项所述的经基因修饰的瘟病毒或其如下组分，所述组分至少包括如在权利要求1至8中任一项中所限定的Erns基因片段或通过所述Erns基因片段编码的多肽。
11.一种用于动物的疫苗，尤其是用于偶蹄目动物如猪或牛的疫苗，其包括根据权利要求1至8中任一项所述的经基因修饰的瘟病毒或根据权利要求9所述的宿主细胞，或根据权利要求10所述的组合物或其组合，以及在药理学上可接受的载体材料。
12.一种根据权利要求1至8中任一项所述的经基因修饰的瘟病毒的应用，用于预防或减少瘟病毒感染或用于减少在所述动物中由瘟病毒诱发的疾病的相应的病症。
13.一种重组的嵌合的Erns多肽，其具有N末端片段和C末端片段，其中所述N末端片段和所述C末端片段源自与KSPV和BVDV远缘的瘟病毒，其中所述远缘的瘟病毒是不同的瘟病毒，所述瘟病毒尤其选自叉角羚瘟病毒、Bungowannah病毒、LINDA病毒、大鼠瘟病毒、非典型猪瘟病毒(APPV)和蝙蝠瘟病毒。
14.根据权利要求13所述的重组的嵌合的Erns多肽，其特征在于，所述重组的嵌合的Erns多肽包括所述大鼠瘟病毒中的N末端的Erns基因片段和所述叉角羚瘟病毒中的C末端的Erns基因片段，尤其地，所述多肽包括根据SEQ Nr.2的序列。
15.一种用于检测瘟病毒或瘟病毒特异性抗体，尤其是KSPV和BVDV的检测系统，其特征在于，所述检测系统具有根据权利要求13或14所述的重组的嵌合的Erns多肽作为抗原。
16.一种用于差异化检测动物接种根据权利要求11所述的疫苗，尤其是KSPV或BVDV疫苗的检测系统，其特征在于，所述检测系统具有根据权利要求13或14所述的重组的Erns多肽作为抗原或者具有非嵌合的Erns多肽，所述非嵌合Erns多肽源源自与KSPV和BVDV远缘的瘟病毒，其中这些远缘的瘟病毒尤其选自：叉角羚瘟病毒、Bungowannah病毒、LINDA病毒、大鼠瘟病毒、非典型猪瘟病毒(APPV)和蝙蝠瘟病毒。
17.一种根据权利要求13或14所述的重组的嵌合的Erns多肽的应用或如在权利要求16中定义的非嵌合Erns多肽的应用，所述应用用于检测针对权利要求11所述的疫苗的抗体以区分自然感染KSPV或BVDV和接种经基因修饰的瘟病毒，所述瘟病毒尤其是KSPV或BVDV，尤其呈DIVA ELISA形式。
18.一种诊断型测试试剂盒，所述诊断型测试试剂盒包括根据权利要求1至8中任一项所述的经基因修饰的瘟病毒或根据权利要求13或14所述的重组的多肽或如在权利要求16中所定义的非嵌合Erns多肽。
19.一种利用权利要求11所述的疫苗或根据权利要求18所述的诊断型测试试剂盒或根据权利要求1至8中任一项所述的经基因修饰的瘟病毒或根据权利要求13或14所述的重组的嵌合的多肽或如在权利要求16所定义的非嵌合的Erns多肽或根据权利要求9所述的宿主细胞或根据权利要求10所述的组合物来控制在偶蹄目的动物种群中的瘟病毒感染的方法。
20.一种用于对动物进行疫苗接种的方法，所述方法包括以下步骤：施用根据权利要求11所述的疫苗、根据权利要求1至8中任一项所述的经基因修饰的瘟病毒或根据权利要求9所述的宿主细胞或根据权利要求10所述的组合物或根据权利要求13或14所述的重组的嵌合的Erns多肽或其组合。
21.根据权利要求20所述的用于对动物进行疫苗接种的方法，所述方法用于预防或减少瘟病毒感染或用于减少在这些动物中由瘟病毒诱导的疾病的相应的病征。
22.一种用于防止瘟病毒感染或瘟病毒感染扩散的方法，所述方法包括以下步骤：施用根据权利要求11所述的疫苗、根据权利要求1至8中任一项所述的经基因修饰的瘟病毒或根据权利要求9所述的宿主细胞或根据权利要求10所述的组合物或根据权利要求13或14所述的重组的嵌合的Erns多肽或其组合。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE102018110208.9 | 2018-04-27 | ||
| DE102018110208.9A DE102018110208A1 (de) | 2018-04-27 | 2018-04-27 | Gentechnisch veränderte Pestiviren und deren Verwendung als Markerimpfstoff |
| PCT/EP2019/060716 WO2019207095A1 (de) | 2018-04-27 | 2019-04-26 | Gentechnisch veränderte pestiviren und deren verwendung als markerimpfstoff |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112020509A true CN112020509A (zh) | 2020-12-01 |
Family
ID=66379896
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201980027958.0A Pending CN112020509A (zh) | 2018-04-27 | 2019-04-26 | 转基因的瘟病毒及其作为标记疫苗的应用 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112020509A (zh) |
| DE (1) | DE102018110208A1 (zh) |
| WO (1) | WO2019207095A1 (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100136055A1 (en) * | 2008-12-03 | 2010-06-03 | Pfizer Inc. | Chimeric pestiviruses |
| CN102965348A (zh) * | 2009-04-28 | 2013-03-13 | 辉瑞大药厂 | 具有经修饰的erns蛋白的牛病毒性腹泻病毒 |
