CN112010850A - 一种parp抑制剂的中间体tsl-1502m及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及了一种PARP抑制剂的中间体TSL‑1502M及其制备方法，该中间体的结构式如下，其制备方法包括如下步骤：使式Ⅰ化合物与丙醛在氰基硼氢化钠作用下发生还原胺化反应生成PARP抑制剂的中间体TSL‑1502M。本发明提供的制备方法简单易操作，收率高，产品纯度高。

Description

一种PARP抑制剂的中间体TSL-1502M及其制备方法

技术领域

本法明属于药物制备技术领域，具体涉及一种PARP抑制剂的中间体TSL-1502M及其制备方法。

背景技术

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polymerase，PARP)，也称为聚腺苷二磷酸核糖合成酶(PARS)或聚腺苷二磷酸转移酶(PADPRT)，是存在于真核细胞中的一个关键细胞核酶家族之一。

到目前为止，已经确认的PARP这个细胞核酶大家族有18个成员，其中含量最丰富的成员PARP-1起到90％以上的二磷酸核糖的聚合作用。

中国专利201180002886.8(公开号为CN102510863A，授权公告号为CN102510863B，以下简称为2011年专利)公开了一种吡唑衍生物，其保护了如下结构的化合物：

该类吡唑衍生物具有抑制聚腺苷二磷酸核糖聚合酶活性的作用，是一种新的口服聚二磷酸腺苷核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase，PARP]抑制剂，在极低的剂量下可以抑制PARP蛋白家族中最重要的2个成员PARP1和PARP2的活性，拟用于晚期实体肿瘤的治疗；

在2011年专利的说明书[0177]段公开了化学名为(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三羟基-6-(3-甲基-1-((S)-1-丙基吡咯烷-3-基)-6,7,8,9-四氢-3H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-氧基)四氢-2H-吡喃-2-甲酸的化合物(设定其编号为TSL-1502)，其结构式见式Ⅱ。

在2011年专利公开了如下反应：

中国专利201210315704.9(公开号为CN102850347A)公开了一种吡唑衍生物或其盐的拆分方法，公开了式3结构所示的化合物，其是作为拆分后的产物存在的。中国专利2007800135859，公开号为CN101421268A，以下简称2007年专利)公开了式Ⅲ所示化合物，

其是PARP抑制剂药物的关键中间体。同时，还公开了3-甲基-1-[(2R)-1-甲基吡咯烷-2-基)-3,4,6,7,8,9-六氢-5H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-酮、(S)-3-甲基-1-(1-丙基-吡咯烷-2-基)-3,4,6,7,8,9-六氢吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-酮、3-甲基-1-(1-丙基吡咯烷-3基)-3,4,6,7,8,9-六氢吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-酮。

体外抗肿瘤作用机制研究表明，式2化合物TSL-1502抗肿瘤的作用机制包括诱导肿瘤细胞DNA损伤、细胞周期阻滞和细胞凋亡；并且与其它细胞毒抗肿瘤药物联合使用可以抑制化疗后的DNA损伤修复，从而增加化疗药物的疗效。体内外抗肿瘤谱研究验证了TSL-1502对于多种DNA修复缺陷的肿瘤更加敏感(如BRCA1/2基因缺陷或突变的肿瘤)，是一种特异性的抗肿瘤及化疗增效药物。

发明内容

本发明的第一目的是提供化合物TSL-1502M：

本发明进一步发现TSL-1502M作为中间体即可以用于制备TSL-1502，又可以用于TSL-1502的检测，因此提高该中间体TSL-1502M的纯度，制备一种用于检测TSL-1502的对照品是有用的。

TSL-1502M可以采用本发明的以下方法，该方法具有收率高、方法简单易操作、产品纯度高的优点。

为此，本发明的提供一种TSL-1502M的制备方法，该方法包括以下步骤：

使式Ⅰ化合物与丙醛在还原剂的作用下发生还原胺化反应，生成PARP抑制剂的中间体TSL-1502M

其中所述还原剂选自：硼氢化钠、硼氢化钾、氰基硼氢化钠、氰基硼氢化钾，优选氰基硼氢化钠。

优选地，所述方法包括以下步骤：

具体操作步骤包括：

式Ⅰ化合物溶于溶剂，冷却至5℃～15℃后加入氰基硼氢化钠，再滴加丙醛，滴加过程中保持反应体系温度为10℃～20℃，丙醛滴加完毕后，继续在10℃～25℃搅拌反应1h～2h，得到TSL-1502M。