| AU2013224704A1 (en) * | 2008-12-03 | 2013-10-03 | Zoetis Services Llc | Bovine viral diarrhea virus with a modified Erns protein |
| UA103501C2 (ru) * | 2008-12-03 | 2013-10-25 | Пфайзер Инк. | Вирус бычьей вирусной диареи с модифицированным erns белком |
| CN105886531A (zh) * | 2016-04-12 | 2016-08-24 | 浙江大学 | 分子标记猪瘟病毒弱毒疫苗的构建方法 |
| WO2017114778A1 (en) * | 2015-12-30 | 2017-07-06 | Intervet International B.V. | Pestivirus marker vaccine |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2968912A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Intervet International B.V. | A pestvirus comprising protein e rns, e1 and e2, which causes group a-iicongenital tremors in pigs, composition and methods of use thereof |
| WO2016176624A2 (en) | 2015-04-30 | 2016-11-03 | Kansas State University Research Foundation | Porcine pestvirus, vaccines, and assays |
-
2018
- 2018-04-27 DE DE102018110208.9A patent/DE102018110208A1/de active Pending
-
2019
- 2019-04-26 WO PCT/EP2019/060716 patent/WO2019207095A1/de active Application Filing
- 2019-04-26 CN CN201980027958.0A patent/CN112020509A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100136055A1 (en) * | 2008-12-03 | 2010-06-03 | Pfizer Inc. | Chimeric pestiviruses |
| AU2013224704A1 (en) * | 2008-12-03 | 2013-10-03 | Zoetis Services Llc | Bovine viral diarrhea virus with a modified Erns protein |
| UA103501C2 (ru) * | 2008-12-03 | 2013-10-25 | Пфайзер Инк. | Вирус бычьей вирусной диареи с модифицированным erns белком |
| CN102965348A (zh) * | 2009-04-28 | 2013-03-13 | 辉瑞大药厂 | 具有经修饰的erns蛋白的牛病毒性腹泻病毒 |
| WO2017114778A1 (en) * | 2015-12-30 | 2017-07-06 | Intervet International B.V. | Pestivirus marker vaccine |
| CN105886531A (zh) * | 2016-04-12 | 2016-08-24 | 浙江大学 | 分子标记猪瘟病毒弱毒疫苗的构建方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| LUO Y等: "Construction of chimeric bovine viral diarrhea viruses containing glycoprotein E rns of heterologous pestiviruses and evaluation of the chimeras as potential marker vaccines against BVDV", VACCINE, vol. 30, no. 26, pages 3843 - 3848 * |
| RICHTER M等: "Complementation studies with the novel "Bungowannah" virus provide new insights in the compatibility of pestivirus proteins", VIROLOGY, vol. 418, no. 02, pages 113 - 122, XP028277426, DOI: 10.1016/j.virol.2011.07.014 * |
| 洪焜等: "反向遗传操作技术在瘟病毒属研究中的应用", 中国兽药杂志, vol. 51, no. 07, pages 57 - 63 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2019207095A1 (de) | 2019-10-31 |
| DE102018110208A1 (de) | 2019-10-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9180179B1 (en) | Development of a marker foot and mouth disease virus vaccine candidate that is attenuated in the natural host | |