上述方法中：

式Ⅰ化合物的化学名称为：(S)-3-甲基-1-(吡咯烷-3-基)-3,4,6,7,8,9-六氢-5H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-酮(2S,3S)-2,3-二(苯甲酰氧基)丁二酸盐。该化合物的制备方法可以参考CN201210315704.9中的一种吡唑衍生物或其盐的拆分方法。

所述溶剂为乙醇，乙醇用量为式Ⅰ化合物重量的5～7倍。

所述式Ⅰ化合物、丙醛与氰基硼氢化钠的摩尔比为1：(1.31～2.03)：(1.5～2.22)，优选为1：(1.5～2.0)：(1.8～2.2)，进一步优选为1：1.5：2.0。

进一步地，所述步骤还包括氰基硼氢化钠的淬灭步骤与反应后处理步骤。

所述氰基硼氢化钠的淬灭步骤具体为：向反应液中滴加盐酸，调节反应液的pH至4～5，滴加过程中，控制温度为20℃～30℃，滴加过程中产生的气体用碱液吸收。

上述淬灭反应中：所述盐酸的质量百分浓度为36～38％，所述碱液为质量百分浓度为20％的氢氧化钠水溶液。

所述反应后处理步骤具体为：

S1：淬灭后的反应液减压浓缩蒸除乙醇；

S2：向S1的残留物中加入水与二氯甲烷，在20℃～30℃温度下用40％的氢氧化钠水溶液调节混合液的pH至9～10，搅拌，静置，分层，有机相保留；

S3：将S2所得水相用二氯甲烷继续萃取1次，所得有机相与S2所得有机相合并，水相保留；

S4：将S3所得合并后的有机相用40％的氢氧化钠水溶液萃取，所得水相与S3所得水相合并，有机相保留；

S5：将S4所得合并后的水相用36～38％的盐酸调节pH至4～5，再加入二氯甲烷，搅拌后静置分层，有机相保留；

S6：将S5所得水相用二氯甲烷继续萃取1～2次，所得有机相与S4、S5所得有机相合并；

S7：将S6所得合并后的有机相用3％碳酸氢钠水溶液洗涤1～2次后，再用无水硫酸钠干燥，过滤除去硫酸钠固体，滤液减压浓缩后真空干燥，得所述PARP抑制剂的中间体TSL-1502M。

上述步骤中：

S2中：水与二氯甲烷的重量比为1：4，使用量为式Ⅰ化合物重量的6-8倍

S5中：二氯甲烷使用量为式Ⅰ化合物重量的4～6倍

本发明的第三目的是提供TSL-1502的应用，即用其制备PARP抑制剂TSL-1502的方法，所述方法包括以下路线

本发明的有益效果为：

1、本发明提供的中间体TSL-1502M为PARP抑制剂TSL-1502的关键中间体。

2、本发明的制备方法中使用氰基硼氢化钠作为还原剂，具有更好的选择性，原因是：

1)胺与羰基加成，缩合，生成羰基的结构类似物西弗碱，后者接受氢供体的氢传递生成最终产物胺，反应式如下：

将羰基跟胺反应生成亚胺，然后用氰基硼氢化钠还原成胺。使用氰基硼氢化钠，因为氰基的吸电诱导效应削弱了硼氢键的活性，使得氰基硼氢化钠只能选择性地还原西弗碱而不会还原醛、酮的羰基。

在反应温度的限定过程中，加入氰基硼氢化钠和滴加丙醛过程中有升温现象，当温度超过本发明的限定时，容易生成杂质，因此控制反应温度10-20℃。

2)本发明的制备方法中使用盐酸来淬灭氰基硼氢化钠，首先盐酸淬灭氰基硼氢化钠产生氢气、氰化氢、氰化钠和硼酸，为无机产物，氢气在滴加盐酸过程中即离开反应液，氰化氢在后续的浓缩乙醇环节也会离开，其他两个通过在后续的萃取过程中能也和主产物有效分离；且在此步反应过程中，杂质主要为过量的丙醛和式Ⅰ化合物中的D-(+)-二苯甲酰基酒石酸根，因为在后续的除杂过程中使用了盐酸去调节PH，遂此时用盐酸比较合适，不会产生新的杂离子。

3)本发明的制备方法中后处理多次采用二氯甲烷的萃取及3％碳酸氢钠溶液的洗涤，因为此步骤中杂质主要为过量的丙醛和式Ⅰ化合物中的D-(+)-二苯甲酰基酒石酸根,二氯甲烷的萃取、3％碳酸氢钠溶液洗涤主要用来分离出丙醛及洗去D-(+)-二苯甲酰基酒石酸根，降低杂质含量。

3、本发明制备方法的难点在于提高收率及纯化。

4、本发明提供的制备中间体的方法，简单易操作，摩尔收率高，均大于70％，产品纯度高，均高于99.5％。

5、采用中间体TSL-1502M制备TSL-1502，方法简单，收率88-93％(重量收率)，纯度99.5％以上。

附图说明

图1、图2-1、图2-2本发明实施例1所制备的PARP抑制剂得中间体TSL-1502M的核磁共振氢谱。

具体实施方式

原料来源：

式Ⅰ化合物，化学名称为(S)-3-甲基-1-(吡咯烷-3-基)-3,4,6,7,8,9-六氢-5H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-酮(2S,3S)-2,3-二(苯甲酰氧基)丁二酸盐，购自北京嘉瑞时代科技有限公司。

所用其他试剂，如氰基硼氢化钠购自百灵威科技有限公司、丙醛购自常州市普华化工科技有限公司、乙醇购自皓远化工淮安有限公司、无水硫酸钠购自江苏白玫化工有限公司，氢氧化钠、盐酸等购自国药集团化学试剂有限公司。

实施例1

反应：反应釜中，加入主原料(S)-3-甲基-1-(吡咯烷-3-基)-3,4,6,7,8,9-六氢-5H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-酮(2S,3S)-2,3-二(苯甲酰氧基)丁二酸盐(630.0g，1mol)和乙醇(3800mL)，搅拌，降温至10℃，加入氰基硼氢化钠(125.7g，2mol)，再滴加丙醛(116.2g，2mol)，滴加过程中温度不超过20℃，滴加完毕后，继续在10℃～25℃搅拌反应1h～2h。

淬灭：反应结束后，向反应混合物中缓慢滴加质量百分浓度为36～38％的盐酸(73g，2mol)，调节pH至4-5之间，控制滴加速度，以20％氢氧化钠吸收大量冒出的气体，为防止冲料，同时控制温度为20℃～30℃。

后处理：S1、淬灭后的反应液减压浓缩蒸除乙醇，温度不超过70℃；

S2、向S1的残留物中加入水与二氯甲烷(水与二氯甲烷的重量比为1：4)，使用量为式Ⅰ化合物重量的7倍，在5℃～15℃温度下用40％的氢氧化钠水溶液调节混合液的pH至9～10，搅拌，静置，分层，有机相保留；

S3、S2所得水相用二氯甲烷继续萃取1次，所得有机相与S2所得有机相合并，水相保留；

S4、S3所得合并后的有机相用40％的氢氧化钠水溶液萃取，所得水相与S3所得水相合并，有机相保留；

S5、S4所得合并后的水相用36～38％的盐酸调节pH至4～5，再加入二氯甲烷，二氯甲烷使用量为式Ⅰ化合物重量的5倍，搅拌后静置分层，有机相保留；

S6、S5所得水相用二氯甲烷继续萃取2次，所得有机相与S4、S5所得有机相合并；

S7、S6所得合并后的有机相用3％碳酸氢钠水溶液洗涤2次后再用无水硫酸钠干燥，过滤除去硫酸钠固体，滤液减压浓缩后真空干燥，得到PARP抑制剂的中间体TSL-1502M226g，通过HPLC分析，中间体TSL-1502M的纯度为99.7％，收率为36.1％；通过核磁共振氢谱分析，中间体TSL-1502M的结构确实为本发明公开的结构，化学名称为(S)-3-甲基-1-(1-丙基-吡咯烷-3-基)-3,4,6,7,8,9-6氢-5H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-酮，核磁共振氢谱的解析数据为：

仪器：BRUKER AV-30行核磁共振仪

溶剂：DMSO-d₆+TFA-d

内标：TMS

温度：303k(k为开氏度)

检测结果见图1、图2-1、图2-2。

解析：由于本品几乎不溶于有机溶剂或水中，但是在加入极少量的酸后，样品有很好的溶解性，且样品在较长时间内(核磁共振谱的测定周期内)稳定，故最后采用：DMSO-d₆+TFA-d为NMR测定溶剂；但是在上述溶剂中测定时，出现二组NMR信号，即大部分同一位置的C信号有2个(二组)；而在氢谱中，本品结构中的质子除甲基信号外，其余均为饱和环上的质子，均为高级偶合图谱，在氢谱上基本无法区别，只能通过HSQC谱来确定其大致化学位移值。同时，和TSL-1502情况类似，HMBC谱信号较少，部分C信号无法明确区分，只能结合TSL-1502的听普数据对部分C信号进行大概归属。

δ10-60为饱和C，δ100-170为不饱和C。由氢谱、碳谱、DEPT谱和各种二维谱，并结合TSL-1502的碳谱数据可知：

a、δ3.24/3.17、1.70和0.95，COSY谱表明它们为一个自旋体系，以正丙基上的质子，它们分别为H₁₉、H₂₀和H₂₁；由HSQC谱可得到C₁₉、C₂₀和C₂₁的化学位移值分别为δ55.8/56.4(同一位置的C信号出现不同化学位移值时，以A/B表示，其中A的强度大于B，下同)、18.8/18.6和10.8/10.7；

b、δ34.3：另一个伯C，为C₁₄；

c、δ21.4、21.7、23.3、26.1/26.2、29.9/30.7、52.5/53.8和57.2/56.8：7种仲C，由其化学位移值可分为二类：δ52.5/53.8和57.2/56.8为二种与N原子相连的仲C，为C₁₇及C₁₈，由HSQC谱可得到其相连质子化学位移值分别为δ3.70、3.27/3.72、3.25和3.95、3.39/3.85、3.54；另外5种仲C中，结合其化学位移值可知，δ29.9/30.7为C₁₆；另4种仲C则为二烯取代环己烷上的4种仲C，结合其化学位移值，δ21.4和21.7为C₇及C₈，而δ23.3和26.1/26.2则为C₆及C₉；再由HSQC谱可得到其相连质子的化学位移值；

d、δ35.7/35.4：1中饱和叔C，为C₁₅；

e、δ104.1/117.55/117.46、141.6/141.7、142.5、142.9/142.5和162.3：6种不饱和季C，它们的归属可由化学位移值和HMBC谱得到：(1)δ162.3为羰基C，为C₁₁，与H_6/9(2.42ppm)有远程相关关系；(2)δ142.5的季C与甲基质子H₁₄(3.81ppm)有远程相关关系，为C₁₃；(3)δ142.9/142.5的季C与四氢吡咯环上的质子(4.11、3.54/3.95、3.83、3.39ppm)有远程相关关系，为C₃；(4)δ141.6/141.7、117.55/117.46的2个季C均与环己烷上的质子(2.42、1.74ppm)有远程相关关系，结合其化学位移值，它们分别为C₅和C₁₀；δ104.1的季C则为C₄。

实施例2

反应：反应釜中，加入主原料(S)-3-甲基-1-(吡咯烷-3-基)-3,4,6,7,8,9-六氢-5H-吡唑并[3,4-c]异喹啉-5-酮(2S,3S)-2,3-二(苯甲酰氧基)丁二酸盐(0.5mol)和乙醇(1900mL)，搅拌，降温至10℃，加入氰基硼氢化钠(1.0mol)，再滴加丙醛(1.0mol)，滴加过程中温度不超过20℃，滴加完毕后，继续在15℃搅拌反应2h。

淬灭：反应结束后，向反应混合物中缓慢滴加盐酸(1.0mol)，调节pH至4-5之间，控制滴加速度，以20％氢氧化钠吸收大量冒出的气体，为防止冲料，同时控制温度为20℃～30℃。

后处理：S1、淬灭后的反应液减压浓缩蒸除乙醇，温度不超过70℃；

S2、向S1的残留物中加入水与二氯甲烷，水与二氯甲烷的重量比为1：4，使用量为式Ⅰ化合物重量的7倍，在5℃～15℃温度下用40％的氢氧化钠水溶液调节混合液的pH至9～10，搅拌，静置，分层，有机相保留；

S3、S2所得水相用二氯甲烷继续萃取1次，所得有机相与S2所得有机相合并，水相保留；

S4、S3所得合并后的有机相用40％的氢氧化钠水溶液萃取，所得水相与S3所得水相合并，有机相保留；

S5、S4所得合并后的水相用36～38％的盐酸调节pH至4～5，再加入二氯甲烷，二氯甲烷使用量为式Ⅰ化合物重量的10倍，搅拌后静置分层，有机相保留；

S6、S5所得水相用二氯甲烷继续萃取2次，所得有机相与S4、S5所得有机相合并；

S7、S6所得合并后的有机相用3％碳酸氢钠水溶液洗涤2次后再用无水硫酸钠干燥，过滤除去硫酸钠固体，滤液减压浓缩后真空干燥，得到PARP抑制剂的中间体TSL-1502M中间体TSL-1502M 113g，通过HPLC分析，中间体TSL-1502M的纯度为99.8％，收率为36.4％。

Claims (10)

1.一种结构如下的用于制备PARP抑制剂的中间体化合物：

2.权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

使式Ⅰ化合物与丙醛在还原剂的作用下发生还原胺化反应，生成PARP抑制剂的中间体TSL-1502M。

。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述还原剂选自：硼氢化钠、硼氢化钾、氰基硼氢化钠、氰基硼氢化钾。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：使式Ⅰ化合物与丙醛在氰基硼氢化钠作用下发生还原胺化反应生成PARP抑制剂的中间体TSL-1502M：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：式Ⅰ化合物溶于溶剂，冷却至5℃～15℃后加入氰基硼氢化钠，再滴加丙醛，滴加过程中保持反应体系温度为10℃～20℃，丙醛滴加完毕后，继续在10℃～25℃搅拌反应1h～2h，得到TSL-1502M。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述溶剂为乙醇，乙醇用量为式Ⅰ化合物重量的5～7倍；所述式Ⅰ化合物、丙醛与氰基硼氢化钠的摩尔比为1：(1.31～2.03)：(1.5～2.22)。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述式Ⅰ化合物、丙醛与氰基硼氢化钠的摩尔比为1：(1.5～2.0)：(1.8～2.2)。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤还包括氰基硼氢化钠的淬灭步骤与反应后处理步骤；所述氰基硼氢化钠的淬灭步骤具体为向反应液中滴加盐酸，调节反应液的pH至4～5，滴加过程中，控制温度为20℃～30℃，滴加过程中产生的气体用碱液吸收。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述盐酸的质量百分浓度为36～38％，所述碱液为质量百分浓度为20％的氢氧化钠水溶液。

10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述反应后处理步骤具体为：

S1、淬灭后的反应液减压浓缩蒸除乙醇；

S2、向S1的残留物中加入重量比2倍量的水与2倍量的二氯甲烷，在25℃～30℃温度下用40％的氢氧化钠水溶液调节混合液的pH至9～10，搅拌，静置，分层，有机相保留；

S3、S2所得水相用重量比1倍量的二氯甲烷继续萃取1次，所得有机相与S2所得有机相合并，水相保留；

S4、S3所得合并后的有机相用重量比1倍量的40％的氢氧化钠水溶液萃取，所得水相与S3所得水相合并，有机相保留；

S5、S4所得合并后的水相用36-38％的盐酸调节pH至4～5，再加入重量比4倍量的二氯甲烷，搅拌后静置分层，有机相保留；

S6、S5所得水相用重量比2倍量的二氯甲烷继续萃取1～2次，所得有机相与S4、S5所得有机相合并；

S7、S6所得合并后的有机相用3％碳酸氢钠水溶液洗涤1～2次后再用无水硫酸钠干燥，过滤除去硫酸钠固体，滤液减压浓缩后真空干燥，得所述PARP抑制剂的中间体TSL-1502M。

Images