| US9897605B2 (en) | Porcine torque teno virus vaccines and diagnosis | |
| Moraes et al. | Increased efficacy of an adenovirus-vectored foot-and-mouth disease capsid subunit vaccine expressing nonstructural protein 2B is associated with a specific T cell response | |
| WO2016176624A2 (en) | Porcine pestvirus, vaccines, and assays | |
| US7842298B2 (en) | Avian hepatitis E virus, vaccines and methods of protecting against avian hepatitis-splenomegaly syndrome and mammalian hepatitis E | |
| US9993544B2 (en) | Recombinant classical swine fever virus (CSFV) comprising substitution in the TAV epitope of the E2 protein | |
| JP3602759B2 (ja) | 弱毒型のウシウィルス性下痢性ウィルス | |
| Wehrle et al. | Chimeric pestiviruses: candidates for live-attenuated classical swine fever marker vaccines | |
| KR20220009960A (ko) | 재조합 고전적 돼지 열병 바이러스 | |
| Sánchez et al. | Classical swine fever virus E2 glycoprotein antigen produced in adenovirally transduced PK-15 cells confers complete protection in pigs upon viral challenge | |
| US8961996B2 (en) | N-linked glycosylation alteration in E0 and E2 glycoprotein of classical swine fever virus and novel classical swine fever virus vaccine | |
| AU2008256939A1 (en) | A live attenuated antigenically marked classical swine fever vaccine | |
| US8426575B2 (en) | N-linked glycosylation alteration in E1 glycoprotein of classical swine fever virus and novel classical swine fever virus vaccine | |
| US8063195B2 (en) | Mutations in a toll-like receptor motif in the NS4B of classical swine fever virus strain brescia influences virulence in swine | |
| JP3262273B2 (ja) | ブタコレラを含むペスチウイルス感染の如き感染に対する保護法、ヌクレオチド配列およびワクチンの開発および診断に使用されるポリペプチド | |
| CN112020509A (zh) | 转基因的瘟病毒及其作为标记疫苗的应用 | |
| WO2015134480A1 (en) | A live attenuated antigenically marked classical swine fever vaccine | |
| RU2765658C9 (ru) | Выделение нового пестивируса, вызывающего врожденный тремор а | |
| RU2765658C2 (ru) | Выделение нового пестивируса, вызывающего врожденный тремор а | |
| Kanpipit et al. | Immunogenicity of transmembrane deleted-G protein of bovine ephemeral fever virus (BEFV) expressed in insect cells | |
| CN115927416A (zh) | 嵌合猪瘟病毒、猪瘟标记疫苗及其制备方法和应用 | |
| EP1438969A1 (en) | Arterivirus marker vaccine | |
| Haqshenas et al. | Molecular cloning and expression of nucleocapsid gene of chicken infectious bronchitis virus strain Massachusetts H120 | |
| Pezzoni et al. | First expression in baculovirus of major capsid proteins belonging to two new lagoviruses. | |
| CN101016547A (zh) | 海洋双rna病毒mabv重组蛋白的制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |